浏览该文件中国农业科学院研究生院（共五篇）

第一篇：浏览该文件中国农业科学院研究生院

中国农业科学院研究生院

在校研究生出国（境）管理办法（试行）

为进一步规范我院对在校研究生出国（境）的管理，特制订本办法。

一、出国（境）人员分类

1、申请国家留学基金人员

在校期间向国家留学基金委申请并获批准的人员。

2、单位公派出国（境）人员

在校期间，根据培养单位或导师科研工作需要，派出合作研究、培训及参加国际会议等人员。

3、申请自费出国（境）留学人员

在校或拟毕业后自费出国（境）攻读学位或做博士后人员。

4、出国（境）探亲或旅游人员

在校期间申请出国（境）探亲或旅游的人员。

二、申请国家留学基金人员的管理

按照国家教育部有关规定，我院在读研究生在征得导师和培养单位同意的情况下，可以向国家留学基金委员会申请公派出国留学。

具体申请程序及有关规定如下：

1、拟申请国家留学基金委留学项目的研究生，每年在规定日期，向研究生工作处递交由导师和培养单位签字同意的《中国农业科学院研究生院研究生申请国家留学基金委留学项目表》、留学基金委的《申请表主表》和《单位推荐意见表》。经研究生院相关处室会签后，报主管院长批准，统一上报。

2、凭《中国农业科学院研究生院研究生申请国家留学基金委留学项目表》（审批通过）复印件，研究生院相关处室予以出具该研究生申请留学基金所要提供的各种证明材料。

3、在校研究生凭国家留学基金委颁发的《国家留学基金资助出国留学资格证书》办理护照、休学和离校手续。应届毕业生凭国家留学基金委颁发的《国家留学基金资助出国留学资格证书》及与研究生院签订的《应届毕业生出国（境）

协议书》办理护照，并与毕业生一起办理离校手续。

4、因与留学基金委签订了《资助出国留学协议书》，并交纳了出国留学保证金，我院不收取出国保证金。

5、在校公派研究生在国家规定的留学期限内，我院保留其档案和户籍，逾期未归按照我院《学生管理规定》，按自动退学处理，将其档案和户籍迁转回生源所在地。应届毕业生在国家规定的留学期限内，我院保留其档案和户籍，逾期未归按照《国家公派出国留学研究生管理规定（试行）》要求，将其档案和户籍迁转回生源所在地。

6、按照《国家公派出国留学研究生管理规定（试行）》要求，在留学期间未得到留学基金委批准，不予出具任何与改变留学身份、留学期限、留学国家和留学院校（研究机构）的证明。

7、公派留学研究生是正式党员的，我院继续保留组织关系，要求每半年向党组织进行一次书面的思想汇报和交纳党费。是预备党员的，在考察期延长一年后，国内考察期满一年，并在留学期间能够坚持向党组织汇报思想，符合正式党员条件，本人提出转正申请，可以转正。

在职、定向、委培在校研究生拟申请国家留学基金委留学项目，也要在规定时间里提交由导师和培养单位签字同意的《中国农业科学院研究生院研究生申请国家留学基金委留学项目登记表》到研究生工作处，经培养处会签，报主管院长批准后，回在职、定向、委培单位办理相关手续。凭国家留学基金委颁发的《国家留学基金资助出国留学资格证书》办理休学和离校手续。未提交申请或未办理休学和离校手续而擅自出国的，按自动退学处理。

未尽事项按照《国家公派出国留学研究生管理规定（试行）》办理。

三、单位公派出国（境）人员管理

在校研究生由于培养单位或导师科研工作需要，出国（境）进行合作研究、培训或参加国际会议的，须向研究生工作处提交《中国农业科学院研究生院研究生出国（境）申请表》，经主管院领导批准并交纳出国保证金后，方可办理出国（境）相关手续。

出国保证金博士研究生二万元，硕士研究生一万元。待其按期回国后，将护照交回，保证金全额返还。如未获批准逾期未归，保证金不予返还。

出国超过三个月，必须办理休学和离校手续，一切待遇按照休学研究生相关规定处理。

在职、定向、委培在校研究生因公出国（境），也需提交《中国农业科学院研究生院研究生出国（境）申请表》，经主管院领导批准后，回原单位办理出国（境）相关手续。出国超过三个月，必须办理休学和离校手续。

四、自费出国（境）留学人员管理

在校研究生在学期间不允许申请自费出国（境）留学，研究生院不予出具任何相关证明和办理任何手续。拟自费出国留学的，办理退学手续，按《学生管理规定》中有关退学的规定办理。

应届毕业生拟申请自费出国（境）留学，于第三学年10月31日以前，提交《中国农业科学院研究生院应届毕业生自费出国留学申请表》报研究生工作处，经相关处室审核，并报主管院领导批准后，各处室予以出具相关证明和办理相关手续。

毕业前办理护照的，需交保证金五千元，并在6月15日前办理。待其办完离校手续后，保证金全额返还。

五、出国（境）探亲或旅游人员管理

研究生院只允许在校研究生在假期期间出国（境）探亲或旅游。拟在假期出国（境）探亲或旅游的研究生，必需提交《中国农业科学院研究生院研究生出国（境）申请表》到研究生工作处，经主管院领导批准，交纳保证金二万元后，予以办理相关手续。未获批准逾期不归者按照我院《学生管理规定》要求，按自动退学处理，保证金不予返还。

凡未经批准擅自出国（境）的，一经发现，一律按自动退学处理。

本规定自2009年9月1日起执行，由研究生院研究生工作处负责解释。

第二篇：中国农业科学院研究生院招生简章

中国农业科学院研究生院

2011年全日制专业学位硕士研究生统一入学考试大纲

科目代码：341 考试科目：农业知识综合三

一、考查目标

《农业知识综合三》侧重于农业工程综合知识的考查。考试内容涵盖食品加工与安全领域的主干课程，包括食品卫生学、食品安全管理与法规、食品分析与检验技术等学科。要求考生比较系统地理解和掌握本领域基本概念、基础理论和基本方法，能够运用基本原理和方法分析、判断和解决有关实际问题。

二、适用范围

适用于报考食品加工与安全领域的考生。

三、考试形式和试卷结构

1、试卷满分及考试时间

本试卷满分为150分，考试时间为180分钟。

2、答题方式

闭卷、笔试。

3、试卷内容结构

食品卫生学、食品安全管理与法规、食品分析与检验技术等科目内容各占50分。

四、考试大纲

（一）食品卫生学 1.食品的生物污染 1.1 食品的细菌污染

食品细菌污染的途径 食品细菌污染的种类 食品细菌污染的危害 食品细菌污染的检验和标准 食品细菌污染的预防 1.2 食品的真菌污染

食品真菌及其毒素污染的特点 食品的黄曲霉毒素污染：黄曲霉毒素污染的状况和危害、黄曲霉毒素的性质及控制措施

食品的其他真菌毒素污染：赭曲霉素、杂色曲霉毒素、伏马菌素、T2毒素、单端孢霉烯族类化合物、展青霉素、桔青霉素易污染的食品和控制措施 1.3 食品的腐败变质

食品腐败变质的概念、发生的条件、影响因素、卫生学意义及控制措施 1.4 食品的病毒污染

食品中甲肝病毒、脊髓灰质炎病毒、口蹄疫病毒、疯牛病病毒污染的途径与控制措施

1.5 食品的寄生虫污染

寄生虫的概念、危害方式以及绦虫（含幼虫）、蛔虫的感染途径、危害、预防措施

2.食品的化学污染 2.1 食品农药残留

食品中农药残留的来源、影响因素和预防控制措施 2.2 食品的重金属污染

生物放大的概念和意义、食品中铅、砷、汞、镉污染的途径、危害及预防控制措施

2.3 食品的多环芳烃污染

多环芳烃的污染来源、危害及预防措施 2.4 食品中N-亚硝基化合物的污染

食品中N-亚硝基化合物的来源、危害及预防控制措施 2.5 食品中二噁英的污染

食品中二噁英的来源、危害及预防措施 2.6 食品添加剂

食品添加剂的使用原则、存在的问题及控制 2.7 食品包装材料的污染

食品包装材料的污染、影响因素、预防控制措施 3.食品安全性评价 3.1 基本概念

毒性、剂量、剂量-反应关系、半数致死量、阈剂量、最大无作用剂量、ADI等食品安全性评价的基本概念

3.2 食品安全性毒理学评价程序及判断标准 4.食物中毒

4.1 食物中毒的概念、流行病学特点、类型 4.2 细菌性食物中毒 沙门氏菌、副溶血弧菌、变形杆菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、肉毒梭状芽孢杆菌食物中毒的原因食品、发生季节、预防措施 4.3 真菌性食物中毒

