马瑞发言稿

第一篇：马瑞发言稿

尊敬的领导，老师们

大家好！我是宝鸡宝鸡高新区派往凤县支教的老师马瑞。今天，我非常高兴作为支教老师代表发言。首先，请允许我代表全体支教老师，感谢教育局和学校领导这一年来对我们在工作上的支持和信赖，在生活上的关心和帮助。

城区学校有优越的教学资源和先进的教育理念，教育局也常常给我们创造展示学习的机会，我有幸成为一名城区教师，今天的成长与进步与城区学校密不可分。因此，作为一名人民教师，我有责任，也有义务为教育的均衡发展，为社会的和谐，贡献一点微小的力量。怀着教书育人的梦想，我来到了这里，即使路远山遥，但还是挡不住我实现梦想的步伐。

初来黄牛埔中心小学时，一切都是那么陌生，但是领导和同事们的关心帮助，让我感受到了家的感觉，这便让我很快投入到工作学习中。

在黄小工作的一年中，我成长了许多。当然这要感谢黄小的领导对我的工作能力的信任和支持，给了我一个很好的历练机会。在上一学年中，我担任四年级一个班的班主任工作以及语文教学，六年级的数学教学。这些工作繁杂琐碎，但我并没有放弃，而是把它当成自己人生中的一笔宝贵财富。这一年，我认真工作，把自己融入到这个集体当中，按照学校规定严格要求自己，和同事们探讨教育教学问题。借鉴身边同事们的班级管理经验，结合自己本班情况以及自己的创新想法，正确引导山区孩子们的学习生活。现在孩子们也渐渐长大了。除此之外，我也很注重自己专业素质的提高，坚持与同课头老师互相听评课，时刻关注教育新闻，注重教育理论的学习，将自己的教学想法大胆的在课堂上实施。工作的同时，我时刻记着自己还是一名学习者。学习乡村教师在艰苦的办公环境中无私奉献教育事业的精神，他们的耐心，细心，爱心感化着我。让我明白了一名合格的人名教师，无论在什么条件下都应该将爱岗敬业，无私奉献作为自己的信念。

在工作的一年中，我曾经也因为各种原因想过放弃，但当我走进校园，听到孩子们朗朗的读书声，下课围着你问问题时，问我一声声“老师好”时，我为自己退缩的想法感到惭愧，我是一名老师，教书育人是我的职责，它是无条件的，我怎么能因为条件的好坏而选择教育呢？

在工作的一年中，我深深的体会到了，乡村学校的闭塞。这里不仅缺乏好的硬件设施，而且更缺乏先进的理念，信息来源比较狭窄。孩子们普遍缺乏应有的爱，缺乏科学的家庭教育。但是这里孩子也有求知的梦想，每周要走好多山路，寻求自己的求学之路。在知识的面前，他们如饥似渴。每当给他们讲一些新东西时，他们的眼神让我震惊。所以，我觉得这里需要我，需要更多优秀的老师。每个孩子都有求知的权利，作为老师更应该在求学之路助他们一臂之力。

参加工作不到三年，而我两年的宝贵时间将在黄小度过，我感到很自豪，我相信这将成为我人生一种特殊的经历。因此，在后面一年的工作当中，我继续严格要求自己，尽职尽责，做到耐心细心搞教育，创新性工作，将爱的种子播撒在这里。

我的讲话完毕，谢谢大家！

第二篇：2013个人工作总结-马瑞

2013个人工作总结

——马瑞

一年的工作转瞬又将成为历史，辞旧迎新，2014年即将来

临。新的一年意味着新的起点、新的机遇、新的挑战。总结过去，展望未来是为了“决心再接再厉，更上一层楼”，在即将过去的一年，取得成绩的同时，我也找到了工作中的不足。当然我还有许多需要领导批评指正的不足之处，有待进一步优化和解决。自动化东部试采维护班组的一员，在认真落实上级领导安排各项工作同时，结合平时维护的实际情况和运行中不断发现众多问题，现将这一年的工作总结如下：

一、日常重点工作：

1、响应上级冬防保温，保证装置平稳运行的工作方针，通过开展相关冬防保温工作，总结工作经验，完善冬防保温工作，冬季运行工作。加密巡检，确保仪表不冻堵，对未加电伴热保温不好的地方也及时跟催联系电站尽快对其加电伴热保证冬季能够正常的成产运行。

