分子生物学复习总结

第一篇：分子生物学复习总结

分子生物学

一．绪论

1．分子生物学研究的主要内容包括：1）DNA重组技术；2）基因表达调控的研究；3）生物大分子的结构功能研究；4）基因组、功能基因组与生物信息学研究。P11

2.分子生物学研究的三大理论和两大技术保证 ：1）40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗传的物质基础问题；2）50年代提出了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制，解决了基因的自我复制和世代交替问题；3）50年代末至60年代，相继提出了“中心法则”和操纵子学说，成功地破译了遗传密码，充分认识了遗传信息的流动和表达。两大技术保证：1）DNA的体外切割和连接；2）DNA的核苷酸序列分析技术。

二．染色体与DNA

3.核小体是由H2A、H2B、H3、H4各两个分子生成的八聚体和由大约200bpDNA组成的。八聚体在中间，DNA分子盘绕在外，而H1则是在核小体的外面。每个核小体只有一个H1。核小体的形成是染色体中DNA压缩的第一个阶段。

4.原核生物DNA的主要特征：1）原核生物中一般只有一条染色体，且大都带有单拷贝基因，只有少数基因（如rRNA基因）是以多拷贝形式存在的；2）整个染色体DNA几乎全部由功能基因与调控序列所组成；3）几乎每个基因序列都与它所编码的蛋白质序列成线性对应状态。

5．真核细胞染色体具有如下特征：1）分子结构相对稳定；2）能够自我复制，使亲、子代之间保持连续性；3）能够指导蛋白质的合成，从而控制整个生命过程；4）能够产生可遗传的变异。

6.染色体上的蛋白质包括组蛋白和非组蛋白。组蛋白是染色体的结构蛋白，它与DNA形成核小体。

7．组蛋白具有如下特性：1）进化上的极端保守性；2）无组织特异性；3）肽链上氨基酸分布的不对称性，碱性氨基酸集中分布在N端的半条链上；4）组蛋白的修饰作用，包括甲基化、乙酰化、磷酸化及ADP核糖基化等；5）富含赖氨酸的组蛋白H5，H5的磷酸化在蛋白质的失活过程中起重要作用。

8.非组蛋白有：HMG蛋白、DNA结合蛋白、H24非组蛋白。

9.C值反常现象：真核细胞基因组的最大特点是它含有大量的重复序列，而且功能DNA序列大多被不编码的蛋白质的非功能DNA所隔开。所谓C值，通常是指一种是生物体单倍体基因组DNA的总量。

10.DNA的二级结构：是指两条多核苷酸反向平行盘绕所生成的双螺旋结构。二级结构的分类，右手螺旋：A-DNA和B-DNA;右手螺旋：Z-DNA。

11.DNA的半保留复制机制：DNA在复制过程中碱基间的氢键首先断裂，双螺旋被分开，每条链分别作为模板合成新链，产生互补的两条链。这样新形成的两个DNA分子与原来DNA分子的碱基顺序完全一样。因此，每个子代分子的一条链来自亲代DNA,另一条链则是新合成的，所以这种复制方式被称为DNA半保留复制。

12.真核生物DNA的复制与原核生物DNA复制的区别：1）真核生物每条染色体上可以有多处复制起点，而原核生物只有一个复制起点；2）真核生物的染色体在全部完成复制之前，各个起始点上DNA的复制不能再开始，而在快速生长的原核生物中，复制起始点上可以连续开始新的DNA复制，表现为虽只有一个复制单元，但可以有多个复制叉。

13.原核细胞染色体DNA复制的功能单位是复制子，由起始物位点和复制起点两个部分组成。起始物位点编码复制调节蛋白质，复制起点与蛋白质相互作用并启动复制。

14.错配修复系统修复的原则是“保存母链，修复子链”，找出错误碱基所在的DNA链，进行修复。

15.转座子是存在于染色体DNA上可自主复制和移位的基本单位。可分为：IS序列、复合式转座子、Tna家族。

三、生物信息的传递（上）从DNA到RNA

16.DNA是储藏遗传信息的最重要的生物大分子，DNA双链可以分为：编码链和模板链。

17.转录的基本过程：模板识别、转录起始、通过启动子及转录的延伸和终止。

18.ơ因子的作用：使RNA聚合酶全酶识别启动子序列的特异性总共提高了107倍。

19.转录起始复合物：当新生RNA链达到6-9个核苷酸使才能形成稳定的RNA聚合酶-DNA-RNA三元复合物，释放ơ因子，表示转录起始的终止，转录进入延伸期。，20.启动子是一段位于结构基因5端上游区的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板

DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性。启动子结构：1）转录起始点；2）-10区(TATA区)；3）-35区(TTGACA区)。

21.原核生物DNA的-10区与-35区的距离为16-19bp时，能够维持启动子的活性。另外，增强子也具有强化转录起始的作用。

22.真核生物启动子区包括:TATA区、CAAT区、GC区、增强子，习惯上将TATA区上游的保守序列称为上游启动子元件或上游激活序列。

23.原核生物mRNA与真核生物mRNA的特征比较：

原核生物mRNA的特征：1）原核生物mRNA的半衰期短；2）许多原核生物mRNA以多顺，反子的形式存在；3）原核生物mRNA的5端无帽子结构，3端没有或只有较短的poly(A)

结构。，真核生物mRNA的特征：1）真核生物mRNA的5端存在帽子结构；2）绝大多数真核生物

mRNA具有poly(A)尾巴。

四、生物信息的传递（下）mRNA-蛋白质

24.三联子密码：mRNA上每3个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸，这三个核苷酸就称为密码，也叫三联子密码。

25.移码突变：在开放阅读框内插入非3的倍数的密码子引起的突变叫做移码突变。

26.密码子的简并性：由一种以上密码子编码同一种氨基酸的现象称为密码子的简并性，对应于同一种氨基酸的密码子称为同义密码子。

27.rRNA的三叶草型二级结构，由受体臂、TΨC臂、多余臂、反密码子臂、D臂组成，其中最重要的两条臂是受体臂和反密码子臂。

28.核糖体由大、小两个亚基组成，小亚基组要负责对模板mRNA进行特异性识别，mRNA的结合位点也在小亚基上；大亚基负责携带氨基酸及tRNA的功能，肽键的形成，AA-tRNA、肽基-tRNA的结合等，A位、P位、转肽酶中心等主要在大亚基上。

29.蛋白质合成的生物学机制。大致步骤：氨基酸的活化，肽链的起始，肽链的延伸，肽链的终止及释放，肽链的折叠和加工。

A.氨基酸的活化：氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的作用下生成活化氨基酸：AA-tRNA。（原核

fMetMet生物首先被活化的是fMet-tRNA,真核生物则是Met-tRNA）

B.翻译的起始：（IF因子的参与）核糖体上三个与氨酰-tRNA结合的位点：A位、P位、E位。在原核细胞核糖体翻译起始时，只有fMet-tRNAfMet能与第一个P位点结合，其他所有tRNA都必须通过A位到达P位，再由E位离开核糖体。

