病理组织工作站

第一篇：病理组织工作站

快速石蜡切片病理诊断

我院病理科引进的钧镒超声组织处理仪（病理组织工作站），病理常规石蜡切片诊断报告一般需时3～5天，在病人病情危急或者是肿瘤病人的诊断中，临床活检，用常规石蜡制片法制作，病理报告如没特殊情况，一般都需要三天才能发出。其程序基本是活检当天下午取材，晚上组织脱水及浸蜡，第二天上午包埋切片及染色，当切片送达医生手里时，已是第二天的上午，下午看阅切片，至复检医生手里时，已是第三天的时间了。这是一般的工作时间，可这对于急需获得病理结果的患者来说，三天时间确实太长，尤其是门诊病人，远道求医的患者，或者外地的患者，三天的时间就意味着等待，住宿及消费。为了解决上述的问题，减少患者的经济负担，为患者蠃来保贵的治疗时间，超声波快速石蜡制片法可胜任此项工作。最新超声波快速石蜡制片机，开展了快速石蜡切片病理检查。

超声波快速石蜡制片机能提高组织内分子和溶剂分子的运动速度，它能使组织的蛋白质迅速发生凝固并保持细胞原结构，因而能快速固定组织并保持组织的外形和柔韧性，有利于切片。超声波快速石蜡制片具有操作简便，时间短不易误诊，病理切片资料可长期保存等优点，目前病理科经过一段时间的前期准备及试验工作，该项目质量可靠，结果稳定，制片质量近似于常规石蜡切片技术，完全符合病理诊断的要求，大大地提高了工作效率。

应用超声波快速石蜡制片机，一般可以在6小时工作时间内发出常规病理诊断报告（上午11点前送检标本，当天下午5点前发出报告；下午4点前送检标本，次日上午12点前发出报告）。该项目按淄博市物价收费标准收费，如科室病人有需要做快速石蜡病理检查，请医生及时将其标本送到病理科。

开展快速石蜡切片病理诊断技术，既能使患者得到尽早诊断，从而得到及时治疗，减轻痛苦，同时又能使病人缩短就诊时间及住院天数，减轻医疗费用，方便了病人，实为一种优质、简便、安全、快速的好方法。

医生申请快速石蜡切片病理检查的注意事项：

1、如需做快速石蜡病理检查，请在申请单上注明快速石蜡病理检查。

2、如送检标本为少见疑难病例，需要进一步做免疫组化检查，在6小时内发出初检报告，免疫组化报告3工作日内发出。

3、为保证工作顺利进行，请需做快速石蜡病理切片的标本，离体后立即用福尔马林固定，并由专人快速送到病理科检查。

4、骨组织及淋巴结组织建议做常规石蜡病理切片检查。

5、周六、日不做快速石蜡切片检查。

计划首先开放科室：胃肠镜活检，耳鼻喉活检，宫颈活检，子宫内膜刮出组织。

第二篇：手术室组织病理标本管理制度

手术室病理标本管理制度

手术室病理标本管理制度

为了规范病理标本管理，避免各类差错事故的发生，保证准确及 时发出病理报告，根据我院实际情况特制定以下规定。

一、手术中取下的标本（不论组织大小）都必须送做病理检查，不得随意丢弃。

二、凡需手术病员，由床位医生术前填写“病理申请单”，于手 术当天与病历一起送人手术室。手术中切下的标本由巡回护士放入容 器内，按规定标本完全浸入 10%中性福尔马林溶液或 95％乙醇溶液 内，并贴好标码（姓名﹑住院号），送交手术室专职人员登记签收。

三、送检的病理标本连同病理申请单由手术室专职人员送到病理 科，负责送检标本人员必须带上“病理标本签收簿”，由病理科工作 人员核对无误签收后，方能留下标本。

四、凡送检冰冻病理标本，手术医师必须按要求填写冰冻病理申 请单，并由手术主刀或一助（特殊情况下可由手术室专职人员）将手 术标本给病人家属或委托人确认。然后由手术室专职人员将冰冻标本 ﹑病理申请单一同送到病理科。凡需送冰冻检查，临床医师应提前一 天通知病理科。

五、病理科收到标本后应及时操作检查。病理报告签发时限：

1、冰冻报告一般在收到标本后半小时左右发出临时冰冻报告。如遇特殊情况应及时通知手术室，三天后发出正式冰冻报告。

2、石蜡切片报告在实际收到标本后五个工作日内发出，如遇特 殊情况（需做

酶标﹑特染﹑脱钙等）应及时发出临时报告。

3、细胞学检查：穿刺涂片一般在穿刺后一小时发出报告，如有 特殊情况需和病人约定发出报告日期，脱落细胞检查在收到标本后二 个工作日内发出报告。

六、病理标本检查后至少保留一个月。

七、凡违反上述规定者，按性质﹑后果，责任到人。手术室病理标本管理制度流程 术前填写病理申请单

普通标本 10%中性福尔马林或 95％乙醇 冰冻病理标本 病人家属或委托人确认 提前一天通知病理科 登记签收 送检病理科 冰冻报告 石蜡切片 细胞学检查 按照规定发出报告

