第一篇：尿酸测定试剂注册技术审查指导原则
附件3 尿酸测定试剂注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导技术审评部门对尿酸测定试剂的技术审评工作，同时也为注册申请人注册申报资料的准备及撰写提供参考。
本指导原则是对尿酸测定试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围 本指导原则所指尿酸测定试剂是指基于比色法的原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆、尿液中的尿酸进行体外定量分析的试剂。
本指导原则仅适用于测定尿酸含量的尿酸酶过氧化物酶偶联法（不含干化学法）测定。
依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号）,尿酸测定试剂管理类别为Ⅱ类，分类编码为6840。
二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。相关描述应至少包含如下内容：
1.产品预期用途及辅助诊断的临床适应症背景情况 1.1尿酸的生物学特征、结构与功能、在体内正常和病理状态下的代谢途径和存在形式。
尿酸（Uric Acid，UA）是嘌呤碱基代谢产物，既可以来自体内，也可以来自食物中嘌呤的分解代谢，主要在肝脏中生成，小部分尿酸可经肝脏随胆汁排泄，其余大部分均从肾脏排泄；
UA可自由滤过肾小球，也可经肾小管排泄。原尿中90%UA被肾小管重吸收。
1.2与预期用途相关的临床适应症背景情况，如临床相关疾病的发生、实验室诊断方法等。
尿酸的测定临床上主要用于高尿酸血症的辅助诊断。
注：若注册申报产品声称临床意义超出此内容范围，应提供相关文献或临床研究依据。
目前尿酸含量的测定方法主要有磷钨酸（PTA）法、尿酸酶法和高效液相色谱（HPLC）法等。酶法可分为紫外直接测定法和酶偶联法。
2.产品描述 包括产品所采用的技术原理、主要原材料的来源、质量控制及制备方法、主要生产工艺过程及关键控制点，质控品、校准品的制备方法及溯源情况。
3.有关生物安全性方面的说明 如果体外诊断试剂中的主要原材料采用各种动物、病原体、人源的组织和体液等生物材料经处理或添加某些物质制备而成，为保证产品在运输、使用过程中对使用者和环境的安全，研究者应提供上述原材料有关生物安全性的说明。
4.有关产品主要研究结果的总结和评价 5.参考文献 6.其他 包括同类产品在国内外批准上市的情况，相关产品所采用的技术方法及临床应用情况，申请注册产品与国内外同类产品的异同等。
（二）主要原材料的研究资料（如需提供）主要原材料的选择、制备、质量标准及实验验证研究资料；
质控品（如产品包含）、校准品（如产品包含）的原料选择、制备、定值过程及试验资料；
校准品的溯源性文件，包括具体溯源链、实验方法、数据及统计分析等详细资料。
（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供）产品的主要生产工艺可以用流程图表示，明确关键工序和特殊工序，并简单说明控制方法。确定反应温度、时间、缓冲体系等的研究资料、确定样本和试剂（盒）组分加样量的研究资料。不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述。
（四）分析性能评估资料 申请人应提交生产者在产品研制阶段对三批试剂（盒）进行的所有性能验证的研究资料，对于每项分析性能的评价都应包括具体研究目的、试验设计、研究方法、试验数据、统计方法、可接受标准、研究结论等详细资料。性能评估时应将试剂和所选用的校准品、质控品作为一个整体进行评价，评估整个系统的性能是否符合要求。有关分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，包括试验地点、适用仪器、试剂规格和批号、所选用的校准品和质控品、临床样本来源等。
性能评估应至少包括空白吸光度、分析灵敏度、精密度、准确度、线性、分析特异性（抗干扰能力）等，具体研究方法建议参考国际或国内有关体外诊断产品性能评估文件进行。
1.试剂空白吸光度 用厂家指定的空白样本重复测定2次，记录试剂（盒）参数规定读数点主波长下的吸光度值（A），结果均值应符合产品技术要求性能指标的要求。
2.分析灵敏度 测定已知浓度的样本，记录在试剂（盒）规定参数下产生的吸光度变化（ΔA）。结果应符合产品技术要求性能指标的要求。
3.准确度 建议按如下优先顺序，同时结合申请人实际情况，采用如下方法之一对试剂（盒）准确度进行评价。
3.1相对偏差 根据生产企业提供的试剂（盒）线性区间，将参考物质或具有溯源性的标准品作为样本，按照待测试剂（盒）说明书的步骤进行检测，每个样品重复测定3次，按公式（1）计算每次测定值（Xi）的相对偏差（B），结果均应符合产品技术要求性能指标的要求。若有1次测定值的相对偏差不符合要求，需继续重复测定样本20次，并计算每次测定值的相对偏差，应有不少于19次测定值的相对偏差符合产品技术要求性能指标的要求。
B=|(Xi-T)|/T×100% …………………（1）式中：
B—相对偏差；
Xi—第i次的测定值；
T—测定样本的靶值。
3.2方法学比对 用不少于40个在检测浓度范围内不同浓度的人源样品，以生产企业指定的已上市分析系统作为比对方法，每份样品按待测试剂（盒）操作方法及比对方法分别检测。用线性回归方法计算两组结果的相关系数（r）及医学参考水平的相对偏差，结果应符合申请人自定的要求。
在实施方法学比对前，确认两者都分别符合各自相关的质量标准或技术要求后方可进行比对试验。方法学比对时应注意质量控制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。
4.精密度 测量精密度的评估方法包括重复性和批间差试验，应至少包括两个浓度水平的样本。
4.1重复性 在重复性条件下，对至少两个不同浓度的样本分别重复测定至少10次，分别计算测定结果的平均值（）和标准差（SD），根据公式（2）得出变异系数（CV），结果均应符合产品技术要求性能指标的要求。
CV=SD/×100%………………（2）式中：
CV—变异系数；
SD—10次测量结果的标准差；
—10次测量结果的平均值。
4.2批间差 分别用三个不同批号试剂（盒），对至少两个不同浓度的样本，分别重复测定3次，计算每个浓度样本每批号3次测量结果的平均值（i，i=1、2、3），根据公式（3）、公式（4）计算批间相对极差（R），结果均应符合产品技术要求相应性能指标的要求。
= ………………（3）R=(max-min)/×100% ………………（4）式中：R—批间相对极差；
max—i的最大值，i=1、2、3；
min—i的最小值，i=1、2、3；
T—三批测量结果的总平均值。
5.线性 取接近线性区间上限的高值(H)和接近下限的低值(L)样本或纯化水各一份，混合成至少5个稀释浓度的样本(xi)。用试剂（盒）分别测试各稀释浓度3次，然后分别计算每个稀释浓度检测结果的均值(yi)，以xi为自变量，以yi为因变量求出线性回归方程，按公式（5）计算线性回归的相关系数®；
同时将xi代入线性回归方程，计算yi的估计值(yie)，根据公式（6）和（7）计算线性绝对偏差或相对偏差(Ri),结果均应符合产品技术要求性能指标的要求。
……………（5）绝对偏差 = 检测结果均值（yi）-估计值（yie）……（6）……………………（7）建立试剂线性所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似，且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影响。
6.分析特异性 干扰物质：对样本中常见干扰物质对检测结果的影响进行研究，如血液样本中血红蛋白、甘油三酯、胆红素、类风湿因子，尿液样本中抗坏血酸、葡萄糖、白蛋白、pH等，干扰物浓度的分布应覆盖人体生理及病理状态下可能出现的物质浓度，结果应量化表示，禁用轻度、严重的模糊表述。
7.其他需注意问题 7.1企业可建立自己的企业参考品，参考品来源应稳定，并明确建立过程。
7.2如注册申请中包括不同适用机型，需要提交在不同机型上进行上述项目评估的试验资料及总结。
如注册申请中包含不同的包装规格，需要对不同包装规格之间的差异进行分析或验证。如不同的包装规格产品间存在性能差异，需要提交采用每个包装规格产品进行的上述项目评估的试验资料及总结。如不同包装规格之间不存在性能差异，需要提交包装规格之间不存在性能差异的详细说明，具体说明不同包装规格之间的差别及可能产生的影响。
7.3校准品溯源及质控品定值 校准品应提供详细的量值溯源资料。应参照GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，提供企业（工作）校准品及试剂（盒）配套校准品定值及不确定度计算记录。提供质控品在所有适用机型上进行的定值资料。
（五）参考区间确定资料 应明确研究采用的样本来源、详细的试验资料、统计方法等，参考值范围可参考文献资料，但应当明确说明出处，并进行转移验证。建议参考WS/T 402-2012等相关文件。
（六）稳定性研究资料 稳定性研究资料主要涉及两部分内容，申报试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究。前者通常包括实时稳定性（有效期）、开瓶稳定性、复溶稳定性（如有）、运输稳定性等。对于实时稳定性研究，应提供至少3批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的性能检测研究资料。适用样本的稳定性研究主要包括室温、冷藏和冷冻条件下保存的有效期研究，适于冷冻保存的样本还应对冻融次数进行研究。稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据、具体的实施方案、详细的研究数据以及结论。
试剂稳定性和样本稳定性两部分内容的研究结果均应在说明书【储存条件及有效期】和【样本要求】两项中进行详细说明。
（七）生产及自检记录 提供连续三批产品生产及自检记录的复印件。
（八）临床评价资料 此项目已经列入《关于新修订免于进行临床试验医疗器械目录的通告》（国家药品监督管理局通告2018年第94号）中免于进行临床试验的体外诊断试剂目录。根据体外诊断试剂临床评价的相关要求，申请人可按照《免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评价资料基本要求（试行）》（国家食品药品监督管理总局通告2017年第179号）要求进行临床评价。如无法按要求进行临床评价，应进行临床试验，临床试验的开展、方案的制定以及报告的撰写等均应符合相关法规及《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的要求。
1.临床评价途径 临床评价资料应符合《免于进行临床试验的体外诊断试剂临床评价资料基本要求（试行）》（国家食品药品监督管理总局通告2017年第179号）要求。下面仅对临床评价中的部分具体问题进行阐述。
1.1评价方法 与境内已上市同类产品进行比较研究试验，证明两者具有等效性；
或与参考方法进行比较研究试验，考察待评价试剂与参考方法的符合率/一致性。对拟申报产品临床性能进行评价的相关文献,可作为补充临床评价资料提交。
1.2评价机构 临床评价由申请人自行或委托其他机构或实验室在中国境内完成，试验过程由申请人进行管理，试验数据的真实性由申请人负责。境外申请人可通过其在中国境内的代理人，开展相关临床评价工作。
1.3试验地点 申请人可根据产品特点自行选择试验地点完成样本检测，与参考方法进行比较研究试验，应选择具有中国合格评定国家认可委员会（CNAS）认可的相关检测资质的参考实验室进行研究。
1.4临床评估方案 申请人应在试验前建立合理的临床评估方案并遵照执行。方案中应明确样本类型、例数、存贮条件、纳入/排除标准，盲法设置方法，试验流程，质量控制措施，统计分析方法及判定依据等内容。
1.5样本要求 评价用样本应为来源于人体的样本，样本来源应可追溯。根据预期用途、参考区间及检测范围确定样本分布。样本数量应采用合理的统计学方法进行计算，在符合最低样本量要求的前提下，还应符合统计学要求。
评价用的样本类型应与注册申请保持一致。对于不具有可比性的不同样本类型，如血液样本和尿液样本，应分别进行符合统计学意义数量的评估。对于具有可比性的不同样本类型，如血清和血浆样本，可在分析性能评估中对样本适用性进行研究，或在临床评价中对每种样本类型分别进行符合统计学意义数量的评估。
1.6统计分析 申请人应根据产品特点及试验数据的分布选择合适的统计学方法，如相关分析、Bland-Altman法等，统计结果应能证实待评价试剂相对于对比试剂/参考方法检测结果无明显偏倚或偏倚量在允许误差范围内。
1.7临床评价报告 临床评价报告应该对试验的整体设计及各个关键点给予清晰、完整的阐述，应该对整个临床评价基本信息、试验设计、实施情况、结果分析、结论等进行条理分明的描述，并应包括必要的基础数据和统计分析方 2.临床试验途径 临床试验的开展、方案的制定以及报告的撰写等均应符合相关法规及《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的要求。
（九）产品风险分析资料 对体外诊断试剂产品寿命周期的各个环节,从预期用途、可能的使用错误、与安全性有关的特征、已知和可预见的危害等方面的判定以及对患者风险的估计进行风险分析、风险评价和相应的风险控制基础上，形成风险管理报告。应当符合相关行业标准YY/T 0316《医疗器械 风险管理对医疗器械的应用》的要求。
