第一篇：分子诊断学复习资料 简答题部分
简答
基因组的特点：？（大题）人类基因组的特点：
1、人类基因组具有23对染色体，基因组序列大约2.9亿个核苷酸，含有蛋白质编码基因大约20, 000-25, 000个。其中大量基因与中枢神经系统，特别是脑部发育相关；
2、绝大多数基因为断裂基因，且分布不均（每条染色体具有基因富集区和基因稀疏区）。除蛋白质编码基因外，其他大量基因为RNA编码基因；
3、基因内和基因附近中存在大量短序列调控元件，发挥基因的调控表达和协调表达的作用；
4、基因组（基因内）中存在大量功能未知的其他序列（“非编码DNA”），如串联重复序列、转座元件。
5、序列突变是人类基因突变的重要来源，序列/基因多态性是研究人类遗传突变的重要手段。
6、线粒体DNA（mtDNA）是人类母系遗传疾病的重要来源基础。真核基因组特点：
1.真核基因组结构庞大：人：3×109bp。几、十、百倍于原核。
2.线性双链DNA，多条染色体和二倍体（Diploid）：DNA和组蛋白质形成染色体，存在于核膜内。人：23对，46条；
3.单顺反子(Monocistron)：一个结构基因转录生成一条mRNA。
4.功能基因不连续性，内含子与外显子并存（断裂基因）：转录后需剪接(Splicing)5.非编码区多于编码序列(9:1)6.含有大量重复序列（Repetitive Sequences): 重复次数可达数百万次，序列多态性是真核生物基因组的重要特征。原核生物基因组的特点：
1.基因组呈共价闭合环状双链状态，散布在细胞中，有时相对集中形成类核/拟核（Nucleoid）
2.基因组DNA小，基因数目少（1500-5900个），种间DNA大小差异大，GC含量差异大(菌种鉴定和分类标准），基因多为单拷贝基因（编码rRNA、tRNA基因多拷贝，利于核糖体的快速组装和蛋白质合成）
3.基因组只有一个复制起始点，功能相关的基因大多成簇地串联排列（操纵子结构）在染色体上，结构基因无内含子，基因连续分布，为多顺反子。
4.除主基因组外，原核生物往往还具有质粒基因组
5.转座元件/基因是原核生物基因组的重要特征（转座元件（Tranposable Element）是指可移动的基因成分，即能在一段DNA分子内部或两段DNA分子之间移动的DNA片段，又称跳跃基因。）6.致病基因是致病原核生物基因的重要特征 病毒基因组的特点：
1.基因组大小相差很大（HBV：3.2kb，痘病毒：300kb）
2.结构分子具有多样性（DNA病毒/RNA病毒，单链DNA/RNA病毒，双链DNA/RNA病毒，环状分子/线性分子）3.基因组多数是连续性（单一分子基因组），但RNA病毒往往不连续（呼肠孤病毒：10条节段双链RNA，甲乙流感病毒：8条单链节段RNA，丙型流感病毒：7段单链节段RNA。包装在同一个病毒颗粒内，或在不同病毒颗粒内，只有全部基因组序列都存在，才具备感染能力）4.编码序列占基因组的90%以上，间隔区序列很少；
5.多为单拷贝（单倍体），即每个基因只出现一次（除逆转录病毒基因组有两个拷贝）； 6.相关基因丛集（功能上相关的基因排列在一起）、有重叠基因和不规则基因结构序列。
1、试述点突变（基因背景清楚和未知）的主要检测方法。答：对基因背景清楚或部分清楚的点突变，可以采取直接检测基因点突变的方法，如等位基因特异性寡核苷酸杂交(allele specific oligonucleotide，ASO)、PCR-ELISA、等位基因特异性扩增(allele specific amplification，ASA)、PCR-RFLP、基因芯片技术等进行诊断，例如β地中海贫血，可以使用ASO、PCR-RFLP 联合基因芯片技术进行诊断。对于一些基因背景未知的点突变，可以采用单链构象多态性(single-strand conformational polymorphism，SSCP)、变性梯度凝胶电泳(denaturing graient gel electrophoresis，DEEG)、异源双链分析(heteroduplex analysis，HA)、DNA序列测定、蛋白截短测试（protein truncation test，PTT）等方法，如Hopkins大学医学院的研究人员设计了47 对PCR引物，分段扩增血友病A因子Ⅷ 基因片段，进行DGGE分析，发现多态性片段后再进行DNA序列分析，几乎查清了所有临床轻中度病人的点突变。
2、试述限制性内切酶MstⅡ切割法诊断镰状细胞贫血的原理并图示。
答：在FⅧ基因区域内，有一种A基因存在三个拷贝，其功能不详，其中一个A基因位于FⅧ基因的第22 号内含子内(A1)，另外两个位于X染色体的末端(A2、A3)。A1基因可以与其上游的两个A基因拷贝中的一个发生同源重组，引起FⅧ基因的1-22 外显子片段倒位，这种倒位导致FⅧ功能完全丧失而发生严重的血友病(图15-5)。其中与A2发生的重组称为近端重组，约占倒位的15％；与A3发生的重组称为远端重组，约占倒位的85％。
3、试述近端重组、远端重组概念。
答：在FⅧ基因区域内，有一种A基因存在三个拷贝，其功能不详，其中一个A基因位于FⅧ基因的第22 号内含子内(A1)，另外两个位于X染色体的末端(A2、A3)。A1基因可以与其上游的两个A基因拷贝中的一个发生同源重组，引起FⅧ基因的1-22 外显子片段倒位，这种倒位导致FⅧ功能完全丧失而发生严重的血友病(图15-5)。其中与A2发生的重组称为近端重组，约占倒位的15％；与A3发生的重组称为远端重组，约占倒位的85％。
4、简述TGGE/DGGE的基本原理
答：在TGGE中，随着温度的逐渐升高时，DNA分子会呈阶梯式逐步发生解链。部分解链的双链DNA分子表现出一种复杂的分枝构像，使得其电泳迁移率大大下降。DNA分子的解链决定于该分子的解链温度（Tm），而Tm有强烈的序列依赖性，如在单取代突变中，若是A:T（两个氢键）被G:C（三个氢键）取代，将增加该双链DNA分子的Tm值。而整个DNA分子序列对解链温度也有影响，若A:T被T:A替代，或G:C被C:G替代，分子的解链温度也会发生改变。因此不同的DNA分子由于其Tm不同，将于不同凝胶位置（温度不同）产生分枝（解离）使电泳迁移率降低，从而在凝胶上的不同位置形成条带。DGGE的变性条件为热（一般为60℃的恒定温度）和固定比率的甲酰胺（0－40％）、尿素（0－7M）。这些梯度变性的功能就相当于TGGE中的温度梯度的功能，使不同DNA分子在不同的凝胶部位发生解链，引起迁移率下降，从而将不同的DNA分子分离。
5、简述变性高效液相色谱法检测基因变异的优点
答：DHPLC突变检测技术与其它方法相比，具有更高的准确性和敏感性。
（1）DHPLC与各种电泳法的比较 SSCP 分析片段长度<300 bp，对于人类SNP的检出率为50～95％，尤其容易漏检位于发夹结构中的变异。CSGE检测杂合子的灵敏度与SSCP相当或稍低。而DHPLC对150bp~600bp的DNA片段的突变检出率都可达到100％，且而不需要特殊的样本处理。TGGE/DGGE对于异源双链及同源双链分子的检测灵敏度高出CSGE和SSCP很多。但对于较高温度的融解区域的突变检测，DHPLC的灵敏度要高于TGGE/DGGE。（2）DHPLC与DNA测序的比较 对于频率高于20%的变异，直接测序的检出率为80％，DHPLC的检出率可达到100％；基因突变频率低于20%时就很难用测序方法检测到，而DHPLC可从待检样品中检测到占总基因量0.5-5%的突变等位基因，且重现性很好。
6、试述PTT检测基因变异的优缺点
答：PTT检测突变的优点：①能检测出只与疾病相关的蛋白截短突变；②可检测出在RNA形成过程中发生的突变（如剪接突变）；③通过只鉴定引起疾病截短突变，PTT分析不会受到基因沉默变异如多态性的妨碍；④截短蛋白分子的长度指明了突变的位置，因此更方便进行测序分析以确定突变。
PPT检测突变的缺点：①由于PCR扩增效率的影响，对于包含几千个核苷酸序列多个外显子的疾病基因，就需要分成几个1－2kb的片段分别扩增，分别进行PTT检测；②由于微小缺失/插入突变对蛋白产物分子大小影响太小，凝胶不能分辩，因而检测不出编码序列中小的插入或缺失或是错义突变；③引起RNA产量改变或使mRNA不稳定的突变可能被漏检。
7、简述PFGE的基本原理
答：PFGE采用一种正交的交变脉冲电场，在进行琼脂糖凝胶电泳时，其方向、脉冲时间和电压大小可交替改变。在每次电场方向改变时，DNA分子就要有一定的时间改变形状和迁移方向，只有当DNA分子达到一定构型，沿新的泳动方面伸直后，才能向前迁移。DNA分子的转向时间与其大小关系极为密切，分子越大，分子构型转换所需时间就越长，转变迁移方向的时间也就越长。对于不同大小的DNA大分子，其改变泳动方向所需的时间不等，迁移速度的快慢也就不等，因此就可以按DNA分子量大小使其分离开来。根据欲分离的DNA分子大小适当调节电场方向的相交角度、电压及脉冲时间等参数，即可将各种分子量大小不同的分子分开。
8、假基因的分类及其发生机理。
与正常功能的基因序列相似，但无转录功能或转录产物无功能的基因称假基因(pseudogene)。根据是否保留相应功能基因的间隔序列(如内含子), 假基因分两大类:一类保留了间隔序列，称为非加工假基因(non-processed pseudogene)，通常因基因的复制修饰,如点突变、插入、缺失和移码突变而导致复制后的基因在转录和翻译时出现异常,丧失正常功能，它与功能基因一般在同一染色体上, 也称复制型假基因(duplicated pseudogene)。假基因中大多数则缺少间隔序列的称为已加工假基因(processed pseudogene)，主要是转录过程中mRNA 以cDNA 的方式重新整合进入基因组(很可能发生在生殖细胞中)，在长期进化选择过程中因为随机突变积累而丧失功能，通常这种假基因无内含子，两边有小的侧翼定向重复序列(flanking direct repeat)，3'端多具多聚腺苷酸尾。
9、简述CpG岛与DNA甲基化调控。
大约有一半的人类基因富含CpG 的顺序，称为CpG岛(CpG island)，CpG 岛常位于转录调控区或其附近，主要存在于看家基因和一些组织特异性表达基因。在正常组织，除印记基因和失活的X染色体外，包括启动子区在内的基因5′端CpG 岛大部分是非甲基化的。DNA甲基化与基因表达呈负相关，DNA甲基化调控基因表达直接的机制可能是因为甲基从DNA分子的大沟中突出，阻止了转录因子与基因相互作用，还可能直接抑制RNA聚合酶活性而抑制基因的表达。间接的机制包括两种类型：①与甲基化DNA结合蛋白结合；②改变染色质结构，这都间接阻碍转录因子与DNA结合而抑制转录。DNA甲基化对胚胎发育非常重要，与X染色体失活，基因组印记，特别是肿瘤密切相关。
10、作为一种遗传标记，人类短串联重复序列（STR）的主要用途有哪几个方面？
主要用途①人类基因遗传图谱的制作。②目的基因筛选和基因诊断。通常目的基因若与STR位点有连锁关系, 则其位置与STR位点邻近, 故通过对STR附近区域克隆测序, 就可能发现目的基因。通过家系和对照研究, 运用连锁和相关分析, 可以找到与疾病高度相关的STR位点。③法医学个体识别和亲权鉴定。法医案例中, 对于量极少和降解严重的生物检材, 通过PCR进行STR位点扩增并将几个STR 位点联合起来分析, 可得到相当高的累积个体识别率和父权排除率。因而STR用于法医学领域有着广阔的前景，为司法侦案、破案提供有利的科学依据。
