第一篇:万能保险持续奖金准备金提取方法分析
寿险精算
精算通讯第六卷第一期
万能保险持续奖金准备金提取方法分析与比较
赵晓京 梁永华
安永华明会计师事务所
【摘要】万能保险持续奖金是保险公司对持续有效的保单或持续交费的保单在满足合同约定条件时给予的奖金。由于保监会未明确规定万能保险持续奖金准备金的评估方法,目前各保险公司的具体做法不一。本文对持续奖金准备金的评估方法进行了研究,并结合公司自身的经验,对市场上各保险公司采用的主要评估方法进行分析和比较。
【关键词】万能保险 持续奖金 准备金方法
一、引言
我国寿险市场上销售的三大类投资型产品:投连、分红、万能保险中,万能保险出现的最晚,但却是2006年保险市场上风头最劲的产品。与其他两类产品相比,万能保险的保证利率与分红保险产品相当,而投连产品无保证利率;万能保险投资账户的结算频率为每月一次,虽然低于投连产品每周一次的结算频率,但明显高于分红保险,因而能及时反映市场投资收益率的变化情况。正是由于万能保险兼具保证利率高、结算频率快的优点,自2004年10月29日中国人民银行宣布上调人民币基准利率后,万能保险就受到了保险公司和消费者的追捧。各公司纷纷推出形态各异的万能险产品,许多保险公司万能保险的保费收入都占到个银渠道保费收入的50%以上,最高达到80%以上。
由于万能保险保证的最低结算利率仍然受到保监会2.5%的最高定价利率的限制,为了提高产品竞争力,许多公司都在产品条款中加入了额外的持续奖金。主要形态有以下两种:
1、持续交费奖励,适用于期交的万能险产品,目的是鼓励投保人交纳续期保费。由于万能保险与传统寿险不同,只要保单的账户价值能满足保单管理费和风险管理费等要求,即使投保人停止交纳保险费,保单仍然有效。为了鼓励客户如期交纳保险-24寿险精算
精算通讯第六卷第一期
之间。也有公司以最低保证利率为折现利率。
(2)账户结算利率的确定。对应于折现利率,各公司一般以保险公司预计投资回报率减去预计利差来确定未来的账户结算利率。目前的《万能保险精算规定》取消了对预计利差不超过2%的规定。
(3)持续奖金是否应该视为账户外的现金流?一种观点是保险公司兑现持续奖金时用于增加保单账户价值但并没有支付给客户,所以持续奖金不应该在持续奖金给付时刻视为账户外的现金流,而应包含在保险公司将来对客户的给付或理赔中;另一种观点是持续奖金相当于保险公司将股东的利益转移给客户,所以在保险公司兑现持续奖金时就视为现金流支出。容易看出,前一种观点下的准备金比后面一种低。
由于万能保险的投资账户也是独立账户,与投连产品有类似之处,而且保监会未作明确规定,所以不少公司都采用了这种方法。
流按照精算模型预测,再将现金流的现值作为一种准备金,用来和当前账户价值比较,差额即为非账户准备金,其中也包括了持续奖金准备金。账户预测和折现率的假设通常为最低保证利率,为保守起见,该方法往往会忽略退保的假设。
三、万能保险持续奖金准备金的方法比较
下面以一款万能型两全保险为例,按以上四种方法评估各保单年度的持续奖金准备金。
险种:十年期趸交两全保险(万能型)最低结算利率: 2.0% 实际投资回报率假设:5.0% 实际利差假设:1.5%
实际结算利率假设:5%-1.5%=3.5% 保单管理费假设:0.5%
初始账户价值:人民币10,000元
持续奖金为从第六保单年度起每年账户价值的2%
不考虑死亡率和费用率(方法三假设营业费用等于保单管理费),下表为各方法提取的实际持续奖金准备金的走势图。
4、贴现预测现金流和当前账户价值进行比较 该方法类似于毛保费评估方法,把将来账户价值和非账户价值(如持续奖金和死亡给付等)的现金
各方法持续奖金准备金走势方法一方法二方法三方法四1,4001,2001,***-1
第二篇:呆账准备金的提取原则
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呆账准备金的提取原则
呆账准备金的提取
当年呆账准备金累计提取额=年末贷款余额×1%-呆账准备金上年末余额
核销的贷款呆账应保留追索权。收回已核销贷款呆账增加呆账准备金,由此使年末呆账准备金余额超过年初贷款余额1%的部分,当年不必冲回超额部分。
银行提取呆账准备金要符合两项原则:
一是及时性原则;
二是充足性原则。
前者是指银行呆账准备金的提取应在估计到贷款可能存在内在损失、贷款的实际价值可能减少时进行,而不应在损失实际实现或需要冲销贷款时进行;后者是指银行应当随时保持足够弥补贷款内在损失的准备金。