C.肽链的延伸：包括后续AA-rRNA与核糖体结合、肽键的生长、移位三个步骤。

D.肽链的终止：RF与终止密码子相结合后，诱导肽基转移酶把一个水分子而不是氨基酸加到延伸中的肽链上，水解P位上与多肽链与tRNA之间的二脂键。

E.蛋白质的前体加工：包括N端fMet或Met切除，二硫键的形成，特定氨基酸的修饰，切除新生肽链中非功能片段。

30.信号肽的结构特点：1）一般带有10-15个疏水氨基酸；2）在靠近该序列N端常常有1个或数个带正电荷的氨基酸；3）在其C-末端靠近蛋白酶切割位点处常常带有数个极性氨基酸，离切割位点最近的那个氨基酸往往带有很短的侧链（丙氨酸或甘氨酸）。

31.信号肽假说:1）完整的信号肽是保证蛋白质运转的必要条件；2）仅有信号肽还不足以保证蛋白质运转的发生；3）信号序列的切除并不是运转所必需的；4）并非所有的转运蛋白质都有可降解的信号肽。

32.信号肽的定义：能启动蛋白质转运的任何一段多肽。

33.前导肽对线粒体蛋白质的识别和跨膜有关键作用。

34.前导肽的结构和功能：1）前导肽通常是疏水的；2）带正电荷的碱性氨基酸（特别是精氨酸）含量较为丰富，它们分散于不带电荷的氨基酸序列之间；3）羟基氨基酸（特别是丝氨酸）含量较高；4）有形成两亲α-螺旋结构的能力；5）带正电荷的碱性氨基酸在前导肽中有重要作用，如果它们被不带电荷的氨基酸所取代，就不能发挥牵引蛋白质的过膜的作用。

五、分子生物学研究方法：

35.电泳：指带电粒子在电场中向与自身电荷相反的电荷的电极移动的现象。

36.迁移率：电泳分子在电场作用下迁移的速度，它与电场强度和电泳分子本身携带的净电荷成正比，与分子的摩擦系数成反比。

37.分子杂交：标记的探针DNA变性后与变性后的靶DNA/RNA通过碱基互补配对结合，形成杂种分子的过程。

38.核酸探针：是指能与特定核苷酸序列发生特异性互补的已知核苷酸片段，因而可检测样品中特定的基因序列。

39.聚合酶链式反映(PCR)技术

原理：将双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子，DNA聚合酶以单链DNA作为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸合成新生的DNA互补链。PCR三步曲:DNA解链（变性，90-95℃）；引物与模板DNA相结合（退火，45-55℃）；DNA合成（延伸，72℃左右）。

2+PCR反应应加入：模板DNA、PCR引物、四种核苷酸及适当浓度的Mg。

40.琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的区别：

1）前者是水平电泳，后者是垂直电泳；2）前者为DNA本身的电荷，后者为SDS复合后的电荷；3）前者为EB染色，后者为考马斯亮蓝染色。

41.DNA序列分析：Sanger双脱氧终止法。

六、基因的表达调控（上）

42.组成型合成蛋白质：合成速率不受环境变化或代谢状态影响的蛋白质。与之对应的是适应型或调解型蛋白质。

43.顺式作用元件（DNA上）与反式作用因子（蛋白质上）

顺式作用元件:是指对基因表达有调节活性的DNA序列，其活性只影响其自身处在同一个DNA

分子上的基因，同时，DNA序列通常不编码蛋白质，多位于基因旁侧内含子

中，如增强子。

反式作用因子：是能调节与它们接触的基因表达的扩散分子（通常是蛋白质），如转录子；

其编码基因与其识别或结合的靶核苷酸序列不在同一个DNA分子上。

44.原核基因调控机制的类型：负控诱导和负控阻遏，其调节产物是阻遏蛋白；正控诱导和

正控阻遏，其调节产物是激活蛋白。

45.通过代谢物调节的基因活性主要有可诱导和可阻遏两大类。

可诱导调节：是指一些基因在特殊的诱导物或化合物的作用下，由原来关闭的状态转变为工

作状态即在某些物质的诱导下使基因活化，如大肠杆菌的乳糖操纵子。

可阻遏调节：这类基因平时都是开启的，处在生产蛋白质或酶的工作过程中，由于一些特殊

代谢物或化合物的积累而将其关闭，阻遏了基因的表达。

46.弱化子：当操纵子被阻遏，RNA合成被终止时，起终止转录信号作用的那一段核苷酸被

称为弱化子。

47.葡萄糖效应（降解物的抑制作用）：指当葡萄糖和其他糖类一起作为细菌的碳源时葡萄糖总是优先被利用，葡萄糖的存在阻止了其他糖类的利用的现象。

48.转录因子：是转录起始过程中，RNA聚合酶所需要的辅因子，它是能参与正调控的反式

作用因子。

49．乳糖操纵子包括三个结构基因：Z、Y和A，以及启动子、控制子和阻遏子等。

50．Lac操纵子的控制模型：

1）Z、Y、A基因的产物由一条多顺反子的mRNA分子所编码；

2）该mRNA分子的启动区（P）位于阻遏基因（I）与操纵区（O）之间，不能单独起始半乳糖苷酶和透过酶基因的高效表达；

3）操纵区是DNA上的一小段序列（仅为26bp），是阻遏物的结合位点；

4）当阻遏物与操纵区相结合时，lac mRNA的转录起始受到抑制；

5）诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵区相结合，从而激发lac mRNA的合成。

51．Lac操纵子的诱导物：异乳糖，异丙基巯基半乳糖苷（IPTG），巯甲基半乳糖苷（TMG）。

52．Trp操纵子的负控阻遏系统：trpR基因突变常常引起trp mRNA的组成型合成，该基因产物因此被称为辅阻遏蛋白。当培养基中的色氨酸含量较高时，它与游离的辅阻遏蛋白相结合，并使之与操纵区DNA紧密结合；当培养基中色氨酸供应不足时，辅阻遏物失去色氨酸并从操纵区上解离，trp操纵子去阻遏。

53．trp操纵子的弱化作用：前导肽基因中有两个相邻的色氨酸密码子，所以这个前导肽的翻译必定对tRNATrp十分敏感。1）当培养基中色氨酸的浓度很低时，负载有色氨酸的tRNATrp也就少，这样翻译通过两个相邻的色氨酸密码子的速度就会很慢，当4区被转录完成时，核糖体才进行到1区（或停留在两个相邻的Trp密码子处），这时的前导区结构是2-3配对，不形成3-4配对的终止结构，所以转录可以继续进行，直到将trp操纵子中的结构基因全部转录。2）而当培养基中色氨酸的浓度高时，核糖体可顺利通过两个色氨酸密码子，在4区被转录之前，核糖体就到达2区，这样使2-3不能配对，3-4区可以著有配对形成茎-环状终止结构，转录停止，trp操纵子中的结构基因被关闭而不再合成色氨酸。所以，弱化子对RNA聚合酶的影响依赖于前导肽翻译中核糖体所处的位置。

