第一篇：免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结
免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结
1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。
2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。
3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。
4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。
5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。
6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程，成功有时也加快你自傲。
7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那，这是因为我经过了反复的动手+动脑，把理论原理运用于实践，在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决，最终把理论与实践融会贯通。
一、概念和常用方法介绍
1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。
2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。
3、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。
4、目前几种常用免疫组化方法简单介绍
1）免疫荧光方法是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。
2）免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。
3）免疫胶体金技术免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。
5、被检测的物质 组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激 素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
6、特点 1）特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应。2）敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP三步法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。3）定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。
7、从蛋白水平检测角度，免疫组化技术与Western blotting、ELISA的异同1）Western blotting：蛋白质免疫印迹，也是利用抗体抗原反应原理，结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比，定量可能更加准确；当然Western blotting也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位），但敏感性远远低于免疫组化技术。2）ELISA：酶联免疫吸附试验，也是利用抗体-抗原-抗原结合反应原理来检查体液或组织匀浆中蛋白含量的检测。与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一。
二、实验流程简介
1、SP三步法
1）石蜡切片，常规脱蜡至水。2）0.3%或3%H2O2去离子水（无色液体）孵育10-30分钟，以灭活内源性过氧化物
酶活性。3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟4）候选步骤：采用抗原修复：微波（建议30分钟内4次中火）、高压、酶修复方法。自然冷却，再用3分钟×3次.5）血清封闭：室温15-30分钟，尽可能与二抗来源一致。倾去，勿洗。6）滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2~3小时或4℃过夜（最好复温）。PBS冲洗，3分钟×5次。7）滴加生物素标记的二抗，室温或37℃孵育30分钟-1h。8）PBS冲洗，3分钟×5次。9）滴加SP（链霉亲和素-过氧化物酶），室温或37℃孵育30分钟-1h。10）PBS冲洗，3分钟×5次。11）显色剂显色（DAB等）。12）自来水充分冲洗。13）可进行复染，脱水，透明。14）选择适当的封片剂封片。
2、即用型二步法 1）脱蜡、水化组织切片。2）根据所应用的一抗的特殊要求，对组织切片进行预处理。3）0.3%或3%H2O2去离子水孵育5分钟-30分钟，以阻断内源性过氧化物酶，PBS或TBS冲洗。4）滴加一抗，室温或37℃孵育30~60分钟，或4℃过夜，PBS或TBS浸洗3分钟×5次。5）滴加enhangcer增强剂，37度30min，PBS或TBS浸洗3分钟×5次。6）滴加通用型IgG抗体-Fab段-HRP多聚体，室温/37℃孵育30分钟-1h，PBS/TBS冲洗，3分钟×5次。7）应用DAB溶液显色。8）蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明、封片。
三、免疫荧光技术
1、免疫荧光方法中的重要环节 1）冰冻切片制备：建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。2）组织切片固定：切好片风干后立即用冰西奈山环保组织固定液固定5-10min，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。3）血清封闭：为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用血清（与二抗来源一致）封闭，减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的，一般10-30min。4）一抗孵育条件：在免疫组化反应中最重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。具体条件还要摸索。5）二抗孵育条件：二抗一般室温或37度30min-1h，具体时间需要摸索，而浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度，切记要避光反应。但在免疫荧光中我们一般先把二抗浓度和孵育时间先定下，然后去摸索一抗浓度和孵育时间。最后，荧光素标记的二抗随着保存时间的延长，可能后有大量的游离荧光素残留，需要注意配制时小包装和并进行适当的离心。6）复染：目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位。一般常用DAPI复染。7）封片：为了长期保存，我们一般用缓冲甘油等封片，此外还有专门的抗荧光萃灭封片液。避免产生气泡，方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一拐角，而另一手拿对面的那个拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低另一拐角，这样一般不会产生气泡。8）切片清洗：为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗（延长时间和增多次数）尤为重要，我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。注意（1）单独冲洗，防止交叉反应造成污染。（2）温柔冲洗，防止切片的脱落。我喜欢用浸洗方式；（3）冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。（4）PBS的PH和离子强度的使用和要求。这方面我有惨痛教训，当时我买的抗体稀释液偏酸，结果背景一片黄（未见特异性染色），建议PH在7.4-7.6浓度是0.01M。（中性及弱硷性条件（PH7-8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）9）拍照：有条件的话最好立即拍照，若不能及时拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和湿度。使用荧光显微镜注意严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序；应在暗室中进行检查；防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜；检查时间每次以1~2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3~5min后，荧光也明显减弱或褪色；激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象；所以最多不得超过2~3h；荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再启用时，须待灯光充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。关闭汞灯至少在开启15-30分钟后；标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发；使用的玻片等载体，都必须厚度均匀，无明显的自发荧光，如果使用油镜，还必须保证镜油为无荧光镜油；电源最好装稳压器，否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命，也会影响镜检的效果。
