生物化学实验报告：Western blotting检测大肠杆菌重组蛋白

第一篇：生物化学实验报告：Western blotting检测大肠杆菌重组蛋白

实验三 Western blotting检测大肠杆菌重组蛋白

一、实验目的

利用Western Blotting技术，定性（或定量）检测苦荞黄酮醇合酶基因（Flavonol synthase gene, FtFLS）在大肠杆菌表达宿主菌Escherichia coli BL(DE3)中的诱导表达。

二、实验原理

黄酮醇合酶（FLS，EC 1.14.11.23）属于2-ODD家族，催化黄酮醇合成支路中最后一步氧化反应，也是直接合成黄酮醇的反应。FLS可以使二氢黄酮醇在C3链中C2和C3之间氧化形成双键，从而生成黄酮醇：a Dihydroflavonol + 2-oxoglutarate + O2 a Flavonol + succinate + CO2 + H2O。

本实验采用PCR的方法，在苦荞黄酮醇合酶基因（FtFLS）ORF起始密码子前引入Kpn І酶切位点，去掉终止密码并引入BamH І酶切位点。克隆引入酶切位点后的FtFLS到表达载体pET-30b(+)质粒中，其表达产物分别在N-末端和C-末端各含有6 × His标签。重组质粒（pET-30b(+)-FtFLS）经鉴定后转化表达宿主菌E.coli BL21(DE3)并使用IPTG进行诱导表达。收集诱导0 h、2 h、4 h、6 h和8 h的产物，经SDS-PAGE后用于考马斯亮蓝R-250染色或Western blotting分析。

Western blotting的标准流程如下：蛋白质首先通过SDS-PAGE胺凝胶电泳分离，通过电泳转移到固相支持物上（硝酸纤维素膜、PVDF膜和尼龙膜）；将膜上未反应的位点封闭起来，以抑制抗体的非特异性吸附，固定的蛋白质即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用并通过放射、生色或化学发光的方法进行定位。

本实验采用小鼠抗聚组氨酸单克隆抗体（Anti-His tag IgG，一抗）与重组FtFLS蛋白的N-末端和C-末端6 × His发生抗原-抗体特异反应，再利用辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG（peroxidase-Goat Anti-Mouse IgG，二抗）与一抗发生特异结合，最后使用DAB进行显色。DAB即：二氨基联苯胺（3, 3'-diaminobenzidine），是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物。DAB在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。该方法常用于检测过氧化物酶的活性，它灵敏度高，特异性好，在免疫组化，原位杂交，Western blotting等膜显色中 1

应用广泛。

三、操作步骤 3.1 样品的制备

原始样品可为细胞、组织、培养上清、免疫沉淀或亲和纯化的蛋白，以下为定性检测大肠杆菌重组蛋白时细胞样品的处理方法，其余的样品制备方法参阅相关文献。

材料与试剂：

重组pET-30b(+)-FtFLS质粒、表达宿主菌E.coli BL21(DE3)、LB固体培养基（Kan 50μg/mL）、LB 液体培养基（10mL、50mL）、Kan（50 mg/mL）、IPTG（24 mg/mL）、PBS缓冲液、5 X SDS上样缓冲液。仪器与设备：

恒温培养箱、恒温摇床、超净工作台、酒精灯、消毒酒精（75%）、棉球、接种环、台式离心机、冰盘、Tip（10 μL、200 μL、1 mL）、微量加样器（10 μL、200 μL、1 mL）、离心管（1.5 mL、10 mL）。操作步骤：

①含重组质粒pET-30b(+)-FtFLS的表达宿主菌E.coli BL21(DE3)划线于LB 固体培养基（Kan抗性），37℃培养16 h。

②挑选单菌落，接种至10 mL LB培养基（按0.1%加入Kan，10 μL）于37 ℃过夜培养，即为种子液。

③按2 %的接种量（1 mL）将种子液接种到50 mL LB Kan培养基中（按0.1%加入Kan，50 μL），于37 ℃培养OD600至0.5（约2.5 h）。

