EM菌生态菌的养蚕使用方法 生态养蚕技术

第一篇：EM菌生态菌的养蚕使用方法 生态养蚕技术

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EM生态菌液的养蚕使用方法 生态养蚕技术

一、EM生态菌液用在桑树：

1、用EM生态菌液稀释成500倍，即EM生态菌液1：红糖1（用暖水溶解后）加水500斤，淋于桑树木头。

2、稀释500倍，即EM生态菌液1：红糖1加水500斤混合稀释后用喷雾器（未用过农药）喷洒蚕桑叶面，每隔10天喷一次。

3、发酵蚕屎撒在蚕桑地上，方法是：先把蚕屎晒干，然后用100倍稀释液发酵，即EM生态菌液1：红糖1加水100斤均匀喷洒在蚕屎上，然后将蚕屎装入有胶纸的尼龙袋，扎好袋口（夏季6天，冬天10天）蚕屎发出酒曲香气味，说明成功，可撒在桑地上。如果是酸臭味，说明失败（水份过多），应重新发酵，直到成功为止。

二、EM生态菌液喷桑叶喂蚕：

用本品和冷开水（清洁水）配成稀释液，细雾喷湿桑叶，稍干后于当天第二餐添喂。具体用法：⑴、2—4龄蚕：按1：100配成稀释液，,即1瓶盖（5ml）+冷开水或清洁水1—1.2斤；⑵、5龄蚕：按1：50配成稀释液，即10瓶盖+水4.5—5.5斤。注意：备专用喷壶。水要清洁，不能有农药残留或油污。细雾喷洒，边喷边翻动桑叶。根据天气和桑叶的干湿度，可适当增、减水加入量。阴雨天要把桑叶稍晾干再喂。遇炎热天气，4—5龄蚕，每天可多喂一次EM原露喷湿的桑叶。五龄蚕时，可将桑叶撒在蚕座上，然后喷雾桑叶，这样省工省时。一张蚕种用EM原露500—750ml，效果最佳。

三、EM生态菌液对桑叶保鲜：

按1：300配成稀释液，即1瓶盖+水3斤，均匀喷湿桑叶，按常规方法装入无毒塑料袋或缸桶中，24小时内不发黄不变质。

地址：北京市海淀区上地三街

电话：010-62669720

官方网址：www.xiexiebang.com

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四、EM生态菌液喷施桑园可增产：

按1：300配成稀释液，即1瓶盖+水3斤，喷洒桑树，10天喷洒一次。叶喷给桑树提供营养物质，促进光合作用，增加叶绿素含量，使桑叶宽厚油绿，质量好产量高。

五、EM生态菌液喷蚕体可消毒除臭。

夏秋季气温较高，可直接将EM混合液喷在蚕体上，然后再将桑叶撤在蚕座上喷蚕。除常规用药消毒蚕体蚕座外，中午、晚上气温高时用此法喂蚕，脓病、僵病得到很好的抑制，蚕病减少。用此法可消除蚕粪的臭味，优化蚕的生长环境和蚕农的工作环境。EM液浓度为1：300倍。

使用效果：

一是蚕儿食桑快而干净，几乎一触及桑叶就食，连叶脉都食完。而对照蚕撒叶数分钟后才开始食用，并且残桑多。二是蚕的抗病力强，病蚕少，死亡率低，仅为0.85%。三是增产效果好，与对照区相比，试验区结茧率提高30.5%，公斤茧粒数减少169粒，减少21.2%，而且蚕茧大，茧质好，等级高，卖价好。

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第二篇：em菌水蛇养殖技术

水蛇除喜食各种淡水杂鱼、泥鳅外，还尤喜欢黄鳝和各种蛙类。应根据容易捕获的季节或水蛇的育肥特按时投喂，尽量使投饵种类多样化，满足其身体生长的需要。大多数水蛇食欲旺盛，每隔4-5天便要摄食一次。一般条重约100-200克的水蛇，每次可吞食1-2条小杂鱼，多者可达3-4条。水蛇的胆量非常的大，饮食过程中有旁人的打扰也不会影响到它正常饮食。但是在水蛇进食后，就不要在过分的惊扰水蛇了，否则会将吞入腹中的食物吐出来。不仅会延迟下一次的进食时间，还会减少应有的进食量，对水蛇的生长极为不利。饲养水蛇是目前人工养殖蛇类中死亡率最低的品种，只要饲养者采取科学的喂养方法，注重水蛇生长的环境健康，水蛇就能够健康的成长。