（十）产品技术要求 产品技术要求应符合《体外诊断试剂注册管理办法》和《体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式》以及《关于发布医疗器械产品技术要求编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第9号）的相关规定。该产品目前已有相应的行业标准发布，企业产品技术要求应至少不低于行业标准要求。如产品含有配套校准品或质控品，还应包含对校准品或质控品的相关要求。
产品技术要求应包含产品名称、产品型号/规格及其划分说明、性能指标、检验方法和产品技术要求编号。产品名称、产品型号/规格及其划分说明和性能指标的内容应与其他注册资料中的相应内容保持一致。检验方法应优先考虑采用公认的或已颁布的标准检验方法，对于尚无公认的或已颁布的标准检验方法，需与产品性能研究资料的内容一致，并保证该方法具有可重现性和可操作性。
性能研究及产品技术要求研究适用的国家标准和行业标准清单见表1。
表1 相关产品标准 GB/T 21415 《体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》 GB/T 26124 《临床化学体外诊断试剂（盒）》 GB/T 29791.1 《体外诊断医疗器械 制造商提供的信息（标示）第1部分：术语、定义和通用要求》 GB/T 29791.2 《体外诊断医疗器械 制造商提供的信息（标示）第2部分：专业用体外诊断试剂》 YY/T 1207 《尿酸测定试剂盒（尿酸酶过氧化物酶偶联法）》 YY/T 1227 《临床化学体外诊断试剂（盒）命名》 注：上述标准未标注年代号，申请人应参照最新版本；
如有其他新的适用国家标准和行业标准，应参照。
（十一）产品注册检验报告 首次申请注册的尿酸测定试剂应该在具有相应医疗器械检验资质和承检范围的医疗器械检测机构进行产品的注册检验。该项目已有国家标准品发布，应使用国家标准品进行注册检验。
（十二）产品说明书 说明书承载了产品预期用途、试验方法、检测结果解释以及注意事项等重要信息，是指导使用人员正确操作、临床医生准确理解和合理应用试验结果的重要技术性文件。产品说明书的格式应符合《关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014第17号）的要求。结合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》的要求，下面对尿酸测定试剂说明书的重点内容进行详细说明。
1.【产品名称】 试剂名称由三部分组成：被测物名称、用途、方法或原理。例如：尿酸测定试剂盒（尿酸酶过氧化物酶偶联法）。
2.【包装规格】 2.1包装规格应明确装量（如××mL；
××测试）。
2.2与产品技术要求中所列的包装规格一致。
3.【预期用途】 应至少包括以下几部分内容：
3.1说明试剂（盒）用于体外定量测定人血清、血浆、尿液样本中尿酸的含量。
3.2尿酸测定的临床意义，尿酸含量异常情况常见于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些医学解释。
作为支持性资料，申请人应提供由临床循证研究、教科书、临床专著、核心期刊文献或英文SCI文献等有关临床适应症背景的资料。
4.【检验原理】 应结合产品主要成分简要说明检验的原理、方法，必要时可采取图示方法表示。
例如：尿酸在尿酸酶催化下，氧化生成尿囊素和H2O2。H2O2与4-氨基安替比林（4-AAP）和3,5二氯-2-羟苯磺酸（DHBS）在过氧化物酶的催化下，生成有色物质（醌亚胺化合物），其颜色变化与样本中UA含量成正比。反应式如下：
尿酸+O2+H2O尿囊素+CO2+H2O2 H2O2+4-AAP+DHBS有色化合物+H2O 5.【主要组成成分】 5.1对于产品中不包含，但对该试验必需的试剂组分，说明书中应列出此类试剂的名称、医疗器械注册证号或备案证号、纯度，提供稀释或混合方法及其他相关信息。
5.2对于校准品（若配有）：注明校准品的定值及其溯源性，溯源性资料应写明溯源的最高级别（应包括标准物质或参考方法的发布单位编号）。
5.3对于质控品（若配有）：注明质控品的靶值范围。如靶值范围为批特异，可注明批特异，并附单独的靶值单。
6.【储存条件及有效期】 6.1对试剂的效期稳定性、复溶稳定性（如有）、开瓶稳定性等信息作详细介绍。包括环境温湿度、避光条件等。
6.2不同组分保存条件及有效期不同时，应分别说明，产品总有效期以其中效期最短的为准。
注：保存条件不应有模糊表述，如“常温”、“室温”。
7.【适用仪器】 7.1说明可适用的仪器，应写明具体适用仪器的型号，不能泛指某一系列仪器，并且与分析性能评估资料一致。
7.2如不同包装规格有与之特定对应的机型，应同时明确对应关系。
8.【样本要求】 重点明确以下内容：
8.1样本类型、处理、保存期限及保存条件（短期、长期）和运输条件等。明确血浆的抗凝剂类型。以上描述皆应与研究资料一致。
8.2已知干扰物。
9.【检验方法】 详细说明试验操作的各个步骤，包括：
9.1试剂配制方法、注意事项；
9.2试验条件：温度、时间、测定主/副波长、比色杯光径、试剂用量、样本用量、测定方法、反应类型、反应方向、反应时间等以及试验过程中的注意事项；
9.3校准：校准品的使用方法、注意事项、校准曲线的绘制；
9.4质量控制：质控品的使用方法、对质控结果的必要解释以及推荐的质控频率等；
9.5检验结果的计算：应明确检验结果的计算方法。
10.【参考区间】 应注明适用样本类型的正常参考区间，并说明参考区间确定方法。建议注明“由于地理、人种、性别和年龄等差异，建议各实验室建立自己的参考区间”。
11.【检验结果的解释】 说明可能对检验结果产生影响的因素，明确有可能存在的数值升高因素及数值降低因素，明确说明对何种条件下需要进行确认试验，以及在确认试验时对待测样本可能采取的优化条件等进行详述。
提示常见药物可能存在的干扰，并提供相应的研究资料或文献资料作为支撑。
如样本浓度超出线性范围后，应明确最大可稀释倍数及稀释液种类，并提供相应的支持性研究资料。
12.【检验方法的局限性】 说明试剂（盒）的检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例的依据，为达到诊断目的，此检测结果要与临床检测、病史和其它检测结果结合使用。
13.【产品性能指标】 至少应详述以下性能指标: 13.1试剂空白吸光度；
13.2分析灵敏度；
13.3准确度；
13.4精密度（重复性和批间差）；
13.5线性（线性相关系数和线性偏差）。
13.6抗干扰能力 14.【注意事项】 应至少包括以下内容：
14.1本试剂（盒）仅供体外检测使用，试剂中含有的化学成分应说明接触人体后产生的不良影响后果及应急处理措施。
14.2采用不同方法学的试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实验室在发给临床医生的检测报告中注明所用试剂特征(如参考区间或方法学)。
14.3有关人源组分（如有）的警告，如：试剂（盒）内校准品、质控品或其他可能含有人源物质的组分，虽已通过乙型肝炎表面抗原（HbsAg）、人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV1/2）、丙型肝炎抗体（抗-HCV）等项目的检测为阴性，但截至目前，没有任何一项检测可以确保绝对安全，故仍应将这些组分作为潜在传染源对待。提示对于潜在传染源的处理方式。
14.4对于动物源性组分，应给出具有潜在感染性的警告。
14.5对所有样本和反应废弃物都应视为传染源对待。
14.6其他有关尿酸检测的注意事项。
三、审查关注点 （一）关注产品预期用途有关的描述是否与临床研究结论一致。临床研究用对比试剂和第三方确认试剂的预期用途应与申请产品预期用途一致。申报样本类型应在临床研究中进行验证。
（二）审查产品技术要求时应注意产品应符合YY/T 1207《尿酸测定试剂盒（尿酸酶过氧化物酶偶联法）》有关规定。
（三）说明书中预期用途、储存条件及有效期、检验方法、参考区间、产品性能指标、抗干扰能力等描述应分别与临床研究资料、稳定性研究资料、参考区间研究资料、分析性能评估资料的研究结论相一致。
四、编写单位 四川省食品药品审查评价及安全监测中心。
第二篇：甘油三酯测定试剂盒注册技术审查指导原则
附件5
甘油三酯测定试剂盒注册技术审查指导原
则
本指导原则旨在指导注册申请人对甘油三酯（Triglyceride，TG）测定试剂盒注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。
本指导原则是对甘油三酯测定试剂盒的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围
甘油三酯测定试剂盒是指利用酶法对人血清、血浆或其他体液中的甘油三酯含量进行体外定量测定的试剂。本指导原则适用于进行产品注册和相关许可事项变更的产品。
脂肪酶分解血清中甘油三酯为甘油和脂肪酸。在ATP存在下，甘油激酶将甘油磷酸化成3-磷酸甘油。后者被磷酸甘油氧化酶氧化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢。过氧化氢与过氧化物酶、4-氨基比林进行显色反应，生成有色苯醌亚胺，在500nm（480nm—550nm）处吸光度值与甘油三酯含量成正比。本文不适用于干化学类测定试剂。
依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），甘油三酯检测试剂属于酯类检测试剂，管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。
二、注册申报资料要求
（一）综述资料
甘油三酯（Triglyceride，TG）是3分子长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子。甘油三酯是人体内含量最多的脂类，大部分组织均可以利用甘油三酯分解产物供给能量，同时肝脏、脂肪等组织还可以进行甘油三酯的合成，在脂肪组织中贮存。人血清中甘油三酯水平呈明显正偏态分布。病理性升高：原发性见于家族性高甘油三酯血症与家族性混合型高脂（蛋白）血症等。继发性见于糖尿病、糖尿累积病，甲状腺功能衰退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药、酗酒等。病理性降低：原发性见于无β-脂蛋白血症和低β-脂蛋白血症。继发性见于继发性脂质代谢异常，如消化道疾病（肝疾患、吸收不良综合征）、内分泌疾患（甲状腺功能亢进症、慢性肾上腺皮质不全）及肝素等药物的应用。综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。
（二）主要原材料的研究资料（如需提供）
包括主要反应成分、质控品、校准品等的选择、制备、质量标准确定的方法及研究资料；校准品应提供详细的量值溯源资料，包括定值试验资料和溯源性文件等；质控品应提供详细的定值资料。
（三）主要生产工艺和反应体系的研究资料（如需提供）1.主要生产工艺介绍，可用流程图方式表示，并说明主要生产工艺过程的研究资料、每一步生产工艺的确认资料及试验数据。包括：工作液的配制和分装，显色系统的描述和确定依据等。
2.主要反应体系的研究资料，包括：样本采集及处理、样本要求，确定反应温度、时间、缓冲体系比较等条件的确认资料及试验数据，确定样本和试剂盒组分加样量的确认资料及试验数据，校准方法、质控方法等。
（四）分析性能评估资料
申请人应当提交产品研制或成品验证阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，对于每项分析性能的评价都应包括具体的研究项目、实验设计、研究方法、可接受标准、试验数据、统计方法、研究结论等详细资料。性能评估时应将试剂和所选用的校准品、质控品作为一个整体进行评价，评估整个系统的性能是否符合要求。有关分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，包括实验地点、适用仪器、试剂规格和批号、所选用的校准品和质控品、临床样本来源等。
性能评估应至少包括准确度、精密度、线性范围、最低检测限、分析灵敏度、分析特异性、其他影响检测的因素等。
1.准确度
对测量准确度的评价方法依次包括：相对偏差、回收试验、比对试验等方法，甘油三酯项目目前有国家标准品和国际参考物质，建议申请人优先采用相对偏差的方法，申请人也可根据实际情况选择其他合理方法进行研究。
1.1相对偏差
使用国家标准品或国际参考物质作为样本进行测试，重复测定3次，计算平均值与标示值的相对偏差。
或用由参考方法定值的高、低2个浓度的人血清对试剂盒进行测试，每个浓度样品重复测定3次，分别取测试结果均值，计算相对偏差。
1.2回收试验
在人血清样品中加入一定体积标准或校准品溶液或纯品，每个浓度重复测定3次，计算回收率。
回收试验注意事项：
1.2.1加入的标准液体积与血清体积比应不大于1:20或其体积比不会产生基质的变化；
1.2.2加入标准或校准品溶液后样品总浓度应在试剂盒测定线性范围内；
1.2.3标准品或校准品应有溯源性； 1.3比对试验
采用参考方法或国内/国际普遍认为质量较好的已上市同类试剂作为参比方法，与拟申报试剂同时检测一批病人样品（至少40例样本），从测定结果间的差异了解拟申报试剂与参比方法间的偏倚。如偏倚很小或在允许的误差范围内，说明两检测系统对病人标本测定结果基本相符，对同一份临床样本的医学解释，拟申报试剂与参比方法相比不会产生差异结果。