④加入IPTG至终浓度为1 mmol/L（100 μL），置于25℃连续诱导表达8 h，分别取诱导前0 h，诱导后2 h、4 h、6 h和8 h的培养液5 mL于10 mL离心管中，置于冰水混合物上备用。

⑤诱导完毕后，各样品于8000 rpm（12000 rpm易爆管）离心5 min收集沉淀，用等体积PBS（5 mL）重悬漂洗细胞2次，收集菌体。

⑥各管分别加入400 μL PBS重悬细胞，加入100 μL 5 X SDS上样缓冲液，置于沸水浴中10 min（注意防止爆管）。注意事项：

①重组蛋白的诱导表达应进行正确的无菌操作并加入适宜浓度的抗生素，避免可能的污染。

②在合适的盐浓度下，应保持蛋白质的最大溶解性。

③选择合适的表面活性剂和还原剂，破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价键二硫键。尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子。

④制备过程应在低温下进行，以避免细胞破碎释放出的各种酶类的修饰。

⑤样品建议分装成合适的量（比如分装出20ul检测蛋白质定量用），然后保存与-20°或-80℃中长期保存，但要注意不要反复冻融，因为会使蛋白的抗原特性发生改变。3.2 SDS-PAGE SDS-PAGE（SDS变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳）的分离原理则仅根据蛋白质的分子量的差异。因为SDS-PAGE上样缓冲液含有SDS和巯基乙醇（2-ME）或二巯基赤藓醇（DTT），其可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键、分子内氢键、破坏蛋白质的高级结构、形成SDS-蛋白质复合物。该复合物形成榛状结构，平均每两个氨基酸残基结合一个SDS分子，使其带有大量的负电荷（蛋白质分子本身的电荷完全被SDS掩盖），从而消除了不同分子之间原有的电荷差别。材料与试剂：

① 分离胶缓冲液（1.5 mol/L Tris-HCl，0.4% SDS，pH 8.8）。② 浓缩胶缓冲液（0.5 mol/L Tris-HCl，0.4% SDS，pH 6.8）。

③ 30%丙烯酰胺/N, N'-亚甲基双丙烯酰胺（Arc/Bis）：29.2 g Acr，0.8 g Bis，定容至100 mL。

④ 10%过硫酸铵（W/V），需新鲜配制。

⑤ 2 X 上样缓冲液（pH 8.0）：含0.5 mol/L Tris-HCl（pH 6.8）2 mL，甘油2 mL，20% SDS 2 mL（W/V），0.1%溴酚蓝 0.5 mL，2-β-巯基乙醇（2-ME）1.0 mL，定容至10 mL。

⑥ 电极缓冲液（pH 8.3）：3.03 g Tris，14.41 g Gly，1.0 g SDS，调整pH后定容至1000 mL。

⑦ 染色液：45%甲醇，10%乙酸，0.25%考马斯亮蓝R-250。⑧ 脱色液：10%（V/V）乙酸，5%（V/V）乙醇。⑨ 封底胶：1g琼脂糖溶于100 mL电极缓冲液。⑩ 预染标准分子量蛋白质Marker。仪器与设备：

垂直板电泳槽及其附件，电炉，电泳仪，微量加样器（10 μL），Tip（10 μL）。操作步骤：

① 电泳槽的安装：将成套的两块玻璃板正确放入硅胶条中，夹在电泳槽里，按对角线顺序旋紧螺丝（注意分辨上下槽）。用1%的琼脂糖封底（封于下槽底部），待琼脂糖凝固后即可制胶。

② 制胶：选择合适的胶浓度，按下表配制分离胶，灌入两玻璃板之间，加至距短玻璃板顶端3 cm处，立即覆盖5 mm左右水层，静置等待聚合，当分离胶与水层之间的界面重新出现时表明胶已聚合。小心倒掉分离胶上水层，配制浓缩胶后加入玻璃板中，插入梳子并及时补充由于浓缩胶聚合产生的空隙（该过程避免气泡的产生）。