第三篇：病理组织切片制作技术

病理组织切片制作技术

病理组织切片常用的制作方法有三种。即石蜡切片法，冰冻切片法和火棉胶切片法。以石蜡切片法为代表，切片的基本制作过程是：

组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。

以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。因此应细致、耐心、认真负责，并事先做好计划安排。

一、取材

采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压，扯拉病料，以防人为损伤。切取的工具要清洁。采取病料越新鲜越好，一般不超过死后24小时。应选择病变部与可疑病变部切取，切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。特殊病料应根据器官的结构特点切取。管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。

切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。

二、固定

固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。材料取下后，应迅速固定。固定液数量应为病理组织块的5到20倍。由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。

最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配成。

三、冲洗

固定后的组织块，应将固定液洗去。一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色。

冲洗时如不方便用流水冲洗，也可用较大容器盛装水浸洗，每隔相当时间换水一次。整个浸洗时间比流水冲洗应稍长一些。酒精固定的组织材料不需冲洗。

四、脱水

经过固定的组织，冲洗后要进行脱水。脱水的目的在于将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，为石蜡等其他包埋剂浸入组织创造条件。常用的脱水剂为酒精。由于酒精可以任何比例与水结合，对组织穿透力强，又能使组织硬化，因而不能将组织从水中直接移入浓度高的酒精中，应从低浓度逐渐到高浓度。脱水必须充分，否则给浸蜡造成困难。

除用酒精作脱水剂外，还可以用正丁醇（N—Butyla alcohol）。正丁醇微溶于水，能与各种浓度酒精混合，也能直接溶解石蜡。故组织经正丁醇脱水后，不须经二甲苯透明。用正丁醇作脱水剂，组织块收缩减低，也不会过硬，故比酒精优越。

五、透明

透明的目的是将组织内的酒精用矿物油或植物油置换出来，并溶解石蜡，帮助石蜡浸透组织。由于经过透明剂处理的组织块用肉眼观察呈透明状，故称这一过程为透明。常用的透明剂为二甲苯（Xylol），因其穿透力较强，因而组织在二甲苯中停留时间不宜过长，一般透明时间在30分钟左右即可。

六、浸蜡 浸蜡是指组织经过透明作用以后，放入溶化的石蜡中浸渗，使石蜡浸入组织块中，冷却后，才能进行切片。

通常选择熔点在52～56℃之间的石蜡，并视切片时环境的气温而选择。室温高则选用熔点稍高的石蜡，反之，则选用熔点较低的石蜡，这样可防止切片时石蜡太软或易碎裂。浸蜡的过程是：

二甲苯石蜡混合液（1：1）

1小时 二甲苯石蜡混合液（1：2）

1小时

石蜡（1）

1小时30分 石蜡（2）

1小时30分

上述过程可在56℃～58℃恒温箱中进行，含二甲苯的混合液可用磨口小瓶盛装。

七、包埋

包埋就是将已浸渗好的组织包埋于浸渗剂中。根据需要，包埋的方法常有石蜡包埋法和火棉胶包埋法。石蜡包埋法：

（1）先将熔化的石蜡倒入包埋框，用加热的镊子将欲包埋的组织块在蜡液内放置好。注意各组织块之间的距离和每个组织块的位置和方向。

（2）迅速第二次往平皿内倾倒蜡液，淹没组织块。待蜡液出现凝固层后，即轻轻放入冷水盆中或冰箱中使其凝固。石蜡完全凝固后，倒出冷缩的蜡块片，用加热的外科刀，按组织块位置修整蜡片待用。

对于实验动物（狗和兔等）组织，一般的脱水透明和浸蜡时间如下： 处理步骤处理时间（min）处理步骤处理时间（min）① 75%酒精长短不定二甲苯Ⅰ、Ⅱ⑥ 30 ② 85%酒精 120－300 二甲苯Ⅲ⑦ 60

③ 95%酒精Ⅰ和Ⅱ 120－300 56－58℃石蜡⑧ 30 ④无水酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 30 56－58℃石蜡⑨ 60－120 ⑤无水酒精Ⅲ 60－120 56－58℃石蜡⑩ 120－180

注：摘自病理学技术，人民卫生出版社，王伯，李玉松，黄高，张远强主编。

八、组织切片

不同的切片制备方法，其切片方法也有较大差别，组织切片法包括石蜡切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、石蜡包埋半薄切片法、树脂包埋薄切片法和大组织石蜡切片法等。常用的切片工具包括组织切片机、切片刀和自动磨刀仪器等。以下分别加以叙述。

（一）石蜡切片法

组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程称为石蜡切片法。为现在病理诊断常用的制作切片的方法。在切片前应先切去标本周围过多的石蜡（此过程称为修块）但也不能留得太少，否则易造成组织破坏，连续切片时分片困难。一般切4－6μm的切片，特殊情况可切1－2μm。要观察病变的连续性，可制作连续切片。除此之外，石蜡包埋的组织便于长期保存，因此石蜡切片仍是目前各种切片制作方法中最常用，最普遍的一种方法。