益富源水产em菌液|水产em菌种|水产养殖微生态制剂|em原液|em原露|改善水质|增加含氧量|减少病原微生物及不良藻类|预防水产养殖动物皮肤病发生|改善肠道环境预防肠道疾病发生|em原种|em益生菌|益富源em菌正规厂家直营 产品介绍：

本品由放线菌、乳酸菌、芽孢杆菌、光合细菌、酵母菌等单一菌种经特殊工艺研制而成的高效复合微生物菌液。每毫升含有益总菌数≥200亿CFU [产品名称]益富源水产em菌

[主要成分]放线菌、乳酸菌、芽孢杆菌、光合细菌、酵母菌 [用法用量]

1、池塘养殖，放苗或水花前3-4天每亩用2000ml全池泼洒，放苗或水花时，用1公斤兑水100公斤，浸泡15分钟，每亩泼洒2公斤,以后每隔15-20天喷洒一次，每亩用2公斤泼洒。

2、水库使用，每亩按2-3公斤稀释使用一次，每15天使用一次，最好配合使用有机复合肥，这样效果更佳。

3、特种水产养殖（水蛇，甲鱼、虾、鳗鱼、桂鱼、各种热带鱼等），（1）环境处理：放水前一周，用100倍菌液代替石灰均匀喷洒净化环境。放养前3天，用为20万分之一的菌液稀释液泼洒水面，放养后每15天喷洒一次，水质较差的地方应加大浓度，并缩短泼洒间隔时间。（2）调节水质：在每次换水后泼洒菌液稀释液（浓度为20万分之一），可泼在增氧机旁或进水口，通过机器和水流作用扩散有益微生物，以利最短时间分解有害物质，尽快稳定水质。虾类、甲鱼等养殖品种每月泼洒稀释液2-3次，发病季节适当增加用量。

水蛇肉质雪白细嫩，味道鲜美，营养丰富，且有较高的药用和食疗价值，能促进伤口愈合、健肤美容、舒筋活血，被广东、香港、澳门人视为滋补佳品，在广州及珠江三角洲等地有的地方还开设有水蛇食街或水蛇粥城。广东从2003年下半年禁食野生动物开始，其他各种陆上野生蛇类均在禁售、禁食之列，只有人工养殖的水蛇仍在市场出售和在宾馆、酒楼供应食客，但因需要量较大而养殖数量不多导致货源较紧，价格涨高，据预测其售价仍有上升趋势。

水蛇人工养殖技术简单，成本低，发展空间大，市场前景十分广阔。投资8000元建一个小型生态水蛇场，1个劳动力饲养种蛇100组(1公3母为1组)400条，办场第二、第三、第四年的纯收入分别为8144元、1．19万元、5．2万元。以建设与投资效益分析。

水蛇场建设

饲养400条种蛇，需10平方米种蛇池4个、3平方米幼蛇养殖过渡池4个、100平方米商品蛇饲养塘3个、活体饲料生产房1间、水生饲料生产塘1个、蚯蚓养殖场1个。

1．种蛇繁殖池：长4米、宽2．5米、深1．1米，砖水泥结构，池底保持淤泥30厘米厚。

2．幼蛇养殖过渡池：长2米、宽1．5米、深0．6米，砖水泥结构，池底保持淤泥20厘米厚。蛇池可并排建，池底向排水端呈5％坡度倾斜，深处池底有排水孔通向池外排水沟进出水口分别设在长方形养殖池的对角线上。两池之间设有人行道。

