食品微生物教学实习报告

第一篇：食品微生物教学实习报告

食品微生物教学实习报告

一、大肠菌群检验的准备工作

1、设备和材料

冰箱（2℃~5℃）、生化培养箱（37℃，24~48h）、手提式高压蒸汽锅、干燥箱（160 ℃，1~2h）、天平（感量0.1g）、无菌吸管（1ml、10ml或微量移液器及吸头）、无菌锥形瓶、无菌培养皿

2、培养基和试剂

月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）：称取7.12g溶解于100ml蒸馏水中，分装到有玻璃小倒管的6支试管，每管10ml；再将剩下的稀释一倍，分装到有玻璃小倒管的3支试管，每管10ml；121℃高压灭菌15min。

煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）：称取4g溶解于100ml蒸馏水中，分装到有玻璃小倒管的9支试管，每管10ml；121℃高压灭菌15min。

伊红美兰营养琼脂：称取10g溶解于200ml蒸馏水中，装于无菌锥形瓶中，121℃高压灭菌15min。

葡萄糖发酵管：称取2.5g溶解于100ml蒸馏水中，分装到有玻璃小倒管的20支试管，每管5ml；121℃高压灭菌15min。

革兰氏染液：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、95%乙醇、沙黄水溶液

无菌生理盐水：称取4.5g溶解于500ml蒸馏水中，装到500ml的玻璃瓶中；121℃高压灭菌15min。

二、培养物的灭菌处理

1在夹层锅中加水没过电热管

2将待灭菌的培养基装入内筒，注意不要过紧，以免影响蒸汽的流通和灭菌效果。3将内筒放置在锅内的搁架上。将排气阀下面的蛇形管插入内筒内壁的半圆管中，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。

4将高压锅置于热源之上（电炉、煤火炉均可，如自带加热炉丝的，可直接接通电源）加热，待压力表指针达到0.05MPa时，打开排气阀，待指针回零，并且排净空气后，关闭排气阀，使压力上升，达到0.1MPa时，维持25~30min（根据需要控制温度时间，一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min），关闭热源，待指针回零后，打开排气阀排气（注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外），再将高压锅盖打开，利用锅内的余热烘干包装纸。灭菌后的培养基空白培养。

5灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，经24h培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。

6培养过细菌的试管和培养皿可先行集中，用1kg/cm2高压灭菌15～30分钟，再用热水洗涤后，用肥皂洗刷，流水冲洗。

三、无菌操作

（一）操作前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭。

1、玻璃器皿的消毒和清洁

⑴新购玻璃器皿的处理新购玻璃器皿应用热肥皂水洗刷，流水冲洗，再用1%～2%盐酸溶液浸泡，以除去游离碱，再用水冲洗。对容量较大的器皿如试剂瓶、烧瓶或量具等，经清水洗净后应注入浓盐酸少许，慢慢转动，使盐酸布满容器内壁数分钟后倾出盐酸，再用水冲洗。

⑵污染玻璃器皿的处理

①一般试管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%石炭酸浸泡，再煮沸30分钟，或在3%～5%漂白粉澄清液内4小时，有的亦可用肥皂或合成洗涤剂洗刷使尽量产生泡沫，然后用清水冲洗至无肥皂为止。最后用少量蒸馏水冲洗。

②细菌培养用的试管和培养皿可先行集中，用1kg/cm2高压灭菌15～30分钟，再用热水洗涤后，用肥皂洗刷，流水冲洗。

③吸管使用后应集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小时，逐支用流水反复冲洗，再用蒸馏水冲洗。

④油蜡沾污的器皿，应单独灭菌洗涤，先将沾有油污的物质弃去，倒置于吸水纸上，100℃烘干半小时，再用碱水煮沸，肥皂洗涤，流水冲洗。必要时可用二甲苯或汽油去油污。

⑤染料沾污的器皿，可先用水冲洗，后用清洁或稀盐酸洗脱染料，再用清水冲洗。一般染色剂呈碱性，所以不宜用肥皂的碱水洗涤。

⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡，取出后流水冲洗，再用肥皂或弱碱性煮沸，自然冷却后，流水冲洗。被结核杆菌污染或不易洗净的玻片，可置于清洁液内浸泡后再冲洗。

