第一篇：诊断学知识点汇总_复习资料
诊断学知识点汇总，复习资料
绪论
1、症状概念，2、体格检查，3、诊断学内容 第一篇 常见症状
1、体征，2、正常体温、稽留热、弛张热的定义，3、咯血定义，4、咯血与呕血区别
5、呼吸困难定义，6、三种肺性呼吸困难表现（尤期前二种），7、心原性呼吸困难的特点
8、胸痛的病因，9、中心与周围性紫绀不同原因，10、心原性与肾原性水肿的鉴别
11、肝原性水肿表现特点
12、急性腹痛的常见原因
13、呕血的常见原因，出血量的估计，呕血与便血的相互关系
14、黄疸（和隐性）的定义，三种黄疸的鉴别，15、嗜睡与昏睡的区别，浅与深昏迷的区别 第二篇 问诊
1、问诊的内容，2、主诉的定义和组成
3、现病史是病史中的主体部分，由哪些组成，与既往史有何不同 第三篇 检体诊断
1、体检基本方法有哪些？触诊的方法有哪些？叩诊的方法，体型的分类
2，常见面容，三种体位，皮肤发黄二种原因的区别，红疹与出血点 的区别，蜘蛛痣与肝掌购
3、霍纳氏征，瞳孔大小的改变，4、扁桃体肿大的分度，5、颈静脉怒张的定义
6、甲状腺肿大的分度，听到血管杂音的意义，7、桶状胸
8、胸式（男，小孩）腹式（女）呼吸增减意义，9、深大呼吸，潮式及间停呼吸
10、触觉语颤、听觉语音的定义及方法，增减意义、11、正常胸部叩诊音（4种），肺下界及移动度，12、三种呼吸音的区别
13、异常支气管呼吸音听诊意义，14、罗音产生机理，二种罗音的鉴别
15、胸膜磨擦音的听诊特点，16、肺实变、肺气肿、胸腔积液、气胸的综合体征。
17、心尖搏动点的位置，范围，左、右心室肥大及纵隔移位时的变化 18、震颤定义与杂音的辨证关系
19、心脏叩诊的方法，左右心界的组成，心浊音界改变的原因（左室肥大、右室肥大肺脉高压，心包积液，左气胸及胸腔积液）20、心脏听诊内容，听诊部位，21、早搏及房颤的体征，室早及房颤的ECG表现。
二、三联律的概念。
22、第一、二心音的鉴别，23、第一心音增减及第二心音增减的意义，24钟摆律，胎心律
25、第二心音分裂的听诊特点及临床意义（正常人，二狭，PDA，RBBB，ASD—“固定”）
26、左心室舒张期奔马律的听诊特点及临床意义，27、OS及心包叩击音的意义
28、心杂音分析内容，29、器质性与功能性杂音的区别 30、Austin Flint 及 Graham Steell的定义，31 连续性杂音的意义
32、异常脉搏，正常血压，临界高血压，高血压，低血压
33、左、右心衰时的症状和体征，心功能级别（心功能不全度数）的判定原理及标准
34、二狭，二闭，主闭（周围血管体征），主狭的综合体征
35、腹部膨隆的意义，36、腹壁静脉方向（上，下腔梗阻，门脉高压，正常）
36、腹膜刺激征的检查方法及意义（板状腹，揉面感，压痛点，反跳痛，麦氏点，胆囊点）
37、腹部包块的检查内容，38、液波震颤的意义
39、肝、脾触诊的方法，正常大小，40、莫菲氏征及胆总管渐进阻塞征
41、泌尿系有炎症时的压痛点，42、肝上界位置、脾界，及浊音宽度
43、移动性浊音及腹水与巨大卵巢囊肿的鉴别
44、振水音的意义，45、肝硬化肝功能失低偿期，门脉高压的全身综合体征
46、胃肠穿孔致急性弥漫性腹膜炎时的综合体征
47、区别上、下运动神经元瘫痪，偏瘫和交叉瘫的概念。肌力的分级
48、肌张力，震颤（静止性，运动性，粗颤与细颤）
49、共济运动的检查方法和意义
50、生理反射，病理反射（巴氏征）的意义（锥体束损伤，上运动神经元瘫痪）82、脑膜刺征 第四篇 器械检查 心电图
1、胸导联及肢导联连接，心电轴的判断及意义
2、每一小格横、竖代表的时间、电压，心率的计算
3、正常P波的方向，时间，电压，“肺性P波”，“二尖瓣型P波”
4、QRS波：低电压，左右心室肥大
5、ST-T改变与心肌缺血，6、心肌梗塞：特征性表现，演变过程，定位
7、正常窦性心律的心电图特点，8、房性、交界性、室性早搏的心电图特征
9、房室传导阻滞：一度（P-R间期延长），二度，三度
10、P-R间期缩短：预激综合征
11、房颤的心电图特点（1、2、3点）第五篇 实验室检查 血液
1、血液三大系例正常值，2、中性粒细胞增减意义
3、中性粒细胞核左移，核右移，4、E的增减意义
5、Hct,Ret意义，骨髓
6、M/E，POX，NAP，铁染色的意义
7、缺铁性贫血的血象及骨髓象表现 出凝血
8、CFT，BT，9、血小板正常值与CRT
10、CT，KPTT，PT，11、PPP 尿液及肾功能
11、正常尿量，多尿，少尿，无尿的数值，12、血尿的概念，尿比重固定
13、蛋白尿的概念，尿糖，酮体阳性的意义，14、白细胞尿，脓尿，管型尿的意义
15、肾小球滤过功能，肾小管排泄功能和浓缩稀释试验的意义 粪便检查
16、OB试验的意义 脑脊液检查
17、几种常见脑膜炎的脑脊液的特点，18、漏出液与渗出液的鉴别要点 肝脏检查
18、肝功能检查包括哪些项目，急性病毒性肝炎和慢性肝病时肝功能有何变化？
19、AFP、AKP、γ-GT的临床意义 第七篇 诊断方法和病历
1、诊断常用的推理方法有哪些？
2、一元性诊断的意义
3、诊断的内容和格式，4、完整的住院病历包括哪些内容，由哪些人负责编写，病人入院后多长时间完成。
第二篇：分子诊断学复习资料 简答题部分
简答
基因组的特点：？（大题）人类基因组的特点：
1、人类基因组具有23对染色体，基因组序列大约2.9亿个核苷酸，含有蛋白质编码基因大约20, 000-25, 000个。其中大量基因与中枢神经系统，特别是脑部发育相关；
2、绝大多数基因为断裂基因，且分布不均（每条染色体具有基因富集区和基因稀疏区）。除蛋白质编码基因外，其他大量基因为RNA编码基因；
3、基因内和基因附近中存在大量短序列调控元件，发挥基因的调控表达和协调表达的作用；
4、基因组（基因内）中存在大量功能未知的其他序列（“非编码DNA”），如串联重复序列、转座元件。
5、序列突变是人类基因突变的重要来源，序列/基因多态性是研究人类遗传突变的重要手段。
6、线粒体DNA（mtDNA）是人类母系遗传疾病的重要来源基础。真核基因组特点：
1.真核基因组结构庞大：人：3×109bp。几、十、百倍于原核。
2.线性双链DNA，多条染色体和二倍体（Diploid）：DNA和组蛋白质形成染色体，存在于核膜内。人：23对，46条；
3.单顺反子(Monocistron)：一个结构基因转录生成一条mRNA。
4.功能基因不连续性，内含子与外显子并存（断裂基因）：转录后需剪接(Splicing)5.非编码区多于编码序列(9:1)6.含有大量重复序列（Repetitive Sequences): 重复次数可达数百万次，序列多态性是真核生物基因组的重要特征。原核生物基因组的特点：
1.基因组呈共价闭合环状双链状态，散布在细胞中，有时相对集中形成类核/拟核（Nucleoid）
2.基因组DNA小，基因数目少（1500-5900个），种间DNA大小差异大，GC含量差异大(菌种鉴定和分类标准），基因多为单拷贝基因（编码rRNA、tRNA基因多拷贝，利于核糖体的快速组装和蛋白质合成）
3.基因组只有一个复制起始点，功能相关的基因大多成簇地串联排列（操纵子结构）在染色体上，结构基因无内含子，基因连续分布，为多顺反子。
4.除主基因组外，原核生物往往还具有质粒基因组
5.转座元件/基因是原核生物基因组的重要特征（转座元件（Tranposable Element）是指可移动的基因成分，即能在一段DNA分子内部或两段DNA分子之间移动的DNA片段，又称跳跃基因。）6.致病基因是致病原核生物基因的重要特征 病毒基因组的特点：
1.基因组大小相差很大（HBV：3.2kb，痘病毒：300kb）
2.结构分子具有多样性（DNA病毒/RNA病毒，单链DNA/RNA病毒，双链DNA/RNA病毒，环状分子/线性分子）3.基因组多数是连续性（单一分子基因组），但RNA病毒往往不连续（呼肠孤病毒：10条节段双链RNA，甲乙流感病毒：8条单链节段RNA，丙型流感病毒：7段单链节段RNA。包装在同一个病毒颗粒内，或在不同病毒颗粒内，只有全部基因组序列都存在，才具备感染能力）4.编码序列占基因组的90%以上，间隔区序列很少；
5.多为单拷贝（单倍体），即每个基因只出现一次（除逆转录病毒基因组有两个拷贝）； 6.相关基因丛集（功能上相关的基因排列在一起）、有重叠基因和不规则基因结构序列。
