几种核酸提取方法概述

第一篇：几种核酸提取方法概述

几种核酸提取方法概述

(1).浓盐法

利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95％乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.（2）.阴离子去污剂法:

用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.（3）.苯酚抽提法:

苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态.

第二篇：实验二 植物核酸的提取-教案

授课教师 学生人数 55 课 题 实验二 植物基因组DNA的提取 授课类型 新授课 授课方法 讲授、演示 教学目的 掌握CTAB法提取植物基因组DNA的原理与方法 教学重点 理解每一步实验操作的目的 教学难点 实验操作过程中的一些注意事项 教学过程

一、背景知识

1.DNA在细胞中存在的位臵？植物细胞DNA存在的位臵和动物细胞有何不同？（图）教学用具 多媒体

2.DNA的存在形式

双螺旋结构图

双螺旋结构组成

染色体是怎样形成的？

一级结构（核小体=双螺旋+组蛋白）-二级结构（螺线管）-三级结构（超螺线管）-四级结构（染色体）

真核生物基因组DNA是经过四级包装形成了染色体，先是DNA形成双螺旋结构，再与组蛋白形成核小体（一级结构），压缩7倍，再形成螺旋管（二级结构），压缩6倍，之后再形成超螺旋管（三级结构），压缩40倍，最后超螺旋管压缩形成染色体（四级结构），再压缩5倍，正常细胞中基因组DNA是以染色质（相当于一级结构）形式存在，在细胞分裂的中期以染色体形式存在，真核生物细胞质DNA主要是以裸露的环状DNA形式存在，没有核小体结构。

3.遗传物质核酸除了DNA外还有另外一种，即RNA，它与DNA在结构上的区别？（图）

RNA基本单位中间的五碳糖是核糖，含氮碱基尿嘧啶（U）替代 胸腺嘧啶（T）4.核酸的理化性质

（1）形状：DNA为白色类似石棉样的纤维状物，RNA的纯品呈白色粉末或结晶。

（2）溶解性：一般都溶于水，不溶于乙醇、异丙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。（3）保存：在酸性溶液中，核酸易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。

二、实验目的

1.掌握CTAB法提取植物基因组DNA的原理 2.CTAB法提取植物基因组DNA的实验方法

三、实验原理

1.核酸在细胞中的存在方式，是以核酸-蛋白质复合物的形式存在，如一级结构核小体（图）：DNA螺旋+组蛋白

2.通过低温研钵破坏植物细胞壁

3.加入CTAB溶解细胞膜，CTAB与核酸形成核酸-CTAB复合物，使核酸与蛋白质分离。

4.加入高盐溶液溶解核酸-CTAB复合物，加入蛋白质变性剂使蛋白质变性沉淀出来，离心除去蛋白质。5.加入核酸沉淀剂，溶解CTAB，并使和核酸沉淀出来，离心得到核酸沉淀。

四、实验仪器 1.水浴锅

2.离心机（12管）：3台 3.研钵：10个

4.移液枪（包括枪头）：1ml、400ul

五、实验材料与药品

实验材料：新鲜菠菜叶片 1.十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）

作用：溶解细胞膜并与核酸结合，便于分离核酸。商品信息：瓶装/100g。

理化性质：白色或浅黄色结晶体至粉末状，有刺激气味，易溶于异丙醇，可溶于水,震荡时产生大量泡沫，化学稳定性好，耐热、耐光、耐压、耐强酸强碱。有吸湿性，在酸性溶液中稳定；溶于10份水，溶于热水、乙醇、三氯甲烷,易溶于异丙醇水溶液,微溶于丙酮,不溶于乙醚和苯。

储存：在阴凉，干燥，通风良好的地方，远离不相容的物质。危害：高毒，对皮肤及粘膜刺激性小，有轻微脱脂作用。2.1M Tris-HCl PH8.0缓冲液

作用：提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏 商品信息：瓶/100ml，无色、澄清溶液

理化性质：Tris中文品名为三羟甲基氨基甲烷，瓶/500g。是一种白色结晶或粉末。溶于乙醇和水，微溶于乙酸乙酯、苯，不溶于乙醚、四氯化碳，对铜、铝有腐蚀作用，有刺激性的化学物质。

储存：室温保存。

危害：毒性低，可致癌，不要直接接触皮肤。3.乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）

作用：螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制脱氧核糖核酸酶（DNase）活性，活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。

商品信息：瓶/250g。

理化性质：无味无臭或微咸的白色或乳白色结晶或颗粒状粉末。溶于水，不溶于乙醇、乙醚，其水溶液pH值约为5.3。可由EDTA与氢氧化钠和碳酸钙作用制得。

储存：于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。应与氧化剂分开存放，切忌混储。配备相应品种和数量的消防器材。储区应备有合适的材料收容泄漏物。

危害：对粘膜和上呼吸道有刺激作用。对眼睛、皮肤有刺激作用。本品可燃，具刺激性。4.Tris饱和酚

作用：强蛋白质变性剂。商品信息：瓶/250ml。

理化性质：为浅黄色透明液体，上层为Tris-HCl溶液，加有抗氧化的0.25% 8-羟基喹啉和0.1%的β-巯基乙醇。

储存：4℃避光保存。

危害：Tris饱和酚有较强的腐蚀性，应尽量避免皮肤直接接触或吸入体内。如发现变为黄色或棕色，表明发生氧化，不能使用。5.β-巯基乙醇（2-巯基乙醇）

作用：提供一种还原剂，这样酚类物质（植物材料特别是老的材料中含有大量的酚类物质）就不能被氧化成醌（醌易与DNA发生共价结合，使DNA发生褐变，从而影响你提DNA的实验）。巯基乙醇兼有消除CTAB震荡时产生的泡沫的作用。

商品信息：瓶/100g。

理化性质：无色透明液体，具有少许硫醇气味。易溶于水，乙醇和乙醚等有机溶剂，与苯可以任意比例混溶。水中溶解度：1mg/mL。

储存：对空气敏感，易吸潮。使容器保持密闭，储存在阴凉、干燥通风处。打开了的容器必须仔细重新封口并保持竖放位臵以防止泄漏。建议贮存温度 2-8℃。

危害：高毒吸入、摄入或经皮肤吸收后会中毒。对环境有危害，对水体可造成污染。本品可燃。6.氯化钠（NaCl）

作用：CTAB-核酸复合物在高盐溶液中易溶。商品信息：瓶/500g，分析纯AR。

理化性质：白色晶体状。易溶于水、甘油，微溶于乙醇、液氨；不溶于浓盐酸。在空气中微有潮解性。稳定性比较好。

储存：储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。应与氧化剂分开存放，切忌混储。危害： 7.无水乙醇

