流感病毒采集规范

第一篇：流感病毒采集规范

附件5：流感监测实验技术操作规范

一、流感监测临床标本的采集、运送、处理及流感病毒株的运输

（一）、流感临床标本的采集

病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节。多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织。标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。

采样液常用的采样液有以下五种：普通肉汤、pH7.4～7.6的Hank's、Eagle's、水解乳蛋白液或不加抗菌素的生理盐水（漱喉液）。为防止采样液生长细菌和真菌，在采样液中需加入抗菌素，加入庆大霉素，其终浓度为0.1mg/ml,和抗真菌药物，其终浓度为2mg/ml。加入抗菌素以后重新调节pH值为7.4，配制好以后，分装每个采样管4ml,-20℃冻存。采样方法有以下几种：

1)鼻拭子：将带有聚丙烯纤维头的拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以另一拭子拭另侧鼻孔。将拭子头浸入采样液中，尾部弃去。

2)咽拭子：用带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将拭子头浸入采样液中，尾部弃去。注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。

3)鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次。4)漱口液：用10 ml生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集洗液

5)鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔。

（二）、临床标本运送

新鲜的临床采集标本应在4℃条件下24小时内运送至全国流感监测网络实验室。未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存。标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4℃保存，如未能接种应置-70℃或以下保存。

冻存的临床采集标本应在冻存的条件下，低温送至实验室。冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。如未能分离的标本应置-70℃或以下保存。

临床标本采集管建议使用带螺口的塑料管。

（三）、临床标本处理

临床采集标本送至实验室后，须经处理后再进行病毒的分离接种。含聚丙烯纤维的拭子的采集标本，先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出。鼻腔或咽部洗液的标本，充分振荡标本管，将粘液打碎。置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存。

鼻咽漱液或抽取液：用干净灭菌过的毛细吸管，在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同样置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存。

注：如采样液中尚未加抗菌素，应在接种前补加，用量同上前，混匀后置4℃ 过夜或室温作用数小时后可接种。

临床标本处理后，将原始标本分为三份，一份（40％）用于鸡胚接种，一份（30％）用于MDCK细胞接种，一份（30％）保存待复核用。对于病毒分离阳性的标本－70℃保存6个月，在收到国家流感中心复核鉴定报告后，按照生物安全有关规定处理；病毒分离阴性的标本随时按生物安全的有关规定处理。

（四）、血清标本的采集与处理

血清标本多用于流感暴发时的血清学核实诊断及人禽流感待查病例的诊断。血清标本采集应该包括急性期和恢复期双份血清。急性期血样应尽早采集，可在采集病毒分离标本时同时采集，但不能晚于发病后7天。恢复期血样则在发病后2～4周采集。一般采集空腹血。单份血清不能用作诊断。

取一根至少能装3 ml以上，干净和灭过菌的血清管做好标记，并进行登记，登记的内容包括：医院名称，患者姓名，性别，急性期（Acute，A）或是恢复期（Convalescence，C），采样日期（年，月，日）。

1． 从患者手臂静脉采2 ml血，放入准备好的上述血清管中。2． 然后置室温数小时待血完全凝固。

3． 1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于1.5 ml 无菌管中，做好标记。

4． 血清可置4℃存放一周，存放超过一周需置-20℃或以下保存。

（五）、流感病毒株的运输

需送国家流感中心实验室检测的病毒分离物，填写“流感/人禽流感毒株送检单”，在冻存后，在低温条件下，送至中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流感中心进行复核，运输时遵守国家生物安全的有关规定。

1．流感毒株的送检要求

（1）自国家级流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的全部毒株。

（2）自其它流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的流感病毒，单向血凝抑制效价与国家流感中心提供的标准参照血清相比，有4倍或4倍以上差异的毒株。

（3）自其它流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的流感病毒，HA<8,且网络实验室不具备RT-PCR鉴定能力。

（4）暴发时采样分离到的所有流感毒株。

（5）HA阳性，用国家流感中心提供的标准参照血清进行HI试验，4种血清的HI效价均≤20的毒株。

（6）所送检的毒株要求每份3ml，并且无细菌污染。（7）全国流感监测网络实验室直接将毒株送至国家流感中心，填写“流感/人禽流感毒株送检单”。监测网络实验室中的市级实验室送检毒株时，应同时送省级疾控中心实验室备份。

（8）送检毒株在HI试验完成后，每两周送至国家流感中心。（9）HA阳性，用国家流感中心提供的标准参照血清进行HI试验，4种血清的HI效价均≤20的毒株，应在HI试验完成后24小时内送至国家流感中心。

2．寄送流感中心的流感毒株标本的包装、运输

（1）病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本。

（2）将密闭后的病毒标本放入大小适合的塑料袋内密封。（3）直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里。

（4）将装标本的密封袋放入专用运输箱内（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料。

（5）标本运输：异地运输可以采用邮寄或快递的方法 国家流感中心联系方式为：

中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心 地址：北京市宣武区迎新街100号 联系电话： 010－63580764 传真： 010－635580764

（六）、标本的接收 送检的标本（毒株）送到实验室后，由专人在生物安全柜内打开标本的包装。记录收到日期、送检实验室名称、核对并记录送检标本（毒株）标编号是否与送检单相同。收到的毒株后，国家流感中心给送检单位及时反馈。

附件3.人猪流感（H1N1）病例标本采集和实验室检测指南

（暂行）

猪流行性感冒（H1N1病毒）病毒的检测

所有猪流行性感冒（H1N1病毒）疑似病例应该采集上呼吸道标本来检测猪流行性感冒（H1N1病毒）的病毒。

推荐采集的呼吸道标本：

疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔冲洗液/吸取物。如果不能收集这些标本，可合并鼻拭子与口咽拭子。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒运输液（VTM），并立即用冰块或冰排保存或置于4 ℃（冰箱），并马上运送至实验室。临床样品收集人员及实验室人员的感染控制指导请见相关文件。