1、试述点突变（基因背景清楚和未知）的主要检测方法。答：对基因背景清楚或部分清楚的点突变，可以采取直接检测基因点突变的方法，如等位基因特异性寡核苷酸杂交(allele specific oligonucleotide，ASO)、PCR-ELISA、等位基因特异性扩增(allele specific amplification，ASA)、PCR-RFLP、基因芯片技术等进行诊断，例如β地中海贫血，可以使用ASO、PCR-RFLP 联合基因芯片技术进行诊断。对于一些基因背景未知的点突变，可以采用单链构象多态性(single-strand conformational polymorphism，SSCP)、变性梯度凝胶电泳(denaturing graient gel electrophoresis，DEEG)、异源双链分析(heteroduplex analysis，HA)、DNA序列测定、蛋白截短测试（protein truncation test，PTT）等方法，如Hopkins大学医学院的研究人员设计了47 对PCR引物，分段扩增血友病A因子Ⅷ 基因片段，进行DGGE分析，发现多态性片段后再进行DNA序列分析，几乎查清了所有临床轻中度病人的点突变。
2、试述限制性内切酶MstⅡ切割法诊断镰状细胞贫血的原理并图示。
答：在FⅧ基因区域内，有一种A基因存在三个拷贝，其功能不详，其中一个A基因位于FⅧ基因的第22 号内含子内(A1)，另外两个位于X染色体的末端(A2、A3)。A1基因可以与其上游的两个A基因拷贝中的一个发生同源重组，引起FⅧ基因的1-22 外显子片段倒位，这种倒位导致FⅧ功能完全丧失而发生严重的血友病(图15-5)。其中与A2发生的重组称为近端重组，约占倒位的15％；与A3发生的重组称为远端重组，约占倒位的85％。
3、试述近端重组、远端重组概念。
答：在FⅧ基因区域内，有一种A基因存在三个拷贝，其功能不详，其中一个A基因位于FⅧ基因的第22 号内含子内(A1)，另外两个位于X染色体的末端(A2、A3)。A1基因可以与其上游的两个A基因拷贝中的一个发生同源重组，引起FⅧ基因的1-22 外显子片段倒位，这种倒位导致FⅧ功能完全丧失而发生严重的血友病(图15-5)。其中与A2发生的重组称为近端重组，约占倒位的15％；与A3发生的重组称为远端重组，约占倒位的85％。
4、简述TGGE/DGGE的基本原理
答：在TGGE中，随着温度的逐渐升高时，DNA分子会呈阶梯式逐步发生解链。部分解链的双链DNA分子表现出一种复杂的分枝构像，使得其电泳迁移率大大下降。DNA分子的解链决定于该分子的解链温度（Tm），而Tm有强烈的序列依赖性，如在单取代突变中，若是A:T（两个氢键）被G:C（三个氢键）取代，将增加该双链DNA分子的Tm值。而整个DNA分子序列对解链温度也有影响，若A:T被T:A替代，或G:C被C:G替代，分子的解链温度也会发生改变。因此不同的DNA分子由于其Tm不同，将于不同凝胶位置（温度不同）产生分枝（解离）使电泳迁移率降低，从而在凝胶上的不同位置形成条带。DGGE的变性条件为热（一般为60℃的恒定温度）和固定比率的甲酰胺（0－40％）、尿素（0－7M）。这些梯度变性的功能就相当于TGGE中的温度梯度的功能，使不同DNA分子在不同的凝胶部位发生解链，引起迁移率下降，从而将不同的DNA分子分离。
5、简述变性高效液相色谱法检测基因变异的优点
答：DHPLC突变检测技术与其它方法相比，具有更高的准确性和敏感性。
（1）DHPLC与各种电泳法的比较 SSCP 分析片段长度<300 bp，对于人类SNP的检出率为50～95％，尤其容易漏检位于发夹结构中的变异。CSGE检测杂合子的灵敏度与SSCP相当或稍低。而DHPLC对150bp~600bp的DNA片段的突变检出率都可达到100％，且而不需要特殊的样本处理。TGGE/DGGE对于异源双链及同源双链分子的检测灵敏度高出CSGE和SSCP很多。但对于较高温度的融解区域的突变检测，DHPLC的灵敏度要高于TGGE/DGGE。（2）DHPLC与DNA测序的比较 对于频率高于20%的变异，直接测序的检出率为80％，DHPLC的检出率可达到100％；基因突变频率低于20%时就很难用测序方法检测到，而DHPLC可从待检样品中检测到占总基因量0.5-5%的突变等位基因，且重现性很好。
6、试述PTT检测基因变异的优缺点
答：PTT检测突变的优点：①能检测出只与疾病相关的蛋白截短突变；②可检测出在RNA形成过程中发生的突变（如剪接突变）；③通过只鉴定引起疾病截短突变，PTT分析不会受到基因沉默变异如多态性的妨碍；④截短蛋白分子的长度指明了突变的位置，因此更方便进行测序分析以确定突变。
PPT检测突变的缺点：①由于PCR扩增效率的影响，对于包含几千个核苷酸序列多个外显子的疾病基因，就需要分成几个1－2kb的片段分别扩增，分别进行PTT检测；②由于微小缺失/插入突变对蛋白产物分子大小影响太小，凝胶不能分辩，因而检测不出编码序列中小的插入或缺失或是错义突变；③引起RNA产量改变或使mRNA不稳定的突变可能被漏检。
7、简述PFGE的基本原理
答：PFGE采用一种正交的交变脉冲电场，在进行琼脂糖凝胶电泳时，其方向、脉冲时间和电压大小可交替改变。在每次电场方向改变时，DNA分子就要有一定的时间改变形状和迁移方向，只有当DNA分子达到一定构型，沿新的泳动方面伸直后，才能向前迁移。DNA分子的转向时间与其大小关系极为密切，分子越大，分子构型转换所需时间就越长，转变迁移方向的时间也就越长。对于不同大小的DNA大分子，其改变泳动方向所需的时间不等，迁移速度的快慢也就不等，因此就可以按DNA分子量大小使其分离开来。根据欲分离的DNA分子大小适当调节电场方向的相交角度、电压及脉冲时间等参数，即可将各种分子量大小不同的分子分开。
8、假基因的分类及其发生机理。
与正常功能的基因序列相似，但无转录功能或转录产物无功能的基因称假基因(pseudogene)。根据是否保留相应功能基因的间隔序列(如内含子), 假基因分两大类:一类保留了间隔序列，称为非加工假基因(non-processed pseudogene)，通常因基因的复制修饰,如点突变、插入、缺失和移码突变而导致复制后的基因在转录和翻译时出现异常,丧失正常功能，它与功能基因一般在同一染色体上, 也称复制型假基因(duplicated pseudogene)。假基因中大多数则缺少间隔序列的称为已加工假基因(processed pseudogene)，主要是转录过程中mRNA 以cDNA 的方式重新整合进入基因组(很可能发生在生殖细胞中)，在长期进化选择过程中因为随机突变积累而丧失功能，通常这种假基因无内含子，两边有小的侧翼定向重复序列(flanking direct repeat)，3'端多具多聚腺苷酸尾。
9、简述CpG岛与DNA甲基化调控。
大约有一半的人类基因富含CpG 的顺序，称为CpG岛(CpG island)，CpG 岛常位于转录调控区或其附近，主要存在于看家基因和一些组织特异性表达基因。在正常组织，除印记基因和失活的X染色体外，包括启动子区在内的基因5′端CpG 岛大部分是非甲基化的。DNA甲基化与基因表达呈负相关，DNA甲基化调控基因表达直接的机制可能是因为甲基从DNA分子的大沟中突出，阻止了转录因子与基因相互作用，还可能直接抑制RNA聚合酶活性而抑制基因的表达。间接的机制包括两种类型：①与甲基化DNA结合蛋白结合；②改变染色质结构，这都间接阻碍转录因子与DNA结合而抑制转录。DNA甲基化对胚胎发育非常重要，与X染色体失活，基因组印记，特别是肿瘤密切相关。
10、作为一种遗传标记，人类短串联重复序列（STR）的主要用途有哪几个方面？
主要用途①人类基因遗传图谱的制作。②目的基因筛选和基因诊断。通常目的基因若与STR位点有连锁关系, 则其位置与STR位点邻近, 故通过对STR附近区域克隆测序, 就可能发现目的基因。通过家系和对照研究, 运用连锁和相关分析, 可以找到与疾病高度相关的STR位点。③法医学个体识别和亲权鉴定。法医案例中, 对于量极少和降解严重的生物检材, 通过PCR进行STR位点扩增并将几个STR 位点联合起来分析, 可得到相当高的累积个体识别率和父权排除率。因而STR用于法医学领域有着广阔的前景，为司法侦案、破案提供有利的科学依据。
11、人类单核苷酸的多态性（SNP）的特点及主要用途有哪几个方面？
疾病的连锁分析与基因的定位：包括复杂疾病（如骨质疏松症、糖尿病、心血管疾病、精神性紊乱、各种肿瘤等）的基因定位、关联分析，并可用于遗传病的单倍型诊断。
指导用药和药物设计：SNP多态性能充分反映个体间的遗传差异。通过研究遗传多态性与个体对药物敏感性或耐受性的相关性, 可以阐明遗传因素对药物效用的影响, 从而对医生针对性的用药和药物的开发提供指导和依据。