作用：DNA沉淀剂、洗涤剂。商品信息：瓶/500ml，分析纯AR。

理化性质：无色澄清液体。极易从空气中吸收水分，能与水和氯仿、乙醚等多种有机溶剂以任意比例互溶。储存：储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。库温不宜超过30℃。保持容器密封。应与氧化剂、酸类、碱金属、胺类等分开存放，切忌混储。采用防爆型照明、通风设施。禁止使用易产生火花的机械设备和工具。

危害：易燃，具刺激性。蒸气与空气能形成爆炸性混合物，爆炸极限3.5%～18.0%（体积）。8.氯仿（三氯甲烷）

作用：蛋白质变性剂，加速有机相与液相分层，去除核酸溶液中的少量酚（酚易溶于氯仿）。商品信息：瓶/500ml。

理化性质：无色透明液体，极易挥发，有特殊气味。不溶于水，溶于醇、醚、苯。储存：保存在密封的棕色瓶中。

危害：麻醉性。有致癌可能性。在光照下遇空气逐渐被氧化生成剧毒的光气。9.异戊醇

作用：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

商品信息：瓶/500ml。

理化性质：无色液体，有不愉快的气味。微溶于水，可混溶于醇、醚等有机溶剂。

储存：储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。库温不宜超过30℃。保持容器密封。应与氧化剂、酸类等分开存放，切忌混储。采用防爆型照明、通风设施。禁止使用易产生火花的机械设备和工具。储区应备有泄漏应急处理设备和合适的收容材料。

危害：吸入、口服或经皮肤吸收有麻醉作用。其蒸气或雾对眼睛、皮肤、粘膜和呼吸道有刺激作用，可引起神经系统功能紊乱，长时间接触有麻醉作用。易燃，其蒸气与空气可形成爆炸性混合物，遇明火、高热能引起燃烧爆炸。10.异丙醇

作用：DNA沉淀剂，DNA在异丙醇的溶解度更低，所以用异丙醇来沉淀更完全，而后由于异丙醇不易挥发，所以用乙醇洗去异丙醇，乙醇挥发快。用-20度预冷异丙醇沉淀效果较等体积乙醇沉淀好；异丙醇约和2.5倍体积的乙醇效果相当；但DNA微溶于乙醇，使用乙醇沉淀会使部分DNA溶解损失；所以多选用-20度预冷异丙醇。一般6500倍到8000倍重力10分钟就可以将异丙醇沉淀的核酸紧密的离到管底。

商品信息：棕色玻璃瓶/500ml。

理化性质：无色透明具有乙醇气味的可燃性液体。有似乙醇和丙酮混合物的气味，能与醇、醚、氯仿和水混溶，不溶于盐溶液。

储存：储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。库温不宜超过30℃。保持容器密封。应与氧化剂、酸类、卤素等分开存放，切忌混储。采用防爆型照明、通风设施。禁止使用易产生火花的机械设备和工具。储区应备有泄漏应急处理设备和合适的收容材料。

危害：微毒类，高浓度蒸气具有明显麻醉作用，对眼、呼吸道的黏膜有刺激作用，能损伤视网膜及视神经。常温下可引火燃烧，其蒸汽与空气混合易形成爆炸混合物。11.PVP-40（聚乙烯吡咯烷酮）

作用：PVP是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。

商品信息：白色塑料瓶/100g。

理化性质：白色或乳白色粉末或颗粒，有微臭。溶于水、碱、酸及极性有机溶剂。储存：室温干燥保存。危害： 12.液氮（LN2）

作用：低温导致植物组织冻裂，方便研磨使细胞破碎，使DNA释放完全；低温情况下各酶处于低活性状态，有利于抑制DNAase的作用，保护DNA。商品信息：分析纯

理化性质：-196℃。液态的氮气。是惰性的，无色，无臭，无腐蚀性，不可燃，温度极低。储存：储存于阴凉、通风的库房。库温不宜超过30℃。危害：汽化时大量吸热接触造成冻伤。

六、实验试剂

1.氯仿-异戊醇（24:1）100ml-20ml=80ml {氯仿 96ml + 异戊醇 4ml} = 100ml，4℃保存 2.酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）40ml {氯仿-异戊醇（24:1）20ml + Tris饱和酚20ml} = 40ml，4℃保存 3.TE缓冲液 PH8.0 50ml {10mM Tris-HCl（PH8.0）缓冲液 0.5ml + 0.5M EDTA（PH8.0）0.1ml} → → 定容到50ml → 高压灭菌后冷却4℃保存  【0.5M EDTA（PH8.0）】的配制：100ml {蒸馏水 80ml + EDTA-2Na.2H2O 18.61g} → 用NaOH（约2g）调至PH8.0 → 定容至100ml → → 分装后高压灭菌备用。注：需加入NaOH调至PH8.0才能完全溶解。 【10mM Tris-HCl（PH8.0）缓冲液】的配制：10ml {1M Tris-HCl PH8.0缓冲液100μl + 水9.9ml} → 定容至10ml → 10mM Tris-HCl（PH8.0）缓冲液 4.2%CTAB抽提液 250ml

{CTAB 4g + 无水乙醇 5ml + 水100ml} → 加入200ml烧杯中 → 加热溶解 → 再依次加入 → → {5M NaCl 56ml + 1M Tris-HCl（PH8.0）20ml + 0.5M EDTA 8ml} → 定容至250ml → 高压灭菌冷却后加入 → {1%β-巯基乙醇（400ul）2ml + PVP-40 5g} → 4℃保存   【5M NaCl溶液】配制：100ml {NaCl 29.22g + 水90ml} → 加热到80℃溶解冷却后 → 定容至100ml → 高压灭菌备用 【1%（v/v）β-巯基乙醇】配制：10ml {β-巯基乙醇 100μl +水9.9ml} → 1%β-巯基乙醇10ml 5.蒸馏水

