二苯胺试剂鉴定DNA[范文大全]

第一篇：二苯胺试剂鉴定DNA

二苯胺试剂：鉴定 DＮA。

二苯胺试剂得配制

A 液：1。５ g 二苯胺溶于 1００ mL 冰醋酸中,再加 1５ mL 浓硫酸，用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态，则需加温后待其熔化，再使用。

B 液：乙醛得体积分数为 0、2％得溶液.配制：将 0、1 mＬ B 液加入到 10 ｍL A 液中，现配现用.DＮA 得粗提取与鉴定

实验原理

1、DＮA 在ＮａCl 溶液中得溶解度,就是随着 NａCl 得浓度得变化而改变得。

当ＮaＣl 得物质得量浓度为０、14 ｍol／L 时，DNA 得溶解度最低.利用这一原理,可以使溶解在ＮaＣl 溶液中得ＤＮA 析出。

2、ＤNA 不溶于酒精溶液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得 DNＡ。

3、DＮA 遇二苯胺(沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定 DNA 得试剂。

注意事项

1、步骤 3 析出含 DＮA 得黏稠物中,蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入,不能一次快速倒入。

2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但就是在不同得步骤中玻璃棒得用法不同。

实验用具

鸡血细胞液（５～1０ mL）;体积分数为 95%得冷酒精,蒸馏水，质量浓度为０、１ g/mＬ得柠檬酸钠溶液，物质得量浓度分别为 2 mol/L 与０.015 mol／L 得 NaCl 溶液,二苯胺试剂；烧杯(10０ mL，1 个, ５０ ｍL，５０0 mL，各 2 个)，漏斗，试管（２0 ｍL,２个），玻璃棒,滴管,量筒（1０0 ｍL，1 个），纱布，镊子，滤纸，铁架台,铁环，三角架，酒精灯,石棉网,载玻片，试管夹。

实验原理:

1、析出溶解在 NaC１溶液中得 DＮA。

２、用冷酒精提取出含杂质较少得ＤNA.

３、DNA 在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。

方法步骤:

１．提取细胞核物质:顺时针方向搅拌，稍快,稍重.5 ｍin

2.溶解 DＮA:

3。析出含 DNA 得黏稠物：蒸馏水３００mＬ,逆时针方向搅拌，缓慢

4。过滤：取黏稠物

５。再溶解:顺时针方向搅拌，较慢。３ ｍin

6。过滤:取滤液。

7．提取出含杂质较少得 DNA,逆时针方向搅拌，稍慢.5 min

８．DNA 得鉴定:沸水浴５min

【实验十二】DNA 得粗提取与鉴定

实验原理

DNA 在氯化钠溶液中得溶解度,就是随着氧化钠得浓度得变化而改变得。当氯化钠得物质得量浓度为 2 mol/L 时，DNＡ得溶解度最大，浓度为 0.１4 mol/L 时,ＤNA 得溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中得 DNA 析出.DNA 不溶于９5％得酒精溶液,但就是细胞中得某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少得 DNA。

DNA 中含有脱氧核糖,能与二苯胺(沸水浴)反应生成蓝色物质，因此,二苯胺可以作为鉴定 DNA 得试剂。

目得要求 1、学会 DNA 得粗提取与鉴定得方法。

２、观察提取出来得 DNA 物质得颜色与形状。

材料用具

材料：活鸡或鲜血鸡血。

仪器:离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100 mL,ｌ个),烧杯（10０ mL，l 个,50 mL、5０0 mL 各 ２个)，试管（２0 mL,2 个）,漏斗,试管夹,纱布.试剂:酒精得体积分数为 95%得溶液（实验前置于冰箱内冷却 24 h),蒸馏水,柠檬酸钠得质量浓度为 0。1g/mＬ得溶液,氯化钠得物质得量浓度分别为 2 mol/L 与 0．015 mol/L 得溶液，二苯胺试剂。

方法步骤

实验前需要制备鸡血细胞液(由教师完成)，制备得方法就是：取柠檬酸钠得质量浓度为 0。1 g/ｍＬ得溶液（抗凝剂)1０0 mＬ,置于500 mL烧杯中.将宰杀活鸡流出得鸡血（约１80 mL)注入烧杯中,同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免凝血.然后,将血液倒入离心管内，用 １000 ｒ/min 得离心机离。２ｍiｎ,此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时,用吸管除去离。心管上部得澄清液,就可以得到鸡血细胞液.１．提取鸡血细胞得细胞核物质

将制备好得鸡血细胞液 5 mL～１0ｍＬ，注入到 50 ｍL 烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水 20 mL,同时用玻璃棒充分搅拌 5 min,使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布得漏斗将血细胞液过滤至５00mL.取其滤液。