真菌性食物中毒的特点，毒蕈、霉变甘蔗、霉变甘薯、赤霉病麦等真菌毒素中毒发生的季节、原因和预防措施 4.4 天然植物食物中毒

四季豆、发芽马铃薯、毒蕈、鲜黄花菜、豆浆中毒的中毒物质、危害及其预防措施

4.5 天然动物食物中毒

河豚鱼、有毒贝类、热带鱼、鱼胆、动物甲状腺中毒的中毒物质、危害及其预防措施

（二）食品安全管理与法规 1.绪论

1.1 食品质量和食品安全概念

1.2 食源性疾病、污染物和食品安全危害分类

食源性疾病；食品污染物；食品安全危害：生物危害、化学危害和物理危害。1.3 食品安全质量控制体系的研究对象、内容和手段 1.4 食品供应链概念

2.建立实施HACCP体系的意义 2.1 HACCP体系概念及其来历 2.2 建立实施HACCP体系的原因 2.3 建立实施HACCP体系的组织 2.4 ISO22000:2005食品安全管理体系 3.HACCP体系原理

3.1 HACCP体系的七项基本原理 3.2 HACCP体系所涉及的术语和定义

HACCP研究；HACCP计划；HACCP体系；HACCP工作小组；直线型、模块型和通用型HACCP方案；HACCP加工流程图；显著危害和非显著危害；CCP判断树；关键控制点的关键限值与操作限值；纠偏。3.3 建立HACCP体系的步骤

4.建立HACCP体系的条件与前提方案 4.1 一般管理规范

4.2 ISO 9000质量管理体系

质量管理体系中质量控制点和食品安全关键控制点的区别 4.3 HACCP体系的前提方案——GMP GMP的主要内容和强调的环节 4.4 HACCP体系的前提方案——SSOP 4.5 HACCP体系与GMP和SSOP的关系 4.6 食品配方与食品安全

酸度、防腐剂、水分活度、配料等与食品安全 4.7 食品加工技术环节与食品安全

热加工、发酵、辐照等加工技术环节与食品安全 4.8 对食品安全危害的控制措施 5.HACCP原理应用实例

5.1 畜禽屠宰行业可能发生的食品安全危害与控制 5.2 净菜加工可能发生的食品安全危害与控制 5.3 肉类罐头加工可能发生的食品安全危害与控制 5.4 果蔬汁可能发生的食品安全危害与控制 5.5 糕点加工可能发生的食品安全危害与控制管理

（三）食品分析与检验技术

1.食品分析的概念、性质、任务和作用 1.1 食品分析的概念及性质

食品分析是研究和评定食品品质及其变化、开发食品分析方法的一门专业性很强的技术学科。1.2 食品分析的任务与作用

是对食品工业生产中的原料、辅料、成品、半成品、副产品等进行检测，以达到控制和管理生产、保障食品质量安全和开发新资源与新产品的目的。1.3 食品分析的内容

主要包括（1）食品营养成分分析；（2）食品添加剂分析；（3）食品中有害物质分析（4）食品的感官检验等。2.样品采集及预处理方法 2.1 样品的采集

样品采集是指从大量的分析对象中抽取有代表性的一部分样品作为分析材料的过程。2.2 样品的制备

是对上述采集的样品进一步粉碎、混匀、缩分，目的是保证样品完全均匀，取任何部分都具有代表性。2.3 样品的保存

样品如不能立即分析应妥善保存，其目的是防止样品发生受潮、挥发、风干、变质等现象。2.4 样品的预处理方法

样品预处理就是在样品正式分析测定前将被测组份提取出来或将干扰成分去除的过程。一般分为（1）溶剂提取法；（2）有机物破坏法；（3）蒸馏法；（4）皂化法；（5）层析法等。3 食品分析检验的一般方法

食品分析所采用的分析方法主要有 3.1 感官检验法

通过人的感觉器官（眼、鼻、口、皮肤）所具有的视觉、嗅觉、味觉和触觉，对食品的色、香、味、形等质量特征和卫生状况作出判定和客观评价的方法。3.2 物理检验法

通过对被测食品的某些物理性质如温度、密度、折射率、旋光度、非典等的测定，可间接求出食品中某种成分的含量，进而判断被检食品的纯度和品质。3.3 化学分析法

是以物质的化学反应为基础的分析方法，主要包括重量分析和容量分析法两大类。

3.3.1 重量分析

是将被测成分与样品中的其他成分分离，然后称定该成分的质量，计算出被测物质的含量。3.3.2 容量分析

也称滴定分析，它是将已知浓度的标准溶液由滴定管加到被检溶液中，直到所用试剂与被测物质的物质量相等为止。可借助指示剂的变色来观察终点。根据标准溶液的浓度和消耗体积，计算出被测物质的含量。3.3.3 化学分析中标准溶液的配制及溶液浓度的表示方法

标准溶液是化学分析中用来直接定量测定待测组分含量的溶液，正确配制标准溶液对提高容量分析的准确度有重大意义。标准溶液的配制方法一般有直接法和间接法两种。

溶液的浓度通常是指在一定量的溶液中所含溶质的量。常用的方法有：物质的量浓度（摩尔浓度）、溶质的质量分数（百分浓度）、溶质的体积分数、比例浓度等。

3.4 仪器分析法

借助特殊的仪器，通过测量试样溶液的光学性质或电化学性质，从而求出被测组分的含量。常用的方法有紫外-可见分光光度法、原子吸收光谱法、荧光分析法、气相色谱法、高效液相色谱法等。3.5 酶分析法

是利用酶的反应进行物质定性、定量的方法。要求掌握酶法分析的特点。4.食品中一般成分的检验 不同食品其成分与含量也各不相同。要求了解下列各种成分测定的主要方法，掌握操作原理与简单过程。4.1 水分的测定

水分测定常分为直接法和间接法两大类。直接法是利用水分本身的物理、化学性质来测定水分的方法，如干燥法、蒸馏法和卡尔.费舍尔法；间接法是利用食品的相对密度、折射率、电导、介电常数等物理性质测定水分的方法。本大纲仅要求掌握干燥法原理。4.2 灰分的测定

食品经灼烧后的残留物就叫灰分。灰分是食品中无机成分总量的标志。灰分测定包括总灰分、水溶性灰分、水不溶性灰分、酸不溶性灰分等。要求掌握总灰分的测定原理和方法。4.3 总酸度的测定