所有药剂用水都要纯净水经高压灭菌冷却

七、实验步骤

（一）实验前准备

1.研钵、异丙醇-20℃预冷；【研钵10个、异丙醇75ml】

2.将2%CTAB抽提液从4℃冰箱内取出在65℃水浴预热；【CTAB抽提液30ml】 3.称取30份新鲜菠菜叶片，每份1g，称重时去叶脉；【菠菜叶片30g】 4.用蒸馏水冲洗叶片，滤纸吸干水分，将叶片用剪刀剪小。【洗瓶、滤纸、剪刀】

5.实验器材：冰箱、65℃水浴锅、液氮、10ml离心管90个、药匙、移液枪（1ml、100μl、400μl）、离心机（10000r/min）

6.实验药剂：酚-氯仿-异戊醇30ml（每管1ml）、氯仿-异戊醇60ml（每管2ml）、无水乙醇12ml（每管400 μl）、TE缓冲液3ml（每管100μl）

（二）破碎细胞，释放溶解核酸

1.将叶片臵于预冷的研钵（实验前-20℃预冷）中，倒入液氮，尽快研磨成粉末；

 目的：低温导致植物组织冻裂，方便研磨使细胞破碎，使DNA释放完全；低温情况下各酶处于低活性状态，有利于抑制DNase的作用，保护DNA。

2.将粉末加入10ml离心管中，加入 1ml预热的CTAB 抽提缓冲液，轻轻搅动摇匀；  目的：CTAB可以溶解细胞膜并与DNA结合，便于分离DNA。加入β-巯基乙醇和PVP-40的目的是减少植物中酚类物质的影响。EDTA的作用是螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制脱氧核糖核酸酶（DNase）活性，活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。Tris-HCl提供一个缓冲环境，防止DNA被破坏。高盐溶液可以更好的溶解核酸-CTAB复合物。

3.将离心管臵于 65℃的水浴中保温40分钟，期间每隔10分钟轻轻摇晃几次。 目的：水浴使CTAB抽提液和叶片充分反应。

（三）抽提去掉蛋白质

1.将水浴的离心管取出，冷却 2分钟后，加入1ml酚-氯仿-异戊醇，振荡 2分钟，使两者混合均匀，12000 r/min离心10分钟；  目的：第一次离心溶液分3层，上-中-下层：CTAB-核酸-变性蛋白-有机溶剂

2.取上清液（含CTAB-核酸）至新的10 ml离心管中，加入2ml氯仿-异戊醇，轻轻颠倒离心管，混匀，12 000r/min离心10分钟。 目的：第二次离心进一步去掉变性蛋白，去掉多余的酚

（四）沉淀核酸

1.小心取上清液（含CTAB-核酸）臵于一个新的10ml离心管中（尽量避免吸取中间层）,加入2.5ml的异丙醇（-20℃预冷），将离心管慢慢上下摇动30秒，使异丙醇与水层充分混合，室温放臵15分钟至能见到DNA絮状物；  目的：异丙醇为DNA沉淀剂，异丙醇与CTAB互溶，但不与核酸相溶。用-20℃预冷的异丙醇沉淀效果较等体积乙醇沉淀好，异丙醇约和2.5倍体积的乙醇效果相当，但核酸微溶于乙醇，使用乙醇沉淀会使部分核酸溶解损失；所以多选用-20度预冷异丙醇。核酸在异丙醇的溶解度更低，所以用异丙醇来沉淀更完全。异丙醇易溶于CTAB，但不与核酸相溶。2.10000r/min离心10分钟,小心倒去上清液。 目的：第三次离心使核酸沉淀到管底。

（五）核酸的洗涤

用400ul无水乙醇洗涤核酸沉淀直至无色，10000r/min离心10分钟，倾去上清液晾干。 目的：异丙醇不易挥发，所以用乙醇洗去异丙醇及多余的NaCl，乙醇挥发快。

（六）保存

向下层离心物中加入100μl TE缓冲液进行溶解，臵于-20℃冰箱保存，以便下次课用。 目的：一般长期保存DNA，贮存在TE缓冲液中比较好。TE为含EDTA的Tris-HCl(PH 8.0)缓冲液：其中比较关键的成分是EDTA，日常环境中不可避免的存在DNase，而DNase的活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。TE中含有的EDTA可以螯合金属离子，从而使DNase失活。而Tris-HCl的作用主要是维持一定碱性PH值，有助于DNA的溶解和稳定。不加EDTA也是可以的，而且EDTA会影响下游酶切，连接反应以及质粒转染进细胞的效率，如果接下来要做这些实验是应该避免使用含EDTA的缓冲液的。短期储存DNA也可以使用ddH2O，有助于DNA连接等效果。

八、实验注意事项

1.在整个实验过程中应严格执行无菌操作； 2.部分药品有毒，操作中应注意安全防护；

3.磨样时最好是加液氮，磨样速度要快，使材料处于低温状态； 4.刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔； 5.抽提时不要有太力振动，操作也要仔细，尽量避免DNA断裂；

6.将异丙醇吸出时用的枪头一定要剪过的，这点很重要，过尖的枪头会把DNA链弄断。

九、思考题

1.本实验中用到的各种试剂的作用是什么？ 2.本实验中进行了几次离心操作，每次的目的？

十、实验安排

全班55人，按照学号分组，每6人一组，共9组，最后一组7人。每组作3个离心管，共用一个研钵。

每3组（共18人9个离心管）共同进行离心操作。

第三篇：中药提取方法

综述中药提取方法

摘要

以中药提取方法的本质和影响提取作业的因素为理据，分析国内中药厂提取方法 关键词

中药提取方法 1前沿

近年来有关中药提取方法的论述有很多，然而有效成分的提取率仍然是现今国内中药制药工业现代化的瓶颈。尽管近年来国内在中药提取生产中推出了一些新工艺，如超声场强化提取、微波提取、超临界流体提取等，但当下的主流仍是浸提技术。浸提技术是应用溶剂提取固体原料中某一或某类成分的提取分离操作，又称固液萃取。目前在中药生产过程中，常用的中药浸提方法有煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流法、水蒸气蒸馏法等。

面对众多中药提取方法如何抉择是一个复杂的问题，因为它牵涉到生产设备和生产条件等许多因素。加上如今中药提取的规模较大，尤其考虑到连续生产，即使在实验中取得成果，在实际情况下还要经过长时间的实践检验。还有前面提到过的提取新工艺，其提取物往往是化学结构明确的物质，与传统中药生产完全是两回事，所以生产传统中药的厂家下不了决心去尝试新工艺，生产者情愿随大流，以避免风险。