拭子

理想的情况下，标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做杆。不推荐棉拭子和木杆。不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。标本采集管应包含3毫升病毒运输液（例如，含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）。

临床标本储存

所有呼吸道标本应保存在4℃，并尽快放置在-70℃。如果没有-70℃度冰箱，标本应保存在4℃，但不应超过4天。

临床标本运输

临床标本应按照A类包装要求运送，并用干冰运输。

所有标本应标示清楚。疑似病例标本运送应包含的信息请参照禽流感标本运输。

检测程序

呼吸道标本应首先应用real time RT-PCR方法检测A型流感病毒的M基因、Swine（H1N1）的HA基因和NP基因，以及质控对照RNP基因。同时，接种MDCK细胞或SPF鸡胚进行病毒分离，并测定病毒的全基因组序列。

推荐的检测方法

用Real-time RT-PCR方法检测猪流行性感冒（H1N1病毒）病毒。

其他检测方法 快速流感抗原检测

一些商用快速检测可以区分A和B型流感病毒。快速检测实验A型流感阳性的病例符合可能病例的标准（见上文）。这些实验对检测人感染猪流行性感冒（H1N1病毒）病毒临床标本的敏感性和特异性未知，而且检测季节性流感病毒的灵敏度不佳。因此，快速检测阴性结果可能是假阴性，不能作为猪流感感染的最后诊断。

免疫荧光法（或装配的IFA）

免疫荧光试验可以区分A和B型流感病毒。检测A型流感阳性的病例符合可能病例的标准（见上文）。免疫荧光试验的结果取决于临床标本的质量，操作技能，对检测人感染猪流行性感冒（H1N1病毒）病毒临床标本的敏感性和特异性未知。因此，免疫荧光试验阴性结果可能是假阴性，不能作为猪流感感染的最后诊断。病毒培养

可用MDCK细胞和SPF鸡胚分离猪流感（H1N1病毒）病毒可以诊断感染，但无法为临床诊断及时提供结果。病毒分离阴性并不能排除感染猪流感（H1N1病毒）病毒。

第二篇：细菌标本采集规范

临床微生物学标本采取和处理的规范化要求

正确的采取、处理与运送用于细菌培养的标本是临床细菌检验成功的关键。标本采取与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础；而标本采取与处理不当将严重影响检验结果，给临床以误导，延误对患者的正确治疗。为此，我们提出初步的参考意见，并希望在实践中不断完善。

一、血液细菌培养标本的采集和处理

临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者，需做血液细菌培养以明确病原。

1.采血时机：在患者发热期间越早越好，最好在抗菌治疗前，以正在发冷发热时或发冷发热前半小时为宜。

2.采血次数及间隔：在急性发热性疾病如脑膜炎、细菌性肺炎，需马上做抗菌治疗；或急性骨髓炎、化脓性关节炎等要紧急手术的患者，应立即从两臂分别取2份标本。对感染性心内膜炎患者，建议在24h内取血3次，每次间隔不少于30 min；必要时次日再做血培养2次。对发热原因不明者两次抽血间隔60 min；必要时于24～48h后再抽血2次。因为1次血培养不足以说明问题，可能会遗漏阳性结果。

3.采血部位：多次采血应在不同部位的血管穿刺以排除皮肤菌丛污染的可能。要避免从血管插管内取血，因插管常被污染，其培养结果不能反映真实情况。在不同部位取血，2次分离出同样菌种才是确定病原菌的有力证据。

4.采血量：采血量与血培养的检出率相关，所以采血量一定要足够。成人一般为10ml，新生儿与婴幼儿为1～2 ml。

二、下呼吸道分泌物(痰培养)的标本采取和处理

下呼吸道分泌物(痰)的细菌学检查对病原学诊断起着重要作用，但痰标本的质量往往难以保证，造成病原学诊断和实际引起感染的病原菌脱节，直接影响抗菌药物的应用、甚至耐药菌的出现或流行。痰标本的细菌学检验地带网检查应注意如下几个问题。

1.标本的采取：自然咳痰：要求患者清晨留取，留取标本前用清水漱口3次，之后用力咳出。咳痰较困难者可用雾化蒸气吸入以利痰液咳出。幼儿可用手指轻叩胸骨柄上方以诱发咳痰。

2.气管穿刺法：仅用于昏迷患者，由临床医师 进行操作。

3.纤维支气管镜抽吸：通常用于在给患者行纤维支气管镜检查时顺便抽取。

4.胃液抽取法：多用于可疑患有肺结核的患者在有可能将痰液咽下的情况时采用。

5.标本的运送：标本采集后应立即送检，以避免杂菌过度生长。

三、尿液细菌培养标本的采集和处理

尿液的细菌培养检查对于膀胱和肾脏感染的及早发现和病原学诊断很有价值。对于尿道、前列腺以及内、外生殖器炎症的诊断也有一定价值。

1.标本收集时间：需在应用抗菌药物之前或停用抗菌药5 d之后留取尿液标本；尿液在膀胱内应停留6～8h以上，使细菌有足够时间繁殖。

2.标本收集方法：

(1)清洁排尿法：女患者以手指将阴唇分开，用肥皂水或碘伏清洗外阴，然后以清水冲洗尿道口周围，擦干并排出前段尿液后，用无菌容器接取中段尿；男患者应翻转包皮冲洗，用碘伏消毒尿道口；婴儿消毒其阴部后，将无菌小瓶直接对准尿道口排尿后立即送检。