11、人类单核苷酸的多态性（SNP）的特点及主要用途有哪几个方面？
疾病的连锁分析与基因的定位：包括复杂疾病（如骨质疏松症、糖尿病、心血管疾病、精神性紊乱、各种肿瘤等）的基因定位、关联分析，并可用于遗传病的单倍型诊断。
指导用药和药物设计：SNP多态性能充分反映个体间的遗传差异。通过研究遗传多态性与个体对药物敏感性或耐受性的相关性, 可以阐明遗传因素对药物效用的影响, 从而对医生针对性的用药和药物的开发提供指导和依据。
用于进化和种群多样性的研究：生物界的进化及进化过程中物种多样性的形成与基因组的突变和突变的选择密切相关, 构建整个基因组的SNP 图谱对于直接研究人类的起源、进化具极大意义。对比人群之间SNP 图谱的异同情况可以对人类的起源、迁移等作出估计, 从而理清人类进化过程中源与流的问题。
12、人类基因组研究的主要内容是什么？
人类基因组研究主要包括两方面的内容：以全基因组测序为目标的结构基因组学和以基因功能鉴定为目标的功能基因组学，又称后基因组研究。
结构基因组学代表基因组分析的早期阶段，通过基因作图、核苷酸序列分析确定基因组成、基因定位的科学，包括规模化地测定蛋白质、RNA及其它生物大分子的三维结构等内容,以获得一幅完整的、能够在细胞中定位以及在各种生物学代谢途径、生理途径、信号传导途径中全部蛋白质在原子水平的三维结构全息图。功能基因组学代表基因分析的新阶段，是利用结构基因组学提供的信息研究基因功能，使人们有可能在基因组学、蛋白质组学、分子细胞生物学以致生物体整体水平上理解生命的原理。对疾病的防治和机理的阐明有重要应用意义。
基因分类：A.按功能:1.结构基因---编码蛋白和酶分子结构（蛋白基因）；2.调控基因(Regulatory Gene)---调节结构基因表达，包含调节基因、操纵基因和启动基因；3.转录而不翻译的基因（RNA基因）：rRNA基因→rRNA→核仁形成区，核糖体组成。tRNA基因→tRNA→转运氨基酸。
B.按重要程度: 1.看家基因(House-keeping Gene): 维持细胞最低限度功能所不可少的基因, 如编码组蛋白基因、编码核糖体蛋白基因、线粒体蛋白基因、糖酵解酶的基因等。这类基因在所有类型的细胞中都进行表达。2.必需基因(Essential Gene): 突变时会引起致死表型的基因.基因表达的特点：A时间特异性，单细胞生物：特定基因表达严格按特定时间顺序发生。多细胞生物：基因表达在不同的发育阶段严格按特定时间顺序开启或关闭。又称为阶段特异性（Stage specificity）。B, 空间特异性, 在某发育阶段，同一基因在不同组织器官其表达有差异。又称为细胞特异性（Cell specificity）
基因表达的方式: A组成性表达, 某些基因的表达不受内外环境的影响，在个体生长过程中，几乎在所有的组织中持续表达或变化很小。这些基因一般为看家基因（Housekeeping gene）B, 诱导和阻遏表达, 诱导（Induction）：基因受环境刺激而开启表达增强。阻遏（Repression）：基因受环境刺激而表达受到抑制和减弱C, 协调表达, 在一定控制机制下，功能相关的一组基因进行协调共同表达
14、叙述原核生物基因组的结构特征。
在原核生物基因组中只有一个DNA复制起点。基因组DNA通常是由一条环状双链DNA（double stranded DNA，dsDNA）分子组成。基因组DNA与支架蛋白和RNA结合在一起，以复合体的形式存在。广泛存在操纵子结构。操纵子结构是原核生物基因组的功能单位，在原核基因调控中具有普遍的意义。原核生物的结构基因多数是单拷贝的并且结构基因中没有内含子成分。编码顺序一般不重叠。具有编码同工酶的不同基因。基因组中编码区所占比例为50﹪，不编码区中常常含有基因表达调控的序列。基因组DNA分子中存在多种功能的识别区域，这些区域经常有反向重复序列存在，并能形成特殊的结构。原核生物基因组存在着可移动的DNA序列，这些可移动的DNA序列，通过不同的转移方式发生基因重组，使生物体更适应环境的变化。
15、简述原核生物的类核组成。
原核生物与真核生物的主要区别在细胞核上。原核生物没有典型的细胞核结构，基因组DNA位于细胞中央的核区，没有核膜将其与细胞质隔开，但能在蛋白质的协助下，以一定的组织形式盘曲、折叠包装起来，形成类核（nucleoid）也称拟核。类核的中央部分由RNA和支架蛋白（scaffolding protein）组成，外围是双链闭环的超螺旋DNA。在超螺旋结构的基础上，DNA 分子再扭结成许多活结样或花瓣样的放射状结构的DNA环。每个环形的活结状结构代表一个结构域，在各结构域中DNA呈负超螺旋状态。每个DNA环是一个相对独立的功能区，可以独立完成不同区域的基因表达与调控。在类核中80﹪为DNA，其余为RNA 和蛋白质。如果用DNA酶处理后可使基因组DNA链断裂；如果用RNA酶或蛋白酶处理类核，则类核变得松散，不能维持DNA链的折叠结构，这表明RNA和蛋白质对维持类核分子的折叠以及形成环状结构是必不可少的。
16、简述原核生物转座子的类型及特点。
⑴插入序列（insertion sequence,IS）长度约700bp～2 000bp，由一个转位酶基因及两侧的反向重复序列（16bp～41bp）组成。反向重复序列的对称结构使IS可以双向插入（正向插入或反向插入）靶位点。并在插入后于两侧形成一定长度（3bp～11bp）的顺向重复序列称靶序列（target sequence）IS的转位频率为10-7／拷贝，即在一个世代的107细菌中有1次插入。⑵转座子（transposon,Tn）是一类复杂的转位因子。Tn比IS大，约4500～20000bp，除了携带有关转座的必需基因外，还含有能决定宿主菌遗传性状的基因，主要是抗生素和某些药物的抗性基因，转座子中的转位酶称为转座酶（transposase），其功能是介导转座子从一个位点转座到另一个位点，或从一个复制子转座到另一个复制子，其转座过程与IS相似。
⑶Mu噬菌体 是一类具有转座功能的温和性噬菌体。温和性噬菌体有多种，如大肠杆菌λ噬菌体、大肠杆菌Mu-
1、P1和P2噬菌体等。这类噬菌体具有整合能力，可以整合到细菌染色体中去，也称可转座的噬菌体（transposable phage）。当它们感染细菌后，其溶源性整合和裂解周期的复制均以转座方式进行，但转座位点是随机的。
17、通过转座可引起哪些遗传效应？
⑴引起突变 转位可能引起多种基因突变。当转位因子插入一个基因内部，会引起这个基因的插入失活；当插入多顺反子前端的基因中时，可引起下游的所有基因停止转录，因为转位因子中含ρ依赖的转录终止信号；当插入染色体或质粒中时，常引起缺失和倒位突变。⑵引入新的基因 在插入位点上引入新的基因，如含有抗药基因R质粒的转位因子，转位到染色体中时，可在该部位出现抗药性基因。若将带有Amp+R质粒的细菌与不含R质粒的带有Kan+转座子的细菌进行接合，结果产生了Amp+ Kan+的细菌，并且能够在含有氨苄青霉素及卡那霉素的培养板上生长。经过转位作用，在这种细菌内产生Amp+及Kan+的质粒，经过再次接合作用，即可产生含Amp+ Kan+R质粒细菌。
⑶引起生物进化 基因重排经常发生，转座作用是基因重排的重要机理之一，如通过转座，可将两个本来相隔遥远的基因靠拢，从而进行协调的控制作用，这两段基因顺序经过转座作用连接在一起有可能在进化过程中产生新的蛋白质。
18、真核生物染色体基因组的一般特点？
①真核生物基因组远大于原核生物基因组，结构复杂，基因数庞大，具有多个复制起点；②真核细胞的基因组DNA都是线状双链DNA，而不是环状双链分子；③基因组中非编码区多于编码区；④真核基因多为不连续的断裂基因，由外显子和内含子镶嵌而成；⑤存在大量重复序列。
19、真核生物基因组含有的重复序列有哪些？
（一）高度重复序列
重复频度>105。根据卫星DNA的长度，又可分成3种：卫星DNA、小卫星DNA、微卫星DNA。
（二）中度重复序列
这类重复序列主要由比较大的片段（由100bp到几千bp）串联重复组成，分散在整个基因组中，重复频度不等，如Alu家族、rRNA、tRNA和组蛋白等。
20、简述质粒的概念和特性，常用的质粒载体有哪几种？
质粒为细菌染色体外一些双链、共价闭合环状DNA分子，是能够进行独立复制并保持稳定遗传的复制子。质粒具有复制和控制机构，能够在细胞质中独立自主的进行自身复制，并使子代细胞保持它们恒定的拷贝数。
质粒一般具有以下特性：①自主复制性，它能独立于宿主细胞的染色体DNA而自主复制；②质粒不相容性；③可扩增性；④可转移性。
理想质粒载体应具备①具有松弛型复制子；②在复制子外存在几个单一的酶切位点；③具有插入失活的筛选标记；④分子量相对较小，有较高的拷贝数。
常见的质粒载体有：pBR322质粒、pUC质粒载体、pGEM系列载体等。
21、试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。
[答案] 质粒DNA提取的方法包括碱裂解法、煮沸裂解法和SDS裂解法。
1）碱裂解法：在NaOH存在的强碱性（pH12.0～14.0）的条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁和裂解细胞，并使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。它是一种适用范围很广的方法，能从所有的大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA，制备量可大可小。
2）煮沸裂解法：是将细菌悬浮于含Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中，Triton X-100和溶菌酶能破坏细胞壁，再用沸水浴裂解细胞，使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性。对CCC质粒DNA因结构紧密不会解链，当温度下降后，CCC质粒DNA可重新回复其超螺旋结构，通过离心去除变性的蛋白质和染色体DNA，然后回收上清液中的质粒DNA。本法只能用于小质粒DNA（小于15kb）的小量或大量制备，适用于大多数从大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA。
3）SDS裂解法：它是将细菌悬浮于等渗的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA处理以破坏细胞壁，再用SDS裂解去壁细菌，从而温和地释放出质粒DNA到等渗溶液中，然后用酚/氯仿抽提。适用于大质粒DNA的提取。
22、简述哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有哪几种？ [本题答案]哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有： 酚提取法、甲酰胺解聚法、玻棒缠绕法和异丙醇沉淀法、磁珠吸附法等。
23、简述从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的主要方法有哪几种？