提取方法的不同，提取等量有效成分所需原料和能源也不尽相同，资源和能源对世界经济和人类生存环境的影响越来越被重视。可持续发展经济和资源节约型社会的概念已经被全世界广泛认同，中国也不例外。在市场竞争激烈异常的今天，生产成本的控制就是企业的生命，而对世界能源价格上涨的现实，生产者应该节约每一滴水，每一度电。中药生产厂家必须努力挑选出最好的中药提取方法，改变目前中药提取效率低、高能耗、高污染所造成的负面影响。2选择原则

和所有的工程项目一样，选择中药提取方法必 要考虑的条件也是：被处理物料的性质、数量，产品的价值操作人员的技术水平，现实的设备安装场地，生产成本的控制，投资的预算。所追求的目标也是最高的投资回报率，最低的能耗，最简单的操作，最理想的提取率。降低生产成本，提高产品质量，从而提升本企业的市场竞争力。舍此不会有 良好的后果。3中药提取本质

中药提取本质上是一种固液萃取作业，任何化工原理教科书和化工手册对固液萃取的机理都有详尽的阐明。为了便于分析国内中药厂现有提取装置的状况，有必要将其与中药提取有关的结论摘录于此。（1）固液萃取的速度取决于二相接触介面的面积和吸附力，溶质扩散到介面的距离，溶剂的粘度和扩散系数、对溶质的选择性，萃取的温度、压力。

（2）固液萃取的萃取率取决于萃取时间、级数（同一份固相被萃取的次数）和溶剂的数量。（3）在多级萃取作业中，固液萃取的级效率取决于固相底流的反混量，以及固液二相接触的均匀程度。

（4）萃取率既定时，多级固液萃取的溶剂使用量取决于萃取过程的形式：并流、错流或逆流。（5）所谓并流是指被萃取的固体物料在每一级萃取作业中都被同一份溶剂萃取，液相的移动方向与固相在级间移动的方向相一致的作业方式。实际上是一种移动的单级萃取作业。为了保证最终的萃取推动力，萃取液成品的浓度必须相当低，所以整

个萃取过程的溶剂需用量相当大。

（6）所谓错流是指被萃取的固体物料在每一级萃取作业中都使用新鲜溶剂进行萃取，每一级都要将固液二相分离。然后把这些浓度逐次降低的各级提取液混合在一起作为成品。

（7）所谓逆流是指被萃取的固体物料在每一级萃取作业中都是被来自下一级的萃取液所萃取，固液二相的移动方向是相逆的。新鲜的液相溶剂萃取最后一级固相渣滓，而最浓的萃取液成品萃取新鲜的固相物料。不仅可用最少的溶剂量维持各级萃取所需的推动力，而且可以获得浓度最高的萃取液成品。4中药提取方法

回流法

回流法系指用乙醇等挥发性有机溶剂浸提药材成分，浸提液被加热，溶剂馏出后又被冷凝流回浸出器中浸提药材，这样周而复始，直至有效成分提取完全的方法。该法由于浸提液受热时间较长，故不适用于受热易破坏的药材成分的浸出。常用设备为多功能提取罐、索氏提取器。

滤过分离法

滤过分离法系指将混悬液通过多孔的介质（滤材），固体微粒被截留，液体经介质孔道流出，使固-液分离的方法。常用的滤过方法与设备如下所述。

（1）常压滤过

系指常压下滤过的操作。常以滤纸或脱脂棉作滤过介质，常用滤器为玻璃漏斗、搪瓷漏斗、金属夹层保温漏斗等。

（2）减压滤过

系指抽真空下滤过的操作。常用的滤器如布氏漏斗（铺垫滤纸或纸浆滤板）、砂滤棒（外包滤纸或丝绸布）、垂熔玻璃滤器（包括漏斗、滤球、滤棒）等。

（3）加压滤过

系指加压下滤过的操作。例如板框压滤机，是由许多块“滤板”和“滤框”串连组成，适用于黏度较低、含渣较少的液体加压密闭滤过。

（4）薄膜滤过

系指以薄膜为滤过介质，按薄膜所能截留的微粒最小粒径或相对分子质量，达到的滤过操作，可分为微孔滤膜滤过（微滤）、超滤、反渗透等。

微滤是指以微孔滤膜为滤过介质进行的滤过操作。微孔滤膜滤过具有以下特点：滤膜质地薄（0.1～0.15mm），孔径比较均匀，孔隙率高，故滤速快；滤膜对料液的吸附少；滤过时无介质脱落，对药液无污染。微孔滤膜的孔径范围为0.025～14μm，生产中主要用于精滤，如注射液的滤过。0.22μm以下孔径的滤膜可以滤除细菌。

超滤是指利用具有不同分子量截留值的薄膜作滤过介质，溶剂和小分子溶质可通过滤膜，大分子溶质被滤膜截留。所以，超滤是在纳米（Bin）数量级选择性滤过的技术。具有非对称结构的超滤膜孔径为l～20nm，主要滤除5～100nm的微粒。可用于中药注射剂的精制及除菌；蛋白质、酶、多糖类药物溶液的超滤浓缩等。

水提醇沉法

水提醇沉法（水醇法）系指在中药水提浓缩液中，加入乙醇使达不同含醇量，某些药物成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，固液分离后使水提液得以精制的方法。一般操作过程是：将中药水提液浓缩至1︰1～1︰2（ml︰g），（溶液：溶质）药液放冷后，边搅拌边缓慢加入乙醇使达规定含醇量，密闭冷藏24～48h，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液。操作时应注意以下问题：①药液应适当浓缩，以减少乙醇用量。但应控制浓缩程度，若过浓，有效成分易包裹于沉淀中而造成损失。②浓缩的药液冷却后方可加入乙醇，以免乙醇受热挥发损失。③选择适宜的醇沉浓度。一般药液中含醇量达50％～60％可除去淀粉等杂质，含醇量达75％以上大部分杂质均可沉淀除去。④慢加快搅。应快速搅动药液，缓缓加入乙醇，以避免局部醇浓度过高造成有效成分被包裹损失。⑤密闭冷藏。可防止乙醇挥发，促进析出沉淀的沉降，便于滤过操作。⑥洗涤沉淀。沉淀采用乙醇（浓度与药液中的乙醇浓度相同）洗涤可减少有效成分在沉淀中的包裹损失。