本实验选用12.5%的SDS-PAGE胶对重组FtFLS进行分离。

试剂 浓度 分离胶缓冲液 mL 浓缩胶缓冲液 mL Acr/Bis mL

分离胶

7.5% 10% 12.5% 15% 4.05.3

4.08.0

30% 4.01.25 0.75 4

H2O mL 10% AP mL TEMED mL

8.0 0.3

6.7 0.3

5.3 0.3

4.0 0.3

1.3 0.3

3.0 0.15 0.005

0.008 0.008 0.008 0.008 0.008 ③ 点样：分别在上下电泳槽中倒入电极缓冲液，上槽淹没短玻璃板，下槽淹没电极即可。此时，小心拔出梳子，用微量加样器调整点样孔之间的浓缩胶（此步骤应检查电泳槽是否漏液）。使用微量进样器分别在样品槽内分别加入预染的标准分子量蛋白质、诱导前0 h，诱导2 h、4 h、6 h和8 h后处理好的样品18 μL（上样总体积一般不超过15 μL，加样孔的最大限度可加20 μL样品）。

④ 电泳：接通电源，调节电压至100 V，恒压电泳；待指示剂进入分离胶后，调节电压至200 V恒压电泳。待指示剂在分离胶中迁移5-6 cm左右时，停止电泳。剥胶：小心剥胶，将浓缩胶（浓缩胶影响操作）和分离胶上不用的部分切去（便于识别），见图3和图4.⑤ 染色：凝胶经蒸馏水漂洗1次后加入染色液，电炉加热处理10-20 min染色。⑥ 脱色：使用蒸馏水漂洗取出染色液，加入脱色液，电炉加热脱色至出现清晰的蛋白条带。注意事项：

①上样总体积一般不超过15L，胶孔的最大限度可加20L样品。

②微量加样器应贴壁吸取样品，避免吸进气泡；将微量加样器Tip头插至加样孔中缓慢加入样品，避免样品溢出。

③电泳设备应注意检查正负极、是否短路或接触不良、是否漏液、电流电压大小（电流强度会随电泳的进行有所降低）。

④电极缓冲液和AP应新鲜配制，上下槽缓冲液不可混用（电泳完毕分别收集）。3.3 转膜与杂交

杂交膜的选择是决定Western blotting成败的重要环节。应根据杂交方案、被转移蛋白的特性以及分子大小等因素，选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。

用于Western blot 的膜主要有两种：硝酸纤维素膜（NC）和聚偏氟乙烯（PVDF）膜。NC膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物，在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起，但在非离子型的去污剂作用下，结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小，选择不同孔径的NC膜。因为随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。通常用0.45 μm和0.2 μm两种规格的NC膜。大于20 kDa的蛋白可用0.45 μm 的膜，小于20 kDa的蛋白用0.2 μm的膜。PVDF 膜灵敏度、分辨率和蛋白亲和力比常规的膜要高，非常适合于低分子量蛋白的检测。但PVDF 膜在使用之前必需用纯甲醇浸泡饱和1-5 sec。蛋白质常用的转移方法主要有两种：槽式湿转和半干转移。前者操作容易，转移效率高；而后者适用于大胶的蛋白转移，所用缓冲液少。以下为槽式湿转的操作步骤。材料与试剂：

材料：PVDF膜，Whatman 滤纸，搪瓷盘，一次性PE手套，镊子，玻棒，试剂：转移缓冲液 pH 8.3（25 mmol/L Tris，0.2 M 甘氨酸，20%甲醇），1000 mL 10 X TBS缓冲液pH 7.6（24.2 g Tris base，80 g NaCl，用1N HCl调pH=7.6），脱脂奶粉、BSA或试剂盒自带的蛋白质干粉，洗涤缓冲液（1 X TBS，0.1% Tween-20），封闭缓冲液（1×TBS，0.1% Tween-20，5% w/v脱脂奶粉或BSA），抗体稀释液[1×TBS, 0.1% Tween-20 加5% BSA（多抗）或5%脱脂奶粉（单抗）]。仪器与设备：