(2)膀胱穿刺法：为避免尿道正常菌群的污染，收集尿液最好的方法是膀胱穿刺。尤其做厌氧菌检查时必须采用膀胱穿刺法。穿刺时膀胱应充盈，皮肤严格消毒后用装有19或20号针头的注射器在耻检验地带网骨联合距脐1/3处穿刺。膀胱穿刺的适应症有：①有尿道感染的临床症状，但中段尿培养细菌数很低，而又难以确定感染源者。②婴幼儿、新生儿、不能用导管者。③怀疑有厌氧菌感染时。

(3)肾盂尿采集法：若取左右两侧肾盂尿，应请泌尿科医生采取，左右侧的标本要标记明确，以免出现错误。

(4)对用封闭式引流装置的留置导尿患者留取尿液标本培养时，用适当的消毒剂严格消毒引流管和导尿管连接处的管壁，用装有21号针头的注射器穿刺导尿管壁吸取尿液。不可打开导尿管和引流管连接处收集标本，培养用的尿液标本也不能从引流袋中留取。(5)膀胱镜检查、输尿管插管或逆行肾盂造影时，收集的尿液可用来做细菌培养。

(6)做病毒学检测时用容器收集清洁的标本即可，不需特殊方法收集。标本中加入抗生素可抑制细菌的过度生长，且标本需冷藏。

2.标本的运送和保存：用无菌带螺帽的容器盛标本，标本应在1 h之内送检，超过2 h者应重送，否则易致假阳性结果。

四、粪便标本微生物学检查的质量要求

1.标本采集：粪便标本应在发病早期并且尽量在用抗生素治疗前采集，直接用棉拭子，也可用直肠拭子，置小瓶中送检。

2.显微镜检查：粪便直接涂片革兰染色，可作为艰难梭菌、弧菌、弯曲菌、葡萄球菌、白色念珠菌等初步筛查，盐水滴片用作肠道寄生虫检查。

3.标本保存和运送：标本置密封好的小瓶中，记录姓名、日期、标本号、及时送检，一般不长于2小时。

五、生殖道标本的采集和处理 1.男性标本：

(1)如疑为急性淋病奈瑟菌或其他化脓性细菌感染应在清洗龟头部后，以碘伏或其他非粘膜刺激性消毒剂消毒后，挤出分泌物立即以无菌棉拭子采取，立即送检，或以专用的细拭子插入尿道口1～2cm，旋转采取。

(2)如疑为前列腺炎、精囊炎或慢性淋病奈瑟菌感染应由医师按摩前列腺，以无菌手续自尿道口采取前列腺液送检。

2.女性标本：

(1)成年妇女自宫颈采取标本，应在扩阴器的支持下，选取有炎症或分泌物部位，先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物，再用另一拭子取分泌物送检。如做厌氧或真菌培养应另外采取标本。

(2)如未成年幼女疑患性传播疾病时，不应使用扩阴器，应以无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检。

六、胸腹水、脑脊液标本的采集

均由医师以无菌手续穿刺取得，必须应用带盖的无菌容器，立即送检。

七、对不合格标本的处理

微生物室对于下列标本收集不符合规定的标本将予拒收，并通知临床，按标本要求复送：

1.申请单项目与标本不符。

2.申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。3.标本已有明显的污染迹象(如开塞)。

4.标本量过少或已明显干燥。

第三篇：甲型H1N1流感病毒实验活动管理工作规范

甲型H1N1流感病毒实验活动管理工作规范

为做好我省甲型H1N1流感防控工作，确保我省甲型H1N1流感病毒实验室检测质量与生物安全，特制定本规范。本规范是从事甲型H1N1流感检测实验室的最低要求，是对申请开展甲型H1N1病毒实验活动的实验室进行审批的技术依据。

一、工作原则

㈠甲型H1N1流感病毒的生物学特性和变异趋势尚不完全明确，且传染性较强，甲型H1N1流感病毒目前暂时按照病原微生物危害程度分类中的二类进行管理。必要时，将依据甲型H1N1流感疫情的发展和病毒毒力变异情况，以及动态风险评估结果，适时调整其危害分类等级。

㈡从事甲型H1N1流感检测实验室必须经过省卫生厅组织的生物安全论证，合格后方可开展甲型H1N1流感病毒检测工作。

㈢从事甲型H1N1流感检测实验室所在单位要加强实验室生物安全组织领导，建立健全实验室生物安全管理体系，明确生物安全管理责任。

㈣未经培养的临床样本检测在生物安全二级实验室进行。㈤需要开展甲型H1N1流感病毒分离工作的单位，必须在带负压的生物安全二级以上实验室进行，通过省卫生厅组织的生物安全论证后方可开展。

㈥临床检测样本检测结果为甲型H1N1阳性的，实验室要按照有关规定，及时通知患者就诊医院，由患者就诊医院进行疫情报告。其阳性样本及时送当地疾病预防控制中心国家级流感监测网络实验室进行病原分离工作。

二、管理制度

㈠根据各实验室具体情况和特点，建立甲型H1N1流感病毒实验室生物安全风险评估制度。

㈡建立并健全甲型H1N1流感病毒相关的体系文件，包括程序文件、标准操作程序（SOP）和记录等文件。

㈢建立并健全甲型H1N1流感病毒及样本使用审批制度。㈣建立并健全甲型H1N1流感实验室意外事故的应急处理预案。㈤实验室所在的机构应设立生物安全委员会，负责咨询、指导、评估、监督实验室的生物安全相关事宜。实验室负责人必须是所在机构生物安全委员会成员。