２．溶解细胞核内得ＤNA

将氯化钠得物质得量浓度为 2 mｏｌ得溶液 40ｍＬ加入到滤液中,并摇动烧杯,使其混合均匀,这时 DNＡ在溶液中呈溶解状态。

３．析出含 DNA 得粘稠物

沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现得粘稠物会越来越多.当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中氯化钠得物质得量浓度相当于０、1４ moｌ/Ｌ）。

4。滤取含 DNＡ得粘稠物

用放有多层纱布得漏斗，过滤步骤 3 中得溶液至 500ｍL 得烧杯中,含 DNA 得粘稠物被留在纱布上。

5.将ＤＮA 得粘稠物再溶解

取 １个 5０ mL 烧杯,向烧杯内注入氯化钠得物质得量浓度为 2 mol／L 得溶液 ２0ｍL。用钝头镊子将纱布上得粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。

６。过滤含有 DNA 得氯化钠溶液

取１个１00 mL 烧杯，用放有两层纱布得漏斗过滤步骤 5 中得溶液。取其滤液,DＮＡ溶于滤液中。

７．提取含杂质较少得 DNＡ

在上述滤过得溶液中，加入冷却得、酒精得体积分数为 ９５％得溶液 50ｍＬ(使用冷却得酒精，对 DNA 得凝集效果较佳）,并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少得丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面得水分。这种丝状物得主要成分就就是DNA。注意观察丝状物就是什么颜色得.8.ＤNA 得鉴定

取两支20 mL得试管，各加入氯化钠得物质得量浓度为0.01５ ｍｏl/L得溶液5 ｍL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解.然后,向两支试管中各加入4mｌL 得二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 ５ ｍin，待试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色得变化。将观察得结果填写在《实验报告册》上。

结论

步骤８得 2 支试管中溶液颜色得变化说明了什么？将得出得结论填写在《实验报告册》上.讨论

1。提取鸡血中得 DNA 时,为什么要除去血液中得上清液？

2．步骤回与步骤 3 中都需要加入蒸馏水,两次加入得作用相同吗？为什么？ 3。ＤNA 得直径约为 20×10-1０ ｍ,实验中出现得丝状物得粗细就是否表示 1 个 DNＡ分子直径得大小？

第二篇：二苯胺鉴定dna

二苯胺鉴定dna

实验原理1.DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的，二苯胺鉴定dna。当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

DNA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解，产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊酸，后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物，其反应如下图。蓝色化合物在595nm处有最大吸收，且DNA在40µg ~400µg范围内时，吸光度与DNA浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。

甲基绿能把DNA染成绿色，为什么在DNA粗提取与鉴定试验中则用二苯胺鉴定?带着这个问题我上网查资料，经过我反复的思考，哈哈.....终于想明白了。我们在观察DNA、RNA的分布实验中用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂染色，由于甲基绿和吡罗红与DNA、RNA的亲和力不一样，呈绿色的是DNA，呈红色的是RNA，我们很容易用显微镜观察到DNA、RNA主要分布在那里?里面强调的是用甲基绿和吡罗红混合染色剂，所以隐含的意思是不能单独使用一种染色剂，要是单独用甲基绿染色就会把RNA染成绿色，鉴定材料《二苯胺鉴定dna》。DNA粗提取与鉴定这个实验，DNA鉴定则换成用二苯胺，在这个DNA粗提取过程中，用改变氯化钠浓度办法将蛋白质与DNA分开，用冷酒精处理进一步将DNA与RNA、蛋白质分开。一系列的操作就是要获得纯度较高的DNA，最后获得的纯度较高的DNA不能排除有RNA，所以此时用甲基绿鉴定DNA、RNA都被染成绿色，所以不能说绿色一定是DNA拍卖公司而改用二苯胺就不一样了，DNA和二苯胺反应的产物成蓝色，RNA则没有这种颜色反应。所以用二苯胺鉴定呈蓝色的一定是DNA，并且蓝色深浅与DNA含量高低有关。

1、二苯胺与甲基绿能否混用

这是用于鉴定DNA的存在的两种试剂，二苯胺加热法中，呈现蓝色反应。用甲基绿溶液直接滴在有DNA丝状物的载玻片或玻棒上，呈蓝绿色反应。只用一种即可，不混合用。前者要加热，后者不加热。

2、两者都可以和DNA反应，应该怎样区分它们呢

甲基绿甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状，能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂，细胞学上常用来染染色质，跟酸性品红一起可作植物木质部的染色

3、DNA的鉴定→DNA的鉴定可用二苯胺法，DNA遇到二苯胺变为蓝色;还可以用“甲基绿”法，“甲基绿”使DNA变为蓝绿色。

用“甲基绿”法鉴别DNA时，可将“甲基绿”直接滴到玻璃棒的丝状物上后，要用水充分冲洗掉浮色后再观察。

配制二苯胺试剂→取0.1毫升B液，滴入到10毫升A液中，混匀。⑦鉴定→取4毫升DNA提取液放入试管中，加入4毫升二苯胺试剂，混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100°)加热10分钟。在加热过程中，随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。