通过中和滴定，用标准碱液测定浅色食品中总酸度的含量。4.4 粗脂肪的测定

常用的方法为索氏提取法，适用于脂类含量较高、含结合态脂肪较少、能烘干磨细、不易吸潮结块的样品测定。4.5 碳水化合物的测定 4.5.1 还原糖的测定

糖类的测定是以还原糖的测定为基础的。掌握直接滴定法测定还原糖的原理和方法。

4.5.2 淀粉的测定

常用的淀粉测定方法有酸水解法和酶水解法。本大纲要求掌握酶水解法测定淀粉的原理和方法。4.6 蛋白质的测定

蛋白质的测定主要有紫外法、比色法、凯氏定氮法、仪器法等多种方法，凯氏定氮法是测定食品中粗蛋白的常用方法。4.7 维生素的测定

食品中维生素种类繁多，测定方法也各不相同。4.7.1 脂溶性维生素的测定

主要通过皂化和有机溶剂提取后，用比色法、紫外分光光度法或液相色谱法测定。要求掌握比色法测定维生素A的原理。4.7.2 水溶性维生素的测定

用荧光法、比色法、滴定法和高效液相色谱法测定。4.8 矿物元素的测定

食品中的矿物元素通过干灰化或湿灰化的方法，将有机物分解成无机物后用比色法、滴定法或原子吸收法进行测定。5.分析结果的表示与数据处理 5.1 有效数字

就是可靠数字与可疑数字之和。有效数字的修约按“四舍六入五留双”的原则。在有效数字的计算中，应遵循四则运算的规则。5.2 误差、准确度与精密度

分析结果的准确度是指分析结果与真值的接近程度。准确度的高低用误差来衡量。精密度就是几次平行测定结果相互接近的程度。精密度的高低用偏差来衡量。食品分析中误差常用绝对误差、相对误差表示，而偏差常用绝对偏差及相对偏差表示。

6.各种食物成分结果的表述

检测结果的表示应采用法定计量单位并尽量与食品卫生标准一致。固体样品与液体样品的结果均有不同的表示方法。

第三篇：基因工程原理中国农业科学院研究生院

中国农业科学院究生院

《基因工程原理》复习题

一、名词解释

1.原核基因（Prokaryotic

gene）：由原核生物（如大肠杆菌）基因组编码的基因，以及高等生物细胞器线粒体基因组和叶绿体基因组等编码的基因，统称原核基因。

2.真核基因（Eukaryotic

gene）：真核生物基因组DNA编码的基因,以及感染

真核细胞的DNA病毒和反转录病毒基因组编码的基因，统称真核基因。

3..前导序列（Leader

sequence）：又叫前导序列区或5＇-非翻译区（5＇-UTR），系指位于mRNA5＇-起始密码子之前的一段长数百个核苷酸的不翻译的RNA区段。

4.尾随序列（Tai1er

sequence）：又称尾随序列区或3＇-非翻译区（3＇-UTR），系指位于mRNA3＇-终止密码子之后一段100多核苷酸的不翻译的RNA区段。

复制子（Replicon）：

指有一个复制起始区（oriC）和起始基因的DNA复制单元。例如细菌染色体、病毒基因组、质粒基因组等，凡其DNA能够进行复制的遗传单元，均称复制子。真核细胞基因组的复制子是指含有一个复制起始位点的DNA（RNA）的复制子特称复制单元。

6.增强子

（Enhancer）：又叫增强子序列或增强子元件，是真核基因中发现的一

种特异序列，能够在距离目标基因50kb以上的位置，从上游或下游的不同位置及方向增强该基因的转录活性。

7.沉默子（Silencer）在真核基因启动子中除了增强子之外，沉默子同样也是一种可远距离调控相关基因转录活性的顺式元件。与增强子一样，沉默子也能够从启动子的上游、下游甚至是基因内部三种不同的位置以及正向或反向，影响相关基因启动子的转录起始效率。同时沉默子往往是以组织特异性或时间特异的作用方式，控制基因的表达作用。但与增强子的功能效应相反，沉默子只能抑制而不能激活相关基因的转录起始活性。

8.绝缘子（Insulator）亦即是增强子活性的物理边界元件（physical

boundary

element），它是一段能够抑制或隔离增强子功能效应的顺式转录调节序列。绝缘子的这种功能作用的发挥，取决于它所在的位置。如果它是位于增强子和启动子之间，便能够阻断增强子的功能效应；但当它是位于增强子-启动子区段的外侧，便不能够阻断增强子的功能作用。因此也有的作者将绝缘子称为隔离邻近增强子对启动子激活作用的中间隔栅（neutral

barrier）。绝缘子的作用是与特异结合蛋白IBP的结合发挥作用。它的意义：能阻断增强子超远距离的激活作用影响生物的发育顺序；真核绝缘子能保护顺序表达以防无义基因的表达。

9.调节子（Regulon）：指在大肠杆菌基因组中，其表达活性受同一种基因编码的蛋白质协同调节的，一组不连续相邻排列的结构基因。调节子与操纵子不同之处在于，后者的结构基因是彼此相邻排列的，而调节子的结构基因则是分散于染色体的不同部位，甚至是位于不同染色体上

10.基因差异表达（Differential

expression

of

gene）：

真核生物在每一特定的发育阶段，或是某一特定类型的细胞中，一般只有15%的基因进行表达。这种在生物个体发育的不同阶段，或是在不同组织和细胞中，发生不同基因按时间、空间进行有序表达的方式，叫基因的差异表达。

11.基因内互补（Intragenic

complementaion）：

系指编码同样的多肽序列，但又各具一个不同

突变的两个基因联合产生出一种有功能活性的蛋白质多肽的生化过程。

12.基因图（Gene

map）：描述染色体或DNA分子上不同基因的排列顺序及其间隔距离的线性图。它包括遗传图和物理图两种。

遗传图（genetic

map）：是根据遗传重组实验绘制的，用来表示同一染色体上不同基因（或特定DNA序列区）之间的排列顺序及其相对距离的线性图。其图距用厘摩(cM)表示。

物理图（Physical

map）：以精确的物理长度为单位，一般以核苷酸数表示不同基因在染色体或DNA分子上的排列顺序及其间隔距离的实际长度的线性图。

13.基因簇（Gene

cluster）与基因家族（Gene

family）：系指原核生物基因组中，由不同或相关的一组相合基因组成的一种特殊的排列组合方式。同一基因簇的各个基因在遗传上往往是紧密连锁，它们可以是属于同一操纵子的不同结构基因，也可以是不同操纵子的不同结构基因；它们可以是同一基因家族的不同成员，也可以是不同基因家族的不同成员。

基因家族（Gene

family：由同一生物中同一始祖基因经过重复突变进化而来，具相似的结构、相似的产物和相似的功能。它们的特征：（1）多重姓；（2）紧密连锁（3）表型及功能方面的相关性；（4）核苷酸序列的一致性。

14.基因克隆（Gene

cloning）：基因克隆又叫DNA克隆，它是指将外源基因插入到克隆载体上形成重组DNA分子群体，并转化到大肠杆菌寄主细胞中进行复制繁殖，以便从大分子DNA或DNA片段中分离纯化目的基因或特定的DNA片段的实验操作，叫做基因克隆或DNA克隆。

15.融合基因（Fusion

gene）：亦称重组基因、杂种基因或嵌合基因。通常是指通过自发突变形成或利用DNA重组技术构建的。是一类具有来自两个或两个以上不同基因的核苷酸序列的新型基因。融合基因可以形成融合蛋白，但融合基因不一定都形成融合蛋白。

16.基因剂量

（Gene

dosage）：指的是一个细胞所拥有的同一种基因的拷贝数。

基因剂量实验是建立在局部二倍体菌株的基础上，专门来检测基因拷数的增加，对其编码产物合成速率之影响的分子遗传学的研究技术。

17.裂口（Gap）：双链DNA分子上的某一条链丢失一个或连续数个核苷酸造成的单链断裂。

缺口（Nick）：双链DNA分子的某一条链的相邻核苷酸之间丢失一个磷酸二酯键造成的单链断裂。

18.切丁酶（Dicer）：亦有人译为RNAi核酸酶。是一种RNaseⅢ样（RNaseⅢ

like）的核酸内切酶。能把双链RNA（dsRNA）分子切割成21~23bp的小分子干扰RNA

。这是一种需要ATP的过程。

19.异裂酶（Neoschizomer）：

指一组来源不同，但具有相同的识别序列和不同的切割位点的一组核酸内切限制酶称异裂酶

20.同尾酶（Isocaudarner）：一组来源不同，识别序列各异，但能够切割形成相同黏性末端的核酸内切酶。

21.同裂酶

(Isoschizomer)