转膜电泳仪及其附件，杂交仪，培养皿，凝胶成像系统。操作步骤： 转膜

① 准备转移缓冲液，依据胶的大小剪取膜和滤纸6片，将凝胶和PVDF膜和滤纸放入转移缓冲液中平衡10min。

② 装配转移三明治（海绵→3层滤纸→胶→膜→3层滤纸→海绵）：在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和浸过的膜；将夹子打开使一面保持水平（规定为正极）。在上面垫一张海绵垫，用玻棒来回擀几遍以

擀走里面的气泡。在垫子上垫三层滤纸，一手固定滤纸一手用玻棒擀去其中的气泡。依次加膜、加胶，再在膜上盖3张滤纸并除去气泡，见图5。

③ 将转移槽置于冰浴中，放入三明治，加转移缓冲液，插上电极，100V电泳1h（电流约为0.3 A）。

④ 电泳结束，观察预染的蛋白质Marker是否转移到膜上。杂交

① 用25-50 mL洗涤缓冲液洗涤硝酸纤维素膜5 min, 1 次。

② 封闭硝酸纤维膜：加封闭缓冲液25 mL，37℃封闭2 h。用量以浸没整张膜为准，图6。

③ 抗体的稀释（已依稀）：小鼠抗聚组氨酸单克隆抗体使用100 μL抗体稀释液进行溶解稀释，储存与4℃。（一般特异性抗体浓度1 μg/mL）

④ 硝酸纤维膜孵育一抗：加入20 mL抗体稀释液，将25 μL一抗加入培养皿中（已完全覆盖膜为准），37℃孵育2 h左右，见图7和图8。（视实验时间，也可以4℃孵育过夜）

⑤ 用25 mL洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维素膜3 次, 每次5 min。

⑥ 硝酸纤维膜孵育二抗：加入25 mL抗体稀释液，将25μL二抗全部加入培养皿中（以完全覆盖膜为准），37 ℃孵育2 h，见图7和图8。

⑦ 用30 mL洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维膜4 次, 每次5 min。

⑧ DAB 显色：按每2 mL蒸馏水加显色剂A，B，C 各１滴，混匀。混匀后加至膜上。室温显色。一般显色1－30 分钟。若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。注意事项：

①操作中戴手套，不要用手触膜。

②如检测小于20 kDa的蛋白应用0.2μm的膜，并可省略转移时的平衡步骤。③某些抗原和抗体可被Tween-20 洗脱，此时可用1.0% BSA代替Tween-20。④关于封闭剂的选择：5%脱脂奶/TBS or PBS: 能和某些抗原相互作用，掩盖抗体结合能力；0.3~3% BSA in PBS：低的内源性交叉反应性。

⑤如用0.1% Tween 20、0.02% NaN3 in PBS or TBS作封闭剂和抗体稀释液，抗体检测后可进行蛋白染色。

⑥如要同时检测大分子量和小分子蛋白，最好用梯度胶分离蛋白。

四、实验结果

4.1 考马斯亮蓝显色结果

4.2 DAB显色结果

五、讨论与分析

1.考马斯亮蓝显色结果

由图可知，其变化趋势是目的条带颜色越来越深，条带宽度也逐渐变宽。说明随着培养时间推移，产生的目的蛋白越来越多，也就意味着转入的基因得到表达。而目的条带宽度在6h以后变化已经不明显，说明此时目的蛋白的表达已达到接近峰值。实验结果的背景色偏深，但还不影响结果的判定。2.DAB显色结果