[本题答案] 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法主要包括 DEAE-纤维素膜插片电泳法、电泳洗脱法、低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法、冷冻挤压法及现在有试剂盒供应的以硅为基础的纯化系统等。
24、简述磁性球珠分离法分离mRNA的原理。
[本题答案]磁性球珠分离法是基于寡聚(dT)与poly(A)的互补配对特性、用生物素标记寡聚(dT)，通过寡聚(dT)与mRNA 3’端poly(A)形成杂交体，这种杂交非常迅速，在1－2分钟内就可完成，可有效地除去rRNA, tRNA以及其他RNA,而后通过生物素与链亲和素顺磁性磁珠之间的相互作用来捕获这些杂交物而达到分离纯化。
25、描述质粒DNA的结构特点。
多数细菌来源的质粒核酸是环状双链DNA分子，没有游离的末端，每条链上的核苷酸通过共价键头尾相连。质粒DNA分子通常具有三种不同的构型。当其两条核苷酸链均保持完整环形结构时，为共价闭合环状DNA分子，这样的DNA常以超螺旋状态存在；如果两条链中只有一条链保持完整环形结构，另一条链出现一至数个缺口时，为半开环DNA；若两条链均有缺口并发生断裂则成为线性DNA分子。
26、试述质粒的类型有哪些？
根据细菌染色体对质粒复制的控制程度是否严格可将质粒分为：严紧型质粒和松弛型质粒。按转移方式分为：接合型质粒、可移动型质粒、自传递型质粒。按质粒大小分为：小型质粒、大型质粒。按质粒的宿主范围分为：窄宿主谱型质粒、广宿主谱型质粒。按质粒的功能分为：F质粒、R质粒、Col质粒。
27、线粒体DNA与核DNA有哪些不同之处？
（一）非孟德尔的母系遗传。mtDNA 因位于细胞质中,表现为严格的母性遗传, 不服从孟德尔遗传，绝大部分mtDNA 是通过卵细胞遗传。
（二）高突变率。mt DNA突变率约为nDNA的10～100倍，此外mtDNA 与有毒物质的结合频率比核DNA 高数倍至数十倍。
（三）异质性和复制分离。异质性即突变mtDNA与野生型mtDNA 以不同的比例共存于一个细胞内的现象。复制分离即在细胞分裂的复制过程中,突变的和野生型的mtDNA 随机进入子细胞的过程，复制分离的结果使突变mtDNA 杂合体向突变纯合或野生纯合方向转变,但因突变复制具有优势,故易产生突变积累，突变积累的程度不同,突变mtDNA 在群体中的多态性程度也不同。
（四）阈值效应。每个细胞的mt DNA有多种拷贝，而一个细胞mt DNA编码基因的表现型依赖于一个细胞内突变型mt DNA和野生型mt DNA的相对比例，mtDNA 突变导致氧化磷酸化水平降低,当能量降低到维持组织正常功能所需能量的最低值时即达到了mtDNA表达的能量阈值，可引起某组织或器官的功能异常而出现临床症状，这就是阈值效应。
（五）半自主复制与协同作用。mt DNA虽有自我复制、转录和编码功能，但该过程还需要数十种nDNA编码的酶参加，因此mt DNA基因的表达同时也受nDNA的制约，两者具有协同作用。
28、何谓线粒体病？简述线粒体病的遗传学分类。
线粒体病（mitochondriopathy）是指由于线粒体呼吸链功能不良所导致的临床表现多样化的一组疾病。临床表现常见为眼睑下垂、外眼肌麻痹、视神经萎缩、神经性耳聋、痉挛或惊厥、痴呆、偏头痛、类卒中样发作等。
从核基因缺陷和线粒体基因缺陷的角度对线粒体病进行遗传学分类可分为三种类型：点突变，mtDNA的大规模缺失或插入和源于核DNA缺陷引起mtDNA缺失。
29、病毒的基本结构成份主要有哪些？
毒没有完整的细胞结构，由四种基本结构成份组成：①由一种核酸(DNA或RNA)组成的病毒基因组。②由病毒基因组编码的衣壳蛋白组成的衣壳。③来源于宿主细胞质膜系统（细胞膜、内质网膜或高尔基体膜）的包膜。④病毒颗粒中的其它内容物，包括酶、核酸结合蛋白及金属离子等。30、国际病毒分类委员会（ICTV）将病毒分成哪几类？ 国际病毒分类委员会（ICTV）制定了《国际病毒分类与命名原则》。根据病毒的基因组组成及复制方式，可将病毒分为如下几类：
DNA病毒（DNA Viruses）
第一组：双链DNA病毒（Group I: dsDNA Viruses）第二组：单链DNA病毒（Group II: ssDNA Viruses）RNA病毒（RNA viruses）
第三组：双链RNA病毒（Group III: dsRNA Viruses）第四组：正链RNA病毒（Group IV:(+)ssRNA Viruses）第五组：负链RNA病毒（Group V:(-)ssRNA Viruses）
DNA与RNA逆转录病毒（DNA and RNA Reverse Transcribing Viruses）
第六组：RNA逆转录病毒（Group VI: RNA Reverse Transcribing Viruses）第七组：DNA逆转录病毒（Group VII: DNA Reverse Transcribing Viruses）亚病毒因子（Subviral Agents）
卫星（Satellites）类病毒（Viroids）朊病毒（Prions）
31、简述长病毒末端重复序列的特点和作用。
逆转录病毒基因组RNA在逆转录后生成的双链DNA中，两端有长末端重复序列（long terminal repeat，LTR）结构。LTR在结构与功能上与上述重复序列不同。LTR中的重复序列只占一部分，另外还包括单一序列。5＇端的LTR包含许多特定的基因表达调控区域，是一组真核生物增强子和启动子单位，而3＇端的LTR具有转录终止的作用。另外，逆转录病毒基因组利用LTR中的重复序列形成环状结构，在整合酶作用下整合入宿主细胞基因组内。53蛋白质组学的研究特点有哪些？
① 整体性 ② 揭示生命的动态性过程 ③ 体现生命现象的复杂性
32、等电聚焦凝胶电泳的原理是什么？
依据蛋白质分子的净电荷或等电点进行分离的技术。在等电聚焦过程中，电场所采用的载体两性电解质含有脂肪族多氨基多羧酸，可在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续pH梯度，蛋白质分子在一个载体两性电解质(ampholyte)形成的连续而稳定的线性pH梯度中电泳，当蛋白质迁移到其等电点位置时，净电荷为零，在电场中不再移动，因此可将各种不同等电点性质的蛋白质分离开来
33、简述酵母双杂交系统的优缺点。
酵母双杂交系统所具有的优点：①蛋白质作为被研究的对象不用被纯化；②检测在活细胞内进行，可以在一定程度上反映体内（细胞内）的真实情况；③由于这一系统可以反映基因表达产物的累积效应，因而可检测存在于蛋白质之间微弱或短暂的相互作用；④采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库，可用于分析多种不同功能的蛋白。
局限性：①双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内，而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等，这些反应在核内无法进行。②由于某些蛋白本身具有激活转录功能或在酵母中表达时发挥转录激活作用，从而引起报告基因的表达，产生“假阳性”结果。③双杂交只是反映蛋白质间能发生作用的可能性，这种可能还必须经过其他实验验证，尤其要与生理功能研究相结合，否则可能会误入歧途。
34、蛋白质间互作鉴定：
（1）蛋白质亚基的聚合：线性、环状、螺旋、球状、交叉聚合（2）分子识别：抗原与抗体、配体与受体、酶与底物（3）分子的自我装配：核糖体、细菌鞭毛、病毒的自动装配
（4）多酶复合体：丙酮酸脱氢酶复合体包括丙酮酸脱氢酶、二氢硫辛酸转乙酰基酶和二氢硫辛酸脱氢酶。
蛋白质间作用力：（1）氢键：肽键之间，主－侧、侧－侧链之间（2）范德华力：取向力、诱导力、色散力
（3）疏水键：非极性基团为了避开水相二群集在一起的作用力。（4）离子键（盐键）：正负离子之间的静电引力所形成的化学键。
蛋白质相互作用的研究方法: 体外：（1）肽蛋白质亲和层析；（2）亲和印迹；（3）免疫沉淀；（4）交联等。
体内：（1）酵母双杂交系统；（2）噬菌体展示技术；（3）生物传感芯片质谱；（4）蛋白质定点诱变。
蛋白组学研究内容：1.蛋白质分离；2.蛋白质的鉴定；3.蛋白质-核酸间相互作用；4.蛋白质与蛋白质的相互作用。蛋白组学研究的特点：1）整体性和规模化；2）动态性和网络化；3）复杂性和综合技术化；
蛋白质组研究常用技术：
1）蛋白质分离技术（电泳和层析技术）；2）蛋白质检测与图像分析以及鉴定技术； 3）蛋白质互作研究技术；4）生物信息学分析技术。
35、蛋白质组学的研究内容有哪些？
蛋白质组学的研究包括两个方面：一是针对蛋白质表达模式的研究，一是在蛋白质功能模式方面的深入分析。
36、PCR，聚合酶链反应（Polymerase chain reaction)：是一种模拟体内天然DNA复制过程的体外核酸扩增技术，是基因扩增技术的一次重大革新。
PCR原理：利用DNA聚合酶催化一对引物间的特定DNA片段在体外实现快速、大量扩增的方法，也称：无细胞克隆技术或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法。PCR标准反应体系（五要素,）
（1）DNA模板(template)：靶基因
（2）原料：dNTPs（dATP，dGTP，dCTP，dTTP）
（3）催化酶：耐高温的DNA聚合酶（如：Taq酶）
（4）一对引物（primer）：扩增序列的决定者其与靶基因两侧序列互补
（5）Mg2+ 和 Buffer PCR反应过程----三步曲
1.高温变性：在高温（95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板
2.低温退火：在低温（37～55℃）下，两条人工合成的寡核苷酸引物分别与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链
3.适温延伸：在耐热DNA聚合酶的最适温度（72℃）下，以引物的3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新链。
37、PCR衍生技术(pcr技术有哪些)：逆转录PCR、反向PCR、巢式PCR、标记PCR、多重PCR、原位PCR、不对称PCR、定量PCR、锚定PCR
38、如何提高PCR扩增的特异性？
① 升高退火温度可增加引物与模板结合的特异性
② 缩短退火和延伸时间，可减少错误引发及多余的DNA聚合酶分子参与酶促延伸的机会 ③降低引物和酶的浓度也可以减少错误引发，尤其是能减少引物二聚体的引发 ④ 改变Mg2+的浓度可进一步提高扩增的特异性 ⑤ 引物设计的特异性 ⑥ 减少循环次数
⑦ 热启动（Hot Start）：即首先将模板变性，然后在较高温度时加入Taq DNA聚合酶、引物及MgCl2等一些重要成分，这样使得引物在较高温度下与模板退火，提高了反应的严格性，使扩增更特异 ⑧ 采用两对引物即外引物和内引物进行扩增来提高扩增的特异性。
39、PCR检测技术有何临床应用：(1)PCR在病原微生物的检测中的应用；（2）PCR在遗传病中的应用；（3）PCR在肿瘤中的应用；（4）其它方面的应用：PCR技术除用于临床诊断和治疗外，还可用于DNA指纹、个体识别、亲子关系识别、法医物证等。40、影响PCR反应的因素有哪些？
PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液，这些因素都对PCR反应产生影响。