是一类来源不同，而识别序列相同，切割能产生相同的黏性末端的核酸内切酶。

22.拓朴异构酶（T0poisomerase）：在原核和真核细胞中发现的，具有催化单链DNA或双链DNA产生瞬时断裂的功能。具有切割与连接的双重功能，导致双链构型的改变。在抗癌研究中，发展抑制拓扑异构酶的活性的抗癌药物好的开发研制具有重要意义。

23.质粒DNA迁移作用（Plasmid

mobilization）：指由共存的接合型质粒引发的非接合型质粒的转移过程。由于结合型质粒的mob基因产生的迁移蛋白可作用于与其共存的非迁移型质粒的nic位点所产生的迁移作用，称质粒DNA迁移作用。

24.柯斯载体（Cosmid）：是一类人工构建的，含有λ噬菌体DNA的cos序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体。它既具有λ噬菌体的特性，也具有质粒载体的特性。并且具有高容量的克隆能力，其DNA可以体外被包装到噬菌体的外壳内。

25.噬菌体展示载体（Phage

display

vector）：根据单链噬菌体表面表达的蛋白质或多肽的噬菌体表面展示技术，当把外源基因插入在该载体的基因Ⅲ或基因Ⅷ的编码序列中，正确表达出融合蛋白的这类特殊用途的噬菌体载体。

26.穿梭质粒载体（S

huttle

plasmid

vector）：

简称穿梭载体，或叫双功能载体。是一类人工构建具有两种不同的复制起点和选择记号，因而可在两种不同寄主细胞（如大肠杆菌和酿酒酵母）中进行复制与存留的质粒载体。

27.M13克隆体系的优点：

a.可方便地产生外源单链DNA；

b.重组子可用组织化学方法检测；

c.lacZ基因上具多克隆位点，便于外源DNA插入；

d.可定向克隆外源基因；

28.质粒载体的结构特点：

a.具复制起点（ori）；

b.具抗生素抗性基因（选择用）；

c.具若干核酸内切酶的单切点；

d.较小的分子量和较高的拷贝数。

启动子封堵（Promoter

occlusion）：由一个上游启动子驱动的转录作用，当其通读过下游启动子时，便会使该启动子的功能受到抑制的现象，叫做启动子封堵。

30.Ⅱ型核酸内切酶的特点：a.不具有多亚基结构（单一切割功能）；b.能识别双链DNA分子中靶子序列c.切割形成不同长度的限制片段;

d由于不对称切割，能形成粘性末端;

e

酶切反应不需能量ATP。

31.表观遗传信息层（Epigenetic

layer

of

information）：它是贮藏在围绕DNA分子周围并与DNA分子结合的蛋白质及化学物质中。表观遗传信息如同RNA基因一样令人困惑，甚至比RNA基因更为重要。

32.分子伴侣（Molecular

chaperone）：

专指一类多功能蛋白质，它能促使某些蛋白质按正确方式组装或折叠，而它本身却不是最终形成功能蛋白质的组成部分，此类蛋白质特称为分子伴侣。

33.RNA干扰（RNAi）：近年来研究发现，当一些小分子量的外源双链RNA进入寄主细胞后，便可促进与其同源的内源mRNA发生特异性的降解作用，从而高效而特异地阻断体内相应基因的活性，在细胞内发挥基因的剔除作用。这种现象叫RNA干扰。

34.生命体遗传信息的三个层次是：

第一层次是由编码蛋白质的基因组成，如人类基因组的基因编码序列占总DNA序列的不到2%；

第二层次：仅由编码RNA而不编码蛋白质的基因组DNA组成。这一部分DNA叫做非编码的DNA，它的转录产物称为非编码的RNA（不包括tRNA、rRNA和snoRNA），其相应的基因称为RNA基因。这类基因隐藏在巨大的非编码的染色体DNA序列当中。因此过去亦被称为隐藏基因（cryptic

gene）；

第三层次：表观遗传信息层（epigenetic

layer

of

information）。

它贮藏于围绕在DNA分子周围并与DNA结合的蛋白质及其他化学物质中。表观遗传信息如同RNA基因一样令人兴奋，甚至比RNA基因更为重要。

35.全局调节（Global

regulation

system）

原核生物如细菌细胞为了适应环境条件的大范围的重要变化，单靠一个操纵子作局部的调节显然是不够的，它还需一种能够同时调节许多相关操纵子的，特殊调节体系。这种调节体系称全局调节体系。它是由许多单一的调控途经，交织组成的一种复杂的调控网络，来应付外界环境的压力的同时，能适时快速作出反应。

共线性

（Collinearity）：所谓共线性包括如下4种不同的情况：

其一是指位于同一条染色体DNA分子或是同一条DNA分子上，不同基因的位置排列关系。这种情况有时特称为同线性（Synteny）。

其二是指不同物种的相关染色体DNA分子之间，基因排列顺序的一致性。

其三是指位于DNA分子与其转录本RNA分子之间，核苷酸碱基排列顺序的一

致性。

其四是指位于DNA分子或mRNA分子上遗传密码子的排列顺序，与相应的蛋白质多肽链上氨基酸排列顺序之间的一致性。

37.基因工程诞生的理论基础和技术基础是什么？

（1）

理论基础：

（a）

上世纪40年代明确了遗传物质携带者是DNA，而不是蛋白质;明确了基因的载体。

（b）上世纪50年代相继揭示了DNA双螺旋结构模型和半保留复制机理，从而解决了基因的复制。

（c）

上世纪50

世纪末和60年代初相继提出了中心法则和操纵子学说并成地破译了遗传密码子，从而解决了遗传信息的流向和基因表达问题。

（2）

技术基础：

（a）

DNA分子的体外切割与连接技术;

（b）

DNA测序技术;

（c）

基因克隆的载体的发展与应用;

（d）大肠杆菌的转化技术;

（e）琼酯糖凝胶电泳技术;

（f）

核酸杂交技术。

38.RNA编辑（RNA

editing）：

在有些基因的转录后加工过程中，会有大量的尿嘧啶核苷酸（Us）加入到前体mRNA（pre-mRNA）的核苷酸序列中去，或是从pre-mRNA的核苷酸序列中删除下来，甚至还会发生核苷酸碱基的取代反应。这种在RNA转录本成熟、修饰过程中发生的核苷酸的加入、删除或取代的现象，叫做RNA编辑（RNA

editing）。

如此碱基饰变的结果，使得RNA转录本的核苷酸序列与其对应的DNA链的核苷酸编码序列并不完全匹配。由此饰变的mRNA所转译的蛋白质多肽链的氨基酸序列结构，便与按照其基因的核苷酸序列推导出来的有所差别。

39（1）微小RNA(microRNA，miRNA)：

是在真核细胞中发现的一类调节型的、非编码蛋白质的、小分子量的单链RNA。miRNA是由内源基因组编码转录成的Pri-miRNA被果蝇酶切割生成70-80nt的pre-miRNA，经自我折叠成双链的发夹结构，进入细胞质后被切丁酶进一步切割并除去单链环，形成21～25bp双链体(miRNA：miRNA*)分子，双链体解离出单链的存留链miRNA同目标mRNA结合阻止翻译，另一条消失链miRNA*被降解。

39（2）miRNA与siRNA的比较

相似点：

（1）

分子结构十分相似。长度均为21～25的小分子量RNA、5，-端都具有P基团、3，-端都具有0H-基团；

（2）

都通过与RISC结合的方式发挥功能作用；

（3）

终极作用都是抑制mRNA的翻译活性，而导致基因沉默。

不同点：

（1）

生物合成途径不同；

siRNA主要是由外源导入的双链(dsRNA)经切割产生的、少数的是由内源dsRNA切割产生。

miRNA则不然，它是由内源基因组编码转录成Pri-miRNA，被果蝇酶切割生成70-80nt的pre-miRNA，由于pre-miRNA存在回文结构自我折叠成双链的发夹结构→由输出蛋白的作用进入细胞质后被切丁酶进一步切割加工成21～25bp小片段并除去单链环形成双链miRNA，双链体(miRNA：miRNA*)分子，解离出单链的存留链miRNA同目标mRNA结合阻止翻译，另一条消失链miRNA*被降解。

