高中生物必修二实验十一DNA的粗提取与鉴定

第一篇：高中生物必修二实验十一DNA的粗提取与鉴定

实验十一

DNA的粗提取与鉴定 教学目的

初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。观察提取出来的DNA物质。实验原理

DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。DNA在0．14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA。DNA＋二苯胺蓝色（用于DNA的鉴定）实验步骤 1．材料制备

0.1G/ml柠檬酸钠100ml

500ml烧杯→玻璃棒搅拌→1000r/min离心2min→吸去上清液→ 活鸡血180ml

即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血细胞自行沉淀）2．方法步骤

取血细胞液5-10ml＋20ml蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速搅拌

（1）提取血细胞核物质纱布过滤，滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质 原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞破裂（2）溶解核内DNA：滤液＋2mol/LNaCl溶液40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌

（3）析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液相当于稀释到0．14mol/L）（4）滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上（5）DNA粘稠物再溶解：

20ml2mol/LNaCl溶液

50ml烧杯，上述粘稠物缓慢搅拌3 min（6）过滤含DNA的2mol/LNaCl溶液：用2层纱布过滤，滤液中含DNA（7）提取含杂质较少的DNA：上述溶液＋95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝装物卷起。（8）DNA鉴定：

实验关键：

本实验成功的关键是获取较纯净的DNA，因此应注意：

1．充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后，应用 玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出DNA 2．沉淀DNA必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精，并在冰箱中（5℃以下）至少存放24小时。

3．正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第（3）、（5）步骤，玻璃棒不要直插烧杯底部，且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。在步骤（7），要将玻璃棒插入烧杯溶液中间，用手缓慢转动5-10min。【同类题库】

．在“DNA的粗提取与鉴定”的实验中分别使用2mol／L、0．14mol／L、2mol／L、0015mol／L的氯化钠溶液，其作用分别是（A）A．溶解、析出、溶解、溶解

C．溶解、溶解、析出、溶解 B．析出、溶解、析出、溶解

D．溶解、析出、溶解、析出 ．下列图示中能反映DNA溶解度与NaCI溶液浓度之间关系的是（C）

．DNA在下列哪种浓度的NaCl溶液中溶解度最低（B）

A．2．00mol/L

B．0．14 mol/L

C．0．015 mol/L

D．0．10 mol/L ．在DNA的粗提取过程中，初步析出DNA和提取较纯净的DNA所用的药品的浓度和名称分别是（B）

①0．1 g/ml的柠檬酸钠溶液②2．00mol/L的NaCl溶液③0．14 mol/L的NaCl溶液④体积分数为95%的酒精溶液⑤0．015 mol/L的NaCl溶液⑥0．04 mol/L的NaCl溶液 A．①③⑤

B．③④

C．②④

D．②③④ ．与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是（C）A．操作时缓缓滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度

B．在操作A时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证DNA分子完整 C．加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度，两者均可析出 D．当丝状粘稠物不再增加时，此时NaCl的浓度约为0.14mol/L.．（多选）下列有关“DNA粗提取”的操作中，正确的是（ABCD）A．在鸡血细胞液中加入蒸馏水

B．在“析出DNA粘稠物”时，要缓缓加入蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增多 C．在用酒精凝集DNA时，要使用冷酒精 D．用玻璃棒搅拌时要沿一个方向 ．“DNA的粗提取与鉴定实验”中有三次过滤：（1）过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液。（2）过滤含粘稠物的0.14mol/L NaCl.（3）过滤溶解有DNA的2mol/L NaCl.以上三次过滤分别为了获得（A）

A．含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液 B．含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液 C．含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布中DNA D．含较纯的DNA滤液、纱布上粘稠物、含DNA的滤液