由于损失的不可避免性,银行及时、足额提取呆账准备金就成为帮助银行保持经营稳健的有效工具。
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第三篇:财金(2005)49号《金融企业呆帐准备金提取管理办法》
财政部关于印发《金融企业呆账准备提取管理办法》的通知
2005年6月21日 财金[2005]49号
国家开发银行,中国农业发展银行,中国进出口银行,中国工商银行,中国农业银行,中国银行,中国建设银行,中国建银投资有限责任公司,交通银行,招商银行,中国民生银行,中国国际信托投资公司,中国光大(集团)总公司,中华民族国际信托投
资公司,中煤信托投资有限责任公司,各省、自治区、直辖市、计划单列市财政厅(局):
为了防范经营风险,增强金融企业抵御风险能力,准确核算损益,促进金融企业 稳健经营和健康发展,现将《金融企业呆账准备提取管理办法》印发给你们,请遵照 执行。
请各省、自治区、直辖市、计划单列市财政厅(局)将本办法转发给所辖各银行 和其他相关金融机构执行,并做好监督管理工作。
附件:金融企业呆账准备提取管理办法
第一章 总则
第一条 为了防范经营风险,增强金融企业抵御风险能力,准确核算损益,促进金 融企业稳健经营和健康发展,制定本办法。
第二条 本办法所称金融企业是指除金融资产管理公司外,经中国银行业监督管理 委员会批准,在中华人民共和国境内注册的政策性银行、商业银行、信托投资公司、财务公司、金融租赁公司和城乡信用社等经营金融业务的企业。
第三条 本办法所称呆账准备,是指金融企业对承担风险和损失的债权和股权资产 计提的呆账准备金,包括一般准备和相关资产减值准备。
本办法所称一般准备,是指金融企业按照一定比例从净利润中提取的、用于弥补 尚未识别的可能性损失的准备。
本办法所称资产减值准备,是指金融企业对债权和股权资产预计可收回金额低于 账面价值的部分提取的,用于弥补特定损失的准备,包括贷款损失准备、坏账准备和 长期投资减值准备。其中,贷款损失准备是指金融企业对各项贷款预计可能产生的贷 款损失计提的准备,坏账准备是指金融企业对各项应收款项预计可能产生的坏账损失 计提的准备。
第二章 呆账准备的提取
第四条 金融企业承担风险和损失的资产应提取呆账准备,具体包括贷款(含抵 押、质押、担保等贷款)、银行卡透支、贴现、信用垫款(含银行承兑汇票垫款、信 用证垫款、担保垫款等)、进出口押汇、股权投资和债权投资(不含采用成本与市价 孰低法或公允价值法确定期末价值的证券投资和购买的国债本息部分的投资)、拆借(拆出)、存放同业款项、应收利息(不含贷款、拆放同业应收利息)、应收股利、应收租赁款、其他应收款等资产。
对由金融企业转贷并承担对外还款责任的国外贷款,包括国际金融组织贷款、外国买方信贷、外国政府贷款、日本国际协力银行不附条件贷款和外国政府混合贷款等资产,也应当计提呆账准备。
金融企业不承担风险的委托贷款等资产,不计提呆账准备。
第五条 金融企业应当于每年终了根据承担风险和损失的资产余额的一定比例提取一般准备。一般准备的计提比例由金融企业综合考虑其所面临的风险状况等因素确定,原则上一般准备余额不低于风险资产期末余额的1%。一般准备由金融企业总行(总公司)统一计提和管理。金融企业应当按季对各项债权和股权资产进行检查,分析各项债权和股权资产的可收回性,根据谨慎性原则,合理预计各项资产可能产生的损失。对预计可能发生的贷款损失,计提贷款损失准备;对预计可能产生的坏账损失,计提坏账准备;对预计可能产生的长期投资损失,计提长期投资减值准备。
第六条 贷款损失准备的计提范围为金融企业承担风险和损失的贷款(含抵押、质押、担保等贷款)、银行卡透支、贴现、信用垫款(含银行承兑汇票垫款、信用证垫款、担保垫款等)、进出口押汇、拆出资金、应收融资租赁款等。
贷款损失准备包括专项准备和特种准备两种。
专项准备是指金融企业根据《贷款风险分类指导原则》对贷款资产进行风险分类后,按贷款损失的程度计提的用于弥补专项损失的准备。专项准备的计提比例由金融企业根据贷款资产的风险程度和回收的可能性合理确定。
金融企业可参照以下比例计提专项准备: 关注类计提比例为2%;次级类计提比例为25%;可疑类计提比例为50%;损失类计提比例为100%。其中,次级和可疑类资产的损失准备,计提比例可以上下浮动20%。