（2）抑制翻译的方式不同；

siRNA是通过与目标mRNA编码区中的靶序列的结合引导RISC复合物中的切段酶，从靶序列的中间部位切割断裂mRNA分子，从而抑制翻译。

miRNA与此不同，它是通过与目标基因mRNA的3，-UTR序列中的结合位点的序列互补作用，促使mRNA失去翻译活性。因此在miRNA作用过程中，虽然目标蛋白质的数量减少了，但其mRNA的丰度却没有明显的变化。

（3）碱基互补水平不同；

siRNA与靶序列之间核苷酸碱基的互补水平达百分之百的完全匹配。

但miRNA则依材料来源的差异而有两种不同的情况。植物mRNA与靶序列核苷酸碱基也是百分之百完全匹配的、而动物的miRNA与其结合位点的核苷酸碱基则不是完全互补的，两者之间存在着若干非配对的碱基。

40.微量碱法分离纯化质粒DNA的原理有如下几点：

（1）根据质粒DNA与染色体线性

DNA在拓扑学上的差异。质粒DNA（cccDNA）是共价闭合双链超盘旋构型的小分子DNA，而细胞染色体DNA在细胞裂解分离过程中断裂成线性DNA（LDNA），虽然在化学本质上没有本质区别，但在高级结构拓扑学上存在差异。

（2）

差异碱变性，在pH

12.0-12.5高pH条件下，线性的DNA容易变性解链，而质粒DNA不易变性或很少变性。

（3）

酸复性，在pH4.8条件下，cccDNA很快复性，而线性的染色体DNA不可逆的变性并与蛋白质、RNA形成沉淀物，通过离心可以把LDNA与cccDNA分开。cccDNA在上清液中。

（4）

酒精沉淀cccDNA,以2.5倍的95%

酒精沉淀质粒DNA，(浓度为66%沉淀最好)。保存在TE（pH8.o）缓冲液中，放置在－20Co下保存备用。

41.图示λZAP载体的组成结构及优点：

T3-MCS-

T7

___________________________＼／____________________

cos_｜

｜

｜

pBluescriptSK噬菌粒

｜

｜

___｜

｜______｜____｜________________________｜______｜__｜cos

I

LacZ

T

结构组成：（1）含有具内删除特性的pBluescriptSK噬菌粒；

（2）在pBluescriptSK噬菌粒两端具有f1的起始子（I）和终止子（T）；

（3）在pBluescriptSK噬菌粒内部具有两端带有T3和T7启动子的多克隆位点MCS；

（4）在pBluescript的内部带有缺陷的LacZ基因；

（5）在该载体的两端具有cos末端。

λZAP的特点：

（1）是一种具有内删除特性的插入型λ噬菌体载体，（2）可克隆10kb大小的外源DNA。

（3）当外源DNA插入取向和读码结构正确，就能表达出融合蛋白质，并可用抗体筛选。

（4）当外源DNA插入在多克隆位点，使β半乳糖苷酶失活故可用Xgal显色的组织化学筛选重组子（白色为重组子）；

（5）克隆的外源DNA可在体内随pBluescript噬菌粒删除下来，省去了常规的亚克隆；

（6）利用T3或T7噬菌体的RNA聚合酶，可方便地制备外源插入的DNA的任何一条链的mRNA。

内删除源理：当含有外源DNA插入的重组λZAP载体，感染大肠杆菌F＋菌株，再用辅助噬菌体M13（或f1）

超感染。于是，在细胞内由此辅助噬菌体基因Ⅱ提供的反式作用蛋白质，便会识别位于λZAp载体上的f1起始子和终止子，并最终导致含有外源DNA插入的pBluescript噬菌粒在体内从λZAP载体上删除下来。最终被辅助噬菌体M13的蛋白质包装成单链DNA噬菌体颗粒，并被挤出寄主细胞。

42.M13克隆体系中β-半乳糖苷酶Xgal的显色原理

M13克隆体系包括M13克隆载体和M13特殊的寄主菌株两部分组成。β-半乳糖苷(LacZ)当它为四聚体时具有活性，可把无色的X-gal切割成半乳糖和深蓝色靛蓝，因此Xgal可作为β-半乳糖苷酶活性的一种指示剂。由于LacZ基因分子量太大。依据基因内互补作用的原理。利用基因工程的方法，即将编码同样的蛋白质多肽链序列，但各自具突变的序列，当这种载体转入到特殊的寄主菌株中便组成具有功能活性的多肽的生化过程。根据这一原理，在M13克隆载体种上LacZ－HindⅡ片段具有β-半乳糖苷酶第2-92位氨基酸，大肠杆菌F，因子上带有缺失了第11-42位氨基酸的缺陷性LacZ(简称M15基因)。当M13载体感染了这种M13特殊的寄主菌株如JM101后，便会产生具有功能活性的β-半乳糖苷酶，于是在含有指示剂Xgal和诱导物IPTG的培养基中，就会出现蓝色的噬菌斑。但当外源基因插入到M13克隆载体时，无法形成四聚体的具活性的LacZ，就不能切割Xgal，故白色噬菌斑为重组子。

43.DNA标签法分离产物未知基因的原理及主要步骤

根据DNA插入突变作用原理，用已知的插入序列为探针，分离产物未知基因的方法。由于插入的DNA序列是己知的，人为地给目的基因加上标签，故称DNA标签法。

主要步骤：（1）

当一段特定的DNA标签序列插入到野生型的基因的内部或其附近位点时，便会诱发该基因发生突变，形成突变体；（2）

用已知的标签序列作DNA分子探针，从突变体的基因组DNA文库中筛选出突变的基因；（3）

再利用筛选到的突变基因除标签序列以外的序列作探针，再从野生型的基因组DNA文库中筛选出目的基因。

44.用于克隆真核基因的大肠杆菌表达体系的优点和条件

大肠杆菌表达体系的优点：

（1）

背景知识清楚，分子生物学、遗传学的基础研究，特别是表达调控知识丰富；

（2）

具有完善安全的基因工程体系。包括安全的寄主菌株和载体系统；

（3）

早期转基因表达调控研究扎实，许多基因如胰岛素基因、生长素基因等，都能在大肠杆菌中高效的有效表达；

（4）

易工业化批量生产，培养方便、操作简单、成本低廉，特别对药用蛋白

发酵生产。

实现真核基因在大肠杆菌中有效表达的条件：

（1）真核基因的编码序列必须是连续的cDNA，因为原核细胞中不具备剪辑加工的酶；

（2）原核的启动子，最好是诱导型的强启动子；

（3）以融合蛋白质的形式表达，稳定性好。

45.酵母

双杂交体系的原理及其用途是什么？

酵母双杂交体系简称Y2H。这是在上一世纪90年代初，在转录因子结构的基础上发展出来的一种敏感的体内鉴定基因的方法。可用来有效地分离与己知靶蛋白相互作的另一种蛋白质编码基因，也是分离与某种特定启动子调控元件结合的特异性转录因子的有效手段。

如同许多真核生物的转录因子一样，酵母β-半乳糖苷酶的转录因子GAL4也含有两个结构上可分开的、功能上相互独立的结构域，即DNA结合域(DNA_BD)和转录激活域(AD)。应用DNA重组技术，可以把GAL4转录因子的这两个结构域分开。如果把它们放置在同一个酵母细胞中，所产生的GAL4

DNA-BD和AD多肽，彼此之间不会直接发生相互作用，所以不具有转录因子的功能活性，无法激活相关基因转录。但是应用DNA重组技术，将两个分开的GAL4的DNA-BD和AD，甚至分别来自两个不同的转录因子的DNA-BD和AD重组成一个转录因子(使之在空间上彼此靠近)则又可重新获得转录因子的功能活性，即可激活相关基因的转录。酵母双杂交体系就是根据这种原理建立的。

