第一篇：分子生物学实验室常用试剂配方-ProbeGene2015(精)
分子生物学常用试剂配制与保存 一.常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺(Spermidine : 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体积为 10ml。分装成小份贮存 于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine : 溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20℃。10mol/L乙酸胺(ammonium acetate: 将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔径的滤 膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA :加 100mg 的牛血清蛋白(组分 V 或分子 生物学试剂级,无 DNA 酶于 9.5ml 水中(为减少变性, 须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直 至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml ,然后 分装成小份贮存于-20℃。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate: 溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml。3mol/L乙酸钠(sodium acetate:
溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中, 用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2, 再加水定容到 100ml。
0.5mol/L EDTA: 配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液(0.5mol/L , 混合后形成 EDTA 的三钠盐。或称取 186.1g 的 Na2EDTA·2H2O和 20g 的 NaOH ,并溶 于水中,定容至 1L。
1mol/L HCl: 加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPTG: 溶解 250mg 的 IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷 于 10ml 水中, 分成 小份贮存于-20℃。
100mmol/L PMSF: 溶解 174mg 的 PMSF(苯甲基磺酰氟 于足量的异丙醇中, 定容到 10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶 K(proteinase K: 将 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中,轻轻摇动,直至蛋白酶 K 完 全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml ,然后分装成小份贮存于-20℃。10mg/ml Rnase A(无 DNase : 溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0。溶解后于水浴中煮沸 15min , 使 DNA 酶失活。用 1mol/L的 Tris-HCl 调 pH 至 7.5,于-20℃ 贮存。(配制过程中要戴手套
10N 氢氧化钠(NaOH : 溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌 , 氢 氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。
100%三氯乙酸(TCA : 在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水, 用磁力搅拌器搅拌直至完 全溶解。(稀释液应在临用前配制
2.5%X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷: 溶解 25mg 的 X-gal 于 1ml 的二甲基甲酰胺(DMF , 用铝箔包裹装液 管,贮存于-20℃。
10%SDS(十二烷基硫酸钠: 称取 100gSDS 慢慢转移到约含 0.9L 的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅 拌直至完全溶解。用水定容至 1L。
2mol/L山梨(糖醇(Sorbitol : 溶解 36.4g 山梨(糖醇于足量水中使终体积为 100ml。DEPC(焦碳酸二乙酯处理水: 加 100ul DEPC 于 100ml 水中, 使 DEPC 的体积分数为 0.1%。在 37℃ 温浴至少 12h ,然后在 15 psi 条件下高压灭菌 20min ,以使残余的 DEPC 失活。DEPC 会与胺起反应,不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺(deionized formamide: 直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中, 用磁 力搅拌器轻轻搅拌 1h ,可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1号滤纸 过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃ 贮存(防止氧化。
苯酚 /氯仿 /异戊醇: 将 Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿 /异戊醇(24:1均匀混合后,移 入棕色玻璃瓶中 4℃ 保存。
PBS Buffer: 组份 :137 mM NaCl, 2.7mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配置方法(1L: 1.称量下列试剂,置于 1L 烧杯中。NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2.向烧杯中加入约 800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加 HCl 将 pH 值调节至 7.4,然后加入去离子水将溶液定容至 1L。4.高温高压灭菌后,室温保存。
注意:上述 PBS Buffer中无二价阳离子, 如需要, 可在配方中补充 1mM CaCl2和 0.5 mM MgCl2。
磷酸缓冲液(phosphate buffer:
按照下表所给定的体积, 混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱 和 1mol/L 磷酸氢二钠(双碱 贮液, 获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的 磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O贮液:溶解 138g 于足量水中,使终体 积为 1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4贮液 :溶解 142g 于足量水中 使终体积为 1L。
1mol/L 磷酸二氢钠(ml 1mol/L 磷酸氢二钠(ml 最终 pH 值 77 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9
7.0 7.1 7.2 Tris 缓冲液(Tris-HCl buffer: 将 121g 的 Tris 碱溶解于约 0.9L 水中,再根据所要求的 pH(25℃下 加一定量的浓盐酸(11.6N ,用水调整终体积至 1L。
浓盐酸的体积(ml pH 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 TE(用于溶解和贮存 DNA 成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量 10mmol/L Tris-HCl 1mmol/L EDTA
水
1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0, 25℃ 200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0 98.8ml 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide: 小心称取 1g 溴化乙锭,转移到广口瓶中,加 100ml 水,用磁力搅拌器 搅拌直到溶解,分装成小份 4℃避光保存。
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸(TAE 缓冲液