1．切片前的准备

（1）固定后的标本经脱水、透明、浸蜡和包埋后，制成蜡块。高质量的蜡块和锋利的切片刀是保证切片质量的关键环节。检查切片刀是否锋利，简便的方法是用头发在刀锋上碰一下，如一碰即断，说明刀锋锋利。用显微镜观察可确定刀口是否平整，有无缺口。

（2）准备充足的经过处理的清洁载玻片和恒温烤片装置，大中号优质狼毫毛笔和铅笔（用于在载玻片的粗糙端写号），如用普通载玻片，可用碳素墨水和蛋白甘油按3：1体积混合后书写。

2．切片制作过程

（1）将预先修好的组织块先在冰箱中冷却，而后装在切片机固定装置上。将切片刀装在刀架上，刀刃与蜡块表面呈5℃夹角。将蜡块固定，调整蜡块与刀至合适位置，并移动刀架或蜡块固定装置，使蜡块与刀刃接触。

（2）切片多使用轮转式切片机，使用时左手执毛笔，右手旋转切片机转轮。先修出标本，直到组织全部暴露于切面为止，但小标本注意不要修得太多，以免无法切出满意的用于诊断的切片，标本应注意切全。切出蜡片后，用毛笔轻轻地托起，尔后用眼科镊夹起，正面向上放入展片箱（展片温度根据作用的石蜡熔点进行调整，一般低于蜡熔点10～12℃），待切片展平后，即可进行分片和捞片。切片经30%的酒精初展后，再用载玻片捞起放入展片箱更易展平。为减少切片刀与组织块在切片过程中产生的热量，使石蜡保持合适的硬度，切片时可经常用冰块冷却切片刀和组织块，尤其在夏季高温季节更为必要。（3）轮转式切片机切取组织，是由下向上切，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分放在上端（如皮肤组织，应将表皮部分向上。而胃肠等组织，应将浆膜面朝上）。

（4）捞片时注意位置，要留出贴标签的空间，并注意整齐美观。捞起切片后，立即写上编号。

（5）切片捞起后，在空气中略微干燥后即可烤片。一般在60℃左右烤箱内烤30min即可，也可用烤片器烤片。血凝块和皮肤组织应及时烤片。但对脑组织待完全晾干后，才能进行烤片。否则，可能产生气泡影响染色。

3．注意事项

（1）组织的取材和固定 取材时，组织块的大小厚薄应适当，过大、过厚的组织，固定液不易渗透，易引起固定不良。过小、过薄的组织，在固定和脱水的过程中易变硬或产生弯曲扭转，同样影响切片质量。陈旧、腐败和干枯的组织不宜制作切片。用陈腐组织制成的切片，往往核浆共染，染色模糊，组织结构不清，无法进行观察。固定不及时和固定不当的组织，染色时常出现核质着色较浅，轮廓不清，出现不同程度的片状发白区。组织固定时，固定液的量应充足，至少要在4倍以上，同时注意组织块不要与容器粘连。至于组织固定的时间，根据具体情况加以掌握。有关固定时应注意的事项，可参见有关章节。（2）组织脱水、透明和浸蜡组织脱水用的各级酒精，应保证相应浓度，以便组织脱水彻底。但无水酒精中，组织块放置时间不宜过长，否则组织过硬，切片困难。遇到此情况，可将组织浸在香柏油中软化，用二甲苯洗去香柏油后，再重新浸蜡和包埋。脱水酒精，尤其是无水酒精中混有水分，则组织脱水不干净。经二甲苯时，组织也无法透明，呈现浑浊。此时应将组织在新的酒精中重新脱水。二甲苯透明也应充分，否则不利于石蜡的浸透。但组织在二甲苯内的时间应严格掌握，时间过长组织易碎，也无法切出好的切片。时间不足，则石蜡不易浸透。浸蜡的温度也不宜过高，时间长短也应加以控制。总之，组织脱水、透明和浸蜡对于切片质量都有一定影响，组织脱水、透明和浸蜡过度，组织块变硬变脆，因此对于小块组织或小动物标本应注意时间。但若时间不够，组织块硬化不够，也不利于切片和染色，因此，应注意各具体环节的操作，并注意保证各种试剂的质量。

（3）切片切片刀要求锋利且无缺口，切片自行卷起多由切片刀不锋利所致，切片刀有缺口时，易造成切片断裂破碎和不完整。骨组织切片时，用重型刀较好。全钢刀或单面钨刀也适合石蜡或火棉胶包埋的骨组织。