3．商品蛇饲养塘：面积100平方米，深1．2米，四周建有1米高的防逃墙。

4．活体饲料生产场地：

①活体饲料生产房1问10平方米，用于生产黄粉虫和EM活菌制剂；

②50平方米小池塘1个，用于生产水生饲料；

③在池塘边建一个50～70平方米的蚯蚓养殖场。

第三篇：桑田全生态自然耕作养蚕实践报告

桑田全生态自然耕作养蚕实践报告

通过对广东郁南、乳源、翁源等地区桑田养蚕情况的观察得知，由于长期的化肥使用或短肥种植，造成桑叶营养缺乏，养殖的蚕茧偏小，蚕虫发病率彼大，且蚕丝质量品质不高，该如何解决这些问题？通过实践，较理想的方法，也有可能是未来桑蚕业发展之道：桑田全生态自然耕作，就是利用生物酶酵素的新陈代谢功能，将农药化肥及过量毒素等，从桑树体，尤其是桑树头中排除，促发新的根系，增加叶绿素，光合更丰富的营养成份至桑叶，并彻底解决农药化肥污染，再用微生物技术配合生物肥料，即采用将蚕屎利用微生物发酵为生物肥施洒桑田。

一、生物肥料桑田的优势

一般农户养殖桑蚕种1-3两批，每月二批，可有蚕屎300百斤至1000斤，传统方法堆放到年底，做为普通肥料施到桑田，有些桑户无处堆放就丢掉或直接施入桑田，造成病菌传染，影响蚕虫生长。桑农对桑田在降枝后进行施肥，约每亩地一百斤化肥，有效肥力25%的化肥75元100斤，有效肥力48%(氮16-磷16-钾16)的化肥125元100斤，全年肥料成本需投入500-1000元，许多桑户能省则省，不愿施肥，更重要的是桑农发现长期施化肥对桑树头寿命和发枝叶有严重影响，蚕虫结茧也一年不如一年，现在的茧重量比十几年前普遍减轻40%，平均重量只有1.6克，能够达到2克的已是养蚕高手。

利用微生物技术对蚕屎进行发酵，使其成为生物肥料，桑户可节省养蚕成本，更重要的优点是生物肥没有化学污染，对蚕虫健康和正常生理生长有良好的推动。应用生物肥和生物酶酵素新陈代谢技术的桑田三个周期后，蚕茧可达3-4克，同时对桑树寿命及生长有极大的支持，生物肥料桑田的桑叶可提前十天产叶并达到增产50%的效果。< ~ 课 件 >由于生物肥料是桑农利用自家蚕屎生产，农户只需购买生物肥专用微生物菌种，每200斤生物肥料成本仅10元以下，较之任何化肥成本都低90%以上，更重要的是肥力更好，不污染土质。生物肥的氮磷钾添加也可与农户自有植物材料条件就地解决，比如柴草灰、农作物粕渣等都是良好的氮磷钾来源。

二、生物酶酵素新陈代谢技术使用与生物肥生产使用流程

1.降桑枝叶后施除草剂，待草萎枯后洒施自产生物肥每亩50市斤，并用生物酶酵素2号喷洒桑树头，促根系扩张，待桑枝新芽叶片约拇指大小时喷洒生物酶酵素1号，促新根及叶片生长。之后每7-10天向桑叶喷洒生物酶酵素1号一次，三至四次为一个周期。

2.降枝叶日始计，第二十五天后，可采摘第三四片叶饲养蚁蚕。可采摘第五六片叶饲养三四眠中蚕。

3.第四十天后，可剪枝叶饲养五龄蚕。

4.五龄蚕后降枝桑树进行新一轮生物肥料和生物酶酵素技术周期，如此周而复始。经过几轮周期，土地和桑树进入有机生物状态，蚕虫获得无毒侵害后生理健康，病情减少，茧丝量必然达到增幅。

5.蚕屎生物肥生产流程：桑蚕上朴吐丝后，将蚕屎收集，清除桑枝，将其与四眠前蚕屎一起堆积，根据重量计算混合适当比例的生物菌种，蚕屎湿度水分控制在20%-30%之间，经七天发酵，可以立即使用。