54．半乳糖操纵子包括3个结构基因：异构酶（galE），半乳糖-磷酸尿嘧啶核苷转移酶（galT），半乳糖激酶（galK）。这三个酶的作用是使半乳糖变成葡萄糖-1-磷酸。

55．Gal操纵子与lac操纵子所不同的是galR与galE、T、K及操纵区O等的距离都很远，而galR产物对galO的作用与lacI-lacO的作用相同。

56．基因表达的转录调控是生物最经济的调控方式。转录生成mRNA以后，再翻译生成或翻译后水平进行“微调”，是对转录调控的补充，它使基因表达的调控更加适应生物本身的需求和外界条件的变化。

57．mRNA 3’端poly(A)的长短对翻译效率有很大影响。细胞中蛋白质合成旺盛时，mRNA链上核糖体数量就多，mRNA链上的poly(A)也较长。当某些mRNA链不再被翻译时，核糖体就被释放出来，其poly(A)也相应缩短。

七、基因的表达与调控（下）

58．基因扩增：指某些基因的拷贝数专一性大量增加的现象，它使细胞在短时期内产生大量的基因产物以满足生长发育的需要，是基因活性调控的一种方式。

59．基因重排：将一个基因从远离启动子的地方移到距离它很近的位点从而启动转录，这种方式被称为基因重排。

60．DNA的甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。

61．真核生物的转录调控大多数是通过顺式作用元件和反式作用因子复杂的相互作用来实现的。

顺式作用元件：是指存在于基因DNA中的特异性调控序列。真核基因的顺式作用元件按照功能可以分为启动子和增强子。

反式作用因子：是能直接或间接地识别或结合在各种顺式作用元件8-12bp核心序列上，参与调控靶基因转录效率的一组蛋白质。顺式作用元件必须与反式作用因子结合才能对转录起到调控作用。

62．蛋白激酶根据底物蛋白质被磷酸化的氨基酸残基种类可以分为三大类：1）丝氨酸/苏氨酸型；2）酪氨酸型；3）组氨酸型。

63．依赖于cAMP的蛋白激酶称为A激酶（PKA）。依赖于Ca2+的蛋白激酶称为C激酶（PKC）。

64．酪氨酸激酶（PTK）包含跨膜受体家族与胞质非受体家族两大类。跨膜受体家族由胞外结合配体结构域、跨膜结构域和细胞质激酶结构域组成。

65．应答元件：能与某个（类）专一蛋白因子结合，从而控制基因特异性表达的DNA上游序列。

66．热激蛋白调控基因表达的机制：1）在没有受热或其他环境胁迫时，HSF主要以单体形式存在于细胞质和核内。2）受到热激活其他环境胁迫时，细胞内变形蛋白增多，它们都与HSF竞争结合Hsp70，从而释放HSF，使之形成三体并输入核内，HSF被迅速磷酸化。3）HSF与HSE的特异性结合，引起包括Hsp70在内的许多热激应答基因表达，大量产生Hsp70蛋白。4）随着热激温度的消失，细胞出现大量游离的Hsp70蛋白，它们与HSF结合，形成没有DNA结合能力的单体并脱离DNA。

八、疾病与人类健康

67．癌基因可分为两大类：病毒癌基因和细胞转化基因。

第二篇：分子生物学复习知识总结

分子生物学复习知识总结

一、名词解释

1．Gene and Genome基因和基因组

基因：是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。能够表达和产生蛋白质和RNA的DNA序列，是决定遗传性状的功能单位。

基因组：细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和。一般的定义是单倍体细胞中的全套染色体为一个基因组，或是单倍体细胞中的全部基因为一个基因组

2.Signal peptide信号肽

分泌蛋白新生肽链N端的一段20～30氨基酸残基组成的肽段。将分泌蛋白引导进入内质网，同时这个肽段被切除。现这一概念已扩大到决定新生肽链在细胞中的定位或决定某些氨基酸残基修饰的一些肽段。

3.Opening Reading Frame开放式阅读框

开放阅读框是DNA上的一段碱基序列，由于拥有特殊的起始密码子和直到可以从该段碱基序列产生合适大小蛋白才出现的终止密码子，该段碱基序列编码一个蛋白。

4.Sense strain有意链：DNA双链中序列和方向与mRNA的序列完全相同的那条DNA链，又称编码链。

5.Expressed sequence tag(EST)表达序列标准

从互补DNA(cDNA)分子所测得部分序列的短段DNA(通常300~500bp)。从cDNA文库所得到的许多表达序列标签集合组成表达序列标签数据库，代表在一定的发育时期或特定的环境条件下，特定的组织细胞基因表达的序列。可用于验证基因在特定组织中的表达，推导全长cDNA序列，或作为标签标志基因组中的特殊位点以确定基因的位置等。

6.Microarray基因芯片

DNA芯片技术是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可获得样品的遗传信息。由于常用计算机硅芯片作为固相支持物，所以称为DNA芯片。

7.Genomics and RNomics

RNomics：RNA组学，既是核糖核酸组学，研究所有RNA的不同时空表达谱及其生物学意义。研究RNA组的学科，主要是直接鉴定生物体中非信使小RNA(snmRNA)在特定条件和不同状态下的种类、功能、差异及其与蛋白质的相互作用，是基因组学和蛋白质组学研究的扩充、发展和延伸。

Genomics：基因组学，研究基因组的结构与功能的学科，主要包括DNA的核苷酸序列、遗传信息含量、基因组织和基因数目等，基因组的产物不仅是蛋白质，还有许多复杂功能的RNA。包括三个不同的亚领域，即结构基因组学、功能基因组学和比较基因组学。

8.RNAiRNA干扰

RNA干扰，利用双链小RNA分子高效、特异的降解细胞内同源RNA，从而阻断体内靶基因的表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。

9.MicroRNA微小分子RNA

是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。据推测，这些非编码小分子RNA（miRNAs）参与调控基因表达，10.intron and exon内含子和外显子

内含子，在不连续基因中无编码功能的区段（在初始转录产物hnRNA加工产生成熟的mRNA

时，被切除的非编码序列是内含子）

真核生物细胞DNA中的间插序列。这些序列被转录在前体RNA中，经过剪接被去除，最终不存在于成熟RNA分子中。内含子和外显子的交替排列构成了割裂基因。在前体RNA中的内含子常被称作“间插序列”。