（4）切片刀和切片机切片刀放置的倾角以20－30℃为好。倾角过大切片上卷，不能连在一起。过小则切片皱起。应注意维护切片机，防止因螺丝松动产生震动，切片时会造成切片厚薄不均。遇硬化过度的肝、脑、脾等组织时，应轻轻切削，防止由于震动产生空洞现象。（5）特殊要求切片的制作 石蜡切片虽然有很多优点，但制片过程中要经过酒精和二甲苯等有机溶剂处理，因此很易造成组织内抗原性的丧失，在用于免疫组织化学染色时影响结果的准确性。因而有人采用冷冻干燥包埋法，即将新鲜组织低温速冻，利用冷冻干燥机在真空和低温条件下除去组织内的水分，然后用甲醛蒸汽固定干燥后的组织，而后在进行浸蜡、包埋和切片。此法可保存组织内的可溶性物质，防止蛋白质变性和酶的失活，减少抗原的丢失。用于免疫荧光标记、免疫酶标记和放射自显影。

（二）冰冻切片法

冰冻切片在组织学技术中应用广泛，对临床快速病理诊断尤其具有重要意义。另外，因冰冻切片制作时不经各级酒精的脱水，二甲苯的透明等过程，因此对脂肪和类脂的保存较好，在进行脂肪染色和神经组织髓鞘的染色常用。冰冻切片多用于新鲜组织，甲醛固定的组织和低温冰箱冷藏的组织块等。组织不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后进行切片。

1．恒冷箱切片 将组织块在恒冷箱的切片机上切片。恒冷箱切片机的种类较多，可根据实际情况加以选用。一般调节温度为－25℃左右。箱内温度下降后，打开观察窗，将组织固着器放置到速冻台上，先放少量OCT或羧甲基纤维素，待冻结后将组织块放上，并在其周围加适量包埋剂，将组织块包埋。组织冻结后，将组织固着器装到切片机上，调整组织的切面与刀刃平行并贴近刀刃，将厚度调至适当位置后，关闭观察窗。初步修出组织切面后，放下抗卷板，开始切片。切出切片用载玻片贴附后，进行吹干或固定。这种切片用于科研和教学的连续切片，效果较好。在切片前，应预先启动进行预冷，同时准备多个冷却台，用于多块组织切片。

2．半导体制冷冰冻切片法 组织块放置在半导体制冷台上，加少许蒸馏水，调好切片的厚度。接通循环流水后，再接通电源，而且在使用的全过程中流水不能中断，关闭电路后，才能停水。还应注意电源正负极不能接反，用整流电源控制温度。冰冻组织周围的水不宜过多，用手检查组织块的硬度，当可切成厚薄一致的切片时，即可切片。切片用毛笔展平后，立即用载玻片贴附，待切片刚要融化时，即刻入固定液内固定1min。已固定的组织切片，收集于清水中。根据目的进行染色。暂时不染色的切片，用载玻片吸附。

3．甲醇制冷器 制冷箱为附有带导管的制冷台和制冷刀的甲醇循环装置，其冷却速度较快，属开放式，做一般常规冰冻切片用。

4．二氧化碳冰冻法 将组织块用蒸馏水洗后，放在冰冻切片机的冷冻台上，加蒸馏水少许。打开冷冻台的二氧化碳开关，二氧化碳气体喷出，待组织出现冷霜时，关闭二氧化碳，即可切片。组织冷冻过硬易碎，若冷冻不够，组织块硬度不足，切片呈粥糜状，无法成片，应用间歇冷却法继续冷却。硬度一般在刚开始解冻时最适合，应迅速切片。

5．冰冻切片粘片法冰冻切片粘片法基本按石蜡切片的粘片处理，但烤片温度不宜超过40℃。烤干后立即取出，温度过高，时间过长，则切片易碎。烤干后用70%酒精和自来水略洗后即可染色。

九、苏木精－伊红染色方法

苏木精-伊红染色方法，简称HE染色方法，是生物学和医学的细胞与组织学最广泛应用的染色方法。在病理学实验室中称为常规染色方法。病理细胞和组织学的诊断，教学和研究都是用HE染色方法观察正常和病变组织的形态结构。因此病理学工作者必需学习和掌握这种染色方法。

（一）HE染色的基本原理

1．细胞核染色的原理

细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精硷性染料以离子键或氢键结合而染色。苏木精在碱性染料中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2．细胞浆染色的原理