㈥建立并健全严格的实验室准入制度，实验室入口处应标明所从事的生物因子、负责人和紧急联系电话。

㈦实验室指定专人负责工作人员的健康及感染监测工作，开展工作人员岗前及定期健康体检、保留本底血清并要求进行预防接种，建立个人健康档案。

㈧建立实验室设施、设备的定期维护制度，并设专人负责管理。㈨建立正确的生物安全标示使用制度。㈩建立严格的毒种及样本的保存和销毁制度。

（十一）建立严格的实验室废物处理管理制度。

三、人员要求

㈠实验室应具有确保工作正常运行的相应数量的管理、技术、安保、设施维护等工作人员。

㈡工作人员应具有较强的责任心，健康状况良好，接受必要的健康监测。

㈢从事甲型H1N1流感病毒实验室活动人员须经实验室生物安全管理和专业知识培训，培训合格后，持证上岗。工作人员须具备全面的实验室生物安全管理知识和流感专业知识，具备一定流感病毒实验工作经验，熟悉流感实验活动的各项制度和流程。

㈣工作人员应经过严格审批和登记后方可进入实验室。当实验活动进行时，要限制该实验室工作人员的出入。

㈤实验室管理层应按工作的复杂程度定期评价员工的表现，至少每12个月一次。

㈥实验室工作人员必须在身体状况良好的情况下，才能进入实验室进行工作。出现下列情况，不应进入上述区域。

1、身体出现开放性损伤；

2、患发热性疾病；

3、感冒、上呼吸道感染或其他导致抵抗力下降的情况；

4、妊娠期间；

5、已经在实验室连续工作4小时以上或其他原因造成的疲劳状态。6、16岁以下儿童不应被授权进入实验室工作区。

四、甲型H1N1流感实验室布局及操作

㈠疑似或确诊甲型H1N1流感病例的未经培养的感染性材料的操作实验室布局

1、实验室入口处应标明所从事的生物因子、负责人、紧急联系电话。

2、实验室主入口的门、放置生物安全柜实验室的门应可自动关闭。

3、大量的备用物品应存储在实验室工作区域外。

4、实验室工作区域外应具备存放个人衣物的条件。

5、至少应在实验室工作区配备简易洗眼装置。

6、实验室所在的建筑内应配备高压蒸汽灭菌器或其它适当的消毒设备。

7、实验室工作区应配备生物安全柜。

8、生物安全柜的排风应通过独立于建筑物公共通风系统的管道排出。

9、在风险评估和确保 HEPA 功能正常的基础上，生物安全柜的排风可以在室内循环；但实验室应具备通风换气的条件。

10、有可靠的电力供应和应急照明。㈡核酸检测操作

1、除满足四㈠所要求的条件外，从事甲型H1N1流感RT-PCR核酸检测应具有四个独立物理分区，分别为试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区，每个区均具有独立的缓冲间，并保证风向从外到内的定向气流。

2、从事Real-Time RT-PCR核酸检测应具有三个独立物理分区，分别为试剂准备区、标本制备区和扩增、产物分析区，每个区均具有独立的缓冲间，并保证风向从缓冲间往试验区定向气流。㈢甲型H1N1流感病毒分离培养的操作

甲型H1N1流感病毒分离培养的操作除满足四㈠所要求的条件外，实验室应有可控的通风系统，确保实验室由外向内的定向气流。实验室排风不可再循环至建筑物其他区域。当实验室内的气体要排放到室外时，必须能快速从排气管道及所在建筑物派出，气体可通过HEPA过滤排放。

㈣实验室生物安全

1、工作人员应穿戴个人防护设备，包括一次性手套、反穿衣、隔离衣、连体衣、帽子、鞋套或专用鞋子，眼部保护装备。其中工作人员须佩戴生物防护型N95（1860）口罩，应经过培训且每个人须通过密合度测试。

2、对标本进行核酸检测时，标本接收分装、核酸操作、PCR反应体系配制、电泳操作应当在不同房间进行。不同房间的移液器和枪头不应混用，标本分装和PCR反应体系配制的区域不应接触到核酸，并有单独的实验防护用品。

3、所有感染性或潜在感染性材料的操作应在年检合格的生物安全柜中进行。

4、应使用带有密封离心杯或转子的离心机，并且在生物安全柜中打开离心杯或转子。

五、甲型H1N1流感实验室仪器设备配置

1、核酸检测

甲型H1N1流感实验室须配置以下仪器才能开展甲型H1N1流感核酸检测工作：Ⅱ级生物安全柜、PCR仪、Real-time PCR仪、台式高速低温离心机、凝胶成像仪、混匀器、高压锅、电泳仪及-30℃冰箱各一台，同时需配置不同刻度的100～1000l、20～200l和2～20l移液器各二。如果只进行Real-time PCR检测，可不需要PCR仪、凝胶成像仪、电泳仪。

2、病毒培养

甲型H1N1流感实验室须配置以下仪器才能开展甲型H1N1流感病毒分离工作：Ⅱ级生物安全柜、CO2培养箱、－70℃冰箱、离心机（高速）、倒置显微镜、高压锅和普通冰箱各一台，同时需配置不同刻度的100～1000l、20～200l和2～20l移液器各两个。

六、消毒及废物处理

㈠储备有效灭活甲型H1N1流感病毒消毒剂，如含氯消毒剂、酒精、过氧化物、四价的氨化合物。

㈡确保使用合格的消毒剂。

㈢实验室产生的废物应按照《医疗废物管理条例》、《医疗卫生机构医疗废物管理办法》的规定进行处理。

七、运输

严格按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》的要求，开展甲型H1N1流感病毒及样本运输工作。