2、自投产以来东部试采计量分离器LV阀出现大量的故障。给生产及自动计量带来了很大的麻烦，影响了生产稳定和安全隐患，自项目部引进了便携式超声波流量计后每天对无法自动计量的单机进行手动计量，彻彻底底的解决了单井的计量问题。

3、每十天对东部集输各单井进行一次日常检查巡检，对仪表的准确率、完好率、进行统计。及时上报整改存在的问题和隐患，提高生产事故的预见性。同时逐步形成自动化工作开展的指导思路，做到风险可控、隐患及时发现、及时防范、及时解决的工作模式。

二、检修工作：

1、检修工作，共有52口单井的700多台仪表的拆装及效验其中包括压力变送器、温度变送器、温度计、硫化氢气体检测仪、可燃气体检测仪。保证仪表的校验率达到95%以上

2、自控阀的保养。

3、远传液位计与就地液位计共计90多台的拆检及清洗。

4、所有单井控制柜的吹扫及检查

在此次检修中由于站外单井分散、距离相对较远等客观因素，这就要求我们对人员的分配要合理，人员的调配要恰当、人员的分工要明确。我们仍然克服炎热的夏日、工作的繁重、任务的紧迫等困难，历时18天圆满完的成了此次检修工作。

三、重大问题整改工作

1、自处理厂投产以来东部试采大部分单井火炬无法点燃经过我们查看相关资料和分析后发现现场火炬点火燃料气过大，经手动调试后能够正常点火使用。

2、东部集输大部分单井语音呼叫系统由主控室打往各个单井现场不能扩音，现场人员无法接收，经检查处理后部分单井由于电话内主板已烧坏无法进行扩音。在与甲方领导协调及厂家技术人员沟通后，厂家予以更换后出现的问题都已解决能够正常使用。

四、新单井投产调试工作：

1、新单井投产调试工作自2013-2014也不断增加了新井其中包括：东部试采的ZG7-

1、ZG7-

2、ZG6、TZ26-H11、ZG6-

2、TZ721-

8、ZS1C、TZ62-TH、TZ62-H16、TZ62-H17、TZ62-H14、ZG541H、TZ721-H6、TZ62-H15、82-TH、等以上

单井系统调试及仪表日常维护与检查工作。

回首过去，我们尽职尽责，任劳任怨。展望未来，我们胸有成竹，信心百倍。相信在全体员工的共同努力下，我们的业务水平将再现高点，公司的明天也会更加的美好、强大！我们自动化维护班组也会在不断的学习中进步，不断的工作中升华，圆满顺利的实现下一年的目标和计划。我坚信：没有比脚更长的路，没有比肩更高的峰！努力造就实力，态度决定高度，这就是我们力量的源泉，冲锋的战旗，智慧的摇篮！

第三篇：瑞马公司介绍

瑞马公司介绍

一、公司简介：

“瑞马”品牌诞生于1886年的意大利都灵镇，历经200余年的发展，如今瑞马己成为一个历史悠久的品牌。瑞马的热能设备畅销世界，享誉全球，成为欧洲热能领域的领跑者。

瑞马热能技术设备(国际)有限公司旗下有多个生产基地，员工人数超过20000名，12家跨国公司及5个代表处，产品畅销至60多个国家和地区。瑞马热能技术设备(国际)有限公司为提升服务，进一步打开亚洲国际市场，2009年瑞马进驻中国，引进自己的先进生产技术，注入资金联手建造了自己在中国的4S服务基地——中山羽顺热能技术设备有限公司，并于2010年8月份正式投产，从而大大提高了对中国客户的销售、服务能力。

瑞马一贯重视技术创新及产品质量，投入大量资金用于燃烧、锅炉和供热等领域的技术研发。瑞马重视节约能源和对环境的保护，大举进军热电联供、再生与新型能源领域(例如太阳能集热板技术)，瑞马一直致力于供热系統的技术开发，使其完美无缺，并制定了能耗效率和节能环境保护方面的新标准。