由于显色结果并不理想，不能清晰反映我们实验设计所需要的结果。上图显色结果为绘制的示意图。主要可能是因为一抗孵育时间较短导致，也可能是由于蛋白样品本身上样量不足或蛋白浓度较低，以及转膜转印效率不够高。另外，也可能由于以下这些方面没有严格做到影响了实验结果：

A制作凝胶时，严格按照配方制作，倒胶时做到既快又稳，防止产生气泡。同时，制胶前应洗净玻板并使其完全干燥，否则会影响实验结果。

B进入杂交阶段，重要的是控制温度和孵育时间，在孵育之前，封闭也是必不可少的步骤。显色效果与各个步骤都是密不可分的，但一抗、二抗品质与用量尤为重要。这一步必须尤为仔细。

C 当进入转膜阶段时，注意转移三明治的顺序，海绵、滤纸、胶、膜，滤纸，海绵。还需要注意的是一定要驱赶完海绵里的气泡，不然会造成短路。

D为提高实验准确度样品应按照以下标准：样品不能反复冻融，样品未加蛋白酶抑制剂。同时，建议检查Western Blot过程，提高抗浓度。对于加蛋白酶抑制剂来说，一般加PMSF就可以了，最好能多加几中种蛋白酶抑制剂。

第二篇：生物化学实验报告格式

《生物化学实验》

实验报告本

专业

班级

姓名

学号

目录

实验一 基本操作

实验二 血糖测定

实验三 血清谷丙转氨酶的测定 实验四 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 实验五 凝胶层析（分子筛层析）

实验六 饱食和饥饿对白鼠肝糖原含量的比较 实验七 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 实验八 分离纯化基因组DNA

（一）实验九 分离纯化基因组DNA

（二）实验十 PCR

实验十一 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物

实验题目

1.实验目的2.实验原理

3.实验步骤

4.实验数据及处理（或实验现象及分析）

5.结论

6.讨论

《生物化学实验》

预习与原始记录本

专业

班级

姓名

学号

目录

实验一 基本操作

实验二 血糖测定

实验三 血清谷丙转氨酶的测定

实验四 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 实验五 凝胶层析（分子筛层析）

实验六 饱食和饥饿对白鼠肝糖原含量的比较 实验七 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 实验八 分离纯化基因组DNA

（一）实验九 分离纯化基因组DNA

（二）实验十 PCR

实验十一 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物

实验题目

1.预习报告

1.1实验目的1.2实验流程

1.3 预计结果

1.4注意事项

2.实验原始数据记录（或实验现象）

第三篇：彭文豪运动生物化学实验报告

用pH试纸检测晨尿的酸碱度实验报告

课程：运动生物化学实验名称：用pH试纸检测晨尿的酸碱度实验 实验时间：2013年4月18日实验地点：长江大学新体育馆

姓名：彭文豪班级：体教11001班

学号：201000290得分：

实验目的：学习并掌握如何用pH试纸检测晨尿的酸碱度，讨论尿液的成分以及24训小时练对尿液成分的影响。

实验原理： pH试纸是用来检测液体或气体酸碱度的工具,pH 英文全名hydrogen ion concentration，氢离子浓度指数。这是一种现成的试纸，想要使用时，撕下一条，放在平整的玻璃器上。然后用一支干燥的玻璃棒或滴管从玻璃容器中蘸取一滴溶液滴到pH试纸的中部,从它的颜色变化中可以知道溶液的酸碱度。pH试纸遇酸变红，遇碱变蓝。通过试纸变化的颜色与标准的比色卡的颜色进行对照，我们大致可以知道溶液的的pH值了。想要检测尿液的酸碱度，我们可以采用早晨起床的第一次的尿液，这样我们检测的值会相对比较准确。实验器材：1个玻璃杯、玻璃棒、pH试纸、标准比色卡、记录的工具、清洁剂、干抹布、手机上的秒表