用于进化和种群多样性的研究：生物界的进化及进化过程中物种多样性的形成与基因组的突变和突变的选择密切相关, 构建整个基因组的SNP 图谱对于直接研究人类的起源、进化具极大意义。对比人群之间SNP 图谱的异同情况可以对人类的起源、迁移等作出估计, 从而理清人类进化过程中源与流的问题。
12、人类基因组研究的主要内容是什么？
人类基因组研究主要包括两方面的内容：以全基因组测序为目标的结构基因组学和以基因功能鉴定为目标的功能基因组学，又称后基因组研究。
结构基因组学代表基因组分析的早期阶段，通过基因作图、核苷酸序列分析确定基因组成、基因定位的科学，包括规模化地测定蛋白质、RNA及其它生物大分子的三维结构等内容,以获得一幅完整的、能够在细胞中定位以及在各种生物学代谢途径、生理途径、信号传导途径中全部蛋白质在原子水平的三维结构全息图。功能基因组学代表基因分析的新阶段，是利用结构基因组学提供的信息研究基因功能，使人们有可能在基因组学、蛋白质组学、分子细胞生物学以致生物体整体水平上理解生命的原理。对疾病的防治和机理的阐明有重要应用意义。
基因分类：A.按功能:1.结构基因---编码蛋白和酶分子结构（蛋白基因）；2.调控基因(Regulatory Gene)---调节结构基因表达，包含调节基因、操纵基因和启动基因；3.转录而不翻译的基因（RNA基因）：rRNA基因→rRNA→核仁形成区，核糖体组成。tRNA基因→tRNA→转运氨基酸。
B.按重要程度: 1.看家基因(House-keeping Gene): 维持细胞最低限度功能所不可少的基因, 如编码组蛋白基因、编码核糖体蛋白基因、线粒体蛋白基因、糖酵解酶的基因等。这类基因在所有类型的细胞中都进行表达。2.必需基因(Essential Gene): 突变时会引起致死表型的基因.基因表达的特点：A时间特异性，单细胞生物：特定基因表达严格按特定时间顺序发生。多细胞生物：基因表达在不同的发育阶段严格按特定时间顺序开启或关闭。又称为阶段特异性（Stage specificity）。B, 空间特异性, 在某发育阶段，同一基因在不同组织器官其表达有差异。又称为细胞特异性（Cell specificity）
基因表达的方式: A组成性表达, 某些基因的表达不受内外环境的影响，在个体生长过程中，几乎在所有的组织中持续表达或变化很小。这些基因一般为看家基因（Housekeeping gene）B, 诱导和阻遏表达, 诱导（Induction）：基因受环境刺激而开启表达增强。阻遏（Repression）：基因受环境刺激而表达受到抑制和减弱C, 协调表达, 在一定控制机制下，功能相关的一组基因进行协调共同表达
14、叙述原核生物基因组的结构特征。
在原核生物基因组中只有一个DNA复制起点。基因组DNA通常是由一条环状双链DNA（double stranded DNA，dsDNA）分子组成。基因组DNA与支架蛋白和RNA结合在一起，以复合体的形式存在。广泛存在操纵子结构。操纵子结构是原核生物基因组的功能单位，在原核基因调控中具有普遍的意义。原核生物的结构基因多数是单拷贝的并且结构基因中没有内含子成分。编码顺序一般不重叠。具有编码同工酶的不同基因。基因组中编码区所占比例为50﹪，不编码区中常常含有基因表达调控的序列。基因组DNA分子中存在多种功能的识别区域，这些区域经常有反向重复序列存在，并能形成特殊的结构。原核生物基因组存在着可移动的DNA序列，这些可移动的DNA序列，通过不同的转移方式发生基因重组，使生物体更适应环境的变化。
15、简述原核生物的类核组成。
原核生物与真核生物的主要区别在细胞核上。原核生物没有典型的细胞核结构，基因组DNA位于细胞中央的核区，没有核膜将其与细胞质隔开，但能在蛋白质的协助下，以一定的组织形式盘曲、折叠包装起来，形成类核（nucleoid）也称拟核。类核的中央部分由RNA和支架蛋白（scaffolding protein）组成，外围是双链闭环的超螺旋DNA。在超螺旋结构的基础上，DNA 分子再扭结成许多活结样或花瓣样的放射状结构的DNA环。每个环形的活结状结构代表一个结构域，在各结构域中DNA呈负超螺旋状态。每个DNA环是一个相对独立的功能区，可以独立完成不同区域的基因表达与调控。在类核中80﹪为DNA，其余为RNA 和蛋白质。如果用DNA酶处理后可使基因组DNA链断裂；如果用RNA酶或蛋白酶处理类核，则类核变得松散，不能维持DNA链的折叠结构，这表明RNA和蛋白质对维持类核分子的折叠以及形成环状结构是必不可少的。
16、简述原核生物转座子的类型及特点。
⑴插入序列（insertion sequence,IS）长度约700bp～2 000bp，由一个转位酶基因及两侧的反向重复序列（16bp～41bp）组成。反向重复序列的对称结构使IS可以双向插入（正向插入或反向插入）靶位点。并在插入后于两侧形成一定长度（3bp～11bp）的顺向重复序列称靶序列（target sequence）IS的转位频率为10-7／拷贝，即在一个世代的107细菌中有1次插入。⑵转座子（transposon,Tn）是一类复杂的转位因子。Tn比IS大，约4500～20000bp，除了携带有关转座的必需基因外，还含有能决定宿主菌遗传性状的基因，主要是抗生素和某些药物的抗性基因，转座子中的转位酶称为转座酶（transposase），其功能是介导转座子从一个位点转座到另一个位点，或从一个复制子转座到另一个复制子，其转座过程与IS相似。
⑶Mu噬菌体 是一类具有转座功能的温和性噬菌体。温和性噬菌体有多种，如大肠杆菌λ噬菌体、大肠杆菌Mu-
1、P1和P2噬菌体等。这类噬菌体具有整合能力，可以整合到细菌染色体中去，也称可转座的噬菌体（transposable phage）。当它们感染细菌后，其溶源性整合和裂解周期的复制均以转座方式进行，但转座位点是随机的。
17、通过转座可引起哪些遗传效应？
⑴引起突变 转位可能引起多种基因突变。当转位因子插入一个基因内部，会引起这个基因的插入失活；当插入多顺反子前端的基因中时，可引起下游的所有基因停止转录，因为转位因子中含ρ依赖的转录终止信号；当插入染色体或质粒中时，常引起缺失和倒位突变。⑵引入新的基因 在插入位点上引入新的基因，如含有抗药基因R质粒的转位因子，转位到染色体中时，可在该部位出现抗药性基因。若将带有Amp+R质粒的细菌与不含R质粒的带有Kan+转座子的细菌进行接合，结果产生了Amp+ Kan+的细菌，并且能够在含有氨苄青霉素及卡那霉素的培养板上生长。经过转位作用，在这种细菌内产生Amp+及Kan+的质粒，经过再次接合作用，即可产生含Amp+ Kan+R质粒细菌。
⑶引起生物进化 基因重排经常发生，转座作用是基因重排的重要机理之一，如通过转座，可将两个本来相隔遥远的基因靠拢，从而进行协调的控制作用，这两段基因顺序经过转座作用连接在一起有可能在进化过程中产生新的蛋白质。
18、真核生物染色体基因组的一般特点？
①真核生物基因组远大于原核生物基因组，结构复杂，基因数庞大，具有多个复制起点；②真核细胞的基因组DNA都是线状双链DNA，而不是环状双链分子；③基因组中非编码区多于编码区；④真核基因多为不连续的断裂基因，由外显子和内含子镶嵌而成；⑤存在大量重复序列。
19、真核生物基因组含有的重复序列有哪些？
（一）高度重复序列
重复频度>105。根据卫星DNA的长度，又可分成3种：卫星DNA、小卫星DNA、微卫星DNA。
（二）中度重复序列
这类重复序列主要由比较大的片段（由100bp到几千bp）串联重复组成，分散在整个基因组中，重复频度不等，如Alu家族、rRNA、tRNA和组蛋白等。
20、简述质粒的概念和特性，常用的质粒载体有哪几种？
质粒为细菌染色体外一些双链、共价闭合环状DNA分子，是能够进行独立复制并保持稳定遗传的复制子。质粒具有复制和控制机构，能够在细胞质中独立自主的进行自身复制，并使子代细胞保持它们恒定的拷贝数。
质粒一般具有以下特性：①自主复制性，它能独立于宿主细胞的染色体DNA而自主复制；②质粒不相容性；③可扩增性；④可转移性。
理想质粒载体应具备①具有松弛型复制子；②在复制子外存在几个单一的酶切位点；③具有插入失活的筛选标记；④分子量相对较小，有较高的拷贝数。
常见的质粒载体有：pBR322质粒、pUC质粒载体、pGEM系列载体等。
21、试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。
[答案] 质粒DNA提取的方法包括碱裂解法、煮沸裂解法和SDS裂解法。