特种准备是指金融企业对特定国家、地区或行业发放贷款计提的准备,具体比例 由金融企业根据贷款资产的风险程度和回收的可能性合理确定。
第七条 坏账准备的计提范围为存放同业款项、应收债券利息、应收股利、应收经营租赁款、其他应收款等各类应收款项。
金融企业可参照《贷款风险分类指导原则》对计提坏账准备的资产进行风险分类,并根据风险分类结果参照贷款专项准备计提比例确定坏账准备的计提比例。金融企业在确定坏账准备的计提比例时,应当根据以往的经验、债务单位的实际财务状况和现金流量等相关信息予以合理估计。
第八条 长期投资减值准备的计提范围为股权投资和债权投资(不含采用成本与市价孰低法或公允价值法确定期末价值的证券投资和购买的国债本息部分的投资)。
对于有市价长期投资可以根据下列迹象判断是否应当计提减值准备:
(一)市价持续2年低于账面价值;
(二)该项投资暂停交易1年或1年以上;
(三)被投资单位当年发生严重亏损;
(四)被投资单位持续2年发生亏损;
(五)被投资单位进行清理整顿、清算或出现其他不能持续经营的迹象。
对于无市价长期投资可以根据下列迹象判断是否应当计提减值准备:
(一)影响被投资单位经营的政治或法律环境的变化,如税收、贸易等法规的颁 布或修订,可能导致被投资单位出现巨额亏损;
(二)被投资单位所供应的商品或提供的劳务因产品过时或消费者偏好改变而使 市场的需求发生变化,从而导致被投资单位财务状况发生严重恶化;
(三)被投资单位所在行业的生产技术等发生重大变化,被投资单位已失去竞争 能力,从而导致财务状况发生严重恶化,如进行清理整顿、清算等;
(四)有证据表明该项投资实质上已经不能再带来经济利益的其他情形。
第九条 金融企业必须根据资产的风险程度及时、足额提取呆账准备。呆账准备提 取不足的,不得进行税后利润分配。
第十条 金融企业总部及分支机构应于每季度终了后30天内向主管财政部门提供 其呆账准备提取情况(包括计提呆账准备的资产分项、分类情况、资产风险评估方法、呆账准备计提比例及变更情况),并按类别提供相关呆账准备余额变动情况(期初、本期计提、本期转回、本期核销、期末数)。
第十一条 财政部驻各地财政监察专员办事处负责对当地中央管理的金融企业分支 机构呆账准备提取的监督管理,对末按规定足额提取呆账准备,应当及时进行制止和 纠正。
第三章 账务处理
第十二条 金融企业按规定提取的一般准备作为利润分配处理。一般准备是所有者 权益的组成部分。
第十三条 金融企业提取的相关资产减值准备计入当期损益。已计提资产减值准备 的资产质量提高时,应在已计提减值准备的范围内转回,增加当期损益。
第十四条 对符合条件的资产损失经批准核销后,冲减已提取的相关资产减值准备。对经批准核销的表内应收利息,已经纳入损益核算的,无论其本金或利息是否已逾期,均作冲减利息收入处理。
已核销的资产损失,以后又收回的,其核销的相关资产减值准备予以转回,超过 本金的部分,包括收回表内应收利息和表外应收利息,计入利息收入。转回的资产减 值准备作增加当期损益处理。
第十五条 资产减值准备以原币计提,即人民币资产以人民币计提,外币资产以外 币或折合美元计提,人民币和外币资产减值准备分别核算和反映。
第四章 附则
第十六条 金融企业可以根据本办法制定具体办法,报主管财政部门备案。
第十七条 本办法自2005年7月1日起施行。以前有关规定与本办法有抵触的,以本办法为准。
第四篇:中药提取方法
综述中药提取方法
摘要
以中药提取方法的本质和影响提取作业的因素为理据,分析国内中药厂提取方法 关键词
中药提取方法 1前沿
近年来有关中药提取方法的论述有很多,然而有效成分的提取率仍然是现今国内中药制药工业现代化的瓶颈。尽管近年来国内在中药提取生产中推出了一些新工艺,如超声场强化提取、微波提取、超临界流体提取等,但当下的主流仍是浸提技术。浸提技术是应用溶剂提取固体原料中某一或某类成分的提取分离操作,又称固液萃取。目前在中药生产过程中,常用的中药浸提方法有煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流法、水蒸气蒸馏法等。
面对众多中药提取方法如何抉择是一个复杂的问题,因为它牵涉到生产设备和生产条件等许多因素。加上如今中药提取的规模较大,尤其考虑到连续生产,即使在实验中取得成果,在实际情况下还要经过长时间的实践检验。还有前面提到过的提取新工艺,其提取物往往是化学结构明确的物质,与传统中药生产完全是两回事,所以生产传统中药的厂家下不了决心去尝试新工艺,生产者情愿随大流,以避免风险。