6.蚕屎生物肥的氮磷钾及微量元素份量，可通过植物农作物进行同时发酵调整。

7.桑田桑树所需的氮磷钾在蚕屎生物肥基本上中已经具备，如还需要，可根据土地、气候、季节及桑树长势等调节氮磷钾比例份量，尤其是钾元素蚕屎中较少，在发酵时加入5%-10%的柴草灰即可。氮的添加可用适量植物果粕，磷钙因养蚕各阶段使用石灰消毒，基本无需添加。

8.蚕屎生物肥也可以增加桑农收益。桑户养蚕量大，蚕屎生物肥使用有余，可出售给种植果树的果农使用，或出售给有机肥料厂为原料。

三、生物技术是天然彩色茧丝桑蚕的发展基础

全生态自然耕作对桑田桑树的运用，确保了养殖蚕虫不受化肥农药的污染，除了茧丝量增加之外，对杂交或基因改造的可吐彩色丝的桑蚕，在杂交性能和基因稳定方面起到巨大的支持。生物酶新陈代谢技术促进桑树光合，提高桑叶营养和产量，日前在广东郁南东坝镇龙塘村多个农户示范田取得高品质蚕茧增产40%的效益。

广东省致富委组织桑蚕高产技术示范小组，对广东云浮、英德、乳源、翁源等地实地调查，发现这些地区的桑农因桑田土壤、蚕种、养殖条件、技术、习惯的差异之外，桑蚕茧质量普遍处于低水平，茧重量平均只有1.6克以下，每两蚕种产茧量（吐丝三天出售的湿茧统计）在70－110市斤之间，且蚕虫体弱常造成桑农收不保本。部分地区的桑户十亩地才月二批养殖二两蚕种。

五月二十六日开始，省致富委桑蚕高产技术推广小组在东坝镇龙塘村及周边几个村选择不同桑田，养殖技术也有高低差异的十户进行全生态自然耕作的高产技术示范。为使桑农三十天内了解高产技术的魔力，采取喷洒桑树大叶，分别对蚁蚕到五龄蚕；三眠蚕到五龄蚕进行对比饲养，并对桑农准备放弃养殖的二眠体弱蚕抢救性喂食，均取得30%-44%的茧增产。

同批蚕种，没有喷施新陈代谢生物酶的桑树叶饲养的蚕结茧重量平均为1.6克，喷施新陈代谢生物酶的桑树经促进光合的桑叶饲养蚕结茧重量平均达到2.33克，且色泽较更亮白。

郁南东坝镇是广东的桑蚕养殖大镇，拥有一万多亩的桑田，仅龙塘村桑户达八百多户。一般每户桑田有七、八亩，每月二批养殖蚕种2-3两，售茧量（吐丝三天湿茧计）为150-280斤。高产技术实施第一个月的增产幅度就给桑蚕户带来180-350斤的变化。

根据示范户实践总结，桑树系更为发达，叶增产，光合作用强劲，叶的营养含量大幅增加，从而使饲养的桑蚕体质健康，成茧重量预计可达4克/个。桑农在相同劳动和成本投入中可获得三倍收益。

第四篇：em菌在水产中的运用 文档

控制水环境中氨、硫化氢等有害物质含量，调控养殖池微生物生态结构； * 增强水产动物免疫功能，预防病害，增进健康，降低发病率及死亡率； * 促进生长发育、增重，增加产量；

* 无污染，成本低，收效大，改善肉质；

* 净化水质，改善环境，延长换水间隔；

* 减少病原菌，平衡微生态，减少药物的使用，保障环境安全。

1.减少病原微生物和不良藻类；明显增强养殖对象的免疫力和抗病性，降低发病率，提高成活率。用户反映，益生菌原液可使蟹苗成活率提高近一倍，中华石斑鱼的成活率由原来的30％提高到70％以上。