外显子，在不连续基因中有编码功能的区段（在初始转录产物hnRNA加工产生成熟的mRNA时，留下的编码序列是外显子）

真核生物基因的一部分，它在剪接(Splicing)后仍会被保存下来，并可在蛋白质生物合成过程中被表达为蛋白质。外显子是最后出现在成熟RNA中的基因序列,又称表达序列。既存在于最初的转录产物中，也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序列。术语外显子也指编码相应RNA外显子的DNA中的区域。所有的外显子一同组成了遗传信息，该信息会体现在蛋白质上。

二、简答题

1病毒、原核生物基因组与真核生物基因组结构特点是什么？

①种类单一；②单倍体基因组：每个基因组在病毒中只出现一次；③形式多样；④大小不一；⑤基因重叠；⑥动物/细菌病毒与真核/原核基因相似：内含子；⑦具有不规则的结构基因；⑧基因编码区无间隔：通过宿主及病毒本身酶切；⑨无帽状结构；⑩结构基因没有翻译起始序列。

2、原核基因组的特点：

①为一条环状双链DNA；②只有一个复制起点；③具有操纵子结构；④绝大部分为单拷贝；⑤可表达基因约50%，大于真核生物小于病毒；⑥基因一般是连续的，无内含子；⑦重复序列很少。

3、真核基因组的特点：

①真核生物基因组远大于原核生物基因组，结构复杂，基因数庞大，具有多个复制起点；②基因组DNA与蛋白质结合成染色体，储存于细胞核内；③真核基因为单顺反子，而细菌和病毒的结构基因多为多顺反子；④基因组中非编码区多于编码区；⑤真核基因多为不连续的断裂基因，由外显子和内含子镶嵌而成；⑥存在大量的重复序列；⑦功能相关的基因构成各种基因家族；⑧存在可移动的遗传因素；⑨体细胞为双倍体，而精子和卵子为单倍体。2举例说明差示筛选组织特异cDNA的方法

制备两种细胞群体，目的基因在其中一种细胞中表达或高表达，在另一种细胞中不表达或低表达，然后通过杂交对比找到目的基因。

例如：在肿瘤发生和发展过程中，肿瘤细胞会呈现于正常细胞表达水平不同的mRNA，因此，可以通过差示杂交筛选出与肿瘤相关的基因。也可利用诱导的方法，筛选出诱导表达的基因。

3分别写出6种以上RNA的功能

m RNA

t RNA

r RNA

silencing RNAsiRNA主要参与（RNAi）现象，以带有专一性的方式调节基因的表达

miRNAmicroRNAs（miRNAs）是一种小的，类似于siRNA的分子，由高等真核生物基因组编码，miRNA通过和靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体（RISC）降解mRNA或阻碍其翻译。miRNAs在物种进化中相当保守，在植物、动物和真菌中发现的miRNAs只在特定的组织和发育阶段表达，miRNA组织特异性和时序性，决定组织和细胞的功能特异性，表明miRNA在细胞生长和发育过程的调节过程中起多种作用。

HnRNA:核内不均一RNA胞核中的一大类分子质量不一致的RNA分子。被视为信使核糖核酸(mRNA)的初级转录产物，经过一系列加工步骤才能产生成熟的、有功能的Mrna SnRNA;核内小RNA参与HnRNA的剪切和转运

SnoRNA:核仁小RNA: rRNA的加工与修饰 SCRNA/7SL RNA:

真核细胞有细胞核和细胞浆中都含有许多小RNA，它们约有100到300个碱基，每个细胞中可含有105-106个这种RNA分子。它们是由RNA聚合酶Ⅱ或Ⅲ所合成的.scRNA则参与蛋白质的合成和运输, 如SRP颗粒就是一种由一个7SRNA和蛋白质组成的核糖核蛋白体颗粒,主要功能是识别信号肽, 并将核糖体引导到内质网。

小胞浆RNA(scRNA,small cytosol RNA)又称为7SL?RNA，长约300个核苷酸，主要存在于细胞浆中，是蛋白质定位合成于粗面内质网上所需的信号识别体(signal recognization particle)的组成成分

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4以你将要开展的分子生物学研究为例，如何撰写开题报告？

开题报告包括综述、关键技术、可行性分析和时间安排等四个方面。由于开题报告是用文字体现的论文总构想,因而篇幅不必过大,但要把计划研究的课题、如何研究、理论适用等主要问题写清楚。开题报告的总述部分应首先提出选题，并简明扼要地说明该选题的目的、目前相关课题研究情况、理论适用、研究方法。