1）碱裂解法：在NaOH存在的强碱性（pH12.0～14.0）的条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁和裂解细胞，并使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。它是一种适用范围很广的方法，能从所有的大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA，制备量可大可小。
2）煮沸裂解法：是将细菌悬浮于含Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中，Triton X-100和溶菌酶能破坏细胞壁，再用沸水浴裂解细胞，使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性。对CCC质粒DNA因结构紧密不会解链，当温度下降后，CCC质粒DNA可重新回复其超螺旋结构，通过离心去除变性的蛋白质和染色体DNA，然后回收上清液中的质粒DNA。本法只能用于小质粒DNA（小于15kb）的小量或大量制备，适用于大多数从大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA。
3）SDS裂解法：它是将细菌悬浮于等渗的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA处理以破坏细胞壁，再用SDS裂解去壁细菌，从而温和地释放出质粒DNA到等渗溶液中，然后用酚/氯仿抽提。适用于大质粒DNA的提取。
22、简述哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有哪几种？ [本题答案]哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有： 酚提取法、甲酰胺解聚法、玻棒缠绕法和异丙醇沉淀法、磁珠吸附法等。
23、简述从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的主要方法有哪几种？
[本题答案] 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法主要包括 DEAE-纤维素膜插片电泳法、电泳洗脱法、低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法、冷冻挤压法及现在有试剂盒供应的以硅为基础的纯化系统等。
24、简述磁性球珠分离法分离mRNA的原理。
[本题答案]磁性球珠分离法是基于寡聚(dT)与poly(A)的互补配对特性、用生物素标记寡聚(dT)，通过寡聚(dT)与mRNA 3’端poly(A)形成杂交体，这种杂交非常迅速，在1－2分钟内就可完成，可有效地除去rRNA, tRNA以及其他RNA,而后通过生物素与链亲和素顺磁性磁珠之间的相互作用来捕获这些杂交物而达到分离纯化。
25、描述质粒DNA的结构特点。
多数细菌来源的质粒核酸是环状双链DNA分子，没有游离的末端，每条链上的核苷酸通过共价键头尾相连。质粒DNA分子通常具有三种不同的构型。当其两条核苷酸链均保持完整环形结构时，为共价闭合环状DNA分子，这样的DNA常以超螺旋状态存在；如果两条链中只有一条链保持完整环形结构，另一条链出现一至数个缺口时，为半开环DNA；若两条链均有缺口并发生断裂则成为线性DNA分子。
26、试述质粒的类型有哪些？
根据细菌染色体对质粒复制的控制程度是否严格可将质粒分为：严紧型质粒和松弛型质粒。按转移方式分为：接合型质粒、可移动型质粒、自传递型质粒。按质粒大小分为：小型质粒、大型质粒。按质粒的宿主范围分为：窄宿主谱型质粒、广宿主谱型质粒。按质粒的功能分为：F质粒、R质粒、Col质粒。
27、线粒体DNA与核DNA有哪些不同之处？
（一）非孟德尔的母系遗传。mtDNA 因位于细胞质中,表现为严格的母性遗传, 不服从孟德尔遗传，绝大部分mtDNA 是通过卵细胞遗传。
（二）高突变率。mt DNA突变率约为nDNA的10～100倍，此外mtDNA 与有毒物质的结合频率比核DNA 高数倍至数十倍。
（三）异质性和复制分离。异质性即突变mtDNA与野生型mtDNA 以不同的比例共存于一个细胞内的现象。复制分离即在细胞分裂的复制过程中,突变的和野生型的mtDNA 随机进入子细胞的过程，复制分离的结果使突变mtDNA 杂合体向突变纯合或野生纯合方向转变,但因突变复制具有优势,故易产生突变积累，突变积累的程度不同,突变mtDNA 在群体中的多态性程度也不同。
（四）阈值效应。每个细胞的mt DNA有多种拷贝，而一个细胞mt DNA编码基因的表现型依赖于一个细胞内突变型mt DNA和野生型mt DNA的相对比例，mtDNA 突变导致氧化磷酸化水平降低,当能量降低到维持组织正常功能所需能量的最低值时即达到了mtDNA表达的能量阈值，可引起某组织或器官的功能异常而出现临床症状，这就是阈值效应。
（五）半自主复制与协同作用。mt DNA虽有自我复制、转录和编码功能，但该过程还需要数十种nDNA编码的酶参加，因此mt DNA基因的表达同时也受nDNA的制约，两者具有协同作用。
28、何谓线粒体病？简述线粒体病的遗传学分类。
线粒体病（mitochondriopathy）是指由于线粒体呼吸链功能不良所导致的临床表现多样化的一组疾病。临床表现常见为眼睑下垂、外眼肌麻痹、视神经萎缩、神经性耳聋、痉挛或惊厥、痴呆、偏头痛、类卒中样发作等。
从核基因缺陷和线粒体基因缺陷的角度对线粒体病进行遗传学分类可分为三种类型：点突变，mtDNA的大规模缺失或插入和源于核DNA缺陷引起mtDNA缺失。
29、病毒的基本结构成份主要有哪些？
毒没有完整的细胞结构，由四种基本结构成份组成：①由一种核酸(DNA或RNA)组成的病毒基因组。②由病毒基因组编码的衣壳蛋白组成的衣壳。③来源于宿主细胞质膜系统（细胞膜、内质网膜或高尔基体膜）的包膜。④病毒颗粒中的其它内容物，包括酶、核酸结合蛋白及金属离子等。30、国际病毒分类委员会（ICTV）将病毒分成哪几类？ 国际病毒分类委员会（ICTV）制定了《国际病毒分类与命名原则》。根据病毒的基因组组成及复制方式，可将病毒分为如下几类：
DNA病毒（DNA Viruses）
第一组：双链DNA病毒（Group I: dsDNA Viruses）第二组：单链DNA病毒（Group II: ssDNA Viruses）RNA病毒（RNA viruses）
第三组：双链RNA病毒（Group III: dsRNA Viruses）第四组：正链RNA病毒（Group IV:(+)ssRNA Viruses）第五组：负链RNA病毒（Group V:(-)ssRNA Viruses）
DNA与RNA逆转录病毒（DNA and RNA Reverse Transcribing Viruses）
第六组：RNA逆转录病毒（Group VI: RNA Reverse Transcribing Viruses）第七组：DNA逆转录病毒（Group VII: DNA Reverse Transcribing Viruses）亚病毒因子（Subviral Agents）
卫星（Satellites）类病毒（Viroids）朊病毒（Prions）
31、简述长病毒末端重复序列的特点和作用。
逆转录病毒基因组RNA在逆转录后生成的双链DNA中，两端有长末端重复序列（long terminal repeat，LTR）结构。LTR在结构与功能上与上述重复序列不同。LTR中的重复序列只占一部分，另外还包括单一序列。5＇端的LTR包含许多特定的基因表达调控区域，是一组真核生物增强子和启动子单位，而3＇端的LTR具有转录终止的作用。另外，逆转录病毒基因组利用LTR中的重复序列形成环状结构，在整合酶作用下整合入宿主细胞基因组内。53蛋白质组学的研究特点有哪些？
① 整体性 ② 揭示生命的动态性过程 ③ 体现生命现象的复杂性
32、等电聚焦凝胶电泳的原理是什么？
依据蛋白质分子的净电荷或等电点进行分离的技术。在等电聚焦过程中，电场所采用的载体两性电解质含有脂肪族多氨基多羧酸，可在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续pH梯度，蛋白质分子在一个载体两性电解质(ampholyte)形成的连续而稳定的线性pH梯度中电泳，当蛋白质迁移到其等电点位置时，净电荷为零，在电场中不再移动，因此可将各种不同等电点性质的蛋白质分离开来
33、简述酵母双杂交系统的优缺点。