在实施方法学比对前，应分别对拟申报试剂和参比试剂进行初步评估，只有在确认两者都分别符合各自相关的质量标准后方可进行比对试验。方法学比对时应注意质量控制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。
2.精密度
测量精密度的评估应至少包括两个浓度水平的样本进行，两个浓度都应在试剂盒的测量范围内且有一定的临床意义，通常选用该检测指标的临界值附近样本和异常高值样本。
3.线性范围
建立试剂线性范围所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似，理想的样本为分析物浓度接近预期测定上限的混合人血清，且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影响。
超出线性范围的样本如需稀释后测定，应做相关研究，明确稀释液类型及最大可稀释倍数，研究过程应注意基质效应影响，必要时应提供基质效应研究有关的资料。
4.最低检测限
最低检测限的确定常使用同批号试剂对零浓度校准品（或样品稀释液）进行至少20次重复检测，平均值加2倍SD（≥95%臵信区间）即试剂的最低检测限。
5.分析灵敏度
试剂盒测试给定浓度的被测物时，吸光度差值（ΔA）应符合生产企业给定范围。6.分析特异性
应明确已知干扰因素对测定结果的影响：可采用回收实验对不同浓度的溶血、黄疸对检测结果的影响进行评价，干扰物浓度的分布应覆盖人体生理及病理状态下可能出现的物质浓度。待评价的甘油三酯样本浓度至少应为高、中、低三个水平，选取线性范围内有临床代表性意义的浓度。
药物干扰的研究可根据需要由申请人选择是否进行或选择何种药物及其浓度进行。
7.校准品溯源及质控品赋值（如产品中包含）校准品应提供详细的量值溯源资料，包括定值试验资料和溯源性文件等；质控品应提供详细的定值资料。应参照GB/T 21415—2008《体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，提供企业（工作）校准品及试剂盒配套校准品定值及不确定度计算记录，提供质控品赋值及其靶值范围确定的记录。
8.其他需注意问题
不同适用机型、不同包装规格，应分别提交分析性能评估报告。如注册申请中包含不同的包装规格，需要对不同包装规格之间的差异进行分析或验证。如不同的包装规格产品间存在性能差异，需要提交采用每个包装规格产品进行的上述项目评估的试验资料及总结。如不同包装规格之间不存在性能差异，需要提交包装规格之间不存在性能差异的详细说明，具体说明不同包装规格之间的差别及可能产生的影响。
（五）参考区间确定资料
应明确研究采用的样本来源、详细的试验资料、统计方法等，参考区间可参考文献资料，但应当对至少120例的健康个体进行验证。研究结论应与产品说明书【参考区间】的相应描述保持一致。
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料主要涉及两部分内容，申报试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究。
试剂的稳定性包括实时稳定性、运输稳定性、开瓶（待机）稳定性等，申请人应至少提供3个生产批次的实时稳定性、开瓶稳定性和运输稳定性研究资料，包括研究目的、材料和方法、研究结论等。试剂的稳定性研究应注意选取代表性包装规格进行研究（例如：校准品稳定性应选取最易受影响的最小装量）。
适用样本的稳定性主要包括室温保存、冷藏和冷冻条件下的有效期验证，可以在合理温度范围内选择温度点（温度范围），每间隔一定的时间段即对储存样本进行性能的分析验证，从而确认不同类型样本的效期稳定性。适于冷冻保存的样本还应对冻融次数进行评价。
试剂稳定性和样本稳定性两部分内容的研究结果均应在说明书【储存条件及有效期】和【样本要求】两项中进行详细说明。
（七）临床评价资料
临床试验资料应符合《关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号）的要求，同时研究资料的形式应符合《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）临床研究资料有关的规定。下面仅对临床实验中的基本问题进行阐述。
1.研究方法
选择境内已批准上市的性能不低于试验用体外诊断试剂的同类产品作为参比试剂，采用试验用体外诊断试剂（以下称待评试剂）与之进行对比试验研究，证明本品与已上市产品等效。
2.临床试验机构的选择
应选择至少两家经国家食品药品监督管理总局资质认可的临床试验机构，临床试验机构实验操作人员应有足够的时间熟悉检测系统的各环节（试剂、质控及操作程序等），熟悉评价方案。在整个实验中，待评试剂和参比试剂都应处于有效的质量控制下，最大限度保证试验数据的准确性及可重复性。
3.临床试验方案
临床试验实施前，研究人员应从流行病学、统计学、临床医学、检验医学等多方面考虑，设计科学合理的临床研究方案。建议临床前开展预试验工作，最大限度地控制试验误差。各临床试验机构的方案设臵应保持一致，且保证在整个临床试验过程中遵循预定的方案实施，不可随意改动。整个试验过程应在临床试验机构的实验室内并由本实验室的技术人员操作完成，申报单位的技术人员除进行必要的技术指导外，不得随意干涉实验进程，尤其是数据收集过程。
试验方案中应确定严格的病例纳入/排除标准，任何已经入选的病例再被排除出临床研究都应记录在案并明确说明原因。在试验操作过程中和判定试验结果时应采用盲法以保证试验结果的客观性。各临床试验机构选用的参比试剂应保持一致，以便进行合理的统计学分析。另外，待评试剂的样本类型应不超越参比试剂的样本类型。
临床试验方案必须获得临床试验机构伦理委员会的同意。
4.研究对象选择
临床试验应选择具有特定症状/体征人群作为研究对象。企业在建立病例纳入标准时，应考虑到不同人群的差异，尽量覆盖各类适用人群。在进行结果统计分析时，建议对各类人群分别进行数据统计分析。总体样本数不少于200例，异常值样本数不少于80例。样本中待测物浓度应覆盖待评试剂线性范围，且尽可能均匀分布。
应明确样本存贮条件、可否冻融等要求及避免使用的样本，血浆应明确抗凝剂的要求。实验中，尽可能使用新鲜样本，避免贮存。如无法避免使用贮存样品时，注明贮存条件及时间，在数据分析时应考虑其影响。
如果声称待评试剂同时适用于血清或血浆样本类型，可完成一个样本类型（血清或血浆）不少于200例的临床研究，同时可选至少100例血清或血浆同源样本进行比对研究，异常值样本不少于40例进行临床研究，其中不同浓度样本分布情况与总例数中分布情况应一致。也可以分别对同时适用的多个样本类型按照《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号）中试验样本量一般要求规定的200例进行试验，异常值样本数不少于80例。
涉及产品检测条件优化、增加与原样本类型具有可比性的其他样本类型等变更事项，临床试验采用变更后产品与变更前产品或者已上市同类产品进行比对试验，在至少2家（含2家）临床试验机构开展临床试验，总样本数不少于100例，异常值样本数不少于40例。
5.统计学分析
对临床试验结果的统计应选择合适的统计方法，如相关分析、线性回归、绝对偏倚/偏差及相对偏倚/偏差分析等。对于对比实验的等效性研究，最常用是对待评试剂和参比试剂两组检测结果的相关及线性回归分析，应重点观察相关系数（r值）或判定系数（R2）、回归拟合方程（斜率和y轴截距）等指标。结合临床试验数据的正/偏态分布情况，建议统计学负责人选择合理的统计学方法进行分析，统计分析应可以证明两种方法的检测结果无明显统计学差异。在临床研究方案中应明确统计检验假设，即评价待评试剂与参比试剂是否等效的标准。
6.临床试验总结报告撰写
根据《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的要求，临床试验报告应该对试验的整体设计及各个关键点给予清晰、完整的阐述，应该对整个临床试验实施过程、结果分析、结论等进行条理分明的描述，并应包括必要的基础数据和统计分析方法。建议在临床总结报告中对以下内容进行详述。
6.1临床试验总体设计及方案描述
6.1.1临床试验的整体管理情况、临床试验机构选择、临床主要研究人员简介等基本情况介绍。
6.1.2纳入/排除标准、不同人群的预期选择例数及标准。6.1.3样本类型，样本的收集、处理及保存等。6.1.4统计学方法、统计软件、评价统计结果的标准。6.2具体的临床试验情况
6.2.1待评试剂和参比试剂的名称、批号、有效期及所用机型等信息。
6.2.2对各研究单位的病例数、人群分布情况进行总合，建议以列表或图示方式给出具体例数及百分比。
6.2.3质量控制，试验人员培训、仪器日常维护、仪器校准、质控品运行情况，对检测精密度、质控品回收（或测量值）、抽查结果评估。
6.2.4具体试验过程，样本检测、数据收集、样本长期保存等。
6.3统计学分析
6.3.1数据预处理、对异常值或离群值的处理、研究过程中是否涉及对方案的修改。
6.3.2定量值相关性和一致性分析
用回归分析验证两种试剂结果的相关性，以y=a+bx和R2的形式给出回归分析的拟合方程，其中：y是待评试剂结果，x是参比试剂结果，b是方程斜率，a是y轴截距，R2是判定系数（通常要求R2≥0.95）。
6.4讨论和结论
对总体结果进行总结性描述并简要分析试验结果，对本次临床研究有无特别说明，最后得出临床试验结论。
（八）产品风险分析资料
对体外诊断试剂产品寿命周期的各个环节,从预期用途、可能的使用错误、与安全性有关的特征、已知和可预见的危害等方面的判定以及对患者风险的估计进行风险分析、风险评价和相应的风险控制基础上，形成风险管理报告。应当符合相关行业标准的要求。
风险分析应包含但不仅限于以下方面的内容：预期用途错误包括：设计开始时未设定预期分析物、未作适用机型验证、未针对特定的样本类型验证。性能特征失效包括：精密度失效、准确度失效、非特异性、稳定性失效、测量范围失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校准失效。不正确的结果包括：配方错误、采购的原料未能达到设计要求的性能、原材料储存条件不正确、使用了过期的原材料、反应体系不正确、试剂与包装材料不相容。可能的使用错误包括：生产者未按照生产流程操作，检验者未按照原料、半成品、成品检验标准操作，装配过程组份、标签、说明书等漏装或误装，成品储存或运输不当，客户未参照产品说明书设臵参数或使用。与安全性有关的特征包括：有毒化学试剂的化学污染、样本的潜在生物污染、不可回收包装或塑料的环境污染。
（九）产品技术要求
申请人应当在原材料质量和生产工艺稳定的前提下，根据申请人产品研制、前期临床评价等结果，依据国家标准、行业标准及有关文献，按照《关于发布医疗器械产品技术要求编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第9号）的有关要求，编写产品技术要求，内容主要包含产品性能指标和检验方法。
进口产品的产品技术要求应当包括英文版和中文版，英文版应当由申请人签章，中文版由申请人或其代理人签章。
下面就产品技术要求中涉及的产品适用的相关标准和主要性能指标等相关内容作简要叙述。
1.产品适用的相关标准：（1）GB/T 21415—2008体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性
（2）GB/T 26124—2011临床化学体外诊断试剂（盒）（3）YY/T 1199—2013甘油三酯测定试剂盒（酶法）2.主要性能指标： 2.1外观
应与申请人声称试剂外观一致。这里可以包括试剂盒包装外观、试剂内包装外观、试剂的外观。
2.2装量
试剂装量应不少于标示装量。2.3试剂空白吸光度
用蒸馏水、去离子水或其他指定溶液作为空白加入工作试剂作为样品测试时，试剂空白吸光度A(申请人指定的波长，37℃，1.0 cm)≤0.2。
2.4分析灵敏度
试剂盒测试给定浓度的被测物时，吸光度差值（ΔA）应符合生产企业给定范围。
2.5线性范围
线性范围应至少达到1.13 mmol/L—9.04 mmol/L。2.5.1相关系数（r）
线性相关系数r应不小于0.990（线性范围下限应不低于产品的最低检测线，不高于参考区间下限）。
2.5.2线性偏差
线性偏差应不超过申请人给定值。线性偏差可分段描述或连续描述，若分段描述，应注意分段点的确定。
2.6精密度 2.6.1重复性
用同一样本或质控品重复测试至少10次，所得结果的精密度（变异系数CV）应≤5.0%。
测定样本应至少包含两个浓度点，一般应按医学决定水平取甘油三酯临界值和异常高值浓度点。
2.6.2批间差
试剂（盒）批间相对极差应≤10.0%。样本选取同前。2.7准确度
2.7.1相对偏差 提供参考物质或用参考方法定值的血清测定，实测值与标示值偏差应在±15.0%范围内。
2.7.2回收试验 在临床样本中加入一定体积标准溶液（标准溶液体积与临床样本体积应不会产生基质的变化，加入标准溶液后样品总浓度必须在试剂（盒）测定线性范围内）或纯品，回收试验一般选取两个或两个以上浓度进行，回收率应在90%—110%之间。
2.7.3比对试验 用待测试剂盒与申请人选定分析系统（已在国内上市）分别检测不少于40个在检测范围内的人源样品，用线性回归方法计算两组结果的相关系数r≥0.990以及每个浓度点的偏差，偏差应不超过申请人给定值。偏差可分段描述或连续描述，若分段描述，应注意分段点的确定。
建议按上述优先顺序，采用上述方法之一测试试剂盒的准确度。
2.8稳定性