开题报告的内容大致如下：课题名称、承担单位、课题负责人、起止年限、报名提纲。开题报告以及怎么写

1、课题来源及研究的目的和意义；

2、国内外在该方向的研究现状及分析；

3、主要研究内容及创新点；

4、研究方案及进度安排，预期达到的目标；

5、为完成课题已具备和所需的条件和经费；

6、预计研究过程中可能遇到的困难和问题及解决的措施；

7、主要参考文献；

5举出分子生物学研究中常用的工具酶及良好载体的条件

工具酶

连接酶：①DNA连接酶：T4DNA连接酶、大肠杆菌DNA连接酶②RNA连接酶

聚合酶：①DNA聚合酶：

1、依赖于DNA的DNA聚合酶：大肠杆菌DNA聚合酶 Ⅰ、Klenovo酶、T4 DNA聚合酶、天

然的T7 DNA聚合酶、经修饰的T7 DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶

2、不依赖于DNA的DNA聚合酶（末端转移酶）

3、依赖于RNA的DNA聚合酶（反转录酶）

②RNA聚合酶：依赖于DNA的RNA聚合酶、不依赖于DNA的RNA聚合酶（Poly（A）聚合酶）激酶、磷酸酶：碱性磷酸酶、T4多核苷酸激酶

核酸酶：①核酸外切酶：

1、单链5ˊ→3ˊ和3ˊ→5ˊ核酸外切酶（exoⅦ）

2、双链5ˊ→3ˊ末端外切酶：λ噬菌体核酸外切酶、T7基因6核酸外切酶

3、双链3ˊ→5ˊ核酸外切酶（exoⅢ）

②核酸内切酶：Bal 31核酸酶、核酸酶S1、绿豆核酸酶、微球菌核酸酶

③脱氧核糖核酸酶（DNase I）

④核糖核酸酶（RNase）：核糖核酸酶A（RNaseA）、核糖核酸酶H（RNaseH）、核糖核酸T1（RNaseT1）

其他常用酶：①DNa甲基化酶②DNA结合蛋白：单链DNA结合蛋白（SSB）、RecA蛋白③拓扑异构酶I

良好载体的条件：

1能在宿主细胞中大量复制，得到大量的重组DNA分子

2载体上的内切酶微点对于一种酶来说只能有一个（置换型载体上被置换片段的两侧各有一个内切酶位点

3克隆载体要有复制起点，表达载体要有启动子

4载体上有报告基因或选择标记基因

5在不影响载体复制和表达的DNA序列上有内切酶酶切位点

6具有较高的外源DNA装载能力

第三篇：分子生物学总结

SectionA 1 三个域：真细菌，古细菌，真核生物 2 组装中的主要作用力：非共价健作用力

SectionB 1 蛋白质纯化的分析方法

正电荷：天冬氨酸 谷氨酸

负电荷：赖氨酸 精氨酸

组氨酸

极性：天冬酰胺 谷氨酰胺

苏氨酸 丝氨酸 半胱氨酸

非极性：脂肪族 甘氨酸 丙氨酸 缬氨酸 亮氨酸

异亮氨酸 甲硫氨酸 脯氨酸

芳香族 苯丙氨酸

酪氨酸 色氨酸 Cys 二硫键 Gly 无手性 Pro 亚氨基酸

芳香族氨基酸最大吸收峰280mm 3 蛋白质的一级(决定蛋白折叠及其最后的形状的最重要的因素)：氨基酸脱水缩合形成肽链 N端到C端

共价键

二级：多肽链中空间结构邻近的肽链骨架通过氢键形成的特殊结构。

α转角

β螺旋 氢键为主要作用力

三级： 多肽链中的所有二级结构和其他松散肽链区域（散环结构）通过各种分子间作用力（非共价键为主），弯曲、折叠成具有特定走向的紧密球状构象。

非共价键

四级： 许多蛋白分子由多条多肽链（亚基，subunits）构成。组成蛋白的各亚基以各种非共价键作用力为主，结合形成的立体空间结构即为四级结构。非共价键 偶极：电子云在极性共价键的两原子间不均匀分布，使共价键两端的原子分别呈现不同的电性

兼性离子：具有正电荷（碱性），又具有负电荷（酸性）的分子 双极性分子：

Section C 1核酸的光学特性：

增色性：一种化合物随着结构的改变对光的吸收能力增加的现象 减色性：一种化合物随着结构的改变对光的吸收能力减少的现象 Reason: 碱基环暴露在环境中的越多，对紫外的吸收力越强 Absorbance（吸收值）：Nucleotide > ssDNA/RNA > dsDNA 核酸的最大吸收峰260mm(碱基有芳香环)芳香族氨基酸最大吸收峰280mm A260/A280:

纯的 dsDNA：1.8 纯的 RNA：2.0 纯的 Protein：0.5 2 Tm 值（熔解温度）：热变性时，使得DNA双链解开一半所需要的温度。

Tm=2x(A+T)+ 4x(G+C)

Tm值与DNA分子的长度，及GC的含量成正比

Annealing（退火）:热变性的DNA经过缓慢冷却后复性

快速冷却： Stay as ssDNA

缓慢冷却: 复性成dsDNA 3 脱氧核糖核酸与核糖核苷酸得到画法 支持双螺旋结构的两个实验：查戈夫规则

X射线晶体衍射 5 双螺旋的内容：

双链之间的关系：DNA分子由两条链组成

双链反向平行(5’3’ 方向)

两链的碱基通过氢键互补配对，A:T;G:C。

双链序列反向互补

各基团排列方式：糖-磷酸骨架DNA分子排列在外;

碱基对平面相互平行，排列在DNA分子的内部。空间结构为：右手双螺旋结构

每转一圈~10个碱基对，每一圈长度33.2A

双链螺旋中形成大沟，小沟。碱对DNA的影响：高pH值对DNA的影响比低pH值的要小。

高 pH 值(pH>11)会改变碱基构象，使DNA变性（双链解旋，成单链）

RNA的影响：高pH值，2’羟基会攻击磷酸二酯键，使其断裂，形成2’，3’-环式磷酸二酯键，从而使RNA分子断裂 共价闭合环状DNA(convalently closed circular DNA, cccDNA）。即通过共价键结合形成的封闭环状DNA分子。超螺旋DNA（Supercoil DNA）:松弛型双链DNA进一步旋转后，再形成闭环结构时，就会形成DNA超螺旋结构

L=T+W 判断是否为超螺旋 正负超螺旋 拓扑异构酶：暂时断裂DNA分子中一条或两条单链上的磷酸二酯键，改变DNA分子的连接数及拓扑状态。

功能：消除DNA复制和转录等过程产生的超螺旋。

细胞中，Ⅰ型酶与Ⅱ型酶的活性保持一种平衡状态。Ⅱ型酶的“使DNA超螺旋化” 与Ⅰ型酶“使DNA松驰化” 相抗衡，从而使DNA保持适当的超螺旋密度。EB: 嵌入DNA配对碱基之间，使DNA分子在嵌入处局部解旋，增加ccDNA其它部位的正超螺旋 Type II RE

二型限制性内切酶:识别位点一般为４～8个碱基对的回文序列

如：EcoRI

5’-GAATTC-3’

3’-CTTAAG-5

Section D 1 染色体的折叠：串珠结构 ：核心组蛋白:H2A, H2B, H3 and H4.连接组蛋白 H1

核小体

30nm纤丝

高级环状结构（染色质的最高结构）

紧密缠绕结构 着丝粒：两侧是大量的名叫卫星DNA的重复序列

端粒：上百个短的重复序列

作用：端粒DNA 形成特殊的环状二级结构，保护染色体末端不被核酸外切酶降解。

抵消DNA复制时每一轮复制都导致两末端形成的后随链比母链要短一截的现象对染色体的影响 异染色质：高度浓缩，无转录活性

常染色质：结构松散，有转录活性

DNaseI 敏感区域：对区域内DNA的转录活跃

串珠结构

DNaseI 超敏感区域：转录活跃的基因的调控区域

DNA裸露 4 原核染色体结构：非特异性DNA结合蛋白：类组蛋白

位点特异性DNA结合蛋白：与特殊的DNA序列结合

有其他特殊的生理功能：RNA polymerases

对结构域的形成也很重要

复性动力曲线：

Low C0t: 高重复 卫星DNA Moderate C0t : 中重复 串联基因簇

反转座子 High C0t :单拷贝或低重复

大肠杆菌基因组 染色体结构对基因转录的影响

CpG 抑制→CpG位点中的胞嘧啶的C-5常发生甲基化(CpG甲基化），CpG 甲基化可能可以DNA转录被限制→哺乳动物基因组中，有些区域含有很多未甲基化的CpG 位点，被称为CpG 孤岛。