提取方法的不同,提取等量有效成分所需原料和能源也不尽相同,资源和能源对世界经济和人类生存环境的影响越来越被重视。可持续发展经济和资源节约型社会的概念已经被全世界广泛认同,中国也不例外。在市场竞争激烈异常的今天,生产成本的控制就是企业的生命,而对世界能源价格上涨的现实,生产者应该节约每一滴水,每一度电。中药生产厂家必须努力挑选出最好的中药提取方法,改变目前中药提取效率低、高能耗、高污染所造成的负面影响。2选择原则
和所有的工程项目一样,选择中药提取方法必 要考虑的条件也是:被处理物料的性质、数量,产品的价值操作人员的技术水平,现实的设备安装场地,生产成本的控制,投资的预算。所追求的目标也是最高的投资回报率,最低的能耗,最简单的操作,最理想的提取率。降低生产成本,提高产品质量,从而提升本企业的市场竞争力。舍此不会有 良好的后果。3中药提取本质
中药提取本质上是一种固液萃取作业,任何化工原理教科书和化工手册对固液萃取的机理都有详尽的阐明。为了便于分析国内中药厂现有提取装置的状况,有必要将其与中药提取有关的结论摘录于此。(1)固液萃取的速度取决于二相接触介面的面积和吸附力,溶质扩散到介面的距离,溶剂的粘度和扩散系数、对溶质的选择性,萃取的温度、压力。
(2)固液萃取的萃取率取决于萃取时间、级数(同一份固相被萃取的次数)和溶剂的数量。(3)在多级萃取作业中,固液萃取的级效率取决于固相底流的反混量,以及固液二相接触的均匀程度。
(4)萃取率既定时,多级固液萃取的溶剂使用量取决于萃取过程的形式:并流、错流或逆流。(5)所谓并流是指被萃取的固体物料在每一级萃取作业中都被同一份溶剂萃取,液相的移动方向与固相在级间移动的方向相一致的作业方式。实际上是一种移动的单级萃取作业。为了保证最终的萃取推动力,萃取液成品的浓度必须相当低,所以整
个萃取过程的溶剂需用量相当大。
(6)所谓错流是指被萃取的固体物料在每一级萃取作业中都使用新鲜溶剂进行萃取,每一级都要将固液二相分离。然后把这些浓度逐次降低的各级提取液混合在一起作为成品。
(7)所谓逆流是指被萃取的固体物料在每一级萃取作业中都是被来自下一级的萃取液所萃取,固液二相的移动方向是相逆的。新鲜的液相溶剂萃取最后一级固相渣滓,而最浓的萃取液成品萃取新鲜的固相物料。不仅可用最少的溶剂量维持各级萃取所需的推动力,而且可以获得浓度最高的萃取液成品。4中药提取方法
回流法
回流法系指用乙醇等挥发性有机溶剂浸提药材成分,浸提液被加热,溶剂馏出后又被冷凝流回浸出器中浸提药材,这样周而复始,直至有效成分提取完全的方法。该法由于浸提液受热时间较长,故不适用于受热易破坏的药材成分的浸出。常用设备为多功能提取罐、索氏提取器。
滤过分离法
滤过分离法系指将混悬液通过多孔的介质(滤材),固体微粒被截留,液体经介质孔道流出,使固-液分离的方法。常用的滤过方法与设备如下所述。
(1)常压滤过
系指常压下滤过的操作。常以滤纸或脱脂棉作滤过介质,常用滤器为玻璃漏斗、搪瓷漏斗、金属夹层保温漏斗等。
(2)减压滤过
系指抽真空下滤过的操作。常用的滤器如布氏漏斗(铺垫滤纸或纸浆滤板)、砂滤棒(外包滤纸或丝绸布)、垂熔玻璃滤器(包括漏斗、滤球、滤棒)等。
(3)加压滤过
系指加压下滤过的操作。例如板框压滤机,是由许多块“滤板”和“滤框”串连组成,适用于黏度较低、含渣较少的液体加压密闭滤过。
(4)薄膜滤过
系指以薄膜为滤过介质,按薄膜所能截留的微粒最小粒径或相对分子质量,达到的滤过操作,可分为微孔滤膜滤过(微滤)、超滤、反渗透等。
微滤是指以微孔滤膜为滤过介质进行的滤过操作。微孔滤膜滤过具有以下特点:滤膜质地薄(0.1~0.15mm),孔径比较均匀,孔隙率高,故滤速快;滤膜对料液的吸附少;滤过时无介质脱落,对药液无污染。微孔滤膜的孔径范围为0.025~14μm,生产中主要用于精滤,如注射液的滤过。0.22μm以下孔径的滤膜可以滤除细菌。
超滤是指利用具有不同分子量截留值的薄膜作滤过介质,溶剂和小分子溶质可通过滤膜,大分子溶质被滤膜截留。所以,超滤是在纳米(Bin)数量级选择性滤过的技术。具有非对称结构的超滤膜孔径为l~20nm,主要滤除5~100nm的微粒。可用于中药注射剂的精制及除菌;蛋白质、酶、多糖类药物溶液的超滤浓缩等。
水提醇沉法