2、无菌器材和液体的准备将玻璃器具中的培养皿、培养瓶、试管、吸管等按上述方法洗净烘干后，用一洁净纸包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，装入干净的铝盒或铁盒中，于120℃的干燥箱中干燥灭菌2小时，取出备用。对于手术器械、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液，则采用高压蒸气灭菌法，即在15磅的条件下，加热20分钟。而对于MEM培养液、小牛血清和消化液等需用G5或G6滤器负压抽滤后使用。

（二）操作过程中是界面与外界隔离,避免微生物的侵入。

无菌操作过程在无菌操作过程中，最重要的是要保持工作区的无菌、清洁。因此，在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，并认真洗手和消毒。在操作时，严禁喧哗，严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的止血钳、镊子等。培养瓶应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。对于吸管应先用手拿后1/3处，戴上胶皮乳头，并用酒精灯烧烤之后再吸液体。此外接种过程无菌操作应注意先用75%酒精擦手，手干后点燃酒精灯；接种过程不离开酒精灯火焰；接种环在接种前后要用火焰灼烧；所有使用器具经过严格灭菌并不准乱，尤其是棉塞等；接种用的培养基事先应做无菌培养试验（37℃24～48h）

四、生化培养箱和超净工作台的使用

生化培养箱的使用：

1、打开箱门，将待处理物件放入箱内搁板上，关上箱门。

2、接通电源，将三芯插头插入电源插座，将面板上的电源开关置于“开”的位置，此时仪表出现数字显示，表示设备进入工作状态。

3、通过操作控制面板上的温度控制器，设定您所须要的箱内温度

当设定温度大于环境温度5℃以上，请将制冷转换开关置于“RT+5℃”。（温度控制器详细操作说明见后页。）

4、仪器开始工作，箱内温度逐渐达到设定值，经过所需的处理时间后，处理工作完成。

5、关闭电源，待箱内温度接近环境温度后，打开箱门，取出物件

超净工作台使用：

1、使用前的检查

（1）接通超净工作台的电源；

（2）旋开风机开关，使风机开始正常运转，这时应检查高效过滤器出风面是否有风送出；

（3）检查照明及紫外设备能否正常运行，如不能正常运行则通知工程部检修；

（4）工作前必须对工作台周围环境及空气进行超净处理，认真进行清洁工作，并采用紫外线灭菌法进行灭菌处理；

（5）净化工作区内严禁存放不必要的物品，以保持洁净气流流动不受干扰。

2、使用

（1）使用工作台时，先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒；

（2）接通电源，提前50分钟打开紫外灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面积累的微生物，30分钟后，关闭紫外灯，开启送风机；

（3）工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流不受干扰；

（4）操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，关闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒；

