塑封机的工作原理与操作方法浅析

第一篇：塑封机的工作原理与操作方法浅析

塑封机的工作原理与操作方法浅析

编辑：湖湘文印联盟

塑封机的工作原理是在电机的拖动下保持匀速转动，通过发热装置将胶辊加热，加上一定的压力，两张预涂胶的塑封膜相对粘贴在被塑封物上。

由此看出，在工作时，胶辊的损耗是比较大的，因此在保养时，应该特别注意胶辊的保养与维护。另外，我们在平时操作机器时，也应注意操作方法，切忌错误操作；这样在保养时可以省些麻烦，延长机器的使用寿命。

塑封机的操作方法介绍：

1、将塑封机平稳妥放置在工作平台上。

2、将控制面板上的调节温度旋钮，置于温度较低的刻度位置，电源开关在关的位置。

3、接通电源，插头要插按牢靠，打开电源开关，红色电源指示灯亮，塑封机同时开始升温。

4、根据塑封膜热熔温度的高低和划片厚度的不同，调节温度旋钮，设定适宜的温度。

5、当绿色指示灯亮时，表示温度已到设定温度可以进行塑封工作。

6、将塑封膜分开，将资料页夹在中间，使塑封膜的涂胶面面对被塑封物，然后将塑封膜合上。

7、从前向后送入塑封机中加热，经前后胶辊对压后，从后工作面板输出，即可得到良好的塑封件。

8、塑封工作结束后，不要立即关机，首先将温度调节旋钮置于最低温度刻度位置，运转5分钟后再关机，以利胶辊使用寿命。

9、关机时先关掉电源开关，然后切断电源。

第二篇：高中史料教学的原理与操作方法

高中史料教学的原理与操作方法

王锡文（广东省中小学教师工作室，特级教师）

“历史是一门既包括描述也包括解释的学科。”随着历史课程改革的推进，史料教学的重要性将越来越突出。运用史料解释历史、还原历史现场，进而理解历史成为新课程改革以来中学历史课堂教学改革的亮点之一，也是实现三维目标的必由途径。可以说，几乎每一节历史课，都会有史料教学的环节。同时，在近几年来的高考命题改革中，作为一种重要的能力考查目标，史料分析的色彩和比重在试卷中将越来越显著。几乎可以说，“没有史料无以成题”。

一、历史史料教学的地位和现状

（一）历史史料的分类

史料是研究和认识历史的依据，是“重现”历史的基础。一般来说，史料愈是确凿、丰富，人们经过研究和解释，对历史的认识也就愈是真切，对历史的“重现”也就愈接近它的本来面貌。史学专家们一般把史料分为三类，即文献史料、实物史料、口述史料。．文献史料。一切以文字形式记载的资料，如官私史书、文书档案、文集日记、野史笔记，以及各方面的书籍和近代以来出现的报刊、杂志等；也包括了碑刻、摩崖，以及考古发现的甲骨文、金文、简帛、墓志等都属于文献史料。今天，除了以纸张为载体的文献资料以外，还有大量以电子媒介为载体的文献资料。对于世界上发生的大小事件，人们通过电子邮件、BBS 跟帖等方式表明自己的态度，历史记载变得更加丰富多样，也为我们利用好文献史料组织教学活动提供更为广阔的资源。．实物史料。是历史上人类活动遗留下来的各种物件，主要是各种历史遗存和考古发现，如遗址、墓葬及出土文物等。．口述史料。是指人们口头讲述并被记录下来的资料，其记录的方式有笔录、录音、录像等多种。这些资料包括神话、传说、故事、史诗、俗谚、遗训，以及回忆录、对话录、采访记、座谈录音等。

从另外一个角度分类，也可以把史料大体分为第一手史料和第二手史料。一般说来，第一手史料是指原始资料，即历史人物、事件、现象发生的那个时代留下来的材料，特别是当事人和目击者提供的史料，直接反映了所研究对象的情况；第二手史料是指距离那个时代较远的记录、转述，或者后人的研究成果，间接反映了研究对象的情况。一般来说，第一手史料的史料价值较高，但也不是绝对，古人说：“不识庐山真面目，只缘身在此山中。”史料的撰写者，有时也会“当局者迷”，反倒不如后人或者局外人看得全面、客观。

（二）当前历史史料教学的现状

当前史料教学进行得如火如荼，涌现了大量优秀的教学案例。下面谈谈一些问题。第一，教师的理念没有跟上。不少教师仅仅是把史料教学理解为史料的简单堆积，并没有把史料教学与三维目标紧密联系，更没有有意识地培养学生的质疑精神和质疑的能力。在课堂上，给出大量史料，也只是做“依靠教材既定论点，加以佐证”的工作而已。这样的话，违背了史料教学法的初衷。史料教学的教学目标是什么？用什么方法比较好？培养学生的基本能力有哪些？等这些基本问题搞清楚了，才有助于历史教师在使用史料教学中高效胜出。

第二，学生的能力有待提高。在目前的教法下，大多数学生“史从证来、论从史出、史论结合”的历史思维能力没有得到很好培养，质疑意识和质疑能力比较低下。日常学生对教师的提问，大部分仅仅局限于自己对教材或者自己在建构知识网络时遇到了不懂的地方，是一种对文本低级的疑惑。而质疑，应该是一种超越文本对问题提出自己看法的意识和能力。在很多地方，课堂还是教师一言堂，并没有“发挥学生的主体作用”。学生对大量、不同的观点的史料，显得无所适从，带有恐惧感。

第三，史料的获取途径狭窄。也许这个本来不应该是问题，但是却是制约史料教学的另一大因素。扪心自问，除了大学时候的教材和工作之后断断续续买了几本书，我们手头上还有什么别的资料？日常大量琐碎的工作占据了中学教师不少的时间，使得我们无暇看书，渐渐与高校的学术研究脱节。

第四，教学时间安排失当。一节四十分钟或者四十五分钟的历史课，应该如何合理安排呢？指导学生阅读史料的时间是多少呢？学生练习的时间又是多少呢？不少老师都比较糊涂。

二、例谈历史史料教学的策略与方法

在实际教学活动中，如何鉴别史料、选择史料、分析史料，不少一线教师都遇到了困惑。本视频试图从这些问题着手，抛砖引玉，希望给广大教师提供参考。

（一）从哪里选取史料

史海浩瀚，单文字史料就多如牛毛，随着时代的发展，史料的记载方式还包括了图片、音频、视频等。史料如此丰富，史料的来源当然也丰富多样的，获取的途径相当多。

作为中学教师，史料的来源首推教科书，教科书的大字小字、插图等是教材编者精心选取的，是课堂教学的第一材料，平时在教学中应充分利用好课本的素材。其次，可以从网络上撷取史料。一般采用关键词、关键句搜索的办法就可以找到相关史料，相当方便；另外还有不少网站提供大量的学术史料。但网络资料有其自身弊端，教师在采纳网络资料的时候要充分鉴别真伪与准确性。

