12月份经验教训总结-李新乐

第一篇：12月份经验教训总结-李新乐

12月份经验教训总结

生产部：李新乐

大肠杆菌 E.coli 是基因工程中常用的表达工具，它不像真核基因表达系统那样可以对表达产物进行翻译后加工修饰，但是由于其遗传背景清楚，有多种表达载体、菌株和纯化系统，生长快，产量高，成本低，生产规模大和使用安全，操作简便，周期短，经济等很多优点，因此仍然是不可被替代的使用最为广泛的系统。

目标蛋白在大肠杆菌系统中表达的形式有两种：一种是在细胞内表现为可溶性的蛋白质，一种是在细胞内表现为不溶性的包涵体颗粒，即产物以包涵体的形式存在。

包涵体是外源基因在原核细胞中表达，尤其在大肠杆菌中高效表达时，形成的由膜包裹的高密度、不溶性、无活性蛋白质颗粒，显微镜下观察时为高折射区，与胞质中其他成分区别明显。包涵体一般含有50%以上的重组蛋白，其余成分为RNA聚合酶，核糖体元件，环状和缺口质粒DNA，外膜蛋白OmpC、OmpA和OmpF以及脂质、脂多糖、肽聚糖等。一般难溶于水，只溶于变性剂(如盐酸胍，尿素等)。

包涵体的形成比较复杂，不仅与宿主细胞，表达基因有关，与外界培养环境也有很大关系。关于包涵体的形成，主要有以下几种论点：

①与胞质内蛋白质生成速率有关，基因表达速度太快，新生多肽无充足的时间进行折叠，从而形成非结晶、无定形的蛋白质的聚集体。动力学模型表明: 活性蛋白的产率取决于蛋白合成、折叠、聚集的速率,在蛋白质高水平表达时，新生肽链的聚集速率一旦超过蛋白正确折叠的速率就会导致包涵体的形成；

②局部高浓度的新生肽，加快非专一性沉淀。

③宿主菌的培养条件，如培养基营养成分、温度、pH值、离子强度等因素，都会影响包涵体的形成。当温度超过某一种蛋白的变性温度后，随着温度增加，蛋白质凝集量增加，当环境的pH接近某一种蛋白的等电点时，蛋白的凝集也增加，包涵体形成增多。

④蛋白质自身的稳定性。目的基因所表达的重组蛋白，对大肠杆菌来说属于异体蛋白，大肠杆菌表达体系内不具备某些哺乳动物蛋白(重组蛋白)翻译后修饰所需的酶类和辅助因子，如折叠酶或分子伴侣等，致使中间产物大量聚集形成包涵体。

⑤重组蛋白的氨基酸组成。研究显示含硫氨基酸多的重组蛋白形成包涵体的可能性较大。可能是因为宿主细胞还原性环境使表达蛋白中二硫键的稳定性下降，出现多余或错配的二硫键。

第二篇：9月份经验教训总结—李新乐

9月份经验教训总结

生产部：李新乐

九月份在制备gp41项目的菌体时，蛋白表达时形成了包涵体。

在基因工程中，在某些生长条件下，大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子，它们致密地集聚在细胞内，或被膜包裹或形成无膜裸露结构，这种水不溶性的结构称为包涵体。包涵体的形成主要是因为在重组蛋白的表达过程中缺乏某些蛋白质折叠的辅助因子, 或环境不适, 无法形成正确的次级键等。

1、重组蛋白在宿主系统中高水平表达时,无论是用原核表达体系或酵母表达体系甚至高等真核表达体系, 都可形成包涵体。事实上, 内源性的蛋白质, 如果表达水平过高, 也会聚集形成包涵体。因此, 包涵体形成的原因主要是高水平表达的结果, 即合成速度太快, 以至于没有足够的时间进行折叠, 二硫键不能正确的配对, 过多的蛋白间非特异性结合, 蛋白质无法达到足够的溶解度等。

2、重组蛋白在大肠杆菌中表达时, 缺乏一些蛋白折叠过程中所需要的酶和辅助因子, 如折叠酶和分子伴侣等, 是包涵体形成的又一原因。

高效表达的重组异源蛋白在大肠杆菌中形成包涵体的影响因素有很多, 其中温度就是一个很重要的因素，提高温度有利于包涵体的形成。较高的培养温度由于加快了蛋白质的合成速度, 增加了无活性蛋白质集聚物的形成速度和疏水作用, 因此促进了包涵体的形成。在制备gp41项目的菌体时，在37度条件下诱导时，形成大量包涵体，再改用16度过夜诱导后就得到了改善，形成可溶性表达。