甲基化—转录抑制

去甲基化—恢复转录

组蛋白的乙酰化：核心组蛋白N-端的Lys被乙酰化，DNA与核心组蛋白体解聚。Gene 表达被激活

去乙酰化：抑制 gene表达

组蛋白的磷酸化:对组蛋白 H1 磷酸化，抑制基因表达 其他组蛋白中心法则

Section E 1 DNA复制：细胞中，一条双链DNA分子通过碱基配对，形成两条与其序列相同的DNA双链分子的过程。2

确定DNA半保留复制

半不连续复制 3 复制的基本步骤 复制为双向

大肠杆菌的复制：

起始AT含量高的区域

参与蛋白：DnaA（复制起始因子)：识别并结合于重复序列上，驱使富含AT的重复序列解链，需负超螺旋，及ATP

DnaB(DNA解旋酶):DNA双链解旋，形成复制叉

SSB:(单链结合蛋白):保持解旋部分的单链状态

DnaG(引发酶/引物酶):RNA引物合成，引发复制 延伸

参与蛋白：DNA Pol III全酶：负责新链的合成:前导链，冈崎片段

DNA pol

I：复制中除去引物，填补引物处空缺

终止： 真核生物的复制：

一个细胞周期内，一个DNA分子只能复制一次

Section F 1 复制忠实性的机制：

DNA复制的高精度：模板连和进入核苷酸在DNA聚合酶的作用位点正确配对

3’到5’外切核酸酶对错误碱基的校正

错配修复 2 holiday模型 3

Section K 编码链 模板链 2 大肠杆菌的转录

RNAP酶：核心酶：a 亚基：aNTD对核心酶的组装很重要。

aCTD在识别启动子、调节转录水平中起着非常重要的作用。

b 亚基：RNAP的催化中心。

与模板DNA、RNA产物、及底物核糖核苷酸紧密结合。

抗生素利福平结合在在b 亚基上，可以抑制RNAP的转录活性。

利福平只抑制转录的起始。

利迪链菌素只抑制延伸而不抑制转录起始

b’ 亚基：可能与RNAP的催化有关。

肝素与b’亚基结合后，能干扰RNAP与DNA的结合，抑制转录。

w 亚基：可能与RNAP的组装及维持RNAP结构的稳定性有关

s factor(s因子)：s factor 在启动子特异性识别过程中至关重要 移动慢的原因：可以保持与翻译同步。

与有些基因转录调控相关。

有利于转录终止

RNAP没有3’ →5’外切酶活性，不能进行转录校正。其错配率达10-4。RNAP倒退暴露新合成的错配碱基，可以有利于其他辅助核酸酶将错配碱基切除，增加转录的忠实性。s70基础启动子的一般结构

-10 序列：它对转录起始时，RNAP打开DNA双链的过程非常重要。-

10序列到TSS位点的距离对转录效率也有很大的影响-35 序列：增强RNAP s factor 的识别能力及与DNA的结合能力 4 影响启动子效率的DNA序列：

核心启动子的序列：与保守序列越像，效率越高。

TSS周围序列：影响起始效率。

转录单位的前30个核苷酸的碱基序列：影响RNAP从启动子处移动出去（启动子区清空）的速率。

核心启动子附近的调控元件。转录的起始：开放复合物 闭合复合物 无效起始

延伸：启动子的清空，链的延伸转录泡，s因子的循环利用

终止：依赖性 不依赖性

反复重复序列

Section L 1.顺式作用元件（cis-acting elements）：一般为DNA上较为保守的、有着特异性序列或结构的特定区域。它们只能影响与其在同一条染色体上的基因的活动。如：启动子，转录激活因子结合位点等。

反式作用基因/调节基因（trans-acting genes，regulator genes）

可以影响与他们不在同一条染色体上的基因的表达水平的DNA元件。2 乳糖操纵子 色氨酸操纵子 正负调控都可以有诱导和阻遏两种调控方式。

正控诱导：诱导因子活化激活因子，使其可以增加基因的表达。（Lac operon，CRP调控）正控阻遏：共阻遏物使激活因子失活，减少基因的表达。负控诱导：诱导因子使阻遏蛋白失活，增加基因的表达。（Lac operon，lac repressor）负控阻遏:共阻遏物活化阻遏蛋白，使其可以降低基因的表达。（Trp operon，trp repressor）

Section M 增强子 沉默子 TFIID：可与多种核心启动子元件或特异性转录因子结合，启动二类转录预起始复合物组装的通用转录因子。

TBP(TATA-box binding protein):可识别并结合TATA-box TAFII（TBP-associated factor II）：TBP关联蛋白，TFIID中与TBP形成复合体的所有蛋白，～13个。

TFII H的结构与功能：蛋白激酶(4 个亚基)：催化蛋白磷酸化。将NTP（一般为ATP）的g-磷酸基团转移到蛋白上。

磷酸化 RNA pol II 中的CTD 结构域。TFIIE 刺激TFIIH介导的磷酸化反应。DNA 解旋酶/ATPase(5 亚基)：

水解ATP，利用其能量打开DNA的双链 TBP(TATA-binding protein): 确保 RNA Pol I能正确定位到转录起始区域上。

SP1 为组成性表达的转录因子，在所有的细胞中都存在，与基因本底表达水平有关 SL1，选择因子,RNA Pol I起始转录所必需的因子 CTD:羧基末端结构域，的磷酸化状态与转录进程有关

转录起始时期，CTD结构域一般处于去磷酸化形式，与结合启动子有关。

转录延伸时期，CTD结构域常处于磷酸化形式，与mRNA的加工有关。

Section N 1 DNA-binding domains（DBD）:DNA结合结构域

螺旋-转角-螺旋结构（域）

锌指结构（域）

碱性结构（域）

Dimerization domains：二聚体化结构域

亮氨酸拉链 螺旋 散环 螺旋 DBD+DM 激活结构域 酸性激活结构域 富含谷氨酰胺结构域 富含脯氨酸的结构域 LBD

Section O 真核生物中mRNA 加工的一般过程 5’加帽: CTD作用：转录起始时，参与加帽反应的三种酶结合在RNA Pol II的CTD结构域上。转录产物刚开始合成时，即对其5’端进行加帽反应。

作用：防止降解：核糖核酸酶一般不能降解帽结构中的三磷酸键

帮助转运mRNA到细胞质中

增强翻译水平：mRNA需要帽结合蛋白的帮助才能更好的与核糖体结合 帮助去除pre-mRNA中的第一个内含子。3’加Poly(A)尾：

作用：防止被核酸酶降解：增加mRNA的稳定性

有助于mRNA从细胞核到细胞质的转运

参与pre-mRNA的最后一个内含子的剪接。

增强mRNA的翻译水平，增加基因的表达 剪接 甲基化 2 核酶有：有催化功能的RNA即为核酶

U2 U6 RNAP 3 RNA的多样性：可变加工，反式剪接，RNA编辑 原核生物核糖体

真核生物核糖体 原核rRNA 加工的大致过程：形成多个茎环结构，与蛋白结合形成RNP，核苷酸修饰，逐级切割

真核rRNA 加工的大致过程：甲基化，切割。内含子剪接 原核tRNA 加工的大致过程:将多顺反子前体切割，分离出单顺反子前体

单顺反子前体进一步被切割，形成与成熟tRNA长度一致分子（RNases D, E, F，P

.碱基修饰，形成成熟tRNA 真核tRNA 加工的大致过程：5’-末端成熟，3’-末端成熟（添加5’-CCA-3’）去除内含子 7 miRNA and siRNA的调控机制：mRNA降解，抑制翻译，抑制转录