酵母双杂交系统所具有的优点：①蛋白质作为被研究的对象不用被纯化；②检测在活细胞内进行，可以在一定程度上反映体内（细胞内）的真实情况；③由于这一系统可以反映基因表达产物的累积效应，因而可检测存在于蛋白质之间微弱或短暂的相互作用；④采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库，可用于分析多种不同功能的蛋白。
局限性：①双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内，而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等，这些反应在核内无法进行。②由于某些蛋白本身具有激活转录功能或在酵母中表达时发挥转录激活作用，从而引起报告基因的表达，产生“假阳性”结果。③双杂交只是反映蛋白质间能发生作用的可能性，这种可能还必须经过其他实验验证，尤其要与生理功能研究相结合，否则可能会误入歧途。
34、蛋白质间互作鉴定：
（1）蛋白质亚基的聚合：线性、环状、螺旋、球状、交叉聚合（2）分子识别：抗原与抗体、配体与受体、酶与底物（3）分子的自我装配：核糖体、细菌鞭毛、病毒的自动装配
（4）多酶复合体：丙酮酸脱氢酶复合体包括丙酮酸脱氢酶、二氢硫辛酸转乙酰基酶和二氢硫辛酸脱氢酶。
蛋白质间作用力：（1）氢键：肽键之间，主－侧、侧－侧链之间（2）范德华力：取向力、诱导力、色散力
（3）疏水键：非极性基团为了避开水相二群集在一起的作用力。（4）离子键（盐键）：正负离子之间的静电引力所形成的化学键。
蛋白质相互作用的研究方法: 体外：（1）肽蛋白质亲和层析；（2）亲和印迹；（3）免疫沉淀；（4）交联等。
体内：（1）酵母双杂交系统；（2）噬菌体展示技术；（3）生物传感芯片质谱；（4）蛋白质定点诱变。
蛋白组学研究内容：1.蛋白质分离；2.蛋白质的鉴定；3.蛋白质-核酸间相互作用；4.蛋白质与蛋白质的相互作用。蛋白组学研究的特点：1）整体性和规模化；2）动态性和网络化；3）复杂性和综合技术化；
蛋白质组研究常用技术：
1）蛋白质分离技术（电泳和层析技术）；2）蛋白质检测与图像分析以及鉴定技术； 3）蛋白质互作研究技术；4）生物信息学分析技术。
35、蛋白质组学的研究内容有哪些？
蛋白质组学的研究包括两个方面：一是针对蛋白质表达模式的研究，一是在蛋白质功能模式方面的深入分析。
36、PCR，聚合酶链反应（Polymerase chain reaction)：是一种模拟体内天然DNA复制过程的体外核酸扩增技术，是基因扩增技术的一次重大革新。
PCR原理：利用DNA聚合酶催化一对引物间的特定DNA片段在体外实现快速、大量扩增的方法，也称：无细胞克隆技术或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法。PCR标准反应体系（五要素,）
（1）DNA模板(template)：靶基因
（2）原料：dNTPs（dATP，dGTP，dCTP，dTTP）
（3）催化酶：耐高温的DNA聚合酶（如：Taq酶）
（4）一对引物（primer）：扩增序列的决定者其与靶基因两侧序列互补
（5）Mg2+ 和 Buffer PCR反应过程----三步曲
1.高温变性：在高温（95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板
2.低温退火：在低温（37～55℃）下，两条人工合成的寡核苷酸引物分别与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链
3.适温延伸：在耐热DNA聚合酶的最适温度（72℃）下，以引物的3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新链。
37、PCR衍生技术(pcr技术有哪些)：逆转录PCR、反向PCR、巢式PCR、标记PCR、多重PCR、原位PCR、不对称PCR、定量PCR、锚定PCR
38、如何提高PCR扩增的特异性？
① 升高退火温度可增加引物与模板结合的特异性
② 缩短退火和延伸时间，可减少错误引发及多余的DNA聚合酶分子参与酶促延伸的机会 ③降低引物和酶的浓度也可以减少错误引发，尤其是能减少引物二聚体的引发 ④ 改变Mg2+的浓度可进一步提高扩增的特异性 ⑤ 引物设计的特异性 ⑥ 减少循环次数
⑦ 热启动（Hot Start）：即首先将模板变性，然后在较高温度时加入Taq DNA聚合酶、引物及MgCl2等一些重要成分，这样使得引物在较高温度下与模板退火，提高了反应的严格性，使扩增更特异 ⑧ 采用两对引物即外引物和内引物进行扩增来提高扩增的特异性。
39、PCR检测技术有何临床应用：(1)PCR在病原微生物的检测中的应用；（2）PCR在遗传病中的应用；（3）PCR在肿瘤中的应用；（4）其它方面的应用：PCR技术除用于临床诊断和治疗外，还可用于DNA指纹、个体识别、亲子关系识别、法医物证等。40、影响PCR反应的因素有哪些？
PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液，这些因素都对PCR反应产生影响。
41、影响PCR反应的因素有哪些？
PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液，这些因素都对PCR反应产生影响。
42、简述bDNA信号放大系统的原理。
分枝DNA是人工合成的带有侧链的DNA片段，在每个侧链上都可以标记可被激发的标记物。以bDNA为基础建立的连续放大DNA信号以检测DNA的技术称为分枝DNA信号放大系统。
bDNA信号放大系统包括四种杂交探针，即目标探针、前放大体、放大体和标记探针。首先用亲和素包被微孔，加入目标探针，该组探针能与等检核酸靶序列上不同区域互补，其5′端用生物素标记，能与微孔中的亲和素高度亲和结合；再向微孔中加入待测标本，目标核酸与固定于微孔中的目标探针结合；再加入前放大体，该组探针的一段能与目标核酸的不同区域互补结合，另一段与放大体（即分枝DNA）的主链部分的序列互补结合，分枝DNA由主链和数十根寡核苷酸组成，每个分枝上都有标记探针的杂交位点，由酶标寡核苷酸组成的标记探针与bDNA上的互补序列结合，加入底物后最后经化学发光检测仪检测。利用bDNA信号放大系统可在每个靶序列上结合60～300个酶分子，而且所有杂交反应同时进行，观察到的信号与靶DNA的量成正比，可通过标准曲线将靶DNA定量。
43、简述链末端终止法测定 DNA 序列的原理
答：利用DNA聚合酶，以待测单链DNA为模板，以dNTP为底物，设立四种相互独立的测序反应体系，在每个反应体系中加入不同的双脱氧核苷三磷酸（dideoxyribonucleoside triphosphate，ddNTP）作为链延伸终止剂，在测序引物引导下，按照碱基配对原则，每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链，通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后，从凝胶底部到顶部按5′→3′方向读出新合成链序列，由此推知待测模板链的序列。
44、简述化学法测定 DNA序列的基本原理
答：化学法是对待测DNA进行化学降解。在化学法的测序系统中，先对待测DNA末端进行放射性标记，然后分成4组或5组互为独立的化学反应体系，每一组用不同的化学试剂特异地针对某一种或某一类碱基进行化学切割，通过化学降解后产生长短不一的DNA片段，其长度取决于改组反应所针对的碱基在待测DNA片断中的位置，将各组反应产物通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后直接识读待测DNA的序列。
45、Sanger双脱氧链终止法,全称：双脱氧链末端合成终止法