再次，从历史专业书籍和历史专业论文中选取。这就意味着广大一线教师要多关注史学动态，与时俱进，扩大阅读范围。

另外，可以从每一年的高考试题和各类模拟题中找史料。近几年的高考题或模拟题都以“新材料、新情境”出现，涌现了很多新颖的史料，可以为教学所用。除了上述的途径，还可以通过看新闻、到档案馆或博物馆参观等方式来获取。总之，方式多种多样，只要平时多留意多积累，肯定可以构造属于自己的史料库。

（二）怎样选取史料

选取史料组织教学之前，先要明确几个大的原则：一是根据课程标准，灵活调整教学的目标，并选取史料（更多选取第一手史料），有所偏重；二是根据学生情况来选择史料（不宜选取文字阅读量过大的史料），对症下药；三是研读史料，精心设问，置疑解惑；四是选择多样化的史料，丰富课堂内容，在观点的碰撞中锻炼学生思维；五是带着问题去研读史料，多选取能够激发学生情感、态度、价值观的史料。

1.根据课程标准，灵活调整教学的目标，并选取史料（更多选取第一手史料），有所偏重

《普通高中历史课程标准(实验)》就知识与能力方面的课程标准中明确指出 “在掌握基本历史知识的过程中，进一步提高阅读和通过多种途径获取历史信息的能力；通过对历史事实的分析、综合、比较、归纳、概括等认知活动，培养历史思维和解决问题的能力。”其中阅读与获取历史信息，需要在教学中学会运用史料；而对历史事实的分析更要建立在史料的搜集、甄别与运用上。课标还就教学过程与方法方面提出了“努力做到论从史出、史论结合”、“注重探究学习”、“养成独立思考的学习习惯”等要求。“探究学习、独立思考”，需要建立在对历史本来面貌的认识的基础上，特别需要进行史料教学；而“论从史出，史论结合”更是对教学中史料的运用提出明确和更高的要求。从国家新课程标准的表述中，不难看出，善于运用史料教学，在中学历史课堂教学过程中是十分必要的。课标是教材编写的出发点，更是教师平时备课上课的依据，在史料教学中，应紧紧按照课标的要求，设置每一课的教学目标。华附刘敏老师的《王安石变法》一课的课标要求为：（1）了解王安石变法的历史背景；

（2）归纳王安石变法的主要内容，评价其历史作用。在学习新课之前，教师布置了《自学提纲》，加上平时的“通史讲坛”活动，学生可以自己掌握变法的历史背景和主要内容，因此刘老师将课堂的重点列为课标的后部分——评价王安石变法。刘老师通过史料教学来引导学生身临其境王安石的时代，用历史的眼光来评价这场伟大的变法，并引导学生联系改革开放三十年后的今天，得出启迪，落实情感态度价值观目标。

相比刘老师的“循规蹈矩”，东莞东华高级中学的李小萍老师的《洋务运动》一课同样采用了史料教学法，但更显得“灵活多变”。《洋务运动》一课，在高中三本必修中都有所涉及，分别是必修Ⅰ的第 12 课，必修Ⅱ的第 10 课，必修Ⅲ的第 20 课。课程标准里是这样规定的：“简述鸦片战争后中国经济结构的变动和近代民族工业兴起的史实，认识近代中国资本主义产生的历史背景。”“了解鸦片战争后中国人学习西方、寻求变革的思想历程，理解维新思想在近代中国社会发展过程中所起的作用。”显然，课标的这两处要求都没有明确要求把握洋务运动，但岳麓版教材里有关近代中国经济结构的变动和影响民族工业发展的因素，皆与洋务运动相关。因此，李老师在立足于课程标准的基础上，根据学生现阶段对洋务运动的模糊和片段理解，着力点在阅读新材料材料，根据新情境，提取信息，得出更人性化的新认识，通过细节来展示一个和学生以往结论中不一样的洋务运动，针对高三学生提出了这样的教学目标：“能通过观念细节的变化分析洋务运动前的时代挑战；能通过李鸿章和张之洞的洋务人生认识洋务运动艰难曲折的应战细节；学会通过新材料得出新认识，提升材料分析的史学能力；通过李鸿章和张之洞的洋务人生感悟中国近代历史改革者的艰难、智慧、局限以及他们事业深远的影响。”

从上面这两位教师的教学目标设计，我们可以看出教学活动的设计或教学资源的选取，在一般情况下都是以主题为中轴而展开的；教学设计系统的各个基本构成要素，也是围绕主题联结而来的。不管是采用史料教学法，还是使用其它的教学方法，都要先确定好本课的教学主题，即课堂的教学灵魂。

2.根据学生情况来选择史料（不宜选取文字阅读量过大的史料），对症下药 学生是课堂的主体，学生的情感、行为变化是衡量教学有效性的最重要的尺度之一，史料的选取要根据学生的实际情况。学生在学习本堂课的知识前，他们已有的知识技能怎样？学习本课主要需要准备哪些学习方式或学习方法，学习本课需要准备怎样的情感态度与价值观呢？

为了更好的了解学生的情况，李小萍老师在课前设置了一个问卷调查，要求他们选取其中之一解答，也可全部解答。如下：

（1）洋务运动中的哪些人物你最感兴趣，为什么？选取一二简述。（2）当时的清政府是否需要一场洋务运动？观点自选，说明之？

（3）洋务运动创办过程的那个环节你最渴望探求，为什么？试用自己的方式来完成你的心愿。（4）洋务运动的指导思想是什么？你对这个思想的认识和评价是什么？为什么？

（5）在传统认识里洋务运动的目的是什么？你的观点有和不同？为什么？（6）洋务运动是否能让中国富强起来？为什么？（观点自选，史论结合说明）（7）对洋务运动的评价，史学家范文澜和胡绳认为“洋务运动是反动的卖国的运动，其作用在于加深了中国的半殖民地化。”，华东师范大学 历史系教授夏东元指出：洋务运动是“以学习和利用西方先进的科举技术来维护和拯救清王朝为首的封建统治的活动。”你同意哪些观点？你怎样评价洋务思想和洋务运动？你能说明自己的观察视角和评判标准吗？从国人对洋务运动前后不同的评价，你认识到了什么？

从学情调查中，教师发现学生对洋务运动中的李鸿章和他的洋务事业有特别的渴望，但是他们缺乏相应的资料，无从探究，也不可能得到更多的认识。针对学生的情况，李老师精心设计了这节课，引导学生在新材料、新情景下重新构建对洋务运动进行全方位的认识和探究，力图跳出学生已有观念的限制，引导学生在细节中探寻一个真实的洋务运动和洋务派。