检测申请人声称已到期试剂，产品性能应符合试剂空白吸光度、分析灵敏度、线性范围、精密度、准确度要求。冻干品应同时进行复溶稳定性试验，复溶后放臵到有效期末，产品性能应符合试剂空白吸光度、分析灵敏度、线性、测量精密度、准确度要求。
2.9校准品和质控品的性能指标（如产品中包含）应至少包含外观、装量（干粉试剂可不做）、准确性、均一性、稳定性。冻干型校准品和质控品还应检测批内瓶间差和复溶稳定性。
（十）产品注册检验报告
具有相应医疗器械检验资质和承检范围的医疗器械检验机构出具的注册检验报告和产品技术要求预评价意见。甘油三酯项目目前有国家标准品，应当使用国家标准品进行注册检验，并符合相关要求。
（十一）产品说明书
说明书承载了产品预期用途、检验方法、对检验结果的解释以及注意事项等重要信息，是指导实验室工作人员正确操作、临床医生针对检验结果给出合理医学解释的重要依据，因此，产品说明书是体外诊断试剂注册申报最重要的文件之一。
结合《关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号）的要求，下面对甘油三酯测定试剂盒说明书的重点内容进行详细说明。
1.【产品名称】
根据《体外诊断试剂注册管理办法》中的命名原则，产品名称通常由被测物质的名称、用途、方法或原理三部分组成，方法或原理部分应能体现具体反应原理，建议参考分类目录或行业标准。2.【包装规格】
包装规格应明确单、双或其他多试剂类型；如不同包装规格有与之特定对应的机型，则应同时明确适用机型。如有货号，可增加货号信息。
如:试剂1:1×40 mL,试剂2: 1×20 mL 日立7170生化分析仪
3.【预期用途】应至少包括以下几部分内容： 3.1说明试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他体液中甘油三酯的含量。
3.2明确与甘油三酯检测相关的临床适应症背景情况。如：病理性升高：原发性见于家族性高甘油三酯血症与家族性混合型高脂（蛋白）血症等。继发性见于糖尿病、糖尿累积病，甲状腺功能衰退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药、酗酒等。病理性降低：原发性见于无β-脂蛋白血症和低β-脂蛋白血症。继发性见于继发性脂质代谢异常，如消化道疾病（肝疾患、吸收不良综合征）、内分泌疾患（甲状腺功能亢进症、慢性肾上腺皮质不全）及肝素等药物的应用。
4.【检验原理】应结合产品主要成分简要说明检验的原理、方法，必要时可采取图示方法表示，检验原理的描述应结合产品主要组成成分、被测物和产物的关系进行描述：
如：用脂蛋白酯酶（LPL）使血清中的甘油三酯（TG）水解成甘油与脂肪酸，将生成的甘油用甘油激酶（GK）及三磷酸腺苷（ATP）磷酸化。以磷酸甘油氧化酶（GPO）氧化3-磷酸甘油（G-3-P），然后以过氧化物酶（POD），4-氨基安替比林（4-AAP）与4-氯酚（三者合称PAP）反应显色，在特定波长处监测吸光度值，可计算甘油三酯含量。
反应式如下：
5.【主要组成成分】应明确以下内容：
试剂盒提供的试剂组分的名称、比例或浓度，各组分是否可以互换；如含有校准品或质控品，除明确组成成份及生物学来源外，还应明确其定值及溯源性，溯源性应写明溯源的最高级别，包括标准物质或参考物的发布单位及编号，质控品应明确靶值范围。
例如：
本试剂盒由试剂1、2和校准品组成：
试剂1：三羟甲基氨基甲烷缓冲液100 mmol/L、三磷酸腺苷（ATP）0.20 mmol/L、甘油激酶（GK）1200 U/L、甘油磷酸氧化酶4000 U/L、氯化镁23 mmol/L、过氧化物酶5 KU/L；
试剂2：三羟甲基氨基甲烷缓冲液100 mmol/L、4-氨基安替比林1.0 mmol/L、脂蛋白脂酶2500 U/L、三磷酸腺苷0.20 mmol/L、3，5-二氯-2-羟基苯磺酸钠2.0 mmol/L； 校准品：为甘油三酯溶液，校准品具有批特异性，每批定值，定值见瓶签标示，量值可溯源至GBW09148或国际参考物质SRM1595。
6.【储存条件及有效期】应明确未开封的试剂实际储存条件及有效期，开封后在生化分析仪上待机稳定期。干粉校准品（如适用）应明确复溶稳定性。
注：保存条件不应有模糊表述，如“室温”、“常温”。7.【适用仪器】应明确可适用的具体品牌、型号的仪器。8.【样本要求】重点明确以下内容：样本类型、处理、保存期限及保存条件（短期、长期），运输条件等。如有血浆样本，应注明对抗凝剂的要求（如果草酸盐、柠檬酸盐、EDTA钠盐等对甘油三酯浓度造成干扰，应明确避免使用的提示）。冷藏/冷冻样本检测前是否须恢复室温，可冻融次数。特殊体液标本还应详细描述对采集条件、保存液、容器要求等可能影响检测结果的要求。应对已知的干扰物进行说明，如：存在的干扰因素，明确黄疸、溶血、药物等干扰物对测定的影响，同时列出干扰物的具体浓度。
9.【检验方法】详细说明试验操作的各个步骤，包括： 9.1试剂配制方法、注意事项。
9.2试验条件：温度、时间、测定主/副波长、试剂用量、样本用量、测定方法、反应类型、反应方向、反应时间等以及试验过程中的注意事项。
9.3校准：校准品的使用方法、注意事项、校准曲线的绘制。
9.4质量控制：质控品的使用方法、对质控结果的必要解释以及推荐的质控周期等；建议在本部分注明以下字样：如果质控结果与预期不符，提示检测结果不可靠，不应出具检测报告。
9.5检验结果的计算：应明确检验结果的计算方法。超出线性范围的样本如进行稀释，应结合可检测范围研究结果明确稀释液类型和最大可稀释比例。
10.【参考区间】应注明常用样本类型的参考区间，并简要说明其确定方法。建议注明“由于地理、人种、性别和年龄等差异，建议各实验室建立自己的参考区间”。
11.【检验结果的解释】说明可能对检验结果产生影响的因素，在何种情况下需要进行确认试验。
12.【检验方法的局限性】说明该检验方法的局限性。
13.【产品性能指标】 至少应详述以下性能指标，性能指标应与产品技术要求中相关技术指标保持一致。
13.1试剂空白吸光度； 13.2分析灵敏度； 13.3准确度；
13.4精密度（重复性和批间差）； 13.5线性范围； 13.6特异性。
14.【注意事项】应至少包括以下内容：
14.1本试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。
14.2本试剂盒仅供体外诊断用，试剂中含有的化学成分接触人体后是否会产生不良的影响后果。
14.3采用不同方法学的试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释；建议实验室在发给临床医生的检测报告注明所用试剂特征。
14.4有关人源组分的警告，如：试剂盒内的质控品、校准品或其他人源组分，虽已经通过了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等项目的检测，但截至目前，没有任何一项检测可以确保绝对安全，故仍应将这些组份作为潜在传染源对待。
14.5样本：（1）采集时间要求、与用药的先后顺序或用药后时间间隔等；（2）对所有样本和反应废弃物都应视为传染源对待。
14.6其他有关甘油三酯测定的注意事项。
15.【标识的解释】如有图形或符号，请解释其代表的意义。
16.【参考文献】应当注明在编制说明书时所引用的参考文献。
17.【基本信息】 17.1境内体外诊断试剂
17.1.1注册人与生产企业为同一企业的，按以下格式标注基本信息：
注册人/生产企业名称，住所，联系方式，售后服务单位名称，联系方式，生产地址，生产许可证编号
17.1.2委托生产的按照以下格式标注基本信息： 注册人名称，住所，联系方式，售后服务单位名称，联系方式，受托企业的名称，住所，生产地址，生产许可证编号
17.2进口体外诊断试剂 按照以下格式标注基本信息： 注册人/生产企业名称，住所，生产地址，联系方式，售后服务单位名称，联系方式，代理人的名称，住所，联系方式
18.【医疗器械注册证编号/产品技术要求编号】应当写明医疗器械注册证编号/产品技术要求编号。
19.【说明书核准日期及修改日期】应注明该产品说明书的核准日期。如曾进行过说明书的变更申请，还应该同时注明说明书的修改日期。
三、参考文献
（一）《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）
（二）《医疗器械说明书和标签管理规定》（国家食品药品监督管理总局令第6号）
（三）《关于发布医疗器械产品技术要求编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第9号）
（四）《关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的那广告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号）
（五）《关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号）
（六）《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）
（七）《关于含有牛、羊源性材料医疗器械注册有关事宜的公告》（国食药监械〔2006〕407号）
（八）国家食品药品监督管理部门发布的其他规范性文件
（九）GB/T 21415—2008体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性
（十）GB/T 26124-2011临床化学体外诊断试剂（盒）
（十一）YY/T 0316—2008医疗器械 风险管理对医疗器械的应用
（十二）YY/T 1199—2013甘油三酯测定试剂盒（酶法）
甘油三酯测定试剂盒注册技术审查指导原
则编写说明
一、指导原则编写目的
编制本指导原则旨在指导和规范注册申请人对甘油三酯（Triglyceride，TG）测定试剂盒注册申报资料的准备及撰写工作，同时帮助审查人员理解和掌握该类产品原理、组成、性能、预期用途等内容，把握技术审评工作基本要求和尺度，对产品安全性、有效性作出系统评价。
由于甘油三酯测定试剂盒产品仍在不断发展，审查人员仍需从风险分析的角度认真确定申报产品的预期用途与风险管理是否相当；由于我国医疗器械法规框架仍在构建中，审查人员仍需密切关注相关法规、标准及最新进展，关注审评产品实际组成、原理、预期用途等方面的个性特征，以保证产品审评符合现行法规安全、有效的要求。
二、指导原则部分内容说明
（一）指导原则主要根据体外诊断试剂产品注册申报资料的要求，借鉴国家食品药品监督管理部门已发布的相关产品注册技术审查指导原则的体例进行编写，以便于注册技术审评人员理解。
（二）产品应适用相关标准中给出了现行有效的国家标准、行业标准（包括产品标准、基础标准）。
（三）产品的主要性能指标中给出了产品需要考虑的各个方面，主要提出共性要求，具体量化指标需要参照相关的国家标准、行业标准和生产商技术能力予以确定。
（四）关于线性偏差以及准确度偏差说明：考虑到，如技术要求中线性偏差以及准确度（比对试验）偏差均采用相对偏差进行表述，当对线性范围中某一极低值样本进行线性范围以及准确度（比对试验）试验时，其试验结果采用绝对偏差符合申请人的规定更为合理。因此，本指导原则建议企业可对产品线性偏差以及准确度（比对试验）偏差进行分段要求，分别采用绝对偏差和相对偏差进行表述。
（五）关于产品技术要求中分析灵敏度描述的说明：行业标准YY/T 1199—2013中分析灵敏度指的是产品功能灵敏度，而国家标准GB/T 26124—2011中分析灵敏度，指的是产品校准曲线斜率。鉴于甘油三酯测定试剂盒功能灵敏度指标目前并没有实际临床意义，本指导原则中分析灵敏度要求采用国家标准GB/T 26124—2011中校准曲线斜率的描述。
（六）关于参考区间的验证资料中对健康个体至少120例的说明：此例数的规定，结合已发布产品技术审查指导原则，并参考《WS/T 402—2012临床实验室检验项目参考区间的制定》以及《C28-A2 如何确定临床检验的参考区间：批准指南（2000）》。
（七）关于临床试验“总体样本数不少于200例，异常值样本数不少于80例”的说明：参照国家局已发布实施的缺血修饰白蛋白、肌酸激酶、碱性磷酸酶产品注册技术指导原则。
（八）关于综述资料、产品说明书中有关与甘油三酯检测相关的临床适应症背景的说明：临床意义的描述参考自《全国临床检验操作规程（第4版）》。
三、指导原则编写单位和人员
本指导原则编写人员由浙江省医疗器械技术审评人员、行政审批人员、检验和临床专家、产品专业厂家代表等共同组成。
第三篇：地中海贫血相关基因检测试剂注册技术审查指导原则（2020年）
附件3
地中海贫血相关基因检测试剂
注册技术审查指导原则
本指导原则旨在指导注册申请人对地中海贫血相关基因检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本指导原则是对地中海贫血相关基因检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，也不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究和验证资料，相关人员应在遵循法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围