原理：利用DNA聚合酶，以待测单链DNA为模板，以dNTP为底物，设立4种互相独立的测序反应体系，在每个反应体系中加入不同的双脱氧核苷酸三磷酸（ddNTP）作为链延终止剂，在测序引物引导下，按照碱基配对原则，每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链，通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后，从凝胶底部到顶部按5’到3’方向读出新合成链序列，由此推知待测模板链的序列。每个测序反应体系的组成：1.DNA聚合酶；2.单链DNA模板（待测片段）；3.带有3-OH末端的单链寡核苷酸引物；4.Mg2+；5.原料-dNTPs(dATP,dGTP,dCTP和dTTP)；6.终止剂-ddNTPs(ddATP,ddGTP,ddCTP和ddTTP)测序体系的关键成分：（1）链终止剂，2’，3’-二脱氧核糖核苷酸（ddNTPs)（2）用于测序的变性聚丙烯酰胺凝胶（PAGE)胶长40cm，厚度均匀；4-8%丙烯酰胺；7mol/L尿素（3）模板，即待测序的DNA片段（4）引物。酶促测序反应中，利用一个与模板特定序列互补的合成寡核苷酸作为DNA合成的引物（5）DNA聚合酶（6）放射性同位素标记的dNTP：α-35S-dNTP 焦磷酸测序技术（PSQ)：在以靶DNA链为模板指导核酸合成的过程中，将释放的可见光作为检测信号，从而对靶DNA链进行实时测序的方法，是一种合成测序技术。原理：同一反应体系中由四种酶催化的级联化学发光反应，首先让测序引物与待测模板结合成杂交体，在每一轮测序反应中，只加入一种dNTP，若该dNTP与模板配对，聚合酶就可以将其掺入到引物链中，并释放出等摩尔的焦磷酸基团（PPi），PPi最终转化为可检测的光信号，并由Pyrogram TM 转化为一个峰值，每个峰值的高度与反应中掺入的核苷酸数目成正比，随后，加入下一种dNTP，继续DNA链的合成。产生的荧光信号自动传入分析系统，直接测读靶DNA序列。特点：1.无需电泳，也无需荧光标记，操作极为简便，具快速、准确、经济和实时；2.阅读能力已从100bp至400bp ；3.该技术具有多种不同的用途。
46、简述哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有哪几种？
哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有： 酚提取法、甲酰胺解聚法、玻棒缠绕法和异丙醇沉淀法、磁珠吸附法等。
47、简述重组DNA技术的原理及技术。
重组DNA是在体外利用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异的切割，获得的目的基因或DNA片段与载体连接，从而组成一个新的DNA分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，并在宿主细胞中进行无性繁殖，获得大量的目的基因或DNA片段。经重组的DNA分子能在宿主细胞中进行表达，获得相应的蛋白质。
大致步骤包括：①目的基因的获取；②载体的选择；③目的基因与运载体连接成重组 DNA；④重组DNA导入受种细胞；⑤重组体的筛选
49、简述黏性末端DNA重组体的构建过程。
目的基因和载体可由同一种限制酶切割后产生，或由不同的限制酶切割形成互补黏性末端，经退火，彼此间很容易按碱基配对原则形成氢键。然后由DNA连接酶催化连接接头处的缺口，形成重组质粒。载体DNA在限制酶切割后，用碱性磷酸酶处理，除去5’端磷酸基，以避免载体DNA自身环化。50、举例说出重组DNA技术在医药领域的应用。
可以利用重组DNA技术探明致病基因的结构和功能，了解其致病机制；开发基因工程药物和疫苗用于临床；建立基因诊断、治疗技术，为疾病的预防、治疗提供新方法、新技术。具体可用于基因诊断：基因诊断是从基因水平上检测人类遗传性疾病的基因缺陷；基因治疗：是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过载体导入人体靶细胞取代靶细胞中的缺陷基因，从而达到治疗疾病目的的方法；基因工程药物、疫苗和抗体的研究和制备；利用基因敲除或转基因技术可改造生物、培育新的生物品种或用于药物筛选和新药评价等。
51、基因芯片的主要类型及其特点（1）从支持物来分 ①薄膜型：聚丙烯膜、硝酸纤维素膜和尼龙膜②玻片型：生产此类产品的公司 如 Affimetrix（2）从点阵的制备方法来分 ①原位合成型（In Situ Synthesis）②合成点样型（off-chip synthesis）（3）根据探针片段长度分 ①Oligo-Chip：约8~25nt，常用于基因类型的分析，如突变、正常变异（多态性）和测序②cDNA-Chip：<2000nt，常用于基因表达和差异表达分析（两种或以上相关样本）③Genomic Chip：>5000nt，基因组结构分析（4）根据用途分：基因变异检测芯片表达谱芯片功能基因芯片.52、生物芯片：采用平面微细加工技术（光导原位合成或微量点样等）将大量生物样品（核酸、多肽、细胞、组织切片等）有序地固化于支持物表面（玻片、硅片、尼龙膜等）由此组成的密集二维生物样品的微阵列。原理：分子间特异的相互作用
生物芯片技术的特点：1）高度交叉的综合性新技术；2）高度集成性、微型化和连续化；3）高通量；4）通过设计不同的探针阵列、使用特定的分析方法，可使该技术具有多种不同的应用价值。
基因芯片：
1）基因芯片：有序地、高密度地排列着大量的基因片段（probe)的载体(玻璃片或纤维膜等)。2）基因芯片技术：将大量核酸探针分子固定于支持物上，标记的样品分子按碱基互补原则与探针进行杂交，通过检测杂交信号分布和强度、进而获取关于样品分子的序列和数量的信息，是高通量研究基因表达、突变等的革命性技术。基因芯片检测的原理和步骤：
原理：将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的待测样品进行杂交，通过检测杂交信号的分布和强度，实现对样品中基因信息的定性和定量分析。
基本步骤：
1.芯片制备。2.靶核酸制备（样品提取纯化、扩增和标记）3.靶核酸与探针（芯片）杂交 4.杂交结果的扫描5.图像分析和数据处理
基因芯片的特点：
1.微型化和自动化；现有芯片面积：最大525cm２,最小1cm２样品DNA的用量：5nl/阵点 杂交和洗片等过程自动化,工作效率极高。2.高度平行性；实验组和对照组的样品等都在同一张芯片上同时进行杂交分析,结果的可比性好。
3.巨大的信息产出率；芯片上各点所对应的基因或其表达的定性（量）分析、差异表达分析等。4.高度敏感性和专一性；能可靠并准确检测出10pgDNA/μL样品。5.可反复使用；一张由尼龙膜制作的微阵列，可以重复杂交使用多达20次。
53、简述蛋白芯片的原理及应用。
蛋白质芯片的基本原理是采用原位合成、机械点样或共价结合的等方法将多肽、蛋白、酶、抗原、抗体固定于固相介质上形成的生物分子点阵，在待分析样品中的生物分子与蛋白质芯片的探针分子发生杂交或相互作用或其他分离方式分离后，利用激光共聚焦显微扫描仪对杂交信号进行高通量检测和分析。蛋白质芯片是将整个蛋白质水平的相关生化分析过程集成于芯片表面，从而实现对多肽、蛋白质及其他生物成份进行高通量检测。
蛋白质芯片技术是一种快捷、高效、高通量、并行、微型化和自动化的蛋白质分析技术，适用于分析包括组织、细胞系、体液在内的多种生物样品能分析包含针对信号传导、癌症、细胞周期调控、细胞结构、凋亡和神经生物学等广泛的生物功能的相关蛋白，灵敏度高达pg/ml。
54、举例说明基因芯片在临床诊断中的应用。
基因芯片作为一项现代化的诊断新技术在感染性疾病、遗传性疾病的诊断和耐药性检测等方面已显示出良好的应用前景。下面举例说明基因芯片在疾病诊断的应用。
（1）感染性疾病的诊断。性传播疾病、肝炎等。
（2）遗传性疾病的诊断。地中海贫血、血友病、婚前检查等。（3）耐药性检测。结核分支杆菌耐药性检测芯片等。
55、试述基因芯片的工作原理及制备。
基因芯片技术是建立在基因探针和杂交测序技术上的一种高效、快速的核酸序列分析手段。它将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强度及分布来进行分析。在一块1cm2大小的基因芯片上，根据需要可固定数以千计甚至万计的基因，以此形成一个密集的基因方阵，实现对千万个基因的同步检测。基因芯片技术主要包括四个主要步骤：芯片制备、样品制备、杂交反应和信号检测以及结果分析。
56、试述生物芯片的种类及主要功能。
生物芯片根据其结构特点，可以将生物芯片分为微阵列芯片和微流体芯片两个主要类别。微阵列芯片是由生物材料微阵列构成的芯片，包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片和组织芯片等，由于它们的工作原理都是基于生物分子之间的亲和结合作用，如核酸分子的碱基配对作用，抗原和抗体的结合等，所以通常也称为亲和生物芯片。微流芯片是以各种微结构为基础的芯片，利用它可实现对各种生化组分的微流控操作和分析，这类芯片的代表有毛细管电泳芯片、PCR反应芯片、介电电泳芯片等。(生物芯片发展的最终目标是将各种生物化学分析操作的整个过程，从样品制备、生化反应到结果检测，都集成化并缩微到芯片上自动完成，以获得所谓的微型全分析系统（micro total analysis systen,μ-TAS）,或称“微缩芯片实验室”（lab-on-a-chip）。微缩芯片实验室代表了生物芯片技术发展的未来。)