第三篇：经验教训总结

最主要的问题怕而不果断

雷曼光电 当日放量涨停突破 怕高而没敢追 形态正好符合我的买点40%到手的利润没抓到 当时听信了股评家说欧洲债务危机没钱搞光电设备，而光电设备的买家主要是欧洲 可见，股评家的言论不可信。

教训：短线操作只注重技术研判，寻找短线热点，大胆追涨，果断买入，大胆持股 第一个涨停可以大胆追

濮耐股份 当时没有突破就买了不符合自己的买股标准的股票，买入后没有耐心而过早卖出，导致亏损。

三五互联 买入时机比较正确，但卖出应该果断，创新高但没放量就该果断卖出，第二天又涨停，而错过了

鑫富药业 涨停板追入，当天上涨有些急促，又不是短期热点，难免第二天的调整。

该股既非热点也没有向上攻击形态，只是听股评家说买超跌反弹品种而买入，受了他的影响

短线操作原则:

1.忍不要太心急，不惧调整

2.狠果断买进 卖出

3.稳坚定持股

4.快

5.细细心分析

6.股价经过急跌后涨停的股票要谨慎，做好买底部经过吸货后洗盘完毕的股票，除非形

态走势很完美，买经过蓄势的股票，准备向上攻击

7.经过急跌的股票，一定要经过一个吸筹的过程才可能向上攻击。以后未经过震荡蓄势的股票要少买。大黑马一般都是突破前期高点的股票。

短线真谛在于两个动作：跳跃和躲避跳跃：随板块轮动跳跃，个股只做正在拉升的个股，回避下跌调整的股票

第四篇：总结经验教训

总结经验教训，应对更严峻的安全管理工作 通过学习“群众路线教育实践活动”，结合安全工作实际情况，回顾半年来的安全工作，总结起来、分析起来，我们感到自己肩上的担子很重。

一、安全状况：

2013年1-7月份全矿共发生各类事故24起。其中死亡事故1起5人，轻伤事故13起21人，瓦斯超限事故10起。

其中：

轻伤事故与去年同期相比下降了32.3%（18起10人），六月份无轻伤事故。

2013年7月份全矿共发生1起轻伤事故：2013年7月13日3时30分掘二区9202队李汉岭在场子迎头片帮砸伤左腿。

今年7月份与去年同期各类事故下降6起，同比下降83.33%。今年7月与去年顶板事故同期都是1起；

今年7月份与去年同期其他事故下降7起，同比下降100%。从最近6月、7月的安全状况来看，我矿安全形势较好，如何发扬这样的成绩，这就是摆在安全管理者面前的重要任务。

二、只有总结才能看到不足，才能知道问题出在何方，才能应对严峻的安全管理工作。

安全生产是永恒的主题，是一切工作的基础。回顾过去的安全生产工作，我们清楚地看到，在工作中虽然施工措施写了很多，但是做到的却很少，不得不引起警惕。综一区冲击地压就是一个很好的案例，我们必须引以为戒。所以做好安全工作，就要看如 1 何保证安全管理措施到位，如何完善安全生产管理规章制度并有效实施，如何将安全工作的重点放在一线，是我矿当前认真对待的主题，既要完成上级交给的安全生产任务，还要在实际工作中把安全工作中的措施落实到位。

“安全第一、预防为主”的方针虽然早已家喻户晓，但实际上是喊得多、落实得少，叫得响、行动迟缓。安全工作不是一朝一夕的事情，也不是一个人的能力所能解决的，它受到多种因素的制约。只有加强安全生产过程监督，下大力度规范现场安全措施，加强对人员违章现场处理，不断规范现场作业行为，推行标准化作业，将安全工作真正从事后分析转移到过程监督中，才是扭转不安全局面的有效措施。在此，我就如何抓好下半年安全工作，谈几点意见和看法，不当之处请提出批评指正。

1、加强对安全生产工作的领导是实现安全生产的根本保证。要搞好安全生产工作，必须加强对安全生产工作的领导。安全工作管理既强调管到底，又强调理到位。调理到位就是要理出头序，理顺关系；就是要不断完善安全工作行为准则，检查制度和标准，考核奖惩办法。管到底，就是要使“安全第一，预防为主”的方针深入人心，要严抓细管，刚性考核，绝不姑息任何违章行为。比如有的职工蹬车，只要抓住就严厉处罚等等一些违章现象，始终坚持把安全生产摆在重要位置，不断健全安全生产保证体系和安全生产监督体系，以全面落实安全生产责任制为核心，以完善安全生产法规、制度和责任制为基础，以落实措施、反违章、推行质量标准化建设为原则，做到组织落实、措施落实、检查落实、考核落实，使安全生产管理的基础工作进一步加强。