酵母双杂交体系包括两种大肠杆菌-酵母菌的穿梭载体；和一种特殊的己经缺失了内源GAL4转录因子的酵母寄主菌株。

第一种穿梭载体叫DNA-BD质粒载体：

它具有色氨酸合成酶基因、把己知的靶基因按正确的读码结构和取向插入在该载体的多克隆位点上，便可与GAL4

DNA-BD多肽形成第一种杂种蛋白(X)。

第二种穿梭载体叫AD质粒载体：

它具有亮氨酸合成酶基因（leu）、是用于构建cDNA表达文库的专用载体。克隆的cDNA片段按正确的读码结构和取向插入在该载体的多克隆位上（构成cDNA文库），cDNA编码的蛋白质便与GAL4的AD多肽融合成第二种杂种蛋白（Y）。

酵母寄主菌株：

将上述两种杂种质粒共转化到酵母双杂交体系专用的寄主菌株特点：（1）这种菌株己经丧失了内源GAL4转录因子的能力；（2）具有LacZ和his3的报告基因；（3）具有trp和leu的转化标记，即在缺少Trp和Leu的缺陷性培养基上无法生长的。

将共转化的酵母细胞涂布在缺少亮氨酸(Leu）和色氨酸（Trp）的SD培养基上，如果由笫一种质粒表达的靶蛋白同第二种质粒表达的cDNA文库编码的一种蛋白质发生了相互作用，这样DNA-BD与AD就会在空间上彼此靠近，而且它具有色氨酸和亮氨酸的编码基因，因此在缺陷性的选择培养上能生长，于是便构成了有功能活性的GAL4转录因子，从而启动下游报告基因LacZ的表达，在含X-gal和诱导物IPTG的条件下，β-半乳糖苷酶把X-gal切割，选择出蓝色阳性克隆。这有可能分离到含有与靶蛋白相互作用的另一种蛋白编码基因。

酵母双杂交体系可以用于产物未知基因的分离、也可用于新基因功能的鉴定。

46.表达载体的组成：

（1）

原核启动子，最好是诱导型的强启动子，使外源基因蛋白表达量占总蛋白的10-30%。

如果表达的是毒蛋白，启动子应呈现低限的基础转录水平；

（2）

多克隆位点(MCS)，用于插入外源基因；

（3）

抗生素抗性基因，用作选择标记；

（4）

复制起点(ori)，决定外源基因的拷贝数;

（5）

转录终止子，防止启动子通读作用，提高蛋白质的稳定性；

（6）

翻译起始序列和转译增强子；

（7）

翻译终止子，防止核糖体的跳跃(Skipping)。采用四联核苷酸UAAU

效果更好。

47.简述构建cDNA克隆的定义、主要步骤及其优越性？

（1)

定义：cDNA克隆：从mRNA出发，经反转录、与载体分子重组、转化寄主细胞增殖，将目的基因克隆化的过程称为cDNA克隆。从理论上讲该生物的每一种mRNA都应有一个克隆。故亦称cDNA文库

（2）

步骤：

第一步：提取处于特定发育阶段的真核生物体的特定器官或组织中的总RNA，根据mRNA

poly(A)尾特点过Oligo(dT)柱，分离纯化出mRNA；

第二步：利用适当引物(一般用Oligo(dT)和反转录酶，获得

cDNA/mRNA杂合分子。

第三步：，用碱处理降解，或用RNaseH酶切割cDNA/mRNA杂合分子中的mRNA链获得cDNA第一链，再由第一链cDNA合成第二链cDNA。

第四步：双链DNA与适当的载体重组，将重组体的群体导入大肠杆菌寄主细胞中增殖，从而构成cDNA文库。

（3）cDNA文库的优点：

（a）

以mRNA材料出发，对于RNA病毒特别适用；

（b）库容量小（相当DNA文库的15％）筛选工作量小；

（c）

假阳性比例小，因每一种mRNA就应有一个克隆。

（d）

具特殊用途：①

克隆的真核基因在原核中表达需cDNA；

②

核苷酸序列测定；

③

发育过程中时空表达基因的研究分析。

48.何为柯斯质粒载体，其结构、特点是什么？

定义：柯斯质粒载体是人工构建带有λ噬菌体的cos位点和E.coli质粒的复制子的新型质粒载体。它具有质粒载体的特点和λ噬菌体的特点。

结构：

（a）

具一个质粒的复制起点（ori）;

（b）具若干来自质粒载体的选择记（1-2个）;

（c）具相当数量的来自质粒的核酸内切酶的单切点;

（d）具有λ噬菌体的cos位点。

特点：（1）λ噬菌体的特点：a.导入寄主细胞后，可以重新环化起来；

b.经体外包装后转导效率大大提高;

c.无法进入溶菌周期，也不能形成噬菌体颗粒。

（2）具质粒载体特点：a.在寄主细胞内可像质粒DNA一样复制；

b.在氯霉素作用下扩增；

c.具有抗生素抗性记号。

（3）具有高容量的克隆能力：上限45kb，下限30kb；

（4）能与带有同源序列的质粒DNA重组。

49.分别叙述原核基因组和真核基因组的结构特点。

（1）原核基因组的结构特点：

（a）高效的遗传信息利用率；

①

既没有不必要的额外重复序列，也极少存在无功能的冗余序列；

②

基因组９８％以上的核苷酸序列都是编码基因

③

基因排列紧凑，同一个操纵子不同基因之间的间隔距离一般不超过

２０bp，而且其中还存在着转录起始信号和终止信号；

④

存在着编码序列彼此重叠、编码不同蛋白质的重叠基因。

（b）双链ＤＮＡ的编码功能；

（c）多基因聚集排列成操纵子结构形式；

（d）染色体基因组的拷贝数平均每细胞为1.1条，在富裕培养基中可高达3～4条。

（2）真核基因组的结构特点：

（a）包装成特定的染色体结构；

（b）基因组的多倍性；

（c）具有大量的重复序列；

（d）

高比例的非编码的DNA序列。以人为例，非编码序列占基因组总长的98%以上，而蛋白质编码基因的序列还不到基因组总长的2%。包括基因与基因之间的非编码的DNA序列，以及基因内部的非编码的DNA序列。

（e）

庞大的基因数量；

如拟南芥：25，000个左右、水稻：40，000个左右、小鼠：30，000个左右、人类：24，000个左右。

（f）基因分布密度不均一。如基因分布有富集区和荒漠区之分。

.何为基因克隆？其主要的实验步骤

定义：基因克隆又叫DNA克隆，它是指将外源基因插入到适当的克隆载体上，形成重组DNA分子群体转化到大肠杆菌寄主细胞中进行复制繁殖，以便从大分子DNA或DNA片段中分离纯化出目的基因或特定的DNA片段的实验操作，叫做基因克隆或DNA克隆。

其主要步骤：

（1）

DNA片段化：从实验材料分离纯化基因组DNA，经机械方法或酶

消化、超声波等方法获得一定长度的DNA片段。

（2）

体外重组：将片段化的DNA与适当载体分子重组。

（3）

重组子转化：将重组子转入到适当的寄主菌株中进行增殖。

（4）

重组子的筛选：从大量的转化细胞中筛选阳性克隆的重组子。

（5）

目的基因的分离：用多种酶切后走凝胶电泳，并用探针进行杂交，分离出目的基因的DNA，并克隆在M13载体上进行测序。

(6）

目的基因的表达与功能鉴定。

51.DNA转录与复制有哪些差别？

基因的转录与复制的过程，无论在生物化学还是酶学方面都是十分相似的。它们二者都是在各自特有的核酸酶，即RNA聚合酶和DNA聚合酶的催化下，合成出一条与DNA模板链互补的新的多核苷酸链。尽管如此，基因的转录（RNA合成）和基因的复制（DNA合成）之间，仍然存在着如下几个方面的差别：