已有的常见免疫组化难题集锦
1、石蜡切片和冰冻切片的比较？（1）要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。（2）冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。（3）石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80度的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的的切片，为了防止RNA降解，保存一贯很重要。由于石蜡切片可以切到4微米左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
2、一抗的选择要点和技巧是什么？（1）单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。（2）应用范围的选择。有的一抗只能用于Western blotting，或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至表明石蜡切片或冰冻切片。（3）种属反应性的选择（species reactivity）。这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。(4)种属来源，一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。(5)生产厂家的选择。如santa Cruz公司抗体一般1ml，价格2100元左右；而chemicon公司一抗一般100ul，价格2800元左右。这两个厂家的同一种抗体它的实际效价稳定是不同的，我一般用后者抗体做免疫组化效果较好，而前者做Western blotting效果还可以。
3、在什么情况下使用TritonX-100？（1）Triton X-100化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚，是一种去污剂。在免疫组织化学(>10um厚切片)和免疫细胞化学中一般用Triton X-100 作为细胞通透剂，在膜上打孔。（2）其作用原理：Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，故在细胞免疫组化时尤为推荐使用，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。（3)Triton X-100既是一种表面活性剂，也有抗氧化作用，具体参阅： http://www.xiexiebang.com/bbs/post/view?bid=68&id=12301317&sty=1
4、封闭血清的选择原则是什么？（1）膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性！（2）封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。（3）也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。
5、抗体孵育条件的比较？（1）一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。（2）二抗一般室温或37度30min-1h，具体时间需要摸索。
6、一抗4度孵育后为什么要进行37度复温？（1）一方面，防止切片从4度直接放入PBS易脱片；（2）另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要,但对表达较弱的抗原可能有用,4度和37度时分子运动方式不同,前者分子碰撞机率和运动速度小于后者,后者结合更快,但敏感性也提高了并易造成非特异染色。（3）其实，我更赞同后一种说法，因为我尝试把肝脏或睾丸片子从4度过夜拿出后，直接用PBS洗没发生过脱片现象。事实胜于雄辩！
7、DAB显色时间如何把握？（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；（2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；（3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；（4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短（最好一抗4度过夜）；另一方面就是封闭时间过长。
8、免疫组化结果如何分析？（1）阳性着色细胞计数法。在40*光镜下，随机选择不重叠的10个视野，人工或机器计数阳性着色细胞，每组3~6张不同动物组织切片，然后进行组间比较即可。（2）灰密度分析法。通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析，然后进行统计分析即可。（3）评分法。通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度（0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色）、阳性范围进行评分（1~4分为0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），最终可以分数相加，再进行比较。对于以上这几种方法，各有利弊，请细心选择。要想得到正确结果的前提是你要做出着色均匀、背景很浅的高质量切片。
9、在什么情况下进行组织抗原修复，抗原修复的条件是什么？（1）由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。（2）修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH的等）。（3）微波修复，我们一般用6min*4次，效果不错。
10、内源性过氧化物酶的灭活时间和浓度是什么？（1）一般3%过氧化氢灭活时间短点，可以10min左右；而0.3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间，一般10~30min。（2）用西奈山环保组织固定液配置过氧化氢比双蒸水或PBS能更好保护抗原和固定组织作用，过氧化氢孵育时间过长易引起脱片。（3）现用现配，配好后4度避光保存。
11、如何才能充分脱蜡？（1）蜡不溶于水，如果脱蜡不干净，少许蜡存留于切片上，将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题，切片在染色前必须彻底脱蜡，目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯，因它脱蜡力强，脱蜡时间较短；（2）脱蜡的时间要根据季节，室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天，室温较高，脱蜡试剂也新鲜，则脱蜡时间不需很多，3-5分钟就已足够。如果在冬天，室温较低，脱蜡试剂也较陈旧，则脱蜡时间需要延长，10-20分钟或更长。（3）当天切的切片，烧烤2小时后进行染色，切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程，如果预先切好烤好的切片，在染色前，还必须对切片进行加温10-20分钟，然后再行脱蜡，这样脱蜡速度加快，效果魁伟更好。总之，操作时应根据不同的季节，不同的室温，不同的试剂来决定，脱蜡的时间，原则上是要彻底、干净、完全地脱去切片上的蜡。
12、如何最大限度地降低组织非特异性染色？（1）缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。（2）一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。（3）内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；（4）非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；（5）缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等；（6）适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要；（7）防止标本染色过程中出现干片，这容易增强非特异性着色。
13、苏木素复染时间的把握？（1）苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况，一般数秒-数分钟。不过这个如果染色不理想可以补救的。即：染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。（2）盐酸酒精是分化，氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗，然后置于盐酸酒精中数秒（一定动作要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返兰即可。（3）如果分化的颜色过浅，可以复置于苏木素中染色。