（5）最后开启工作台紫外灯，照射消毒30分钟后，关闭紫外灯，切断电源；

（6）每二月用风速计测量一次工作区平均风速，如发现不符合技术标准，应调节调压器手柄，改变风机输入电压，使工作台处于最佳状况；

（7）每月进行一次维护检查，并填写维护记录。

3、清洁

（1）每次使用完毕，立即清洁仪器，悬挂标识，并填写仪器使用记录；

（2）取样结束后，先用毛刷刷去洁净工作区的杂物和浮尘；

（3）用细软布擦拭工作台表面污迹、污垢目测无清洁剂残留，用清洁布擦干；

（4）要经常用纱布沾上酒精将紫外线杀菌灯表面擦干净，保持表面清洁，否则会影响杀菌能力；

（5）效果评价:设备内外表面应该光亮整洁，没有污迹。

第二篇：微生物实习报告

林业与生物技术学院

实习报告

学生姓名：娄钧翼学号：201001220327专业名称：生物科学—微生物班级：生物科学102班指导教师：张昕

2012-6-26

一、实习目的意义

1、通过实习过程掌握酸奶中乳酸细菌的分离纯化

2、土壤中自生固N菌分离、纯化、生长曲线测定 ：通过实习过程，掌握土壤中微生物的分离、纯化和生长曲线测定的技术；

3、参观临安青山污水处理厂：参观污水处理厂，了解其运行模式，以及在污水处理过程中微生物发挥的作用和技术；

4、参观富阳海正药业有限公司：了解一个大公司大企业的运行情况，以及专业方面的一些技术和应用。

二、实习地概况

1、第一个和第二个实验是在学校学六实验室完成的；

2、第三个实验：临安市青山污水处理有限公司成立于2002年3月21日，于2004年5月1日投入试运行，是一个集污水收集、处理于一体的公益事业企业。公司坐落于浙江省临安市青山湖街道研口村发达畈，占地66亩，近期投资8082万元，建成处理能力2万吨/日，收集管网42公里，工艺采用MSBR法，具有脱氨除磷功能的污水处理设施。公司坚持内抓管理强素质，外创先进塑形象，通过规范化、制度化、精细化、科学化的管理来不断提高污水处理水平，努力提升科学管理层次，切实增强企业核心竞争力。公司设备、工艺先进，技术力量雄厚，现有职工21人，其中技术人员15人。公司先后通过了ISO9000和ISO14000质量环境管理体系认证及清洁生产认证。同时被评为浙江省公众满意单位杭州市环境保护模范企业、临安市花园式工厂、临安市安全声场先进单位、临安市卫生先进单位、临安市绿色企业等荣誉称号。

3、第四个实验：占地16000平方米，累计投资超过2.6亿元，设有60多个单元实验室，集小试、中试与研发支持为一体。始创于1956年的浙江海正药业股份有限公司秉承“执著药物创新，成就健康梦想”的使命和“成为广受尊重的全球化制药企业”的愿景，致力于整合药物研发与生产资源，为全球客户提供更好的产品和服务，通过美国FDA、欧盟EDQM、澳大利亚TGA、韩国KFDA等官方认证的品种达到40多个，销往全球30多个国家和地区。

2009年，公司荣获“全国五一劳动奖状”，海正、HISUN及图形被认定为“中国驰名商标”，入选“中国万种微生物基因组计划”和“国家重大（磅）级药物品种产业化技术创新联盟”。因圆满完成“抗甲流药物中间体生产”的国家任务，受到省政府的通令嘉奖。

2010年，公司入选浙江省医药工业“十强企业”，并荣获“国内最佳产品线十佳工业企业” 称

号，同时被誉为“金蜜蜂奖成长型企业”。

我们主要参观了海正药业在富阳的分公司。

三、材料方法

1、材料：乳酸细菌培养基、酸奶

原理：当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会是PH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于PH

值降低，再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基

上生长。因此十分容易鉴别乳酸菌。

方法 ：1.1(6月7日)配备乳酸细菌培养基(蛋白胨10.0G,牛肉膏10.0G,酵母膏5.0G,柠檬酸氢二铵2.0G,葡萄糖20.0G,吐温801.0ML,乙酸钠5.0G,磷酸氢二钾2.0G,硫酸镁0.58G,硫酸锰0.25G,琼脂18.0G,蒸馏水1000ML,PH 6.2—6.6)

1.2(6月7日)培养基灭菌

1.3(6月8日)用灭菌后冷却至50摄示度左右的培养基到成平板

1.4(6月8日)用灭菌过的接种环挑取酸奶在平板上划线纯化培养4天左右

1.5(6月12日)挑取平板上菌落制成临时装片观察

2、材料：阿须贝无氮培养基、土壤

方法：2.1(6月12日)配备阿须贝无氮培养基(葡萄糖10.0G, 磷酸氢二钾0.2G, 硫酸

镁0.2G,氯化钠0.2G,CaSO4’2H2O;0.1G,碳酸钙5G,琼脂18G,蒸馏水

1000ML,PH7.2)阿须贝无氮培养液(葡萄糖10.0G, 磷酸氢二钾0.2G, 硫酸镁

0.2G,氯化钠0.2G,CaSO4’2H2O;0.1G,碳酸钙5G,蒸馏水1000ML,PH7.2)