根据学生情况来选择史料，除了表现在课前的调查和跟踪，更重要的是表现在针对学生的情况选择合适的史料，不同年龄和能力的学生需要使用不同形式的史料。高中生阅读史料，提取要点的能力还有待加强，因此我们课堂选择的材料最好是那些大众化、容易理解的史料；并且要对难度较大的原始文献进行加工和编辑，删掉文献中难懂和没用的部分，当然也不能过分改写和编辑，以至于改变文献的原意。

李小萍老师在新课一开始给学生展示了三则简单有趣的史料“英国人的膝盖能弯曲吗？”“夷和洋不一样吗？”“胡林翼被吓晕了。”这三则史料侧重于细节，反差较大，在课堂的开始就制造一个思维的冲击点，在惊奇的刺激下学生的思维被调动。课堂的开头有凝神、起兴之效。第二则史料内部本身有矛盾而且又能和第一个细节对应，二者形成一个相互的比较和发展。第三则史料充满戏剧性，在课堂上制造笑点之外更能制造思维点。三则史料容易理解，材料之间起到了阐明与冲突的作用，达到了史料教学的效果。

一般来说，对史料的摘引与转述较可行的方法有三种，一是对那些易于知晓但散于各处的文献资料，用“摘引”的方法，将有关的文字资料摘出来放在一起来说明某个问题；二是对那些文字难懂且篇幅较大的文献，宜采用“转述”的方法，即教师将其内容用通俗易懂的话介绍给学生；三是摘引和转述两者相结合，这一种形式常用。

3.研读史料，精心设问，置疑解惑

一节好课，史料选取是否恰当，有没有组织学生针对史料进行有效的研讨十分重要。有的教师在备课过程中选取了大量的史料，但在教学实践中却将这些极有价值的史料只作“走马观花”似的浏览，这样就起不到史料教学法的效果。在教学中，史料要精心选取，并且精心设问，方能突显史料教学的效果。对待典故史料，需要细嚼慢咽，逐句过关。在一些教学内容中，我们常常会引用官私史书、碑刻、墓志等文献史料。教师对一些冷僻的读音、字义，难懂的典故等细节，要给予讲解，不能粗枝大叶，脱离学生的实际认知情况。

东莞的李小萍老师在上《洋务运动》一课时，在史料选择上采用了李鸿章写给恭亲王奕的一封信：“鸿章窃以为天下事穷则变，变则通。中国士大夫沉浸于章句小楷之积习，武夫悍卒又多粗蠢而不加细心，以致用非所学，学非所用。„„鸿章以为，中国欲自强则莫如学习外国利器。欲学习外国利器则莫如觅制器之器，师其法而不必尽用其人。欲觅制器之器与制器之人，则我专设一科取士，士终身悬以为富贵功名之鹄，则业可成，业可精，而才亦可集。”

这封信在历史上比较出名，是史学家研究李鸿章洋务人生必不可少的材料。但这份典型材料长度较长，而且多是文言文，对于高中生来说阅读有一定的难度。这就需要教师在设置问题、解释史料上下功夫了。为此，李小萍老师选择在课前就先提供材料，留给学生充足的时间阅读史料。同时选择了学生的认知冲突点来设置问题，因为这段材料里体现出的李鸿章和学生原有认识里的李鸿章是有一定矛盾冲突的，材料里的李鸿章是一个改革家，一个有远见卓识、又本着经世致用的传统精神的改革家，与平日教科书里那个“狭隘”的李鸿章不太一样。李老师设置了两个问题（1）根据材料，提取李鸿章认为改革的必要性何在？提取李鸿章的改革规划。（2）李鸿章的这封信被蒋廷黻誉为 19 世纪最有价值的文章，值得再三的阅读，在信中体现了李鸿章的哪些远见卓识呢？ 问题精辟有力，贴近史料，紧扣目标，引发了课堂的一个小高潮，学生通过一封信引发的思考，对李鸿章的再认识，逐渐形成。在层层深入后，李老师又找到了“李鸿章请修铁路却遭到反对”的原始史料，组织学生在研读史料中学会找关键词，再通过关键词去总结核心问题，解决疑惑。

4.选择多样化的史料，丰富课堂内容，在观点的碰撞中锻炼学生思维平时的历史课堂教学所选用的史料形式应该是多种多样的，史料的形式包括历史文献、摘录、历史地图、统计资料、历史图片、艺术作品、名言警句、诗词楹联、民间传说、照片邮票、漫画插图、音像资料等。将各种形式的史料结合起来使用，培养学生“史由证来，论从史出，史论结合”的历史思维，我们的历史课堂也更有生命力。

刘敏老师在《王安石变法》一课就选择了多样化的史料，除了我们常见的文字史料外，还有漫画材料（“西夏军队与北宋作战”的漫画）；柱状图表（北宋官员增长图、北宋兵员增长图、北宋前期的财政收支图）；直观的数据史料（收复河湟五州，拓地 2000 余里，受抚羌族 30 万帐）等等。李老师的课堂所采用了的史料同样丰富多样，有各种漫画插图、还有历史地图、音像资料等。其中既有一手史料，也有大量的二手史料。当然，史料不是越多越好，而是要精心挑选，有所取舍。选择的史料应能全面反映所考擦的历史现象，避免选择非典型性材料。

5.带着问题去研读史料，多选取能够激发学生情感、态度、价值观的史料 不少教师都有过困惑，采用史料教学法的时候如何落实情感、态度、价值观目标呢？比较可行的方法是制造认知或思维的冲突点。华附刘敏老师在讲述《王安石变法》时，用了“历史的遗憾”的标题引出王安石变法的背景。她选取的材料为“公元 1127 年，靖康之变。距离王安石发起他那著名的变法运动刚好五十八年；距离司马光废除这些变法，也过去四十一年；距离另一位反对变法的苏东坡去世，相隔了二十六年。这三人，在中国历史上享有同样伟大的名声，并且一度是相互倾慕的好朋友。因为这场变法，三人渐行渐远，终于彻底葬送了友情，并且成为政治上的死敌。”这样的材料引人思考，提高了学生的学习兴趣，有利于激发学生情感、态度、价值观。

除此，刘老师还罗列了大量史料，比如“不愿让人抬、不坐轿的宰相；拒奢华、拒纳妾的宰相”的精辟概括、“拒喝上司包拯的敬酒”的趣味小故事等，生动刻画了王安石的性格特征，展示了一个有强烈社会责任感、有丰富的地方工作经验、品德高尚、意志坚定、性情执拗的北宋改革家形象。