．为获取较纯净的DNA，采集来的血样可用蛋白酶处理，然后用有机溶剂除去蛋白质。下列有关叙述，正确的是（D）

A．除去血浆中的蛋白质

B．除去染色体上的蛋白质

C．除去血细胞表面的蛋白质

D．除去血细胞中所有的蛋白质

．在“DNA的粗提取与鉴定实验”中，和“使用蛋白酶从染色体中提取DNA”中的蛋白酶具有相似作用的物质是（D）

A．NaCl溶液

B．蒸馏水

C．柠檬酸钠

D．冷却的酒精 ．DNA不溶于下列何种溶液（D）

A．NaCl溶液

B．KCl溶液

C．MgCl溶液

D．酒精溶液 ．下列不同浓度的NaCl溶液中，使DNA析出最彻底和溶解度最高的是（A）①0.14mol/L ②2mol/L ③0.25mol/L ④0.015 mol/L A．①和②

B．②和①

C．②和③

D．②和④ ．下列操作中，对DNA的提取量影响较小的是（B）

A．使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA等核物质 B．搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动

C．在析出DNA粘稠物时，要缓缓加入蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增多 D．在用酒精沉淀DNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却 E．在DNA的溶解和再溶解时，要充分搅拌 ．在“DNA的粗提取与鉴定实验”中：

（1）实验中两次使用蒸馏水，第一次目的是，第二次目的是。

（2）说明不同浓度的NaCl溶液的作用： 2mol/L NaCl的作用； 0.14mol/L NaCl的作用； 0.015 mol/L NaCl的作用；

（3）提纯DNA的原理是，所用试剂为。搅拌要，目的。

（4）能否用哺乳动物血液代替？简述理由。

[（1）使血细胞吸水破裂，溶解细胞核内的DNA；降低NaCl溶液的浓度，降低DNA分子在NaCl溶液中的溶解度析出DNA分子（2）溶解含DNA的核物质；使含DNA的丝状粘稠物析出DNA分子；进行DNA鉴定（3）DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些盐类蛋白质可溶于酒精溶液；95%的冷却酒精；轻缓、同方向；保持DNA分子的完整性（4）不能，成熟的哺乳动物红细胞没有细胞核] ．此实验中有几次用玻璃棒搅拌，每次搅拌的方向是一致的；但每次搅拌的强度不同，请就此予以说明。

（1）提取鸡血细胞核内物质时，应搅拌，目的是。

（2）向含核物质的2mol/L NaCl 溶液滴加蒸馏水析出DNA粘稠物时，应搅拌，目的是。（3）DNA粘稠物再溶解于2mol/L NaCl 溶液时，应搅拌，目的是。（4）用95%的冷却酒精提取含杂质较少的DNA时，应搅拌，目的是。

[（1）快速；加速血细胞破裂（2）轻缓；尽量保持DNA分子的完整性（3）轻缓；尽量保持DNA分子的完整性（4）轻缓；保持DNA分子的完整性] ．以下是有关DNA的粗提取实验的阅读材料：

a．核酸极不稳定，在较为剧烈的化学、物理因素和酶的作用下很容易降解。在制备DNA时要加入DNA酶（水解DNA的酶）的抑制剂柠檬酸钠，以除去Mg，防止DNA酶的激活。b．核酸中的DNA和RNA在生物体内均以核蛋白（由核酸和蛋白质组成）的形式存在，DNA核蛋白在1 mol/L NaCl 溶液中溶解度很大，但在0.14mol/L NaCl 溶液中溶解度很低；而RNA核蛋白溶于0.14mol/L NaCl 溶液。

c．用苯酚处理，可使蛋白质变性，且留在苯酚层内；在DNA溶液中加入2．5倍体积，浓度为95%的酒精，可将DNA分离出来。此时DNA十分粘稠，可用玻璃棒搅成团取出。d．DNA在强酸性环境下，水解产生脱氧核糖等小分子物质，它与二苯胺酸性溶液反应，能生成蓝色化合物。

e．实验材料与器械：柠檬酸钠溶液、石英砂、0.14mol/L NaCl 溶液、1 mol/L NaCl 溶液、苯酚、95%的酒精、二苯胺试剂、浓硫酸、花椰菜、研钵、烧杯、漏斗、玻璃棒、量筒、石棉网、酒精灯、吸管、试管等。

以下是DNA粗提取实验的步骤，请根据以上阅读材料回答有关问题：（1）研磨：取10克花椰菜加适量的、和石英砂，研磨成匀浆。（2）过滤。（3）将滤液稀释6倍，其目的是：。（4）离心处理，产生沉淀。