成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L 200ml 的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0 补足 1L 5×Tris-硼酸(TBE 缓冲液
成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 ml的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0 补足 1L 6×DNA Loading buffer蔗糖凝胶上样液(室温贮存 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 40%聚蔗糖 水
1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0 4g 补足到 10ml
10×DNA Loading buffer(终止反应 十二烷基硫酸钠 /甘油凝胶上样液(室温贮存 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量
0.2%溴酚蓝 0.2%二甲苯青 FF 200 mmol/L EDTA 0.1%SDS 50%甘油 水 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0 100ul 10% SDS 5ml 补足到 10ml 30%(W/V Acrylamide 组份浓度 30%(W/V Acrylamide 0.05% 配制量 1L 配置方法 : 1.称量下列试剂,置于 1L 烧杯中 Acrylamide 290g BIS 10g 2.向烧杯中加入约 600mL 的去离子水,充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至 1L ,用 0.45μm 滤膜滤去杂质。4.于棕色瓶中 4℃ 保存。
注意:丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用有积 累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有 可能含有少量的未聚合成份。
40%(W/V Acrylamide 组份浓度 40%(W/V Acrylamide 0.05% 配制量 1L 配置方法
1.称量下列试剂,置于 1L 烧杯中 Acrylamide 380g BIS 20g 2.向烧杯中加入约 600mL 的去离子水,充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至 1L ,用 0.45μm 滤膜滤去杂质。4.于棕色瓶中 4℃ 保存。
注意:丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收, 其作用有 积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒,但也应谨慎操作,因 为有可能含有少量的未聚合成份。
10%(W/V过硫酸铵
组份浓度 10%(W/V过硫酸铵 配制量 10mL 配置方法 1.称取 1g 过硫酸铵。
2.加入 10mL 的去离子水后搅拌溶解。3.贮存于 4℃。
注意:10%过硫酸胺溶液在 4℃ 保存时间可使用 2周左右, 超过期限 会失去催化作用。
考马斯亮蓝 R-250染色液
组份浓度 0.1%(W/V考马斯亮蓝 R-250, 25%(V/V异丙醇, 10 %(V/V冰醋酸 配制量 1L 配置方法
1.称取 1g 考马斯亮蓝 R-250, 置于 1L 烧杯中。2.量取 250mL 的异丙醇加入上述烧杯中,搅拌溶解。3.加入 100mL 的冰乙醋酸,均匀搅拌。4.加入 650mL 的去离子水,均匀搅拌。5.用滤纸出去颗粒物质后,室温保存。考马斯亮蓝染色脱色液
组份浓度 10%(V/V醋酸, 5%(V/V乙醇 配制量 1L 配置方法
1.量取下列溶液,置于 1L 烧杯中。醋酸 100mL
乙醇 50mL dH2O 850mL 2.充分混合后使用。显影液
组份浓度 0.005%(V/V柠檬酸, 0.02%(V/V甲醛(SDS-PAGE银 氨染色用 配制量 1L 配置方法
1.称取下列试剂,置于 1L 试剂瓶中。柠檬酸 50mg 甲醛 0.2mL 2.加入 1L 去离子水后,摇动混合后溶解。3.室温保存。5×Tris-GlycineBuffer 组份浓度 0.125M Tris , 1.25M Glycine, 0.5%(w/v SDS(SDS-PAGE 电泳缓冲液 配制量 1L 配置方法
1.称取下列试剂,置于 1L 烧杯中。Tris 15.1g
Glycine 94g SDS 5.0g 2.加入约 800mL 的去离子水,搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至 1L 后,室温保存。三.常用培养基 LB 培养基
将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g 如果需要用 1N NaOH(~1ml 调整 pH 至 7.0,再补足水至 1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。
SOB 培养基
将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化钠 0.5g 1 mol/L 氯化钾 2.5ml 用水补足体积到 1L。分成 100ml 的小份,高压灭菌。培养基冷却到室 温后,再在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L氯化镁。
SOC 培养基
成分、方法同 SOB 培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了 在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L氯化镁外, 再加 2ml 灭菌 的 1mol/L葡萄糖(18g 葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到 100ml , 用 0.22um 的滤膜过滤除菌。
TB 培养基
将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60℃ ,再加 100ml 灭菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的 溶 液(2.31g 的 KH2PO4和 12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为 100ml。高压灭菌或用 2×YT培养基
将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化钠 4ml 如果需要用 1N NaOH(~1ml 调整 pH 至 7.0,再补足水至 1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。
YPD 培养基
将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水补足体积为 1L 后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对色氨酸营 养缺陷型每升培养基添加 1.6g 色氨酸, 因为 YPD 培养基是色氨酸限制 型培养基。为了配制平板,需要在高压灭菌前加入 20g 琼脂粉。四.常用抗生素
氨苄青霉素(ampicillin(100mg/ml
溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中, 最后定容至 10ml。分装成小份 于-20℃ 贮存。常以 25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素(carbenicillin(50mg/ml 溶解 0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成 小份于-20℃ 贮存。常以 25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养 基。
卡那霉素(kanamycin(10mg/ml 溶解 100mg 卡那霉素于足量的水中, 最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃ 贮存。常以 10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林(methicillin(100mg/ml 溶解 1g 甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃ 贮存。常以 37.5ug/ml终浓度与 100ug/ml氨苄青霉素一起添加于 生长培养基。