地中海贫血（简称地贫）是一种常染色体隐性遗传病，是由于珠蛋白基因发生突变（包括点突变和缺失等），致使珠蛋白肽链合成减少或完全不能合成而导致的一组单基因遗传性溶血性疾病，轻者可无临床表现，重者以进行性溶血性贫血为主要特征。根据珠蛋白肽链合成受到抑制的类型，地贫分为α-，β-和γ-地贫等，临床上最常见的是α-和β-地贫。地贫主要分布在地中海沿岸、东南亚和少数非洲地区，具有明显的种族特性和地域分布差异。地贫是我国南方地区最常见、危害最大的遗传病之一，尤以广西、云南、广东、海南、四川和贵州等省份为甚，云南、海南和广东的地贫基因人群携带率可达10%以上，广西更是达到了20%以上。
α-地贫主要是由于α-珠蛋白基因发生突变而引起。α-珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括胎儿期和成人期表达的2个基因（α2和α1），基因的排列顺序为5’-α2-α1-3’。根据单倍型的情况，可将α地贫分为3类：（1）缺失型α+地贫（-α/），缺失1个α基因；（2）缺失型α0地贫（--/），2个α基因同时缺失；（3）非缺失型α+地贫（αTα/或ααT/），1个α1或α2基因发生点突变或少数几个碱基的缺失。中国现已发现至少19种α-珠蛋白基因大片段缺失和38种α-珠蛋白基因点突变。其中，6
种α-珠蛋白基因的突变：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αWSα/（HBA2：c.369C>G）、αQSα/（HBA2：c.377
T>C）；αCSα/（HBA2：c.427T>C）占患病人群总数的98%。
α-地贫基因型和临床分型的关系已经基本阐明。α-地贫的表型严重程度随着功能性α-珠蛋白基因的减少而加重：（1）1个α-基因缺失或点突变（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα），称为静止型α-地贫，通常不贫血，血液学表现为小细胞低色素；（2）2个α-基因缺失或复合-α基因点突变，或点突变，其基因型为--/αα或-α/-α或-α/ααT或αTα/-α或αTα/αTα，称为轻型α-地贫，临床表现为不贫血或轻度贫血，血液学检查有小细胞低色素特征；（3）3个α-基因缺失或复合α基因点突变，基因型为--/-α或--/αTα，称为中间型α-地贫，又称Hb
H病，患者有轻至重度贫血。某些基因型为αTα/αTα的病例（如αCSα/αCSα、αQSα/αQSα和αCSα/αQSα）也表现为Hb
H病。通常，--/αTα的非缺失型
Hb
H病较单纯缺失型Hb
H病（--/-α）的临床表现更为严重，特别是基因型为--/αCSα或--/αQSα的Hb
H病患者，贫血程度较为严重；（4）4个α-基因缺失，其基因型为--/--，称为重型α-地贫，又称Hb
Bart’s胎儿水肿综合征，此类个体一般无法存活到出生或分娩后半小时内死亡。
β-地贫是由于β-珠蛋白基因发生突变而引起，以点突变为主，少数为缺失型。β-珠蛋白基因簇位于11p15.3，包括2个成人期表达基因（β和δ），基因的排列顺序为5’-δ-β-3’。根据β-珠蛋白链合成量的程度，可将β-地贫分为3类：（1）β0地贫，β-珠蛋白链完全不能合成，其所在的等位基因称为β0地贫等位基因；（2）β+地贫，β-珠蛋白链合成减少，其所在的等位基因称为β+地贫等位基因；（3）β++地贫，又称沉默型β-地贫，β-珠蛋白链合成轻微减少。中国已至少报道84种β-珠蛋白基因点突变和11种β-珠蛋白基因缺失。其中，6种点突变：HBB：c.126_129delCTTT，HBB：c.52A>T，HBB：c.-78A>G，HBB：
c.79G>A，HBB：
c.316-197C>T和HBB：
c.216_217insA占了全部突变类型的90%以上。
β-地贫的临床表型可分为4种：（1）静止型β-地贫，基因型为β++/βN，血液学表型正常或临界，一般只能通过分子诊断识别；（2）轻型β-地贫，基因型为β0/βN或β+/βN，临床表现为小细胞低色素和HbA2值升高；（3）中间型β-地贫，基因型为β+/β+或β+/β0，表型变异范围大，可从轻度贫血到中度贫血，多于幼儿期出现中度贫血；（4）重型β-地贫，基因型为β+/β0或β0/β0，通常伴有严重贫血，需要定期输血才能存活。患儿出生时无症状，常于婴儿期（3-12月龄）发病。如不治疗，患儿多于5岁前死亡。此外，中间型的分子基础较为复杂，显性β-地贫突变的杂合子（βD/βN），合并α-地贫突变的β-地贫突变纯合子（β0/β0），或合并α-珠蛋白三联体的β-地贫突变杂合子（β0/βN或β+/βN），也会显示中间型的表型。
2018年发布的《重型β-地中海贫血的诊断和治疗指南》明确规定：对于重型β-地中海贫血的诊断，有条件者均应进行基因诊断，基因型为纯合子或双重杂合子为确诊本病的指标。2018年发布的《儿童非输血依赖型地中海贫血的诊治和管理专家共识》也明确规定：地贫基因检测为非输血依赖型地贫的诊断依据之一。
另外，国家卫生健康委员会发布的相关文件要求：为减少重型地贫患儿出生，在我国地贫高发省份实施地贫防控试点项目。主要流程包括：（1）对新婚夫妇和计划怀孕夫妇在怀孕前或孕期进行血常规初筛；（2）对夫妇一方或双方血常规检查结果阳性的夫妇进行血红蛋白分析复筛；（3）对血红蛋白分析复筛结果均为阳性的夫妇，取其抗凝静脉全血进行相应的α+β地贫基因检测；（4）综合夫妇双方病史询问、地贫筛查和基因检测结果，判定为高风险夫妇。对高风险夫妇进行追踪，及时了解受检妇女怀孕情况，指导女方在怀孕后适宜时期接受产前诊断。产前诊断的对象为胎儿，样本类型为胎儿的绒毛、羊水和脐带血，检测项目为相应的地贫基因检测。
综上，结合该类产品临床使用的实际情况，本指导原则的预期用途可为：用于体外定性检测人外周静脉全血或胎儿羊水等样本中基因组DNA的α-和/或β-地贫相关基因，用于α-和/或β-地贫的辅助诊断（遗传诊断），地贫高风险夫妇的评估，或胎儿的产前遗传诊断等。
结合该类产品在中国注册的实际情况以及当前的认知，本指导原则仅对“α-和/或β-地贫的辅助诊断（遗传诊断）”预期用途的相关内容进行了详细阐述。针对其他预期用途，本指导原则仅对部分内容进行了阐述，申请人应根据产品特性，对本指导原则未涉及的内容进行补充并做出相应评价。
本指导原则的技术要求是基于PCR探针法方法建立的，对于其他分子生物学检测技术（如：PCR-反向点杂交法和gap-PCR法等），可能部分要求不完全适用或本文所述技术指标不够全面，申请人可以根据产品特性对不适用部分进行或补充其他的评价和验证，但需阐述不适用的理由，并验证替代方法的科学合理性。
本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。
二、注册申报资料要求
（一）综述资料
综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及国内外同类产品上市情况介绍等内容。其中，同类产品上市情况介绍部分应着重从方法学、检验原理、检测的突变类型以及临床意义等方面详细说明申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的主要区别。
综述资料应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（原总局令第5号，以下简称《办法》）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（原总局公告2014年第44号），以下简称《44号公告》的要求。
（二）主要原材料的研究资料
主要原材料研究资料包括主要反应成分、对照品（质控品）及企业参考品的研究资料。
1.此类产品的主要反应成分一般包括人基因组核酸提取/纯化试剂、检测所需引物、探针、酶、dNTPs、反应缓冲液等。申请人应提交相关原材料的选择、制备和质量标准等的研究资料。如为申请人自制，应提交详细的工艺稳定性研究资料；如为外购，还应提交供应商筛选资料以及供应商提供的原材料质量检定报告。
1.1
核酸提取/纯化试剂（如有）的主要组成、原理介绍及相关的验证资料。
1.2
引物、探针
申请人应详述引物、探针的设计原则，提供引物、探针核酸序列、模板核酸序列及两者的对应情况。建议设计多套引物探针以供筛选，针对待测位点的特异性等进行评价，选择最佳设计，并提交详细的筛选研究数据。
申请人应针对选定的引物、探针原材料进行质量评价，一般包括：分子量、纯度（HPLC等）、浓度、探针荧光标记基团的激发波长和发射波长，以及功能性试验等，并依据评价结果建立合理的质量标准。
1.3酶
酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申请人应针对各种酶的活性进行验证，提交功能性试验资料，并确定酶的质量标准。
DNA聚合酶应具有DNA聚合酶活性，无核酸内切酶活性，具热稳定性。UDG/UNG应具有水解尿嘧啶糖苷键的活性，无核酸外切酶及核酸内切酶活性。
1.4脱氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）
包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；应提交对其纯度、浓度、保存稳定性等的验证资料，以及功能性试验资料，并确定质量标准。
2.对照品（质控品）
试剂盒的质控体系通过设置各种试剂盒对照品（质控品）来实现。阳性对照应至少包括代表性的突变位点和突变类型。阴性对照可以是含有野生型序列的核酸溶液。空白对照为不含核酸的溶液。
如该类产品所采用的方法学和检验原理显示：无论检测何种样本（野生型、杂合突变和纯合突变），其反应体系均可报出核酸序列结果，均可对管内抑制导致的假阴性结果进行质量控制，则无需另外设置内标；否则，试剂盒应另外设置内标。
对照品可采用人基因组DNA、细胞系或质粒等。空白对照应参与样本核酸的平行提取。申请人应提供对照品原料选择、制备、定值过程等的详细研究数据，并对其检测结果做出明确的范围要求。
3.企业参考品
企业参考品主要包括阳性参考品、阴性参考品、检测限参考品和精密度参考品等。申请人应提交企业参考品的原料选择、制备方法、基因序列确认及检验标准的详细研究资料等。
3.1
阳性参考品：可采用临床样本或其核酸溶液，如采用临床样本，则样本类型应与待测样本一致。应至少包含所有检测位点的杂合型样本，同时尽量纳入纯合突变型样本。对于某些稀有基因型，也可采用细胞系或质粒。
3.2
阴性参考品：应包括野生型临床样本或其核酸溶液，以及易产生交叉反应的同源序列样本，同时应尽量包含检测范围外其他检测位点的样本等。
3.3检测限参考品可选择最低检测限浓度（例如：95%检出率水平）或接近最低检测限浓度（例如100%检出率水平）的临床样本或其核酸溶液，至少包含所有检测位点的杂合型样本。
3.4
精密度参考品应至少包括低浓度杂合突变型临床样本或其核酸溶液，应至少包括代表性的突变位点和突变类型，且在每一反应体系均有分布。
目前，该类产品已有国家参考品，对于申报产品所声称的检测位点，企业参考品的要求应不低于国家参考品。
（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料
主要生产工艺研究资料包括工作液配制（引物、探针浓度、酶浓度、dNTPs浓度、缓冲液离子浓度等）、分装和冻干（如有）、荧光标记（如有）等工艺过程的描述及确定依据。生产过程应对关键参数进行有效控制，可采用流程图方式描述生产工艺，标明关键工艺质控步骤，并详细说明该步骤的质控方法及质控标准。
反应体系研究指反应条件的选择确定过程，包括样本采集、预处理（如有）、样本用量、试剂用量、核酸提取纯化步骤、PCR反应条件、阈值循环数（Ct值）等的确定。
不同适用机型的反应条件如有差异应分别提交。
（四）分析性能评估资料
申请人应针对下述各项分析性能提交详细的评估资料，包括试验地点、适用仪器、试剂规格、批号、试验方法、试验样本（类型、来源、数量、处理方法、基因型和浓度确认等）、可接受标准、统计方法、试验数据及结论等。分析性能评估的实验方法可以参考国内外有关体外诊断产品性能评估的指导原则。
每项性能评估应尽量采用与适用样本类型一致的临床样本，对于某些稀有基因型，也可采用细胞系等。
1.核酸提取/纯化性能（如有）
在进行靶核酸检测前，应有适当的核酸提取/纯化步骤。该步骤应最大量分离和纯化目的核酸并尽可能去除PCR抑制物。无论检测试剂是否含有核酸提取/纯化组分，申请人都应对配套使用的核酸提取/纯化方法的提取效率和提取核酸纯度、浓度等做充分的验证，并评价该方法能否满足该类产品的要求。
2.检测准确性
建议采用若干份临床样本验证该类产品的检测准确性，样本类型与说明书声称的样本类型一致。样本应涵盖野生型、所有检测位点的杂合突变型，同时尽量纳入纯合突变型。对于某些稀有基因型，也可采用细胞系或质粒。
3.最低检测限
该类产品的最低检测限可定义为：在满足一定的检测准确性和精密度的条件下，能够检出目标序列的最低人基因组DNA的浓度。可采用梯度浓度的人基因组DNA样本进行多次重复检测，确定适当检出率水平（如：95%）下的最低人基因组DNA浓度。检测限评价建议采用临床样本或细胞系，并至少包含所有检测位点的杂合突变型。应明确临床样本或细胞系与人基因组DNA浓度的对应关系。
4.分析特异性
4.1
应针对同源序列或检测范围外基因和位点进行交叉反应验证，说明交叉反应样本的制备方法、核酸序列确认方法，提交详细的验证资料。
4.2
应针对可能的内源和外源性干扰物进行干扰试验研究。内源干扰物主要涉及血脂、胆红素、血红蛋白和白蛋白、母体细胞的干扰等，外源干扰物主要包括血液样本采集可能用到的抗凝剂和常用药物等。
干扰试验可通过在临床样本中人工添加干扰物质的方式，评价干扰物质对目标序列检测的影响，也可直接采集暴露于干扰因素后的受试者样本，进行干扰试验评价。建议申请人在每种干扰物质的潜在最大浓度（“最差条件”）条件下进行评价；如有干扰，应确定不产生干扰的最高浓度。