细胞浆内主要成分是蛋白质，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。伊红是细胞浆的良好染料。

随着科学技术快速发展和电子计算机的广泛应用，染色自动仪器的出现，许多实验室已用全自动染色机代替人工染色。

（二）人工操作苏木精伊红染色方法

1．染色步骤 二甲苯I脱蜡10min.二甲苯II脱蜡5min。

无水乙醇洗去二甲苯1min×2次。

95%酒精1min。

90%酒精1min。

85%酒精1min。自来水洗2min。

苏木精染色1min至5min。自来水洗1min。

1%盐酸酒精分化20s。自来水洗1min。

稀氨水（1%）反蓝30s。自来水洗或蒸馏水洗1min。伊红染色20s至5min。自来水洗30s。

85%酒精脱水20s。

90%酒精30s。

95%I酒精1min。

95%II酒精1min。无水乙醇I 2min。无水乙醇II 2min。二甲苯I 2min。二甲苯II 2min。二甲苯III 2min。

中性树胶或加拿大树胶封片。

2．染色结果

细胞核呈蓝色，细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色。

（三）自动染色机苏木精伊红染色程序

1．二甲苯I 10min。

2．二甲苯II 10min。

3．无水乙醇1min。

4．无水乙醇1min。

5．95%酒精I 1min。

6．95%酒精II 1min。

7．90%酒精I 1min。

8．80%酒精1min。

9．自来水洗1min。

10．苏木精染色1至5min。

11．自来水洗1min。

12．1%盐酸酒精分化30s。

13．自来水洗5min。

14．伊红染色30s至5min。

15．自来水洗30s。

16．85%酒精20s。

17．90%酒精30s。

18．95%酒精1min。

19．95%酒精1min。

20．无水乙醇I 2min。

21．无水乙醇II 2min。

22．二甲苯I 2min。

23．二甲苯II 2min。

24．二甲苯III 2min。

25．中性树胶或加拿大树胶封片。

（四）冰冻切片苏木精伊红染色

1．恒冷箱冰冻切片，粘贴在载玻片上，用95%酒精95ml和冰醋酸5ml的混合固定液固定1min。自来水洗。

2．苏木精染色1～2min。

3．自来水洗30s。

4．1%盐酸酒精分化20s。

5．自来水洗20s。

6．稀氨水30s。

7．自来水洗20s。

8．伊红染色20s～1min。

9．自来水洗10s。

10．85%酒精20s。

11．90%酒精30s。

12．95%酒精1min。

13．无水乙醇I 1min。

14．无水乙醇II 2min。

15．二甲苯I 1min。

16．二甲苯II 2min。

17．二甲苯III 2min。

18．中性树胶或加拿大树胶封片。

（五）染色液的配制

1．苏木精（素）

苏木精是一种纯天然染料，是从苏木素树提炼出来的，苏木树主产墨西哥的坎偑切，苏木精的染色性能差，经过一百多年精心加工配制，现用的苏木精配方，染色性能好，保持时间长，是世界上唯一的常规细胞核染料，2．苏木精的配制

苏木精的配方很多，可根据不同需要选用，Harris配方最常用。（1）Harris苏木精的配制 苏木精1g 硫酸铝钾15g 无水乙醇10ml 蒸馏水200ml

先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，用无水乙醇溶解苏木精再倒入已溶解的硫酸铝钾蒸馏水中，煮沸1min后，稍冷却，慢慢加入红色氧化汞0.5g，继续加热至染液变为紫红色，用纱布盖瓶口，用前滤纸过滤后每100ml加冰醋酸5ml。（2）Mayer苏木精改良配法

A液 苏木精2g

无水乙醇40ml

B液

硫酸铝钾100g 蒸馏水600ml

稍加热使硫酸铝钾在水中溶解，将苏木精溶于酒精中，再将A液与B液混合煮沸2min。用蒸馏水补足600ml，加入400mg碘酸钠充分混匀，苏木精染液呈紫红色。（3）Gill改良苏木精染液的配制 苏木精2g

无水乙醇250ml 硫酸铝钾17g 蒸馏水750ml 碘酸钠0.2g 冰醋酸20ml

先将苏木精溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中。两液溶解后将其混合，加入碘酸钠待苏木精氧化成紫红色，再加入冰醋酸。

3．伊红溶液的配制（1）水溶性伊红 伊红Y0.5－1g 蒸馏水100ml

先将水溶性伊红加入蒸馏水中，用玻璃棒将伊红搅起泡沫后过滤，每100ml加冰醋酸1滴。（2）乙醇性伊红液的配制 伊红Y 0.5～1g

90%酒精100ml

先将伊红溶于酒精中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸1滴。用乙醇性伊红液染细胞浆后不可经水洗直接用85%酒精脱水。

4．盐酸酒精分化液的配制 浓盐酸0.5～1ml

75%酒精99ml

此液用一段时间后需要延长或更换液体，新液分化时间要短。

5．染色中注意事项（1）脱蜡 石蜡切片必需经过脱蜡后才能染色，脱蜡前切片要经烘烤，这样使组织与玻璃片粘贴牢固。组织切片脱蜡应彻底，脱蜡好坏主要取决于二甲苯的温度和时间，所有的时间都是指新的二甲苯在室温25℃以下时，如果二甲苯是用过一段时间，切片又比较厚，室温低应增加脱蜡时间，脱蜡不净是影响染色不良的重要原因之一。（2）染色

石蜡切片经水洗后放入Harris苏木精染色，一般情况下在新配的苏木精溶液中只需要染1min左右，应根据染片的多少，逐步把染色时间延长。苏木精染色后，不宜在水中和盐酸酒精停留过长，切片分化程度应在镜下观察，分化过度，应水洗后重新在苏木精中染色，再水洗分化和使切片在自来水或稀氨水中充分变蓝。