41、影响PCR反应的因素有哪些？
PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液，这些因素都对PCR反应产生影响。
42、简述bDNA信号放大系统的原理。
分枝DNA是人工合成的带有侧链的DNA片段，在每个侧链上都可以标记可被激发的标记物。以bDNA为基础建立的连续放大DNA信号以检测DNA的技术称为分枝DNA信号放大系统。
bDNA信号放大系统包括四种杂交探针，即目标探针、前放大体、放大体和标记探针。首先用亲和素包被微孔，加入目标探针，该组探针能与等检核酸靶序列上不同区域互补，其5′端用生物素标记，能与微孔中的亲和素高度亲和结合；再向微孔中加入待测标本，目标核酸与固定于微孔中的目标探针结合；再加入前放大体，该组探针的一段能与目标核酸的不同区域互补结合，另一段与放大体（即分枝DNA）的主链部分的序列互补结合，分枝DNA由主链和数十根寡核苷酸组成，每个分枝上都有标记探针的杂交位点，由酶标寡核苷酸组成的标记探针与bDNA上的互补序列结合，加入底物后最后经化学发光检测仪检测。利用bDNA信号放大系统可在每个靶序列上结合60～300个酶分子，而且所有杂交反应同时进行，观察到的信号与靶DNA的量成正比，可通过标准曲线将靶DNA定量。
43、简述链末端终止法测定 DNA 序列的原理
答：利用DNA聚合酶，以待测单链DNA为模板，以dNTP为底物，设立四种相互独立的测序反应体系，在每个反应体系中加入不同的双脱氧核苷三磷酸（dideoxyribonucleoside triphosphate，ddNTP）作为链延伸终止剂，在测序引物引导下，按照碱基配对原则，每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链，通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后，从凝胶底部到顶部按5′→3′方向读出新合成链序列，由此推知待测模板链的序列。
44、简述化学法测定 DNA序列的基本原理
答：化学法是对待测DNA进行化学降解。在化学法的测序系统中，先对待测DNA末端进行放射性标记，然后分成4组或5组互为独立的化学反应体系，每一组用不同的化学试剂特异地针对某一种或某一类碱基进行化学切割，通过化学降解后产生长短不一的DNA片段，其长度取决于改组反应所针对的碱基在待测DNA片断中的位置，将各组反应产物通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后直接识读待测DNA的序列。
45、Sanger双脱氧链终止法,全称：双脱氧链末端合成终止法
原理：利用DNA聚合酶，以待测单链DNA为模板，以dNTP为底物，设立4种互相独立的测序反应体系，在每个反应体系中加入不同的双脱氧核苷酸三磷酸（ddNTP）作为链延终止剂，在测序引物引导下，按照碱基配对原则，每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链，通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后，从凝胶底部到顶部按5’到3’方向读出新合成链序列，由此推知待测模板链的序列。每个测序反应体系的组成：1.DNA聚合酶；2.单链DNA模板（待测片段）；3.带有3-OH末端的单链寡核苷酸引物；4.Mg2+；5.原料-dNTPs(dATP,dGTP,dCTP和dTTP)；6.终止剂-ddNTPs(ddATP,ddGTP,ddCTP和ddTTP)测序体系的关键成分：（1）链终止剂，2’，3’-二脱氧核糖核苷酸（ddNTPs)（2）用于测序的变性聚丙烯酰胺凝胶（PAGE)胶长40cm，厚度均匀；4-8%丙烯酰胺；7mol/L尿素（3）模板，即待测序的DNA片段（4）引物。酶促测序反应中，利用一个与模板特定序列互补的合成寡核苷酸作为DNA合成的引物（5）DNA聚合酶（6）放射性同位素标记的dNTP：α-35S-dNTP 焦磷酸测序技术（PSQ)：在以靶DNA链为模板指导核酸合成的过程中，将释放的可见光作为检测信号，从而对靶DNA链进行实时测序的方法，是一种合成测序技术。原理：同一反应体系中由四种酶催化的级联化学发光反应，首先让测序引物与待测模板结合成杂交体，在每一轮测序反应中，只加入一种dNTP，若该dNTP与模板配对，聚合酶就可以将其掺入到引物链中，并释放出等摩尔的焦磷酸基团（PPi），PPi最终转化为可检测的光信号，并由Pyrogram TM 转化为一个峰值，每个峰值的高度与反应中掺入的核苷酸数目成正比，随后，加入下一种dNTP，继续DNA链的合成。产生的荧光信号自动传入分析系统，直接测读靶DNA序列。特点：1.无需电泳，也无需荧光标记，操作极为简便，具快速、准确、经济和实时；2.阅读能力已从100bp至400bp ；3.该技术具有多种不同的用途。
46、简述哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有哪几种？
哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有： 酚提取法、甲酰胺解聚法、玻棒缠绕法和异丙醇沉淀法、磁珠吸附法等。
47、简述重组DNA技术的原理及技术。
重组DNA是在体外利用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异的切割，获得的目的基因或DNA片段与载体连接，从而组成一个新的DNA分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，并在宿主细胞中进行无性繁殖，获得大量的目的基因或DNA片段。经重组的DNA分子能在宿主细胞中进行表达，获得相应的蛋白质。
大致步骤包括：①目的基因的获取；②载体的选择；③目的基因与运载体连接成重组 DNA；④重组DNA导入受种细胞；⑤重组体的筛选
49、简述黏性末端DNA重组体的构建过程。
目的基因和载体可由同一种限制酶切割后产生，或由不同的限制酶切割形成互补黏性末端，经退火，彼此间很容易按碱基配对原则形成氢键。然后由DNA连接酶催化连接接头处的缺口，形成重组质粒。载体DNA在限制酶切割后，用碱性磷酸酶处理，除去5’端磷酸基，以避免载体DNA自身环化。50、举例说出重组DNA技术在医药领域的应用。
可以利用重组DNA技术探明致病基因的结构和功能，了解其致病机制；开发基因工程药物和疫苗用于临床；建立基因诊断、治疗技术，为疾病的预防、治疗提供新方法、新技术。具体可用于基因诊断：基因诊断是从基因水平上检测人类遗传性疾病的基因缺陷；基因治疗：是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过载体导入人体靶细胞取代靶细胞中的缺陷基因，从而达到治疗疾病目的的方法；基因工程药物、疫苗和抗体的研究和制备；利用基因敲除或转基因技术可改造生物、培育新的生物品种或用于药物筛选和新药评价等。
51、基因芯片的主要类型及其特点（1）从支持物来分 ①薄膜型：聚丙烯膜、硝酸纤维素膜和尼龙膜②玻片型：生产此类产品的公司 如 Affimetrix（2）从点阵的制备方法来分 ①原位合成型（In Situ Synthesis）②合成点样型（off-chip synthesis）（3）根据探针片段长度分 ①Oligo-Chip：约8~25nt，常用于基因类型的分析，如突变、正常变异（多态性）和测序②cDNA-Chip：<2000nt，常用于基因表达和差异表达分析（两种或以上相关样本）③Genomic Chip：>5000nt，基因组结构分析（4）根据用途分：基因变异检测芯片表达谱芯片功能基因芯片.52、生物芯片：采用平面微细加工技术（光导原位合成或微量点样等）将大量生物样品（核酸、多肽、细胞、组织切片等）有序地固化于支持物表面（玻片、硅片、尼龙膜等）由此组成的密集二维生物样品的微阵列。原理：分子间特异的相互作用
生物芯片技术的特点：1）高度交叉的综合性新技术；2）高度集成性、微型化和连续化；3）高通量；4）通过设计不同的探针阵列、使用特定的分析方法，可使该技术具有多种不同的应用价值。
基因芯片：
1）基因芯片：有序地、高密度地排列着大量的基因片段（probe)的载体(玻璃片或纤维膜等)。2）基因芯片技术：将大量核酸探针分子固定于支持物上，标记的样品分子按碱基互补原则与探针进行杂交，通过检测杂交信号分布和强度、进而获取关于样品分子的序列和数量的信息，是高通量研究基因表达、突变等的革命性技术。基因芯片检测的原理和步骤：
原理：将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的待测样品进行杂交，通过检测杂交信号的分布和强度，实现对样品中基因信息的定性和定量分析。
基本步骤：
1.芯片制备。2.靶核酸制备（样品提取纯化、扩增和标记）3.靶核酸与探针（芯片）杂交 4.杂交结果的扫描5.图像分析和数据处理
基因芯片的特点：
1.微型化和自动化；现有芯片面积：最大525cm２,最小1cm２样品DNA的用量：5nl/阵点 杂交和洗片等过程自动化,工作效率极高。2.高度平行性；实验组和对照组的样品等都在同一张芯片上同时进行杂交分析,结果的可比性好。
3.巨大的信息产出率；芯片上各点所对应的基因或其表达的定性（量）分析、差异表达分析等。4.高度敏感性和专一性；能可靠并准确检测出10pgDNA/μL样品。5.可反复使用；一张由尼龙膜制作的微阵列，可以重复杂交使用多达20次。
53、简述蛋白芯片的原理及应用。
蛋白质芯片的基本原理是采用原位合成、机械点样或共价结合的等方法将多肽、蛋白、酶、抗原、抗体固定于固相介质上形成的生物分子点阵，在待分析样品中的生物分子与蛋白质芯片的探针分子发生杂交或相互作用或其他分离方式分离后，利用激光共聚焦显微扫描仪对杂交信号进行高通量检测和分析。蛋白质芯片是将整个蛋白质水平的相关生化分析过程集成于芯片表面，从而实现对多肽、蛋白质及其他生物成份进行高通量检测。
蛋白质芯片技术是一种快捷、高效、高通量、并行、微型化和自动化的蛋白质分析技术，适用于分析包括组织、细胞系、体液在内的多种生物样品能分析包含针对信号传导、癌症、细胞周期调控、细胞结构、凋亡和神经生物学等广泛的生物功能的相关蛋白，灵敏度高达pg/ml。
54、举例说明基因芯片在临床诊断中的应用。
基因芯片作为一项现代化的诊断新技术在感染性疾病、遗传性疾病的诊断和耐药性检测等方面已显示出良好的应用前景。下面举例说明基因芯片在疾病诊断的应用。
（1）感染性疾病的诊断。性传播疾病、肝炎等。
（2）遗传性疾病的诊断。地中海贫血、血友病、婚前检查等。（3）耐药性检测。结核分支杆菌耐药性检测芯片等。
55、试述基因芯片的工作原理及制备。
基因芯片技术是建立在基因探针和杂交测序技术上的一种高效、快速的核酸序列分析手段。它将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强度及分布来进行分析。在一块1cm2大小的基因芯片上，根据需要可固定数以千计甚至万计的基因，以此形成一个密集的基因方阵，实现对千万个基因的同步检测。基因芯片技术主要包括四个主要步骤：芯片制备、样品制备、杂交反应和信号检测以及结果分析。
56、试述生物芯片的种类及主要功能。