5.精密度
精密度评价应采用临床样本进行试验，试验操作完全按照说明书执行，包含核酸提取/纯化等步骤（如有）。应对每一反应体系进行精密度评价，并至少覆盖代表性的突变位点和突变类型。
精密度评价需满足如下要求：
5.1对可能影响检测精密度的主要因素进行验证，除检测试剂本身外，还包括分析仪器、操作者、地点、时间、检测轮次和试剂批次等。
5.2设定合理的精密度评价周期，对批内/批间、日内/日间以及不同操作者之间的精密度进行综合评价。如有条件，申请人应选择不同的实验室进行重复实验以对室间重复性进行评价。
5.3用于精密度评价的临床样本至少设置低浓度和中/高浓度水平。
5.4精密度指标可设置为CV等（如有），申请人应对精密度指标评价标准做出合理要求。
（五）阳性判断值确定资料
建议纳入一定数量的临床样本，应包括所有检测位点的各种基因型（野生型、杂合突变型，同时尽量纳入纯合突变型），采用受试者工作特征（ROC）曲线或其他合理方法确定阳性判断值。
如试剂判读存在灰区，应解释说明灰区范围的确定方法。
对于某些检测方法学，阳性判断值研究可能不适用，申请人应说明理由。
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料主要包括申报产品的稳定性研究和适用样本的稳定性研究两部分。前者主要包括申报产品的实时稳定性、开瓶/复溶稳定性、运输稳定性及冻融次数限制的研究等；后者则是指适用样本的保存条件和保存时间等的研究。
实时稳定性研究应采用至少三批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后，选取多个时间点进行产品性能评价，从而确定产品保存条件和有效期。
如核酸提取液可保存，还需对核酸提取液的保存条件和保存时间进行研究。
（七）临床试验
应满足《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》（原国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号）的要求，如相关法规、文件有更新，临床试验应符合更新后的要求。下面仅说明该类产品临床试验中应关注的重点问题。
1．针对“α-和/或β-地贫的辅助诊断（遗传诊断）”预期用途
1.1
临床试验机构及人员
申请人应根据产品特点及预期用途，综合不同地区人种和流行病学背景等因素，选择不少于3家（含3家）符合法规要求的临床试验机构开展临床试验。
1.2
临床试验适用人群和临床样本
具有地贫症状和/或体征，或血液学表现为小细胞低色素的疑似地贫患者和携带者；需与地贫进行鉴别诊断的其他疾病患者，如：缺铁性贫血、铁粒细胞性贫血或先天性红细胞生成异常性贫血等。
临床试验所用样本应为抗凝外周血样本（基因组DNA非临床样本）。临床样本的采集、处理、保存和提取等应分别满足申报产品说明书、对比试剂说明书（如适用）及第三方试剂说明书（如适用）的相关要求。
1.3临床试验方法
1.3.1已有同类产品上市的申报产品
对于已批准的α-地贫突变和β-地贫突变，原则上选择已上市同类产品作为对比试剂，评价申报产品的临床检测性能。
1.3.2无同类产品上市的申报产品
1.3.2.1
如新突变位点的临床意义已获行业认可（如：国内相关指南或专家共识），且上述认可基于充分的中国人群的临床数据，则临床试验可选择Sanger基因测序（针对新的点突变）或临床普遍使用的其他公认方法（针对其他类型的新突变位点，如缺失）作为对比方法，评价新突变位点的临床检测性能。除此之外，还应提交新位点临床意义已获行业认可的相关证据，该部分资料可不纳入临床方案和报告。
1.3.2.2
如新突变位点的临床意义未获行业认可，则临床试验应包括两个目的，新突变位点的临床检测性能评价和临床意义评价。新突变位点的临床检测性能评价可参考1.3.2.1；新突变位点的临床意义评价应提交基于中国人群的充分的临床证据，证明基因型与表型的关系，如：随访或其他可证明基因型与表型关系的临床验证资料。
1.4最低样本量和阳性例数
临床试验样本量应采用适当的统计学方法进行估算，并详细描述所使用统计方法及各参数的确定依据。
1.4.1
临床检测性能评价的样本量估算
临床检测性能评价的样本量估算可分为以下几种情况。
对于常见突变位点，建议采用单组目标值法分别估算每个突变位点临床试验的最低样本量，通过阳性符合率计算所需阳性样本的例数，通过阴性符合率计算所需阴性样本的例数，同时考虑脱落情况，估算最低样本总量。阳性符合率和阴性符合率的目标值（临床可接受的最低标准）建议均不低于95%。
对于罕见突变位点，阴性样本的例数可根据上述方法进行估算，阳性样本则应保证一定的例数。
对于极其罕见的、且有确切临床证据证明其临床意义的突变位点，阴性样本的例数可根据上述方法进行估算，阳性样本的例数则应结合临床证据确定。
1.4.2
新位点临床意义评价的样本量估算
新位点临床意义评价的样本量估算，建议采用抽样调查公式或其他合理方法进行估算。
2.针对“地贫高风险夫妇的评估”和“胎儿的产前遗传诊断”预期用途
针对上述两个预期用途，本指导原则仅对部分内容进行了阐述，申请人应根据产品特性，充分考虑本指导原则未涉及的内容，设计科学合理的临床试验并进行评价。
2.1临床试验机构和人员
如申报产品的预期用途为胎儿的产前遗传诊断，除满足法规要求外，临床试验机构还应取得产前诊断技术服务资质。临床试验人员应为经过专门培训的取得资质的人员。机构和人员应遵循《产前诊断技术管理办法》《母婴保健专项技术服务许可及人员资格管理办法》，机构应取得《母婴保健技术服务执业许可证》，人员应取得《母婴保健技术考核合格证书》。
2.2
临床试验适用人群和临床样本
如预期用途为地贫高风险夫妇的评估，则适用人群为：地贫表型筛查阳性的育龄人群。地贫表型筛查阳性的育龄人群可根据国家卫生健康委员会和地贫高发地区相关政策确定。
如预期用途为胎儿的产前遗传诊断，则适用人群为：地贫高风险夫妇的胎儿。地贫高风险夫妇的确定可参考国家卫生健康委员会等相关文件。
临床试验所用样本应为胎儿羊水等临床样本（基因组DNA非临床样本）。临床样本的采集、处理、保存和提取等应符合国家卫生健康委员会等相关文件的要求，并满足产品说明书的要求。
2.3
最低样本量和阳性例数
针对每种不同的预期用途，应分别采用合理方法估算最低样本量。同一预期用途的不同样本类型（羊水和脐带血等），也应分别采用合理方法估算最低样本量。
3.如有其他预期用途，也应设计科学的临床试验，提供充分的证据，证明其预期用途。
4.不同预期用途的通用要求
4.1
临床试验方法、数据及统计分析
4.1.1应在临床试验方案或报告中明确申报产品、对比试剂和第三方试剂的试验方法。
4.1.2临床试验病例总结表应以列表方式表示，包括申报产品的结果、对比试剂的结果、第三方试剂的检测结果（如有）、临床诊断、年龄和性别等。
4.1.3以交叉表分别总结两种试剂的定性检测结果，选择合适的统计方法进行统计分析，以验证两种试剂检测结果的一致性。
4.1.4
结果差异样本的验证
在数据收集过程中，对于两种试剂检测结果不一致的样本，采用合理方法进行复核，并对差异原因进行分析。如无需复核，应说明理由。
4.2
临床试验方案
各临床试验机构的方案设置应基本一致，且保证在整个临床试验过程中遵循预定的方案，不可随意改动。整个试验过程应在临床试验机构的实验室内并由该实验室的技术人员操作完成，申报单位的技术人员除进行必要的技术指导外，不得随意干涉实验进程。
试验方案应确定严格的入选/排除标准，任何已入选的样本被排除出临床试验都应记录在案并明确说明原因。在试验操作过程和结果判定时，应采用盲法以保证试验结果的客观性。各临床试验机构选用的对比试剂/方法应保持一致，以便进行合理的统计学分析。另外，申报产品的样本类型不应超越对比试剂/方法对样本类型的要求。
4.3临床试验报告
应对试验的整体设计及各个关键点给予清晰、完整的阐述，应该对整个临床试验实施过程、结果分析、结论等进行条理分明的描述，并应包括必要的数据和统计分析方法。
（八）产品技术要求
产品技术要求应符合《办法》、《44号公告》和《医疗器械产品技术要求编写指导原则》（原国家食品药品监督管理总局通告2014年第9号）的相关要求。该类产品作为三类体外诊断试剂，应将主要原材料、生产工艺及半成品要求等内容作为附录附于技术要求正文后。
目前，该类产品已有行业标准，产品技术要求的相关要求应不低于行业标准的要求。
（九）产品检验报告
根据《办法》的要求，第三类体外诊断试剂申请注册时应提交连续三个生产批次样品的检验报告。目前，该产品已有国家参考品，产品检验应满足国家参考品的要求。
（十）产品说明书
产品说明书应满足《体外诊断试剂说明书编写指导原则》（原国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号）的要求，产品说明书的所有内容均应与申请人提交的注册申报资料的相关研究结果保持一致。下面对该类产品说明书的重点内容进行阐述。
1.【预期用途】应至少包括以下几部分内容：
1.1本产品用于定性检测人xx样本基因组DNA中的α-和/或β-地贫xx突变，用于：α-和/或β-地贫的辅助诊断（遗传诊断），地贫高风险夫妇的评估，或胎儿的产前遗传诊断。
1.2介绍地贫相关的临床背景信息及实验室诊断方法等，介绍被测靶标（突变位点）的相关情况。
2.【主要组成成分】
2.1说明试剂盒包含组分的名称或数量等信息，说明不同批号试剂盒中各组分是否可以互换。
2.2试剂盒中不包含但对该项检测必须的组分，企业应列出相关试剂/耗材的名称及其他相关信息。
2.3如果试剂盒中不包含用于核酸提取纯化的试剂组分，则应在此注明经过验证后配合使用的商品化核酸提取纯化试剂盒的生产企业、产品名称以和医疗器械备案号（如有）等详细信息。
3.【检验原理】
3.1对试剂盒的被测靶标进行详细描述（基因位置、突变位点及相关特征等），对试剂盒所用探针、引物或突变的判定等进行详细介绍；对不同样本反应管组合、对照品设置及荧光信号检测原理等进行介绍。
3.2试剂盒技术原理的详细介绍，建议结合适当图示进行说明。如反应体系中添加了相关的防污染组分（如UNG酶），也应对其作用机理进行适当介绍。
4.【储存条件及有效期】
说明试剂盒的效期稳定性等，应明确具体的储存条件及有效期等信息。
5.【样本要求】
样本的采集、处理、运送和保存：明确样本采集、核酸提取纯化前的处理（如离心和洗涤等）、保存条件及期限以及运送条件等。冷藏/冷冻样本检测前是否需要恢复至室温，冻融次数的限制等。
6.【适用仪器】
所有适用的仪器型号，并提供与仪器有关的重要信息以指导用户操作。
7.【检验方法】
详细说明实验操作的各个步骤，包括：
7.1实验条件：实验室分区、实验环境的温度、湿度和空调气流方向控制等注意事项。
7.2试剂配制方法和注意事项。
7.3详述核酸提取纯化的条件、步骤及注意事项（如适用），对核酸提取纯化环节进行合理质控，明确提取核酸的浓度纯度等质量要求。
7.4扩增反应前准备：加样体积、顺序等。
7.5
PCR各阶段的温度、时间设置、循环数设置或相应的自动化检测程序及相关注意事项。
7.6仪器设置（如适用）：特殊参数、探针的荧光素标记情况、对待测样本及其他对照品的荧光通道选择等。
8.【检验结果的解释】
结合对照品、样本管检测结果以及检测类型，以列表形式详述所有可能出现的结果及相应的解释。如存在检测灰区，应详述对于灰区结果的处理方式。
9.【检验方法的局限性】
9.1申报产品仅对下述检测类型xx进行了验证。
9.2有关假阴性结果的可能性分析
9.2.1不合理的样本采集、运送及处理或核酸过度降解均有可能导致假阴性结果。
9.2.2未经验证的其他干扰或PCR抑制因子等可能会导致假阴性结果（如有）。
10.【产品性能指标】简述以下性能指标：
10.1最低检测限：简单介绍最低检测限的确定方法，并明确最低检测限结果。
10.2阳性/阴性参考品符合率。
10.3精密度：简单介绍精密度的确定方法，并明确精密度结果。
10.4分析特异性
10.4.1交叉反应验证：同源性序列等交叉反应验证。
10.4.2干扰物质验证：样本中常见干扰物质对检测结果的影响。
10.5对比试验研究（如有）：简要介绍对比试剂（方法）的信息、所采用的统计学方法及统计分析结果。
11.【注意事项】应至少包括以下内容：
11.1如该产品含有人源或动物源性物质，应给出具有潜在感染性的警告。
11.2临床实验室应严格按照《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》现行有效版本等有关分子生物学实验室、临床基因扩增实验室的管理规范执行。
三、起草单位
国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心。
第四篇：酶联免疫法检测试剂注册技术审查指导原则
附件1
酶联免疫法检测试剂注册技术审查指导原则
一、前言
本指导原则主要针对酶联免疫类检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制等环节提出指导性技术要求。
本指导原则系对酶联免疫法检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需详细阐述其理由及相应的科学依据。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其相关内容也将进行适时的调整。
二、适用范围
本指导原则适用于有关病原微生物检测的第三类体外诊断试剂的注册技术审查。其他酶联免疫法检测试剂（如作为二类管理的体外诊断试剂）可参考本指导原则执行。
三、基本要求
（一）基本原则