2、安全管理制度化，安全措施规范化，作业行为标准化是安全生产管理的基本要求

“不以规矩，不成方圆”，没有合理而规范的管理制度和安全措施，何以能做好安全生产工作，所以不断完善、细化安全管理制度，制定具体的实施细则和办法，完善安全管理规章制度是我们做好安全生产工作的最基本要求。不能只重效益，不重安全，我们安监检查人员在检查过程中发现有的单位根本不重视上级下发的各种制度，不落实到位，比如小班安全质量评估，没有从这些规范中真正做细做好。在事故发生后才追悔莫及，才体会到安全生产管理工作的重要性，因此，在我们的安全生产工作中，每个人要规范的遵守安全生产工作制度和措施，而且要坚持做到贯彻落实，保障这些安全生产工作制度得以执行和落实。有了有效的制度，我们的安全生产工作才可能规范开展，收到应有效果，使安全管理制度化，安全措施规范化。比如：小班安全质量评估制度的落实，每个班都要认真对待，现场把隐患交代清楚，按标准按措施要求去施工，那么事故就会大大减少甚至会消灭事故。所以要求各单位严格按小班安全质量评估做起，从每个环节中落实到位，那么每个单位的质量标准提高了，再抓每个单位系统的存在的问题，把问题处理在萌芽之中，从队长、班组长、瓦检员在现场认真验收工程质量，认真检查施工过程的每个细小环节的安全状况，那么每个班组都会掌握到每个细节的安全状况，施工起来就不会出现质量问题，因此施工中的事故自然就会减少。

3、做好安全生产宣传，抓安全生产教育，提升职工安全意识是前提条件。安全生产与职工日常生活紧密相关，做好安全生 产工作，做好安全生产宣传，抓安全教育，提升职工安全意识是前提，职工安全意识的提高，职工自我保护能力的增强这些是抓好安全生产工作的基础，使职工真正做到从“要我安全”到“我要安全”本质改变。充分利用每日一题，每周一案的学习，让职工掌握技术知识、从“每周一案”中体会到事故教训，使安全生产工作家喻户晓、人人皆知，提升职工的安全意识，使安全生产工作深入人心，做到人人重安全，人人懂安全。安监处经常组织突击检查活动，一是宣传、教育，抓住蹬车违章人员向全矿通报、罚款，二是警示那些违章人员不要违章。另外下半年要求各单位认真做班前安全讲课活动，就本班要做的工作由工程师分析那里有安全隐患，应该注意的问题，贯彻到每名职工思想中，那么工作起来就会有所警示。今后下半年安监系统将不定期的进行突击检查活动，并对各单位的安全大课进行检查。

4、安全生产工作重在管理监督到位，安全管理监督是确保安全生产的重要环节

今年全矿1－7月份工程质量定级共检查394次，合格率为99.24%，优良品率25.12%，等外品率0.76%，其中：

采煤系统检查47次，合格率为97.88%，优良品44.68%，等外率2.12%，掘进系统检查151次，合格率为99.34%，优良品23.17%，等外率0.66%，开拓系统检查196次，合格率99.49%，优良品21.94%，等外品0.51%，从定级和日常检查来看抓好质量标准化是加强安全生产的重要环节，场子质量低劣，环境就会不好，那么自然影响到安全生产。所以要加强质量的安全管理工作。

安全工作重在管理监督到位，这是确保安全生产的重要环节。作为安监工作的监察工作者要根据生产不断发展的需求，及时发现和消除隐患，及时纠正和查处违章，实现安全监督由事后监督向事前监督、过程监督的转变，积极将安全隐患消灭在萌芽状态。安监系统对那些工程质量“偷工减料”现象，进行严厉罚款，并在全矿通报批评，扣发工程质量工资，将会促进安全状况的好转。

5、全面建设队班、组长建设工程。

我矿已下发峻煤发„2013‟19号文件，关于龙煤股份公司鹤 岗分公司峻德煤矿关于对跟班队长、班组长现场安全管理暂行规定（试行）的通知，按照文件规定下半年加强现场安全生产管理，明确跟班队长、班、组长是当班安全、生产第一责任者，在生产中，一定要摆正安全与生产的关系，真正做到不安全不生产。

班组建设培养全体职工的良好安全心态，让班组长强化安全意识，规范操作行为，提高安全技能，从而达到充分利用人的安全意识指导安全行为，用安全行为有效控制生产事故。作业现场施工是由班组完成，因此班组这个小的团体组成了整个的整体，如果在这个小团体中发挥好的积极作用，那么全矿的安全状况就会好转。并制定相应的规章制度，好的班组奖励，出事故的班组进行处罚。