瑞马致力为客户提供安全可靠，技术領先的解決方案，也可根据客户需求量身定制我们的服务。我们有信心把产品与服务做到更优和更好，自信与能力是我们走向卓越的法宝。

二、公司发展历程1、1799年，菲利普·鲁本发明煤气照明和取暖两用装置的专利产品； 2、1800年，鲁本将这种设备用于饭店进行照明和取暖；

3、1822年，意大利米兰理工大学阿斯·瑞马先生改进了这种设备，改为立式，并在自己的餐馆和旅馆里安装使用；

4、1824年，阿斯·瑞马先生的这种立式采暖设备被詹姆斯·巴顿看中，采购100套用于自己的旅馆，得到了用户的赞美；

5、1825年，阿斯·瑞马在意大利都灵镇成立了自己的工厂，开始大批量生产； 6、1886年，阿斯·瑞马以自己的名字命名给工厂起了新名，并组建了股份公司，同年10月“瑞马”第一款壁挂式采暖炉出世；

7、1915年，“瑞马”壁挂炉开始了全球事业性的拓展；

8、1980年，“瑞马”壁挂炉进入亚洲市场，总部设在了中国香港；

9、2000年，“瑞马”壁挂炉进入中国内陆市场，任命马瑞先生为中国区执行总裁；

10、2006年，“瑞马”暖通设备有限公司中国销售公司在广东顺德成立，在中国西北、华北开始了战略性的业务拓展；

11、2008年，应中国区销售需要，决定在中国自产自销，总部前往中国对壁挂炉厂家进行生产、检测审核，12、2009年，瑞马进驻中国，引进自己的先进生产技术，注入资金联手建造了中山羽顺热能技术设备有限公司，13、2010年，进行了公司的改制和革新，同年8月，新型生产线安装调试合格，第一台合格产品成功下线；

14、2011年，意大利瑞马热能技术设备有限公司精心打造的中国制造基地广东中山羽顺热能技术设备有限公司挂牌成立，并将意大利瑞马壁挂炉的全套先进技术注入羽顺公司，成功研发推出10余款新型壁挂式采暖炉和大型立式模块采暖锅炉；

15、2011年12月，根据年底统计，作为新的工厂第一年出货量就达到15000余台，在行业里受到赞扬。

第四篇：本科生毕业论文马瑞 修正

本科生毕业论文（设计）

题

目

南四湖环棱螺基因组DNA的提取与鉴定

姓

名

马瑞

学号

2008142463

院

系

生命科学学院

专

业

生物科学

指导教师

曲志才

职称

教授

2012 年 5 月 20日 曲阜师范大学教务处制

目录

摘要 ……………………………………………………………………………………1 关键词 …………………………………………………………………………………1 Abstract …………………………………………………………………………………1 Key words ………………………………………………………………………………1 引言 ………………………………………………………………………………………1 1 实验材料及方法 ………………………………………………………………………2 1.1 实验材料 ……………………………………………………………………………2 1.2 实验试剂 ……………………………………………………………………………2 1.3 实验器具 ……………………………………………………………………………3 1.4 实验方法 ……………………………………………………………………………3 1.4.1 从环棱螺肌肉组织中提取基因组DNA……………………………………………3 1.4.2 琼脂糖凝胶电泳 …………………………………………………………………3 1.4.3 DNA浓度、纯度及质量检测………………………………………………………4 2 结果与分析 ……………………………………………………………………………4 2.1 琼脂糖凝胶电泳检测结果…………………………………………………………4 2.2 紫外分光光度计检测结果…………………………………………………………4 2.3 实验结果分析………………………………………………………………………6 3 讨论 ……………………………………………………………………………………6 3.1 DNA电泳没出现条带的原因…………………………………………………………6 3.2 DNase的来源以及防止DNase的措施………………………………………………6 3.3 肌肉组织的不同保存方法对实验的影响……………………………………………7 3.4 实验材料的不同研磨方法对实验的影响……………………………………………7 3.5 检测基因组DNA提取效果的方法……………………………………………………7 致谢 …………………………………………………………………………………………8 参考文献 ……………………………………………………………………………………8

南四湖环棱螺基因组DNA的提取与鉴定

生物科学专业学生 马瑞

指导教师 曲志才

摘要：基因组DNA的提取技术是分子生物学研究中经常应用的最重要的实验技术。DNA作为遗传信息的载体，是分子水平实验操作的重要对象，纯度高、浓度高、完整性好的基因组DNA为基因的下游操作可以提供良好的保证。本实验采用经典的酚-氯仿抽提法，以南四湖环棱螺的腹足肌肉组织为材料分离提取高质量的基因组DNA, 用来进行以后的DNA克隆测序等实验研究。实验采用在-20℃条件下保存的肌肉组织为材料，利用SDS裂解细胞，蛋白酶K消化大部分蛋白质，最后用酚+氯仿+异戊醇除去剩余的蛋白质，通过异丙醇沉淀，得基因组DNA。利用琼脂糖凝胶电泳可检测所提取基因组DNA的浓度和质量。