（5）取沉淀物，置于2毫升1 mol/L NaCl 溶液中，使DNA核蛋白再次溶解，再加2毫升苯酚充分震荡后静止，待其分层后弃其上层苯酚。这一步的目的是除去。（6）如何将剩余溶液中的DNA提取出来？。（7）如何证明提取物质确实是DNA分子？。

其实验过程的要点是向放有DNA的试管中加入适量该试剂，混合均匀后，将试管置于中5min，待试管后，观察试管中的颜色变化。这个实验也说明DNA耐温，前次温度有利于，后次温度则有利于DNA。

[（1）柠檬酸钠溶液、1 mol/L NaCl 溶液（3）使DNA核蛋白溶解度降低而析出（5）（DNA核蛋白中的）蛋白质（6）向下层溶液中加2．5倍体积，浓度为95%的酒精，此时用玻璃棒搅动，玻璃棒上成团的物质即是DNA（7）用适量浓硫酸处理提取物，再滴加二苯胺酸性溶液数滴，如有蓝色物质出现即可证明提取物为DNA。沸水浴；冷却；高；加快染色反应的速度；析出。] ．“DNA的粗提取与鉴定”实验中，A、B、C、D、E五个小组除下表中所列处理方法不同外，其他操作步骤均相同，而且正确，但实验结果却不同。组别

实验材料

提取核物质时 加入的溶液

去除杂质时 加入的溶液

DNA鉴定时 加入的试剂

A

鸡血

蒸馏水

95％的酒精(25C)

二苯胺

B 菜花

蒸馏水

95％的酒精(冷却)双缩脲，C 人血浆

蒸馏水

95％的酒精(冷却)

二苯胺

D

人血细胞

2mol／L的氯化钠

0．14mol／L的氯化钠

双缩脲

E

鸡血

蒸馏水

95％的酒精(冷却)

二苯胺

(1)实验材料选择错误的组别是。其原因是。

(2)实验步骤(不包括实验材料)均正确，但得不到DNA的组别是。

(3)沸水浴中试管颜色变蓝的组别是；蓝色较淡的是，其原因是。(4)B组实验不成功的最主要原因是。[(1)C、D 人的血浆中没有细胞结构，成熟的红细胞中没有细胞核，选用这些材料得不到DNA或得到的DNA很少

(2)C(3)A、E A 冷却的酒精对DNA的凝集效果较佳，该组使用的是25℃的酒精

(4)菜花细胞在蒸馏水中不能被破坏，得不到DNA(应采用研磨的方法)] ．在“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，有同学按书本知识和自己的思路，试做了如下实验，请你判断实验结果。

(1)他把与柠檬酸钠混合的新鲜血液放在几层纱布上过滤，纱布上最主要的结构是。

(2)他在含有DNA、RNA及蛋白质等的混合物中加入大量的物质的量浓度为2．0mol/L的氯化钠溶液后，通过搅拌后，放在几层纱布上过滤，他得到的滤液中一定含有实验目的中需要提取的成分是。

(3)他在上述滤液中加入冷酒精(体积分数为95％)，并用玻璃棒向—个方向搅拌，溶液中的丝状物的主要成分是。

(4)他把含有DNA、RNA、蛋白质与氯化钠的混合溶液稀释成物质的量浓度为0．14mol/L的氯化钠溶液后，放在几层纱布上过滤，他得到的滤液中含量最多的成分是。[血细胞