14、PBS的清洗方式选择、次数和时间的选择？（1）单独冲洗，防止交叉反应造成污染。临床上每天检测的病例很多，所用的抗体种类及项目也多，如果在加入一抗孵育完后，将它们在一个缸内洗，这样就会造成交叉污染，影响最后的结果。正确的做法是单独地进行冲洗，冲洗的PBS为一次性，保证切片没有相互交叉污染的机会。（2）温柔冲洗，防止切片的脱落。冲洗切片，取出切片，将PBS从上轻轻地冲洗，让PBS自上而下流下来，不要拿起切片将PBS对准切片冲洗，这样由于冲出的PBS有一定的冲击力，很容易使切片周边引起松动，导致切片的脱落。（3）冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。冲洗切片有人提出用微振荡器振染，振下未结合的各种物，使之不产生背景，此种做法一是浪费时间，二是很容易导致切片的脱落。切片的冲洗据实践认为，用一小烧杯柔和地于切片上冲洗，就能彻底冲洗去未结合的物质，无需附加其它条件，冲洗好于切片上再注入PBS，持续2分钟左右就完全足够了。（4）PBS的PH和离子强度的使用和要求。刘彦仿指出：中性及弱硷性条件（PH7－8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解。免疫组化PBS我们目前常用的PBS的PH在7.4-7.6浓度是0.01M，根据本室十几年来的使用情况，认为该溶液价格便宜配制方面，使用效果好。（5）常用试剂的配制和使用。在免疫组织化学的染色过程中，用得最多的试剂就是缓冲液，因为切片在整个染色中，抗体的加、换、切片的冲洗，DAB的配制都离不开缓冲液。可见缓冲液在整个染色中都起至关键的作用，缓冲液的过酸或偏碱，都将影响染色的结果。
15、脱片产生的原因和如何防止脱片？（1）多聚赖氨酸玻片质量的问题。我原先是买的，迈新按说也是不错的，可是都脱成什么样子了。后面补做第二批时用的病理科老师自己做的片子，要好一点。（2）组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切的厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。（3）组织的问题，我用的组织癌症的很多，越是癌症组织有坏死之类越容易脱。（4）没烤好，时间短温度不够之类。（5）操作的时候甩的太猛了，有脱片嫌疑的片子最好不甩或轻轻甩，用卫生纸从边缘上慢慢吸水。（6）修复的问题：抗原修复的时候高压时间过长了，或者放进100度的修复液时手法不好，咚的一声就丢进去了，这样超容易脱片。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片，但是你要用到EDTA的时候也没办法，只有从另外的问题上着手。（7）此外，一旦见到有组织漂起来操作就更加要谨慎，用PBS的时候尽量用泡的，不要冲。基本上把这些方面都注意到了，能改善的尽量改善，脱片可以减少很多。
16、背景染色较深的原因有哪些？（1）抗体浓度过高：一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。（2）抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执行操作规程，最好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的时间不是传统的1小时，而是30分钟，因此，要根据染色结果进行调整。（3）DAB变质和显色时间太长：DAB最好现用现配，如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长，因为在没有酶的情况下，过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色最好在显微镜下监控，达到理想的染色程度时立即终止反应。不过当染色片太多时或用染色机时，这样做似乎不现实，但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控，避免显色时间过长。（4）组织变干：修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因。解决的办法是操作要认真仔细，采用DAKO笔或PAP Pen在组织周围画圈，可以有效的避免液体流失，也能提高操作速度。（5）切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长（大于24小时）：原因上不清楚，但现象存在。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复，第二天加抗体进行免疫组化染色，如果将装有切片和修复液的容器放在4ºC冰箱过夜，对结果无明显影响，如果放在室温，特别是炎热的夏天，会出现背景着色，因此，不可存放时间太长。（6）一抗变质、质量差的多克隆抗体：注意抗体的有效期，过期的抗体要麽不显色要麽背景着色。用新买抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。
17、苏木素复染后氨水返蓝这一步如何做、浓度多少、时间多长?答：返蓝可以用碱性溶液（PBS/Na2HPO4/淡氨水）或45度温水、冷水蓝化均可。一般蓝化5~10 min。淡氨水有人用50ml自来水＋三四滴的氢氧化铵
第二篇：最新党政机关公文处理的常见问题总结
最新党政机关公文处理的常见问题总结
处理公文总是要面临许多细节，很难全部在国家标准中找到答案，而即使反复阅读过相关的规定，实际工作中还是难免会犯错，因此，结合GBT9704-2012†党政机关公文格式‡†公文处理案例精选‡和我个人在实际工作中的经验，我将网上前人的经验总结重新整理了一下，删去了不符合2012版国家标准的部分，补充了一些新的内容，希望能对各位同行的工作有所助益。
一、行文中的常见错误
滥发文件。主要表现：（1）所发公文属可发可不发之列；（2）所发公文只是照抄照转上级的公文（翻印即可，不必转发）；（3）所发公文内容空洞，无具体措施，不解决问题；（4）行文所涉及的问题可用口头请示、汇报或开会等形式解决；（5）行文所涉及的内容已在报上全文公布过；（6）在部门之间意见分歧，未经协商取得一致时就行文。
二、文种使用中的常见错误
1.自制文种。在正式文种之外，随心所欲，生造公文文种并俨然以正式公文行文。常见的有：‚请示报告‛‚工作思路‛‚情况‛、‚汇报‛‚申请‛‚郑重声明‛等。
2.误用文种。把属于机关其他应用文，特别是事务文书中的文种，误作为正式公文文种使用的情况。常见的有：把计划类文种‚要点‛‚打算‛‚安排‛‚设想‛等作为公文文种直接使用，如†××市委××××年工作要点‡。把属于总结类的文种‚小结‛‚总结‛，以及把属于规章制度类的文种‚办法‛‚规程‛‚须知‛‚实施细则‛等作为正式文种直接使用。但是，如果将上述应用文用转发或印发通知的形式发布，则是规范用法。如‚××市人民政府关于印发市政府1997年工作要点的通知‛。
3.越权使用文种。超出本机关的权限行文，如随意制定‚条例‛。实际上‚条例‛只能用于党的中央组织制定规范党组织的工作、活动和党员行为的规章制度；按照国务院办公厅发布的†行政规范制定程序暂行条例‡的规定，在行政机关公文中，‚条例‛只能应用于特定国家机关制定的法规中，即全国人大常委会制定的法规，国务院制定的行政法规，地方人大及其常委会制定或通过（批准）的地方性法规。如：†中华人民共和国城市道路管理条例‡。基层单位制定有关规章制度时可用‚规定‛或者用‚细则‛、‚办法‛等应用文种，并用转发或印发通知的形式发布。
三、签发人标注中的常见错误
1.上行文未标注签发人姓名
2.下行文也标注了签发人姓名
四、公文标题中的常见错误
滥用标点符号。除法规规章名称外，公文标题中一般不加书名号。常见非法规、规章名称用了书名号，如†关于认真贯彻„×××决定‟的通知‡、†关于批转„××××报告‟的通知‡、†关于„××××请示‟的批复‡，标题中加书名号是错的。
标题中标点符号使用应注意以下4点： 1.法律、法规、规章名称全称应加书名号。
2.如果在事由部分出现多个机关、人名等并列时，每个机关名称、人名之间应用顿号分开，不使用空格。
3.公文标题中出现缩略语时，用引号。如：
国务院批转中国残疾人事业‚十一五‛发展纲要的通知
4.公文标题或某一部分需要注释时，加括号。如：
国务院办公厅关于加快煤层气（煤矿瓦斯）
抽采利用的若干意见
正确使用‚关于‛。以下2种情况的公文标题应该加‚关于‛。1.没有‚关于‛，标题中的公文制发机关与事项形成主谓关系，引起歧义。如：†国务院办公厅关于违规修建办公楼等楼堂馆所案件调查处理情况的通报‡（国办发“2007”41号），这里的‚关于‛一词起到避免‚违规修建‛的主体是‚国务院办公厅‛的作用。
2.标题不能全面概括文件内容时使用‚关于‛。有些公文，其内容相对比较复杂，难以用一个简短的标题全面概括出来，于是选择其最能反映公文主题的内容作为标题，并在前面加上‚关于‛。
五、主送机关中的常见错误
1.主送机关表述不规范。未按党委、人大、政府、政协、法院、检察院、军队、有关部门的顺序排列；未用全称或规范化简称，如‚市府‛应为‚××市人民政府‛；分类排列时未按类内用顿号、类间用逗号的原则办理；随意使用统称，如‚市内各单位‛。
2.多头主送。主送机关不止一个。向上级机关行文，只写一个主送机关，如需同时送其他机关，应当用抄送的形式，但不得同时抄送下级机关。
3.主送个人。公文不得主送领导者个人。
4.越级主送。一般不得越级请示，特别情况下必须越级请示时，应当抄送被越过的机关。
主送是否可以是内设机构，如：省委组织部
六、正文中的常见错误
1.错别字。主要表现：（1）因粗心大意，将‚宏观‛错成‚客观‛，‚拨款‛错成‚拔款‛，‚突击‛错成‚突出‛……；（2）因辨析不准，将‚淡薄‛错成‚淡簿‛，‚渎职‛错成‚赎职‛，‚严厉‛错成‚严励‛……
2.要选用规范词语。‚其他——其它‛。根据国家语委有关规定，在法律法规和公文中统一用‚其他‛，不用‚其它‛。
‚撤销——撤消‛。公文中统一用‚撤销‛，不再用‚撤消‛。‚截止——截至‛。‚截止‛是不及物动词，后面不能带宾语。如果‚截止‛出现在时间之前，需加一个介词作补语或名词性词语加冒号，‚截至‛用于时间之前，不能用于时间之后。如：‚截止7月9日‛应改为‚截至‛，如用‚截止‛，一定要加上介词‚到‛。
像的使用。根据新公布的†简化字总表‡，象不再是像的简化字，仍然各司其职。我们每一个同志都要像爱护自己的生命那样；像浙江----。
账与帐的使用。账用于货币和货物出入的记载,个人账户、挂账、台账；帐专指布、纱、绸子等制成的遮蔽物。