新配的伊红染色快，切片染色不宜过长，应根据染切片的多少逐步延长染色时间，切片经伊红染后，水洗时间要短。（3）脱水

切片经过染色后，通过各级酒精脱水，首先从低浓度到高浓度，低浓度酒精对伊红有分化作用，切片经过低浓度时间要短，向高浓度时逐步延长脱水时间；脱水不彻底，使切片发雾，在显微镜下组织结构模糊不清。（4）透明与封片

石蜡组织切片染色经过脱水后必须经二甲苯处理，使切片透明，才能用树胶封片。常用切片封片胶有国产的中性树胶，光学树胶，加拿大树胶和合成树脂（DPX）。在封片时，树胶不能太稀或太稠，不能滴加的太多或太少，太稀或太少切片容易空泡，树胶也不可太多，不要使树胶溢出玻片四周太多。标签要附贴牢固。封片中不能对着切片呼气。（5）常规石蜡切片和HE染色标本的质量标准（全国统一评定标准）①切片完整，厚度4－6um，薄厚均匀，无褶无刀痕。②染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。

第四篇：病理组织的免疫组织化学技术探讨

病理组织的免疫组织化学技术探讨

【摘要】目的：探讨病理组织的免疫组织化学技术。方法：选取2013年1月-2015年1月我院收治的肿瘤患者50例，分别采用活检穿刺和免疫组织化学技术进行检验，比较两种方法的检测阳性率。结果：经穿刺活检，50例患者中AFP、Glypican-3阳性的有32例，阳性率为64.0%，经免疫组织化学技术检验，47例患者的细胞组织呈现变异性，阳性率为94.0%，免疫组织化学技术检验的阳性率明显高于穿刺活检的阳性率，比较差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：病理组织中运用免疫组织化学技术进行诊断具有较高的准确性，将其和病理形态学诊断结合使用可以为患者疾病的诊断和治疗提供有效的依据，值得推广使用。【关键词】病理组织；免疫组织；化学技术

免疫组织化学染色技术是通过抗原和抗体的结合的反应来确定被检测的细胞中是否存在特异性的抗体，从而对疾病进行诊断。将免疫组织化学技术运用到病理组织的诊断中，使我国的病理诊断水平又提高了一个层次，在诊断以及鉴别诊断方面都具有重要的意义[1]。我院以肿瘤患者50例为研究对象，采用免疫组织化学染色技术诊断，取得了满意的效果，现报道如下。1.资料与方法 1.1一般资料

选取2013年1月-2015年1月我院收治的肿瘤患者50例，分别采用活检穿刺和免疫组织化学技术进行检验，比较两种方法的检测阳性率。50例肿瘤患者中，其中女性有20例，男性有30例，年龄（24-61）岁，平均年龄（40.6±1.8）岁；其中转移性肿瘤26例，肝细胞肝癌19例，血管瘤8例，子宫癌13例。1.2方法

活检穿刺：经过CT扫面确认病变位置，嘱咐患者在活检穿刺前5个小时之内禁食，在CT引导下经皮穿刺取得病理标本进行检验。

免疫组织化学技术：取每例患者的一块组织，采用10%的中性缓冲甲醛固定液固定两小时，固定完成后用脱水也脱水1个小时，分别在透明液和浸蜡液中各放置一个小时，然后用石蜡包埋，采用常规的切片方法切片，切片的厚度为2um。将固定好的切片脱蜡，脱蜡后在室温下用3%的双氧水孵育10min，然后用蒸馏水洗涤3次，每次保持3min，之后用高压锅在110度环境下修复2min,用PBS洗液洗涤3次，每次5min，加入一滴一抗，在室温下孵育2个小时，接着用PBS洗液洗涤3次，每次5min，加入UltarsensitiveTM试剂之后在室温下孵育20分钟，再用PBS液洗涤，洗涤之后用DAB显色，采用蒸馏水冲洗，采用苏木素复染1个小时，采用梯度乙醇脱水，使用二甲苯透明，用中性树胶封固，再采用PBS作为阴性对照，染色呈现棕黄色为阳性。1.3统计学分析

两组检验方法的统计方法为：采用 SPSS17.0 统计学软件对数据进行统计分析；计数资料采用χ2检验进行统计学分析，P<0.05 表示差异具有统计学意义。2.结果

50例患者，经穿刺活检，AFP、Glypican-3阳性的有32例，阳性率为64.0%，经免疫组织化学技术检验，47例患者的细胞组织呈现变异性，阳性率为94.0%，免疫组织化学技术检验的阳性率明显高于穿刺活检的阳性率，比较差异具有统计学意义（P<0.05）。3.讨论