57、核酸探针：序列已知的、能与待测的靶核酸序列互补结合、并带有可检测标记的核酸片段。（它可以是整个基因，或基因的一部分；它可以是DNA或RNA）。
58、基因组DNA探针：为某一基因的全部或部分序列。缺点：真核基因组含有内含子序列；因此，当其用于检测基因表达时，杂交效率低
cDNA探针：从已构建的cDNA文库中筛选和分离出来的靶基因序列。cDNA探针无内含子序列，尤其适用于基因表达的检测，目前应用最广。
59、基因组探针和cDNA探针的共同优点：①制备方便：克隆于质粒载体中②稳定：DNA探针较RNA探针稳定；RNA易被RNA酶降解③标记方法成熟和多样。共同缺点：双链探针存在自身复性，影响杂交效率。
60、RNA探针的优点：单链：杂交时不存在第二条链的竞争（自身复性），杂交效率高；含RNA的杂交体更稳定（Tm更高），杂交反应可以在更为严格的条件下进行，因而RNA探针杂交的特异性高 主要缺点：探针不稳定，易被RNase降解。RNA探针适合于：Northern杂交、原位杂交等。61原位杂交的基本原理
样本经适当处理后，使细胞通透性增加，让探针进入细胞内与组织、细胞中待检测的核酸进行特异性结合形成杂交体，然后通过组织化学或免疫组织化学方法在被检测的核酸原位形成的杂交信号，在显微镜或电子显微镜下对待测核酸进行细胞内定位的方法。
62、核酸杂交技术是一种分子生物学的标准技术，用于检测DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）。DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼农膜上，与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记。在膜上杂交时，探针通过氢键与其互补的靶序列结合，洗去未结合的游离探针后，经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针。
63、核酸分离与纯化的原则：
1.保证核酸序列结构完整性，防止降解和结构破坏;2.剔除其他物质，保证纯度
64、在核酸的分离和纯化过程中，如何保持核酸的完整性？
[本题答案] 为了保证核酸的完整性，首先在操作过程中，应尽量简化操作步骤，减少各种破坏核酸的有害因素，包括物理、化学与生物学的因素。提取应在0～4℃的条件下进行；另外避免强力的机械剪切力对核酸的破坏。细胞内或外来的核酸酶对核酸的生物降解，而破坏核酸的一级结构，使用EDTA、柠檬酸盐并在低温条件下操作，基本上就可以抑制DNA酶的活性；并尽可能地抑制RNA酶的活性。65、RNA的分离与提取：
难点：RNA在体外十分不稳定，易降解，不易得到全长；RNA酶在体外存在于手汉、唾液、呼吸、灰尘中。原则：防止污染、防止降解。
防止方法： 高压灭菌；器皿：200 ℃烘烤2h；试剂：采用焦碳酸二乙脂（DEPC）处理；戴手套、口罩。
提取方法：（1）异硫酸胍-酚氯仿法： 异硫酸胍（4M）+巯基乙醇（0.14M）为蛋白质变性剂，酚/氯仿抽提，异丙醇沉淀RNA，75%乙醇洗涤（2）TRIzol法： TRIzol（苯酚+硫氰酸化合物）+氯仿+异丙醇+75%乙醇（3）酚-氯法。纯化方法：饱和酚（pH4.5-5.5）66、简述原位杂交在临床中的应用
原位杂交技术可以通过标记的探针与分裂中期染色体DNA杂交来精确定位特定核苷酸序列在染色体上的位置；与细胞RNA杂交可观察组织细胞中特定基因的表达水平；还可用特异性的细菌或病毒的核酸序列作为探针与组织、细胞杂交，以确定有无病原体的感染等。原位杂交能在成分复杂的组织中对单一细胞进行研究，不受同一组织中其它成分的影响，因此对于那些细胞数量少且散在于其它组织中的细胞内DNA或RNA的研究更为方便。此外，原位杂交不需要从组织中提取核酸，有利于检测组织中含量极低的靶序列，并可完整地保持组织和细胞的形态，更能准确地反应出组织细胞的相互关系及功能状态。举例：原位杂交检测上皮细胞中人乳头状瘤病毒（HPV）DNA 67、简述临床诊断常用的FISH探针的类型及用途。
根据核酸探针的序列特点，可将FISH探针分为三大类：重复序列探针、单一序列探针和全染色体涂抹探针。重复序列探针（repetitive sequences probes）是指与某条特定的染色体结构结合、特异识别重复DNA序列的探针如着丝粒探针、端粒探针等。一般来说，不同的染色体，着丝粒重复序列中的核苷酸序列也不同，但端粒重复序列不具有染色体特异性。单一序列探针(Unique sequence probes)与某条染色体上特定的区域或基因的单拷贝DNA序列杂交。包括带特异性探针（band special probes）和基因座特异性探针（Locus Specific probes）等。全染色体涂抹探针（whole chromosome painting probes, WCP）是识别一条特定染色体全长上的单一序列探针的混合物。68、临床基因扩增检验实验室应如何设置。
由于基因扩增检验是对靶核酸的指数倍扩增过程，因而有大量的扩增产物的出现，这种扩增产物极易对以后的新扩增反应产生“污染”，为防止这种污染的发生，就需要对基因扩增检验实验室进行严格的分区。临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域，即试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区以及扩增产物分析区。如果采用全自动扩增仪，后两个区域可以合并。应注意的是，各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。进入各工作区域必须严格按单一方向进行，即试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。各区的仪器设备包括工作服、鞋子、实验记录本和笔等都必须专用，不得混淆。此外，上述四个工作区域内还应有固定于房顶的紫外灯，以便于工作后区域内的空气照射。69、如何保证临床基因扩增检验实验室的质量。
临床基因扩增检验实验室的常规测定由一系列步骤组成，包括样本收集、样本处理（核酸提取）、核酸扩增、产物检测结果报告及解释等。室内质量控制仅涉及样本处理、核酸扩增和产物分析等测定分析步骤，而室间质量评价则除了监测测定分析步骤外，还包括较大范围的实验室活动，诸如样本接收中的可靠性、结果报告及解释等。QA则是覆盖更广范围的活动，包括样本收集、结果报告和解释等。
第三篇：西医诊断学心电图部分知识点总结
1.静息电位：细胞未受刺激时存在于细胞内外的电位差，膜内底，膜外高，心横纹肌，骨骼肌相近，莫内-80—-90（mv）.2.动作电位：在静息电位的基础上，细胞受到阈电位刺激产生一个快速的去极化过程和复极化过程形成的电位变化，称为动作电位。
3.除极过程电极位置与波形的关系：已除极部分的胞外电荷为负，未除极部分为正，将电极放在未除极的高电位处，将描述出一个正向的波，放于已除极处将描述一个负向的波。
4.复极过程电极位置与波形的关系：已复极部分的胞外电荷为正，未复极部分为负，电极放于未复极的低点位处，将描述一个负向的波，放于已复极处将描述一个正向的波。
5.正常心电兴奋特点：①正常心肌除极由心内膜向外膜推进。
②中层心肌先除极后完成复极，外层心肌后除极先完成复极（好像复极过程从外层开始的一样）
由此决定了复极波（T）与除极波（R）方向的一致性。
6.心电波段的构成：①P波：代表左右心房点（激动）除极过程。②P—R间期：始于心房开始除极，终于心室除极的开始。③QRS波群：反映左右心室先后除极的过程。
④S—T段：是心室复极过程，基本上都处于平台期，内外心肌点位接近，是特殊的复极波。
⑤T波：主要是心室快速复极期先后不一致形成的点位变化。
7.心电向量的概念：①瞬时心电向量：心肌细胞在除极和复极过程中，由于前后的不同，每一瞬时相互间存在着电动势（电压），具有方向和大小，称为V，规定方向朝向正点位。（这种既具有强度又具有方向性的点位幅度称为心电向量）
②瞬时心电综合向量：心肌是立体结构，除极和复极的每一瞬时存在着许多大小、方向不同的向量相互综合成的一个总向量，称为V，其大小和方向按平行四边形法则合成。