第三篇：鉴定dna的方法

鉴定dna的方法

如何做亲子鉴定? 首先根据做dna亲子鉴定的目的的不同可将亲子鉴定分为司法鉴定和个人鉴定，鉴定dna的方法。个人鉴定只需要提供被鉴定者的样本无需提供任何证件就可以做，但是个人dna检测的结果仅供个人参考了解不可用作为司法用途使用;司法鉴定必须按照严格的司法程序进行，被鉴定人必须提供身份证、户口本、结婚证或者出生证明等能够证明身份的相关证件还必须提供相关单位(比如：派出所、法院、律师或者公安机关)出具的委托函才可以进行，这样做出的鉴定结果才具有法律效力。

如何做亲子鉴定能够得到准确无误的鉴定结果?

为保证dna 亲子鉴定结果的准确无误，对于选择dna鉴定的终端用户一定要选择专业权威机构，确保dna鉴定结果的准确权威、司法公正、科学严谨!

做dna鉴定如何取样? dna亲子鉴定的样本可以是血液、血痕、毛发、口腔细胞、体液、骨骼、牙齿、胎儿羊水等，只要能够提取dna其鉴定结果的准确度是一样的，若您在取样的过程中有任何的疑问都可以拨打0371-61719977进行电话咨询，我们的专家医生会为您答疑解惑!

胎儿亲子鉴定是指利用基因技术鉴定胎儿遗传意义上的父亲，鉴定材料《鉴定dna的方法》。当胎儿遗传意义上的父亲是谁不得而知时，“产前亲子鉴定”可从孕妇的羊水中提取细胞，通过鉴定胎儿的DNA(脱氧核糖核酸)确认父子关系。

胎儿亲子鉴定必须提供的样本为：胎儿样本(羊水、绒毛)、母亲DNA样本、假定父亲DNA样本

怀孕多久可以做胎儿亲子鉴定呢?

在怀孕期做胎儿鉴定的最早时间可以在妊娠时间满8周以后通过抽取胎儿绒毛组织来做或者在怀孕16周也就是4个月的时候通过抽取羊水进行鉴定，不管是绒毛还是羊水做胎儿dna鉴定都和孩子出生后用血液做亲子鉴定的结果同样准确不会出现出现不同的检测结果。

为什么胎儿鉴定中一定要提供母亲DNA样本?

因为羊水样本抽自母体，其中含有母亲DNA成份，如果在实验中从羊水中提取的是母亲DNA而非胎儿DNA，那么在没有母亲DAN样本对比的情况下，就和假定父亲DNA样本进行鉴定对比，其结果就没有准确性可言了，所以在胎儿羊水鉴定中必须提供母亲DNA样本。

DNA和RNA的鉴别，较常用的方法是利用两类核酸中不同的戊糖各自具备的不同的颜色反应，而得以定性鉴别。其中鉴定DNA的方法称为二苯胺法，鉴定RNA的方法称为地衣酚(苔黑酚，3，5-二羟基甲苯)法。上述颜色反应不但可用于两类核酸的定性鉴定，也是定糖法定量测定核酸的依据。

第四篇：dna胎儿性别鉴定

dna胎儿性别鉴定

在没有出现母血DNA胎儿性别检测方法前，一般是利用羊水穿刺术、绒毛采检术、B超等方法来测试，dna胎儿性别鉴定。这些方法不仅需要怀孕的周数长，而且对母体和胎儿具有一定的创伤，可导致1%的流产率。

其实在香港早就出现了这种准确率高达98%的胎儿性别鉴定方法：母血DNA胎儿性别检测，该项技术运用先进精确的DNA基因工程科学技术，自手臂抽取血液进行检测，是目前最早最安全的检测胎儿性别方法，只需8周即可进行检验。

医学家们已经证明早在妊娠8周母血循环中就可监测出胎儿性别。通过母血细胞分离、纯化、可用于早期胎儿性别鉴定与遗传学诊断，常用的胎儿细胞类型滋养细胞和有核红细胞，从母血中分离、纯化胎儿细胞在技术和临床研究上取得了很大的进展，作为无创性产前诊断方法其有着一定的临床应用价值，及深远的意义。

在香港这项检测已经相当成熟，费用也较为便宜。而且，因为准确率高、对孕妇和胎儿均无任何的伤害，是目前最受欢迎的性别鉴定方法!