氯霉素(chloramphenicol(25mg/ml 溶解 250mg 氯霉素足量的无水乙醇中, 最后定容至 10ml。分装成小份 于-20℃ 贮存。常以 12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素(streptomycin(50mg/ml 溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至 10ml。分装
成小份于-20℃ 贮存。常以 10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养 基。萘啶酮酸(nalidixic acid(5mg/ml 溶解 50mg 萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小 份于-20℃ 贮存。常以 15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素(tetracyyline(10mg/ml 溶解 100mg 四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无 水乙醇,定容至 10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光, 于-20℃ 贮存。常以 10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
五、核酸及蛋白质常用数据
1.核苷三磷酸的物理常数 化合物 分 子 量
λmax(pH7.0 1摩尔溶液(pH7.0 中 λmax 时的最大吸 收值
OD 280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 CTP 483 271 9000 0.97 GTP 523 253 13700 0.66 UTP 484 262 10000 0.38 dATP 494
259 15200 0.15 dCTP 467 271 9300 0.98 dGTP 507 253 13700 0.66 dTTP 482 267 9600 0.71 2.常用核酸的长度与分子量 核酸 核苷酸数 分子量
λDNA 48502(双链环状 3.0×107 pBR322 4363(双链 2.8×106 28SrRNA 4800 1.6×106 23SrRNA 3700 1.2×106 18SrRNA 1900 6.1×105 19SrRNA 1700 5.5×105 5SrRNA 120 3.6×104 tRNA(大肠杆菌 75 2.5×104 3.常用核酸蛋白换算数据(1重量换算
1μg=10-6g 1pg=10-12g 1ng=10-9g 1fg=10-15g(2分光光度换算: 1A 260双链 DNA=50μg/ml 1A 260单链 DNA=30μg/ml
1A 260单链 RNA=40μg/ml 4.常用蛋白质分子量标准参照物
(1高分子量标准参照(2中分子量标准参照(3低分子量标准参照 肌球蛋白 分子量 磷酸化酶 B 97, 400 碳酸酐酶 31, 00 肌球蛋白 212, 000 牛血清白蛋白 66, 200 大豆脻蛋白酶 21, 500β-半 乳 糖 甘
酶 B 116, 000 谷氨酶脱氢酶 55, 000 抑制剂
磷酸化酶 B 97, 400 卵白蛋白 42, 700 马心肌球蛋白 16, 900牛 血 清 白 蛋 白
66, 200 醛缩酶 40, 000 溶菌酶 14, 400过氧化氢酶 `57, 000 碳酸酐酶 31, 000 肌球蛋白(F1 8, 100 醛缩酶 40, 000 大豆脻蛋白酶 21, 500 肌球蛋白(F2 6, 200 抑制剂 肌球蛋白(F3 2, 500 溶菌酶 14, 400 5.常用 DNA 分子量标准参照物
λDNA/HindⅢ λDNA/EcoRⅠ λ/HindⅢ +EcoRⅠ pBR322/HaeⅢ 23130 21226 21227 587 123 9416 7421 5148 405 104 6557 5804 4973 504 89 4361 5643 4268 458 80 2322 4843 3530 434 64 2027 3530 2027 267 57 564 1904 234 51 125 1584 1375 974 831 564 125 213 192 184 124 21 18 11 7 2.常用的电泳缓冲液 缓冲液 使用液 浓贮存液（每升）50×：242g Tris 碱 57.1ml 冰乙酸 100ml EDTA(pH8.0 Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸 10×:10g Tris 碱 15.5ml85%
磷酸（1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0 Tris-硼酸（TBE）a 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 0.001mol/L EDTA 5×：54g Tris 碱 27.5 硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0 碱性缓冲液 b Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸 0.001mol/L EDTA 0.5mol/L
六、常用缓冲液 1．磷酸缓冲液（1）25℃下 0.1mol/L 磷酸钾缓冲液的配制 pH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 1mol/L K2HPO4(ml 8.5 13.2 19.2 27.8 38.1 49.7 61.5 71.7 80.2 86.6 90.8 94.0 ※ ※ 0.002mol/L EDTA 1mol/L KH2PO4(ml 91.5 86.8 80.8 72.2 61.9 50.3 38.5 28.3 19.8 13.4 9.2 6.2 说明： Tris-甘氨酸 c 1×:50mmol/L NaOH 1mmol/L EDTA 1×:25mmol/L Tris 250mmol/L 甘氨酸 0.1% SDS 1×:5ml 10mol/L NaOH 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0 5×:15.1g Tris 94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）50ml 10% SDS(电泳级 ①TBE 溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下 用玻璃瓶保存 5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。以片都以 1×TBE 作为使用液（即 1：5 稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电 泳。但 0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖 胶电泳都以 1：10 稀释的贮存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量 通常较大，需要使用 1×TBE 以提供足够的缓冲容量。②碱性电泳缓冲液应现用现配。③Tris-甘氨酸缓冲液用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。2×SDS 凝胶加样缓冲液： 100mmol/L Tris·HCl(6.8 200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2%溴酚蓝 20%甘油 不含 DTT 的 2×SDS 凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取（2）25℃下 0.1mol/L 磷酸钠缓冲液的配制 pH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 1mol/L Na2HPO4(ml 1mol/L NaH2PO4(ml 7.9 12.0 17.8 25.5 35.2 46.3 57.7 68.4 77.4 84.5 89.6 93.2 92.1 88.0 82.2 74.5 64.8 53.7 42.3 31.6 22.6 15.5 10.4 6.8 1mol/L 贮存液现加于上述缓冲液中。3.凝胶加样缓冲液 缓冲液类型 6×缓冲液 0.25%溴酚蓝 Ⅰ 0.25%二甲苯青 FF 40%（W/V）蔗糖水溶液 4℃ 贮存温度 ※: 用 蒸 馏 水 将 混 合 的 两 种 1mol/L 贮 存 液 稀 释 至 1000ml，根 据 Henderson-Hasselbalch 方程计算其 pH 值： pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体]在此，pK’=6.86(25℃。徐州溥博生物科技有限公司 www.xiexiebang.com 6 0.25 溴酚蓝 Ⅱ 0.25%二甲苯青 FF 15%聚蔗糖(Ficoll400 0.25%溴酚蓝 Ⅲ 0.25%二甲苯青 FF 30%甘油水溶液 0.25%溴酚蓝 Ⅳ 40%(W/V蔗糖水溶液 碱性加样缓冲