DNA DNA 水] ．请利用如下实验材料做相关实验，再选择其中的一种实验材料，设计一个实验，以展示你的科学素养和创新才能。

(1)如用上述材料做观察植物细胞的有丝分裂、叶绿体中色素的提取和分离、观察植物的向性运动等实验。你选择的最佳材料依次是(填图中序号即可)。

(2)如用紫色洋葱表皮做完细胞的质壁分离及复原实验后，又用此装片观察细胞分裂，结果未观察到处于分裂期的细胞。请解释原因。(3)创新实验设计方案

实验课题：探究镍为植物生活所必需的矿质元素

材料用具：完全营养液甲、缺镍的完全营养液乙、适当的容器和固定材料、长势相似的玉米幼苗，含镍的无机盐。方法步骤： ①； ②； ②。

实验预期：。

为进一步验证镍元素一定是必需元素．还应增加的实验步骤及结果是：。

[（1）①⑤③（2）高度分化的细胞一般不能继续分裂（3）①取长势相似的等量玉米幼苗，编为甲、乙两组；②甲组用营养液甲培养，乙组用营养液乙培养，其余条件均相同且适宜；③定期观察并记录两组幼苗的生长情况。实验预期：①若两组长势相似，则镍不是玉米生活所必需的营养元素；②若甲组生长正常，乙组生长不良，则镍是玉米生活所必需的营养元素。在乙组缺镍的培养液中加入适量含镍的无机盐，若症状在不久后消失，则镍一定是玉米生活所必需的营养元素。]

第二篇：dna粗提取和鉴定

dna粗提取和鉴定

实验用具

洋葱或其他植物、洗洁精、食盐、搅拌机或研钵(我们采用的是家用豆浆机)、纱布、漏斗、烧杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、试管(20mL两支)、天平，dna粗提取和鉴定。95%酒精、蒸馏水、0.015mol/L的NaCl溶液、二苯胺试剂。

实验材料的选取

凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。

原理

①加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂

蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。

②加入洗涤剂和食盐的作用

洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。

③研磨不充分，对实验结果产生的影响

研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。

④此步骤获得的滤液中可能含有的细胞成分?

可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。

实验步骤

1.破碎细胞，获取含DNA的滤液

动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。例如，提取洋

.葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。

2.去除滤液中的杂质

方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA;方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。

注意事项

①用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。

②方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开;方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。

DNA的析出与鉴定

将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA，鉴定材料《dna粗提取和鉴定》。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。

取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。

实验步骤

1.称取30克已切碎的洋葱，放入研钵中，加入少量石英砂助研，倒入10mL 2mol/L的氯化钠溶液，充分研磨。

洋葱含有挥发性刺激物，有效减少刺激，才能使实验顺利进行。上课前，教师可先将洋葱放入冰箱冷冻一会儿，使其凉透但又不能结冰;或将洋葱切成几大块，放入清水泡一会儿，让其挥发性刺激物溶于水，可以减轻刺激。然后将洋葱切碎备用。研磨的目的主要是使洋葱细胞破裂，使DNA溶于2mol/L的氯化钠溶液，没必要将洋葱研成粥糊状，后者既浪费时间又影响实验效果。研磨时，切忌使用搅拌器(榨汁机)。使用搅拌器虽可以提高研磨效率，但搅拌器将洋葱切成极细小的颗粒，无法通过过滤将洋葱颗粒剔除。只能将酒精直接倒入滤液中，许多洋葱小颗粒因为轻会漂浮起来，DNA藏在其中，无法分辨。学生看不到白色纤维状粘稠物的DNA。

2.研磨后，用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中，得到滤液。

3.向滤液中加入95%的酒精溶液20mL，沿烧杯壁缓缓倒入，不要震动或搅拌。

此时，烧杯中的液体分为上、下两层，下层较浑浊，上层澄清，很快上层溶液中就会有白色纤维状粘稠物析出，用玻璃棒可将其轻轻卷起。这就是记录生命遗传信息的重要物质——DNA。DNA析出的过程中，切忌震动和搅拌(不震动易于分层，我们就能很容易观察到上清液中的丝状物;搅拌会使非常柔软的DNA断裂成小段，不易取出)。如果用玻璃棒DNA不易卷起，可改用表面打毛的牙签，DNA提取物就缠绕在牙签上了。

4.鉴定：取两支试管，编为1、2号，各加入2mol/L的氯化钠溶液2mL，向1号试管中加入一些白色纤维状物，振荡使其溶解，然后向两支试管中各加入2mL二苯胺试剂，沸水浴加热5分钟。

注意事项

1.以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠防止血液凝固。

2.加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。

3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。

4.DNA的溶解度与NaCl溶液浓度的关系：

当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，随浓度的升高，DNA的溶解度降低;当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L时，随浓度升高，DNA的溶解度升高。