法规和公文中“以上”和“以下”均含本数和本级，无须注解说明。按照与遵照的用法：按照法律法规或文件等的规定或要求；遵照上级或长辈的指示、教导等。
公布与发布的用法：公布适用于行政法规，发布适用于决定、命令。相继制定和公布†统计法‡等法律法规。市政府发布了†关于----的决定‡。
制定与制订的用法：制定适用于路线、方针、政策、法令、规章制度，制订适用于方案、规划、计划。
增长与增加的用法：增长一词后接百分比，增加一词后接具体数量。地方财政收入由1997年的1702万元增加到2002年的5638万元。增长幅度达50%，而不是增长速度达50%。
议案和提案：人大代表提出的是议案和建议，政协委员提出的是提案。3.要注意词语的规范提法。
（1）辖区。根据国务院办公厅秘书局关于辖区的规范提法规定，行政机关公文中统一使用‚行政区域‛，不使用‚辖区‛。
（2）荣誉称号。荣誉称号的授予和程序，国家有严格的规定，是一项极高的奖励，不能随便使用‚荣誉称号‛此提法。应改为‚***被评为……‛。
表示独一无二用“惟一”而不是“唯一” 久禁不绝不是久禁不止。富余劳动力不是富裕劳动力
社会各界不是社会各届，届表示次。
公文、出版物统一用“报道”不用“报导”。如：新闻报道；对有关信息要慎重报道。
应有之义不是应有之意 凸显不是突显 磨炼不是磨练
明察暗访不是明查暗访 备受关注不是倍受关注 常抓不懈不是长抓不懈 涣散不是痪散 精简不是精减
4.年代的表述要规范。
（1）凡涉及‚建国以来‛或‚建国多少年‛等字样的，为避免产生异义，应规范表述为‚中华人民共和国建国以来‛或‚新中国成立以来‛。
（2）非本世纪的年代，应将所属世纪写出。如：‚上世纪八十年代以来‛应该改为‚20世纪80年代‛。
5.要正确使用引文。
引文应当先引标题，后引发文字号，再次出现时可直接引用发文字号。
如：‚省府办公厅及时印发了†广东省加强建设工程项目开工管理若干规定‡（粤府办“2006”6号，以下简称†规定‡）‛，此引文有文号，再次出现时应直接引用其文号，不应引用额外增加的简称。应把‚以下简称†规定‡‛去掉，并且把下文中引用的‚†规定‡‛全部改为‚粤府办“2006”6号‛。
过去引用公文时，习惯在引文标题后加上‚以下简称†**‡‛，这是因为在早期的公文处理办法中没有对公文的发文字号作出规定，因此存在大量没有发文字号的公文，当需要引用这些公文时，为使表达简练，只能使用标题的简称。
引文标题应完整。如：‚为进一步贯彻落实国务院†全面推进依法行政实施纲要‡，努力实现……‛，此引文标题仅是原文标题的一部分，正确的引文部分应是‚†国务院关于印发全面推进依法行政实施纲要的通知‡（国发“2004”10号）‛。
6.标点符号错误。常见顿号与逗号混用，逗号与句号混用，分号的误用，书名号与引号混用……
（1）表示概数不应用顿号隔开。如‚
六、七十年代‛应改为‚六七十年代‛。
（2）公文中第一层次标题不加标点符号，第二层次以下的标题均应加标点符号。
（3）错用逗号。逗号表示句子内部的一般性停顿，顿号表示句子内部并列词语之间的停顿。
（4）如使用书名号，其内应写全称。例如：†会计法‡，如用书名号就写全称†中华人民共和国会计法‡，如用‚会计法‛，则不应加书名号。
（5）波折号长度应为两个汉字宽度，但是有的文件里只有一个汉字的宽度，容易与‚一‛字混淆。
7.数字使用不规范。（1）†办法‡规定，公文中的数字，除成文日期、部分结构层次序数和在词、词组、惯用语、缩略语、具有修辞色彩语句中作为词素的数字必须使用汉字外，应当使用阿拉伯数字。但使用过程中有应使用阿拉伯数字却用汉字、数字写法不规范等现象存在。如‚20世纪90年代‛错成‚二十世纪九十年代‛；应该用汉字的用了阿拉伯数字，如‚党的十四大‛错成‚党的14大‛。（2）数字精确到某一单位的个位数时，其小数点后数字的省略表述‚余‛字应臵于单位词之后。另外，同一份文件里对同事项的阿拉伯数字保留小数位应统一。
（3）数字、年份不能回行。
（4）数值范围表示方式要正确。‚2-2.3%‛的说法应改为‚2%-2.3%‛。
（5）表示数量不能没有量词。如：‚50万来宾‛应改为‚50万名来宾‛。
8.随意简称。如将‚社会主义精神文明建设‛简称为‚社精文建设‛，‚高速公路公司‛简称为‚高速公司‛。
（1）要使用规范的机关简称。
（2）要注意简称的规范表述。第一，在简称中须保留关键词或语素，否则不能称其为简称，而应写为‚以下称***‛或‚以下统称***‛。如：‚力争到2010年满足50%以上有稳定职业的外来常住人口（以下简称新市民）的住房要求‛，因‚新市民‛没有保留原名称中的关键词或语素，所以‚以下简称新市民‛应改为‚以下称新市民‛；第二，使用简称时没有标点符号的，在简称说明中也不加标点符号。如：‚珠江三角洲地区（以下简称‘珠三角’）城镇群已成为全省经济社会发展的‘排头兵’‛，因珠三角是地域的名称，后面可直接使用，不应加引号，因此，给它注明简称时也不用加引号。第三，注明下面使用简称后，一般不能再使用其全称。第四，不能采用‚下称**‛等其他不规范的形式。
七、附件标识中的错误
1.附件说明不规范。应在正文下空一行左空二字编排‚附件‛二字，后标全角冒号和附件名称。附件名称后不加标点符号。为显示公文的附件与正文不可分割的关系，附件说明应再公文的正文之下、公文生效标志（即发文机关署名、成文日期和印章）之上。
2.内容不适。在印发、转发、批转公文的通知中，错将所印发、转发、批转的公文作为附件特殊说明。印发、转发、批转通知和所印发、转发、批转件是共同组成一件公文的，且已在标题中说明，无需作附件标注。
八、发文机关标识中的错误
1.位臵不当。常见的错误是居中标识或靠右边顶格标识。正确位臵一般是从全页垂直中线起向右书写，而且发文机关最后一个字比正文缩四个字或与成文日期标识协调（成文日期的最后一个字比正文缩两个字）。在下列两种情况下发文机关标识可越过中线：一是发文机关全称字数多，从中线向右写，一行写不下时；二是联合发文单位多，竖列太长影响美观时。
印章居中下压发文机关署名和成文日期，使发文机关署名和成文日期局印章中心偏下位臵，印章顶端应当上距正文（或附件说明）一行之内。
2.发文机关标示页无正文。当正文之后的空白页容不下印章、成文日期时，应当采用调整正文行距或字距的措施加以解决，若多机关联合行文，该措施也无法实现正文与所有发文机关的印章同处一页，也可以采取‚此页无正文‛的方法，即将印章加盖在下一空白页上，并在该空白页第一行顶格标注‚（此页无正文）‛。
九、抄送机关标识中的常见错误
1.使用已废除了的‚抄报‛或‚报‛、‚送‛、‚发‛。
2.抄送个人。公文不能抄送个人，需要送某位领导阅否由收文机关秘书部门决定。
3.抄送主送机关。既然是主送机关就不必再抄送了。
4.滥抄滥送。将向上级机关的‚请示‛同时抄送平级机关或下级机关；将公文抄送给与公文内容无关的机关。
5.标识不规范。抄送机关未分类或标点符号使用不当。
6.在主送给上级机关的同时，又抄送给某内设机构。
按照公文处理工作有关规定，公文发送给一个单位后，都由收文单位的办公厅（室）负责分发给本单位的相关领导人和业务主管部门，发文单位不应再多头抄送给收文单位的领导人或内设机构。但有些单位在主送给上级机关的同时，又抄送给某内设机构。
关于第6点，我曾经犯过错误。省里召开了一个重要会议后，省委发文件要求各单位积极贯彻落实，并及时上报贯彻落实报告，但是该文件并没有说明上报文件的份数和上报给哪个部门，也没有留联系人和联系方式，紧随其后的是省委督查室的文件，同样是要求各单位上报贯彻落实该重要会议的报告，并在文件中说明，报告主送省委，抄送省委督查室。因此，我便认为省委督查室的文件就是省委文件的具体要求，因此上报省委的文件，主送省委，版记中写了抄送省委督查室。文件上报之后，被省委秘书办退回，并要求删去版记中抄送省委督查室字样后重新报送。
之所以被退文，正是在行文关系上出了问题，省委督查室是省委的内设机构，我在主送省委的文件中抄送省委督查室，自然是不合适的。这件事也同时让我明白，在处理公文的时候要按规矩办事，不能一味‚迷信‛上级单位。
十、印刷、装订中需要注意的问题
国家标准规定，公文双面印刷，页码套正，左侧装订，不掉页。页码用4号半角阿拉伯数码标识，臵于版心下边缘之下一行，数码左右各放一条4号一字线，一字线距版心下边缘7mm。单页码居右空1字，双页码居左空1字。空白页和空白页以后的页不标识页码。一份文件应统一顺次编排页码。
有些单位的公文为单面印刷，有的还在左上角装订；有的公文页码标识的位臵不对，有的没有一字线或一字线字号不规范；有些公文空白页和空白页以后的页标识了页码；转发几份文件的通知，全文未统一顺次编排页码，而是被转发的几份文件页码自成体系。
十一、请示件在格式方面要注意：
1.有签发人；2.有联系人、联系电话；3.不得抄送给下级机关。
一、关于转发上级公文
（一）层层转发如何处理
【案例4-9】多层转发标题难
四招方法繁化简 材料1 ××县人民政府关于转发†××市人民政府关于转发„××省人民政府关于做好防汛工作的通知‟的通知‡的通知
材料2 ××市政府关于转发†×省政府关于转发„人事部关于为××同志恢复名誉后享受×级待遇的通知‟的通知‡ 的通知
材料3 ××市人民政府关于转发××省人民政府关于转发××部†关于汉族地区佛教道教寺观管理试行办法‡的通知的通知
【评析】 批转（转发）性公文，采用“通知”文种。其正文简单，可以采用格式化写作，但其标题的写作相对比较复杂。因其是复式结构，如机械套用一般公文标题“发文机关+事由+文种”的基本格式, 往往出现如案例中两个乃至更多标题重叠的情况，造成“关于”、“转发”、“通知”的重复使用，繁琐冗长，不知所云。要使多层转发批转性公文标题化繁为简，可采用以下方法：
（一）简化 当转发层次较多时，可以省略中间环节，直接转发（批转）原公文，压缩介词“关于”和重叠文种，将删除后也不会影响题意的赘词或标点符号删去。如材料1 可简化为： ××县人民政府转发××省人民政府关于做好防汛工作的通知的通知 材料2 简化为： ××市政府转发人事部关于为××同志恢复名誉后享受×级待遇的通知的通知