液: 300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA 18%聚蔗糖(Ficoll400 Ⅴ 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青 FF 使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保 DNA 均 匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而 使加样操作更为便利，含有 在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的 速率约为二甲苯青 FF 的 2.2 倍，而与琼脂糖浓度无关。以 0.5×TBF 作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长 300bp 的双链线状 DNA 相同，而二甲苯青 FF 的泳动则与长 4kb 的双链线状 DNA 相同。在琼脂糖浓度为 0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化 的影响并不显著。选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲 酚绿作为示踪染料，因为在碱性 pH 条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。4．各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 所需 pH 值（25℃）7．1 7．2 7．3 7．4 7．5 7．6 7．7 7．8 7．9 8．0 8.1 8.2 8.3 0.1mol/L HCl 的体积 45．7 44．7 43．4 42．0 40．3 38．5 36．6 34．5 室温 4℃ 4℃ 4℃ 5.常用缓冲液的 pKa 值 缓冲液 Tris a b 分子量 12.1 283.3 209.3 304.3 195.2 pKa 值 8.08 7.47 7.15 6.76 6.09 缓冲范围 7.1～7.9 7.2～8.2 6.6～7.8 6.2～7.3 5.4～6.8 HEPES MPOSc PIPES MES e d a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N吗啉代）丙磺酸；d：N，N’-双（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。32．0 29．2 26.2 22.9 19.9 6．温度对常用缓冲液 pH 的影响 缓冲体系 Mes Ada pKa(20℃ 6.15 6.60 △pKa/10℃-0.110-0.110 徐州溥博生物科技有限公司 www.xiexiebang.com 7 PiPes Aces Bes Mops Tes Hepes Tricine Tris Bicine Glycylglycine 6.80 6.90 7.15 7.20 7.50 7.55 8.15 8.30 8.35 8.40-0.085-0.200-0.160-0.013-0.200-0.014-0.210-0.310-0.180-0.280 细级 超细 Sephadex G-75 20～80 10～40 30,000 10,000 9～11 5.0±0.3 6 2 40～120 3,000～ 1,000～ 12 ～ 3.92 7.5±0.5 15 24 3 15.86 ～ 超细 10～40 70,000 950,000 Sephadex G-100 40～120 4,000～ 1,000～ 15 ～ 超细 10～40 1,500,000 150,000 20 溶胀最 少平衡 Sephadex G-150 20 ～ 柱头压力 40～120 5,000～ 1,000～ 30 18 ～ 超细 10～40 400,000 150,000 22 Sephadex G-200 15.0±1.5 72 5 3.53 0.88 ～ 10.0±1.0 48 5 9.41 2.35 ～
七、常用凝胶的技术参数 1．葡聚糖凝胶的某些技术数据 床体积 分子量分级范围 毫升/ 干颗粒直径 种类（μ）葡 聚 糖
克干分 得水值 肽及球形 蛋白质 分子）Sephadex 40～ 120 G-10 Sephadex 40～ 120 G-10 Sephadex G-25 100～300 粗级(≈5 ～ 100 目 1,000～ 50～150 中级(≈100～200 100～ ～1500 1500 3.5 2.5 ～ 1.5±3.5 ～700 ～700 2～ 3 1.0±0.1（线 性 子筛 时 间（h）（kPa）沸 室 水 温 浴(2.5cm 直径柱 3 1 40～120 5000～ 1000～ 30 ～ 40 3 1 10～40 800,000 200,000 20 ～ 20.0±2.0 25 72 5 0.39 1.57 ～ 2.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据 排阻的下限 型号(分子量 Bio-gel-P-2 Bio-gel-P-4 6 2 4～6 5,000 5,000 1.5±0.2 Bio-gel-P-6 Bio-gel-P-10 Bio-gel-P-30 Bio-gel-P-60 1,600 3,600 4,600 10,000 30,000 60,000(分子量 200～2,000 500～4,000 1,000～5,000(ml/g 干凝胶 3.8 5.8 8.8 时间(室温,h 2～4 2～4 2～4 2～4 10～12 10～12 分级分离范围 膨胀后的床体积 膨 胀 所 需 最 少 目 5,000～17,000 12.4 20,000～50,000 14.9 30,000～70,000 19.0 40,000 ～ 19.0 100,000 20 细级 ～ 800(≈200～ 400 目 超细 Sephadex G-50 粗级 中级 10～40 Bio-gel-P-100 100,000 24 Bio-gel-P-150 150,000 50,000~150,000 24.0 80,000 ～ 34.0 200,000 24 100～200 50～150 1,500～ 500～ Bio-gel-P-200 200,000 48 Bio-gel-P-300 300,000 100～400,000 40.0 48 徐州溥博生物科技有限公司 www.xiexiebang.com 8 3．琼脂糖凝胶的技术数据 琼脂糖含量 排阻的下限 分级分离的范围（分 型号 %（W/W）（分子量）子量）Sepharose 4B Sepharose 2B Sagavac 10 Sagavac 8 Sagavac 6 Sagavac 4 Sagavac 2 Bio-gel A-0.5M Bio-gel A-1.5M Bio-gel A-5M Bio-gel A-15M Bio-gel A-50M 4 2 10 8 6 4 2 10 8 6 4 2 2.5×105 7×10 2×10 5 7．染料在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度 生产厂家 0.3×10 ～3×10 2×10 ～25×10 6 6 6 凝胶浓度（%）3.5 溴酚蓝 100bp 65bp 45bp 20bp 15bp 12bp 二甲苯青 FF 460bp 260bp 160bp 70bp 50bp 45bp Pharmacia 6 5.0 8.0 12.0 15.0 20.0 1×104～2.5×105 2.5×10 ～7×10 5×10 ～2×10 4 6 4 5 6 15×10 6 2×10 ～15×10 5 6 Seravac
八、遗传密码 密码子的第二位 150×106 0.5×10 1.5×10 5×10 6 6 5×105～15×107 <1×10 ～0.5×10 <1×10 ～1.5×10 1×10 ～5×10 4 6 4 4 6 U UUU UUC Phe Phe C UCU UCC Ser Ser A UAU UAC Tyr Tyr 终 止 G UGU UGG Gys Gys 终（白）止 琥 UGG Trp G 密 码 CGA CGC CGA CGC AGU AGC AGA AGC GGU GGC GGA Arg Arg Arg Arg Ser Ser Arg Arg Gly Gly Gly U C A G U C A G U C A G 子 的 第 三 位（3 端’）止 乳A U C 6 6