生物芯片根据其结构特点，可以将生物芯片分为微阵列芯片和微流体芯片两个主要类别。微阵列芯片是由生物材料微阵列构成的芯片，包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片和组织芯片等，由于它们的工作原理都是基于生物分子之间的亲和结合作用，如核酸分子的碱基配对作用，抗原和抗体的结合等，所以通常也称为亲和生物芯片。微流芯片是以各种微结构为基础的芯片，利用它可实现对各种生化组分的微流控操作和分析，这类芯片的代表有毛细管电泳芯片、PCR反应芯片、介电电泳芯片等。(生物芯片发展的最终目标是将各种生物化学分析操作的整个过程，从样品制备、生化反应到结果检测，都集成化并缩微到芯片上自动完成，以获得所谓的微型全分析系统（micro total analysis systen,μ-TAS）,或称“微缩芯片实验室”（lab-on-a-chip）。微缩芯片实验室代表了生物芯片技术发展的未来。)
57、核酸探针：序列已知的、能与待测的靶核酸序列互补结合、并带有可检测标记的核酸片段。（它可以是整个基因，或基因的一部分；它可以是DNA或RNA）。
58、基因组DNA探针：为某一基因的全部或部分序列。缺点：真核基因组含有内含子序列；因此，当其用于检测基因表达时，杂交效率低
cDNA探针：从已构建的cDNA文库中筛选和分离出来的靶基因序列。cDNA探针无内含子序列，尤其适用于基因表达的检测，目前应用最广。
59、基因组探针和cDNA探针的共同优点：①制备方便：克隆于质粒载体中②稳定：DNA探针较RNA探针稳定；RNA易被RNA酶降解③标记方法成熟和多样。共同缺点：双链探针存在自身复性，影响杂交效率。
60、RNA探针的优点：单链：杂交时不存在第二条链的竞争（自身复性），杂交效率高；含RNA的杂交体更稳定（Tm更高），杂交反应可以在更为严格的条件下进行，因而RNA探针杂交的特异性高 主要缺点：探针不稳定，易被RNase降解。RNA探针适合于：Northern杂交、原位杂交等。61原位杂交的基本原理
样本经适当处理后，使细胞通透性增加，让探针进入细胞内与组织、细胞中待检测的核酸进行特异性结合形成杂交体，然后通过组织化学或免疫组织化学方法在被检测的核酸原位形成的杂交信号，在显微镜或电子显微镜下对待测核酸进行细胞内定位的方法。
62、核酸杂交技术是一种分子生物学的标准技术，用于检测DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）。DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼农膜上，与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记。在膜上杂交时，探针通过氢键与其互补的靶序列结合，洗去未结合的游离探针后，经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针。
63、核酸分离与纯化的原则：
1.保证核酸序列结构完整性，防止降解和结构破坏;2.剔除其他物质，保证纯度
64、在核酸的分离和纯化过程中，如何保持核酸的完整性？
[本题答案] 为了保证核酸的完整性，首先在操作过程中，应尽量简化操作步骤，减少各种破坏核酸的有害因素，包括物理、化学与生物学的因素。提取应在0～4℃的条件下进行；另外避免强力的机械剪切力对核酸的破坏。细胞内或外来的核酸酶对核酸的生物降解，而破坏核酸的一级结构，使用EDTA、柠檬酸盐并在低温条件下操作，基本上就可以抑制DNA酶的活性；并尽可能地抑制RNA酶的活性。65、RNA的分离与提取：
难点：RNA在体外十分不稳定，易降解，不易得到全长；RNA酶在体外存在于手汉、唾液、呼吸、灰尘中。原则：防止污染、防止降解。
防止方法： 高压灭菌；器皿：200 ℃烘烤2h；试剂：采用焦碳酸二乙脂（DEPC）处理；戴手套、口罩。
提取方法：（1）异硫酸胍-酚氯仿法： 异硫酸胍（4M）+巯基乙醇（0.14M）为蛋白质变性剂，酚/氯仿抽提，异丙醇沉淀RNA，75%乙醇洗涤（2）TRIzol法： TRIzol（苯酚+硫氰酸化合物）+氯仿+异丙醇+75%乙醇（3）酚-氯法。纯化方法：饱和酚（pH4.5-5.5）66、简述原位杂交在临床中的应用
原位杂交技术可以通过标记的探针与分裂中期染色体DNA杂交来精确定位特定核苷酸序列在染色体上的位置；与细胞RNA杂交可观察组织细胞中特定基因的表达水平；还可用特异性的细菌或病毒的核酸序列作为探针与组织、细胞杂交，以确定有无病原体的感染等。原位杂交能在成分复杂的组织中对单一细胞进行研究，不受同一组织中其它成分的影响，因此对于那些细胞数量少且散在于其它组织中的细胞内DNA或RNA的研究更为方便。此外，原位杂交不需要从组织中提取核酸，有利于检测组织中含量极低的靶序列，并可完整地保持组织和细胞的形态，更能准确地反应出组织细胞的相互关系及功能状态。举例：原位杂交检测上皮细胞中人乳头状瘤病毒（HPV）DNA 67、简述临床诊断常用的FISH探针的类型及用途。
根据核酸探针的序列特点，可将FISH探针分为三大类：重复序列探针、单一序列探针和全染色体涂抹探针。重复序列探针（repetitive sequences probes）是指与某条特定的染色体结构结合、特异识别重复DNA序列的探针如着丝粒探针、端粒探针等。一般来说，不同的染色体，着丝粒重复序列中的核苷酸序列也不同，但端粒重复序列不具有染色体特异性。单一序列探针(Unique sequence probes)与某条染色体上特定的区域或基因的单拷贝DNA序列杂交。包括带特异性探针（band special probes）和基因座特异性探针（Locus Specific probes）等。全染色体涂抹探针（whole chromosome painting probes, WCP）是识别一条特定染色体全长上的单一序列探针的混合物。68、临床基因扩增检验实验室应如何设置。
由于基因扩增检验是对靶核酸的指数倍扩增过程，因而有大量的扩增产物的出现，这种扩增产物极易对以后的新扩增反应产生“污染”，为防止这种污染的发生，就需要对基因扩增检验实验室进行严格的分区。临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域，即试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区以及扩增产物分析区。如果采用全自动扩增仪，后两个区域可以合并。应注意的是，各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。进入各工作区域必须严格按单一方向进行，即试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。各区的仪器设备包括工作服、鞋子、实验记录本和笔等都必须专用，不得混淆。此外，上述四个工作区域内还应有固定于房顶的紫外灯，以便于工作后区域内的空气照射。69、如何保证临床基因扩增检验实验室的质量。
临床基因扩增检验实验室的常规测定由一系列步骤组成，包括样本收集、样本处理（核酸提取）、核酸扩增、产物检测结果报告及解释等。室内质量控制仅涉及样本处理、核酸扩增和产物分析等测定分析步骤，而室间质量评价则除了监测测定分析步骤外，还包括较大范围的实验室活动，诸如样本接收中的可靠性、结果报告及解释等。QA则是覆盖更广范围的活动，包括样本收集、结果报告和解释等。
第二篇：分子诊断学教学大纲
《分子诊断学》理论教学大纲(本科)编写单位：临床生物化学教研室
参考教材：《分子诊断学》，尹一兵主编，高等教育出《分子诊断学》教学大纲
课程编码：版社，第1版，2007年
05290040 课程名称：分子诊断学（Molecular Diagnose）学分:2.5 总学时：50学时
理论学时：38学时 实验学时：12学时 先修课程要求：生物化学、细胞生物学、医学微生物学、医学免疫学 适应专业：医学检验 教材： 1.尹一兵.分子诊断学，高等教育出版社，第1版，2007年1月； 2.查锡良.生物化学，人民卫生出版社，第七版，2008年1月
一、课程在培养方案中的地位、目的和任务 分子诊断学是临床检验诊断学的一个重要分支。是利用分子生物学技术来研究机体外源性和内源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的改变，从而为疾病诊断，病情监测，药物疗效，预后判断和疾病预防等多方面提供信息和理论依据。随着分子生物学理论与技术在临床检验中的应用，分子诊断学成为当代医学的重要前沿领域，将在临床检验工作中逐步进入主导地位。
二、课程的基本要求 了解分子诊断学性质、任务、发展历程；掌握有关分子诊断学的基本理论和基础知识，重点掌握基因与基因组结构特点与功能；真核生物和原核生物的基因表达调控的基本原理；掌握分子诊断学常用技术方法，着重掌握基因工程技术、PCR、分子杂交、核酸测序、生物芯片技术等分子生物学核心实验技术；了解分子生物学新技术及应用、新进展，并学习DNA提取、PCR基因克隆技术等基础实验，培养学生实验操作技能和实际动手能力。
三、学时安排
（理论课
38学时）授课内容
总学时 理论学时 实验学时 备注 绪论 2 基因组概论 2 8 基因表达调控 4 蛋白质组学 2 生物大分子物质的分离与纯化 2 重组DNA技术 4 PCR 6 4 核酸测序技术 2 核酸分子杂交技术 2 生物芯片技术 2 生物信息学概论 4 其他分子诊断检测技术 4 复习2 总计 50 38 12
四、考核 考核方式：理论考试笔试。成绩构成：理论考试,70%，实验和平时成绩30%。
五、课程基本内容 第一章 绪论 [目的要求] 1.了解分子诊断学的发展简史 2.熟悉分子诊断学研究的主要内容 3.熟悉临分子诊断学在医学中的应用 [讲课时数] 2学时 [教学内容] 1.分子诊断学的性质、任务和特点 2.分子诊断学的历史、现状及未来 3.分子诊断学的现状 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学 第二章 基因组概论
[目的要求] 1.了解基因组学的发展及研究内容 2.熟悉基因组计划主要内容 3.掌握基因与基因组概念 [讲课时数] 2学时 [教学内容] 1.基因 2.基因组 3.基因组计划 4.基因组学 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学 第十三章 基因表达调控（生物化学）[目的要求] 1.熟悉基因表达调控的基本概念 2.熟悉基因表达调控的基本原理 3.熟悉原核生物和真核生物基因表达调节方式 [讲课时数] 4学时 [教学内容] 1.基因表达调控的基本概念 2.基因表达调控的基本原理 3.原核生物基因表达调节 4.真核生物基因表达调节 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学 第五章 蛋白质组学 [目的要求] 1.熟悉蛋白质组学研究特点及研究内容 2.熟悉蛋白质组学主要技术 3.掌握蛋白质组学基本概念 [讲课时数] 2学时 [教学内容]
1.蛋白质组学基本概念