5.盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。

鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的DNA的损失。

第三篇：dna粗提取与鉴定

dna粗提取与鉴定

实验原理

DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的，dna粗提取与鉴定。当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0.14 mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。

DNA不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。

DNA中含有脱氧核糖，能与二苯胺(沸水浴)反应生成蓝色物质，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

目的要求

1.学会DNA的粗提取和鉴定的方法。

2.观察提取出来的DNA物质的颜色和形状。

材料用具

材料：活鸡或鲜血鸡血。

仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简(100 mL，l个)，烧杯(100 mL，l个，50 mL、500 mL各 2个)，试管(20 mL，2个)，漏斗，试管夹，纱布。

试剂：酒精的体积分数为95%的溶液(实验前置于冰箱内冷却24 h)，蒸馏水，柠檬酸钠的质量浓度为 0.1g/mL的溶液，氯化钠的物质的量浓度分别为 2 mol/L和0.015 mol/L的溶液，二苯胺试剂。

方法步骤

实验前需要制备鸡血细胞液(由教师完成)，制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为 0.1 g/mL的溶液(抗凝剂)100 mL，置于500 mL烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血(约180 mL)注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用 1000 r/min的离心机离，鉴定材料《dna粗提取与鉴定》。2min，此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离。心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。

1.提取鸡血细胞的细胞核物质

将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。取其滤液。

2.溶解细胞核内的DNA

将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶液40mL加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。

3.析出含DNA的粘稠物

沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol/L)。

4.滤取含DNA的粘稠物

用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱布上。

5.将DNA的粘稠物再溶解

取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶液 20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。

6.过滤含有DNA的氯化钠溶液

取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。

7.提取含杂质较少的DNA

在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为 95%的溶液 50mL(使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳)，并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA。注意观察丝状物是什么颜色的。

8.DNA的鉴定

取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0.015 mol/L的溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。将观察的结果填写在《实验报告册》上。

结论

步骤8的2支试管中溶液颜色的变化说明了什么?将得出的结论填写在《实验报告册》上。

讨论

1.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液?

2.步骤回和步骤3中都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗?为什么?

3.DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小?

第四篇：dna的粗提取与鉴定

dna的粗提取与鉴定

实验十一 DNA的粗提取与鉴定

教学目的1、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法

2、观察提取出来的DNA物质

实验原理

1、DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的，dna的粗提取与鉴定。当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。

2、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。

3、DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

注意事项

1、步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。

2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。

实验用具

鸡血细胞液(5～10mL);体积分数为95%的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液，二苯胺试剂;烧杯(100mL，1个，50mL，500mL，各2个)，漏斗，试管(20mL，2个)，玻璃棒，滴管，量筒(100mL，1个)，纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。

课时安排

一课时

课前准备

制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100mL，置于500mL烧怀中，注入新鲜的鸡血(约180mL)，用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。也可以用离心机离心2 min(转速1000转/分)。用吸管吸去上清液。

板书

实验十一 DNA的粗提取与鉴定

实验原理

1、析出溶解在NaC1溶液中的DNA。

2、用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。

3、DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。

方法步骤：

1、提取鸡血细胞的细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。5 min2、溶解细胞核内的DNA3、析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢

4、过滤：取黏稠物

5、再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3 min6、过滤：取滤液。

7、提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5 min8、DNA的鉴定：沸水浴5min((1)无变化(2)蓝色)

上节课我们通过几个验证性实验，证明了DNA是主要的遗传物质，自我鉴定《dna的粗提取与鉴定》。那么DNA是什么样的物质呢?今天我们就通过实验将它提取出来，进行观察和鉴定。

通过预习，我们知道选用鸡血细胞液作为实验材料。在制备鸡血细胞液时，所用的柠檬酸钠有防止血液凝固的作用。

制备过程中，一定要用刚宰杀的鸡的新鲜血，并且要与抗凝剂充分混合，防止凝血。我们采用静置一天的方法，获得鸡血细胞液。

大家在动手做实验之前先要明确几个需要注意的问题。

1、要严格按照实验指导的方法步骤去操作。

2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，使用时玻璃棒不要碰到烧杯底，在不同的步骤中玻璃棒的用法不同，每一步的用法参照黑板上的指导去操作。

3、在DNA的鉴定中，所用的二苯胺是一种有毒性的试剂，大家在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位，也不要近距离观察。

下面在实验进行过程中，要思考每一操作步骤要达到什么目的。

在进行步骤1时，利用搅拌的5分钟，做如下提问：

为什么要加蒸馏水?加入蒸馏水后细胞将会怎样?