15×106 50×10 6 4×104～15×106 1×10 ～50×10 6 6 5 6 Bio-Rad 6 UUA U Leu UCA Ser UAA（石）终 赭 UGA Bio-gel A-150M 1 150×10 1×10 ～150×10 4．各处凝胶所允许的最大操作压 凝胶 Sephadex G-10 G-15 G-25 G-50 G-75 9.8 9.8 9.8 9.8 4.9 最大静水压（kPa）密码 子的 第一 位（5’ CUG 端）AUU AUC A AUA AUG GUU GUC G GUA GUG Ile Ile Ile Met Val Val Val Val ACU ACC ACA ACG GCU GCC GCA GCG Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Ala AAU AAC AAA AAG GAU GAC GAA GAG Leu CCG Pro CAG CUU CUC C CUA Leu Leu Leu CCU CCC CCA Pro Pro Pro CAU CAC CAA UUG Leu UGG Ser UAG（珀）His His Gln Gln Asn Asn Lys Lys Asp Asp Glu Glu 5．琼脂糖凝胶浓度与线性 DNA 分辨范围 凝胶浓度（%）0.5 0.7 1.0 1.2 1.5 2.0 线性 DNA 长度（bp）1000～30000 800～12000 500～10000 400～7000 200～3000 50～2000 GGG Gly 6．染料在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度 凝胶浓度（%）5．0 6．0 8．0 10．0 20．0 溴酚蓝 35bp 26bp 19bp 12bp 8bp 二甲苯青 FF 140bp 106bp 75bp 55bp 28bp 徐州溥博生物科技有限公司 www.xiexiebang.com 9
第二篇：分子生物学实验室常用试剂毒性说明
分子生物学实验室常用试剂毒性说明
（1）Tris 吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。
（2）氨基乙酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。避免吸入尘埃。
（3）X-半乳糖(X-gal)：对眼睛和皮肤有毒性。使用粉剂时遵循常规注意事项。应注意的是，X-gal 溶液是在一种有机溶剂（DMF）中制备的。
（4）β-半乳糖苷酶：有刺激性，可产生过敏反应。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。（5）苯二胺 ：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（6）苯酚：有剧毒性和高度腐蚀性，可致严重烧伤。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好合适的手套和护目镜，穿好防护服，在通风橱内操作。若有皮肤接触药物，可用大量清水冲洗，并用肥皂和水清洗，不要用乙醇洗。
（7）苯甲基磺酰氟化物(PMSF)：为一有剧毒的胆碱酯酶抑制剂。对上呼吸道的黏膜、眼睛和皮肤有极大损害。戴好合适的手套和护目镜，在通风橱内操作。万一眼睛或皮肤接触到此药品，立即用大量的水冲洗，丢弃被污染的衣物。
（8）苯甲酸：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，不要吸入。（9）苯甲酸苄酯：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。避免接触眼睛。戴好合适的手套和护目镜。
（10）苯乙醇：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，远离火源、火花和明火。
（11）丙烯酰胺（未聚合的）：为一种潜在的神经毒素，可通过皮肤吸收（有累积效应）。避免吸入尘埃。称量丙烯酰胺和亚甲基双酰胺粉末时，戴好手套和面罩，在化学通风橱内操作。聚合的丙烯酰胺是无毒的，但是使用时也应小心，因为其中可能喊有少量未聚合的丙烯酰胺。
（12）蛋白酶K：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。
（13）碘化丙锭：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。刺激眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。可诱导突变并可能致癌。戴好手套和护目镜，穿好防护服，在通风橱内小心操作。
（14）碘乙酰胺：能碱基化蛋白质上的氨基，从而影响抗原的氨基酸序列分析。有毒性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作，勿吸入尘埃。
（15）叠氮化钠：有剧毒性，可阻断细胞色素电子转运系统。含此药物的溶液要明确标记。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，并小心使用。此药品为氧化剂，故保存时要远离可燃物品。（16）多聚甲醛：有剧毒。易通过皮肤吸收，并对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有严重破坏性。避免吸入尘埃。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。多聚甲醛是甲醛的未解离形式。
（17）3，3’-二氨基联苯胺四氢氯化物：为一种致癌剂，操作时要非常小心。避免吸入气体。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（18）二甲苯：可燃，高浓度有麻醉作用。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。始终远离热源、火花和明火。（19）二甲苯蓝：见二甲苯。
（20）二甲次胂酸钠：可能为致癌剂，并含有砷，有剧毒性。戴好手套和护目镜，只在通风橱内操作。（20）二甲次胂酸钠：可能为致癌剂，并含有砷，有剧毒性。戴好手套和护目镜，只在通风橱内操作。（21）N，N-二甲基酰胺(DMF)：刺激眼睛、皮肤和黏膜。可通过吸入，摄入，和皮肤吸收发挥其毒性。慢性吸入可导致肝、肾损害。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。
（22）二甲亚砜(DMSO)：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。DMSO为可燃物保存于密封容器中。远离热源、火花和明火。
（23）二硫苏糖醇(DTT)：为一强还原剂，有恶臭味。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。当使用固体形 1 式或高浓度溶液时，戴好手套和护目镜并在通风橱内操作。
（24）4ˊ，6-二脒基-2ˊ-苯基吲哚盐酸(DAPI)：可能为一种致癌剂。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。可引起刺激。避免吸入。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。
（25）放射性物质：当计划的一个实验涉及放射性物质的使用时，应包括以下内容：同位素的理化性质（如半衰期，放射型，辐射能量），辐射物质的化学形式，其辐射度（具体的活性）总量，化学浓度，需要使用多少就预定多少，使用放射性物质时，要始终戴好手套和护目镜，穿实验室工作服。X和γ射线为由仪器产生放射性物质辐射出的短波电磁波，它们会丛放射源辐射出来或聚成光束。它们的潜在危险决定于暴露于其中的时间、强度和它的波长。
（26）放线菌素D：是一种畸胎剂和致癌剂，有剧毒。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害，甚至是致命的。应避免吸入。戴好手套和护目镜，并始终在化学通风橱内操作，放线菌D见光分解。
（27）高压玻璃器皿时要格外小心。高压锅和金属容器中的玻璃器皿，宜放入金属网中或蒲氏隔板中。在真空状态下使用玻璃器皿，如真空收集器、干燥设备或氩气条件下的反应器等，要谨慎操作。戴好护目镜。（28）过二硫酸铵：对黏膜组织、上呼吸道、眼睛和皮肤有极大的破坏性。吸入可致命。戴好手套和护目镜，穿好防护服。必须在化学通风橱内操作。操作后要彻底清洗。
（29）过氧化氢：有腐蚀性、毒性，对皮肤有强损害性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，只在化学通风橱内操作。
（30）环乙酰亚胺：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，只在化学通风橱内操作。（31）磺基蓖麻酸（二水合物）；对黏膜和呼吸系统有极大破坏性。不要吸入粉尘，戴好手套和护目镜，在化学通风橱内操作。
（32）甲氨蝶呤(MTX)：为一种致癌剂和致畸胎剂。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。暴露于其中可导致胃肠反应，骨髓抑制，肝或肾损害。戴好手套和护目镜，在化学通风橱内操作。
（33）甲醇：有毒，可致失明。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。要有足够的通风以减少挥发气。不要吸入这些气体。戴好手套和护目镜，在化学通风橱内操作。
（34）甲基磺酸乙酯(EMS)：为一种可诱导机体突变和突变和致癌的挥发性有机溶剂。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。