2.增加有益微生物数量。水面浮游动物、有益藻类增多，特别是红虫不断增多至布满水面。

3.稳定和改善水质，水体颜色清爽，不臭不腐，无硫化氢、氨气等异味，能见度在25-50cm的时间长且较稳定，换水时间可延长2倍以上。

4.鱼虾粪、池底杂质和下脚料不会变成淤泥而呈散沙状。

5.促进生长，增重率明显提高。实践证明，在同等环境下，使用益生菌原液后，可提前上市，平均亩产提高20％-35％，产卵量增加，产卵时间延长。且孵化率较好；饵料不臭，改善养殖环境。

百丰EM菌液用于水产养殖，可改善水质，提高成活率和相对生长率，降低发病率，提高肉质品质，用百丰水产养殖对饲料、粪肥进行发酵，可提高营养成分和饲料效率，大幅度降低饲料系数和养殖成本。

用百丰EM菌液养殖青虾，增产35%以上，商品率提高20个百分点；在池塘中养殖河蟹，成活率达91%，平均规格增0.88两，在湖泊网围中养蟹使用二个月，平均个体规格达0.277两，比对照池增大近一倍，死亡率几乎为零；在温室养鳖中应用，生长率提高28%，饲料系数下降0.65，换水时间延长4倍；河豚越冬，净增重增长63.4%，成活率提高36个百分点；用百丰水产菌液泼洒水体养殖鳜鱼，成活率达90%；常规鱼养殖应用饲料发酵方法，亩产增24.7%，精料系数下降27.2%。此外，在蚯蚓、黄鳝及海珍品上应用效果也十分显著。试验还证明：百丰水产菌液可替代或大幅度减少药物的用量，可防治大多数病害，控制病毒复制蔓延（尤其对河蟹颤抖病病毒、鳜鱼病毒、鲍鱼病毒的预防效果显著）；改善养殖环境，使鱼虾蟹恢复和保持自然本色。百丰EM菌液无毒无害，无任何药物残留，是实施健康养殖、生产绿色食品，争创品牌，发展创汇渔业和生产味道鲜美的水产品的高新技术。

北京百丰天下生物科技有限公司

王华龙：***

第五篇：沙门菌检测技术

沙门菌为常见的肠道病原菌之一，在自然界分布广泛，种类繁多，所致疾病统称沙门菌感染，其中由伤寒、副伤寒沙门菌引起的急性全身系统性传染病是我国《传染病防治法》中规定报告的乙类传染病，而由非伤寒沙门菌引起的食物中毒则占我国内陆地区细菌性食物中毒的首位。

及时准确地检验沙门菌，为诊断和控制由该菌引起的疾病提供依据。沙门菌检验程序主要包括：标本采集、标本的处理与接种、菌株分离与鉴定和PCR检测几个步骤。

标本采集

标本采集前，应准备好所需的培养基和器材，主要有：血液需氧培养瓶、血琼脂平板、XLD（木糖赖氨酸脱氧胆盐）琼脂平板、BS（亚硫酸铋）琼脂平板、SC（亚硒酸盐胱氨酸）增菌液、酒精灯、采样瓶、剪刀、镊子等。

沙门菌检验标本主要分为：食品样品、可疑食物中毒标本，沙门菌患者标本。可疑食物中毒标本主要有：可疑食品、相关环境标本、疑似病人标本。可疑食品的采集：在采集可疑食物中毒标本时，应重点采集剩余食物以及食品加工有关的炊事用具，操作人员的手、肛试等相关环境标本。采样时，用棉试子涂抹物品表面后，置于少量增菌培养基内，也可根据情况在接种现场接种分离平板。

沙门菌感染患者标本的采集：沙门菌感染患者应采集新鲜粪便标本或肛试子直接接种分离平板和增菌液。对伤寒、副伤寒患者，在病程的第1~2周，可采集静脉血液4~8ml，接种血液需氧培养瓶中。