免疫组织化学染色是近年来发展起来的一种病理技术，是病理诊断中的一种常见方法，尤其在肿瘤的诊断中具有较高的实际价值。在免疫组织化学染色技术中，抗体是最基本也是最重要的材料，分为第一抗体和第二抗体，第一抗体是针对组织细胞中的靶细胞抗原或者目的抗原的抗体，与靶细胞中的抗原结合，而第二抗体是用来放大反应的，当第一抗体和抗原结合之后，再与第二抗体结合，第二抗体是可见的，方便检验。免疫组织化学显色是一种酶促反应，抗原抗体的复合物的碱性磷酸酶和过氧化物与底物反应，就生产了一种由颜色的复合物，沉淀在组织或者细胞中的抗原位置。免疫组织化学染色主要包括固定、染色、切片、脱色等过程，整个过程的操作虽然比较简单，但是却容易受到外界环境因素的影响，导致病理诊断中出现一定的误诊现象，所以这就要求操作人员在操作过程中应该严格按照标准操作规程进行操作[2]。值得注意的是，在整个染色过程中，切片应该一直保持湿润，在孵育的过程中，孵育盒中的蒸馏水量要合理的放置，孵育盒要放平，保证抗体液体在组织上的均匀性，避免抗体流到组织的一旁造成假阴性的结果。在加抗体的时候，应该选择单克隆的抗体，因为所有组织标本的来源基本不同，抗原的含量不一样，细胞分化程度也是不一样的，所以显色反应的时间也是不一样的[3]。

免疫组织化学技术是一门新兴的技术，还存在着一些不完善的地方，例如在检查瘤细胞的时候，瘤细胞内可能含有多种抗原，而抗体只会对特异性的抗原反应表达，所以很多时候会受到交叉反应的干扰，所以免疫组织化学技术在病理诊断中也具有一定的局限性，但是由于技术人员在操作上的失误导致的误诊是可以避免的。但是不可否认的是，这并不影响免疫组织化学技术的发展。免疫组织化学技术在肿瘤患者的预后中也发挥着非常重要的作用，可以提供很多有效的预后信息[4]。例如，增生细胞核是否呈现阳性以及阳性细胞的多少都可以指示着肿瘤细胞的增长速度，为患者的预后提供依据。而突变型P21、P53的表达的蛋白如果在多种肿瘤过度表达则说明肿瘤细胞的生长速度非常快，并且发生了转移，恶性程度较高。Ⅳ型胶原是基膜中的重要组成成分，完整的基膜更是良性上皮细胞的标志，如果基膜断裂或者消失的话则说明肿瘤已经发展成为了恶性肿瘤[5]。免疫组织化学技术通过观察抗体对特异性抗原的颜色反应来对组织的抗原进行诊断，与传统的病理诊断相比具有优越性。本研究结果显示，50例患者，经穿刺活检，AFP、Glypican-3阳性的有32例，阳性率为64.0%，经免疫组织化学技术检验，47例患者的细胞组织呈现变异性，阳性率为94.0%，免疫组织化学技术检验的阳性率明显高于穿刺活检的阳性率，与穿刺活检相比，免疫组织化学技术在肿瘤诊断中具有优越性，比较差异具有统计学意义（P<0.05）。本研究结果与郭晋关于病理组织的免疫组织化学技术分析的研究报道数据吻合[6]。说明免疫组织化学技术在病理组织中具有重要的诊断意义。

综上所述，在病理组织诊断中运用免疫组织化学技术具有良好的效果，准确性高，在不同类型的肿瘤疾病中也可以比较准确的判断，从而为患者的疾病治疗提供有效的依据，值得临床推广使用。【参考文献】

[1]徐松,李海,陈芳,张阳,陈金珍.免疫组化在肝脏穿刺组织病理诊断中的应用[J].中国实用医刊,2013,40(2):114-115.[2]兰蕾,常小荣,张国山,石佳.艾烟对大鼠病理组织切片和肺HSP.7O及Caspase-9表达的影响[J].中华中医药杂志,2012,27(4):1042-047.[3]何春燕.免疫组化在肝脏穿刺组织病理诊断中的应用研究[J].中国卫生产业,2013,36（51）：3-5.[4]赵亮,戴朝六,彭松林,薛今琦.双重免疫组化染色检测DLKI与PCNA在肝细胞癌组织中的表达及临床意义[J].山东医药,2012,52(20):54-56.[5]]周猜玮,张永乐,李冰茄,黄从想,吴晓星.慢性乙型肝炎患者肝组织免疫组化表达与血清HBVDNA、HBeAg的关系[J].中国卫生检验杂志,2011,2-1(5):207-1208.