㈠甲型H1N1流感样本可按照B类感染性物质

（UN3733）包装运输；甲型H1N1流感病毒培养物须按照A类感染性物质（UN2814）包装运输。㈡标本运输须通过省卫生厅批准并备案。

㈢实验室应储备充足的符合上述要求的包装材料。㈣运输工作人员须经过相关生物安全知识培训。

㈤陆路运输应有专车，护送人员不少于两人，同时应具备有必要的个人防护装备及消毒用品。

第四篇：临床检验标本采集规范

临床检验标本采集规范

一

血常规检验标本 用EDTA-2K（EDTA-K22H2O）1.5~2.2mg/ml抗凝（EDTA抗凝管、紫色帽）采血。

.2 注意事项：

A 按抗凝管刻度准确采血至2ml。

B 采血后立即上下颠倒混匀5~10次，不可用强力震荡，以免造成溶血。C 采血后尽快送检（为保证结果准确，必须在2h内完成检测）。

二

红细胞沉降率（血沉、ESR）检验标本 静脉采集枸橼酸钠（109mmol/L，即32.06g/L）抗凝血（枸橼酸钠抗凝管、黑色帽）。2 注意事项：

A 单独采1管血，按抗凝管刻度准确采血至2ml（抗凝剂:全血=0.4:1.6）。B 采血后立即上下颠倒混匀5~10次，不可用强力震荡。C 采血后尽快送检（为保证结果准确，必须在2h内完成检测）。

三

凝血检测（PT、APTT、Fbg、TT、D2-聚体）标本 静脉采集枸橼酸钠（109mmol/L，即32.06g/L；抗凝剂:全血=0.2:1.8）抗凝血（枸橼酸钠抗凝管、蓝色帽）。注意事项：

A 单独采1管血，按抗凝管刻度准确采血至2ml。B 采血后立即上下颠倒混匀5~10次，不可有凝块。

C 采血后尽快送检（为保证结果准确，必须在2h内完成检测）。D 空腹采血（餐后脂血会影响检验结果）。

四

血型与交叉配合标本 用EDTA-2K（EDTA-K22H2O）1.5~2.2mg/ml抗凝（EDTA抗凝管、蓝色帽）采血。

.2 注意事项：

A 按抗凝管刻度采血至2~3ml。最好单独采血，便于标本保存。B 采血后立即上下颠倒混匀5~10次，不可用强力震荡，以免造成溶血。

五 血流变检查标本 用肝素钠抗凝管（肝素钠、绿色帽）2 注意事项：

A 按抗凝管刻度采血至4~5ml。

B 采血后立即上下颠倒混匀5~10次，不可用强力震荡，以免造成溶血。

六

尿液常规检查标本 住院病人尽量留取晨尿（安静状态下留取清晨第一次尿）。2 门急诊病人可留取随机尿，但结果受多种因素影响。尿液采集于洁净尿杯中，不可使用其它未经洗涤的器皿如药瓶、试剂瓶等。标本留取后尽快送检（为保证结果准确，必须在2h内完成检测）。

七

尿液特殊检查标本 尿液成分定量检查应根据检查目的选择并在检验科领取防腐剂。

A 尿爱迪氏计数或3h计数：甲醛（40%），5ml/L尿液；3h和12h尿沉渣计数的留尿时间分别为（5：30-8：30）和（20：00-次日8：00）。B 尿蛋白或尿糖定量：甲苯，5~20ml/L尿液。

C 尿17-羟、17-酮、肾上腺素、儿茶酚胺和尿钙等：浓盐酸，10ml/L尿液。2 尿稀释浓缩试验：试验日正常进餐，上午8点排尿弃去，没隔2h留尿一次，至晚上8点共六次标本；晚8点至次晨8点为夜尿，收集于一个容器中，分别标记时间后送检。

八

粪便常规检查标本 一般应为新鲜的自然排出的粪便3~5g，必要时可肛试子取出，但需注明。2 样品置于洁净容器中，最好用带盖塑料盒。

3粪便应选取含脓、血、粘液等异常成分进行检查。做隐血试验时，应嘱病人检查前3天禁食肉类、含动物血的食物。

九

浆膜腔积液检查标本 标本一般由临床医师无菌穿刺采取。送检标本量：常规检查、生化检查、细胞学检查各留取2ml；细菌学检查用无菌管采集标本，结核菌检查留取10ml。标本采集后必须立即送检，否则可因标本凝固、细胞变性等导致标本无法检测或结果不准确。用于细胞学检查时，可在标本中加适量EDTA抗凝，但还需留1管不加抗凝剂的标本用于观察积液的凝固性。

十临床化学检验标本 一般生化检查（肝功、肾功、血脂、血糖、免疫、电解质、心肌酶等）留取不抗凝血（红色帽、真空负压管），采血量视检查项目多少而定，一般为4~5ml。2 糖化血红蛋白需用EDTA抗凝管，操作规程同血常规标本。3 血钾检测标本须立即送检，2h内完成检测。4 空腹采血。如为餐后标本，应在申请单上注明。

十一

临床免疫检验及化学发光检验标本 一般免疫学检验（乙肝病毒、丙肝病毒、HIV、梅毒螺旋体、结核、自身免疫病等）和化学发光检验（各种激素、肿瘤标志物等）留取不抗凝血（红色帽、真空负压管），采血量视检查项目多少而定，一般为4~5ml。2 严格按生物安全有关规定采血。空腹采血。如为餐后标本，应在申请单上注明。

十二

微生物学检验标本 标本采集、运送、验收和处理注意事项 ① 标本采集

A 申请单标记必须清楚（姓名、性别、年龄、临床诊断、标本来源、采集时间、检查项目、抗生素应用情况等），以便实验室合理选用培养基。B 尽量在抗生素应用前采集标本。C 标本采集应严格执行无菌操作。