水提醇沉法(水醇法)系指在中药水提浓缩液中,加入乙醇使达不同含醇量,某些药物成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀,固液分离后使水提液得以精制的方法。一般操作过程是:将中药水提液浓缩至1︰1~1︰2(ml︰g),(溶液:溶质)药液放冷后,边搅拌边缓慢加入乙醇使达规定含醇量,密闭冷藏24~48h,滤过,滤液回收乙醇,得到精制液。操作时应注意以下问题:①药液应适当浓缩,以减少乙醇用量。但应控制浓缩程度,若过浓,有效成分易包裹于沉淀中而造成损失。②浓缩的药液冷却后方可加入乙醇,以免乙醇受热挥发损失。③选择适宜的醇沉浓度。一般药液中含醇量达50%~60%可除去淀粉等杂质,含醇量达75%以上大部分杂质均可沉淀除去。④慢加快搅。应快速搅动药液,缓缓加入乙醇,以避免局部醇浓度过高造成有效成分被包裹损失。⑤密闭冷藏。可防止乙醇挥发,促进析出沉淀的沉降,便于滤过操作。⑥洗涤沉淀。沉淀采用乙醇(浓度与药液中的乙醇浓度相同)洗涤可减少有效成分在沉淀中的包裹损失。
水蒸气蒸馏法
水蒸气蒸馏法系指将含有挥发性成分的药材与水共蒸馏,使挥发性成分随水蒸气一并馏出,经冷凝分取挥发性成分的浸提方法。该法适用于具有挥发性、能随水蒸气蒸馏而不被破坏、在水中稳定且难溶或不溶于水的药材成分的浸提。水蒸气蒸馏法可分为共水蒸馏法、通水蒸气蒸馏法、水上蒸馏法。为提高馏出液的浓度,一般需将馏出液进行重蒸馏或加盐重蒸馏。常用设备为多能提取罐、挥发油提取罐。
渗漉法
渗漉法是将适度粉碎的药材置渗漉筒中,由上部不断添加溶剂,溶剂渗过药材层向下流动过程中浸出药材成分的方法。渗漉属于动态浸出方法,溶剂利用率高,有效成分浸出完全,可直接收集浸出液。适用于贵重药材、毒性药材及高浓度制剂;也可用于有效成分含量较低的药材提取。但对新鲜的及易膨胀的药材、无组织结构的药材不宜选用。该法常用不同浓度的乙醇或白酒做溶剂,故应防止溶剂的挥发损失。
(1)单渗漉法
系指用一个渗漉筒的常压渗漉方法。操作过程是:①粉碎药材:粉碎度应适宜,一般以粗粉或最粗粉为宜。过细易堵塞;过粗不易压紧,溶剂消耗量大,浸出效果差。②润湿药粉:药粉应先用适量浸提溶剂润湿,使之充分膨胀,避免在渗漉筒中药粉膨胀而造成堵塞。③药粉装筒:渗漉筒底部装假底并铺垫适宜滤材,将已润湿膨胀的药粉分次装入渗漉筒,应松紧适宜,均匀压平,上部用滤纸或纱布覆盖,并加少量重物,以防加溶剂时药粉浮起。④排除气泡:打开渗漉液出口的活塞,从药粉上部添加溶剂至渗漉液从出口流出,溶剂浸没药粉表面数厘米,关闭渗漉液出口。⑤药粉浸渍:一般提渍24~48h,使溶剂充分渗透扩散。⑥渗漉:打开渗漉液出口接收漉液,漉液流出速度以1000g药材计算,通常每分钟1~3ml.渗漉过程中应不断补充溶剂。使溶剂始终浸没药粉。
(2)重渗漉法是将多个渗漉筒串联排列,渗漉液重复用作新药粉的溶剂,进行多次渗漉以提高渗漉液浓度的方法。重渗漉法溶剂利用率高,浸出效率高。渗漉液中有效成分浓度高,可不必加热浓缩,避免了有效成分受热分解或挥发损失。但所占容器多,操作较麻烦。主要设备为渗漉筒。
5结束语 由于条件限制,笔者没有亲自尝试文中提到的部分提取方法,这篇文章只是介绍下当今中药提取的主要方法而已。
第五篇:多糖的提取纯化及分析鉴定方法研究
多糖的提取纯化及分析鉴定方法研究
王霄
(合肥工业大学 生物与食品工程学院,安徽 合肥230009)
摘要:详细介绍了动植物多糖的常见提取纯化方法的最新研究进展,并比较了各种方法的优缺点。每种方法都有各自的优缺点,在提取时应根据所选材料的性质选用不同的方法,有些方法在一定的条件下可与别的方法协同作用,并对糖的含量测定及分析鉴定方法的研究进展作了概述。
关键词:多糖;提取;纯化;分析鉴定;研究进展 中图分类号:TU 411.01文献标识码:A
Progress of Polysaccharides Extraction, Purification and Identification Methods
WANG Xiao
(School of Biological and Food Engineering, Hefei University of Technology, Hefei 230009, China)