（二）合并 多个被转发机关、被转发公文标题合并，因为在公文正文和附件中可以完整体现被省略的部分。如：××总公司关于印发关于××项目管理的五个规定的通知 ××市政府办公室转发市××局等六单位关于××××的意见的通知 国务院办公厅转发人事部 财政部关于调整机关、事业单位工作人员工资标准和增加离退休人员离退休费三个实施方案的通知
（三）重拟 建国之初，我国公文格式只有“事由”没有标题。近几年,一些地方政府在其公文处理实施细则中也已有明文规定：“转发上级机关的公文, 如其标题过长, 可按事由摘要转发”[4]。只标明事由的标题在海外公文中也十分流行。所以材料3的标题可重拟为： ××市人民政府关于贯彻执行汉族地区佛教道教寺观管理有关文件的通知
（四）直接翻印下发 按照†办法‡第四十六条的规定，对于直接上级机关无密级来文，如果下级机关没有具体补充意见和执行意见，可以经过本机关负责人或办公室主任批准，直接将上级公文翻印下发。翻印上级机关公文必须作一些简单的技术性处理。
技术性处理的内容包括：
（1）首页保留原文件文头部分；
（2）文尾原发文机关印章，加上原发文机关落款；（3）版记去掉原发文机关版记，换成翻印机关的版记，发送栏标明印发范围，如“送或发：各地区各机关名称”；印刷版记改为翻印机关“××机关办公室 ××××年××月××日翻印”；注明翻印份数。
这样加工整理后，翻印件就算经过法定认证，可以作为正式公文执行。这种方式可避免层层照抄照转文件。（摘自†公文处理案例精选‡第四章 公文格式与稿本）1.在用便函方式转发上级文件时，如果需要抄送局机关各处室，那么抄送单位放什么位臵就很难确定，如果放在上级文件的文末，感觉不是很妥当，因此，我通常的做法是将抄送放在本单位自拟的转发通知后的偶数页，而非整篇公文的末尾。但是这种做法没有找到依据。
2.如何处理层层转发的问题，是否可以越级转发？
二、关于内设机构发文的相关规定
部门内设机构按规定不能对外正式行文，只能以函的形式行文。†国务院办公厅关于实施„国家行政机关公文处理办法‟涉及的几个具体问题的处理意见 ‡（国办函“2001”1号）解释，“部门内设机构不得向本部门机关以外的其他机关（包括本系统）制发政策性和规范性文件，不得代部门审批下达应当由部门下达的事项；与相应的其他机关进行工作联系确需行文时，只能以函的形式行文。”
“函的形式”不是指文种必须使用“函”。“函的形式”亦称函件格式、信函式格式，是国家标准†国家行政机关公文格式‡中规定的特定公文格式之一，一般适用于事务性公文中的下行文和平行文。在使用函件格式行文时，发文主体照样可以按照行文目的和内容选用相应的下行或平行文种，包括 “函”“通知”“批复”“意见”“通报”等。
三、关于抄送的相关规定
材料2 某国企总经理在审批签发文件时，对公司办公室文秘人员说，只要董事长没签字的都要给他打一份，并直接在发文稿纸上的抄报栏里写上了抄报董事长、抄送本公司财务部。公司办公室文秘人员按照总经理的这一意见，只有将‚抄报董事长‛、‚抄送本公司财务部‛也打印在正式发文的版记上。但文秘人员又认为按照行文规定，内部公文最好不要写抄送；不写又违反了总经理的意见，面对这种情况该如何处理呢？
2.案例材料2分析
（1）在材料2中, 某国企总经理在发文稿纸上面写的‚抄报董事长‛‚抄送本公司财务部‛等意见，都是企业领导根据工作需要在签发文件时提出的注发意见，作为负责发文工作的文秘人员，应该按照领导的意见执行。
（2）只是在公文正式发文时表达形式要注意：公文是不能自己抄送自己单位的，也不能将‚抄送‛错写成‚抄报‛。所以如果该公司正式发文后面的版记（文尾）中需要将领导这几个注发意见写出来的话，应该写为‚公司内送阅：董事长（1份）、公司财务部（1份）‛。这种做法当前在机关很常见。
（3）由于公司内部送阅的内容仅仅是该公司内部公文处理的一种做法而已，可以不在对外发的公文上面标注出来。因为其他公文处理的做法都没有在文上标出，所以这种注发意见也不必在对外发文的版记中标注出来。
（摘自†公文处理案例精选‡第七章 公文处理流程与具体操作）
关于第二点，我存在疑问，例如我局下发各基层单位的文件，往往要抄送机关各处室，是否不合规矩？那规范的做法应该如何呢？
第三篇：IC卡发油系统常见问题处理总结
IC卡发油系统常见问题处理
目录
一．黑名单问题...............................................................................................................................2 二．手工添加出库单.......................................................................................................................3 三．应急发油...................................................................................................................................6 四．油罐库存量管理.....................................................................................................................16 一．黑名单问题
进入黑名单一般有2种情况，第一种为油库的工作人员手工添加的，另外一种是系统自动添加的。油库工作人员手工添加的主要是由于司机、车辆存在某一方面的违规现象或需要到油库进行处理的而人为的进行添加黑名单，系统自动添加是根据系统设定的条件而自动生成。
其解决办法有：
第一种情况的：要看这条记录是哪个油库添加的，添加的原因，如果是因为该车违规或存在隐患等被列入黑名单的，除非整改完毕，否则拒绝给其过账发油。而且违规的司机、车辆必须到添加黑名单的油库才能删除。
第二种情况：出现这种情况的首先是验单过账的时候系统提示“因5小时前出库未刷卡进入黑名单，请联系发油员”。
原因分析：这种情况是因为司机出库未打单出库，第二次提油的时候被拒绝。
解决办法：完善出库安检记录，让其“出库”，再删除黑名单即可。
具体操作：
1）在IC卡日常管理>>安检记录查询模块下，找到这条安检记录入下图所示：
2）选中这张单，点击修改按钮，填写出库时间，然后点击保存。
3）进入IC卡日常管理>>黑名单管理下，找到这条记录，将其删除即可。二．手工添加出库单
操作步骤：
1）登录业务整合平台，进入已发油单据。
2）点击“添加”按钮，进入以下界面：
3）在出库单号里面输入出库单号（ERP的凭证号）然后点击读取，出现以下界面。
系统可自动读取的有记账日期、油品名称、油品代码、记账日期、移动类型、车船号、运输类型、标准密度、公布密度、调整温度，流量计编号（需是本油库的用户）。
人工输入的有：平均温度，其余的需要根据实际情况输入后点击计算数据。
说明：调整温度、记账日期、标准密度、公布密度、流量计号要在IC卡管理系统后台维护后才能自动读取，若没有维护则不能自动读取。
关于调整温度的自动读取：按公斤发油的单据，在读取的时候若系统中有维护，则读取已维护的调整温度，若没有则默认为79℃；按升发油的单据，读取的时候若系统没有维护，则不会自动默认79℃，需用用户自己输入。
4）用户点击“计算数据”按钮。
点击计算按钮之前要检查调整温度、平均实测温度、标准密度、公布密度、记账日期有没有空白，若空白则不能计算。
5）用户点击“保存”按钮后，数据将保存到业务整合平台、原计量系统。三．应急发油
操作步骤：
1）登录本油库的业务整合平台，进入ERP应急发油模块（登录本地服务器，不要登录公司服务器10.191.160.160）。
2）进入卡验证信息列表后，点击下载会员卡、配送卡、普通卡验证数据，下载卡和车辆的验证信息。（平常油库可以根据实际情况只下载配送卡的验证数据，建议每星期重新下载一次，以便更新数据。当需要有计划应急发油时才将会员卡、普通卡的数据下载到服务器）。
3）下载后的卡验证信息如下图所示。
4）进入应急发油数据列表，导入应急发油模板。
5）点击“添加”按钮，点击“浏览”按钮。
6）点击“添加”按钮，点击“浏览”按钮。
7）选择要导入的模板，然后点击“打开”。模板见附件1。
8）导入成功后的页面如下图所示。
9）IC卡系统设置>>油库验单参数设置
10）将本油库的”是否应急发油”改为”Y”
11）司机按照正常的流程安检、验单、发油、打单出库。12）进入应急发油数据列表，选择“ATM机已过账”点击“检索”按钮，会将ATM机已过账，但是ERP没过账的单据筛选出来。
13）选中ATM机已过帐、但是ARP没过账的单据 点击ERP应急过账（注意此时千万不要点击下载非计划、计划停机应急发油，这样的话会将ATM机已过账的数据覆盖掉，带来我们手动在ERP过账的后果）。
14）过账完成以后，选中ERP已过账，点击“检索”按钮。
15）若能筛选出数据证明ERP已过账，应急发油到此结束。
附件1.ERP应急发油模板
一、应急发油注意事项：
按规定每天下午5点前把3天内预留单从ERP系统导出。导出预留单的注意事项：
① 必须在比ERP系统备份关闭时间提前15分钟以上的时间情况下，导出ERP系统的Excel文件，或按仓储管理中心有关的规定导出作为应急发油的备份数据；
② 本应急发油只针对预留单，即司机卡301类型的单据，其它类型的单据不能使用应急发油子模块功能进行发油；
③ 由于使用预留单进行应急发油时不对IC卡进行校验，因此在使用预留单应急发油前必需停止所有单据在ATM机上的验单操作；
④ IC卡自助发油验单系统对预留单应急发油确认了的单据暂时不提供冲销功能，因此需要提醒司机注意选择单据；
⑤ 因为用于应急发油的预留单导出数据已确定，所以进行应急发油过程中不能更改任何数据，司机提出任何更改单据要求油库一律不予接受，以免影响网络及ERP系统恢复后的数据过账。
二、应急发油使用方法：
第一步，将ERP的预留单数据导出。导出预留单的操作步骤：
1）登录ERP系统，如图所示，在命令框内输入MB25后回车。
2）在“工厂”输入本油库的ERP代码，在“需求日期”输入需要导出数据的日期范围，输完条件后按左上角的时钟图标执行命令。