关键词：基因组DNA；田螺；肌肉组织；酚-氯仿-异戊醇

Extraction and identification of genomic DNA from Nansihu river snail

Student majoring in Biological science

Name MaRui

Tutor

Qu Zhicai Abstract：Genomic DNA extraction method in application of molecular biology research is often the most important experimental techniques.As the carrier of genetic information, DNA is an important object of genetic manipulation.High purity, high concentration, integrity, good genomic DNA for gene downstream operations can provide a good guarantee.In this study the phenol-chloroform-isoamyl alcohol method was used to extract genomic DNA from muscle tissue of Nansihu river snail, which will be used for the experimental study of the DNA sequencing.It was used the muscle tissue which was preserved in-20℃ refrigeration, using SDS to lyse cells.Most of the protein was digested by proteinase K and the remaining protein was removed by phenol-chloroform-isoamyl alcohol.Through using isopropanol, genomic DNA can be precipitated.Agarose gel electrophoresis can detect the concentration and quality of extracted genomic DNA.Key words: genomic DNA;river snail;Muscle tissue;phenol-chloroform-isoamyl alcohol

引言 在基因工程中，核酸分子是主要的研究对象，因此核酸的分离、提取是分子生物学研究中很重要的技术。DNA作为遗传物质的载体，是分子水平实验操作的重要对象，纯度高、浓度高、完整性好的基因组DNA为基因的下游操作可以提供良好的保证。因此基因组DNA的提取是基因工程操作中最常用、最基本的实验技术，获得完整性良好的基因组DNA一直都是致力于基因工程研究的分子生物学者所面临的挑战性课题。尽管目前已经建立起许多基因组DNA分离提取方法并开发出若干DNA 分离提取试剂盒，但是，仍有不少实验材料由于富含的DNA酶、多糖、多酚等物质或者降解DNA，或者与DNA 形成难溶物等方式严重干扰DNA 的提取，常常导致实验的失败。就目前应用较为广泛的DNA提取方法而言，高盐法提取DNA虽然便捷，但所提取的DNA纯度较低，稳定性较差，影响基因下游操作。酚-氯仿抽提法已经广泛用于提取多种动、植物组织和细胞的基因组DNA，是比较常用的方法。本实验采用的就是酚-氯仿抽提法，原理是：SDS可以裂解组织细胞，使DNA从细胞中释放出来，蛋白酶K可消化部分蛋白质，并使DNA与蛋白质分离。通过水浴加热充分反应后，加入酚-氯仿-异戊醇等有机溶剂，DNA和变性的蛋白质分别位于整个体系的水层和中间层，从而分离。异丙醇能够夺去DNA周围的水分子，使DNA失水，得以沉淀，从而得到纯化的基因组DNA。

南四湖是山东省第一大淡水湖泊，其自然资源丰富，盛产鱼、虾等经济动物，苇、莲等多种水生植物。南四湖的田螺属于软体动物门，腹足纲，田螺科，环棱螺属。环棱螺的分布广泛、种群密度大，它与水产养殖、医学寄生虫、环境保护等方面的研究关系极为密切。多数淡水腹足类动物的个体小、数量多、耐污染性强，它们以水中的小型藻类、有机质等为食，其自身又是鱼类的天然饵料，对于维持水体的生态平衡和治理水体的富营养化等方面都有着重要的作用，近些年来受到国内外学者的高度重视。因此,对于这样一个与人类生活息息相关的物种,提取其基因组DNA是完全有必要的。同时，分离出纯度高、浓度高、完整性好的基因组DNA可以为许多后备实验做准备，如Southern杂交，PCR，基因定位，基因组文库的构建，基因组测序等，而且在分子水平对环棱螺分类地位的研究成效在很大程度上取决于提取的基因组DNA 的质量。基于此，本实验主要研究从南四湖环棱螺肌肉组织中快速有效地提取高纯度的基因组DNA。本研究采用酚-氯仿抽提法,目的在于分析研究南四湖环棱螺基因组DNA适宜的提取条件,并且分离出纯度高完整的基因组DNA，为分子生物学的深入研究奠定了基础。材料与方法