水蒸气蒸馏法

水蒸气蒸馏法系指将含有挥发性成分的药材与水共蒸馏，使挥发性成分随水蒸气一并馏出，经冷凝分取挥发性成分的浸提方法。该法适用于具有挥发性、能随水蒸气蒸馏而不被破坏、在水中稳定且难溶或不溶于水的药材成分的浸提。水蒸气蒸馏法可分为共水蒸馏法、通水蒸气蒸馏法、水上蒸馏法。为提高馏出液的浓度，一般需将馏出液进行重蒸馏或加盐重蒸馏。常用设备为多能提取罐、挥发油提取罐。

渗漉法

渗漉法是将适度粉碎的药材置渗漉筒中，由上部不断添加溶剂，溶剂渗过药材层向下流动过程中浸出药材成分的方法。渗漉属于动态浸出方法，溶剂利用率高，有效成分浸出完全，可直接收集浸出液。适用于贵重药材、毒性药材及高浓度制剂；也可用于有效成分含量较低的药材提取。但对新鲜的及易膨胀的药材、无组织结构的药材不宜选用。该法常用不同浓度的乙醇或白酒做溶剂，故应防止溶剂的挥发损失。

（1）单渗漉法

系指用一个渗漉筒的常压渗漉方法。操作过程是：①粉碎药材：粉碎度应适宜，一般以粗粉或最粗粉为宜。过细易堵塞；过粗不易压紧，溶剂消耗量大，浸出效果差。②润湿药粉：药粉应先用适量浸提溶剂润湿，使之充分膨胀，避免在渗漉筒中药粉膨胀而造成堵塞。③药粉装筒：渗漉筒底部装假底并铺垫适宜滤材，将已润湿膨胀的药粉分次装入渗漉筒，应松紧适宜，均匀压平，上部用滤纸或纱布覆盖，并加少量重物，以防加溶剂时药粉浮起。④排除气泡：打开渗漉液出口的活塞，从药粉上部添加溶剂至渗漉液从出口流出，溶剂浸没药粉表面数厘米，关闭渗漉液出口。⑤药粉浸渍：一般提渍24～48h，使溶剂充分渗透扩散。⑥渗漉：打开渗漉液出口接收漉液，漉液流出速度以1000g药材计算，通常每分钟1～3ml.渗漉过程中应不断补充溶剂。使溶剂始终浸没药粉。

（2）重渗漉法是将多个渗漉筒串联排列，渗漉液重复用作新药粉的溶剂，进行多次渗漉以提高渗漉液浓度的方法。重渗漉法溶剂利用率高，浸出效率高。渗漉液中有效成分浓度高，可不必加热浓缩，避免了有效成分受热分解或挥发损失。但所占容器多，操作较麻烦。主要设备为渗漉筒。

5结束语 由于条件限制，笔者没有亲自尝试文中提到的部分提取方法，这篇文章只是介绍下当今中药提取的主要方法而已。

第四篇：用户研究方法概述

用户研究方法概述

用户研究的方法和工具众多。本文从几个不同的角度对用户研究方法进行划分，并给出了一些常见的用户研究方法的概念和使用范围。

1.用户研究的态度研究方法和行为研究方法

态度研究的目的通常是理解或者获知用户使用产品的目标和观点。用户使用产品的目标揭示了用户使用产品的原因，以及用户想通过产品实现的价值；用户使用产品的观点透露了用户使用产品后的感受。常用的用户态度研究方法有深度访谈、焦点小组、卡片分类、参与式设计、问卷调查（CATI、CAPI、CLT等）。行为研究的目的通常是通过跟踪/收集用户的产品使用数据来了解用户实际使用行为，并发现问题。与用户的态度相比，用户的实际行为能显示出更多与用户有关的信息，是用户真实使用情况的表现，同时也显示用户在使用产品时的普遍倾向。常用的用户行为研究方法包括现场观察研究方法、实验室可用性测试方法、数据挖掘方法（例如兴趣偏好挖掘、行为轨迹挖掘、行为趋势预测等）。

2.用户研究的定性方法和定量方法

定性研究是从小规模的样本量中发现新事物的方法，通过与少数用户（例如10到20个）的互动来得到新想法或揭示以前未知的问题。定性研究的一般性目的是解释用户行为的原因，发掘用户的新见解。常见的定性研究方法包括深度访谈、焦点小组、卡片分类、参与式设计、现场观察研究方法和实验室可用性测试方法等。

定量研究是用大量样本来测试和证明观点的方法，通过分析大量数据，找出具有统计学意义的趋势，从而映射出全部用户的真实情况。定量研究可帮助验证通过定性研究发现的假设。常见的定量研究方法则主要是前面提到的问卷调查方法和数据挖掘方法。

3.用户研究的显意识方法和潜意识方法

前面1和2提到的用户研究方法绝大多数属于显意识的研究方法，不再赘述。现在已经开始有学者研究潜意识的用户研究方法，其基本观点是用户的行为只有5%是由显意识决定的，剩下95%是由潜意识决定的（可能有些夸张）。潜意识研究方法包括隐喻引诱技术、图片投射技术、内隐测量方法等。目前这些潜意识的研究方法更多见诸学术论文，在产品设计开发中的应用案例还比较少。

下一篇文章将对前面提到的这些方法的基本概念和适用范围进行归纳。

网站用户行为分析在用户市场领域的应用

【导言】在全球范围内，网站用户行为分析仍然是一门新兴发展的科学，其方法和实践是在近几年才系统理论化的。在实际应用中，网站用户行为分析博得了很多的好奇，但好奇背后，人们也为她注入了各种想象：网站用户行为分析能带来哪些商业价值？哪些用户行为是值得关注的？网站用户行为分析是如何辅助产品运营和营销分析的？她能给我们何种启示？

本文结合研究院用户行为实验室在现网运营的门户网站中的实践经验，提炼一些主题应用与大家分享和探讨网站用户行为分析的魅力！

一、网站用户行为分析的价值

网站是一个立体的系统，从不同的角度看过去，得到的是不同的结果，每个点击背后都蕴藏着行为。网站用户行为分析便可通过网络数据剖析人们特定的网络行为，揭示人们内心需求、网站访问量的上升和下降、网站访问的群体细分以及用户群的访问意图。其价值体现在：