实验对象： 测试者：彭文豪（网球专项）记录员：彭文豪

实验步骤：

1、清晨起床后开始收集自己未进食的尿液，盛放在玻璃杯中，并放在可测量的桌面上。

2、取出保存好的pH试纸，撕下一片，并将其他的pH试纸继续放在容器中好好保存同时把标准的比色卡平整的放在便于自己观察的桌面上。

3、取出干燥的玻璃棒，从玻璃杯中蘸取一滴尿液，滴到pH试纸的中部。14、过了半分钟，观察pH试纸的颜色变化，与标准的比色卡进行对照，观察出自己的尿液pH值，记录下各自的数据。

5、大约过2分钟之后进行第二次实验，重复第一次的实验步骤。并记录结果。倒掉剩余的盛放在玻璃杯中的尿液，清洗干净玻璃杯玻璃棒。并及时归还仪器。

6、通过检测出来的pH值，分析尿液是否正常，或者是造成尿液过酸或过碱的原因。

实验结果：

1，第一次测得彭文豪同学晨尿的pH值为6，第二次测得的结果为7。正常的尿液的pH值在5.5到7.4之间，所以,彭文豪同学晨尿的pH值在正常的范围内。

2，尿液的成分有水：95 %蛋白质，0%葡萄糖，0%尿素，1.8 %尿酸，0.05%无机盐1.1%。

3，两次测得的结果不一样是由于我们生活的大气中到处都是有细菌的。尿液放置一段时间后，会被细菌分解，自然产生了氨气，氨气成弱碱性，所以在第二次测试的结果上，尿液的pH值有所升高。

4，作为羽毛球专项蒲涛同学第一次的测试结果是5，第二次的测试的结果是6.而尿液的酸碱度的不同也是有许多方面的因素构成的，经调查蒲涛同学在前一天在激烈的网球运动过程中，机体处于缺氧状态，导致大量氧化不全，产物如乳酸、酮体和丙酮酸等酸性物质堆积，从而使尿PH值明显下降，尿液PH值可达5—6程度。而彭文豪同学进食正常，运动量也不大，所以尿液检测结果基本正常。而蒲涛同学检测结果相对呈酸性尿液。5，结论：饮食和运动的剧烈性可以影响人的尿液的酸碱度。

测试者：彭文豪被测试者：彭文豪记录员：彭文豪评分人：彭文豪

第四篇：水中大肠杆菌的检测(多管发酵法)

水中大肠杆菌群书的检测（发酵法）

一、试验目的：

1.了解和学习水中大肠杆菌的测定原理和测定意义。

2.学习和掌握水中大肠杆菌的检测方法。

二、试验原理：

水的微生物学的检验，特别是大肠杆菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水的标准规定饮用水中大肠杆菌群书每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。

水中大肠杆菌的检验方法，常用多管发酵发和滤膜法。多管发酵发可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。滤膜法仅用于自来水和深井水。操作简洁快速，但不适用于杂质较多，易于阻塞滤孔的水样。

三、实验器材：

1.水样：自来水

2.试剂 ：乳糖蛋白胨发酵管内有倒置小套管三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管瓶内有倒置小套管

伊红美蓝或复红亚硫酸钠琼脂平板革兰氏染液。3.仪器及其它用品：载玻片灭菌带玻璃塞空瓶灭菌吸管灭菌试管革兰氏染液显微镜香柏油二甲苯擦镜纸吸水纸灭菌三角瓶等

四、实验步骤：

第一步：

1.水样的采集

自来水洗将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，在开放水龙头取水流5ｍｈ，以灭菌山角瓶接水取样以备分析。

2.用发酵法检查大肠杆菌

（1）生活饮用水的检验

①初步发酵试验：在2个各装有50ｍｈ的3倍乳糖蛋白胨培养液的三角瓶中，以无菌操作各自加水样10ｍｈ。摇匀后，37℃培养24ｈ

第二步：

②平板分离：经24ｈ培养后。特产酸产气及只产酸的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板（EMD培养基上），37℃培养18～24ｈ。大肠杆菌群在EMD平板上，菌落呈紫黑色，具有或略带或不带有金属光泽，或者呈淡紫红色，仅中心颜色较深，挑取符合上述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。

第三步 ：

③复发酵试验：将革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落的剩余部分接于单倍乳糖发酵管中，为防止遗漏，每管可接种来自同一初发酵管的平板上同一类型菌群1～3个，37℃培养24ｈ，如果产酸又产气者，即证实有大肠菌群存在。

第四步 ：

④报告：根据证实有大肠菌群存在的复发酵管的阳性管，查表，报告每升水样品中大肠菌群数（MPN）.