3）选择菜单栏的“清单”→“出口”→“电子数据表”。
4）在弹出对话框中选择“处理模式”，选取“表”的模式，然后单击“√”确认执行命令。
5）继续单击“√”确定执行命令。
6）数据导出后将生成如图所示的Excel表格（各人所需的数据不同导出的表格格式可能不一定相同，请自行调整为IC卡系统所需要的表格形式，表格形式见附件一：应急发油导入数据模板）。
7）将导出的数据表格式按照下图进行调整，表格数据严格要求按下图的数据格式整理，各列的字段位置、名称(新模板将工厂改为工厂1)都要完全一样，否则将无法在IC卡自助发油验单系统中导入数据。此外，为保证数据能正确导入IC卡自助发油验单系统，Excel表格中的日期要设为日期型或自定义的yyyy-mm-dd。注意调整后的表格的有效保存。
四．油罐库存量管理
用户点击“查看”或者“修改”按钮是出现错误页面。
原因：油库的将库存量输入过大，超过数据库的可允许数值范围。
温馨提醒：油罐的库存量管理是真实反映油罐库存的参数，用户不能贪图省事，故意把库存量改大，这样会导致上面的错误，更重要的是会存在发空罐的可能，这样的话危害更大。
解决方法：用户按照油库实际的情况来填写困存量，输入的库存量不要超过10位。
第四篇：高中地理_原理规律大归纳总结
高中地理 原理规律大归纳
1．经度的递变
向东度数增大为东经度，向西度数增大为西经度。
2．纬度的递变
向北度数增大为北纬度，向南度数增大为南纬度。
3．纬线的形状和长度
所有纬线都是互相平行的圆，赤道是最长的纬线圈，由此往两极逐渐缩短。
4．经线的形状和长度
所有经线都是交于南北极点的半圆，长度都相等。
5．南北半球的划分
赤道以北为北半球，以南为南半球。
6．东西半球的划分
20°W往东至160°E为东半球，20°W往西至160°E为西半球。
7．高中低纬的划分
南北纬30°之间为低纬度，30°-60°之间为中纬度，60°-90°之间为高纬度。
8．比例尺大小与图示范围
相同图幅，比例尺愈大，表示的范围愈小；比例尺愈小，表示的范围愈大。
9．地图上方向的确定
①一般情况，“上北下南，左西右东”；②有指向标的地图，指向标的箭头指向北方；③经纬网地图，经线指示南北方向，纬线指示东西方向。
10．等高线的疏密与坡度
同一幅地图中等高线越密，坡度越陡。
11．等高线的凸向与地形
等高线向高处凸出的地方为山谷，向低处凸出的地方为由脊。
12．不同日期的分界线
零点经线往东至日界线为地球上的“今天”，往西至日界线为地球上的“昨天”。
13．天体系统的层次
地月系→ 太阳系→ 银河系→ 总星系
14．地球生命存在的原因
①比较稳定和安全的宇宙环境；②日地距离适中，地球表面温度适宜，存在液态水；③地球体积和质量适中，有足够引力吸引大量气体，形成大气层。
15．月相的变化
①新月（农历初
一、彻夜不见）；②上弦月（初
七、初
八、上半夜西方天空）；③满月（十五、十六、通宵可见）；④下弦月（二十二、二
十三、下半夜东方天空）。16．地球的自转
①方向（自西向东、北极上空俯视呈逆时针方向、南极上空俯视呈顺时针方向）；②周期（1恒星日，即23时56分4秒）；③速度（角速度：除极点外，其它各点均为15°/时；线速度：1670COSФ km/h）；④地理意义（a.昼夜更替，周期为1太阳日，即24小
时。b.经度每隔15°，地方时相差1小时，越向东，地方时越早，c.地球表面水平运动的物体，其运动方向发生一定的偏转，北半球向右，南半球向左）。
17．北极星的地平高度与当地纬度的关系
北半球观测，北极星的地平高度与当地纬度相等。
18．地球的公转
①轨道（椭圆轨道1月初近日点，7月初远日点）；②方向（自西向东、北极上空俯视呈逆时针方向，南极上空俯视呈顺时针方向）；③周期（1恒星年，即365日6时9分10秒；回归年，即365日5时48分46秒）；④速度（角速度为1°/d，线速度约为30km/s;近日点快，远日点慢）；⑤地理意义（a.昼夜长短和正午太阳高度的变化；b.四季和五带的划分）。
19．太阳直射点的回归运动（以北半球为例）
从冬至到第二年夏至，太阳直射点自23°26ˊS向北移动，经过赤道（春分时），到达23°26ˊN；从夏至到冬至，太阳直射点自23°26ˊN向南移动，经过赤道（秋分时），到达23°26ˊS。其周期为1回归年，即365日5时48分46秒。
20．正午太阳高度的变化
由太阳直射的纬线（正午太阳高度为90°）向南北两侧依次递减；由太阳直射点（太阳高度为90°）向四周依次递减；昼半球＞0°，夜半球＜0°；晨昏线上为0°
21．昼夜长短的变化（以北半球为例）夏半年，昼长夜短，纬度越高，昼越长，极点附近为极昼，夏至日，昼最长夜最短，极圈以内为极昼；冬半年，昼短夜长，纬度越高，昼越短，极点附近为极
夜，冬至日，昼最短夜最长，极圈以内为极夜。春秋二分，全球各地昼夜平分；赤道上，终年昼夜等长。
22．四季的划分
我国古代二十四节气中的立春、立夏、立秋、立冬为起点；欧美国家以春分、夏至、秋分、冬至为四季的起点；北温带许多国家一般把3、4、5三个月划分为春季、余类推。
23．五带的划分
南北回归线之间（有太阳直射）为热带，极圈以内（有极昼极夜）为寒带、其余为温带。
24．气温的垂直分布
对流层气温随高度的增加而递减，平流层下层随高度变化很小，在30千米以上，气温随高度增加而迅速上升。
25．气温的水平分布
纬度越高，气温越低，夏季陆地气温高于海洋，冬季相反；气温高的地方，等温线向高纬凸出，反之，气温低的地方，等温线向低纬凸出，撒哈拉沙漠为全球炎热中心，世界极端最低出现在南极洲，北半球寒冷中心为西伯利亚地区。
26．大气的热力作用
①大气对太阳辐射的削弱作用（吸收、反射、散射）；②大气的保温效应（强烈吸收地面长波辐射，并通过大气逆辐射把热量还给地面），又称为“温室效应”。
27．气温与天气 白天多云，气温不高（云层反射作用强）；夜晚多云，气温较高（大气逆辐射强）。
28．全球的热量平衡
就地球多年平均状况来看，地球（地面和大气）收入的热量与支出的热量相等。
29．气压与气温
近地面，气温高，气压低；反之，气温低，气压高。
30．风的形成
水平气压梯度力是形成风的直接原因。水平气压梯度力垂直于等压线，并指向低压。高空，在水平气压梯度力和地转偏向力共同作用下，风向与等压线平行。近地面，加上摩擦力的影响，风向与等压线之间成一夹角。
31．气压带和风带的移动
大致与太阳直射点的移动一致。
32．大气活动中心的分布
1月份，亚欧大陆形成蒙古、西伯利亚高压，副极地低压带被切断，保留在太平洋上为阿留申低压；7月份，亚欧大陆形成印度低压，副热带高压带被切断，保留在太平洋上为夏威夷高压。
33．季风环流的形成与分布
东亚季风由海陆热力性质差异引起，我国西南地区及印度一带的西南季风，由气压带和风带位置的季节移动引起。
34．锋面与天气
冷锋过境时，常出现阴天、下雨、刮风、降温等天气，过境后，气压升高，气温骤降，天气转晴，暖锋过境时多为连续性降水，过境后，气温上升，气压下降，天气转晴。
35．气压系统与天气
气旋过境时，常出现阴雨天气；反气旋控制时，天气晴朗.36．气候的形成
①太阳辐射是导致不同地区气候差异的最基本因素。②下垫面直接影响到大气中的水热状况。③大气环流调整着全球的水热再分布。④人类活动通过改变大气成分和改变下垫面状况，对气候产生影响。
37．气候资源的开发利用
①农业：一地的气候资源往往决定着该地的种植制度（包括作物的结构、熟制、配制与种植方式）。②建筑：街道应与子午线成30°-60°的夹角。③交通：公路、铁路的设计，需注意沿线的暴雨、大风出现的强度和频率，以及冻土、积雪的深度；机场宜选择低云、雾和暴雨出现频率较少、风速较小的地方。
38．台风的形成与分布
热带或副热带洋面上强烈发展的热带气旋，带来强风、特大暴雨和风暴潮。西北太平洋是全球台风发生频率最高、强度最大的海域。
39．全球变暖的成因及危害
大量燃烧矿物燃料及毁林导致大气中二氧化碳的浓度不断升高。全球变暖：①使极地冰川鬲化，引起海平面上升；②引起世界各地区降水和干湿状况的变化。
40．臭氧层空洞的成因及危害
除受太阳活动的影响外，人类使用消耗臭氧物质也是重要原因。到达地面的紫外线增加，危害人体健康，并对生态环境和农林牧渔业造成破坏。
41．酸雨的成因及危害
酸雨的形成主要是由于燃烧矿物燃料，不断排放二氧化硫和氧化氮等酸性气体所致。影响鱼类生长，危害森林和农作物生长，腐蚀建筑物和文物古迹，并危及人体健康。
42．海水温度的水平分布 由低纬海区向高纬海区递减。
43．海水温度的垂直分布
海水温度随深度增加而递减，1000m以下变化很小。
44．海水盐度的分布
从南北半球的副热带海区分别向两侧的高、低纬海区递减。
45．大潮与小潮
新月、满月时出现大潮；上弦月、下弦月时出现小潮。
46．表层洋流的分布
①南北半球以副热带海区为中心的大洋环流（北顺南逆）；②北半球以副极地海区为中心的大洋环流（逆时针）。③南极大陆外围的西风漂流；④北印度洋的季风洋流（夏顺冬逆）。
47．海洋渔业资源的分布
主要集中在温带沿海大陆架海域。
48．海洋环境问题的形成
①海洋污染（工业废弃物、核电站冷却水、农业废水和石油渗漏等）；②海洋生态破坏（工程建设、渔业生产及自然环境的变化等）。
49．海洋权益
《联合国海洋法公约》规定，沿海国家除拥有12海里领海权外，其管辖的海域面积可外延至200海里，作为该国的专属经济区，享有勘探、开发、利用、保护、管理海床上覆水城及底土自然资源的主权。
50．地壳物质循环
从岩浆到形成各种岩石，又到新岩浆的产生，这一运动变化过程，构成了地壳物质循环。
51．地质作用
①定义：引起地壳及其表面形态不断发生变化的作用。②分类：按其能量来源，可分为内力作用（表现为地壳运动、岩浆活动、变质作用等，使地表隆起或凹陷，形成高山或盆地）和外力作用（表现为风化、侵蚀、搬运、沉积、固结成岩作用，把盆地填平）。
52．板块构造学说
全球岩石圈共分为六大板块。一般说来，板块内部，地壳较稳定；两个板块交界处，地壳较活跃，火山和地震也多集中分布在这一地带。板块张裂处，常形成裂谷或海洋，板块相撞挤压处，常形成山脉。
53．地质构造