2.2(6月12日)培养基,培养液灭菌

2.3(6月12日)用灭菌后冷却至50摄示度左右的阿须贝无氮培养基到成平板

2.4(6月12日)用灭菌过的镊子将黄豆大小的菜园土埋入已冷凝的平板培养基上

2.5(6月12日)正面放置28度培养4天

2.6(6月18日)用灭菌过的接种环挑取菌苔在新的阿须贝平板上划线纯化32度

培养

2.7(6月20日)单菌落接入液体培养基中于12.24.36.48H后测吸光值.制备生长

曲线

四、结果分析

1.平板上有一个个单菌落.在显微镜下观察单菌落就只有一种乳酸菌.酸奶中有保加利亚乳 菌与嗜热链球菌二种.2.五、实习感受

通过此次实习，我学到了很多课堂上学不到的东西：亲自动手配培养基，分离、纯化菌类，学会使用分光光度计制作生长曲线，同时参观了一些与微生物紧密相连的公司，了解其运行模式、实践技术和应用。这让我清楚地感到了自己肩上的重任，看清了自己的人生方向，也让我认识到了科研工作应支持仔细认真的工作态度，要有一种平和的心态和不耻下问的精神，不管遇到什么事都要去思考，多听别人的建议，不要太过急燥，要对自己所做的事去负责，不要轻易地去承诺，承诺了就要努力去兑现。实习也培养了我的实际动手能力，增加了实际的操作经验，对实际的科研工作的有了一个新的开始，更好地为我们今后的工作积累经验。

我知道科研工作是一项需要热情的事业，并且要持之以恒的精神和吃苦耐劳的品质。我觉得重要的是在这段实习期间里，我第一次真正地接触了实验，在实践中了解了一些科研技术，并且在此期间，我参观了一些公司，也与社会有所接触。利用这次难得的机会，也打开了视野，增长了见识，为我们以后进一步走向社会打下坚实的基础。

实习期间，我从末出现无故缺勤。我认真听取老师的指导，对于别人提出的实验建议虚心听取，并能够仔细观察、切身体验、独立思考、综合分析，并努力把学到的知道应用到实际实验操作中去，尽力做到理论和实际相结合的最佳状态，培养了我的耐心和素质。

为期两个多星期的实习结束了，我在两个多星期的实习中学到了很多在课堂上根本就学不到的知识，受益匪浅。回想自己在这期间的实习情况，也有不足之处。对此我思考过，学习经验自然是一个因素，然而更重要的是心态的转变没有做到位，有些实验步骤还是停留在应付的层面上。现在发现了这个不足之处，应该还算是及时吧，因为我明白了何谓工作何谓实际。在接下来的日子里，我会朝这个方向努力，在实验操作方面我会更加谨慎。

本次实习是我第一次亲身感受了所学知识与实际的应用，理论与实际的相结合，让我们大开 眼界，也算是对以前所学知识的一个初审吧!这次实习对于我们以后学习、找工作也真是受益匪浅。我会把这此实习作为我人生的起点，在以后的工作学习中不断要求自己，完善自己，让自己做的更好。

第三篇：食品微生物学习心得

学习心得

随着科技发展和人们生活水平的提高，食品安全和卫生已成为人们关注的焦点。“食品微生物检验”是衡量食品卫生的重要指标之一，也是判断被检食品能否食用的科学依据之一，对食品的质量与安全起着监督、预防、评价等作用。通过食品微生物检验可以判断企业中食品加工环境、食品卫生环境的优劣，能够对食品被微生物污染的程度做出正确的评价。食品微生物是一项实践性和应用性很强的学科，在实际生产生活中，微生物与食品的储藏、运输、加工、制造过程紧密相连。一方面是利用有益微生物的作用制造发酵食品；另一方面是防止有害微生物污染食品，保证食品安全。

本次为期18天的食品微生物检验学习，使我的专业理论知识与实际检验水平都得到了全面的启发与提高，借此机会要感谢公司领导对我的信任与大力支持！

此次学习分为二个阶段，一是理论学习阶段，2015年10月25日-11月4日于自治区质监局培训中心学习微生物检测技术理论知识。二是实习阶段，11月5日-11月13日于自治区质监局检测中心微生物检验室检验食品中的常规菌与致病菌。