2.蛋白质组学研究特点 3.蛋白质组学主要技术 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学 第六章 核酸的分离与纯化 [目的要求] 1.熟悉核酸分离与纯化的设计与原则 2.熟悉常用基因组DNA、质粒DNA和RNA分离与纯化原理与方法 [讲课时数] 2学时 [教学内容] 1.核酸分离与纯化的设计与原则 2.基因组DNA的分离与纯化 3.质粒DNA的分离与纯化 4.RNA的分离与纯化 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学 第七章 重组DNA技术 [目的要求] 1.了解重组DNA技术的临床应用 2.了解重组DNA技术常用载体 3.熟悉重组DNA技术的一般步骤 4.掌握限制性核酸内切酶作用特点与重组DNA技术概念 [讲课时数] 4学时 [教学内容] 1.重组DNA技术概念 2.重组DNA技术体系 2.基因组DNA技术常用载体 3.重组DNA技术一般操作步骤 4.重组DNA技术的应用 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学
第八章 PCR [目的要求] 1.了解 PCR
技术的临床应用 2.了解荧光定量PCR 3.熟悉 PCR的设计及影响因素 4.掌握PCR反应原理 [讲课时数] 6学时 [教学内容] 1.PCR反应原理 2.PCR的设计及影响因素 3.荧光定量PCR 4.PCR检测技术的临床应用 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学 第十章 核酸测序技术 [目的要求] 1.了解 DNA测序策略 2.了解DNA测序新技术及DNA自动化测序 3.熟悉 Sanger双脱氧链终止法原理与过程 4.熟悉化学测序法原理与过程 [讲课时数] 2学时 [教学内容] 1.Sanger双脱氧链终止法 2.化学测序法 3.DNA测序策略 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学 第九章 核酸分子杂交技术（2学时）[目的要求] 1.了解 液相核酸分子杂交 2.熟悉传统的核酸分子杂交技术（Southern印迹、Northern印迹、原位杂交）。
3.熟悉常用探针标记方法
4.掌握核酸分子杂交基本原理 [讲课时数] 2学时 [教学内容] 1.核酸分子杂交的基本原理 2.核酸分子杂交常见探针与标记 3.传统核酸分子杂交技术 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学 第十一章 生物芯片技术 [目的要求] 1.了解 芯片实验室 2.熟悉基因芯片基本原理及技术 3.熟悉 蛋白质芯片基本原理及技术 [讲课时数] 2学时 [教学内容] 1.基因芯片原理、技术与应用 2.蛋白质芯片原理、分类、技术与应用 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学 第十三章 生物信息学概论 [目的要求] 1.了解 生物信息学的定义 2.了解重要生物信息数据库 3.了解核酸数据分析与蛋白质数据分析 [讲课时数] 4学时 [教学内容] 1.生物信息学的定义与发展历史 2.数据库检索 3.核酸数据分析与蛋白质数据分析 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学
第十二章 其他分子诊断检测技术 [目的要求] 1.了解 基因变异检测技术 2.了解脉冲电场凝胶电泳技术 3.了解分子影像技术 4.了解凋亡常用检测方法 5.了解RNA干扰 [讲课时数] 4学时 [教学内容] 1.基因变异检测技术原理、技术与应用 2.脉冲电场凝胶电泳技术原理、技术与应用 3.分子影像技术原理、技术与应用 4.凋亡常用检测方法原理 5.RNA干扰 [教学方法]讲授法 [教学手段]多媒体教学
第三篇：分子热运动简答题
分子热运动简答题
1.同学们做作业时,常会用透明胶带把错处揭去,操作时往往要把胶带用力抹一下使之于纸紧贴,才能揭干净,这是为什么? 答：用力抹胶带可以缩小胶带分子与纸分子间的距离，（从而达到引力起作用的范围），使胶带分子与纸分子之间产生较大的引力，这种较大的引力可以将错处的纸揭掉一层。
2.木工师傅做木制品时，用液体胶粘木条，当液体胶凝固后，木条粘的很牢，这是为什么？ 答：因为木胶凝固后，由液体变成固体，分之间距离变小，作用力变大，所以木胶干了后才能粘牢。
3.炒菜时，将盐放在锅里，菜一下子就变咸了；而腌酸菜时将盐放在菜缸里要过很长时间菜才能咸,为什么? 答：分子在不停地做无规则运动，其速度与温度有关，温度越高，分子做无规则运动越剧烈，菜变咸是由于菜和盐之间发生扩散，盐分子做无规则运动，逐渐扩散到菜里面，是菜变咸，腌菜是在常温下进行的，扩散较慢。炒菜时温度高，分子运动更剧烈，扩散较快，所以.炒菜时，将盐放在锅里，菜一下子就变咸了；而腌酸菜时将盐放在菜缸里要过很长时间菜才能咸。
4.炒菜时，很远就闻到了菜的香味，当菜冷下来后，香味就逐渐变淡了，为什么？
答：炒菜时，菜的温度高，分子运动快，有大量分子运动到周围空气中，所以我们能闻到浓浓的香味；当菜凉下来后，温度降低，分子运动速度减慢，扩散到空气中的分子较少，范围较小，所以闻到的香味变淡．
5.如图甲所示，在一端封闭、一端开口的细玻璃管内，下半部倒入水，在水的上面注入酒精且注满，用胶塞塞住管口，过一段时间会看到什么现象？如图乙所示，把一块表面很干净的玻璃板挂在弹簧测力计的下面，手持测力计的上端，把玻璃板往下放到刚好和一盆水的水面接触，再慢慢向上提弹簧测力计，那么，弹簧测力计的示数会有什么变化呢？试亲自动手做一下上面的实验，观察、体会、分析一下其中的道理。
答：图甲：我们看到酒精和水混合后，体积变小了，这个事实说明分子在不停地运动，水和酒精的分子彼此进入对方的空隙中去，所以体积变小。图乙：弹簧测力计的示数变大了，这个事实说明分子之间有引力.图a是一个铁丝圈，中间松松地系着一根棉线；图b是浸过肥皂水并附有液体薄膜的铁丝圈；图c表示用手指头轻轻碰一下棉线的任意一侧。请你猜想一下，会出现什么现象？自己亲自动手做一做，写出你观察到的现象，并试着解释一下。
答：可观察到棉线被另一半薄膜绷紧，这是由于棉线分子和肥皂分子之间的引力的结果。7.如图所示，小明同学在分别盛有热水和冷水的玻璃杯中，小心地滴入一滴红墨水，请回答：（1）实验观察到的现象是什么？．
（2）选用热水和冷水做实验的目的是什么？
答：（1）会看到滴入热水中的红墨水扩散的快；（2）便于探究分子无规则运动速度与温度的关系． 8.找一枚2分硬币轻轻的放入一盆清水的表面上，能否使它不沉入水中？应该怎样放？为什么水能拖起它？
答：能，轻轻缓慢地平放（应不使硬币浸入水中）。水和硬币分子间有吸引力的作用。答：液体表面分子的分布要比内部稀疏些，分子间的引力和斥力都减弱了，但斥力减弱更多，所以表面分子间又相互引力，这个力叫表面张力，它使液面形成一层弹性薄膜，水面的这层弹性薄膜把硬币托住。
9.为什么拉断一张纸所用的力比撕破一张纸所用的力要大？
答：拉一张纸比撕同一张纸时所要克服的分子间的引力多些
。（拉断纸需要同时拉断整个截面上的纤维，即克服整个断面上的分子引力，而撕开一张纸是逐一拉断纤维，每次只克服一个小范围内的分子引力。）
10.通过学习我们已经知道，分子极其微小，直接用眼睛根本看不到，我们通过什么方法来知道它的运动情况的？
答：科学家可以用高科技手段对分子进行观察，而我们可以从一些日常生活中的现象，或用一些简单的实验方法来分析得出分子的运动情况。如扩散现象，人们通过气体、液体、固体的扩散现象，就能说明微小的分子在永不停息地运动着。如：在房间里接通电蚊香片的电源，则整个房间都能闻到蚊香片的气味；把盐撒在菜上，过一段时间后菜就有了咸味；把卫生球（用萘制成）放入箱子里，几天后打开箱子，则整个箱子里都会发出卫生球的气味；在一碗汤里倒入点酱油，则整碗汤都会有酱油的味道和颜色。
11.武汉钢铁公司在制造钢铁零件时，为了增加零件表面的硬度，常把零件放入含碳的渗碳剂中，并适当加热，这样碳分子就可以较快渗入到零件的表面层，试用所学知识说明其中的道理。
答：由于分子在不停地运动，且相互之间存在间隙，所以不同的物质在互相接触时，就会发生扩散现象，碳分子入零件的表面层，就是发生在两种不同的物质间的扩散，通过加热升高了温度，分子无规则运动越激烈，扩散过程越快，碳分子入零件表面层也就加快了。12.在装着红棕色二氧化氮气体的瓶子上面（二氧化氮的密度大于空气密度），倒扣一个空瓶子，使两个瓶口相对，两瓶口之间用一块玻璃板隔开（图甲）．抽掉玻璃板后，最终发现两瓶内气体颜色基本相同（图乙）．
（1）这是一种什么现象？扩散现象
（2）它说明了什么？
说明分子在不停地做无规则运动。
13..扩散现象跟人们的生活密切相关，它有时对人们有用，例如腌制鸭蛋就是通过扩散使盐进入蛋中；它有时有对人们有害，如人造木板粘接剂中的甲醛扩散在空气中造成环境污染。请你分别列举一个扩散现象有用和有害的实例。
答案：有害的扩散现象：煤气泄漏；房间里有人吸烟；臭气熏天。
有益的扩散现象：花香四溢；对制糖水；酒香不怕巷子深。
面粉很散，加水后粘在一起不易散开，为什么？
答： 面粉加水粘在一起后，分子间的距离减小。这样，分子间的作用力就增大，不易散开了。
15为什么说破镜不能重圆？
答：是分子之间距离太大，几乎无作用力，所以破镜不能重圆
内能简答题
1小明用打气筒给自行车轮胎打气后,发现气筒壁的温度明显高于打气前的温度,请你说明其中的原因.答：气筒壁温度升高有两方面的原因:一是由于气筒内的活塞与筒壁间的摩擦生热,引起壁温升高;二是由于气筒内的活塞不断压缩气体对气体做功,气体温度升高导致筒壁的温度升高。
2.用打气筒给自行车的车胎打气，过一会儿筒壁会热起来，解释此现象时，甲同学说：“这是由于活塞上下移动和筒壁摩擦，由于摩擦生热使筒壁温度升高引起的．”乙同学说：“这是由于活塞压缩筒内空气做功，使空气的内能增加，温度升高，又由于热传递筒壁也热起来．”他们俩谁说得对呢?
答：筒壁热了，说明筒壁的温度升高，内能增加了．
用打气筒打气时，活塞与筒壁摩擦可以生热；活塞压缩空气做功也可以生热．实际当中用手摸气筒时，感觉气筒的最下端热，活塞一般压不到这个位置．活塞跟气筒上下的摩擦次数是一样的，而气筒上下不一样热，说明由于摩擦使气筒发热不是主要原因．那么主要原因是活塞越往下压，对气筒内空气做功越多，消耗的机械能也越多，转化的内能也越多，气筒内空气温度就越高，由于热传递，气筒下部的温度也越高．所以乙同学的讲法是对的． 3如图所示，老爷爷站在雪地里手冻的很冷，请你给老爷爷想一想办法，怎样做可以使手暖和些？说出两种办法来，并说明这样做的道理。
答：（1）两手搓一搓可使手暖和些，因为搓手时克服摩擦力做功，机械能转化为手的内能，手的内能增大，温度升高；
（2）可以把手在火炉上烤一烤，这是利用热传递的方式使手的内能增大，温度升高.。
3寒冷的冬天，我们常用两手相互搓或对手 哈气 的方法暖手，请分析这样能使手变暖的原因，并说明两种取暖方法在实质上有何不同？
答：搓手变暖的原因：用做功的方式改变内能。实质是能量的转化，将机械能转化为内能； 哈气变暖的原因：用热传递的方式改变内能。实质是内能的转移。4.人在磨菜刀或剪刀时，往磨刀石上洒水，这主要是为了什么？
答： 刀与磨刀石摩擦生热，刀的温度过高时，钢质硬度会减小，刀刃就不锋利了，洒水后，水吸收了热量，刀的温度就不会过高了。
5.小亮将金属块在砂石上迅速地来回摩擦，金属块的温度就会升高，为什么？ 答：金属块在砂石上迅速地来回摩擦，对金属块做功，机械能转化为内能，使金属块内能增大，温度升高．