(让细胞内溶液的浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破)

为什么要用力搅拌?

(可以加速血细胞和细胞核的破裂)

所以下一步骤过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质。

在进行步骤3时，要向全班明确：这一步骤是这个实验成败的关键，注意加蒸馏水的方法和使用玻璃棒的方法，千万不能太快太猛，防止打碎DNA。

观察滤取出来的黏稠物的颜色。

有的同学提取的黏稠物较少，原因可能是在溶解DNA时不充分，也可能是析出黏稠物时搅拌的快了。

将黏稠物再溶解时一定要充分，多搅拌。以免有DNA损失。

加入冷酒精时动作要慢。

当玻璃棒上出现丝状物缠绕时，继续慢慢搅拌。至不再增加时，取出吸干上面的水分。仔细观察丝状物呈什么颜色?(黄色)

这些丝状物要用二苯胺鉴定。使用二苯胺时要注意不要接触到药液。进行沸水浴时，在实验室较为通风的地方集体进行。

利用沸水浴的5 min。

步骤3中加入蒸馏水的目的?与步骤1有什么区别?

(步骤3中加蒸馏水是使NaCl溶液的浓度逐渐降至0.14mol/L，使DNA的黏稠物析出。而步骤1加蒸馏水是为了让细胞吸水胀破)

步骤7为什么要加50mL的冷酒精?

(因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出。悬浮于溶液中)

现在大家从水浴锅中拿出试管，比较两个试管中溶液的颜色有什么不同?

(有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色)

这一鉴定结果说明什么问题?

(提取出的丝状物是DNA)

那么你看到的丝状物的粗细是不是DNA分子的直径呢?

(不是。DNA分子直径只有2nm。丝状物是多个DNA分子聚在一起形成的)

下面请同学们将实验用具，按原样摆放整齐，实验桌要保持清洁。

今天我们通过实验将DNA提取出来进行了观察和鉴定，那么DNA的化学组成，分子结构和复制是怎样的?我们下节课再继续研究。

第五篇：dna的粗提取和鉴定

dna的粗提取和鉴定

在溶液中,DNA链略带负电荷,而盐离子可被吸引到DNA的负电荷上,中和这些负电荷,只要控制盐的浓度,就能够使DNA片段或者散开,或者聚合在一起,因此,食盐能保持溶液中的浓度与细胞液相当，dna的粗提取和鉴定。DNA不溶于酒精,但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理,就可以用酒精萃取DNA。DNA与二苯胺作用生成蓝色沉淀,即可观察到。

提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。

DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。

此外，DNA不溶

.于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。

DNA对酶 高温和洗涤剂的耐受性

蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温，而DNA在80oC以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。

DNA的鉴定

在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

实验用具

洋葱或其他植物、洗洁精、食盐、搅拌机或研钵(我们采用的是家用豆浆机)、纱布、漏斗、烧杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、试管(20mL两支)、天平。95%酒精、蒸馏水、0.015mol/L的NaCl溶液、二苯胺试剂。

实验材料的选取

凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大，鉴定材料《dna的粗提取和鉴定》。

原理

①加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂

蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。

②加入洗涤剂和食盐的作用

洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。

③研磨不充分，对实验结果产生的影响

研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。

④此步骤获得的滤液中可能含有的细胞成分?

可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。

实验步骤

1.破碎细胞，获取含DNA的滤液

动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。例如，提取洋

.葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。

2.去除滤液中的杂质

方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA;方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。

注意事项

①用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。

②方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开;方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。

DNA的析出与鉴定

将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。

取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。