另外，史料教学不仅仅是教师收集史料，通过多媒体课件提供给学生研讨，也可以组织学生进行自主探究，合作学习。如让学生针对某些问题搜集史料(设疑)→选择史料(甄别)→整理分析史料→运用史料(讲述、讨论等)→撰写小论文。华附刘老师的课堂就鲜明体现了上述特色。史料的学习始终贯穿其中，在过程中突出培养了学生实践能力和独立思考能力等。

总之，史料教学法只是一种教学策略之一，其原理和方法都应服务于课堂的目标，服务于学生的发展。

参考资料

【相关资源】

1.论史料教学（CAJ）

2.论史料教学的分层进行方法及操作原则 _ 以 _ 中国近代史 _ 为例（CAJ）3.论史料教学的价值 _ 兼论中学历史教学发展趋势(CAJ)4.史料教学略论(CAJ)5.史料教学浅谈(CAJ)

6.史料教学与其它教学方法的整合(CAJ)7.谈中学历史新课改背景下史料教学的加强(CAJ)8.关于高中历史史料教学现状的调查与分析(KDH)9.课改背景下史料教学作用新探(KDH)10.利用史料教学培养学生的综合素质(KDH)

11.美国历史教育的特点之一 _ 收集和使用第一手资料(KDH)12.史料教学浅议(KDH)

13.史料教学在历史课堂中的运用(KDH)14.谈历史学科的史料教学(KDH)15.谈新课程背景下的史料教学(KDH)16.试论史料的历史教学应用(NH)

17.试论史料在美国中学历史教学中的运用(NH)18.对美国史料教学的方法论及实践意义之探索(NH)19.王锡文：对外开放格局的形成教学设计 20.一课时讲完隋唐史的实验 21.李小萍：洋务运动教学设计

高一历史学习的障碍与破除》

许多老师感觉教高三比教高一轻松，这是有道理的，高一学生的历史学习习惯尚没建立起来，反而有诸多的障碍在那里等着老师破除，老师是一个教书先生，又要承担更为繁重的清道夫的工作，且要在道路的两旁催发四季的美景，在道理的终点建造一个巍峨英华的发展中心，这怎不叫一个辛劳呢？高三呢？学生早就整装待发在跑道上，教师只要在他们的跑车里加进去适当的燃料就可以了，至于自我的操控那是车手的事情了，教师主要是欣赏赛车的盛况与等着收获赛终的仪式，二郎神三只眼，也常做翘起二郎腿的惬意姿态的。那么高一的学生，历史学习的障碍有哪些呢？我粗略笼络了一下，至少一下六处。

第一，学科多，作业多，历史学习没时间。周三下午，监考历史模块考试，徜徉于奋笔疾书的学生森林里，我感觉大脑呼吸到了负氧离子，特别的舒坦，有唐太宗天下英雄尽入毂中矣的浩然之气。于是深切感悟到那些频繁考试和毫不犹豫批发作业量的学科的老师，他们为何那般的作为，原来其中幸福多多啊。我们的学生早已经没有了个性，早已经成为作业与考试的奴隶，所以在考试和作业中才能是温顺可爱的形象，没有考试和作业，他们是不会关注历史的。但我们的历史，却太多的历史使命感，至于我们的老师不忘记那一份良心驱使下的恻隐之心，告诫自己作业要少，考试要少，不要惊扰了学生发展的梦。而其他学科，则是品嚐作业与考试如蜜的狗熊了，历史的时间被完全挤兑掉了。

第二，学习的板块不完整。学习有预习、听习、复习这三习板块，共同构成一个学习过程。因为历史复习的时间被挤兑掉，所以造成学生历史学习的板块残缺问题，这是很有害的。今年我将作业资料上的作业前置为预习性作业，发现学生大部分能自我解决，作业的质量在表面上看与后置性作业没有明显差别，这说明学生的预习阶段是认真的。——不过，作业的内在质量还是有区别的，前置性的作业，学生更多是查阅教材来完成的，并非教师所期望的先看书，然后作业的程序，后置性的作业呢，学生更多是脱离开教材，更多依赖回忆、调取内化库存的结果，这导致作业的效果的不同。

因为没有复习环节，前两个环节的学习效果被时间销蚀掉，最终几乎剩余为零，这是一个零化的学习游戏，有点悲哀的色调。我常给学生算一笔账，一节历史课40分钟，一课的作业要花费40分钟，这样平均下来，每天的历史学习用时在半个小时以上，因为没有复习，这每周的几个小时就等于荒废掉，人生的好大一段失去了意义，实在是伤怀的孽业。

第三，不科学的课堂观。一个课堂过程里，包括眼看、口动、脑思脑记、手动、耳听，这中间，脑子的运动主要内容是思维和记忆。很多学生的课堂观是错误的，以为课堂上就一个播撒汗水的过程，是听课摄取、手记笔记的任务，却并没有收获记忆的机制，其实。学生应学习收割机的原理，收割与入仓的工作同时进行，然后待课堂结束了，学习的内容基本打包了。一些学生不懂得这个课堂的原理，课堂的效率就比较低。一些学生甚至把课堂作为最放松的时间，课下有大量的作业在那里被逼迫着，课堂上用脑是轻松的、听讲是享乐的，这种课堂最为轻松的情况，让人哭笑不得。

第四，历史为副业的思想。大部分学生是要选学理科的，这就导致他们将历史做副业，只求60分万岁，没有将历史学精的心理姿态。这样的思想具有感染性和传染性，这个学生的历史学习会比较敷衍，这种思想传染下去，整个班级的风气也将是敷衍的，班级的基调就会发生偏移，历史教师不可不警惕。第五，初中学习缺陷制约高中学习。举一个例子，我出了一个依靠徐州来判断淮海战役的题目，学生的错误率比较高，原因之一是历史教材中对三大战役只罗列了名称，没有展开，另一个原因则是学生初中的地理学习，人文地理很是薄弱，他们不知道中国这样一个重要的交通枢纽和区域性中心城市，这对于现代中学生来说，无疑是一种讽刺。但这种讽刺实实在在存在的，这就是中国如今的教育。这种初中教育导致的知识缺陷，对高中历史的教学是很影响的。

第六，对中国教育的叛逆思想与行为。有个学生，极力否定中国式教育，在课堂上表现为对笔记、作业、记忆的不屑，将许多的表现给予了不作为。他的课堂表现是糟糕的，考试同样糟糕，但他并不反省，反而认为这是一种个性的光辉。这样的学生并非少数，因为非主流的脱序，他们大多是沦落为边缘人的，应试教育伤害了他们，他们同时也伤害着教育环境，成为一个很吊诡的群体。