一、理论学习。

1、食品卫生学的意义；食品中菌落总数；大肠菌群；金黄色葡萄球菌；志贺氏菌；沙门氏菌；单核细胞增生李斯特菌；霉菌，酵母菌等常见致病微生物的鉴别、分型与检测技术；食源性微生物的分类与分布；食品内外环境因素与微生物生长的关系；食品传播性微生物的致病性与感染；食品腐败的鉴评、监控；细菌的能量代谢、分解代谢、合成代谢等。使我们掌握了更多食品微生物的基本原理、新的检测技能和方法以及食品质量的控制等。可使我们今后的工作更加精益求精，也为致病菌的检验奠定了坚实的基础。

2、解读了新《食品安全法》，食品安全关系到社会稳定，关系到百姓健康，新《食品安全法》的正式实施，对食品企业提出了更高的要求，食品标准也从卫生方面上升到安全层面，确保了对公众身体健康和生命安全。食品企业是食品安全的重要环节，食品企业的微生物安全是关乎到千万百姓的生命健康。因此，要求我们检验员要有较高素质，不但应具有很好的技术能力，还要有实事求是的科学态度和良好的职业道德。

3、授课老师思路清晰，突出重点，善于引导学生思考，使我们更加深入的了解了各种食品中的各种微生物和丰富的微观世界。通过幻灯片向我们展示了随处可见的食品都与哪些微生物有关及腐败食品因微生物污染引起的食物中毒实例与数据。通过鲜明的图片与生动的讲解，使我们了解了食品微生物的重要性，在感慨微生物的强大作用之余，深切的体会到了食品企业不仅要生产出好的食品，更要生产出更好、更优质的食品。

二、实习阶段。

1、学习了更加严格的无菌操作技术、杀菌技术；完成了送检食品及抽检食品中各种细菌的分离纯化培养、分型与鉴定；微生物观察及分析；学习了菌种保藏与遗传育种技术；完成了各种细菌培养基的配制。

2、借鉴了各种试剂的配制、使用记录；各种仪器设备的操作使用记录；实验室与操作器具的消毒记录等，以完善我单位的各项记录。可参考致病菌的初筛可用快速检测试纸片及初步证实实验同步进行；对于已被证实的菌种可使用VITEK或PCR技术与下一步的生化实验同步进行。很大程度上提高了检出效率及准确率。

3、了解了实验前后的有效处理。前处理：玻化器皿的洗涤可使用超声波清洗机；洗涤后的试管摆放可使用高压筐层层堆叠，然后立起的方式；分装液体可使用分液器；实验过程中可实验移液枪；锥形瓶塞可使用橡皮筋封口等，从而可极大提高工作效率。对于培养基要求115℃灭菌的，需提前将试管于121℃高压锅内灭菌，以保证管内细菌完全灭活。后处理：必须将已发酵或者已长菌的容器用独立高压菌锅灭菌后才可洗涤。加强防范意识，保护自身安全。

4、经过证实，我单位曾一直使用的大肠菌群检测方法有误：1）没有证实实验。我单位大肠菌群的检测一直采用的是GB 4789.3-2010的检验方法，LST初发酵后便查MPN表报出检出值，违背了大肠菌群的国标检验三步法的规定（初发酵、复发酵和证实实验）。规定中第一步LST发酵实验是样品的发酵结果，不是纯菌发酵实验，所以初发酵阳性管经过后两步有可能成为阴性。大量检验数据证明，食品中大肠菌群检验程序的符合率、初发酵与证实实验相差很大，不同食品三步法的符合情况也不一致。只做一步初发酵，误差是比较大的，这样会有相当部分的合格样品被作为不合格样品处理。我单位必须加以重视，避免经济损失。2）套用的国家标准有误。根据我单位产品的微生物技术检测要求，应采取GB 4789.3-2003的检测方法。初发酵：将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内。分离培养：将产气的发酵管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，培养后观察菌落形态。证实实验：在伊红美蓝琼脂平板上挑取可疑大肠菌群于乳糖发酵管继续培养并观察产气情况，同时做革兰氏染色证实；查MPN表，报出检出值。