第五篇：渗透检测实验报告!

渗透检测实验报告

一、实验目的：了解渗透检测的基本原理、方法和操作过程，了解渗透检测缺陷的类型及应用特点。

二、实验内容：用气保护焊堆焊，采用渗透检测的方法对焊缝的裂纹缺陷进行评定。

三、实验要求：

1．了解气保护焊的原理及堆焊技术应用； 2．掌握渗透检测技术的原理与方法； 3．对焊缝进行表面质量检测和质量评定。

四、实验装置：试板一块，渗透剂、显影剂、清洗剂各一瓶，纱布若干，锤子一把，钢丝刷一把。

五、实验步骤：

1.将焊缝表面的渣壳、将污染物清理干净。2.用清洗剂清洗焊缝表面。

3.用肉眼观察焊缝表面的裂纹情况，并记录裂纹的数量。4.在焊缝表面喷涂渗透剂，保持湿润约5-10分钟。

5.擦去试件表面多余的渗透剂，用清洗剂昅洁焊弝表面。6.待表面干后，在焊缝表面喷涂显影剂。7 记录喷涂显影剂后显示的裂纹数量。

六、实验数据及处理

1.将肉眼观测到的裂纹数量和渗透检测出的裂纹数量进行对比。2.对焊缝的质量进行评定。

七、实验报告要求

1． 说明渗透检测的原理、方法和操作步骤。

原理：是利用 荧光染料(荧光法)或 红

艰染料(着色法)渗透剂的渗透作用, 显示缺

陷痕迹。

方法：在被检工件表面涂覆渗透液 渗ဏ液渗入到工件表面开口的缺陷中 去除工件表面多余的渗透液 在工件表面涂上显象剂

缺陷中的渗透液被吸到工件的表面 形成缺陷的痕迹

步骤： 预清洗

渗透

中间清洗

干燥

显像

观察

2． 说明渗透检测缺陷的类型及应用特点。类型：

适用于各种金属材料和非金属材料构件、表面开口缺陷的质量检验

应用特点：渗透探伤由于检验对象不受材料组织结构和化学成分的限制，因而广泛应用于黑色和有色金属锻件、铸件、焊接件、机加工件以及陶瓷、玻璃、塑料等表面缺陷的检查。它能检查出裂纹、冷隔、夹杂、疏松、折叠、气孔等缺陷；但对于结构疏松的粉末冶金零件及其他多孔性材料不适用。

3． 对实验的现象和结果进行分析，并对焊缝的质量进行评定。

本次实验中采用的是着色法，是将含有着色染料物质的渗透液涂敷在被探伤件表面，通过毛细作用渗入表面缺陷中，然后清洗去表面的渗透液，将缺陷中的渗透液保留下来，进行显像。本次实验的显像方法是将显像剂喷涂在被探伤件表面，使渗透液在白光或日光下鲜明可见，便于检查。

图1 喷涂清洗剂后的焊缝表

图2 喷涂显影剂之后的焊缝表面

从上到下依次为: 第一条焊缝不均匀有夹杂，第二条焊缝有裂纹，第三条焊缝有裂纹，第四条焊缝有裂纹，第五条焊缝有裂纹，第六条焊缝不均匀，第七条焊缝有夹渣和裂纹。所以这批焊缝的体质量不合格。

组员：

陈伟10090311 贺峻岳10090308 王维10090304 李嘉泰10090324 韦竺施10090313