1、了解用户在你的网站如何交互：用户在站点上做了些什么？用户来自哪里？连接方式如何？用户的兴趣是什么？用户很快离开是因为导航

不好么？

2、有助于建立数据驱动的文化，辅助市场运营：判断是否实现了预期目标，提升ROI；定位忠诚活跃用户以及访问趋势；评估广告宣传效果和活动推广效果；为专业化的运营支撑提供及时有效的行动建议。

3、优化网站使之更好地实现商业目的：这是网站分析的终极价值，包括优化网站结构和页面质量、优化流量来源、增强用户体验和满意度，以及提升最终转化。对于推进网站精细化、差异化运营目标，有助于长期的客户保持、营销优化和利润最大化。

二、网站用户行为分析过程

网站用户行为通过对目标页面进行插码和日志收集分析，实现了一种对细分流量的定量分析手段。但她不太关注数据的精准性，更关注数据的变化趋势。

第一阶段：流量分析。关注内容包括PV、Hit、UV、Visits、Bounce Rate、驻留时间、进入页面等；

第二阶段：行为分析。关注内容包括点击密度、频次统计、路径分析、目标转化率和来源分析；

第三阶段：优化智能分析。关注内容包括细分用户、忠诚度、活跃度、ROI、渠道影响、兴趣主题等。

三、用户市场领域应用

目前应用广泛的站点类型包括：电子商务、营销站点、内容站点、垂直门户、办公自助等。围绕各自的商业运营目的，网站用户行为分析的目标也有所差异，如电子商务这类网站最终的目标是增加成交量，以带来更多收入，因此分析重点就包括增加网站流量及质量、优化网站结构以提升用户体验和促进用户的转化等；而垂直站点的目标就是提升流量和用户粘性，因此分析重点包括目标用户定位、兴趣热点分析、站点营销推广、路径导航优化等。

我们针对自主移动互联网产品和大型门户站点的现网运营支撑需求，结合用户调研、用户行为挖掘等方法在以下一些应用场景进行了积极尝试，探索得到了用户市场领域的有价值发现。

1、产品体验提升

a)分析用户点击热点，发掘最佳广告位和最受欢迎版块内容，增强宣传体验

b)了解用户使用习惯，优化流程导航和布局优化，增强用户

粘性和页面深度，降低跳出率

2、精准营销推广

a)监测站外搜索、邮件、跳转、嵌套链接等推广效果，发掘

最佳渠道，提升ROI

b)解读渠道客户转化/流失原因，辅助市场运营

c)基于目标用户行为精准推荐，提高业务办理成功率和办理

量

3、用户市场定位

a)挖掘用户来源，了解网站用户分布和活跃忠诚程度

b)细分有价值用户群，描述目标用户画像

c)发现潜在目标用户

4、内容需求获知

a)分析用户访问需求，如搜索、浏览、评论、个性化等

b)挖掘用户兴趣主题偏好分布，刻画不同维度需求

c)发现意见领袖和内容传播模式

d)跟踪内容热点，及时有效响应市场需求，提升竞争力

用户偏好分析——理性 or 非理性？

传统西方经济学对偏好的研究是遵循一定的定义和公理体系的。我们将所有可能的（能够实现的和不能够实现的）可供消费者选择的方案定义为选择集X，偏好关系用于定义选择集中任意两个元素（即两个消费选择方案）或由选择集中的元素任意组成的两组元素集合（即两组消费组合选择方案）之间的关系，具体定义如下：

1.如果X1>>X2，则对消费者而言，“X1远比X2好”；

2.如果X1～X2，则对消费者而言，“X1与X2差不多，难以取舍”；

3.如果X1≥X2，则对消费者而言，“X1比X2略好，至少两者一样好”；

基于上述非正式的定义，有如下公理：

公理一：（完备性公理）对于选择集X中任意两个元素或元素集合X1和X2，总有上述三种关系之一成立；该公理的经济学解释就是用户总是在不同的选择中做出偏好和倾向性判断的。

公理二：（传递性公理）对于选择集X中的任意三个元素或元素集合X1，X2和X3，如果X1比X2好，同时X2比X3好，则X1比X3好；该公理的经济学解释就是

用户的消费选择行为是可以推理的，有利于用户做出最优选择。

公理三：（自反性公理）对于选择集中的任意元素或元素集合X，存在X≥X；也就是一项选择至少会和其本身一样好。

但现实中用户基于自身偏好所做出的实际消费行为并不一定都是严格意义上理性的，往往还会受到下列因素的直接影响：

1、外界环境及舆论的影响；

2、从众心理；

3、特定刺激下的冲动；

4、追求特殊意义和价值；

除了严格意义下的理性偏好以及种种原因引起的非理性偏好之外，现实生活中还存在着大量表面看似理性，实际是非理性的消费行为和活动。

在传统的经济学中，一个基本的前提和假设是出于经济活动中的个体是完全理性和自利驱动的，他们会利用自己所掌握的相关信息来比较全面的评估各种选择在未来的可能性和回报，通过最大化基于自利的期望效用，从而做出选择。但这样的假设与人们实际的经济行为和活动往往是不相符合的，人们的处境、经验阅历、知识水平等各方面的差异，使得人们的决策和选择偏离传统的理性决策模型。

2002年获得诺贝尔经济学奖的美国普林斯顿大学卡尼曼教授便是该领域研究的开创者。他从心理学的角度探讨和解释了符合传统经济学理性人所作的理性自利行为所蕴含的非理性。

卡尼曼教授的贡献在于将心理学研究的成果与经典的经济学问题相结合，并特别研究和探讨了不确定状态下人们的决策和判断的过程，揭示了在不确定条件下人们决策过程中对理性偏离的原因与性质，也指出了这种对传统模型偏离的非理性是有章可循和可预料的，这也就为行为经济学和金融行为学的规范深入的研究奠定了基础。

用户偏好分析——效用是“因”还是“果”？

波普尔的哲学理论认为，所谓科学必须是可以被证伪的，也就是能够被经验所反驳，即原则上能够被一个或一组可能的观察陈述所证伪(而不是指它们实际上被证伪)。换句话说就是科学不能也不应该在肯定的意义上被建立起来，而应该是在基于经验检验的否定意义上被建立起来。而传统的西方经济学主流理论把“偏好”与“效用”演绎成纯粹的数学公理，使其失去了经验检验的可能，也就是从波普尔理论的意义上失去了科学的基础。现代西方经济学效用理论目前普遍将“效用”看作是“偏好”的一种可利用函数度量的外在表现形式。