（35）甲醛：有剧毒性和挥发性。也是一种致癌剂。可通过皮肤吸收，对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激或损伤。避免吸入气体。戴好手套和护目镜。始终在通风橱内操作。远离热源、火花和明火。（36）甲酸：有剧毒，对黏膜组织、上呼吸道、眼睛、皮肤有极大的损伤。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（37）甲酰胺：可导致畸胎。其挥发的气体刺激眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。操作高浓度甲酰胺时要在通风橱内操作。尽可能将反应的溶液盖住。（38）焦磷酸钠：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。（39）焦碳酸二乙酯(DEPC)：是一种潜在的蛋白质变质剂，且为可疑的致癌剂。开启时瓶口不要指向操作者或其他人。瓶内压可导致喷溅。戴好手套并穿实验室工作服，在通风橱内操作。（40）聚丙烯酰胺：无毒性，但仍应谨慎使用，因为其中可能含有少量未聚合的物质。
（41）聚乙二醇(PEG)：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。避免吸入粉末。戴好手套和护目镜。（42）菌种（运输）：健康教育福利部门根据运输器具将各种细菌划分为不同的类别。大肠杆菌的非病原种（K12）和枯草芽孢杆菌为第一类，正常运输条件下是无危害或危害性很微小的。但是沙门菌、嗜血杆菌、链霉菌和假单孢菌的一些菌种为第二类。第二类细菌为“一般潜在危害剂：能造成不同严重程度的疾病，但在普通实验室技术下可操作。”（43）抗淬灭剂：见苯二胺。
（44）考马斯亮蓝：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
（45）联结剂(DMP)：刺激眼睛、皮肤和黏膜。可通过吸入，摄入，皮肤吸收发挥其毒性。不要吸入气体，戴好手套、面罩和护目镜。
2（46）链霉素：有毒性，怀疑为致癌剂和突变诱导剂。可导致过敏反应。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
（47）亮肽素；吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（48）邻苯二甲酸二丁酯：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入气体。（49）磷酸二氢钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。（50）磷酸：高腐蚀性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
（51）磷酸钾：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘，在通风橱内操作。（52）磷酸钠：刺激眼睛和皮肤。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。（53）磷酸氢钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。（54）硫氰酸胍：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。（55）硫氰酸胍盐；见硫氰酸胍。
（56）硫酸：剧毒性，对黏膜组织、上呼吸道、眼睛和皮肤有极大的损伤。可造成烧伤，与其他物质（如纸）接触可能引发火灾。戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。
（57）硫酸镁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（58）氯仿：刺激眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。为一种致癌剂。有肝、肾毒性。有挥发性。避免吸入蒸汽。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（59）氯化铵：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。（60）氯化钙：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。（61）氯化钾：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（62）氯化锂：刺激眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（63）氯化镁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。（64）氯化锰：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。（65）氯化铁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（66）氯化锌：有腐蚀性，对胎儿有潜在危险。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（67）3-（N-吗啉）-丙磺酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。刺激眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。（68）没食子酸丙酯(NPG0：见苯甲酸。（69）柠檬酸钠：见柠檬酸。
（70）柠檬酸：有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。（71）硼酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
（72）羟胺：有腐蚀性和毒性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。（73）氢氧化铵：为氨的水溶液。具有腐蚀性。操作时要小心。氨气可从氨水中挥发出来，具有腐蚀性、毒性和爆炸性。戴好手套。必须在通风橱内操作。
（74）氢氧化钾：剧毒性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。溶液为强碱性，当心使用。戴好手套。（75）氢氧化钠：溶液有剧毒，强碱性，当心使用。戴好手套。其他所有高浓度碱溶液都应以类似方式操作。
（76）秋水仙碱：有剧毒，可致命，可导致癌症和可遗传的基因损害。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。不要吸入粉尘。
（77）β-巯基乙醇：吸入或皮肤吸收可致命，摄入有害。高浓度溶液对黏膜、上呼吸道、皮肤和眼睛有极大损害。β-巯基乙醇有难闻气味。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（78）去氧胆酸钠：刺激黏膜和呼吸道。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。使用粉末时，戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。
3（79）溶剂；谨慎操作。
（80）溶菌酶：对黏膜有腐蚀性。戴好手套和护目镜。（81）三氯乙酸：有很强的腐蚀性。戴好手套和护目镜。
（82）三乙胺：有剧毒，易燃。对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有强腐蚀性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。始终在通风橱内操作。远离热源、火花和明火。
（83）三乙醇胺：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。始终在通风橱内操作。（84）十二烷基磺酸钠(SDS)：有毒性和刺激性，有严重损伤眼睛的危险。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。
（85）双丙烯酰胺：是一种潜在的神经毒素，可通过皮肤吸收，避免吸入，在称量时，戴好手套和护目镜。（86）四环素：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（87）N，N，N’，N’-四甲基乙二胺：对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有极大损伤。吸入可致命，长时间接触可产生严重刺激或烧伤。戴好手套和护目镜。穿防护服，必须在通风橱内操作。使用完毕要彻底清洗。易燃性，其挥发气体可到达一定距离，形成引燃源，瞬间发生火灾。远离热源、火花和明火。（88）四水合乙酸镁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。（89）四唑氮蓝；有危险性，小心操作。