很多内地孕妇通过咨询我们赴港生子的好处，才得知香港有这项技术。在香港不是每个医生都做这项服务的，其中有一个我们长期合作的私家医生有做母血DNA胎儿性别鉴定，性别鉴定《dna胎儿性别鉴定》。

香港天爱母婴收集所有性别鉴定方法比较如下：、DNA 验血：孕妇怀孕经B超确认有7-8周，胎儿正常的情况下可测出胎儿性别，准确率是98%，对孕妇和胎儿没有任何影响。、羊膜穿刺术：主要是为了诊断胎儿是否有染色体方面或神经管的缺陷，通常在怀孕16～20周实施。准确度可达99%，但是有1%的流产机率。、绒毛采检术：在怀孕12～14周左右即能判断胎儿的性别，但它可能造成流产(3%～5%)，还可能伤害胎儿，造成其手脚的残缺。、超声波扫描：超声波是一种声波，它对胎儿没有不良影响，婴儿必须在3～4月准确度较高。利用超声波诊断胎儿性别时，男婴的准确度可达95%以上，女婴的可靠度则只有85%左右，但是受到医生主观视觉，胎儿体位等因素影响。

香港天爱母婴服务公司声明： 本公司主营业务是服务内地孕妇赴香港生孩子咨询及赴港生子全程一条龙服务。因之前很多内地孕妇做完母血DNA胎儿性别鉴定，不是她们想要的就打掉了。我们公司负责人和员工都有自己的信仰，看到这种事情的发生心里都不舒服。所以从今年下半年开始，孕妇需报自己的出生年月及末次月经，经我公司算完是你想要的性别，再帮孕妇预约香港私家医生抽血做性别鉴定。

第五篇：dna粗提取和鉴定

dna粗提取和鉴定

实验用具

洋葱或其他植物、洗洁精、食盐、搅拌机或研钵(我们采用的是家用豆浆机)、纱布、漏斗、烧杯、玻璃棒、量筒(10mL一支)、滴管、试管(20mL两支)、天平，dna粗提取和鉴定。95%酒精、蒸馏水、0.015mol/L的NaCl溶液、二苯胺试剂。

实验材料的选取

凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。

原理

①加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂

蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。

②加入洗涤剂和食盐的作用

洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。

③研磨不充分，对实验结果产生的影响

研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。

④此步骤获得的滤液中可能含有的细胞成分?

可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。

实验步骤

1.破碎细胞，获取含DNA的滤液

动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。例如，提取洋

.葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。

2.去除滤液中的杂质

方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同;方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA;方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。

注意事项

①用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。

②方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开;方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。

DNA的析出与鉴定

将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA，鉴定材料《dna粗提取和鉴定》。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。

取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。

实验步骤

1.称取30克已切碎的洋葱，放入研钵中，加入少量石英砂助研，倒入10mL 2mol/L的氯化钠溶液，充分研磨。

洋葱含有挥发性刺激物，有效减少刺激，才能使实验顺利进行。上课前，教师可先将洋葱放入冰箱冷冻一会儿，使其凉透但又不能结冰;或将洋葱切成几大块，放入清水泡一会儿，让其挥发性刺激物溶于水，可以减轻刺激。然后将洋葱切碎备用。研磨的目的主要是使洋葱细胞破裂，使DNA溶于2mol/L的氯化钠溶液，没必要将洋葱研成粥糊状，后者既浪费时间又影响实验效果。研磨时，切忌使用搅拌器(榨汁机)。使用搅拌器虽可以提高研磨效率，但搅拌器将洋葱切成极细小的颗粒，无法通过过滤将洋葱颗粒剔除。只能将酒精直接倒入滤液中，许多洋葱小颗粒因为轻会漂浮起来，DNA藏在其中，无法分辨。学生看不到白色纤维状粘稠物的DNA。

2.研磨后，用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中，得到滤液。

3.向滤液中加入95%的酒精溶液20mL，沿烧杯壁缓缓倒入，不要震动或搅拌。

此时，烧杯中的液体分为上、下两层，下层较浑浊，上层澄清，很快上层溶液中就会有白色纤维状粘稠物析出，用玻璃棒可将其轻轻卷起。这就是记录生命遗传信息的重要物质——DNA。DNA析出的过程中，切忌震动和搅拌(不震动易于分层，我们就能很容易观察到上清液中的丝状物;搅拌会使非常柔软的DNA断裂成小段，不易取出)。如果用玻璃棒DNA不易卷起，可改用表面打毛的牙签，DNA提取物就缠绕在牙签上了。

4.鉴定：取两支试管，编为1、2号，各加入2mol/L的氯化钠溶液2mL，向1号试管中加入一些白色纤维状物，振荡使其溶解，然后向两支试管中各加入2mL二苯胺试剂，沸水浴加热5分钟。

注意事项

1.以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠防止血液凝固。

2.加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。

3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。

4.DNA的溶解度与NaCl溶液浓度的关系：

当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，随浓度的升高，DNA的溶解度降低;当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L时，随浓度升高，DNA的溶解度升高。

5.盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。

鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的DNA的损失。