Abstract: This paper reviews the extraction, purification and identification methods of animal and plantpolysaccharides, and compares the advantages and disadvantages of each mothed.Each mothed has its own advantages and disadvantages, appropriate mothed should be selected according to the nature of the chosen material, and some of these methods can be synergy with other methods under certain conditions.In addition, analysis and identification of polysaccharides are outlined.Key words: polysaccharides;extraction;purification;analysis and identification;research progress
菌来源的糖缀合物具有广泛的药理及生物活性
0多糖概述
多糖(polysaccharide)是由糖苷键结合的糖链,至少要超过10个以上的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物。由相同的单糖组成的多糖称为多糖,如淀粉、纤维素和糖原;以没的单糖组成的多糖称为杂多糖,如阿拉伯胶是由戊糖和半乳糖等组成。多糖不是一种纯粹的化学物质,而是聚合程度不同的物质的混合物。多糖类一般不溶于水,无甜味,不能形成结晶,无还原性和变旋现象。多糖也是糖苷,所以可以水解,在水解过程中,往往产生一系列的中间产物,最终完全水解得到单糖。
近年来,国际上对糖及糖复合物的研究己成热点,糖类结构测定和生物活性研究取得了明显的进展。大量实验事实揭示糖类是重要信息分子,参与许多生理和病理过程
[1-2]
[3]。
在对各种中药材化学成分研究的过程中,人
们逐步提高了对植物多糖的关注。植物多糖研究比较深入的是茶多糖、菜籽多糖、南瓜多糖、苦瓜多糖、银杏叶多糖、枸杞多糖等等,植物多糖在抗生素替代物及保健品领域已经取得很好的应用。多糖作为重要的生物活性物质具有调节免疫、抗肿瘤、降低糖脂、延缓衰老等活性,在医疗保健、食品、动物养殖等领域有着广阔的应用前景
[4-7]。
1多糖的提取工艺
1.1 水提醇沉法
水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。多糖是极性大分子化合物,提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最
。到目前为止。己有
300余种多糖类化合物从天然产物中被分离出来,其中从中草药、食药用菌中提取的水溶性多糖最为重要。已发现有100多种中草药、食药用
终体积分数达到70 %左右,利用多糖不溶于乙醇的性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置5 h,多糖的质量分数和得率均较高。影响多糖提取率的因素有:提取温度、浸提料液比、提取时间以及提取次数等。为此,研究者对影响多糖提取工艺的这些因素进行了大量研究。林娟[8]
等研究表明水提法提取甘薯多糖的优化工艺条件为:提取温度85℃,加水比1:7,提取时间2.5h,提取率为26.71%。刘永[9]
等研究表明:最佳提取条件为95℃,料液比1:20(g:mL),提取时间2h,提取3次,茶叶多糖含量为35.92 mg/g。
水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,是一种可取的提取方法。但由于水的极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续的分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高[10]。
1.2酶法提取
酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术,使用酶可降低提取条件,在比较温和的条件下分解植物组织,加速有效成分的释放或提取。此外,使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等非目的产物。此法可使后续的浓缩和脱蛋白工艺更简易、省时,粗多糖的纯度更高。但会提高生产成本,对提取条件要求较高。杨云
[11]
等人采用的单酶法和复合酶法提取大枣多糖,单酶法提取多糖含量最高可达44.69%,而复合酶法多糖最高含量可达68.13%。1.3超声波提取
超声法是利用超声波对细胞组织的破碎作用来提高多糖浸出率的,具有快速、安全、简便、成本低、多糖提取率高,成分又不被破坏等优点,但对提取设备要求较高。李进伟
[12]
等通过响应面
分析法考察超声波功率、提取时间、提取温度、料液比对枣多糖得率与纯度的影响,得出枣多糖最佳的提取工艺条件为:超声波功率86~96W,提取温度45~53℃,提取时间20min,料液比1:20(g:ml),枣多糖得率7.63%,纯度35.57%。与传统的水浴浸提法相比,该方法不仅缩短了提取时间,且提高了枣多糖得率与纯度。1.4微波提取
微波萃取是高频电磁波穿透萃取媒质,到达被萃取物料的内部,能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升,细胞内部压力超过细胞壁承受力,细胞破裂,细胞内有效成分流出,在较低的温度下溶解于萃取媒质,通过进一步过滤和分离,获得萃取物料。赵怡红
[13]
等研究表明北冬虫夏草
多糖微波提取最佳条件:微波功率550W、固液比l:30、提取时间30s、提取1次,多糖收率3.67%。刘青梅
[14]
等研究结果表明:对于紫菜多糖
提取微波提取优于热水提取,微波冻融提取效果最佳,提取率最高达7.45%,而热水提取率为2.05%.影响微波浸提的主要因素为浸提时间,其次是微波功率和液固质量比。优选方案为微波功率200W、提取时间8 min、水与紫菜液固质量比40:1。
1.5超临界流体提取
超临界流体提取法根据某些气体在超临界状态下具有特殊的液相性质,对一些组分有较好的溶解性,用来提取目的产物。一般采用CO2超临界萃取多糖组分。朱俊玲
[15]
通过超临界CO2流体
萃取处理芦荟多糖,多糖得率为85.1%,是传统方法的1.5倍。超临界萃取的最佳工艺条件是乙醇用量为250 ml/100g芦荟、萃取压力为25 MPa、萃取温度为35℃。1.6超滤法
超滤是一种膜分离技术。该技术应用于多糖的提取,具有不损害活性、分离效率高、能耗低、设备简单、可连续生产、无污染等优点[16]。
1.7酸提法
有些多糖适合用稀酸提取,并且能够得到更高的提取率。如赵宇等
[17]
对海蒿子多糖的提取方
法研究发现,从多糖提取得率来看,酸提法优于传统的水提法。不过此方法只在一些特定的植物多糖提取中占优势,目前报道的并不多。不过在操作上还是应该严格控制酸度,因为在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。1.8碱提法
与酸提法类似,有些多糖在碱液中有更高的提取率,尤其是含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。不过,也应控制碱的浓度,因为有些多糖在碱性较强时也会发生水解。
2多糖纯化方法
2.1除蛋白
根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点,用V(氯仿)∶V(戊醇或正丁醇)为5∶1 或4∶1,混合物剧烈振摇20~30 min,蛋白质变性生成凝胶,离心分离,分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。此种只能除去少量蛋白质,效
率不高,须反复多次,多糖有损失。但此方法比较温和,在避免多糖降解上效果较好,如配合加入一些蛋白质水解酶,用Sevage 法效果更佳。李婉婷
[18]
研究结果表明木瓜蛋白酶-Sevage法除
去款冬花多糖中的蛋白最为理想,该法的最佳工艺条件为:木瓜蛋白酶的酶底比为l%,pH值7.0,先在50℃水浴中酶解2h,再经Sevage法脱蛋白3次,其蛋白脱除率为88.95%,多糖保留率为92.63%。2.2透析法
透析法是利用一定孔目的膜,使无机盐或小分子糖透过,而将大分子的多糖截留下来从而达到纯化多糖的目的。此法的关键是要选择孔目合适的透析膜。纤维膜孔径为2~3nm,可使单糖分子通过,分离效果较好,透析时常需要多次换水,溶液的pH值维持在6.0~6.5范围内。2.3凝胶柱层析法