1.研制、生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准，并应符合有关法规的要求。— 2 — 2.试剂生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》；同时，应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行；还应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。企业应对试剂的使用范围做出明确规定，并经国家药品监督管理部门批准。
3.诊断试剂的研制应当按照科学、规范的原则，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。
4.试剂在研制、生产过程中所用的各种材料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。
5.生产和质量控制的总体目标：保证试剂使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。
（二）原材料质量控制 1.主要生物原料
与产品质量最密切相关的生物原料主要包括各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科。这类原料可用于包被酶标反应板、标记相关酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）、中和反应用抗原或抗体、制备校准品（标准品）等。使用前应按照工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以保证其达到规定的质量标准。主要生物原料若为企业自己生产，其工艺必须相对稳定；若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果主要原料（包括工艺）或其供应商有变更，应依据国家相关法规的要求进行变更申请。
主要生物原料的常规检验项目一般包括：（1）外观
肉眼观察，大部分生物原料为澄清均一的液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒；或者为白色粉末，不含其他颜色的杂质；特殊生
— 3 — 物原料应具备相应外观标准。
（2）纯度和分子量
主要经SDS-PAGE 电泳后，利用电泳扫描仪进行分析，也可用其他适宜的方法，如高效液相法等。根据所检测生物原料的分子量选择适宜聚丙烯酰胺凝胶浓度进行电泳，一般每个电泳道加样量为5μg，电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝染色或银染法染色。染色后的凝胶用电泳扫描仪分析原料的纯度和分子量，纯度应达到相应的质量标准，分子量大小应在正确的条带位臵。
（3）蛋白浓度
蛋白浓度可通过Lowry法、280nm 光吸收法、双缩脲法或其他适宜的方法进行检测。
（4）效价
效价的测定一般根据蛋白含量测定结果，通过倍比稀释法进行。效价应达到规定的要求。
（5）功能性实验
功能性实验是指生物原料用于试剂盒实际生产中的情况，一般考查使用该原料的试剂盒的灵敏度、特异性和稳定性等，并比较其与上批次原料的相关性。
2.生物辅料
生物辅料一般指在生产过程中作为蛋白保护剂用途的一类生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。这些生物原料的质量标准应符合2000年版的《中国生物制品主要原辅材料质控标准》规定的标准要求，并且要适合于本企业的生产。建议作以下检验：
（1）牛血清或羊血清
外 观：为浅黄色澄清稍粘稠的液体，无溶血或异物。无菌试验：将血清直接37℃放臵7天，明亮处观察，不得出现混浊或— 4 — 沉淀。
总蛋白含量：用双缩脲法测定，蛋白含量≥32mg/ml。
球蛋白含量：取待测血清1ml，采用饱和硫酸铵法进行沉淀，沉淀溶于0.85%氯化钠溶液，至1ml，用Lowry方法测定，蛋白含量应≤2mg/ml。
（2）牛血清白蛋白：
外 观：应为浅黄色、黄色或乳白色的冻干粉末，无吸潮，无结块，无肉眼可见的其它杂质颗粒。
溶解性：将牛血清白蛋白配成10%溶液，在1826℃时，溶解时间应≤15分钟，pH值应为6.57.1。
总蛋白含量：用双缩脲法，其标准为≥95％。
总蛋白中的牛血清白蛋白（BSA）含量：采用硝酸纤维素膜电泳法，其标准为≥95%。
BSA的净含量：总蛋白含量乘总蛋白中的BSA含量，其标准为≥90%。（3）酪蛋白：
应符合生产所需的质量标准。（4）标记用酶
应在产品的质量标准中明示所使用的标记用酶的名称（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等），同时应根据不同生产厂家的检验方法和质量标准进行检验，酶的纯度RZ值（OD403nm/OD280nm）应大于3.0。
对于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，还应进行功能性实验，即以其为原料配制一定浓度的稀释液作为样品，进行酶联免疫测定，均不能出现非特异性反应。
生物辅料的供应商同样要求相对固定，不得随意变更供应商。3.化学原材料
化学原材料的质量标准，包括外观、一般盐类检测、溶液pH值、溶解情况、干燥失重、炽灼残渣等，均应符合《中国生物制品主要原辅材
— 5 — 料质控标准（2000年版）》分析纯级别的要求，并且要适合于本企业的生产。
主要化学原材料的供应商要求相对固定，不得随意发生变更。化学原材料在购入时，原材料的生产商必须提供该批次化学原材料的质量保证材料和质量检验报告。
4.其他物料（1）酶标板 ①外观
明亮处用肉眼观察板条的外观质量，如有欠注、飞边、肮脏、表面光洁度差，底部有波纹及划伤等应剔除。②吸附能力和精密性 采用合适的方法进行检验。
一般用一定浓度的正常人免疫球蛋白G(IgG)包被板条，再用一定浓度的抗人IgG酶结合物吸附，通过显色反应，使用酶标仪读数，计算CV值。CV值结果应符合相关产品的功能性质量标准，一般批内CV≤5％，批间CV≤10％。
（2）液体试剂装量瓶
包括阴阳性对照、样品稀释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液等液体组分，均应有相应的装量瓶，并建立相应的质量控制标准，如不同的液体试剂所用的装量瓶规格、装量瓶的颜色、瓶盖的颜色等。
（3）其他材料
包括试剂瓶标签、粘胶纸、铝箔袋、衬垫、可密封塑料袋、说明书、干燥剂和包装外盒等，应参照国家食品药品监督管理局发布的《体外诊断试剂说明书编写指导原则》和《医疗器械说明书、标签和包装标识管理规定》建立相应质量控制标准。— 6 — 5.企业质控品
企业质控品一般包括阴/阳性参考品的符合率、灵敏度（最低检出量）、精密性、钩状效应（hook效应）等质控样品，对于定量检测试剂，还包括线性质控品样品。如该产品具有国家标准品或参考品，应使用国家标准品（参考品）进行标化；若该诊断试剂没有国家标准品（参考品），则企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
企业质控品的基质应与诊断试剂的待测样品的基质基本一致，如待测样品为血清/血浆，质控品基质也应为血清/血浆。
（三）试剂盒各组分的生产
酶联免疫法检测试剂主要组分的生产包括酶标记物的制备及滴配过程（酶工作液浓度确定）、各种工作溶液的配制、包被酶标反应板、分装及包装等步骤；并通过产品的半成品检验和成品检验两个质控过程来保证其质量符合规定。
1.各种工作液的配制
酶联免疫诊断试剂研制生产过程中所用的工作液一般包括：包被液、封闭液、阴性阳性对照、样品稀释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液、终止液等，对定量检测试剂，还包括标准品（或校准品）溶液。若阴性、阳性对照或其他液体组分涉及生物安全性问题，制备时应在相应的生物安全实验室完成。
各种工作液在配制过程中应严格按质量标准中的配方进行配制，充分混匀确保液体中的各种成分均匀，同时进行相应的质量检验并达到质量标准后，方可使用或分装。对于定量检测试剂，其标准品（或校准品）溶液应具有量值溯源性。
应对配制过程及配制的液体进行的质量控制，主要包括酶结合物的
— 7 — 功能性实验及稳定性；各种溶液的外观、pH值等；酶作用底物应测定在无相应酶的情况下自身显色的情况，并制定合理的限定指标；终止液应对其终止酶促反应的能力进行测定。
2.包被酶标反应板
包被前应对酶标反应板进行质量检验，如尺寸、外观、包装、吸附性能、精密性等，并记录酶标反应板的批号、数量、标识。酶标反应板经检验合格后方能用于包被。不同批号的板条不能混用。
选择经检验合格的包被原料（如抗原、抗体等），经一定的方法确定最佳包被浓度和酶结合物工作浓度，按照诊断试剂的生产规程，配制包被缓冲液、封闭液，经检验合格后，包被酶标反应板，经干燥后，已包被的酶标反应板用铝箔纸封闭（内臵干燥剂），保存于28℃。
应对包被过程进行相应的质量控制，如包被用原料（抗原或者抗体等生物活性原料）的质量检验、包被液和封闭液的质控（如配方、外观、pH值）、包被过程的监控（包括包被和封闭的体积、温度、时间等）、包被均一性检验、干燥过程的监控等。
3.分装和包装
样品稀释液、洗涤液、酶结合物或酶稀释液、底物或底物缓冲液等溶液应严格按照质量标准中的量进行过滤后再分装，分装量的误差应小于5%。
分装及包装均应按照相应的标准操作规程要求进行。包装前，应严格检查试剂盒的品名、批号等，核对各试剂盒各组分的数量，并在关盒前进行复核。
（四）质量控制 1.半成品质量控制（1）半成品抽样
检验人员按试剂的批号，根据抽样申请单抽取规定数量的半成品各— 8 — 组分，作号标记、待检。
（2）半成品检验
根据试剂盒的企业标准或者制检规程进行半成品的检验。半成品检验，一般使用国家标准品（参考品）或经国家标准品（参考品）标化后的企业参考品。若某类试剂没有国家标准品（参考品），则使用企业参考品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
检验指标一般包括阴/阳性参考品的符合率、灵敏度（最低检出量）、精密性等，均应达到相应的质量标准要求。对于精密性，一般情况下CV不得高于15％（采用竞争抑制法的诊断试剂CV不得高于20％）。对定量检测试剂，同时应分析其线性相关系数和定量质控品检测结果的准确性。
企业应该对每一批试剂的半成品进行稳定性研究。试剂盒各组分应留样，28℃定期作稳定性考核，同时作37℃热稳定性试验，试验结果应符合产品的质量标准。
2.成品质量控制
产品包装完成后，质检人员根据试剂的批号、实际包装量、抽样申请单的要求进行抽样，同时填写抽样数量和抽样日期，并且由抽样人签名。抽样数量应包括检验用数量和留样数量。质检人员同时应检查相关原始记录。
每一批酶联免疫类检测试剂的试生产量应满足工艺研究、分析性能验证、稳定性研究、临床试验、自测及注册检验等各阶段所需样品量的要求。
（1）成品检验
成品检验时，一般使用国家标准品（参考品）或经国家标准品（参考品）标化后的企业参考品，并达到相应质量要求。若该诊断试剂没有国家
— 9 — 标准品（参考品），则使用企业参考品，企业参考品的制备应有规范的质量控制程序，以保证产品的安全性、有效性及质量可控，其质量应不低于国家食品药品监督管理局已经批准的同类产品的质量。
（2）稳定性试验
在批放行前，每一批试剂应完成37℃热稳定性试验，试验结果应符合产品的质量标准。
四、名词解释
酶联免疫法：是指在酶标板上包被特定的抗原（和/或抗体）后，利用直接或间接的方法与待测样品中的相关抗体（和/或抗原）反应，形成的抗原抗体复合物再与相应的酶标记的抗体和/或抗原进一步反应，经过酶催化底物发生显色反应，由形成的颜色的强弱来判断样本中相应的抗体和/或抗原的存在。
五、参考文献：
1.《中国生物制品规程》（2000年版），化学工业出版社
— 10 —
第五篇：抗人球蛋白检测试剂注册技术审查指导原则（2018年）
附件3
抗人球蛋白检测试剂注册技术审查指导原则
本指导原则旨在指导注册申请人对抗人球蛋白检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本指导原则是对抗人球蛋白检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。如申请人认为有必要增加本指导原则不包含的研究内容，可自行补充。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、范围
抗人球蛋白检测试剂可进行直接抗人球蛋白试验和间接抗人球蛋白试验，主要用于不规则抗体筛查、交叉配血、抗体致敏红细胞的检测等。
本指导原则适用于抗人球蛋白检测试剂，同时适用于不同的检测方法，如试管法、柱凝集法等，但不适用于血源筛查用抗人球蛋白检测试剂。
本指导原则仅包括对抗人球蛋白检测试剂注册申报资料中部分项目的要求，适用于进行产品注册和相关许可事项变更的产品。其他未尽事宜，应当符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）（以下简称《办法》）等相关法规要求。
二、注册申报资料要求
（一）综述资料
综述资料的撰写应符合《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）（以下简称“44号公告”）的相关要求。内容主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性的说明、有关产品主要研究结果的总结和评价以及同类产品在国内外批准上市的情况介绍等内容，其中同类产品上市情况介绍部分应着重从灵敏度、特异性、效价、重复性等方面写明拟申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的异同。