Section P 1 遗传密码的特性:

蛋白的编码信息由三联体密码子组成。

密码子为连续的，之间无间隔、无重叠。

除三个终止密码子之外，每个密码子对应一种氨基酸

有密码简并现象。即：多个密码子对应同一种氨基酸。

标准遗传密码子在各类生物中基本通用，不过少数生物体或细胞器中，有一些密码子对应的氨基酸与标准的不同。

生物对同义密码子的使用经常有偏好性。不同生物的密码子偏好性不同。

基因一般不重叠。一段核酸分子一般只有一个开放阅读框（open reading frame, ORF/可读框），被翻译成一个蛋白。

有些物种也有重叠基因的现象。开放阅读框:ORF 从起始密码子ATG 到终止密码子

TGA,TAA or TAG 之间的连续的蛋白编码序列

CDS 编码序列 当ORF可以预测一个蛋白时 3 tRNA 二级结构:三叶草结构 4 tRNA的特异性加载：（翻译的高保真性）

氨酰-tRNA合成酶对相应tRNA分子有很强的专一性：第二密码子：

氨酰-tRNA合成酶接受相应氨基酸时有很强的忠实性：校正：双筛选机制—酶的活性中心，酶中的编辑位点 氨酰-tRNA（AA-tRNA）： 3’-end加载了一个氨基酸的tRNA分子。是在蛋白质合成中，将密码子转换氨基酸的适配器。

Section Q 1 密码子与反密码子的反向互补配对 一个tRNA可识别的密码子数由反密码子的第一位碱基决定

摆动学说：第三位密码子与第一位反密码子的配对可以摆动

反密码子第一位为A或C时，配对无摇摆现象。3 核糖体的E，P，A位点 A位：接受AA-tRNA部位.除了起始氨酰-tRNA，其他所有AA-tRNA都只能进A位点。P位：肽酰基-tRNA结合部位。起始氨酰-tRNA也进入此位点。E位：空载tRNA离开核糖体的位点。4 核糖体各亚基的功能