凝胶柱层析法主要是根据多糖分子的大小和形状不同而达到分离目的。但溶液流经多孔性凝胶柱时,小分子已扩散人孔中,各溶质依分子量大小顺序依次流出。此方法快速、简单、条件温和。常用的凝胶有葡聚糖凝胶(Sephadex)和琼脂糖凝胶(Sephamse),以不同浓度的盐溶液和缓冲溶液作为洗脱剂。此法还可进行多糖相对分子量的测定。王赫
[19]
采用Sephadex G-100凝胶色谱柱
分离纯化,从龙胆水溶性多糖中分离纯化得到2 种不同的均一多糖组分TP-
1、TP-2。2.4纤维素住层析法
纤维素阴离子交换剂柱层析对多糖的分离是利用pH 6时,酸性多糖能吸附于交换剂上,中性多糖不吸附,用pH相同离子强度不同的缓冲液将酸性强弱不同的酸性多糖分别洗脱出来。常用的阴离子交换纤维素有DEAE-纤维素和ECTEOLA纤维素。张兰杰
[20]
等就采用DEAE-纤维素柱分离
北五味子多糖,分别得到了白色结晶和黄色粉末两种多糖产物。
3多糖的分析
3.1含量的测定
测定方法:硫酸-苯酚法、硫酸-蒽酮法、比色定量法、分光光度法、纸色谱法、离子交换色谱法、yaphe [21]
法、薄层色谱法、酶法、原子吸
收法
[22]、HPLC法、凝胶电泳法、亲和电泳法连、续流动分析法检测法
[23]、次亚碘酸盐定量法、蒽
酮-硫酸法(总糖)、DNS法
[24]
(还原法)、磷钼
比色法、邻钾苯胺比色法等。每种方法只对某些多糖的测量效果好。比色法分光光度法离子交换色谱法酶法和电泳法等可同时用于多糖的定性定量分析。3.2纯度鉴定
多糖是高分子化合物,其纯品微观上是不均一的,通常所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围的均一组分。多糖纯度鉴定的常用方法:超离心、高压电泳、凝胶层析、HPLC法等。现在应用较多的是HPLC法,旋光度测定[25]
也是纯度
测定的一种方法。3.3分子量的测定
多糖分子量的测定是研究多糖性质的一项重要工作常用方法:渗透压法、蒸气压渗透剂法、端基法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法、超过率法、沉淀法、凝胶电泳法、HPLC法、超离心分析法、分子筛色谱法、GPC法
[26]。
4多糖的鉴定
4.1 多糖一级结构测定
多糖的一级结构分析,主要是分析组成多糖的单糖类型、数目连接方式及苷建构型。常用化学法和仪器分析法。多糖组分与分子比例测定法:部分酸解法、完全酶解法、色谱法;吡喃、呋喃环形式结构的分析:红外光谱;连接次序:选择性光谱法、糖苷键顺序水解、核磁共振; α-β-异头异构体:糖苷酶水解核磁共振;羟基被取代情况:甲基化反应、气相色谱、过碘酸氧化、Smith降解法和测硫酸基法(terho法)、核磁共振、质谱法;糖链、肽链连接方式:单糖与氨基酸组成、稀碱水解法、肼解反应;多糖结构的分析方法很多,迄今没有一种方法可以单独完成多糖结构的分析。仪器分析与化学方法相结合是常用的多糖结构测定方法。4.2多糖高级结构测定
目前研究多糖的二级结构常用的手段是NMR技术,如2D-NMR,13C谱,通用的方法是将现代NMR技术与理论计算相结合通过一定的理论计算筛选构象,主要的理论计算方法有从头计算、丰度经验计算及经验力场计算
[27]
。圆二色
谱法(CD)也可用于糖的构象分析,张丽萍等
[28]
应用谱测定了金顶侧耳多锗的水溶液构象近年来,以精确三维结构知识为基础揭示重要生命活
动的规律已达到前所未有的深度和广度[29],多糖
作为一类重要的生物活性大分子其结构的研究势
必推动对多糖的认识向深层次发展。多糖的应用展望
我国对多糖的研究起步较晚,但近年来的工作取得了较大的进展,愈来愈多的多糖被发现并证实它们具有复杂广泛的生物活性和功能。随着对多糖生物活性的深入研究,多糖的生物活性机理,功效因子会更加明确,它的应用领域也将会更加拓宽。然而,由于多糖本身结构比较复杂,种类繁多,其结构测定和分离纯化有很大的难度;有些多糖在天然植物中的含量低且不易分离及多糖的药理作用与诸多因素有关,给多糖的研究和应用带来许多的挑战,这需要相关行业的人士共同应对。
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