（1）对引物需求有别

。在基因复制中，需要同时存在模板链和引物，DNA聚合酶才能启动DNA新链的合成。而基因的转录则不同，它不需要引物，RNA聚合酶便能启动RNA新链的合成。

（2）使用的底物不一样。由于DNA和RNA分子的核苷酸组成成分不同，因此基因复制与转录所用的底物也不一样：前者是用脱氧核糖核苷三磷酸：dATP、dGTP、dTTP、dCTP；后者是用核糖核苷三磷酸：ATP、GTP、TTP和CTP。

（3）与模板的结合状态有异。基因的复制是按照半保留方式进行的，在新生成的两条子代DNA分子中，新生链和模板链始终是结合在一起的。而基因的转录则不同，新合成的RNA链最终是要从模板上解离下来的。

（4）精确性程度差异悬殊。在基因的转录过程中错误参入RNA链的核苷酸频率是10－4，也就是说每参入10，000个核苷酸，就会出现一个错误（万分之一错误率）。而在基

因的复制核苷酸错误参入频率是10－7，也就是说每参入10，000，000个核苷酸，仅出现一次错误（千万分之一错误率）。这也就是说DNA复制的精确度是超过转录的1000倍！

（5）涉及范围不同。基因复制往往是整个基因组从头至尾逐步进行，涉及范围包括整个基因组中的所有的DNA和基因。而基因转录则不同，它所涉及的范围要比复制小得多，通常只是一个基因或一个操纵子。

52.何为基因扩增，它有哪些方式？

基因扩增是指某种基因拷贝数增多的现象。

其方式有：（1）利用PCR

技术使某基因拷贝数增多；

（2）隆基因导入寄主细胞内使大量繁殖，使基因扩增(单拷贝基因可扩增到约1x106的拷贝)；

（3）环境压力影响使某种基因适应性的扩增；

（4）程序性基因扩增。如非洲爪蟾在形成卵发育过程中其rRNA大量扩增；

（5）生物进化过程中的某种基因得以扩增。

53.真核基因与原核基因表达调解机理的差异

（1）源于细胞结构水平的差异。真核细胞转录和翻译分别在细胞核和细胞质中分开进行；没有涉及mRNA运送过程的调节。原核细胞的转录和翻译是在细胞质中偶联发生。

（2）源于染色体结构水平的差异。真核细胞基因组被包装成染色体，存在于细胞质的有关蛋白质因子（如TF）进入细胞核必须克服染色体的层层屏障才能与顺式元件结合。

（3）源于基因排列与结构的差异。真核基因为单顺反子，大多为断裂基因。转录后加工复杂，而原核基因为多顺反子，转录后加工也简单得多。

54.说明mRNA差别显示分离产物未知基因的基本原理并评述其优缺点。

答：（1）mRNA差别显示：是建立在基因差别表达理论基础上，通过比较不同个体，或同一个体的不同组织或不同发育阶段之间mRNA种的差别，并应用反转录PCR技术而发展出来的一种分离产物未知基因的方法。故又叫mRNA差别显示反转录PCR，简称DDRT-PCR。

（2）原理：根据真核基因3，-端的mRNA分子的poly（A）尾巴前2位碱基，可把mRNA分子分成12种类群，如1个碱基可分为3大类群;根据3，-端的锚定引物，和5，-端设计随机引物。从数理统计推算和实验经验，3种锚定引物和80种随机引物(3×80＝240）240组合,大体上涵盖95%的mRNA。

（3）mRNA差别显示优点：

（a）简单方便，由于使用PCR扩增和序列胶电泳技术，故简单快捷。

（b）灵敏度高，实验利用了PCR技术、序列电泳技术和同位素自

影技术，故具极高的灵敏度。

（c）多用性，可同时比较多个样品间的基因表达差异。④直观性，其每个步骤均可被直观地检测。

（4）mRNA差别显示缺点：

（a）假阳性比率高。

（b）扩增的片段分子量较小。

（c）工作量大。

55.影响酶切反应的因素：

答：（1）DNA分子的性质：（a）酶切位点周围的碱基成分；

（b）酶切位点的密度；

（c）DNA分子的构型；

（d）NA分子的甲基化程度。

（2）酶切的温度；

（3）DNA制剂的纯度。

56.产生酶切星号活性的因素：

（1）每μg样品酶切的用量不得超过10单位；

（2）酶切反应体系中的甘油浓度不得超过5%；

（3）其他金属离子取代二价Mg；

（4）金属镁离子不得低于25mmol/L；

（5）pH不得超过8；

（6）样品中有机溶剂污染的影响。

57.一种基因产生多种蛋白质的原因分析

答：（1）主要原因：（a）.许多基因都拥有多个启动子。在人类基因组中，至少有一半以上的基因都具有多个启动子。在真核断裂基因的转录过程中，可变启动子的使用常常涉及到位于转录起点的可变首位外显子（alternative

first

exon）。可变启动子的不同成员，驱动从相应的可变首位外显子开始转录反应。已经对有些基因的可变首位外显子作了全阵列（whole

arrays）分析，结果证明每个可变首位外显子都具有一个自身专有的启动子。可变的首位外显子的不同产生的蛋白质产物不同；

（b）

初级转录本的可变剪接可产生多种蛋白。可变剪接（alternative

splicing）又称为差异剪接（differential

splicing）或可变mRNA剪接。这是指真核断裂基因初级转录本，在不同类型的或处于不同发育阶段的细胞中发生的不同形式的剪接作用。结果生成具有不同序列结构特征、并编码不同蛋白质异形体的成熟的mRNA分子。因此说，可变剪接可以使同一个基因的初级转录本，最终翻译出多种不同功能的蛋白质分子。以果蝇Dscam基因为例，可形成38016种蛋白质异形体。可见可变剪接是造成一种基因多种蛋白质现象的另一种重要原因。

（2）次要原因：（c）

RNA的编辑；致使mRNA分子核苷酸序列的结构出现了变化。此种RNA编辑具有多种不同的效应，诸如产生出新的起始密码子、终止密码子或是造成多肽链编码序列出现变化。因此，RNA编辑的结果，改变了源自基因DNA模板链的遗传信息，翻译出不同于基因原来编码的新的蛋白质多肽。

（d）

基因重排均可产生不同的蛋白。由于基因区段转位作用或随机连接造成的基因可变区固有排列顺序的改变的基因重排（gene

rearrangement）或DNA重排，可使基因产生不同的蛋白。

58.控制真核基因表达调节的主要方式：

（1）基因重排的调节方式；

（2）基因扩增的调节方式；

（3）基因调节蛋白质的转录调节方式；

（4）RNA加工的调节方式；

（5）核质mRNA转的调节方式；

（6）mRNA稳定性的调节方式；

（7）mRNA翻译的调节方式。

59.真核基因表达调节的主要特点：

（1）真核生物与原核生物在基因表达调节方面的相似性，已知有不少在大肠杆菌中出现的调节机理，原则上也适用于真核生物，例如：i.两者的转录调节，都是通过DNA结合蛋白质，同基因启动子中的特异性顺式元件的结合作用进行的。ii.两者DNA结合蛋白质的多肽基序，在序列结构上也是相同的.（2）真核生物与原核生物在基因表达调节方面的差异性：i.真核生物细胞类型的多样性，与原核相比，特别高等植物与动物，都具有数百种功能各异的不同细胞类型；ii.真核生物具有细胞核结构，因此基因的转录和翻译是分别在细胞核与细胞质中分步进行的；iii.真核生物具有庞大的基因组，其长度要超过原核的700多倍；iii.真核生活物基因拥有大量的各种类型的基因，其总数可达数万种，相当原核生物的20多倍.（3）真核基因表达调节方面与原核基因相比其复杂性或特殊性：i.发育调节,基因表达的发育阶段性调节，器官和组织特异性调节；ii.分化调节，同一受精卵究竟是如何分化出各具特定功能和形状态特征的不同类的组织、器官和细胞？；iii.表达顺序性，复杂的多细胞生命体中，不同基因表达的顺序性的调节机理；iv.同一生命个体中，不同细胞之间的生命活活动被此之间的协调和相对稳定性是息怎样维持的?；v.选择性表达，相同基因组为什么在红细胞前体中会选择性表达编码血红蛋白的基因，而在胰腺细胞中却是选择性表达胰岛素的基因。此种精确控制基因差异表达的分子机理又是如何解释的呢？。