每个标本需做好标识和记录，采集的食品样品4℃保存，已接种标本的增菌液和培养基，室温下保存，2小时内送达实验室。

标本的处理与接种

沙门菌标本的处理与接种常用培养基有：TTB（四硫磺酸钠）增菌液、SC(亚硒酸盐胱氨酸)增菌液、XLD琼脂平板、BS琼脂平板和麦康凯（MaC）琼脂平板。

可疑中毒食品标本的处理：对采集的标本通常按1:10的比例分别接种于100mlTTB和100ml增菌液中，每瓶增菌液加入标本约10g，同时还可将可疑中毒食品标本直接接种于分离平板。将接种后的TTB增菌液置42℃培养箱中培养18~24小时，将SC增菌液和分离平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。取培养后增菌液转种XLD琼脂平板和BS琼脂平板，将接种后的平板置37℃培养箱中培养24~48小时，待观察。

血液（骨髓）标本的处理：将已接种标本的血液培养瓶直接放置37℃培养箱中培养7天，在培养期间分别于培养的第1天、第2天和第7天取培养液一环接种血琼脂平板，将平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。培养至第7天时，如培养物仍无菌生长，则可判为阴性。

肛试子及其他环境标本的处理：将现场采集已接种标本的分离平板和增菌液直接放置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。取出18~24小时培养的增菌液转种XLD琼脂平板和麦康凯琼脂平板。将接种完毕的平板置37℃培养箱中培养18~24小时，待观察。

菌株分离与鉴定

主要实验试剂有：氧化酶（试剂）、三糖铁（TSI）、动力—靛基质—尿素半固体（MIU）和赖氨酸铁琼脂斜面、API20E、沙门菌诊断血清。

沙门菌菌株的鉴定主要试验有：菌体形态观察，菌落形态观察，氧化酶实验，初步生化鉴定（系统生化鉴定），血清学分型。

菌落形态观察：在XLD平板上沙门菌菌落呈粉红色、光滑、湿润、边缘整齐、产H2S的菌株，可形成中心黑色或全部黑色的菌落。在BS琼脂平板上，沙门菌菌落呈黑色有金属光泽、棕色或灰色，培养基周围可呈现黑色或棕色，有些菌株可形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。在麦康凯琼脂平板上，沙门菌菌落为无色、透明或半透明、光滑湿润、边缘整齐、圆形。从分离平板上挑取3-5个可以菌落，分别接种XLD平板和营养琼脂平板，将接种完毕的平板置37℃培养箱中，18~24小时纯化培养。

菌体形态观察：挑取纯培养物进行革兰染色，在显微镜下观察菌体形态。沙门菌为革兰阴性杆菌，长1-3um，宽0.5~1um，无芽胞，两端钝圆。

氧化酶试验：用一次性接种环（或牙签）挑取菌落于滤纸上，滴加氧化酶试剂一滴，在10s内菌落不变色为阴性，呈现紫色者为阳性。本试验菌落不变色，氧化酶试验为阴性：

初步生化鉴定：将菌落形态和氧化酶试验符合沙门菌特征的纯培养物分别接种于三糖铁琼脂斜面（TSI）、MIU培养基、赖氨酸铁琼脂斜面，将已接种的生化培养基置37℃培养箱中，培养18~24小时，待观察。

典型的沙门菌在三糖铁（TSI）上，斜面呈红色，下层产酸呈黄色，多数沙门菌产生硫化氢，试管内出现黑色，有气泡。

赖氨酸脱羧酶试验阳性，培养基由紫色变成紫黑色。

在MIU培养基上尿素为阴性培养基不变色，有动力，沿穿刺线浑浊生长，加入靛基质试剂0.5ml于试管内，轻摇试管，沙门菌靛基质试验结果不定。本试验靛基质试验为阴性，试剂不变色。

系统生化鉴定：肠杆菌科细菌在生化反应上有类似之处，对初步生化试验符合沙门菌的可疑菌株需要进一步做系统的生化鉴定。生化试剂可采用自配或市售成品，也可选用生化鉴定试剂盒（API 20E）或全自动微生物鉴定系统（VITEK）。本试验以API 20E生化鉴定试剂盒进行示范，具体操作步骤如下：