D 采集标本的容器必须经灭菌处理或使用一次性无菌专用容器。

② 标本运送

A 标本采集后尽快送微生物室。

B 标本采集后在室温下超过2h未送达实验室，视为不合格标本。③ 标本验收

A 实验室只能接受和处理合格标本。

B 实验室对不合格标本退回时，须注明原因，并及时与临床联系。2 微生物检验标本采集和处理

① 尿液标本采集和处理：通常留取晨起第一次尿液，及时送检，并保证2h内接种；不能及时送检时，标本应置冰箱保存，并于8h内送检。怀疑沙门氏菌感染时，应于发病2周左右采集标本；怀疑钩端螺旋体感染时，应于发病后2周左右采集标本。常用的标本采集方法如下：

A 中段尿采集法：成年男性和女性分别用肥皂水清洗尿道口和外阴部，再用灭菌水

冲洗尿道口，然后排尿弃去前段尿液，于带盖的无菌试管中留取中段尿液5~10ml。B 导尿法：用导尿管导取5~10ml尿液于无菌试管中；长期留置导尿管者应更换导尿 管留尿；留置导尿时，用无菌消毒法消毒导尿管外部及导尿管口，用无菌注射器通过导尿管抽取尿液送检，不可采集尿液收集袋中的尿液送检。

C 其它方法：膀胱穿刺或肾盂尿采集法须由临床医师采集。

② 粪便标本采集和处理

A 采集时间：腹泻患者处于急性期，尽量在用药前采集粪便；怀疑伤寒患者在发病两周以后采集粪便；怀疑霍乱时应立即采集粪便送检。

B 采集方法：一般患者，取新鲜粪便的黏液、脓血或絮状物等有意义成分2~3g或1~3ml，盛无菌容器内送检；难以获得粪便或排便困难的患者和婴幼儿，可用直肠试子采集标本，再插入灭菌试管中送检。③ 痰及下呼吸道标本采集和处理

A 自然咳痰法：晨痰为佳；先嗽口，清洁牙齿和口腔；再用力咳出呼吸道深部的痰；痰量不得少于1ml；咳痰困难者可先做雾化处理。

B 小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将试子深入咽部，小儿因压舌板刺激引起咳嗽，喷出的肺或气管分泌物粘在试子上送检。

C 支气管镜、支气管穿刺、支气管肺泡灌洗等采集法：由临床医师实施。④ 血液及骨髓培养标本

A 抗生素治疗前，严格无菌静脉采血8~10ml（儿童1~4ml）；骨髓1~2ml。B 无菌注入专用培养瓶中送检。

C 如已用抗生素不能停用时，可在48h内分别于下次抗生素使用前，多次采集血液标本送检。

D 疑为心内膜炎时，为提高阳性检出率，可酌情不同部位、不同时间多次采血送检。⑤ 脑脊液培养标本

A 怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，最好在抗生素使用前采集。B 无菌腰穿采集脑脊液1~2ml，立即送检。⑥ 穿刺液培养标本

A 包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。B 在抗生素使用前采集或在停用抗生素2~3天后采集。C 无菌穿刺采集，标本量不少于1ml。

D 为防标本凝固，可在无菌盛器中加入适量灭菌肝素。⑦ 胃液及胆汁培养

A 采集方法：抽取空腹胃液5ml，置无菌管内送检；胆汁培养标本由十二指肠引流法或胆囊穿刺法或手术中留取胆汁5ml，置无菌管内送检。B 标本采集后必须立即送检。⑧ 脓汁和病灶分泌物培养

A 标本采集前，先对病灶周围消毒，然后用无菌方法采取脓汁或病灶分泌物或组织。B 标本采集后立即置无菌管内送检。⑨ 眼、耳、鼻、咽试子分泌物培养标本 A 用无菌试子常规采集标本。

B 标本采集过程中应注意避免被粘膜上的正常菌群污染。C 标本采集后连同试子一起置无菌管内送检。⑩ 泌尿生殖道培养标本

A 尿道分泌物：清洗尿道后采取尿道溢出的脓性分泌物，或用无菌试子插入尿道2~4cm处轻轻转动后取出，置无菌试管中立即送检。

B 阴道、宫颈分泌物：通过阴道扩张器，用灭菌试子采取阴道口或宫颈管1~2cm处分泌物，置无菌试管中送检。

C 前列腺液：清洗尿道、冲洗膀胱后用前列腺按摩法采集前列腺液于无菌试管中，立即送检。

D 精液：受检者应5天以上未派精，清洗尿道后用手淫或体外排精法，射精于无菌试管中立即送检。

E 溃疡分泌物：灭菌生理盐水清洗患处，用无菌试子取其边缘或基底部的分泌物，置无菌试管中立即送检。⑾

烧伤感染培养标本

烧伤12h后用无菌棉试子采集标本；要注意从多个创面取样；烧伤严重感染时易发生败血症，创面取样的同时应采集血样送做血培养。

⑿

真菌感染培养标本

A 浅部真菌感染标本采集：皮癣者常规消毒皮肤，从皮损边缘刮取鳞屑，置无菌平皿中送检；皮肤溃疡则采集皮损周围脓汁或组织；毛发则采集其根部折断处，至少5~6根送检；指（趾）甲：消毒指（趾）甲并去掉其表面部分，取可疑病变部分，用刀片修成小薄片5~6片，置无菌容器中送检。B 深部真菌感染标本采集：