(2014.4.12由北京大学生命学院黄美娟提供)

第四篇：浏览该文件

附件2：

2012国家重点新产品计划项目申报要求

根据国家科技计划总体安排部署，2012国家重点新产品计划（以下简称新产品计划）重点围绕培育和发展国家战略性新兴产业，继续加大对拥有自主知识产权、技术含量高的创新产品支持，引导和鼓励企业增加新产品研发投入，提高企业技术创新能力，推动科技成果转化和产业化。

2012新产品计划项目分为战略性创新产品和重点新产品两类。各推荐单位战略性创新产品推荐数不超过5个，重点新产品按控制数推荐。评审通过的项目将纳入国家重点新产品计划备选项目库，择优予以支持。

一、重点支持方向

（一）战略性创新产品。

战略性创新产品是指在节能环保、新一代信息技术、生物、高端装备制造、新能源、新材料和新能源汽车等国家战略性新兴产业领域中有重大技术突破、在国民经济发展中具有战略价值、在保障和改善民生中具有显著作用、在行业进步和地方发展中具有重大影响，拥有自主知识产权，具有较强市场竞争优势的重大创新产品。

（二）重点新产品。

重点新产品是指符合国家产业发展政策、在国内首次（或首批）开发成功，并开始有市场销售或具有良好的市场应用前景，经济效益和社会效益明显；具有自主知识产权和自主品牌，技术水平高、附加值大、市场竞争力强的新产品。

1.优先支持钢铁、有色金属、煤炭、电力、石油化工、汽车、建材等行业开发的节能减排和低碳环保的新产品；

2.优先支持符合西部欠发达地区产业发展特点和资源优势，有利于区域-1-

经济协调发展的新产品；

3.优先支持利用信息技术和高新技术改造提升传统产业技术升级，有利于区域优势产业和特色产业集聚发展的新产品；

4.优先支持地方政府重点支持的新产品。

二、支持领域

详见《国家重点新产品计划支持领域（2012）》。

三、不支持范围

1.食品、保健品、饮料、烟、酒类产品；

2.化妆品、日用化工、一般纺织品、服装、家具、家电等日用产品；

3.用进口零部件（包括散件）组装的产品；

4.单纯为军工配套的产品；

5.传统手工艺品；

6.单纯改变花色、外观与包装的产品；

7.动、植物品种资源；

8.高能耗、污染环境的产品。

四、申报要求

（一）申报单位。

凡在中国境内注册、具有独立企业法人资格的单位均可申报。

（二）申报渠道。

1.在各省、自治区、直辖市、计划单列市、副省级城市等省、市地方注册的企业，按地方科技厅（委、局）（以下简称地方）要求的相关程序向地方申报。

2.国务院有关部门的直属企业可向各部门科技司（局）（以下简称部门）申报或向企业注册所在地地方申报。

（三）申报材料。

1.项目申报表；

2.项目产业化状况及前景分析；

3.附件材料（复印件）：

（1）企业法人营业执照（加盖企业公章）；

（2）经审计的企业2010财务报表（每页加盖审计单位印章或盖骑缝章）；

（3）可说明知识产权归属和授权使用的证明文件；

（4）涉及废水、废气、废物排放的项目，需提交环保达标证明；

（5）特殊行业许可证；

（6）质量技术监督机构备案的产品企业标准，或采用国际标准或国外先进标准的认可证明；或采用国家标准、行业标准的标准名称及标准号；

（7）权威机构检测（验）报告；

（8）科技成果鉴定证书或最近2年内的查新报告等技术证明（说明）文件；

（9）用户意见报告（不少于两份）等其他证明材料。

（四）报送材料。

1.申报单位报送材料。

用A4纸打印在线填写的《项目申报表》、《项目产业化状况及前景分析》，内容必须与网上申报材料完全一致。按项目申报清单（附件3）所列顺序装订，加盖公章后报送地方、部门。

2.地方、部门报送推荐材料。

对推荐项目电子数据和纸质申报材料确认无误后，网上提交国家科技计划项目申报中心，将纸质申报材料及战略性创新产品和重点新产品《项目报送汇总表》各一份寄至指定地点。其中纸质申报材料装订顺序：申报材料封页、项目总体评价意见表、项目申报材料清单、项目申报表、项目产业化状况及前景分析、附件材料。

（五）注意事项。

1.申报单位应认真准备申报材料，并对申报材料的真实性负责。若发现弄虚作假，将不予受理。

2.不得重复申报。

（1）申报单位当只允许申报一个新产品计划项目，战略性创新产品和重点新产品两类只能选择其一；

（2）已列入新产品计划的同一产品及型号的项目不得再次申报。若申报项目名称相同，而型号不同，则必须提供该型号所采用的新的授权专利及其说明书摘要，附图和权利要求书等内容，以证明其比原列入计划项目的产品有重大的改进和创新，方可申报。

3.产品名称及型号填写要简洁、清晰、规范。名称应用中文，尽量不出现英文词组或缩写，不得使用“系列产品”等词语，属系列产品必须注明型号。

五、联系方式

1.纸质申报材料寄送地址：北京市西城区三里河路54号468房间，国家重点新产品计划管理办公室（科技部火炬高技术产业开发中心成果推广处）

邮编：10004

5电话：010-68511559、68510951。

2.软件及网络申报咨询

科技部信息中心：010-88659000（中继线），51292636，68522908（传真）。

第五篇：中国农业科学院研究生院2014级新生报到须知

中国农业科学院研究生院2014级新生报到须知

2014级新同学：

你们好！欢迎你到中国农业科学院攻读博士研究生！在您即将踏入校门报到之前，请详细阅读以下内容，并按规定办理入学报到有关事宜。

一、凭我院签发的《录取通知书》于2014年9月1日到北京市海淀区中关村南大街12号中国农业科学院研究生院报到，其他证明均不能作为入学凭证。

二、党的组织关系台头写到“农业部直属机关党委”，去向写“中国农业科学院研究生院”，不要转到或写到研究所；共青团的组织关系由所在单位团委直接转到“中国农业科学院研究生院共青团委”。委托培养研究生的临时组织关系也必须转入上述单位。

人事档案邮寄地址：北京市海淀区中关村南大街12号中国农业科学院研究生院研究生工作处。邮编：100081

三、凭我院签发的《录取通知书》到户口所在地派出所自愿迁出本人户口。户口迁出时应注意以下事项：

1.户口一律迁至“北京市海淀区中关村南大街12号中国农业科学院研究生院”，户口迁移证上必须注明“居民身份证号”。

2.户口只限本人，不能携带家属。

3.户口已在北京市正式落户的新生（学校集体户口者除外）不迁户口。

4.农业户口迁入学校后，均要转为非农业户口。

四、委托培养研究生及中国农业科学院各研究所的在职研究生不转户口、档案。

五、带全本人的被褥、蚊帐、衣物和日常生活用品(南方籍同学应带全冬季御寒衣物)。

六、报到时须提交以下材料：1.录取通知书；2.户口迁移证（不

迁户口者除外）；3.学历、学位证书原件；4.党（团）组织关系；5.近期免冠半身正面一寸照片8张。

七、请认真按要求办理各种手续。若手续不全，将不予报到，并须在规定时间内回原单位重新办理，否则将取消入学资格。如有特殊原因不能按时报到者，应由所在学校（单位）出具有效证明向学校请假，并将请假条发传真至：010－82106609（注明工作处收）。无故逾期两周不报到者，将取消入学资格。

2014年6月11日