第五篇：组织病理技术名解

病理学：病理学是研究疾病发生发展规律的学科，主要的研究范围是疾病发生发展过程中组织、细胞代谢、功能及结构的变化。

取材：组织标本的选择即取材，取材的目的是正确的获取所需要的标本或标本的某一部位。

组织的固定：将各种组织浸入某些化学试剂内，使细胞内的物质能尽量保持其生活状态的形态结构和位置，叫做固定。

Carnoy液：固定胞浆和胞核,对染色体固定佳,显示DNA和RNA效果好.也常用于糖原和尼氏体的固定.不能保存脂质有防止酒精的硬化收缩作用,穿透力强,适用于外膜致密的组织

脱水：某些溶剂置换组织内水分的过程，能够使组织脱水的化学物质称为脱水剂。

透明：组织经酒精脱水后，还必须经过一个媒剂透明过程

浸蜡：经过透明的组织块，进一步移入熔化的石蜡内浸渍，称为浸蜡。用其他浸透剂（火棉胶，碳蜡，明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入

包埋：使用包埋剂将处理过的组织包于其中，使组织达到一定韧度和硬度，有利于切片。

组织芯片：又称组织微列阵，是将数十个、数百个、乃至上千个小的组织片整齐的排列在某一载体上（通常是载波片）而成的微缩组织切片。

石蜡切片：组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程称为石蜡切片法。

HE染色（常规染色）：使用苏木精hematoxlin和伊红eosin染色，主要用以显示各种组织、细胞的一般形态结构以及疾病过程中病变的发生、发展及修复的过程。

封固剂：使染色后的组织封固于载玻片与盖玻片 之间而不与空气直接接触，避免氧化褪色；折光率与玻片的折光率相似。

抗原修复：组织在制作过程中，由于化学试剂的作用封闭了抗原，又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲，致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来，为了解决上述的问题，利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。

抗原修复(Antigen retrieval，AR)技术：是指石蜡、冰冻、火棉胶、塑料切片免疫组织化学（IHC）前用胰蛋白酶、尿素、表面活性剂、微波缓冲液和金属盐等，通过机械的方法断开因福 尔马林固定的导致的抗原表位和不相关蛋白间的交联键，使被掩盖的抗原决定簇或变性的抗原重新暴露或抗原性得到一定程度的恢复，使抗体更好的渗透，与表位结 合。抗原修复能最大程度地恢复在制片等过程中损失的抗原性，使原来认为不能在石蜡切片上进行IHC的许多抗体获得了良好的染色结果，成为一种有效的补救措 施，AR-IHC已广泛应用于临床的研究中。

抗原：刺激机体发生免疫应答产生相应抗体或致敏淋巴细胞并能与之特异性结合的物质。

抗体：受抗原刺激后B淋巴细胞产生的与相应抗原反应的球蛋白

Envision法：EnVision法又称为ELPS法(enhance labeled polymer system)，抗原—抗体反应结合后，第二抗体上标记有多聚化合物(葡聚糖)酶复合物(EnVision复合物)，与第一抗体结合，进而由酶作用底物进行显色定位。EnVision复合物是利用一种多聚化合物将HRP或AKP和第二抗体(抗鼠或抗兔IgG)同时标记在一个多聚化合物上，即形成酶—多聚化合物—第二抗体巨大复合物。

PAP法(Peroxidase-Antiperoxidase Method)：

一抗 + 二抗 + PAP复合物（HRP + 抗HRP抗体[与一抗统一种属]）+ HRP底物显色

LAB法(Labelled Avidin-Biotin Method)：

一抗 + 生物素标记二抗 + HRP标记抗生物素 + HRP底物显色

SP法(Streptavidin-Peroxidase Methed)：

一抗 + 生物素标记二抗 + HRP标记链霉亲和素 + HRP底物显色

ABC法(Avidin-Biotin-peroxidase Complex Method)：

一抗 + 生物素标记二抗 + ABC复合物（抗生物素 + HRP标记生物素）+ HRP底物显色

SABC法(Streptavidin-Biotin-peroxidase Complex Methed)：

一抗 + 生物素标记二抗 + SABC复合物（链霉亲和素+ HRP标记生物素）+ HRP底物显色

非特异性染色non-specific staining：染色过程中出现的不属于特异性抗原抗体反应的着色（假阳性，背景着色）。

衬染（复染）：免疫组化染色后加用其他染料复染，衬托组织形态结构，使形态与功能密切相关，利于结果分析。

阳性对照 positive control

用已知抗原阳性的标本与待检测标本同时免疫组化染色，结果阳性者。

阴性对照 negative control 用确认不含已知抗原的标本作对照，免疫组化染色结果阴性者。阴性对照还有

空白对照，替代对照，吸收对照，抑制实验等

自身对照：在同一标本切片上，靶抗原的阳性反应与其他无关结构或成分的阴性结果形成鲜明对照。

空白或替代对照：以缓冲液（如PBS）或与第一抗体同源的正常动物血清取代第一抗体，结果应为阴性。

吸收对照：用相应的纯化抗原（过量）中和吸收特异性第一抗体，使其结合点全部被外源性抗原结合，不能再与组织内的靶抗原反应，用这种吸收后的第一抗体作免疫组化染色，结果应为阴性。

抑制实验：待检标本因与未标记的特异性抗体反应而影响了与标记的特异性抗体结合，使染色结果明显减弱或转阴。

热修复：消除甲醛固定形成的蛋白分子的交联（共价键分子引力），削弱或打断钙离子化学键，恢复抗原分子的自然构象和抗原性。