①褶皱（a.背斜：岩层向上拱起，常成为山岭，有时成谷；b.向斜：岩层向下弯曲，常成为谷地，有时成山）。②断层（a.地垒：相对上升的岩块，常形成块状山地或高地；b.地堑：相对下沉的岩块，常形成谷地或低地）。
54．地质构造与生产
了解地质构造规律，对于找矿、找水、工程建设等有很大帮助。含石油、天然气的岩层，背斜是良好的储油构造；向斜构造盆地，利于储存地下水。水库等大型工程选址，应避开断层带，以免诱
发断层活动。
55．陆地水体的相互关系
雨水补给为主的河流，其流量变化与降水量变化相一致；冰川融水补给为主的河流，其流量变化与气温变化有密切的关系；河流水与湖泊水、地下水之间可相互补给，湖泊对河流径流还起调蓄作用。
56．水循环
自然界的水在四大圈层中通过各个环节所作的连续运动的过程，按其发生领域分为海陆间大循环、内陆循环和海上内循环。
57．植物对环境的指示作用 莲（水湿环境）、骆驼刺（干旱环境）、铁芒箕（酸性土壤环境）、碱蓬（盐碱性土壤环境）、旗形树冠（风向）、矮牵牛（大气中二氧化硫污染）。
58．植被的环境效益
净化空气、调节气候、涵养水源、保持水土、防风固沙、保持农田、吸烟除尘、降低噪声、美化环境。
59．陆地环境的整体性
陆地环境各要素的相互联系、相互渗透，构成了陆地环境的整体性。
60．陆地环境的地域差异
①由赤道到两极的地域分异（以热量为主导分异因素，自然带沿着纬度变化的方向作有规律的更替）；②从沿海向内陆的地域分异（以水分为主导分异因素，自然带从沿海向内陆作有规律的更替）；③山地垂直地域分异（由于从山麓到山顶的水热状况随着海拔高度的增加而变化，形成了垂直气候带，自然景观也相应地呈现出垂直分布的特点）。
61．陆地自然资源的分布
土地、水、生物等资源，受水热条件的影响，其分布一般具有明显的地带性；矿产资源的分布则主要受地质作用的制约。
62．地质灾害的关联性
一个地域内的若干种地质灾害，它们在成因上是相关的。如我国川、滇、黔接壤地带，形成了以地震、滑坡、泥石流为主的灾害系统。
63．农业的区位因素
气候因素中的光热条件与农作物种类、复种制度和产量关系密切；地形影响耕作的难易、农业的类型和农作物的垂直分布；土壤影响作物种类和产量；市场区位及需求的变化，对农业区位的影响最为突出；交通的心头和保鲜、冷藏技术的发展，使市场对农业区位的影响地域大为扩展。此外，国家的政策对农业产生一定的干预。
64．工业的区位因素
原料、能源对工厂区位的影响逐渐减弱；市场工厂区位的影响逐渐加强；交通对工业具有很大的吸引力；信息通信网络的通达性重要性越来越突出；工业对劳动力技能的需求逐渐增加；环境因素日益成为工业区位选择的重要因素。
65．污染严重的工业的区位选择
大气污染企业应设置在居民区最小风频的上风地带或与常年盛行风向垂直的郊外；水体污染企业应设置在远离水源地或河流的下游。
第五篇：系统封装常见问题大总结
[经验分享] 系统封装常见问题大总结（非官方）
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本帖最后由 玩看 于 2013-7-17 07:41 编辑
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哈哈，好久没来天空了，没办法，忙着应付高考，现在有空了，上来论坛瞧瞧，唬唬，原先的 XP系统封装视频教程大放送 居然因为7天内无回复而被锁帖，哎，都怪115网盘，都怪这破电信，上传速度那么慢，不然的话我就重传了。废话不多说，旧的不去新的不来，现在发布一篇新帖，当初因为看到经常有朋友问些低级问题，而这些问题天空又没有一篇较为完善的总结，为此咬咬牙，从论坛上搜集好几百篇帖子汇聚了平常经常问的问题，其中不乏网友的原话，其中有些疏忽我也进行了订正，希望能到大家的支持，大家有好的经验也不妨写下来，以便帮助更多的人。
【1】问~在老的机子上装虚拟机~~封装出来的系统能装新机上吗？
还有我的老机子 是单核的 ~在这种机子上装虚拟机 封装出来的系统能用在双核或者4核的机子上吗？ skyfree:
1、虚拟机硬件和你本机硬件无关联，至多是CPU与你本机的相同
2、理论上将，在任何机器上封装的系统均可部署到任何机器，但为了减少驱动残留、SRS驱动冲突等问题，也是为了方便，绝大多数时候使用的是最小化硬件的虚拟机
3、虚拟机建议使用完整版的VMware
【2】关于封装前安装驱动问题：
我们大家都知道封装系统前必须卸载驱动，我的问题是比喻显卡、声卡、网卡等，在使用安装版时不一定安装上了驱动（即显卡、声卡、网卡等驱动不上，在设备管理器里出现问号），这时直接进行封装。不为他们安装驱动是否可以（也就是说需要特意把驱动给安装上吗）？
答：
可以。封装不需要安装。
目的是卸载，并不是安装，所以没有装上的就不要装了。一个人有病才去就医，如果没有病就没有必要特意去感染一些病来医吧。
不用安装，就算安装了，使用ES封装时也会自动卸载他们（因为封装系统不止是在一台机器上使用，如果不卸载所有驱动而直接封装出来，那么这个系统部署到其他电脑上只有蓝屏），等部署系统时候会自动安装好驱动的。【3】关于内存不能为read
用YlmF 系统 DIY Y1.6 给XP系统减肥
（1）这个建议不要使用，以前使用过了也出现内存不能为read 现在没使用了一次也没出现过了
（2）用了YMLF1.6的精简工具，后来封装的系统小了，但是用一段后会出现内存不能为READ的现象。
（3）截止目前为止，这个问题算是暂时解决了，最后一次封装的版本，已经测试了10天左右，在7-8台不同配置，不同环境的机器中测试，还没有发现问题。总结如下，ylmf的那个精简工具不能用，迅雷某个版本的不能用，就基本顺利了。（4）YlmF 系统 DIY Y1.6 给系统减肥会替换system32下的一个DLL 以前我也是这样老出现内存不能为read，不用这个工具就没事 最好不要用
【4】关于DX9C安装问题：
1、问：比喻 Office、WinRAR等都是先安装好再封装系统，为什么DX9C一般是在系统恢复才安装，它与显卡有关吗？
答：完全没有关系，就是为了节约空间。如果你不在乎封装系统的大小，完全可以在封装前把所有软件全部安装好，也就省去在部署过程中安装一些程序了。
小结：可以封装前安装，部署时安装一般都是为了节省体积
2、问：DX9安装会不会根据不同的显卡进行安装？
答：DX是微软提供的多媒体编程接口，和显卡型号没有关系。
3、问：WIN7自带了了directX11，还用另安装directX9吗？这两天正在学封装WIN7，突然发现个问题，就是看到系统自带了directX11，那还用在部署的时候安装directX9么？看网上有的说11包含9了，有的说各是各的，知道的来说说吧
答：需要安装directX9，D9是D9，D11是D11，D11不包含D9，说D11包含D9的是不懂装懂。现在很多大型游戏都要装这个directX9（大部分游戏还是D9的），如果你玩游戏的话那DX9是必须的，所以必须装。
4、DirectX9.0C和VBVC静默版的调用时间
问：DirectX9.0C和VBVC静默版是要封装前安装，部署时调用，还是部署完进系统后调用？如果是部署时调用，那应该是部署前，部署中，还是部署后呢？ 答：
一般是在部署时调用，目的是为了控制体积
需要控制体积的话，部署时装；不需要控制体积的话，封装前装。部署中 部署后 都可以，我一般是在部署中注册组件时调用。【5】Adobe Flash Player
Adobe Flash Player 静默安装参数是-install 例子：FlashPlayer.exe-install
【6】关于 封装工具默认参数设置~~
问：一直没用过这个功能，就是一个软件调用静默安装，比如ABC.exe 默认参数是/q 那在参数里写/q还是 ABC.EXE /q ？
Skyfree回复: /q
【7】java VM虚拟机
1、问：封装时需要安装JAVA虚拟机吗？母盘没有集成，请问各位 封装时JAVA虚拟机这个东西还需要装吗？怎么感觉装和不装没啥区别。
答：我认为应该装，因为现在很多网页有JAVA内容，需要这个虚拟机打开。
2、问：MS-JAVA和SUN-JAVA有什么区别？封装应该装哪个？封装的时候应该装哪个软件啊？还是都的装啊？
答：MSjava N年没更新过了..Sunjava比MSJAVA强.使用SUN-JAVA即可。
3、推荐使用sun java vm 而不用ms java vm 的原因：
(1)用原版XPSP3安装，安装微软Java虚拟机(Microsoft Java Virtual Machine)，在IE8中经常会出现内存错误。(2)我的也是，装了微软的Java后 IE8老是出错，后来装了SUN的Java就没有问题
(3)MS java VM 那个东西不好啊，和ie8.0冲突，当弹出要安装activex时就崩溃，不信原版安装完后更新ie8，去微软网站更新就会出错了
(4)ms java vm 已经很久没更新了!sun java vm 倒是比较常用&常更新！
(5)MS java VM与IE8明显不兼容，为什么大家还要集成呢？
前天用实体机封装时发现的，但急于封装，就用了IE7。
封完了不满意，不过也不急了，用虚拟机准备重封时测试了下，目前看，MS java VM严重与IE8不兼容，同时安装这2个，然后打开MSN官网或在线更新网站都报错，3个全是微软自家的。很是奇怪论坛居然没有醒目提示，反反复复测试了几小时，目前看sun java和IE8暂时不存在问题，不过在HP最著名的灌水D版发贴几十分钟内收到的回复来看，貌似没必要集成java，还是比较少的。我现在偏向不集成java，或再测试sun java的兼容性。
4、请问如果不安装java vm对电脑的使用有什么影响。看了许多教程，封装系统的时候都把这个加里面了 最佳答案
1，什么是Java虚拟机
Java虚拟机（JVM）是Java Virtual Machine的缩写，它是一个虚构出来的计算机,是通过在实际的计算机上仿真模拟各种计算机功能模拟来实现的。Java虚拟机有自己完善的硬件架构,如处理器、堆栈、寄存器等,还具有相应的指令系统。2，为什么使用Java虚拟机？
Java语言最重要的特点就是可以在任何操作系统中运行。使用Java虚拟机就是为了支持与操作系统无关，在任何系统中都可以运行。3，Java虚拟机的基本原理