1．1 实验材料

实验所采用的环棱螺取自南四湖，2011年采集的标本于95%的酒精中-20℃冷冻保存，2012年采集的标本进行活体解剖后，直接存放于-20℃冰箱中冷冻保存。根据所采集环棱螺标本的形态特征大致分为三种（详见表1）

表1 三种不同环棱螺采集信息

铜锈环棱螺 梨形环棱螺 方形环棱螺

采集点 南四湖5号 南四湖18号 南四湖7号

采集时间 2012年4月 2011年7月 2012年4月

采集个数 14 17

1．2 实验试剂

（1）分离缓冲液：10mmol/L Tris-HCl(PH 8.0)100mmol/L EDTA 100mmol/L NaCl（2）10%SDS：裂解组织细胞（3）蛋白酶K：消化部分蛋白质

（4）酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）：除去少量蛋白质（苯酚：使蛋白质变性，蛋白质分子溶于酚相，DNA分子溶于水相。氯仿：一是使蛋白质变性，沉淀，通过离心除去：二是抽提水相里微量的苯酚，防止损伤核酸；三是除去样品中的脂溶性杂质。异戊醇：一是减少蛋白质变形过程中产生的气泡；二是有助于分相，使离心后上层含DNA的水相，中层变性蛋白质相，及下层有机溶剂相保持稳定）（5）氯仿-异戊醇（24:1）：除去少量蛋白质

（6）异丙醇：夺去DNA周围的水分子，使DNA失水，易于沉淀（7）70%乙醇：洗涤DNA（8）TE缓冲液：1×TE（9）琼脂糖

（10）上样缓冲液（溴酚蓝）：电泳时跑在DNA前面，防止DNA跑出凝胶（11）电泳缓冲液（1x TAE）

（12）溴化乙锭：嵌合剂，显示DNA位置 1.3 实验器具

移液枪、枪头、枪头台、EP管、离心管、试剂瓶、量筒、研钵、饭盒、大瓷钢、三角烧瓶、电子天平、电泳仪、低温离心机、DNA离心浓缩仪、蒸汽灭菌锅、冰箱、灭菌箱、手套、口罩、锡箔纸等。

1.4 实验方法

1.4.1 从环棱螺肌肉组织中提取基因组DNA（1）准备试验：配置试剂，现配现用的试剂要当天配制，其余的放入冰箱内备用；枪头、EP管等塑料试剂要用报纸包扎起来，放入高压蒸汽灭菌器内，120-121℃高压灭菌20min，再放入干燥箱内烘干备用；剪刀、镊子等仪器用锡纸包扎好于灭菌箱内200℃大约6h，备用；

（2）实验所用的环棱螺腹足肌肉组织材料，一部分取自95%的酒精中-20℃冷冻保存的肌肉组织，一部分取自刚解剖后立即-20℃冷冻的新鲜肌肉组织，取300-400mg组织进行实验。对于肌肉组织的研磨，在实验过程中采取三种不同的方式:第一，在研钵中用剪子将组织剪碎，分别放入4个1.5mL的离心管中；第二，用剪子将组织剪成小块后，加入研磨器进行研磨，在研磨过程中加入无菌水，以保证研磨充分，分别倒入4个1.5mL的离心管中，离心1min，取上清，保留沉淀；第三，用剪子将组织剪成小块后，在研钵中加入液氮，在冷冻的条件下迅速进行研磨，研磨成粉末状后，用药匙分装到4个1.5mL的离心管中。每个管中约70-100mg组织。向每个管中依次加入540μL TE缓冲液，60μL SDS，50μL蛋白酶K，充分震荡混匀；

（3）55℃水浴加热2-4h后取出，加入等体积的酚-氯仿-异戊醇，轻轻颠倒混匀，4℃，12000r/min离心10min；

（4）将上清移至新的离心管中（这时EP管中已经分层，三层，中间为蛋白质，吸取上清是一定不能吸到中间层，以免混入杂质），加入等体积酚-氯仿-异戊醇，轻轻翻转混匀，4℃，12000r/min离心10min（再次离心的目的主要是再一次去除杂质，使DNA充分溶解出来）；

（5）将上清移至新的离心管中，加入等体积氯仿-异戊醇，轻轻翻转混匀，4℃，12000r/min离心10min；

（6）将上清移至新的离心管中，加入等体积异丙醇，颠倒混匀，4℃，12000r/min离心10min；

（7）弃上清，向沉淀中加入70%乙醇洗涤沉淀，12000r/min离心5min，弃上清保留沉淀，干燥5-10min，加入25μL TE缓冲液溶解，得到基因组总DNA。