此次学习与实习虽然时间较短，但内容丰富、涉及面广，理论与实践相结合，可谓受益匪浅、收获良多，不仅丰富了知识、增长了见识，而且开阔了眼界、拓宽了思路，这些对我今后的工作和学习必将起到积极而长远的影响。在今后的工作中，我将不断学习、积累经验、克服不足，脚踏实地、尽职尽责的做好各项工作。不断提高自身素质和业务能力，提升工作的主动性和创造性，以饱满的热情、扎实的作风投入到工作学习当中去，为公司贡献自己的一份光和热。

品管部：孔香 2015年11月19日

第四篇：食品微生物心得体会

心得体会

本次为期一周的实验课，让我更加深入的了解了酸乳中的各种微生物和丰富的微生物的世界。正如我们所知，微生物也有着不同的特征和生活方式，对人类的生活产生着或好或坏的影响。只有当我们能真正的了解这些微生物之后，我们才可以更好地与它们和谐共处。

这次酸乳中微生物检验实验给予了我许许多多的锻炼，从最开始实验课题的选取，实验材料的寻找，小组分工协作完成实验，到最后实验报告的完善，一切都是我们小组共同努力的结果，所以说这次大型实验给我们带来的益处是无法估量的。

当然在这次实验也暴露出了我们很多的问题。实验前我们准备的资料不充分，导致了我们实验开始时就手忙脚乱，实验用的原料比例我们都没能很好的把握。不过随后经过我们的不懈努力，最终还是比较圆满的完成了任务。实验中我们先对培养基进行了制备，后来我们计量了菌落的总数并加以分析辨别。并对主要的菌种大肠杆菌、霉菌、酵母菌、致病菌，乳酸菌等进行了测定和研究。本次实验我们忙中有乐，十分的开心。

这次实验还增强了我们小组之间配合的默契程度，我们小组分工合作，有条不紊，通过大家共同的努力，我们的实验完成的很快。而且也使我们每个人的动手能力的都得到了较好的锻炼。实验中其他组做的实验也给予了我们很大的帮助，我们在思路比较阻塞的时候，大家相互帮助，给了我们很多恳切实用的建议。并且在不懂的地方老师也耐心细致的给予了我们指导，使我们受益匪浅。这段实验时光让我觉得大家就是一个完美的大家庭，很好的团结在了一起。可以说这次实验不光对于我自己，对于我们整个班级都是一个很好的契机。让我感觉我们的大家庭变得更加融合，更有凝聚力了。

总的来说我们这次实验是比较成功的，但是我们在实验中也存在着很多错误并且也走了不少弯路。这给我们的警示是，在科研过程中要秉着严谨认真的态度，在实验前做好周密的计划，预想到各种状况，避免错误的出现。这样才能更好完美的完成各自的任务。

对于这次实验我有一些建议，我觉得实验中应该进行多种产品的对比和比较，在进行活性检验时应当设置空白对照。这样实验会更加严谨，我们分析的数据也会更准确，而且我觉得还可以放映一些相关的影视资料，让我们更加深入的了解现代食品行业并根据现阶段的发展情况确定实验的主流方向，使实验更接近现实工业生产。我觉得通过这些我们会更有针对性的完成实验，并且有可能发现不同的问题，并给出比较合理的处理手段和实现方式。

最后我还是很感谢这次实验，因为我们获得了这样一次机会，一个可以证明自己能力的机会。我们相信我们能行，相信自己会把实验任务完成的很出色。我希望这样的实验能不断开展下去，让更多的同学了解微生物，了解我们丰富多彩的食品世界。

第五篇：兽医微生物实习报告

一．实习目的为了使学生能够理论联系实际，通过亲自实地解剖感染小鼠，对小鼠的心、肝、脾进行麦康凯琼脂平板划线培养，以柯赫法则为这次实习的主线，达到鉴定出小鼠感染的菌种的目的，熟练运用微生物实验课的所涉及的实验操作和方法，提高实验动手能力，分析实验过程中可能出现的问题，并解决问题。特开设微生物教学实习，掌握基本技能，加深理论部分的理解，能够独立诊断出传染病病菌，获得严谨的科学实验素养。