菌悬液制备：挑取24小时培养的营养琼脂平板上1~2个菌落至5ml灭菌生理盐水中制成均匀的菌悬液。

接种与培养：将配制好的菌悬液按产品说明书要求填充API 20E条上的小杯，按要求加盖矿物油，置于36℃培养箱中培养18~24小时，待观察。

结果观察与判定：按照说明书要求，在读取结果前，部分试验先添加附加试剂。根据API 20E中的读数表判定和记录各项反应结果，并得到一个7位数的编码，通过在数据库或API编码表中查询该编码即可获得菌株鉴定结果。

血清学分型：对生化鉴定为沙门菌的菌株，需用玻片凝集法进行血清学分型，血清学分型试验的主要步骤为：先用A-F多价血清作玻片凝集，若血清发生凝集再分别选用O4 O9 O2 O10 O7等因子血清做玻片凝集，以判定其群别。根据判定的O抗原，进行H抗原的第一相和第二相抗原凝集和判定，下面以某品牌血清为例进行试验。

第一步，O抗原凝集，分别取一环A~F血清和生理盐水于洁净的载玻片上，挑取待检菌株新鲜培养物适量，研成乳状，倾斜摇动玻片1分钟，观察血清凝集情况。若血清产生凝集颗粒盐水无颗粒者判为阳性；两者均无凝集颗粒产生，判为阴性；盐水有颗粒者为粗糙型菌株，不能分型。本菌株结果为阳性。

第二步，取一环O4血清于洁净的载玻片上，用与上述相同的方法试验，结果若为阳性，进行H因子血清凝集试验；若结果为阴性，再分别选用O9 O2 O10 O7等因子血清进行玻片凝集试验。本菌株O4为阳性。

第三步，H抗原凝集，在沙门菌抗原表中，选择与O4相对应的H因子的第一相和第二相单因子血清作逐一凝集试验。本次实验结果被检沙门菌的抗原式为1,4,5，12：i：1,2 为鼠伤寒沙门菌。

血清凝集试验中几种特殊情况：

1.Vi抗原的判定：伤寒或丙型副伤寒沙门菌的Vi抗原能阻碍O抗原凝集，含丰富Vi抗原的伤寒菌株，经煮沸破坏Vi抗原，再与O血清凝集。实验方法为，取适量菌苔于1ml生理盐水中，在酒精灯火焰上煮沸后再与O血清凝集，若仍不凝集，可送上级单位鉴定。2.位相诱导法试验：如双相菌只检出一相H抗原时，可用位相诱导的方法获得另一相抗原。位相诱导方法较多，主要有，小玻璃管法、小倒管法、简易平板法。本篇着重介绍简易平板法。将0.7%~0.8%半固体琼脂平板烘干表面水分，挑取已知相因子血清一环滴在半固体琼脂平板表面，放置片刻，待血清吸收到琼脂内，在血清部位的中央 点接种待检菌株，36℃培养18~24小时后，在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌做凝集试验。

3.H抗原不凝集：如果两相H抗原均不出现，则应通过半固体琼脂平板、血平板等琼脂平板传代法获得某相或两相抗原

PCR检验

在沙门菌的检测工作中，常利用PCR技术来做沙门菌检测的初筛实验，以提高工作效率，降低成本。PCR初筛试验采用检测样品增菌液中是否有沙门菌属侵袭性抗原保守基因（invA 基因）的存在，以此来判定是否有沙门菌的存在。PCR反应条件，94℃变性1min，52℃退火1min，72℃延伸1min，35个循环72℃延伸7min。

用凝胶成像系统观察结果时，如在284bp处出现扩增条带，则为阳性，凡是PCR检测呈阳性结果的标本，均应进行沙门菌病原菌的检测。

注意事项

在沙门菌检验过程中，应注意以下问题。

1.试验应在BSL-2生物安全实验室的二级生物安全柜中进行操作，并做好个人的安全防护工作。

2.在生化初筛试验中应特别注意，只有在三糖铁琼脂斜面和底层均产酸，同时赖氨酸脱羧酶试验阴性的菌株或尿素酶阳性的菌株可以排除，其他的反应进行进一步的试验确证。

3.沙门菌的鉴定和血清学分型试验必须使用纯化菌株。

4.BS琼脂平板要求的培养观察时间为48小时，此时才能形成描述的典型菌落。