6、“以人为本”是核心，坚持以人为本，树立人本理念是 创建安全文化的核心。

在今后的安全工作中要坚持以人为本。安全文化建设是预防事故的“人因工程”，以提高劳动者安全素质为主要任务。井下作业现场点多线长，环境复杂，因此心态安全文化是安全文化建设的基础和前提，最能体现人本思想。无论是管理者还是操作者，只有心态安全，才会有行为安全；只有行为安全，才能保证安全制度落到实处。追求健康是人皆有之的基本需求，但为什么还存在“三违”现象屡禁不止的情况呢？关键问题就是没有树立正确的安全理念！比如说，有的单位管理者为追求生产任务，在安全管理的行为导向上，迫使或诱发本单位职工拼任务、拼体力，违章冒险蛮干；再比如，“我要安全”本来应是职工的内在需要，可现在却变成了管理者强迫被管理者必须完成的一项硬性指标……错误观念不破除，正确安全理念不树立，安全文化建设就是竹篮打水。以往的安全教育大多是“我说你听”，不是大道理满堂灌，就是家长式的训斥。解决安全教育入心入脑的问题，一定要注重情感投入，“于细微之处见真情”。如采取为职工过生日、送警句、交心谈心等亲情教育法，不失时机、潜移默化地向职工宣传安全思想；充分发挥亲情的感染作用，筑牢安全第二道防线，那么安全状况就会有很好的转变。

总之安全工作要自我净化、自我完善、自我革新、自我提高，一切从实际出发系统学习孙成坤、吕新华关于“群众路线教育实践活动”的讲话精神，贯彻到安全工作中去，坚决贯彻执行矿党委的矿行政的决定，认真查找存在的突出问题，深入分析原因，总结经验教训，提出解决问题的思路举措和办法；进一步转变工 作作风，提高工作效率。认真开展隐患排查治理，做到排查隐患治理隐患不留后患，对存在重大安全隐患的队组，明确监管责任人，做到挂牌督办，确保隐患治理工作的落实。建立安全隐患排查治理台帐，把排查的安全隐患逐一建档，做到安全隐患有登记，落实整改有措施，检查督导有记录，隐患销号有验收，做到安全隐患治理不留盲区，不留死角，形成安全隐患排查治理长效机制。各单位要以隐患排查治理为契机，规范安全管理，实现隐患登记、整改、回查、销号的全过程管理，分析近年来事故安全，吸取教训，举一反三，提高发现问题及解决矛盾和问题的能力，提升安全管理水平，使安全生产长效机制落到实处，把下半年的工作做好。

2013-8-17，

第五篇：总结经验教训

总结经验教训

成功固然有方法，失败必然有原因。一个人在追求成功的同时，免不了会遭受到许许多多的挫折和失败。曾经努力地去奋斗但结果却失败了，这也许是人生的最大悲剧。除了少数的成功者之外，绝大多数人都遭受过失败或正在失败。在这里，除了要对自己所选择的目标有强烈的信心、明确的目标，坚韧不拔的毅力......外，而必须懂得对失败的原因加以分析、总结，只有这样，才能避免下次重蹈覆辙。古语有云：失败乃成功之母。现如今又有歌唱到：不经历风雨哪能见彩虹，没有人能随随便便成功。可见失败是常有的事，就像我们小时候学走路，跌倒是常有的事。看看现在的我们哪个不是健步如飞。所以失败并不可怕，恰恰相反，失败却是我们成功路上的良师益友。没有这一次的跌倒，哪有下一次的稳健。所以我们不要惧怕失败，就像我们从来不惧怕跌倒一样。不要因为一次的失败而放弃梦想。就像我们没有因为一次的跌倒而放弃走路。只要你正确对待失败，对失败的原因认真的做好分析、总结。总结经验教训，在从新来过，那么我相信成功就只是早晚的事了。

大多数人经历过失败，或者正在经历失败。为什么成功的却只有极少数呢，原因很简单，我们通常在经历过一次失败后，便灰心丧气，给自己找一个很好的理由便就此放弃了。从来没有认真的对过去的失败认真的分析总结，又或许我们失败了，我们也分析了总结了，再做，还是失败。于是更加冠冕堂皇的放弃。但是，成功哪有这么容易。正如前面的歌所唱的，没有人能随随便便成功。要知道在通往成功的道路上是充满荆棘的。我们只有踏平所有的荆棘才能看清通往成功的道路。所以我们要不断的总结经验教训，失败一次分析一次，失败一次，总结一次。只要我们每次失败都能进步一点一点，那我们就能往成功走近一点点。只要我们坚持不懈，我相信我们终有抵达成功的一天。

正如我们现在所生活的文明社会，不也是一步一步总结历史的经验教训而走过来的吗？所以对我们来说，失败是一笔巨大的经验财富，只要我们一点一点的总结，积少成多，运用我们失败的经验也终究会走上一条通往成功的大道。