那么我们如何破解上述的几种问题呢？

第一、将学习的环节完善起来。（1）适当增加考试，历史不拒绝考试，通过考试端正学生态度，激励学生情致，检验学生学情；（2）增加课后作业，最好是精选而针对性强、量少的作业，保证学生将复习的环节重视起来；（3）课堂观的教育，并调整课堂的机制，让学生的记忆在课堂上有一定的空间督促和展示。

第二、对一些应试教育不配合的学生，教师可以利用他们进行素质教育的点缀，如让他们进行研究性的课题，依靠课堂展示让他们获得价值认可，并在这种成就感中由不配合发展为配合，从而进入教育的程序里。排斥不如接纳，批判不如认可，否定不如激励。

第三、建立师生接触机制。如成立“教师小助手”小组，使学生多与教师接触，在接触中了解他们，发展他们，培养一批历史学习上的积极分子，树立一批学习典型，须知，榜样的力量胜过无量的说教。如成立“后进生进办公室谈话”机制，每天都有这样的一些学生与教师进行接触，从而给他们心理的照应，促进他们的学习兴趣、情感、策略，甚至督促。教师应将触角延伸。

第三篇：关于《高中史料教学的原理与操作方法》的一些收获和建议[推荐]

关于《高中史料教学的原理与操作方法》的一些收获和建议

通过这次《高中史料教学的原理与操作方法》的培训后，我对高中历史史料方面有了一些新的认识和收获。

一、史料教学在历史教学中的重要地位

高中历史学科的特点决定了史料教学在历史教学中具有重要的地位。史料教学具有明显的优点：能够激发学生的探究欲望。史料是对教材内容的补充，它拓展了历史知识，往往能够把学生带进历史的时空，引发他们学习的兴趣；有了学习兴趣，学生就会主动参与到教学活动中来，而不是被动地接受知识。

二、史料教学的面临的问题

广大高中历史教师基本上能从思想上认识到史料教学的重要意义，认识到史料教学在促进学生学习方式转变上的重要作用，但是史料教学仍然面临着一些问题：

第一，“许多高中历史教师对于史料教学的相关常识性知识仍比较缺乏，比如什么是史料？可利用的史料种类有哪些？史料选择最基本的原则是什么？”

第二，许多教师由于时间安排不合理，对于史料抱着有时间讲，没时间放过的教学态度，造成史料教学不全面，不系统，难于促进学生历史思维的发展、历史观的形成以及历史方法的掌握，更别谈培养学生的探究精神和创新意识了

第三，基层中学由于条件限制，所利用的史料基本上局限于课本上的文字或图片史料，难于开展课外各种史料的搜集、整理、分析、利用等活动.三、史料教学方法探讨

目前史料教学的这种现状，不利于完成新课程的要求，更不利于学生自主思维的培养。那么，如何改变这种现状呢？除了教师提高自身认识，加强对史料知识的学习之外，笔者认为还可从以下几个方法入手：

（1）由浅入深，循序渐进。所选史料或所提问题必须符合客观的认知规律，遵循由浅入深、循序渐进的原则。无论是一段式还是多段式的史料，所设计的问题应该要有一定的启发性，由浅入深，由易到难；无论是一题多问还是几题几问，问题之间要相互联系，又彼此区别，角度应有所不同，层次有深有浅，形成立体结构。

（2）适当补充，加深理解。在教学中，充分利用新教材的史料是非常必要的，但也不是说就只能完全局限于课本的史料。教师应根据教学目的和教学内容并结合学生的实际能力适当补充相关史料和提出不同层次的问题，从而逐步培养学生分析和解决问题的能力。

总之，史料教学在历史教学中具有十分重要的作用，而且随着教育改革的不断深入，它的地位将越来越稳固。历史教师应在加强理论学习的同时，在教学实践中根据实际的需要，不断地探索史料教学的方法，从而更好地为中学历史教学服务。

第四篇：汽车涂料空气喷涂的原理及喷枪的操作方法概述

汽车涂料空气喷涂的原理及喷枪的操作方法概述

空气喷涂的原理是将压缩空气从喷枪空气帽的中心孔喷出，在喷嘴前端形成负压区，使液-气相急剧扩散，使汽车涂料成为微粒，呈漆雾状飞向并附着在被涂物表面，涂料微粒迅速集聚成连续的涂膜。空气喷涂是上世纪20年代为适应快干涂料而开发的涂装工艺，如今已有很大改进。空气喷涂具有涂装效率高、适应性强、涂膜质量好等优点，至今仍是应用最广泛的涂装工艺之一，但同时它也有漆雾容易飞散、污染环境等缺点。

空气喷涂装置包括喷枪、压缩空气供给和净化系统、输漆装置和喷漆室等。喷枪是空气喷涂的主要工具，对涂膜的质量影响最大。压缩空气供给和净化系统包括空气压缩机、贮气罐。油水分离器和输气管等。压送式喷枪还需要增压箱或输漆泵等输漆装置。喷漆室可保护环境和保证涂装质量。1，喷枪的种类

喷枪可按很多方式进行分类，按混合方式可分为内混式和外混式喷枪。内混式喷枪的涂料和空气在空气帽内侧

混合后喷出，可用于喷涂油性漆、多色美术漆、汽车涂料和涂装小物件，喷雾图形也仅限于圆形。外混式喷枪的涂料和空

气在空气帽的外侧混合，这种喷枪用途广泛。

2，喷枪的结构

喷枪一般由枪头、调节部件和枪体三部分组成。枪头包括空气帽、涂料喷嘴和针阀等部分，其作用是将漆料雾

化，并以一定图形喷涂至被涂物表面。调节部件是指调节涂料喷涂喷出量、空气流量和喷雾图形的装置。枪体

上装有扳机和防止漏漆、漏气的密封件。3，空气喷涂作业（1）涂料的雾化

空气喷涂是通过空气和涂料混合使涂料雾化，雾化效果直接影响到涂膜的质量。涂料的雾化程度取决于空气喷

出量与涂料喷出量之比Qi。即在涂料喷出量一定的情况下，空气喷出量决定于空气帽中心孔与辅助空气孔喷出

空气的速度与流量。对于不同规格的喷枪，在进行喷涂作业时为了达到必要的雾化程度，必须首先确定Qi。尽

管大喷枪的空气喷出量和涂料喷出量都比小喷枪大，但要达到相同的雾化程度，其Qi值应该是相似的。对于同 一喷枪，既可以采用增大空气喷出量的方法，也可以减小涂料喷出量的方法，来增大Qi值，使漆雾变细。（2）喷枪的调节