Java虚拟机屏蔽了与具体操作系统平台相关的信息,使得Java语言编译程序只需生成在Java虚拟机上运行的目标代码(字节码),就可以在多种平台上不加修改地运行。Java虚拟机在执行字节码时,实际上最终还是把字节码解释成具体平台上的机器指令执行。
我们上网时，有些网页是用java语言写的，以及一些java程序脚本等等都需要系统中有Java虚拟机时才能打开察看。不过，有些恶意网页有带病毒的java脚本程序，使电脑中毒。但毕竟是少数。如果不装的话可能中的毒就少一些，但这个虚拟机还是很实用的，很多地方都要用到，建议安装。
【8】保存输入法
XP的话：控制面板-区域与语言-高级-将所有设置应用与当前用户帐户和默认用户配置文件-将其打勾-应用-确定。
win7的话：控制面板—区域和语言—管理—复制设置，然后勾选“欢迎屏幕和系统帐号”和“新建用户帐户”，最后单击“确定”保存设置退出。
（注：由于使用sysprep重新封装系统后，在恢复安装时系统将把输入法的相关设置还原到系统默认状态，封装前新安装的输入法将不在语言栏的列表里显示，需手动再次添加）意思是说，或者比如说：在你装了系统后，我是说的原版的，里面是没有五笔字型输入法的，需要你自己动手去安装；如果你不做这一步的话，系统被你重新封装后再还原，你之前装的“五笔字型输入法”就找不到了。
【9】请问如何彻底删除示例图片？
问：在封装前我是清空了我的文档和共享文档类图片收藏夹里的图片的，为什么封装完后进如系统那些原来的示例图片又出现了？求解答 答：封装完成后，需要到PE下删除公用文件夹下面的示例图片。如果你是在封装前删除的话。那么封装后会自动又生成。封装完成后再删除就没了。【10】在系统部署安装网络组件时出现 svchost.exe$LVS_AUTOARRANGE);取消自动排列
If $iRefresh Then DllCall(“shell32.dll”, “none”, “SHChangeNotify”, “long”, 0x8000000, “int”, 0, “ptr”, 0, “ptr”, 0);刷新图标
_SaveAndLoadIconPos($inifile, 1);Run(“RunDll32.exe USER32.DLL,UpdatePerUserSystemParameters”);刷新桌面(通过复制文件的方式替换壁纸文件适用)Else _SaveAndLoadIconPos($inifile)EndIf
Func _SaveAndLoadIconPos($iFile, $iLoad = 0)Local $iCount, $iIndex, $sName, $xy If Not IsHWnd($hWndManager)Then $hWndManager = WinGetHandle(“Program Manager”)If Not IsHWnd($hWndDesktop)Then $hWndDesktop = ControlGetHandle(“Program Manager”,“",1)$iCount = ControlListView($hWndManager, ”“, $hWndDesktop, ”GetItemCount“)If @error Then SetError(1)Return 0 EndIf If Not $iLoad And FileExists($iFile)Then IniDelete($iFile, ”图标位置“)For $iIndex = 0 to $iCount-1 $sName = ControlListView($hWndManager, ”“, $hWndDesktop,”GetText“, $iIndex)If $iLoad Then $xy = StringSplit(IniRead($iFile, ”图标位置“, $sName, ”“), ”,“)If $xy[0] = 2 Then _ _SendMessage($hWndDesktop, $LVM_SETITEMPOSITION, $iIndex, BitOR(BitShift($xy[2],-16), BitAND($xy[1], 0xffff)))Else;保存图标信息 $xy = _GUICtrlListView_GetItemPosition($hWndDesktop, $iIndex)IniWrite($iFile, ”图标位置“, $sName, $xy[0] & ”,“ & $xy[1])EndIf Next Return 1 EndFunc
1、第一次运行，会自动按图标生成配置文件“icoSpace.ini”,第二次运行，如果检测到有”icoSpace.ini“文件存在，则自动还原桌面图标位置
2、运行程序加参数：xxx.exe /load=icoSpace.ini 会自动读取icoSpace.ini还原桌面图标位置,如果ini文件不存在，则自动创建icoSpace.ini 运行程序加参数：xxx.exe /save=icoSpace.ini 生成图标位置配置文件icoSpace.ini
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一些常见的优化误区
前言：
常常能看到一些 “绝招”在网络上多次转载。然而，一些错误的“绝招”也同样在多个地方多次出现，不但许多初学者照着做，许多老鸟也用这些招数来教别人，甚至一些系统“优化”软件也采用了这些错误的“绝招”。究其原因，归根结底是由于学习这些“招数”的人并没有搞清这些招数的内在原理就照葫芦画瓢，只学动作，不学内功，才导致以讹传讹，一错再错。
以下列举几条常见的、多次重复刊登的错误“绝招”，简要介绍它的原理并指出其错误之处，然后给出正确的设置方法。通过这几个例子，希望能引起大家的重视，遇到别人给出的“绝招”时能自己再动动脑筋思考思考，知其然更要知其所以然，避免“走火入魔”。
（1）自动释放不用的 Dll（即不加载多余的DLL文件）
[HKEY_LOCAL_MACHINESOFTWAREMicrosoftWindowsCurrentVersionExplorer] ”AlwaysUnloadDLL“=dword:00000001
很多优化软件都有关于该项功能的优化，即在注册表HKEY_LOCAL_MACHINESOFTWAREMicrosoftWindowsCurrentVersionExplorer下增加“AlwaysUnloadDLL”为'1'的键值。
这是一个经常用的优化技巧，但经过查证和测试，证明该选项对于Windows 2000以后的操作系统无效。
首先，Microsoft仅在一处官方文档有以下说明：“For operating systems Prior To Windows 2000, you can shorten the inactive period by adding the following information to the registry.HKEY_LOCAL_MACHINESOFTWAREMicrosoftWindowsCurrentVersionExplorer AlwaysUnloadDLL”。从Microsoft的官方文档我们可以得知该选项仅对Windows2000以前的系统有效。其次，通过分析Windows2000/XP/2003以后操作系统的内存管理模式验证了该选项无效，简述如下：Windows2000/XP/2003采用了一种较以前Windows 9x更为复杂而有效的手段来管理内存，从而实现了动态链接库加载与卸载的智能化管理。
例如：当用户关闭了需调用动态链接库B的应用程序A时，Windows并不会立即释放动态链接库B，因此当用户再次启动应用程序A时将获得较第一次更快的启动速度。那么Windows何时释放该动态链接库呢？答案是当其它应用程序向Windows申请内存空间时，若Windows无法在现有空闲空间分配足够的内存给该请求，就会自动释放这类已未被引用的动态链接库(Dll)了。
而且对于日常办公的朋友来说，经常打开一些 OFFICE 程序、看图程序等，如果每次退出程序都清理 DLL 文件的话，重新运行该程序则会比不优化多花上太多的时间。
综上，Windows2000/XP/2003/Vista后内存管理已经非常有效了，我们不应该再主动去设置是否强制卸载暂时尚未使用的动态链接库，即便该选项是有效的，也只会降低系统的整体性能。
（2）加快显示速度
◆加快窗口显示速度
打开注册表编辑器，找到HKEY_CURRENT_USERControl PanelDesktopWindowMetrics，右边窗口找到MinAniMate键值，把它改为0。
◆加快开始菜单的显示
打开注册表编辑器，找”HKEY_CURRENT_USERControl PanelDesktopMenuShowDelay“主键，适当调小该键值，最低可设为“0”。如果此方法无效，请从“控制面板”－“显示属性”－“显示效果”－“高级”，将”show menu shadow"项的选择取消，便可加快开始菜单的显示。
这两点优化，呵呵，其实算不上是优化，因为它并没有给系统带来任何的性能上的提升，所改变的只是菜单的显示延时没了，换句话说，只是改变了显示效果而已。看个人习惯的，我喜欢看到菜单慢慢出来再慢慢消失的过程，一般设置为 100。、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、哎 帖子太长了，被限制字数了，都怪当初没有占楼编辑。
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不好意思哦，搞了隐藏回复，没办法了，不这样做的话这篇帖子不仅很快就沉了下去，而且还会被锁帖，为了不想让悲剧重演，只好麻烦大家了。各位走过路过如果觉得这篇帖子有用的话就帮忙顶下帖，以便迅速解决新手的问题，当然这些还不够，以后如果有空的话我会继续更新的。
呵呵 多谢S大了
帮我设置高亮和置顶操作 谨遵S大建议，取消回复可见及相关内容。
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