1.3.2 琼脂糖凝胶电泳

（1）用胶带将胶板的两端封好，插上梳子；（2）电泳胶的制备（1%）

琼脂糖0.3 g，加入30mL TAE缓冲液，充分加热到沸腾无泡沫，冷却到大约60℃，再向胶中加入溴化乙锭 2L；

（3）倒胶：将融化的凝胶倒入胶模中（不要出现气泡），凝胶厚度大约在3-5 mm之间，在凝胶完全凝固后（室温下30-40 min），撕去胶带，轻轻拔出梳子；

（4）点样：取5L提取的基因组DNA溶液，与溴酚蓝混合后，慢慢将混合物加入上样孔中；

（5）小心地将玻璃板移至装有电泳缓冲液TAE的电泳槽中，且使缓冲液没过胶面。电泳槽中的缓冲液最好与制胶所用的缓冲液是同一批次的，若两种缓冲液中的离子强度及pH不一致，将影响核酸的迁移率；

（6）通电，使DNA向阳极移动。采用80V电压进行电泳；（7）当溴酚蓝在凝胶中移出适当距离后（约1 h），切断电流，取出玻璃板，在凝胶成像系统中观察并记录结果。

1.3.3 DNA浓度、纯度及质量检测

（1）取原液15μL，加TE缓冲溶液稀释到750μL(稀释50倍)，混匀，移至石英比色杯中，以750μL TE缓冲溶液为参比，用紫外分光光度计测定DNA在波长260nm、280nm处的吸收值。

（2）用以下公式进行计算：

DNA浓度(μg/μL)= D260×n(稀释倍数)×50(μg/mL)÷1000； 得率(μg/g)=DNA 量(μg)/样品量(g)； 根据OD260/ OD280判断DNA的纯度。

2、结果与分析

2.1 琼脂糖凝胶电泳检测结果

图1 三种不同环棱螺基因组DNA提取效果电泳图

1.铜锈环棱螺基因组DNA；2.梨形环棱螺基因组DNA;3.方形环棱螺基因组DNA

三种环棱螺的肌肉组织均可以跑出较为清晰的条带，即三种环棱螺均可以提出较为完整的基因组DNA。实验结果显示，酚-氯仿抽提法可以有效的进行南四湖环棱螺基因组DNA的提取，并可以为许多后备实验做准备。但是各条带均有或多或少的拖尾现象，说明在实验过程中存在DNA的降解（图1）。

2.2 紫外分光光度计检测结果

用酚-氯仿抽提法提取三种不同环棱螺基因组DNA的紫外检测结果见表2。

表2 三种不同环棱螺基因组DNA的紫外检测结果 2 OD260 0.252 0.149

OD280 0.138 0.085

OD260/OD280 1.827 1.750

dsdsDNA浓度（μg/μL）dsDNA得率（μg/g）

0.6300 0.3725

189 111.75 3 0.371 0.203 1.828 0.9275 278.25 注：1.铜锈环棱螺基因组DNA；2.梨形环棱螺基因组DNA;3.方形环棱螺基因组DNA A

B

C

图2 三种不同环棱螺基因组DNA的光谱扫描曲线 A为铜锈环棱螺基因组DNA的光谱扫描；B为梨形环棱螺基因组DNA的光谱扫描；

C为方形环棱螺基因组DNA的光谱扫描

从表2中可以看出，3种不同环棱螺基因组DNA的OD260/OD280比值都在1.70－1.85之间，说明提取的DNA纯度较高，用相同的方法提取不同种环棱螺的基因组DNA，都能够得到较高纯度。然而所提取的基因组DNA仍然存在污染，铜锈环棱螺和方形环棱螺DNA的OD260/OD280比值大于1.8，说明存在RNA污染，而梨形环棱螺DNA的OD260/OD280比值小于1.8，说明存在蛋白质污染。即便如此，从表中的数据可以看出，所提取的基因组DNA的浓度和得率均较为理想，说明酚-氯仿抽提法适合不同种环棱螺基因组DNA的提取。