二．实习材料

实验动物：一只被感染小鼠，一只健康小鼠

实验器械，主要包括：小鼠解剖工具手术剪、镊子、蜡盘、钉子，接种棒、酒精灯、打火机、记号笔、手套、载玻片、枪头、注射器、离心管。

实验材料：麦康凯琼脂平板、各种染色液（结晶紫溶液、碘溶液、酒精、沙黄水）、蒸馏水、培养基（普通肉汤培养基、蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、固体培养基）、PBS重悬液、生化试验材料（微量发酵管（葡、乳、枸、尿素、麦、甘醇、蔗、硫）、对二甲基氨基苯甲醛、乙醚、甲基红、vp甲乙液）。

实验主要仪器：离心机，分光光度器，温箱，摇床，超净工作台

三．实习内容

以柯赫法则为主线，通过对感染小鼠的剖解采样、分离培养、镜检、扩增培养，然后把得到的纯培养物对健康小鼠进行再次接种以获得被感染小鼠，再次重复以上操作，把获得的纯培养物通过镜检观察和做生化实验来鉴定出感染小鼠的致病菌。

四．实习操作进程

第一天：实验设计、讨论症状、分离剖解实验设计：以小组为单位进行实验设计，明确此次实验主要法则是：柯赫法则。在老师的指导下确定此次实习的主要步骤，讨论实验中可能遇到的问题以及注意事项。讨论症状：比较观察健康小鼠与病鼠，可见到病鼠一般呈萎靡状，不活跃。每组领取一只感染小鼠观察症状，体表基本正常。分离剖解：先将麦康凯琼脂平板分三区，依次写上肝、脾、心。右手抓起小鼠尾巴，将小鼠摇晕，采用颈椎脱臼法将小鼠处死。将小鼠尸体仰卧固定于蜡盘上，充分露出胸腹部。先用小鼠腹部柔软部用剪刀剪一小口，然后从该小口处往上、往下剪将皮毛剥离，剥离腹膜暴露出肝脏和脾，可观察到有轻微的肝肿胀，颜色变淡。将肝和脾切开一小口，用接种环取样，在麦康凯琼脂平板的相应区域进行划线分离。再打开胸腔观察，可见胸腔有出血现象和凝血块，剪开心包膜，将心脏切一小口，用接种环取样，在麦康凯琼脂平板的相应区域进行划线分离。写上班级组别，日期，置于温箱中培养至第二天早上8点。

第二天：挑取单菌落，镜检，扩增培养，重悬，测OD配浓度，小鼠腹腔注射挑取单菌落：观察麦康凯琼脂平板上菌落的形态为圆形，边缘整齐，表面光滑，暗红色，圆心处颜色较边缘浅。挑去单个菌落，画上记号准备做后续试验。镜检：选取所挑选菌落的一半进行抹片。取干净玻片，滴半滴去离子水，用接种环挑取菌进行抹片、干燥固定、采用格兰染色法染色：草酸铵结晶紫染色1-2’，水洗，革兰氏碘液媒染1-2’，水洗，95%酒精脱色约30’’-1’，水洗，沙黄水溶液复染10 ’ ’-30 ’ ’，水洗。吸干，镜检。观察到该菌被染成红色，是格兰阴性菌。扩增培养：选取剩余的菌接种到肉汤培养基中，置于温箱培养9个小时至菌的生长对数期。4 重悬测OD值配浓度：下午5点左右，将培养的菌转入无菌小管中离心，离心后可见菌沉

于管底，在超净工作台内操作，去上清液，用枪头吸取PBS液至去了上清液的菌管中，反复吹打使其重悬，然后再次离心，去上清，重悬，通过分光光度计测得OD590的值，配成2*10^7CFU浓度的菌液。小鼠腹腔注射：每组挑选一只健康小鼠，在头部或尾部做上记号，用右手抓住鼠尾，将其摇晕，令其前爪抓住铁丝盖上，然后用左手的拇指和食指捏住小鼠头颈部皮肤，并翻转左后使其腹部朝上，将其尾巴夹在左手掌与小指之间，右手把持注射器吸取2mL菌液，在股后侧面插入针头，先刺入皮下，后进入腹腔，注射时阻力，皮肤也无泡隆起。注射完将小鼠放回鼠笼即可。