（二）主要原材料研究资料
主要原材料研究资料应包括主要组成成分（抗体、凝胶、玻璃珠等）的选择、制备及其质量标准的研究资料。
1.抗体的选择及质量标准
明确抗体的来源，如为单克隆抗体应明确细胞株、克隆号等内容。提供抗体灵敏度、特异性、效价等基本性能的验证资料。
抗体如为自行生产，提供抗体的详细生产及鉴定过程。
1.1灵敏度：已知抗体效价的临床有意义的血型系统至少7种血型抗体（IgG）的最高稀释倍数的凝集强度不小于1+。
1.2特异性：临床有意义的已知血型系统至少7种，每种选1个抗体（IgG），与对应的抗原阳性细胞均应检测阳性。
与不规则抗体阴性样本检测结果应为阴性。
1.3效价：如采用倍比稀释的方法验证抗人球蛋白试剂的效价，分别采用IgG和/或C3d致敏的细胞或根据厂家确立的研究方法进行验证。
2.填充物的选择：说明填充物如凝胶、玻璃珠的特性，如组成、粒径及其质量控制要求。应提交选择比较过程，提交验证试验资料。
3.填充缓冲液：应说明组成成分，并对外观、性状、pH值等物理指标及功能性进行研究验证。
4.液体试剂稀释液：应说明组成成分，并对外观、性状、pH值等物理指标及功能性进行研究验证。
（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料
1.主要生产工艺介绍，可用流程图方式表示，并简要说明主要生产工艺的确定依据。
2.产品基本反应原理介绍。
3.主要生产工艺过程的研究资料、每一步生产工艺的确认资料及试验数据。如抗体浓度的选择确定过程、凝胶溶胀条件的确定、填充量及填充过程的研究资料，填充应确保均匀无气泡，以及质量控制的要求。
4.主要反应体系的研究资料、每一步反应体系的确认资料及试验数据。
反应体系的设置应符合《全国临床检验操作规程》等公认标准操作规范、指南或标准的要求。如红细胞悬液制备要求及红细胞浓度的确定、用量的要求、孵育时间等；应提交离心条件的研究资料，建议以离心力或固定离心机型号固定转数和时间的方式设置离心条件。
（四）分析性能评估资料
申请人应提交在产品研制或成品验证阶段对试剂进行的所有性能验证的研究资料，对于每项分析性能的评价都应包括具体研究目的、实验设计、研究方法、可接受标准、实验数据、统计方法等详细资料。有关分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，包括实验地点（实验室）、适用仪器、试剂规格、批号、临床样本来源等。分析性能评估的实验方法可以参考国内或国际有关体外诊断产品性能评估的指导原则进行。
产品性能研究所采用的各种仪器、试剂或其他物品如可能均应采用境内或境外已批准上市的产品，如抗体筛查红细胞、血型抗体等。
分析性能评估试验中应明确所有试验每种试剂的用量、试剂红细胞的浓度、采用的试验方法（试管法、柱凝集法、微孔板法等）。所有试验方法应符合配合使用的血型试剂的具体操作要求。
对于抗人球蛋白检测试剂建议着重对以下分析性能进行研究：
1.间接抗人球蛋白试验：
提供临床有意义的血型系统至少7种不规则抗体（IgG）检测灵敏度和特异性的验证资料，明确所检出抗体的抗体效价的具体要求，可参照以下要求进行实验。
1.1灵敏度
与已知抗体效价的血型抗体的最高稀释倍数的凝集强度不小于1+，并且抗体效价不低于试管间接抗人球蛋白法测定结果。
C3d凝集强度≥2+。
1.2特异性
与已知抗体类型的血型抗体对应的O型相应抗原阳性红细胞的反应为阳性。
与已知抗体类型的血型抗体对应的O型相应抗原阴性红细胞的反应为阴性。
与C3d阳性或阴性样本反应为阳性或阴性。
1.3重复性
分别采用IgG性质抗D抗体，IgG性质抗Jka/Jkb抗体，IgG性质抗Fya/Fyb抗体进行重复性验证。
批内重复性采用同一批次检测卡重复进行检测，重复次数不少于10次。
日间重复性采用同一批次检测卡每日重复进行检测，重复天数不少于10天。
批间重复性采用至少三批检测卡进行重复检测。
批内、日间、批间重复性检测结果应基本一致，检测结果凝集强度差异不超过1+。
采用阴性结果的血清重复10次检测，均应出现阴性反应。
1.4干扰
提供溶血、脂血、黄疸干扰的评估资料，应至少采用强、中、弱性质的抗体进行评价。
1.5血清、血浆比对的评估资料。
1.6抗凝剂的适用性研究验证。
1.7采用部分临床样本进行检测灵敏度和特异性的评价，应考虑涵盖肿瘤、血液病、自身免疫病和贫血患者、老人及儿童等病例来源，应包括阳性和阴性病例。
1.8分别进行每个预期用途的完整的性能评估资料，应至少包括50例阳性病例。
2.直接抗人球蛋白试验
使用被不规则抗体和/或C3d致敏的红细胞进行反应，评价产品性能，适用的性能评价内容可以参照间接抗人球蛋白试验。
（五）阳性判断值
给出不同凝集强度的研究方法，并明确不同凝集强度代表的具体意义，并应包含溶血、混合视野双群等情况，明确具体的试验方法、实验步骤，提供不同凝集强度的图例或相片。
（六）稳定性研究资料
稳定性研究资料主要涉及两部分内容，申报试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究。前者主要包括实时稳定性（有效期）、加热稳定性、开瓶稳定性等研究，申请人可根据实际需要选择合理的稳定性研究方案，实验项目应至少包括灵敏度、特异性、重复性等内容。
稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据、具体的实施方案、详细的研究数据以及结论。对于实时稳定性研究，应提供至少三批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的研究资料。
应对样本稳定性进行研究，主要包括室温保存、冷藏和冷冻条件下的有效期验证，可以在合理的温度范围内选择温度点（温度范围），每间隔一定的时间段对储存样本进行全性能的分析验证，从而确认不同类型样本的稳定性。适于冷冻保存的样本还应对冻融次数进行评价。
试剂稳定性和样本稳定性两部分内容的研究结果应分别在说明书【储存条件及有效期】和【样本要求】两项中进行详细说明。
（七）临床试验
临床试验总体要求及临床试验资料的内容应符合《办法》、“44号公告”及《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号）的规定，以下仅结合抗人球蛋白检测试剂的具体特点对其临床试验中应重点关注的内容进行阐述。
1.研究方法
该类试剂已有同类产品上市，按照法规要求应选择境内已批准上市、临床普遍认为质量较好的同类产品作为对比试剂，采用试验用体外诊断试剂（以下称考核试剂）与之进行比较研究试验，证明本品与已上市产品等效。
2.临床试验单位的选择
应选择符合相关法规要求的临床试验机构进行临床试验，不得选择血站进行临床试验。
3.病例选择
临床总病例数应不少于3000例。应采用临床患者样本进行临床研究，供血者样本不得作为临床病例纳入。应包括对检测易产生干扰的病例，尽量选择多种疾病患者样本（如肿瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、儿童（不同年龄段）等。
4.实验过程
无论直接抗人球蛋白试验还是间接抗人球蛋白试验，均应根据产品的预期用途和适用人群分别进行临床试验。
在进行间接抗人球蛋白检测试剂临床试验的过程中除与对比试剂进行比较外，阳性结果应给出不规则抗体的具体鉴定结果。
产品如适用于不同的预期用途（如不规则抗体筛查、抗体致敏红细胞检测、交叉配血等），每种预期用途均应分别进行至少3000例的临床试验，如适用于不规则抗体筛查或抗体致敏红细胞检测等，每种预期用途应分别包含不少于100例阳性病例，如适用于交叉配血相关用途，应包含不少于100例交叉配血不合病例。抗体致敏红细胞检测应根据疾病的种类，分别进行临床试验。
交叉配血使用的供血者样本，最多只能使用两次，交叉配血不得使用血型不合的样本进行实验。
同时应明确配合使用的试剂产品。
5.统计学分析
应进行考核试剂与对比试剂检测结果的阳性符合率、阴性符合率、总符合率的计算，并以四格表的形式进行列表，并对定性结果进行Kappa检验以验证检测结果的一致性。
6.结果差异样本的验证
对于两种试剂检测结果不一致[考核试剂与对比试剂检测结果不一致、与对比试剂凝集强度差异较大（差异2个凝集强度及以上）]的样本，应采用临床上公认较好的第三种同类试剂进行确认试验，同时应给出最终的抗体鉴定结果。
7.临床试验数据记录表应作为临床试验报告附件提交。临床试验数据记录表应列明所有病例的具体临床诊断信息、凝集强度和抗体鉴定结果，如有不符样本应列明第三方确认的结果。
（八）产品风险分析资料
产品风险分析资料应符合“44号公告”的基本要求，并参照相应的行业标准进行风险分析。风险分析中应充分考虑到各种可能影响检测结果的因素，如某些样本（如肿瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在进行抗人球蛋白检测时可能存在一定的干扰、实验过程不规范、有些抗体较弱导致的检测结果不稳定等，申请人应根据这些不确定的因素分析产品应用可能存在的风险。
（九）产品技术要求
申请人应当在原材料质量和生产工艺稳定的前提下，根据产品研制、性能评估等结果，依据国家标准、行业标准及有关文献，按照《医疗器械产品技术要求编写指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第9号）的有关要求，编写产品技术要求。产品技术要求应符合《办法》和“44号公告”的相关规定。
如果拟申报试剂已有相应的国家/行业标准发布，则企业标准的要求不得低于上述标准要求。
产品技术要求的性能指标应至少包括灵敏度、特异性、重复性等。
产品技术要求的附录应包括主要原材料、生产工艺及半成品检定要求。主要原材料应明确抗体来源、克隆号、纯度、效价、特异性以及功能性验证要求，应明确填充物来源及主要特征、质量控制要求，缓冲液应明确组成、pH值等特性及质控要求。主要生产工艺应以流程图形式描述主要生产工艺过程，并明确主要生产工艺的具体条件和质量控制点。半成品检定应明确半成品的检验要求及方法。
（十）产品注册检验报告
根据《办法》要求，首次申请注册的第三类体外诊断试剂产品应在国家食品药品监督管理部门认可的、具有相应承检范围的医疗器械检验机构进行连续三个生产批次样品的注册检验。
（十一）产品说明书
说明书承载了产品预期用途、检验原理、试验方法、检测结果解释以及注意事项等重要信息，是指导实验室工作人员正确操作、临床医生针对检验结果给出合理医学解释的重要依据，因此，产品说明书是体外诊断试剂注册申报最重要的文件之一。产品说明书的格式应符合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号）的要求，境外产品的中文说明书除格式要求外，其内容应尽量保持与原文说明书的一致性，翻译力求准确且符合中文表达习惯。产品说明书的所有内容均应与申请人提交的注册申报资料中的相关研究结果保持一致，如某些内容引用自参考文献，则应以规范格式对此内容进行标注，并单独列明参考文献的相关信息。
以下内容仅对抗人球蛋白检测试剂说明书的重点内容进行详细说明，说明书其他内容应根据《体外诊断试剂说明书编写指导原则》要求进行编写。
1.【预期用途】
1.1写明本试剂用于直接抗人球蛋白试验和/或间接抗人球蛋白试验，主要用于不规则抗体筛查、交叉配血、抗体致敏红细胞的检测（明确疾病类型）等，同时明确不用于血源筛查，仅用于临床检验。
1.2说明与预期用途相关的临床适应症背景情况，说明相关的临床或实验室诊断方法。
2.【储存条件及有效期】
说明试剂的储存条件及有效期、加速稳定性、开瓶稳定性等。
3.【适用仪器】明确具体的离心机和/或孵育器型号（如适用）。
4.【样本要求】
明确溶血、脂血、黄疸样本是否可以使用，或提供使用此类样本的最低要求。依据稳定性研究结果写明样本稳定性。
明确适用的抗凝剂的要求。
明确具体的样本采集、处理方法及过程。
明确红细胞配制使用的LISS液的生产厂家、规格、货号等内容。
5.【阳性判断值】
明确各种试验方法的结果判断方法及标准，并通过不同凝集强度的图例或照片进行详细解释。
6.【检验方法】
明确配合使用的抗体筛查用红细胞的生产厂家、规格、货号等内容。
须明确具体的检验步骤，反应体系的描述应准确且应与研究资料一致，不同的预期用途应分别详细描述实验过程。如配合其他试剂进行试验，需注明试验方法应完全符合配合试剂的试验操作要求。
7.【检验方法的局限性】
未被检出的抗IgG抗体在某些病例中可能有临床意义。
8.【注意事项】
8.1上腔部分或封口处有气泡或液滴的卡，必须在使用前离心。
8.2浓度过高或过低的红细胞悬液会引起异常结果。
8.3在不规则抗体筛查、交叉配血试验中LISS液可以增强抗原抗体的反应，应严格按产品说明书规范使用低离子液。
三、参考文献
1.国家食品药品监督管理总局.体外诊断试剂临床试验技术指导原则（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号）.2014年9月
2.国家食品药品监督管理总局.体外诊断试剂说明书编写指导原则（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号）.2014年9月
3.中国生物制品规程（2000年版）.化学工业出版社
四、起草单位
国家食品药品监督管理总局医疗器械技术审评中心。
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