国内学者叶航为了重新构建效用理论的经验基础，根据现代生理学和心理学的研究，把偏好定义为“在一定外部条件下，能够重复出现并引发某种特定行为倾向的生理或心理上的不平衡状态”，而把效用定义为“随着偏好的满足，行为主体在生理或心理上由不平衡向平衡转化时所产生的一系列表征与感受”；正如实证经验所显示的：如果“偏好”得不到满足，人体内部的平衡系统便会受到破坏，由此造成一系列生理或心理压力，当压力超过一个阈值，人就会产生行为的动机，进而通过一定的行为来实现自己的偏好，以舒缓身心的紧张状态； 因此，“偏好”与“效用”可以看作一种行为主体控制自身行为的生理和心理上的负反

馈机制，这一视角不但与现有的效用理论没有冲突，而且恰恰可以为其提供一个坚实的经验基础。（参见叶航：“西方经济学效用范式批判”载《经济学家》2003年第1期）

在用户偏好分析中，效用是指用户从选择并消费相关产品或服务的过程中心理上所感受到的满足和实际中得到的效果回馈。总效用是指用户在一段特定的时间内选择并消费一定数量的相关产品和服务所得到内在、外在效用的总和。边际效用是指用户在某一时间内增加消费一个单位的产品或服务所增加的效用。

效用的度量和研究主要包括基数效用和序数效用两方面，基数效用理论认为效用是可以度量和计算的；而序数效用理论是指用户不能清晰的说出自己对某种产品或服务偏好强度的具体大小，即不能说出效用的数值，但是用户可以说出偏好的大小排列顺序，于是可以用这个排列顺序来表示效用和偏好水平的高低。

基于效用理论，我们可以构建能够反映刻画偏好选择所带来的实际效用的效用函数，并可利用效用函数对比效用和偏好的大小或者排序关系。

西方经济学中关于效用理论的发展大致有三条主线贯穿其中：

1、从绝对效用价值论到相对效用价值论；

2、从主观效用价值论但客观效用价值论；

3、从基数效用价值论到序数效用价值论；

同时这三条发展主线在不同的历史时期和发展阶段相互交织和影响，互为借鉴彼此消长，共同推动着效用理论在深度和广度上的发展。

无差异曲线是用来表示给用户带来同等程度的效用水平的两种相关产品或服务的各种不同程度和数量上组合的轨迹曲线，该曲线只是直观的表明用户偏好和效用的水平，并不表示偏好和效用的具体数量或数值。由于同一条无差异曲线上的不同的点代表了能够带来相同总效用的不同商品的程度和数量上的组合，因此无差异曲线也可以叫做等效用曲线。不同的用户的无差异曲线反映着他们的不同偏好。

无差异曲线有如下一些特性：

1、在同一坐标系（相同的两种产品或服务）下的多条无差异曲线中，位置较低的无差异曲线代表较低程度的效用水平和偏好水平；

2、任何两条无差异曲线不会相交；

3、无差异曲线从左上方向右下方倾斜，曲线的斜率是负值；

4、无差异曲线凸向原点，从左至右斜率的绝对值是逐步递减的；

第五篇：文献搜索方法概述

文献搜索方法概述

[ 日期：2007-1-25 ] [ 来自网络]

一、文献密码搜索的方法概述

文献密码搜索的方法精要总结如下: 1.google是密码搜索的利器

2.标准检索表达式:杂志名(数据库名)+password+username 3.检索表达式的变异(pw，pwd等衍生词)4.冗余信息的去除(-NEED)

5.密码的区域性问题(site:EDU，KR，TW)6.文件类型限制

7.INTITTLElink等限制的妙用

8.著名杂志带其他杂志

9.逆向查找:安全,原理简单.但全人工,烦琐,管理和调度技术有待于完善

二、文献缩写－全名自动查询系统

使用方法：

方法一：

将缩写输入查询框内，按“search”就可以了。注：不需把缩写后的“.”号输入，但每个缩写单词间要空格。

网址： http://jake.openly.com/

方法二：

采用耶尔大学的杂志缩写查询系统：

网址：http://info.med.yale.edu/library/journalfinder/

方法三：

生物工程类杂志缩写专用搜索器：

网址：http://darwin.nmsu.edu/~molbio/bioABACUShome.htm

方法四：

生物医学类杂志缩写专用搜索器：

网址：http://library.med.ohio-state.edu/abrv/

方法五：

Medline杂志缩写专用搜索器：

网址：见下跟贴

这里还有个杂志全名与缩写对照的文件供下载： 请登陆

绝对盗版google----供google扬名

http://www.xiexiebang.com/

如何找到powerpoint图片？如何找到一些讲座的资料？

方法简单：输入一个关键词，然后找相关的PPT资料，如找transgenic资料可以：transgenic filetype:PPT

这时可以搜索出大量结果，但这并不完成，可以粗略看看什么内容，然后再看看来源什么网站，寻根求源，可以获得大量相关信息，因为许多讲座不是一个PPT组成，而是由一系列PPT，这样可得到一些较完整的资料。

幻灯片是重要资料来源，不要忽视！

十三、Bioon新讲座----有机检索理念

为什么又要谈检索，不是因为我有什么新发现，而是我与一些检索高手和新手交谈后，发现了很多问题，如重复检索，需要的时候却检索不到，只了解一些文献数据库，对其它数据库却不了解，密码和代理资源严重枯竭......等等。因此感到很忧虑，于是有感而发写的，希望大家能树立新的检索方式和理念，改变上述现状。谈到检索，大家第一想法是查文献，有人便认为是找数据库，有人说是pubmed，都不完全对。检索是一种举动，从最初不懂到懂，这需要一个过程，但许多战友检索水平高了，会找密码和代理了，便认为自己天下无敌了，其实不然，这不是真正的检索高手，真正的检索高手，应该是全方位地了解检索，全方位地、高效地运用你的检索技巧，正如以前一句话：检索让你的生活变得轻松起来！打个比方，为什么检索水平越高，在检索上花的时间反而越多？而且随着你的检索水平提高，你获得文献的速度并未成正比？因为我们都有一些不良的检索习惯，因此今天我倡导的是一种新的检索理念---“有机检索”或叫“生物检索”。这也是我通过长期文献检索获得的经验和教训，希望大家能此为起点，达到一个更高的高度，那么我的目的便达到了。