2.3 实验结果分析

实验结果显示，酚-氯仿抽提法可以有效的进行南四湖不同种环棱螺基因组DNA的提取，并可以为许多后备实验做准备，如PCR，基因组文库的构建，基因组测序等。

实验过程中，由于很多因素的影响，如外界污染源的污染，加入有机溶剂酚-氯仿-异戊醇或氯仿-异戊醇颠倒混匀时过于剧烈导致基因组DNA断裂，水浴时间不充分使得细胞未能充分破裂释放DNA，从而导致一直未能够取得较满意的结果。异丙醇沉淀的步骤时，絮状沉淀有很多，但是不全部是DNA，还含有不少未除净的蛋白质（留在点样孔中）以及RNA（跑在前面），所以电泳的条带没有理想中的效果，会出现蛋白质杂质以及降解的DNA、RNA。然而目的条带基因组DNA仍然能够跑出来，可以继续基因组文库的构建以及基因的克隆、测序等后续操作。

3、讨论

3.1 DNA电泳没出现条带的原因

（1）所提取的DNA样品量太少或者样品中DNA已经被内源性DNase降解。（2）操作时没有严格按照提DNA的要求做，一般需要带手套，最好带上口罩，所有塑料用品需要高压蒸汽灭菌，实验的过程要在超净台上操作，尽量不让外源的DNA酶降解DNA。（3）研磨不充分，或者加入分离缓冲液、SDS、蛋白酶K之后，水浴时间不足，细胞未能充分破裂释放DNA。（4）加入有机溶剂酚-氯仿-异戊醇或氯仿-异戊醇后，颠倒混匀时过于剧烈，从而导致DNA断裂。（5）DNA未能与蛋白质充分分离，当除去蛋白质时，DNA随蛋白质一起被除去。（6）加入异丙醇沉淀离心10min后，DNA依然悬浮，未能沉淀到离心管底部，易随着液体被倒掉。这时，可以用移液枪小心吸出液体，再加入70%的乙醇洗涤，离心后，DNA可以沉淀。（7）在用移液枪吸取上清液时，未用剪过的枪头，从而在吸取时导致DNA链断裂。

3.2 DNase的来源以及防止DNase的措施

要进行PCR，基因组文库的构建以及基因组测序就需要得到完整的基因组DNA；而要得到完整的基因组DNA需要最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性DNase对DNA的降解。内源性DNase始终存在于肌肉组织中，最适pH值在7.0附近，活性在pH5～6区域稳定。外源性DNase稳定且广泛存在，操作者的手、唾液等含有较丰富的DNA酶，实验用试剂、器具等都含有DNase。DNase的活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。依据DNase的这一性质，在Tris-HCl缓冲液中加入EDTA，EDTA可以螯合二价阳离子，抑制DNase的活性。

然而不能因为加入了EDTA就放松了防止外界环境中DNase污染的警惕性。需要严格控制实验条件，避免任何可能的污染，是保证实验成功的关键。为此，必须作到以下几点：

1.实验室应专门辟出操作区，离心机，移液器，试剂等均应专用。电泳槽、制胶板先用蒸馏水洗涤然后用70％的酒精处理，并且应保持清洁，定期行除菌。

2.操作过程中应戴一次性橡胶手套，并经常更换，以防止手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的DNA酶带到试管或污染用具。避免在操作中说话聊天。也可以戴口罩以防止引起DNA酶污染。

3.尽量使用一次性的塑料制品，枪头、EP管等都应该用新的，以防交叉污染。

4．在抽提过程中，若蛋白质含量或其它的杂质还较多，可以增加抽提次数。尽量在低温下操作，如果条件不容许，在室温下操作的时间要尽可能的短。

5.DNA电泳的电泳液和胶必须现配现用。

6.所用玻璃器皿、镊子剪刀等需先置于高压蒸汽灭菌锅内进行高压蒸汽灭菌。3.3 肌肉组织的不同保存方法对实验的影响

本实验所用的田螺肌肉组织材料实验前进行了两种不同的处理方式。

在第一种处理方式中，将采集的田螺标本浸泡于95%的乙醇中，并于-20℃的冰箱中冷冻保存一年。一年后取出田螺标本，解剖，取肌肉组织进行实验，难以提出DNA。推测难以取得理想的实验结果的原因是多方面的，而主要原因可能是经过长时间乙醇的处理，肌肉组织变得坚韧，剪成粉末并加入SDS，蛋白酶K，进行水浴后难以将细胞充分裂解释放DNA，于是DNA则随蛋白质一起被除去；另一个原因则可能是经过长时间的保存，肌肉组织中的DNA已经被降解。