8． 心电综合向量的大小与哪些因素有关：①与心肌细胞的数量（心肌厚度）呈正比关系；②与探查电极位置和心肌细胞之间的距离呈反比关系；③与探查电极的方位和心肌除极方向之间的角度有关，夹角越大，心电向量在导联方向上的投影越小，点位愈弱。
9.空间心电向量环：一个心动周期中循序出现的瞬时综合心电向量的顶端C点位水平连接线所构成的环形轨迹称为…
10.平面（或临床）心电向量图：将空间心电向量环投影在相互垂直的平面上即横面（H），侧面（S），额面（F）得到的三个投影图，称为…
11．六轴系统：将导联标Ⅰ、Ⅱ，Ⅲ的导联轴平行移动，与aVR、aVL、aVF的导联轴一同通过坐标轴的轴心（“O”点）构成了六轴系统（相互间角度均为30°）12.保准导联：标Ⅰ 左上肢（＋）右上肢（－）； 标Ⅱ 左下肢（＋）右上肢（－）； 标Ⅲ 左下肢（＋）左上肢（－）；
13.单极肢体导联：aVR 右上肢（＋）左上、下肢（－）；aVL 左上肢（＋）右上肢、左下肢（－）；aVF 左下肢（＋）左、右上肢（－）；
14.单极胸前导联：左右上肢与左下肢连接在一起作为负极（－），正极（＋）分别位于： V1 胸骨右缘四肋间；V2 胸骨左缘四肋间；V3 在V2与V4的连线中点；V4 左锁骨中线平第5肋间；V5 腋前线平V4水平；V6 腋中线平V4水平；
15.平面心电向量图与心电图的关系：⑴ 心电图是有关的心电向量图在相应导联上的投影。通过心电向量零电位点（即坐标轴原点“O”）作一条与心电轴垂直的线，此线将心电轴分为分为正负两侧，向量投影在正侧形成一个正向的波，投影在负侧形成一个负向的波，其波幅大小取决于投影量的大小。
⑵ 胸前导联心电图相当于横面心电向量图按时间顺序在相应导联上的投影。⑶ 肢体导联心电图相当于额面心电向量图按时间顺序在相应导联上的投影。16.正常心电图波段的形成特点、正常值及变化的临床意义：P波：起始向量指向左前下，终末向量指向左后下，最大向量指向左下后；（构成了P环，其主要向量指向左下稍偏后）
⑴ P波的方向：在标Ⅰ、标Ⅱ、aVF、V4—V6 直立；在aVL、标Ⅲ、V1—V3 可以直立、倒置或低平；在aVR中倒置。
⑵ P波的宽度（时间）：小于0.12s，双峰小于0.04。⑶ P波的振幅：肢导小于0.25mv，胸导小于0.2mv
P波异常：①当时间超过0.12s时可能左房肥大或房室传导阻滞
②P波在aVR导联直立，在标Ⅰ、标Ⅱ、aVF 倒置，称为逆行性P波，表示激动来自房室交界 ③P波高尖：肢导大于0.25mv，胸导大于0.2mv 见于右房肥大。
第四篇：中医诊断学知识点--口味的临床表现及其意义
中医诊断学知识点-口味：口淡、口甜、口黏腻、口酸、口涩、口苦、口咸的临床表现及其意义
口味异常是指病人口中的异常味觉。询问病人口味的异常变化，可诊察内在脏腑的疾病。
（一）口淡
口淡是指病人味觉减退，口中乏味，甚至无味的症状。多见于脾胃虚弱证。
（二）口甜
口甜是指病人自觉口中有甜味的症状。多见于脾胃湿热或脾虚之证。
（三）口黏腻
口黏腻是指病人自觉口中黏腻不爽的症状。常见于痰热内盛、湿热蕴脾及寒湿困脾之证。
（四）口酸
口酸是指病人自觉口中有酸味，或泛酸。多因肝胃郁热或饮食停滞所致。
（五）口涩
口涩是指病人自觉口有涩味，如食生柿子的症状。为燥热伤津，或脏腑热盛所致。
（六）口苦
口苦是指病人自觉口中有苦味的症状。多见于心火上炎或肝胆火热之证。
（七）口咸
口咸是指病人自觉口中有戒味的症状。多见于肾病或寒水上泛的病证。
例题： A.口淡 B.口苦 C.口涩 D.口甜 E.口咸
1）燥热津伤常见口味为 2）心火上炎常见口味为
1.【正确答案】 C 【答案解析】 口涩是指患者自觉口有涩味，如食生柿子的症状。为燥热伤津，或脏腑热盛所致。2.【正确答案】 B 【答案解析】 口苦是指患者自觉口中有苦味的症状。多见于肝胆火旺、湿热内蕴致胆气上逆、心火上炎。
第五篇：医学影像诊断学的复习知识点(骨关节)
1.X线的发现时间在1895年伦琴，德国物理学家2.X线的特性：.穿透性（是X 成像的基础）：X线波长短具有较高能量，物质对它吸收弱，因此具有很强的穿透本领；荧光效应（是进行透视检查的基础）：某些物质被X线照射后，能激发出可见荧光；.感光效应（是X线胶片摄影的基础）：X线和可见光一样，同样具有光化学作用，可使胶片乳剂感光能使很多物质发生光化学作用；电离效应（是进行X线检查时需要注意丰厚的的原因）：具有足够能量的X线光子能够撞击原子中的轨道电子，使之脱离原子产生一次电离。被击脱的电子仍有足够能量去电离更多的原子。
3.X线的应用：X线透视，X线摄影，特殊检查（体层摄影，软X线摄影，高电压摄影），造影检查
4.X线机的构造：X线管装置，高压发生装置，控制装置，透视用影像装置，机械辅助装置。
5.X线透视与摄片的优缺点 ：透视的主要优点是可转动患者体位，改变方向进行观察。检查费用较低。透视的主要缺点有：荧屏亮度较低，影像对比度及清晰度较差，难于观察密度与厚度差别较少的器官以及密度与厚度较大的部位。
X线摄影： 与透视的优缺点正好相反，其优点是：能使人体较厚、较薄的部位清晰地显示在X线照片上 ；病人所受的X线辐射剂量要小于透视、低于CT检查。X线摄影的缺点是：不能动态观察，检查费用高于透视。
6.CR与DR优缺点（CR是数字X线摄影DR是计算机X线摄影）
：CR优点是可与床边机配合进行诊室床边摄影；缺点是工作效率低，增加摄影成本，对影像的分辨力及清晰度提高不多。
DR优点是成像速度快，有高的空间分辨力及密度分辨力；缺点是部分产品相对较贵。7.摄片基本要求：骨盆正位片，一侧桡、尺骨正位片及同侧胫、腓骨正、侧位片；必要时加摄胸部和腰椎正位片。摄片质量要求：摄片位置准确，对比度良好，直接曝光区呈黑色，软组织是灰色，层次分明，皮质和骨小梁显示清晰。
8.儿童的骨骼特点：骨骼最初以软骨的形式出现，软骨必须经过钙化才能成为坚硬的骨骼 ：长骨骨端有骨垢，为了生长发育，一个是红骨髓含量高，处于造血活跃期
9.儿童骨折包括：靑枝骨折，肱骨髁上骨折。
10.骨折：指骨的完整性和连续性中断。骨质疏松 ：骨组织的有机成分和钙盐均减少，而比例仍正常。
11.骨折愈合的标志：以骨痂多少及骨折线是否清晰为标准，如果骨折线模糊，有骨痂生长了就开始愈合了。
12.脊椎骨折的特点： 脊椎骨折不需要较大外力作用即可发生，60～70岁患者发病率最高，可发生在一个或多个椎体，主要发生在胸腰椎。脊椎骨折X线表现为椎体水平骨小梁减少，椎体前缘皮质厚度减低，终板厚度改变，呈双凹形或楔形改变。主要临床表现为腰背疼，包括腰背及四肢关节酸痛、乏力等
13.关节脱位包括：肩关节脱位，肘关节脱位，髋关节脱位。
15.良恶性骨肿瘤的鉴别：
（1）生长情况 ： 良性是生长缓慢，不侵及邻近组织，但可引起压迫移位；无转移 ；恶性是生长迅速，易侵及邻近组织、器官可有转移。
（2）局部骨质变化 :良性是呈膨胀性骨质破坏，与正常骨界限清晰，边缘锐利，骨皮质变薄，膨胀，保持其连续性 ；恶性是呈侵润性骨破坏，病变区与正常骨界限模糊，边缘不整。
（3）骨膜增生 :良性是一般无骨膜增生，病理骨折后可有少量骨膜增生，骨膜新生骨不被破坏；恶性是可出现不同形式的骨膜增生且多不成熟，并可被肿瘤侵犯破坏。
（4）周围软组织变化 ：良性是多无肿胀或肿块影，如有肿块，其边缘清楚；恶性是长入软组织形成肿快，与周围组织分界不清。
16.转移性骨肿瘤：主要通过血液途径转移。
(1)成骨型 X线表现：病变为高密度影，居骨松质内，呈斑片状或结节状，密度均匀一致，骨皮质多完整，多发生在腰椎与骨盆。常多发，境界不清。椎体不压缩、变扁。
(2)溶骨型X线表现：
骨松质中多发或单发小的虫蚀状骨质破坏。病变发展，破坏融合扩大，形成大片溶骨性骨质破坏区，骨皮质也被破坏，但一般无骨膜增生。
17.类风湿性关节炎发病特点：类风湿性关节炎可累及全身任何能活动的关节以四肢关节尤以双手和双足小关节为主最常受累的是近端指间或趾间关节和掌指或庶趾关节其次腕、肘、膝、肩、踝、胸锁、髋、寰枢椎关节也可被累及。此外额颌关节、环构关节及其他颈椎偶可受累。18.强直性脊柱炎的典型表现：骶髋关节的改变，脊柱的改变，周围关节的改变
19.退行性变与骨质增生的区别：骨质增生是退行性改变的表现之一。骨质增生：指一定单位体积内，骨质数量增多，变致密的现象而言。是骨的基本影像学表现。
退行性改变：是软骨退变，损伤。刺激软骨及其下骨内血管增殖，而导致骨皮质面和软骨下骨硬化及骨刺形成。
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