6按照图所示的方法，假如你将铁丝快速地弯折十余次，然后用手指触摸一下弯折处，你会有何感觉?请用物理知识解释产生此现象的原因．
答：感觉发烫(热)。人对铁丝做功，铁丝内能增大，温度升高．
7.要使粗铁丝某段变热，你能有多少种方法？请至少说出四种方法，并指出其改变内能的方式。
做功包括：摩擦铁丝，敲击铁丝，反复弯折铁丝等。热传递就是给铁丝加热，用高温物体与铁丝接触。
8.夏天，人们在开启啤酒瓶盖的瞬间伴有“嘭”的一声，瓶口有一股“白烟”出现．请你用所学的物理知识解释以上现象．
答：瓶内气压大于瓶外气压，打开瓶盖后，瓶内气体膨胀对外做功，内能减小，温度降低，瓶内水蒸气液化成小水滴，出现“白烟”，瓶内气体冲出引起周围空气振动，发出“嘭”的声音。
9.在生活中你可能会发现这样有趣的事：在你往保温瓶灌入大半瓶开水后，塞上软木塞，常常会听到“砰”的声音，发生“蹦塞”现象，这是为什么？在你听到此声音的同时还会看到什么？请你解释一下你所观察到的现象。
答：塞上软木塞后，瓶内的气压大于外面的大气压，产生压力差，推动瓶塞向上运动。听到声音的同时会看到瓶口附近有“白气”产生，是因为瓶内气体对瓶塞做功，内能减少，温度降低，致使瓶内和瓶口的水蒸气液化成小水珠。
10.如图所示，在气缸A中密封有压缩空气，B是一种被销钉K锁住的活塞，C是一个温度计．若活塞与气缸壁间没有摩擦，当把销钉拔出后，将观察到活塞 和 温度计 分别有什么现象发生？为什么？
答：当拔去销钉后活塞向右运动，对活塞做功，温度计的示数下降．
因为压缩空气的压强大于外面大气压，当把插销拔出时后，压缩气体膨胀推动活塞做功，内能减小温度降低。11用所学的物理知识解释以下现象：
（1）用打气筒给自行车打气．打完气后，摸一摸打气筒的外壁，发现外壁变热了．
（2）把打好气的轮胎放置一段时间，使轮胎里外的温度一致．然后旋动气门芯将轮胎放气，同时把温度计上的玻璃泡置于气门芯处喷出的气流中，这时会看到温度计的示数逐渐变小，表明气流的温度低于当时的气温．
答：（1）气筒打气时，气筒的活塞对筒内空气做功，筒内空气内能增大，温度升高；同时，由于气筒活塞运动与筒壁发生摩擦，通过做功方式也产生热，故打完气后，摸一摸打气筒的外壁，发现外壁变热了．
（2）当旋动气门芯将轮胎放气时，轮胎内的压缩空气迅速膨胀对外做功，使其内能减小、温度降低，故把温度计上的玻璃泡置于气门芯处喷出的气流中，这时会看到温度计的示数逐渐变小。
12神州号”宇宙飞船的表面层由耐高温材料做成，以防飞船从太空中返回地面的过程中产生的高温损坏飞船．请你想一想，为什么飞船在返回过程中温度会升高？
答：飞船在返回大气层后，由于飞船速度很快，它与空气相互摩擦，要克服摩擦做功，使飞船的内能增加，温度会升高．
13、如图所示，在金属管内装一些酒精，当迅速来回拉动绕过金属管的粗绳时，筒壁会发热，一会儿，看到紧塞在管口的塞子突然被射出，同时听到“呯”的一声．请自选文中某一现象，作简要解释． 现象：筒壁会发热
原因：克服摩擦做功，物体内能增加，温度升高 14.把一个薄壁金属管固定在桌上，里面放一些乙醚，用塞子塞紧，那一根绳子在管外绕几圈并迅速的来回拉绳子，一会儿，看到瓶塞被冲开，管口出现雾状的“气体”，试用能量转化的观点解释你看到的现象。
答：拉动绳子摩擦管壁，机械能转化为内能，使管壁内能增加，温度升高，管壁放热给乙醚，使乙醚汽化，乙醚蒸气气压足够大时，推开塞子，乙醚蒸气对塞子做功，乙醚蒸气的内能转化为机械能，乙醚蒸气内能减少，温度降低，重新液化，形成雾状气体。
15在日常生活中经常看到这样的现象：往保温瓶中灌入大半瓶开水，塞上木塞，忽然听到“噗”的一声，木塞蹦了出来，同时看到一股“白汽”从瓶中冒出来；而保温瓶中的开水剩下不多时，若瓶塞又不漏气，过了一段时间后，瓶塞会很难拔出。请你根据上述情景提出两个与物理知识有关的问题，并针对所提出的问题做出简答。问题1：_____________________ 简答：_____________________。问题2：_____________________ 简答： _____________________ 答：（1）木塞为什么会蹦出来？答：因为瓶内气体的压强大于瓶外的大气压强，瓶内气体膨胀对塞子做功，内能转化为塞子的动能，故塞子蹦起来。（2）在塞子蹦起来的同时，为什么瓶口会出现“白气”？答：瓶内的气体对塞子做功，内能减少而温度降低，气体内水蒸气液化而形成“白气”。（3）瓶内剩水不多时，瓶塞为什么难拔出？答：由于外面的大气压强比瓶内的气压大，对瓶塞产生向瓶内的压力较大，故很难拔出。（4）为什么瓶内气压会减小？由于瓶内气体在温度降低时，内部的水蒸气发生了液化，而使得瓶内气体变稀薄，故气压减小，小于大气压，故很难拔出。（只要符合题意均能得分）16如图所示，在一个瓶口较细的玻璃瓶内有一些水，水的上方有水蒸气，用塞子塞紧，通过塞子上的孔给瓶内打气，当瓶塞跳出时，可观察到什么现象？说明什么问题？
答：当瓶塞跳起时，瓶口有水雾产生，由于瓶内气体对瓶塞做功，内能减少，温度降低，水蒸气也化成小水珠形成雾。
17（09重庆）物理老师在课堂上用瓶壁较薄的空矿泉水瓶做了如下演示： 首先旋紧瓶盖，接着两手分别握住瓶的上、下部分，使劲拧瓶的下部，使其严重变形压缩瓶内空气，然后迅速旋开瓶盖，可看到瓶盖飞出数米远，瓶口和瓶内有“白雾”产生（如图）请你从以上情景中找出一个物理现象并指出与该物理现象对应的物理知识（不得与示例重复）
示例：
物理现象：使劲拧矿泉水瓶下部，使其发生严重形变 物理知识：力可以改变物体的形状
物理现象：______________________________________； 物理知识：_______________________________________。
答：（1）瓶口和瓶内有淡淡的“白雾” 液化
（2）旋紧瓶盖（或“旋开瓶盖”）力改变物体运动状态（3）瓶盖飞出数米远
惯性（或机械运动）
（4）手握住矿泉水瓶
摩擦力（或“弹力”）5（5）压缩瓶内空气 气体体积越小，压强越大（或对物体做功）（6）瓶盖冲出 气体对外做功（或“力改变物体运动状态”）（7）使劲拧矿泉水瓶下部，使其发生严重形变。力可以改变物体的形状
（答案不唯一，任选一种即可）
18如图所示，小明同学向空气压缩引火仪的厚壁玻璃筒里，吹进清新的空气，放进一小撮干燥的棉絮到底部，用力将活塞快速压下。
（1）压下活塞，厚壁玻璃筒里空气的内能 _________（选填“增大”、“减小”或“不变”），内能的变化方式是 _________。
（2）随着空气内能的变化，玻璃筒中棉絮的内能 _________（选填“增大”、“减小”或“不变”），内能的变化方式是 _________。（3）实验观察到的现象是 ___________________，说明的问题是 _______。
第四篇：诊断学知识点汇总_复习资料
诊断学知识点汇总，复习资料
绪论
1、症状概念，2、体格检查，3、诊断学内容 第一篇 常见症状
1、体征，2、正常体温、稽留热、弛张热的定义，3、咯血定义，4、咯血与呕血区别
5、呼吸困难定义，6、三种肺性呼吸困难表现（尤期前二种），7、心原性呼吸困难的特点
8、胸痛的病因，9、中心与周围性紫绀不同原因，10、心原性与肾原性水肿的鉴别
11、肝原性水肿表现特点
12、急性腹痛的常见原因
13、呕血的常见原因，出血量的估计，呕血与便血的相互关系
14、黄疸（和隐性）的定义，三种黄疸的鉴别，15、嗜睡与昏睡的区别，浅与深昏迷的区别 第二篇 问诊
1、问诊的内容，2、主诉的定义和组成
3、现病史是病史中的主体部分，由哪些组成，与既往史有何不同 第三篇 检体诊断
1、体检基本方法有哪些？触诊的方法有哪些？叩诊的方法，体型的分类
2，常见面容，三种体位，皮肤发黄二种原因的区别，红疹与出血点 的区别，蜘蛛痣与肝掌购
3、霍纳氏征，瞳孔大小的改变，4、扁桃体肿大的分度，5、颈静脉怒张的定义
6、甲状腺肿大的分度，听到血管杂音的意义，7、桶状胸
8、胸式（男，小孩）腹式（女）呼吸增减意义，9、深大呼吸，潮式及间停呼吸
10、触觉语颤、听觉语音的定义及方法，增减意义、11、正常胸部叩诊音（4种），肺下界及移动度，12、三种呼吸音的区别
13、异常支气管呼吸音听诊意义，14、罗音产生机理，二种罗音的鉴别
15、胸膜磨擦音的听诊特点，16、肺实变、肺气肿、胸腔积液、气胸的综合体征。
17、心尖搏动点的位置，范围，左、右心室肥大及纵隔移位时的变化 18、震颤定义与杂音的辨证关系
19、心脏叩诊的方法，左右心界的组成，心浊音界改变的原因（左室肥大、右室肥大肺脉高压，心包积液，左气胸及胸腔积液）20、心脏听诊内容，听诊部位，21、早搏及房颤的体征，室早及房颤的ECG表现。
二、三联律的概念。
22、第一、二心音的鉴别，23、第一心音增减及第二心音增减的意义，24钟摆律，胎心律
25、第二心音分裂的听诊特点及临床意义（正常人，二狭，PDA，RBBB，ASD—“固定”）
26、左心室舒张期奔马律的听诊特点及临床意义，27、OS及心包叩击音的意义
28、心杂音分析内容，29、器质性与功能性杂音的区别 30、Austin Flint 及 Graham Steell的定义，31 连续性杂音的意义
32、异常脉搏，正常血压，临界高血压，高血压，低血压
33、左、右心衰时的症状和体征，心功能级别（心功能不全度数）的判定原理及标准
34、二狭，二闭，主闭（周围血管体征），主狭的综合体征
35、腹部膨隆的意义，36、腹壁静脉方向（上，下腔梗阻，门脉高压，正常）
36、腹膜刺激征的检查方法及意义（板状腹，揉面感，压痛点，反跳痛，麦氏点，胆囊点）
37、腹部包块的检查内容，38、液波震颤的意义
39、肝、脾触诊的方法，正常大小，40、莫菲氏征及胆总管渐进阻塞征
41、泌尿系有炎症时的压痛点，42、肝上界位置、脾界，及浊音宽度
43、移动性浊音及腹水与巨大卵巢囊肿的鉴别
44、振水音的意义，45、肝硬化肝功能失低偿期，门脉高压的全身综合体征
46、胃肠穿孔致急性弥漫性腹膜炎时的综合体征
47、区别上、下运动神经元瘫痪，偏瘫和交叉瘫的概念。肌力的分级
48、肌张力，震颤（静止性，运动性，粗颤与细颤）
49、共济运动的检查方法和意义
50、生理反射，病理反射（巴氏征）的意义（锥体束损伤，上运动神经元瘫痪）82、脑膜刺征 第四篇 器械检查 心电图
1、胸导联及肢导联连接，心电轴的判断及意义
2、每一小格横、竖代表的时间、电压，心率的计算
3、正常P波的方向，时间，电压，“肺性P波”，“二尖瓣型P波”
4、QRS波：低电压，左右心室肥大
5、ST-T改变与心肌缺血，6、心肌梗塞：特征性表现，演变过程，定位
7、正常窦性心律的心电图特点，8、房性、交界性、室性早搏的心电图特征
9、房室传导阻滞：一度（P-R间期延长），二度，三度
10、P-R间期缩短：预激综合征
11、房颤的心电图特点（1、2、3点）第五篇 实验室检查 血液
1、血液三大系例正常值，2、中性粒细胞增减意义
3、中性粒细胞核左移，核右移，4、E的增减意义
5、Hct,Ret意义，骨髓
6、M/E，POX，NAP，铁染色的意义
7、缺铁性贫血的血象及骨髓象表现 出凝血
8、CFT，BT，9、血小板正常值与CRT
10、CT，KPTT，PT，11、PPP 尿液及肾功能
11、正常尿量，多尿，少尿，无尿的数值，12、血尿的概念，尿比重固定
13、蛋白尿的概念，尿糖，酮体阳性的意义，14、白细胞尿，脓尿，管型尿的意义