（90）碳酸钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
（91）同位素125I；在甲状腺，为一潜在的健康杀手。无论何种形式的同位素都用铅板遮挡。操作同位素时，要戴一到两副手套，着取决于同位素的用量和所进行的操作难度。
（92）胃酶抑素：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。（93）胃酶抑素：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（94）硝酸：具有挥发性，操作时要小心。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。远离热源、火花和明火。
（95）硝酸银：强氧化剂，小心操作。皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。与其他物质接触会发生爆炸。
（96）溴酚蓝：皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（97）5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷：对眼睛和皮肤有毒性。皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。（98）5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸酯：有毒性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。（99）5-溴-2’-脱氧脲苷；为致畸胎剂。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。有刺激性。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（100）溴乙啡啶：为一种强致突变剂，有毒性。避免吸入粉尘。操作含此染料的溶液时，戴上手套。（101）血（人类）和血产品和爱普斯坦病毒：其中可能含有隐藏的传染性物质，如乙型肝炎病毒、HIV，可能造成实验上室传染。戴一次性手套，使用吸枪式吸管，在生物安全橱中、操作，防止形成悬浮和污染。污染的塑料器皿在丢弃前要高压处理；污染的液体高压处理或丢弃前用漂白粉处理至少30min。（102）N，N’-亚甲基丙烯酰胺：为毒药，作用于中枢神经系统。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。有刺激性。戴好手套和护目镜。
（103）亚精胺：有腐蚀性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。有刺激性。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（104）亚铁氰化钾：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。有刺激性。戴好手套和护目镜。在通风橱内相当谨慎地操作。远离强酸。
（105）盐酸：有挥发性。吸入，摄入，皮肤吸收可致命。对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有极大损害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（106）盐酸胍：刺激黏膜、上呼吸道、皮肤和眼睛。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
（107）盐酸胍盐：见盐酸胍。
4（108）乙醇：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。（109）乙基亚硝基脲：见N-乙基-N-亚硝基脲
（110）N-乙基-N-亚硝基脲（ENU）：有致癌性，为潜在的突变诱导剂。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。用1ml/LNaOH溶液清洗所有接触过ENU的物品。（111）乙酸铵：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（112）乙醇胺：有毒性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。具有高腐蚀性，并可与酸发生强烈反应。
（113）乙酸：使用时要非常小心。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
（114）乙酸钠：见乙酸。
（115）乙酸铀酰：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。（116）异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。（117）异丁烯酸酯：有毒。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入其气体。（118）异硫氰酸胍盐：见硫氰酸胍盐。
（119）抑肽酶：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤还可导致过敏反应。暴露其中可引起胃肠反应，肌肉疼痛，血压改变或支气管痉挛。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘，必须在通风橱内操作。
（120）月桂酰基氨酸钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。
---------部分核实，未全面核实
第三篇：分子生物学实验室常用试剂的配制方法
一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。
100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）
5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。
10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。
100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）
2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂（Denhardt's regent）
成分及终浓度
配制100ml溶液各成分的用量
2%聚蔗糖（Ficoll，400型）
2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）
2%BSA（组分V）
水
2g 2g 2g
加水至总体积为100ml
依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP
5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）
0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）
水
5ml 1mol/L 贮液
1ml 1mol/L 贮液
1ml 1mol/L 贮液
200ul 100 mmol/L 贮液
50ul 1 mmol/L 贮液
0.5ml 10 mg/mL 贮液
2.25ml
将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。
mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/L dNTP混合液
成分及终浓度
配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水
2ul 100 mmol/L dATP 贮液
2ul 100 mmol/L dCTP 贮液
2ul 100 mmol/L dGTP 贮液
2ul 100 mmol/L dTTP 贮液
12ul
20％PEG 8000/2.5M NaCl
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量
质量浓度为20％聚乙二醇
2.5mol/L 氯化钠
水 20g
50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠
补足100ml
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）
3mol/L 氯化钠
水
88.2g 175.3g 补足1L
溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。
DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺（deionized formamide）
直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。
磷酸缓冲液（phosphate buffer）