喷涂作业前，必须根据被涂物的形状、涂装的质量要求，将喷枪的空气压力、涂料喷涂量和漆雾图形的幅宽调

整到适宜的喷涂条件，而这三者之间有着密切的关系。A,空气压力的调节

喷枪的空气压力有一定的调节范围。空气压力高，漆雾粒子细，分散多，涂料损失大；空气压力低，漆雾粒子

粗，涂膜表面粗造，会产生橘纹、针孔等缺陷，所以应适当选择压力，并且保持压力稳定。B,涂料喷出量的调节

涂料喷出量大，工作效率高，但是对于吸上式和重力式喷枪，涂料喷出量受到空气压力（或空气量）的限制。

由于空气压力的升高是有限的，过多地增加涂料喷出量，会造成漆雾粒子粗，影响涂膜质量。压送式喷枪是通

过调节增压罐的压力来调节涂料喷出量，然后再调节喷枪的涂料喷出量调节机构，达到合适的喷出量。

C.喷雾图形的调节

喷雾图形的大小称为喷雾幅宽，对于图形的喷雾图形是指它的直径，对于椭圆形的喷雾图形是指它的长轴长度

。通过喷枪上部的调节螺栓可以控制空气帽侧面空气孔的空气流量，实现喷雾图形的调节。关闭侧面空气孔，喷雾图形呈圆形，主要用于较小的被涂物表面；打开侧面空气孔，喷雾图形变成椭圆形，主要用于大面积喷涂，应用广泛；侧面空气孔的空气流量越大，喷雾幅宽越大。虽然增加空气压力会增加喷雾幅宽，但超过一定的

限度，喷雾图形的中心部分会变窄直至断开。横向喷涂时，应将空气帽的侧面空气孔调到横轴位置；纵向喷涂

时，应将侧面空气孔调到纵轴位置。（3）空气喷涂的操作要点

喷涂距离、喷枪运行方式和喷雾图形的塔接是空气喷涂的三个操作要点。

喷涂距离指喷枪前端到被涂物的距离。一般情况下大喷枪喷漆距离为20-30cm，小喷枪为15-25cm。喷涂距离

越近，在单位时间形成的涂膜厚，易产生流挂；喷涂距离过远，涂膜变薄，涂料损失大，严重时涂膜表面粗造。

喷枪的运行方式包括喷枪与被涂面的角度和喷枪的运行速度。喷枪与被涂面应垂直，平行运行，才能保证喷

涂距离恒定。喷枪的运行速度一般在30-60cm/s，并保持恒定。如果喷枪倾斜或运行速度多变，都得不到厚度均

匀的涂膜，并且产生缺陷。尤其是在喷涂汽车涂料时，要特别注意。

漆雾图形的塔接指喷涂时，喷雾图形之间部分重叠。由于喷雾图形中部较厚，边沿较薄，所以前后喷雾图形 的边沿部分互相塔接，才能保证涂膜厚度均匀。前后塔接的程度一般为有效喷雾图形幅宽的1/4-1/3，且应保持 不变。

（4）选择喷漆的原则

无论是内混式喷枪还是外混式喷枪，在选用时主要考虑以下四个因素：枪体的重量和大小、涂料的供给方式、喷嘴口径和空气使用量。（1）枪体重量和大小

从减轻劳动者的工作强度来看，希望选择用小型体轻的喷枪。但是小喷枪涂料喷出量和空气量都比较小，效

率低，不适宜大量涂装。如果用大型喷枪喷涂小型被涂料物，则会造成漆雾飞散多，涂装损失大，也不适合。

因此应在满足喷涂作用条件的情况下，考虑喷枪的重量和大小。（2）涂料的供给方式

涂料用量少、颜色更换频繁的小批量涂装可选用涂料罐容量1L以下的重力式喷枪，但不适用于仰面涂装。涂料

用量稍大、颜色更换次数多，特别是侧面喷涂时，选用涂料容量罐1L以下的吸上式喷枪。涂料用量大，颜色比

较单一的连续喷涂可选用压送式喷枪，配以容量为10-100L的增压罐或带有循环管路的涂料泵。

（3）涂料喷嘴口径和空气使用量

喷涂喷嘴口径要适应所要求的涂料喷出量。喷嘴口径越大，涂料喷出量越大。因而，黏度高的涂料应选用喷 嘴口径大的喷枪。压送式喷枪的涂料喷出量随压送涂料的压力增高而增大，可选用喷嘴口径小的喷枪。喷涂底

漆以及对涂膜外观要求不高或涂膜较厚时可选用喷嘴口径大的喷枪。喷涂面漆时，对漆料雾化要求较高，可选

用喷嘴口径较小的喷枪。喷嘴口径不同，空气使用量也不同。喷嘴口径小，空气使用量小，相应的涂料喷出量 也小，反之亦然。

4，热喷涂法

喷涂加热的涂料称为热喷涂。加热的方式可替代加稀释剂使涂料粘度下降，所以热喷涂最初是为了提高硝基

涂料的固含量而开发的，由于具有涂装质量高、作业周期短和环保等优点，得到广泛应用。通常热喷涂设备是空气喷涂喷枪配以涂料加热器。涂料加热器的加热方式有热上加热、蒸汽加热、电加热等，其中电加热使用方便快捷，控温准确，应用最广。为了保持温度恒定，涂料加热器与喷枪之间必须形成循环 通道。

热喷涂法适用于加热后黏度显著下降的涂料，如水溶性涂料、高固含量涂料扽个，对于双组分涂料，可分别

对两组分加热，然后在喷嘴前混合。

第五篇：免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结

免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结

1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。

2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。

3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。

4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。

5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。

6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程，成功有时也加快你自傲。

7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那，这是因为我经过了反复的动手+动脑，把理论原理运用于实践，在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决，最终把理论与实践融会贯通。

一、概念和常用方法介绍

1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。

2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。

3、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较常用的方法；聚合物链接，如即用型二步法，此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。

4、目前几种常用免疫组化方法简单介绍

1）免疫荧光方法是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。

2）免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前最常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。

3）免疫胶体金技术免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶，它能迅速而稳定地吸附蛋白，对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此，用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针，就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位，甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒，且胶体金的电子密度高，所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色，因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。

5、被检测的物质 组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激 素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。

6、特点 1）特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示，如角蛋白（keratin）显示上皮成分，LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应。2）敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段，由于技术上的限制，只有直接法、间接法等敏感性不高的技术，那时的抗体只能稀释几倍、几十倍；现在由于ABC法或SP三步法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合，这样高敏感性的抗体抗原反应，使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。3）定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应，可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。

7、从蛋白水平检测角度，免疫组化技术与Western blotting、ELISA的异同1）Western blotting：蛋白质免疫印迹，也是利用抗体抗原反应原理，结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比，定量可能更加准确；当然Western blotting也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位），但敏感性远远低于免疫组化技术。2）ELISA：酶联免疫吸附试验，也是利用抗体-抗原-抗原结合反应原理来检查体液或组织匀浆中蛋白含量的检测。与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一。