血液：无菌采血8~10ml，注入血培养瓶中，立即送检；如不能立刻送检时血培养瓶应放室温，但不可超过8h。

脑脊液：采样量不少于3ml，分别注入两支无菌试管中送检（一支做真菌培养和墨汁染色，一支做普通培养）。

呼吸道及泌尿生殖道标本：采集方法同普通培养。⒀

厌氧菌感染培养标本

A 标本采集：严格执行无菌操作，避免标本污染和与空气接触；用注射器抽取胸水、腹水、心包液、关节液、胆汁、脑脊液或无菌手术抽取脓液；抽出液体标本后，要尽快排除注射器内的空气。

B 标本运送：标本采集后不得冰箱储存，必须尽快（半小时内）送检；标本运送可采用注射器（已驱氧）或含运送培养基的无氧小瓶或厌氧罐。

第五篇：细菌标本采集规范

临床微生物学标本采取和处理的规范化要求

正确的采取、处理与运送用于细菌培养的标本是临床细菌检验成功的关键。标本采取与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础；而标本采取与处理不当将严重影响检验结果，给临床以误导，延误对患者的正确治疗。为此，我们提出初步的参考意见，并希望在实践中不断完善。

一、血液细菌培养标本的采集和处理

临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者，需做血液细菌培养以明确病原。

1．采集方法：静脉采血，以无菌操作方法抽取血液后，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。如果同时作需氧和厌氧培养，应先将标本接种到厌氧瓶中，再注入需氧瓶，严格防止将空气注入厌氧瓶中。

2.采血时间以及血培养份数：在患者发热期间越早越好，最好在抗菌治疗前，用药前24小时内采集2～3次血液标本，可使细菌检出率高达99%。对间歇性寒战或发热的患者，应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1小时采血，亦可在寒战或发热后1小时采集血液标本。特殊感染患者采血培养时应遵循以下原则：（1）可疑急性发热性菌血症、败血症患者：应在使用抗菌药物之前，在24小时内从不同部位采集2～3份血液标本培养。

（2）可疑细菌性心内膜炎患者、感染性心内膜炎患者：在1～2小时内采集3份血标本培养，如果24小时后阴性，再采集两份血标本培养。

（3）不明原因发热患者：先采集2～3份血标本，抽血间隔60 min，24～36小时后体温升高之前，再采集2份血标本进行培养。因为1次血培养不足以说明问题，可能会遗漏阳性结果。

（4）可疑菌血症但血培养持续阴性时；应改变血培养方法，以获得罕见或苛养的微生物。

（5）在急性发热性疾病如脑膜炎、细菌性肺炎，需马上做抗菌治疗；或急性骨髓炎、化脓性关节炎等要紧急手术的患者，应立即从两臂分别取2份标本。3.采血部位：采血部位通常为肘静脉。疑为亚急性心内膜炎的患者，以肘动脉或股动脉采血为宜。疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓。多次采血应在不同部位的血管穿刺以排除皮肤菌丛污染的可能。要避免从血管插管内取血，因插管常被污染，其培养结果不能反映真实情况。在不同部位取血，2次分离出同样菌种才是确定病原菌的有力证据。采血时要求严格无菌操作，防止皮肤正常菌群污染。

4.采血量：采血量与血培养的检出率相关，所以采血量一定要足够。成人一般为8～10ml/瓶，新生儿与婴幼儿为1～5 ml/瓶，骨髓采血量为1～2ml/瓶。5.标本运送与保存：含血样的培养瓶应立即送往实验室；不能及时送检的标本，应将其放在室温，切忌冰箱存放，因为某些苛养菌可在低温环境中死亡，而使培养阳性率下降。

二、下呼吸道分泌物(痰培养)的标本采取和处理

下呼吸道分泌物(痰)的细菌学检查对病原学诊断起着重要作用，但痰标本的质量往往难以保证，造成病原学诊断和实际引起感染的病原菌脱节，直接影响抗菌药物的应用、甚至耐药菌的出现或流行。痰标本的细菌学检验地带网检查应注意如下几个问题。

1.标本的采集：痰液标本最好在应用抗菌药物之前采集，以深咳晨痰最好，主要有自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰法、小儿采痰法和气管穿刺法等。

(1)自然咳痰法：为最常用的采集痰液方法。留取标本前，嘱咐患者用清水漱口数次，然后将痰吐入无菌带盖的痰杯中。对无痰或少痰的患者可采用雾化吸入加温至45℃的10%NaCl水溶液，使痰液易于排出。对咳痰少的幼儿，可轻压胸骨上部的气管，促进痰液的排出。

(2)气管穿刺法：仅用于昏迷患者，由临床医师进行操作，主要用于厌氧培养。

(3)支气管镜采集法：用气管镜在肺部病灶附近用导管吸引或者用支气管刷直接取材，患者不易接受，故不常用。

(4)胃内采痰法：无自觉症状的肺结核患者（尤其婴幼儿）不会咳嗽，有时将痰误咽入胃中，可采集胃内容物做结核分枝杆菌培养。清晨空腹时将胃管插入患者胃内抽取胃液送检。

(5)小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，用棉拭子深入咽部，小儿收到刺激咳嗽时，可咳出肺部或气管分泌物粘在拭子上。

2.标本的运送与保存：痰液标本采集后应立即送检，以防止某些细菌在外环境中死亡。做结核分枝杆菌和真菌培养的标本不能及时送检时，可放4℃保存，以免杂菌生长。

三、尿液细菌培养标本的采集和处理 尿液的细菌培养检查对于膀胱和肾脏感染的及早发现和病原学诊断很有价值。对于尿道、前列腺以及内、外生殖器炎症的诊断也有一定价值。

1.标本收集时间：需在应用抗菌药物之前或停用抗菌药5 d之后留取尿液标本；尿液在膀胱内应停留6～8h以上，使细菌有足够时间繁殖。最好留取早晨清洁中段尿标本。2.标本收集方法：