按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。
1mol/L 磷酸二氢钠（ml）
1mol/L 磷酸氢二钠（ml）
最终pH值
877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2
TE（用于悬浮和贮存DNA）
成分及终浓度
配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris－HCl 1mmol/L EDTA 水
1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）
200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
98.8ml
Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。
浓盐酸的体积（ml）
pH
8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱
1mol/L 乙酸
mmol/L EDTA 水
242g
57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）
200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L
5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐mmol/L EDTA 水
54g 27.5g 硼酸 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L
染料
1％溴酚蓝（bromophenol blue）
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）
小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。
凝胶上样液（gel loading solutions）
6×碱性凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氢氧化钠mmol/L EDTA 18％聚蔗糖（400型）
0.15％溴甲酚绿
0.25％二甲苯青FF 水
300ul 10N 氢氧化钠
120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.8g 15mg 25mg 补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15％聚蔗糖（400型）
水
1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.5g 补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.25％溴酚蓝
0.25％二甲苯青FF 15％聚蔗糖（400型）
水
2.5ml 1％溴酚蓝 2.5ml 1％二甲苯青FF 1.5g 补足到10ml
6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50％甘油
水
1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
3ml 3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖
水
1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
4g
补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝
0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1％SDS 50％甘油
水
20mg 20mg
4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10％ SDS 5ml 补足到10ml
三.常用培养基
LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨
10g
酵母提取物
5g
氯化钠
10g
如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨
20g
酵母提取物
5g
氯化钠 0.5g mol/L 氯化钾
2.5ml
用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨
12g
酵母提取物
24g
甘油
4ml
各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。
2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨
16g
酵母提取物
10g
氯化钠
4ml
如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨
20g
酵母提取物
10g
葡萄糖
20g
用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
四.常用抗生素
氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）
溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
第四篇：分子生物学实验室
分子生物学实验室（P2设计）
1.功能：进行分
组织培养前实验室设计
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组织培养前实验室设计
在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。
在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。
实验室组成：化学实验室、洗涤菌室、无菌操作室（接种室）、培养室、细胞学实验室、其他小型仪器设备。
1)化学实验室（准备室）：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。主要设备：药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器.2)洗涤、灭菌室：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。
主要设备：水池、操作台、高压灭菌锅、干燥灭菌器（如烘箱）等。
3)无菌操作室（接种室）：主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。
主要设备：紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等。
接种室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1～2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。接种室应设有缓冲问，面积1m2为宜。进入无菌操作室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入接种室杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。
4)培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。
第五篇：分子生物学实验室工作制度
分子生物学实验室工作制度 分子生物学实验室分为试剂准备区、标本制备区、文库构建区、扩增区、纯化区、测序准备区、测序区合计7个独立工作区域：各区实验用品应有明显标识，严禁混用； 实验室工作人员均取得国家要求上岗资质； 为有效防止后扩增区产物的污染，实验工作人员应遵循单向走动原则。试剂准备区→标品制备区→文库构建区→纯化区→测序准备区→测序区，物品传递需通过传递窗进行，严禁人和物品反向流动，进入实验室必须更换有该室特殊标识的工作服和鞋套，工作服及拖鞋均有专门的衣柜存放，每个区均有专用的一次性手套、口罩、帽子并有固定存放处。4 实验室工作人员必须严格按照PCR实验室操作程序进行，实验开始前必须先做好室内及工作台的清洁消毒，离心管、吸头等一次性用品均需高压灭菌处理或用商品化专用耗材。建立门禁，非本室人员未经允许不得进入，工作人员在工作时也不能随意进出，以免造成不应有的污染。
6实验前后应用70%乙醇清洁实验室和实验台面，并打开紫外灯消毒30分钟，试验中使用过的吸头、离心管等应置于1mol/L HCL溶液中浸泡，消毒后集中处理，废弃物置于有生物危害标志的待处理区。7 每天下班前处理好废弃物品，关好水、电、门窗。定期校准和维护好PCR仪、离心机、水浴箱、冰箱等仪器设备。核心仪器设备应做好使用登记工作。
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