第二种处理方式，是将刚采集的新鲜田螺进行活体解剖，取其肌肉组织于-20℃的冰箱中冷冻保存，并在短期内进行实验。-20℃冷冻保存的原因是防止DNA被DNase降解（最好是在-70℃保存，由于实验条件限制，采取-20℃冷冻保存）。新鲜的田螺肌肉组织较软，进行充分研磨后加入SDS，蛋白酶K进行水浴，短时间内就可以使得细胞充分裂解，为后续的实验步骤做了充分的准备。从而使取得理想的实验结果成为可能。3.4 实验材料的不同研磨方法对实验的影响

本实验，采取了三种方式对环棱螺肌肉组织进行研磨，具体的操作与实验效果如下： 第一种方式，是用镊子和剪子在研钵中将肌肉组织剪碎，尽量剪成粉末，来保证与SDS蛋白酶K的充分反应。然而，新鲜的肌肉组织较湿润，难以剪成粉末状，达到理想效果。从而在除去蛋白质时，由于DNA未充分释放，使得不少DNA随蛋白质一起被除去，造成实验材料的浪费，从而跑出的电泳条带颜色较浅，甚至无法跑出条带。

第二种方式是采用玻璃研磨器，将已经剪成小块的肌肉组织进行充分研磨，并加入无菌水将其研磨成浆，分装入离心管中后离心1min，研磨好的组织沉淀到管底，将水吸出，加入后续药品。这个方式可以使组织细胞与SDS，蛋白酶K充分反应，DNA得以充分释放，从而为跑出理想的条带做准备。但是这个方法步骤复杂，耗时较长，并且易在研磨过程中受到DNase的污染。

第三种方式是在研钵中将肌肉组织剪碎的基础上，加入液氮，在液氮冷冻下将实验材料迅速研磨成粉末，分装入离心管中，加入后续药品。采用液氮是实验中最常用也是最为正规的方式，在保证了研磨充分从而使得组织与药品充分反应的同时，也加快了研磨速度，有效的避免了DNase的污染。

3.5 检测基因组DNA提取效果的方法

对于实验中所提取的基因组DNA的提取质量，一般可采取三种方法进行检测。除了本实验中所采用的琼脂糖凝胶电泳的方法和紫外分光光度法以外，还有PCR扩增法：PCR反应条件为95℃预变性5min后，按照94℃变性30s，48℃退火30s，72℃延伸1min的循环参数进行30个循环，最后72℃延伸10min终止反应。反应体系的组成为：dNTP混合物，10×PCR buffer，正向引物，反向引物（根据所扩增的区域选择引物），模板DNA，Taq酶，最后用双蒸水补足20μL。PCR产物在含溴化乙锭的琼脂糖凝胶中电泳分离，用凝胶成像系统记录产物条带。

致谢

从开始写作至本论文最终定稿，总共花费了我一个月以来所有的业余时间。虽说在繁忙的工作之余要完成这样一篇论文的确不是一件很轻松的事情，但我内心深处却满含深深的感激之情。论文是在导师曲志才教授的悉心指导下完成的。导师渊博的专业知识，严谨的治学态度，精益求精的工作作风，诲人不倦的高尚师德，严以律己、宽以待人的崇高风范，朴实无华、平易近人的人格魅力对我影响深远。不仅使我树立了远大的学术目标、掌握了基本的研究方法，还使我明白了许多待人接物与为人处世的道理。是曲导师让我能够静静地坐下来，在知识的海洋里吸取更多的营养，从而能够为自己进一步地加油充电。本论文从选题到完成，每一步都是在导师的指导下完成的，倾注了导师大量的心血。在此，谨向导师表示崇高的敬意和衷心的感谢！由于本理论水平比较有限，论文中的有些观点以及对企业示例的归纳和阐述难免有疏漏和不足的地方，欢迎老师和专家们指正。

本论文的顺利完成，离不开各位老师、同学、朋友和学校的关心和帮助。在此感谢师姐陈思、师妹焦玉莲、师弟吕甲强、丁吉顺同学等等的指导和帮助；感谢实验室的所有老师和同志的指导和帮助；感谢曲阜师范大学的支持和帮助。没有他们的帮助和支持是没有办法完成我的学位论文的，同窗之间的友谊永远长存！参考文献

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第五篇：瑞马嘉丰公司简介10-17

瑞马嘉丰公司简介

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样本大纲

封面1P

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光学与照明系统1P（低碳环保概念形象图，文字简明扼要）

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