二、实验流程简介

1、SP三步法

1）石蜡切片，常规脱蜡至水。2）0.3%或3%H2O2去离子水（无色液体）孵育10-30分钟，以灭活内源性过氧化物

酶活性。3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟4）候选步骤：采用抗原修复：微波（建议30分钟内4次中火）、高压、酶修复方法。自然冷却，再用3分钟×3次.5）血清封闭：室温15-30分钟，尽可能与二抗来源一致。倾去，勿洗。6）滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2~3小时或4℃过夜（最好复温）。PBS冲洗，3分钟×5次。7）滴加生物素标记的二抗，室温或37℃孵育30分钟-1h。8）PBS冲洗，3分钟×5次。9）滴加SP（链霉亲和素-过氧化物酶），室温或37℃孵育30分钟-1h。10）PBS冲洗，3分钟×5次。11）显色剂显色（DAB等）。12）自来水充分冲洗。13）可进行复染，脱水，透明。14）选择适当的封片剂封片。

2、即用型二步法 1）脱蜡、水化组织切片。2）根据所应用的一抗的特殊要求，对组织切片进行预处理。3）0.3%或3%H2O2去离子水孵育5分钟-30分钟，以阻断内源性过氧化物酶，PBS或TBS冲洗。4）滴加一抗，室温或37℃孵育30~60分钟，或4℃过夜，PBS或TBS浸洗3分钟×5次。5）滴加enhangcer增强剂，37度30min，PBS或TBS浸洗3分钟×5次。6）滴加通用型IgG抗体-Fab段-HRP多聚体，室温/37℃孵育30分钟-1h，PBS/TBS冲洗，3分钟×5次。7）应用DAB溶液显色。8）蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明、封片。

三、免疫荧光技术

1、免疫荧光方法中的重要环节 1）冰冻切片制备：建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。选用干净锋利的刀片、组织一定要冷冻适度等，防止裂片和脱片严重。2）组织切片固定：切好片风干后立即用冰西奈山环保组织固定液固定5-10min，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。3）血清封闭：为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用血清（与二抗来源一致）封闭，减弱背景着色。血清封闭的时间是可以调整的，一般10-30min。4）一抗孵育条件：在免疫组化反应中最重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。具体条件还要摸索。5）二抗孵育条件：二抗一般室温或37度30min-1h，具体时间需要摸索，而浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度，切记要避光反应。但在免疫荧光中我们一般先把二抗浓度和孵育时间先定下，然后去摸索一抗浓度和孵育时间。最后，荧光素标记的二抗随着保存时间的延长，可能后有大量的游离荧光素残留，需要注意配制时小包装和并进行适当的离心。6）复染：目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位。一般常用DAPI复染。7）封片：为了长期保存，我们一般用缓冲甘油等封片，此外还有专门的抗荧光萃灭封片液。避免产生气泡，方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一拐角，而另一手拿对面的那个拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低另一拐角，这样一般不会产生气泡。8）切片清洗：为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗（延长时间和增多次数）尤为重要，我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。注意（1）单独冲洗，防止交叉反应造成污染。（2）温柔冲洗，防止切片的脱落。我喜欢用浸洗方式；（3）冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。（4）PBS的PH和离子强度的使用和要求。这方面我有惨痛教训，当时我买的抗体稀释液偏酸，结果背景一片黄（未见特异性染色），建议PH在7.4-7.6浓度是0.01M。（中性及弱硷性条件（PH7-8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）9）拍照：有条件的话最好立即拍照，若不能及时拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和湿度。使用荧光显微镜注意严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序；应在暗室中进行检查；防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜；检查时间每次以1~2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3~5min后，荧光也明显减弱或褪色；激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象；所以最多不得超过2~3h；荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再启用时，须待灯光充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。关闭汞灯至少在开启15-30分钟后；标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发；使用的玻片等载体，都必须厚度均匀，无明显的自发荧光，如果使用油镜，还必须保证镜油为无荧光镜油；电源最好装稳压器，否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命，也会影响镜检的效果。

已有的常见免疫组化难题集锦

1、石蜡切片和冰冻切片的比较？（1）要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。（2）冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。（3）石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80度的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的的切片，为了防止RNA降解，保存一贯很重要。由于石蜡切片可以切到4微米左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。

2、一抗的选择要点和技巧是什么？（1）单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。（2）应用范围的选择。有的一抗只能用于Western blotting，或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至表明石蜡切片或冰冻切片。（3）种属反应性的选择（species reactivity）。这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。(4)种属来源，一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。(5)生产厂家的选择。如santa Cruz公司抗体一般1ml，价格2100元左右；而chemicon公司一抗一般100ul，价格2800元左右。这两个厂家的同一种抗体它的实际效价稳定是不同的，我一般用后者抗体做免疫组化效果较好，而前者做Western blotting效果还可以。

3、在什么情况下使用TritonX-100？（1）Triton X-100化学名称为聚乙二醇辛基苯基醚，是一种去污剂。在免疫组织化学(>10um厚切片)和免疫细胞化学中一般用Triton X-100 作为细胞通透剂，在膜上打孔。（2）其作用原理：Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，故在细胞免疫组化时尤为推荐使用，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。（3)Triton X-100既是一种表面活性剂，也有抗氧化作用，具体参阅： http://www.xiexiebang.com/bbs/post/view?bid=68&id=12301317&sty=1

4、封闭血清的选择原则是什么？（1）膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性！（2）封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。（3）也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。

5、抗体孵育条件的比较？（1）一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，而4度过夜和从冰箱拿出后37度复温45min。（2）二抗一般室温或37度30min-1h，具体时间需要摸索。

6、一抗4度孵育后为什么要进行37度复温？（1）一方面，防止切片从4度直接放入PBS易脱片；（2）另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要,但对表达较弱的抗原可能有用,4度和37度时分子运动方式不同,前者分子碰撞机率和运动速度小于后者,后者结合更快,但敏感性也提高了并易造成非特异染色。（3）其实，我更赞同后一种说法，因为我尝试把肝脏或睾丸片子从4度过夜拿出后，直接用PBS洗没发生过脱片现象。事实胜于雄辩！

7、DAB显色时间如何把握？（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；（2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；（3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；（4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短（最好一抗4度过夜）；另一方面就是封闭时间过长。

8、免疫组化结果如何分析？（1）阳性着色细胞计数法。在40*光镜下，随机选择不重叠的10个视野，人工或机器计数阳性着色细胞，每组3~6张不同动物组织切片，然后进行组间比较即可。（2）灰密度分析法。通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析，然后进行统计分析即可。（3）评分法。通过在光学显微镜下对组织切片分别按染色程度（0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色）、阳性范围进行评分（1~4分为0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），最终可以分数相加，再进行比较。对于以上这几种方法，各有利弊，请细心选择。要想得到正确结果的前提是你要做出着色均匀、背景很浅的高质量切片。