15、肾小球滤过功能，肾小管排泄功能和浓缩稀释试验的意义 粪便检查
16、OB试验的意义 脑脊液检查
17、几种常见脑膜炎的脑脊液的特点，18、漏出液与渗出液的鉴别要点 肝脏检查
18、肝功能检查包括哪些项目，急性病毒性肝炎和慢性肝病时肝功能有何变化？
19、AFP、AKP、γ-GT的临床意义 第七篇 诊断方法和病历
1、诊断常用的推理方法有哪些？
2、一元性诊断的意义
3、诊断的内容和格式，4、完整的住院病历包括哪些内容，由哪些人负责编写，病人入院后多长时间完成。
第五篇：部分复习资料
第一单元
1、结合《窃读记》一文，把握文中的动作和心理描写，体会作者遣词造句的精妙之处
2、给文章分段，归纳每段的段意
3、了解记叙方法——倒叙
倒叙，是根据表达的需要，把事件的结局或某个最重要、最突出的片段提到文章的前边，然后再从事件的开头按事情原来的发展顺序进行叙述的方法。
4、比喻句仿写、造句
例：一本你喜爱的书就是（……），也是（……）。
5、写作
（1）记叙文：谈谈你和书的故事（2）写采访记录（3）记录辩论过程
6、积累名言警句——读书 一日无书，百事荒芜。（陈寿）读书破万卷，下笔如有神。（杜甫）书犹药也，善读之可以医愚。（刘向）黑发不知勤学早，白首方悔读书迟。（颜真卿）读书有三到，谓心到、眼到、口到。（朱熹）第二单元
1、《泊船瓜洲》《秋思》《长相思》（1）理解、翻译以下诗句
①春风又绿江南岸，明月何时照我还。②洛阳城里见秋风，欲作家书意万重。③风一更，雪一更，聒碎乡心梦不成。
（2）想象《秋思》里描述的画面，改写为一个小故事（3）积累以寄托乡思为主题的诗词歌曲（4）体会诗人借不同景物抒发情怀的写法
2、结合《梅花魂》一文，领悟梅花不畏“风欺雪压”的品格，体会外祖父的思乡之情
3、了解托物言志的写作手法，体会“物”的象征意义和暗含的思想情感
4、写作：写写家乡的变化，抒发真实感情
5、体会炼字炼意的好处 春风又（绿）江南岸 僧（敲）月下门
6、积累诗句——思乡 悠悠天宇旷，切切故乡情。（张九龄）浮云终日行，游子久不至。（杜甫）落叶他乡树，寒灯独夜人。（马戴）明月有情应识我，年年相见在他乡。（袁枚）家在梦中何日到，春生江上几人还？（卢纶）江南几度梅花发，人在天涯鬓已斑。（刘著
小学语文知识汇总
一、词语
1．表示“看”的字词：瞥、瞅、望、瞄、瞪、盯、观察、凝视、注视、看望、探望、瞻仰、扫视、环视、仰望、俯视、鸟瞰、俯瞰、远望、眺望、了望
2．表示“说”的字词：讲、曰、讨论、议论、谈论、交流、交谈
3．表示“叫”的字词：嚷、吼、嚎、啼、鸣、嘶、嘶叫、嚎叫、叫嚷
4．表示“第一”的字词：首、元、甲、子、首先、冠军、魁首、首屈一指、名列前茅
5．象声词（表示声音的）：吱呀、喀嚓、扑哧、哗啦、沙沙、咕咚、叮当、咕噜、嗖嗖、唧唧喳喳、叽叽喳喳、轰轰隆隆、叮叮当当、叮叮咚咚、哗哗啦啦
6．表示春的成语：鸟语花香、春暖花开、阳春三月、万物复苏、春风轻拂、春光明媚
7．表示夏的成语：烈日当空、暑气逼人、大汗淋漓、挥汗如雨、乌云翻滚、热不可耐
8．表示秋的成语：秋高气爽、五谷丰登、万花凋谢、天高云淡、落叶沙沙、中秋月圆
9．表示冬的成语：三九严寒、天寒地冻、雪花飞舞、寒冬腊月、千里冰封、滴水成冰
10．带有人体器官或部位名称的词语：头重脚轻、指手画脚、愁眉苦脸、心明眼亮、目瞪口呆、张口结舌、交头接耳、面黄肌瘦、眼明手快、眼高手低、昂首挺胸、心灵手巧、摩拳擦掌、摩肩接踵
11．带有动物名称的成语：鼠目寸光、谈虎色变、兔死狐悲、龙马精神、杯弓蛇影、马到成功、与虎谋皮、亡羊补牢、雄狮猛虎、鹤立鸡群、狗急跳墙、叶公好龙、声名狼籍、狐假虎威、画蛇添足、九牛一毛、鸡犬不宁、一箭双雕、惊弓之鸟、胆小如鼠、打草惊蛇、鸡飞蛋打、指鹿为马、顺手牵羊、对牛弹琴、鸟语花香、虎背熊腰、杀鸡儆猴、莺歌燕舞、鸦雀无声、鱼目混珠、鱼龙混杂、龙争虎斗、出生牛犊、望女成凤、望子成龙、狗尾续貂、爱屋及乌、螳臂当车、蛛丝马迹、投鼠忌器、门口罗雀、管中窥豹
（带有“马”的词语：马不停蹄、马到成功、龙马精神、马失前蹄、指鹿为马、一马当先）
（带有“鸡”的词语：闻鸡起舞、雄鸡报晓、鹤立鸡群、杀鸡取卵、鸡犬不宁、鸡飞蛋打、鸡毛蒜皮）
（带有“牛”的成语：小试牛刀、九牛一毛、牛头马面、牛鬼蛇神、牛马不如、牛角挂书、牛毛细雨、如牛负重、风马牛不相及、初生牛犊不怕虎、九牛二虎之力）12．数字开头的成语：一诺千金、一鸣惊人、一马当先、一触即发、一气呵成、一丝不苟、一言九鼎、一日三秋、一落千丈、一字千金、一本万利、一手遮天、一文不值、一贫如洗、一身是胆、一毛不拔二三其德、两面三刀、两肋插刀、两败俱伤、两情相悦、两袖清风、两全其美、三生有幸、三思而行、三令五申、三头六臂、三更半夜、三顾茅庐、四面楚歌、四面八方、四海为家、四通八达、四平八稳、四分五裂、五大三粗、五光十色、五花八门、五体投地、五谷丰登、五彩缤纷、五湖四海、六神无主、六根清净、六道轮回、六亲不认、七零八落、七嘴八舌、七高八低、七窍生烟、七上八下、七折八扣、七拼八凑、八面玲珑、八面威风、八仙过海，各显神通、九霄云外、九牛一毛、九死一生、九鼎一丝、九牛二虎之力、十指连心、十面埋伏、十字街头、十全十美、十年寒窗、十万火急、十拿九稳、百年大计、百花齐放、百思不解、百家争鸣、百感交集、百读不厌、百川归海、千方百计、千军万马、千言万语、千辛万苦、千秋万代、千真万确、千里鹅毛、万无一失、万众一心、万事大吉、万人空巷、万家灯火、万象更新、万人瞩目
13．带有颜色的词语：桃红柳绿、万紫千红、青红皂白、黑白分明、绿意盎然、绿树成阴、素车白马、万古长青、漆黑一团、灯红酒绿、面红耳赤、青山绿水、白纸黑字、青黄不接
金灿灿、黄澄澄、绿莹莹、红彤彤、红艳艳、红通通、白茫茫、黑乎乎、黑压压
鹅黄、乳白、湖蓝、枣红、雪白、火红、梨黄、孔雀蓝、柠檬黄、象牙白、苹果绿
14．表示颜色多的成语：五彩缤纷、五光十色、万紫千红、绚丽多彩、色彩斑斓
15．表示形态多的成语：千姿百态、千姿万状、姿态万千、形态多样、形态不一
16．表示数量多的成语：不胜枚举、数不胜数、不可胜数、数以万计、不计其数、成千上万、成群结队、人山人海、排山倒海、琳琅满目、车水马龙、铺天盖地、满山遍野
17．表示变化快的成语：变化多端、变幻莫测、千变万化、瞬息万变
18．表示速度快的成语：一泻千里、一目十行、快如闪电、移步换影、健步如飞、19．表示时间快的成语：光阴似箭、日月如梭、星转斗移、流星赶月
20．表示“慢”的词：慢慢、缓缓、冉冉、徐徐、缓慢
21．表示时间极短的词语：一眨眼、一瞬间、刹那间、顷刻间、霎时间、时而、须臾、22．表示“死”的词语：去世、已故、牺牲、阵亡、逝世、与世长辞、为国捐躯、驾崩
23．表示“想”的词语：苦思冥想、静思默想、绞尽脑汁
24．表示人物品质的：拾金不昧、舍己为人、视死如归、坚贞不屈、不屈不挠
25．表示人物外貌的：身材魁梧、亭亭玉立、老态龙钟、西装革履、婀娜多姿、26．表示人物动作的：洗耳恭听、昂首阔步、拳打脚踢、交头接耳、左顾右盼
27．表示人物神态的：扬眉吐气、怒目而视、火眼金睛、面红耳赤、热泪盈眶
（表示“哭”的词语：泪流满面、泪如雨下、泪眼汪汪、泪如泉涌、嚎啕大哭）
（表示“笑”的词语：喜笑颜开、眉开眼笑、哈哈大笑、嫣然一笑、微微一笑）
28表示“人物心情”的成语：忐忑不安、惊慌失措、闷闷不乐、激动人心、焦急万分、（表示喜悦的：笑容可掬、微微一笑、开怀大笑、喜出望外、乐不可支）
（表示愤怒的：火冒三丈、怒发冲冠、勃然大怒、怒气冲冲、咬牙切齿）
（表示憎恶的：可憎可恶、十分可恶、深恶痛绝、疾恶如仇、恨之入骨）
（表示悲哀的：伤心落泪、欲哭无泪、失声痛哭、泣不成声、潸然泪下）
（表示忧愁的：无精打采、顾虑重重、忧愁不安、愁眉苦脸、闷闷不乐）
（表示激动的：激动不已、激动人心、百感交集、激动万分、感慨万分）
（表示舒畅的：舒舒服服、高枕无忧、无忧无虑、悠然自得、心旷神怡）
（表示着急的：迫不及待、急急忙忙、急不可待、操之过急、焦急万分）
（表示愧疚的：追悔莫及、悔恨交加、于心不安、深感内疚、羞愧难言）
（表示失望的：心灰意冷、大失所望、灰心丧气、毫无希望、黯然神伤）
（表示害怕的：惊弓之鸟、提心吊胆、惊惶失措、惊恐万状、惶惶不安）
29．上行下效：深入浅出、借尸还魂、买空卖空、内忧外患、前呼后拥、异口同声、声东击西：三长两短、凶多吉少、不进则退、大同小异、大公无私、承上启下、天长日久：天崩地裂、天老地荒、理直气壮、云开日出
粗细各异：长短不同、黑白相间、表里如一
是非曲直：喜怒哀乐、安危冷暖、生死存亡
30．月光似水：茫雾似轻、枫叶似火、骄阳似火、秋月似钩
日月如梭：雪花如席、雪飘如絮、细雨如烟、星月如钩、碧空如洗、暴雨如注、吉祥如意、视死如归、挥金如土、疾走如飞、一见如故、和好如初、心急如焚
31．山清水秀：早出晚归、眉清目秀、月圆花好、李白桃红、心直口快、水落石出、水滴石穿、月白风清、字正腔圆、口蜜腹剑、雨打风吹、虎啸龙吟、龙争虎斗、走马观花：废寝忘食、张灯结彩、招兵买马、争分夺秒、坐井观天、思前顾后、投桃报李、行云流水、乘热打铁、生离死别、舍近求远、返老还童、打草惊蛇、32．ABAC：载歌载舞、难舍难分、能屈能伸、蹑手蹑脚、有始有终、若即若离、古色古香、无影无踪、无牵无挂、无边无际、无情无义、无忧无虑、无缘无故、无穷无尽
不干不净、不清不楚、不明不白、不闻不问、不伦不类、不吵不闹、不理不睬
自言自语、自说自话、自吹自擂、自私自利、自高自大、自暴自弃、自给自足
时隐时现、时高时低、时明时暗、时上时下、半信半疑、半明半昧、半梦半醒、半推半就、33．AABB：摇摇摆摆、恍恍惚惚、清清楚楚、明明白白、干干净净、飘飘洒洒、顺顺利利、34．ABAB：（动作）整理整理、打扫打扫、清扫清扫、舒活舒活、清理清理、忽闪忽闪
（颜色）雪白雪白、碧绿碧绿、金黄金黄、乌黑乌黑、瓦蓝瓦蓝
35．AABC：闪闪发光、窃窃私语、津津乐道、欣欣向荣、栩栩如生、滔滔不绝、翩翩起舞
36．ABCC：神采奕奕、星光熠熠、小心翼翼、炊烟袅袅、白雪皑皑、烈日灼灼、赤日炎炎
绿浪滚滚、波浪滚滚、云浪滚滚、麦浪滚滚、热浪滚滚、江水滚滚、车轮滚滚
果实累累、秋实累累、硕果累累、果实累累、尸骨累累、弹孔累累、白骨累累
生气勃勃、生机勃勃、生气勃勃、朝气勃勃、兴致勃勃、雄心勃勃、野心勃勃
37．千辛万苦：千军万马、千言万语、千变万化、千山万水、千秋万代、千丝万缕
千奇百怪：千锤百炼、千方百计、千疮百孔、千姿百态
前因后果：前呼后拥、前思后想、前赴后继、前仰后合、前倨后恭
天经地义：天罗地网、天昏地暗、天诛地灭、天南地北、天荒地老
有眼无珠：有气无力、有始无终、有备无患、有恃无恐、有勇无谋、有名无实
东倒西歪：东张西望、东奔西走、东拉西扯、东拼西凑、东邻西舍、东鳞西爪
38．表示形势紧急的成语：迫在眉睫、千钧一发、燃眉之急、十万火急
39．表示声音极响的词语：震耳欲聋、惊天动地、震天动地、响彻云霄
40．表示“团结一致”的四字词：众志成城、齐心协力、同心同德、万众一心
41．表示“钻研精神”的四字词：废寝忘食、刻苦钻研、争分夺秒、精益求精
42．表示思想集中的四字词：专心致志、全神贯注、聚精会神、一心一意
43．描写课堂上讨论场面的四字词：议论纷纷、各抒己见、七嘴八舌、争论不休
44．描写场面热闹的成语：车水马龙、人山人海、人声鼎沸、摩肩接踵、热闹非凡
45．描写体育运动比赛场面的四字词：生龙活虎
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