为什么叫有机检索或生物检索呢？强调的是有计划，有组织，协调检索过程，使检索变得简单化，高效化，为工作和学习带来更多的便捷。

首先应该了解为什么要检索，什么东西需要我检索，在什么地方检索？如何高效率地检索到自己的所需？如何应对检索不到的文献和资料？检索后应该怎么做？

具体说一说，希望大家看完这里内容后，能反思一下，自己过去的检索方式，能否需要进一步改进一下？ 检索的第一步是为什么要检索？检索是工具，是学习和工作的工具，为更好的学习和工具提供指南，因此我这篇的名字也叫指南针，即源于此。什么东西需要检索？大家多认为是文献，paper。不完全正确，我们真正需要的东西，只有一部分是paper，更多的是其它的东西，这些东西同样需要检索！同样值得重视。因此在检索之前你就应该思考，我检索什么东西。

打个比方，我想作一个PPT，想找一个“cell”或一个mitochondria，那么你怎么找？至少有以下一些答案：

（1）在google上找图片，输入关键cell，OK很好，找到很多你需要的，很方便。但众所周知原因，google搜索到的图片，很难打开很多。

（2）输入cell filetype:PPT，在google中找，找到专业的PPT作参考。OK，也是好方法之一。（3）去pubmed,sciencedirect,OVID上去找最新的paper，然后从paper中挑出好看的图作参考。我想以上几种方法都可以实现，但都不是理想的方案，你至少要花一定的时间，可以说你都不是很高效的检索手段。因为有时会存在一时找不到合适的东东的现象，为此许多大虾很迷茫，甚至说昨天我还找到了，怎么今天老找不着呢？搜呀搜，还是找不到！我想大虾级人物经常会遇到这些情况，如果你有，表明你应该更改一下你的搜索理念了。在什么地方检索？当然在数据库。不，在数据库，以及互联网上其它一些地方。大虾级人物可能不以为然，当然了，找全文，可以在数据库中找，可以通过google搜索PDF文件,可以到作者的个人主页上找，或所在研究单位去找，还可以用email去要，也可以去生物谷等网站去求助，还可以找图书馆馆际互借......，但如何有机地处理这些方式，以达到最快找到你所需的东西？方法千万种，但我们需要的是最快的一种！这便是有机检索的精髓。

如何达到有机，或高效率检索？

其一，在知识层面上要了解全球数据库的概况，使检索具有方向性和合理性。

需要大家熟悉全球大的数据库（不包括个人主页等检索方式了），数据库不仅是文献数据库，如OVID,sciencedirect, human press, blackwell, BP,ACS,CA,BA,还包括专业数据库，如疾病数据库，基因和蛋白质各种数据库等等，这里列了较齐全的数据库集合吧Article_Class.asp?ClassID=48，只要找对合适的数据库才能达到有效地检索。如果大家都能对数据库有个大概了解，我想，你的检索水平已经足够高了。当然，检索内容还包括用google对图像，PPT，PDF，等检索（下一代检索也许会用微软的longhorn的新的检索工具了），因此要求大家对检索知识有个初步的掌握，我想我们论坛中有足够多的教程，尤其是入门教程供参考了。千万不要忽视这些入门的东西，对检索高手来说，常温习这些知识同样重要！因为这是检索的基础。

其二，检索不要贪多，一定要精，使检索达到最简化和最优化。尤其是检索文献，有人喜欢一次性下载一两百篇文献，所谓“通吃”，最终看了多少？十有八九是浪费！paper是用来读的，不是用来收藏的。如何高效地检索也包括这一点：只要必需的！不是必需的，不必找！同时看paper只看重要的paper，一般的，或比较差的paper最好少看，有时会误导你的思路的。看时要做标记，并且进入你的数据库，至少今后你会大概的印象，你读过这些文献没有？另外，经常见到网上有人求助没有电子版的文章，或一些偏僻的杂志的文章，我不说这些文章一定没有价值，至少大部分时候，我们都可以将这些文章价值忽略！并不是自己必需要的东西，如果没有也不必可惜和遗憾！多读重要的，有创新的paper（大多网上有电子版）。同时也没有必要每一篇都读过去，只读特别相关的，了解一些周边的信息。文献读多了，会被文献套牢了，你没有思路了。相反，一篇好文献，值得你反复回味，多读数遍都可以，一直到读懂，读透为止。

其三，要求一次检索服务终生，使检索效率达到最大化！这便是高效！许多朋友在需要时便检索，检索完毕，东东就没了，或者不知道放到哪了，或者随手扔了，下次需要时再检索。但一定要知道，有时候当你需要的时候，它并不容易被你检索到。如何避免这种情况呢，这便是我讲的重点之一。

建立自己的数据库是达到有机检索的重要方法之一，也是检索后应该做的主要事情！personal database，或private database。将你所查过的有用信息（因为你现在查了，如果你学习和工作的方向不变，将来可能还会有用），尤其是精华的，有用的信息，及时进行归类整理，相信时间长了，自然便有了自己的小数据库，如果要查什么内容，首先想到的是自己的数据库，如果刻盘，可以随身携带，多么方便快捷，即使不能上网的地方也可以用！其实我们只要细心，就会发现网上有许多试用数据库和免费的内容，但过一段时间后便不免费了，那时再想查这方面文章，就来不急了，甚至你以前查到的内容现在没有了，难道不可惜？如果建立数据库后，便不存在烦恼了。

如何建立自己的数据库呢？我讲一点我个人经验供参考。可以在硬盘（不要在C盘）设立一个文件夹，可以进行分类(最好用英文名），如image, protocol,PDF,Note等，然后分别建立下级文件夹，如在image中建立cell, DNA, human, animal, disease等，Protocol 中建立Immune, molecular biology, cellular biology, biochem...，以供实验使用。这个看自己的专业需要而定。而PDF文件，我希望所有的求助者和应助者都应养成一个良好习惯！

所有经过你手头的文献都要入库！建议文件采用reference manage或endnote软件进行管理，并进行适当地分类，按软件的编号给你的文献编上相应的序号（如1.pdf, 2.pdf, 3.pdf...)，并将文摘导入到软件中（可以直接导入，如果不会用，可以去下载中心下载软件说明书，很快便能学会）。录入时每篇花个几分钟，这样随时间积累，你的数据库将越来越大，这样查找起来非常方便，只要知道关键词或某个词，便能发现不仅仅是一篇你需要的文章，而是很多，应助别人，帮助自己，都很方便。