9、在什么情况下进行组织抗原修复，抗原修复的条件是什么？（1）由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。（2）修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH的等）。（3）微波修复，我们一般用6min*4次，效果不错。

10、内源性过氧化物酶的灭活时间和浓度是什么？（1）一般3%过氧化氢灭活时间短点，可以10min左右；而0.3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间，一般10~30min。（2）用西奈山环保组织固定液配置过氧化氢比双蒸水或PBS能更好保护抗原和固定组织作用，过氧化氢孵育时间过长易引起脱片。（3）现用现配，配好后4度避光保存。

11、如何才能充分脱蜡？（1）蜡不溶于水，如果脱蜡不干净，少许蜡存留于切片上，将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题，切片在染色前必须彻底脱蜡，目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯，因它脱蜡力强，脱蜡时间较短；（2）脱蜡的时间要根据季节，室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天，室温较高，脱蜡试剂也新鲜，则脱蜡时间不需很多，3-5分钟就已足够。如果在冬天，室温较低，脱蜡试剂也较陈旧，则脱蜡时间需要延长，10-20分钟或更长。（3）当天切的切片，烧烤2小时后进行染色，切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程，如果预先切好烤好的切片，在染色前，还必须对切片进行加温10-20分钟，然后再行脱蜡，这样脱蜡速度加快，效果魁伟更好。总之，操作时应根据不同的季节，不同的室温，不同的试剂来决定，脱蜡的时间，原则上是要彻底、干净、完全地脱去切片上的蜡。

12、如何最大限度地降低组织非特异性染色？（1）缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。（2）一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。（3）内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；（4）非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；（5）缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等；（6）适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要；（7）防止标本染色过程中出现干片，这容易增强非特异性着色。

13、苏木素复染时间的把握？（1）苏木素复染时间要看当时的室温、溶液的新旧、目标抗原的定位等情况，一般数秒-数分钟。不过这个如果染色不理想可以补救的。即：染色深则分化时间稍长些即可；染色浅则再置于苏木素中染色即可。（2）盐酸酒精是分化，氨水是返兰。作用不同。片子复染完后流水振洗，然后置于盐酸酒精中数秒（一定动作要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返兰即可。（3）如果分化的颜色过浅，可以复置于苏木素中染色。

14、PBS的清洗方式选择、次数和时间的选择？（1）单独冲洗，防止交叉反应造成污染。临床上每天检测的病例很多，所用的抗体种类及项目也多，如果在加入一抗孵育完后，将它们在一个缸内洗，这样就会造成交叉污染，影响最后的结果。正确的做法是单独地进行冲洗，冲洗的PBS为一次性，保证切片没有相互交叉污染的机会。（2）温柔冲洗，防止切片的脱落。冲洗切片，取出切片，将PBS从上轻轻地冲洗，让PBS自上而下流下来，不要拿起切片将PBS对准切片冲洗，这样由于冲出的PBS有一定的冲击力，很容易使切片周边引起松动，导致切片的脱落。（3）冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。冲洗切片有人提出用微振荡器振染，振下未结合的各种物，使之不产生背景，此种做法一是浪费时间，二是很容易导致切片的脱落。切片的冲洗据实践认为，用一小烧杯柔和地于切片上冲洗，就能彻底冲洗去未结合的物质，无需附加其它条件，冲洗好于切片上再注入PBS，持续2分钟左右就完全足够了。（4）PBS的PH和离子强度的使用和要求。刘彦仿指出：中性及弱硷性条件（PH7－8）有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解。免疫组化PBS我们目前常用的PBS的PH在7.4-7.6浓度是0.01M，根据本室十几年来的使用情况，认为该溶液价格便宜配制方面，使用效果好。（5）常用试剂的配制和使用。在免疫组织化学的染色过程中，用得最多的试剂就是缓冲液，因为切片在整个染色中，抗体的加、换、切片的冲洗，DAB的配制都离不开缓冲液。可见缓冲液在整个染色中都起至关键的作用，缓冲液的过酸或偏碱，都将影响染色的结果。

15、脱片产生的原因和如何防止脱片？（1）多聚赖氨酸玻片质量的问题。我原先是买的，迈新按说也是不错的，可是都脱成什么样子了。后面补做第二批时用的病理科老师自己做的片子，要好一点。（2）组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切的厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。（3）组织的问题，我用的组织癌症的很多，越是癌症组织有坏死之类越容易脱。（4）没烤好，时间短温度不够之类。（5）操作的时候甩的太猛了，有脱片嫌疑的片子最好不甩或轻轻甩，用卫生纸从边缘上慢慢吸水。（6）修复的问题：抗原修复的时候高压时间过长了，或者放进100度的修复液时手法不好，咚的一声就丢进去了，这样超容易脱片。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片，但是你要用到EDTA的时候也没办法，只有从另外的问题上着手。（7）此外，一旦见到有组织漂起来操作就更加要谨慎，用PBS的时候尽量用泡的，不要冲。基本上把这些方面都注意到了，能改善的尽量改善，脱片可以减少很多。

16、背景染色较深的原因有哪些？（1）抗体浓度过高：一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。（2）抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执行操作规程，最好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的时间不是传统的1小时，而是30分钟，因此，要根据染色结果进行调整。（3）DAB变质和显色时间太长：DAB最好现用现配，如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长，因为在没有酶的情况下，过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色最好在显微镜下监控，达到理想的染色程度时立即终止反应。不过当染色片太多时或用染色机时，这样做似乎不现实，但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控，避免显色时间过长。（4）组织变干：修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因。解决的办法是操作要认真仔细，采用DAKO笔或PAP Pen在组织周围画圈，可以有效的避免液体流失，也能提高操作速度。（5）切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长（大于24小时）：原因上不清楚，但现象存在。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复，第二天加抗体进行免疫组化染色，如果将装有切片和修复液的容器放在4ºC冰箱过夜，对结果无明显影响，如果放在室温，特别是炎热的夏天，会出现背景着色，因此，不可存放时间太长。（6）一抗变质、质量差的多克隆抗体：注意抗体的有效期，过期的抗体要麽不显色要麽背景着色。用新买抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。

17、苏木素复染后氨水返蓝这一步如何做、浓度多少、时间多长?答：返蓝可以用碱性溶液（PBS/Na2HPO4/淡氨水）或45度温水、冷水蓝化均可。一般蓝化5~10 min。淡氨水有人用50ml自来水＋三四滴的氢氧化铵