(1)清洁排尿法：女患者首先用肥皂水或碘伏清洗会阴部及尿道口，再用清水冲洗，擦干并排出前段尿液后，用无菌容器接取中段尿10～20ml；男患者应翻转包皮冲洗，用碘伏消毒尿道口；婴儿消毒其阴部后，将无菌小瓶直接对准尿道口接取尿液；均加盖立即送检。

(2)膀胱穿刺法：为避免尿道正常菌群的污染，收集尿液最好的方法是膀胱穿刺。尤其做厌氧菌检查时必须采用膀胱穿刺法。穿刺时膀胱应充盈，皮肤严格消毒后用装有19或20号针头的注射器在耻检验地带网骨联合距脐1/3处穿刺。膀胱穿刺的适应症有：①有尿道感染的临床症状，但中段尿培养细菌数很低，而又难以确定感染源者。②婴幼儿、新生儿、不能用导管者。③怀疑有厌氧菌感染时。(3)肾盂尿采集法：若取左右两侧肾盂尿，应请泌尿科医生采取，左右侧的标本要标记明确，以免出现错误。

(4)对用封闭式引流装置的留置导尿患者留取尿液标本培养时，用适当的消毒剂严格消毒引流管和导尿管连接处的管壁，用装有21号针头的注射器穿刺导尿管壁吸取尿液。不可打开导尿管和引流管连接处收集标本，培养用的尿液标本也不能从引流袋中留取。

(5)膀胱镜检查、输尿管插管或逆行肾盂造影时，收集的尿液可用来做细菌培养。(6)做病毒学检测时用容器收集清洁的标本即可，不需特殊方法收集。标本中加入抗生素可抑制细菌的过度生长，且标本需冷藏。

3.标本的运送和保存：尿液标本采集后应立即送检、及时接种，室温下保存时间不能超过2小时，4℃冷藏时间不能超过8小时，否则尿液细菌迅速繁殖，使尿中细菌计数不准确。但疑为淋病奈瑟菌感染患者的标本不能冷藏保存。

四、粪便标本微生物学检查的质量要求

1.采集方法：粪便标本多采用自认排便法，特殊情况下可采用直肠拭子法。（1）自然排便法：患者用药前自然排便后，采集有脓血、黏液部分粪便2～3克；外观无异常的粪便应从粪便不同部位取材；液体粪便取絮状物，盛于无菌容器或保存液中送检。（2）直肠拭子法：对于不易获得粪便或排便困难的患者，可采用直肠拭子法采集。将拭子前端用无菌甘油或盐水湿润，然后插入肛门约4～5cm（幼儿2～3cm）处，轻轻在直肠内旋转，擦去直肠表面黏液后取出，盛入无菌试管或保存液中送检。

2.标本保存和运送：粪便标本应立即送检；如不能立即送检，放入Cary-Blair运送培养基或pH7.0的磷酸盐甘油（0.033mol/L PBS与等体积的甘油混合）中运送和保存。标本置密封好的小瓶中，记录姓名、日期、标本号、及时送检，一般不长于2小时。

五、生殖道标本的采集和处理 1.男性标本：

(1)如疑为急性淋病奈瑟菌或其他化脓性细菌感染应在清洗龟头部后，以碘伏或其他非粘膜刺激性消毒剂消毒后，挤出分泌物立即以无菌棉拭子采取放入无菌试管中，立即送检，或以专用的细拭子插入尿道口2～3cm，旋转采取。(2)如疑为前列腺炎、精囊炎或慢性淋病奈瑟菌感染应由医师按摩前列腺，以无菌手续自尿道口采取前列腺液送检。2.女性标本：

(1)成年妇女自宫颈采取标本，应在扩阴器的支持下，选取有炎症或分泌物部位，先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物，再用另一拭子取分泌物放入无菌试管中立即送检。如做厌氧或真菌培养应另外采取标本。

(2)如未成年幼女疑患性传播疾病时，不应使用扩阴器，应以无菌拭子在阴道口处采取分泌物放入无菌试管中立即送检。

六、胸腹水、脑脊液标本的采集

1.采集方法：（1）脑脊液多由临床医生采集，通过腰穿法无菌操作采集脑脊液3～5ml，盛于无菌试管或培养瓶中。

（2）胸腹水均由医师以无菌手续穿刺取3～5ml，必须应用带盖的无菌容器，立即送检。

2.标本运送与保存：收集到的脑脊液标本应立即送检，15分钟内送到实验室，同时注意保温，不可置于冰箱保存，否则会使一些细菌死亡（如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和嗜血杆菌），影响细菌的检出率。

七、对不合格标本的处理

微生物室对于下列标本收集不符合规定的标本将予拒收，并通知临床，按标本要求复送：

1.申请单项目与标本不符。

2.申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。3.标本已有明显的污染迹象(如开塞)。4.标本量过少或已明显干燥。

5.尿培养应留样于无菌试管或带盖无菌杯中。（不合格标本大部分是因为留在尿常规杯中）。尿培养标本不合格者，多以污染而致三种以上杂菌生长居多。特别需杜绝的是一些患者见无菌容器太小直接留取中段尿有难度，于是把小便拉在痰盂等大容器中，再把小便倒在无菌容器中送检。

6.痰培养应留样于带盖无菌痰杯中。（不合格标本大部分是因为留在尿常规杯中）。痰培养标本不合格者，多以口水居多或口腔污染严重。挑取痰标本直接涂片镜检，WBC＜10/LP，上皮细胞＞25/LP不适合做细菌培养。

7.大便培养标本不合格者，多以送检时间过长导致标本干燥无法培养，故大便标本须及时送检（1小时内，最好在上班时间直接送细菌室检验）。