第三天：观察小鼠发病情况

小组成员分时间段观察小鼠感染情况，见小鼠濒死的尽快解剖接种分离致病菌。若 一整天未见小鼠有异常情况的等第二天解剖

第四天：剖解划线培养

虽然小鼠未见萎靡，由于预订的感染时间差不多，可以进行解剖接种第一天的操作，可见体表有淤血点，剖开的小鼠肝脏流出大量的血液。其余均同第一天的操作，将麦康凯琼脂平板的上所接的菌置于温箱中培养。

第五天：生化鉴定

观察到平板上只有一个较小的暗红色菌落，挑取该菌落进行扩增培养9小时至细菌生长的对数期。下午6点观察，培养液依旧是澄清的，很可能没有长菌。为做进一步的验证，进行生化试验。将该菌接入微量发酵管（）和蛋白胨以及葡萄糖蛋白胨中，培养至第二天看结果。

第六天：观察结果，整理报告

生化试验无任何反应，说明接的菌为杂菌或污物，整理实验报告并分析失败原因。

六．实验结果与分析

此次试验失败

给小鼠攻毒，未能分离出致病菌，因此也无法鉴定出小鼠被感染的病原菌为何种肠杆菌科

试验失败原因可能有：

1、接种棒火焰消毒后，等待冷却的时间过短，接种棒接种菌时将菌烫死

2、由于小鼠的免疫力强，使得感染小鼠的病原菌被免疫掉了，因此未接种到治病菌

3.给小鼠注射的量或浓度还不够未能达到使小鼠感染的目的4、在第一次从小鼠体内分离出来的菌可能不是致病菌，或者麦康凯琼脂平板上培养出来的 菌落不止一种，而我们挑选到的某一菌落恰好不是致病菌。

5、在进行腹腔注射时，可能没有注射到腹腔，而只注射到皮下，或者其它部位。

6、采样时可能由于接种环未完全伸入到心、肝、脾的组织中，或者伸到的组织里 恰好没有致病菌

7、可能由于小鼠感染的时间过短，还未达到菌生长曲线的高峰期

七．思考与总结此次试验失败的原因有很多在我看来最有可能的原因有以下几点：

（1）小鼠免疫:由于这些小鼠是实验室的小鼠，长期被用来做各种致病菌的实验，使得它们获得一定的免疫，所以虽然注射了足够使小鼠感染发病的剂量，但也被小鼠免疫掉了，而无法从小鼠体内获得病料。

（2）病料不够：从学姐那了解到，她们做攻毒实验的动物，都是将整个组织块磨碎以后，再接到培养基上，而我们做实验是只是用接种棒挑取一点，接种棒上粘到的病料比较少或根本没有，因此培养不出菌。

（3）挑取的单菌落未必是致病菌：由于平板上长出可能不止一种菌，因此挑到的单菌落，未必是致病菌。

2为什么扩增出来的菌不直接注射小鼠，而要经过离心？

因为菌可能会产生毒素，若直接注射可能就无法判断使小鼠发病的到底是毒素作用，还是因为病菌在小鼠体内繁殖感染而造成的。肠杆菌科有哪些，特征有哪些？

学生自我鉴定：

2011年5月16号到21号期间进行了维持一周的微生物实习，在微生物实习期间，我能够做到主动和小组成员交流、合作、解决问题，认真完成实验操作，学会灵活运用自己的专业知识解决问题。

通过这段时期的实习，我们对无菌操作有了进一步的理解，掌握了仪器操作的基本技能，巩固了理论部分的知识，也了解到公共卫生意识的重要性。

实习不过短短的五天，在这短暂的五天内，我们有过发现时的喜悦，有过解剖小鼠时的紧张，有过培养不出菌时的困惑，但最终我们收获了知识，也收获了友谊，在合作中共同进步，在困难中共同进退，一切的困难便能迎刃而解。

这次微生物实习为我们专业的继续拓展提供了宝贵的经验，为动物医学本科专业的我们学习后续课程奠定扎实的基础。