核糖体小亚基功能：结合mRNA

促进密码子与反密码子的正确结合 mRNA移位

大亚基的功能A位、P位、肽酰转移酶（转肽酶）中心等在大亚基上。

负责携带AA-tRNA、肽键/肽链的形成 5 翻译的基本内容 核糖体与mRNA结合

氨酰tRNA逐个进入核糖体

氨酰tRNA通过反密码子与mRNA互补配对 氨酰tRNA分子的氨基酸之间形成肽键。空载tRNA的释放 肽链的释放

第四篇：现代分子生物学总结

医学细胞与分子生物学习题库

一、名词解释

1．基因组

2．基因文库

3．卫星DNA

4．SD序列

5．分子克隆

6．载体

7．反式作用因子

8．粘性末端

9．限制性内切酶

10．cDNA文库

11．转化率

12．质粒拷贝数

13．体外重组

14．感受态细胞

15．探针

16．核酸杂交

17．阳性克隆

18．固相杂交

19．解链温度

20．C值悖理

21．基因家簇

22．反义RNA

23．RNA干扰

24．魔斑

25．顺式作用元件

二．填空题

1.真核生物基因组DNA序列可分为（）、（）和（）。

2.真核生物基因组高度重复序列包括（）、（）、（）和（）四种。

5.原核生物转录水平调控的方式有（）和（）两种方式；前者又可分为（）和（）；后者可分为（）和（）。

6.真核生物基因表达调控包括（）、（）、（）、（）和（）五个层次。

7.真核生物基因组DNA水平的调控包括（）、（）、（）、（）和（）五种方式。

8.反式作用因子可划分为（）、（）和（）三类。

12.影响杂交的因素有（）、（）、（）、（）和（）。

15.逆转录酶是多功能酶，具有（）、（）、（）三种功能，但无（）作用。

16.DN的损伤突变类型有（）、（）、（）、（）和（）。

17.引起DNA损伤突变的因素是（）、（）、（）、（）和（）。

18.DNA的损伤修复方式有（）、（）、（）和（）。

20.病毒基因组可由（）或（）组成；细菌基因组由一条（）组成；真核生物基因组由（）和（）形成（）。

21.原核生物基因表达调控的方式有（）和（）；其中（）是主要的方式。

22.、操纵子由（）、（）和（）组成；受（）产物的调控。

23．顺式作用元件按功能可划分为（）、（）、（）和（）。

24．分子克隆技术的操作包括（）、（）、（）和（）等四个基本过程。

25．限制性内切酶分为（）、（）、（）三种，其中只

有（）在基因工程操作中被应用。

26.限制性内切酶识别（）序列； DNA分子在该酶切割下可产生（）、（）或（）末端。

27．分子克隆中常用的工具酶有（）、（）、（）和（）。

28．分子克隆中常用的载体有（）、（）、（）和（）。

29．目的基因制备的常用方法有（）、（）、（）。

30．体外重组常用方法有（）、（）、（）和（）。

31．重组体导入原核生物细胞中的常用方法有（）和（）；重组体导入真核生物细胞中的常用方法有（）、（）和（）。

32．重组体的筛选方法有（）、（）、（）、（）。

33．cDNA文库的构建步骤是（）、（）（）、（）。

34．常用的核酸探针包括（）、（）和（）。

35．放射性同位素标记常用的标记方法有（）、（）、（）。

36．分子克隆中常用的非放射性同位素标记物有（）、（）、（）等；常用的标记方法有（）、（）。

37．核酸杂交技术可分为（）和（）两种类型；后者又可分为（）和（）。

39．PCR技术的基本过程是（）、（）、（）。

40．影响PCR的因素有（）、（）、（）、（）、（）。

41．PCR反应的特点是（）、（）、（）、（）。

45．限制性核酸内切酶的作用特点是（）、（）、（）、（）。

50．DNA切除修复需要的酶有（）、（）和（）。

三、判断题

1、生物越高度，基因组越庞大，基因数目就越多。（）

2、真核生物结构基因都是单拷贝，rRNA基因为多拷贝。（）

3、同基因是一类结构上完全相同，表达产物功能也相同的一组基因。（）

4、真核细胞基因转录产物为单顺反子。（）

5、原核细胞基因转录产物为多顺反子。（）

6、真核生物基因组中不编码的区域多于编码的区域。（）

7、卫星DNA实际上是出现在非编码区的串联重复序列。

8、串联重复序列是形成卫星DNA 的基础。

9、所有真核生物基因组中都有α卫星DNA。

10、高度重复序列在真核生物细胞基因组中重复出现可达106次以上。

11、中度重复序列的长度和拷贝数很不均一。

12、短分散片段重复顺序的平均长度约为3500-5000bp。

13、长分散片段重复顺序的平均长度约为300bp。

14、中度重复序列大多不编码蛋白质。

15、高度重复序列中有一些可编码蛋白质。

16、中度重复顺序一般具有种特异性。

17、每种组蛋白的基因在同一种生物中拷贝数是相同的。

18、不同生物中组蛋白基因在基因组中的排列不一样。

19、端粒是所有生物染色体末端的一种特殊结构。

20、以RNA为模版合成出的DNA链叫负股链。

21、颠换是指原为嘧啶突变后变为嘌呤。

22、置换是指原为嘧啶突变后变为嘌呤。

23、重组修复也叫复制后的修复。

24、原核细胞和真核细胞中许多mRNA都是多顺反子转录产物。

25、限制性内切酶切割的DNA片段都具有粘性末端。

26、原核生物中mRNA一般不需要转录后加工。

27、增强子并没有启动子活性，却具有增强启动子活性，促进转录起始的效能。

28、在双向复制中一条链按5′→3′的方向合成，另一条链按3′→5′的方向合成。

29、原核细胞和真核细胞复制在多个位点同时起始进行。

30、真核细胞的基因是不连续的，转录出来的所有RNA都必须经过加工。（31、生物DNA分子的大小等于基因的总和。（）

32、所有多肽链经核糖体翻译出来即有正常生理功能。

33、核糖体是蛋白质和rRNA构成的功能复合体。

34、机体的各种细胞中含有相同的遗传信息，所以有相同的表达，35、在负控诱导系统中，阻遏蛋白不与效应物结合时，结构基因不转录。

36、在负控阻遏系统中，阻遏蛋白不与效应物结合时，结构基因不转录。

37、CAP结合在启动子上时，能促进RNA聚合酶与启动子结合，促进转录。）

38、CAP首先与cAMP形成复合物才能与启动子结合。

39、RBS是指mRNA起始密码AUG前的一段非翻译区。

40、反义RNA由反义基因转录而来。

41、转录后基因沉默被称为RNAi。

42、细胞中蛋白质合成旺盛时，mRNA链上核糖体数量就多，poly（A）也较长。

43、限制性核酸内切酶是原核生物所特有的酶。

44、只有Ⅱ型限制性核酸内切酶在分子生物学中被应用。

45、COS区是指λ噬菌体粘性末端构成的区域。

53、基因扩增是指某些基因的拷贝数大量增加的现象。

54、基因重排是DNA水平调控的重要方式之一

55、所有核酸的合成都是以碱基配对为基础的。

56、甲基化程度与基因的表达一般呈反比关系。

57、基因的甲基化程度愈高，其表达则降低。

58、去除组蛋白基因转录活性降低。

59、常染色质:结构松散，基因不表达。

60、异染色质:结构紧密，基因表达。

61、有基因表达活性的染色质DNA对DNaseⅠ更敏感。

62、真核生物基因调控主要也是在转录水平上进行的。

四、选择题：

1.原核生物基因组中的复制起始点有（）

A．1个B．2个C．多个D．1000个以上

2．真核生物基因组中的复制起始点有（）

A．1个B．2个C．多个D．1000个以上

3.真核生物基因之间的间隔区与基因组大小（）

A．有关B．无关C．成正比E．成反比

４.卫星DNA的长度一般为()

A．5-10bpB．300bpC．100bpD．500-1000bp

５.在大肠杆菌细胞中DNA复制的保真性主要是下列哪个酶的作用（A．DNA聚合酶ⅠB．DNA聚合酶Ⅱ

C．DNA聚合酶ⅢD．DNA连接酶

６.既有内切酶活力，又有连接酶活力的是

A．拓扑异构酶B．DNA聚合酶Ⅱ

C．解螺旋酶D．DNA连接酶）

7.转录过程中遗传信息的转递方向是()

A．DNA→RNAB．RNA→DNAC．DNA→DNAD．RNA→RNA

8.hnRNA是()

A．存在于细胞核内的tRNA前体B.存在于细胞核内的mRNA前体

C.存在于细胞核内的rRNA前体D.存在于细胞核内的snRNA前体

9.以RNA为模板合成DNA的酶是（）

A．DNA聚合酶ⅢB．DNA聚合酶ⅠC．RNA聚合酶D．反转录酶

10.蛋白质的生物合成中肽链延伸方向是（）

A．5→3B．从N端到C端C．3→5D．从C端到N端，，11.蛋白质翻译后的加工主要包括（）。

A．氨基酸侧链修饰B．水解修饰

C．二硫键的形成D． 上述各种修饰都包括

12.操纵子调控系统属于哪一种水平的调控（）

A．复制水平的调节B。转录水平的调节

C．翻译水平的调节D。转录后加工的调控

13.与乳糖操纵子操纵基因结合的物质是（）

A．RNA聚合酶B．DNA聚合酶C．阻遏蛋白D．诱导物

14、参与线粒体DNA复制的酶是（）

A．polαB．polδC．polβD．polγ

15、参与领头链DNA复制的酶是（）

A．polαB．polδC．polβD．polγ

16、端粒酶是一种()

A．逆转录酶B．RNA聚合酶C．DNA聚合酶D．DNA酶

17.含稀有碱基最多的RNA是（）

A．mRNAB、rRNAC．5S-rRNAD．tRNA

18.大肠杆菌DNA连接酶需要下列哪一种辅助因子？（）

A．FAD作为电子受体B．NADP+作为磷酸供体

C．NAD+形成活性腺苷酰酶D．NAD+作为电子受体

19.真核生物RNA聚合酶I催化转录的产物是（）

A．mRNAB．45S-rRNAC．5S-rRNAD．tRNA

20.魔斑是指（）

A．ppGppB．cAMPC．cGMPD．7mGppp

21.CAP复合体与操纵子结合的部位是（）

A．启动子B．操纵基因C．结构基因D．调节基因

22.基因的甲基化修饰一般发生在（）

A．CpGB．ApGC．GpTD．TpG

23.有基因表达活性的染色质DNA对下列那个酶敏感性增加？（）

A．DNaseⅠB．DNA polⅠC．DNA polⅡD.Rnase H

24.真核生物的RNA聚合酶识别的是（）

A．启动子B．增强子C．TF-DNA复合体D．RF

25.在分子生物学中被应用的限制性核酸内切酶是（）

A．Ⅰ型B．Ⅱ型C．Ⅲ型D．以上都没用

26.限制性核酸内切酶错位切割产生（）

A．粘性末端B．平头末端C．3’-磷酸D．5’-羟基

27.大肠杆菌DNA连接酶只能连接（）

A．粘性末端B．平头末端C．3’-磷酸D．5’-羟基

28.pBR322是（）

A．复制型载体B．表达型载体C．穿梭载体D．噬菌体载体

29、pUC载体是（）

A．复制型载体B．表达型载体C．穿梭载体D．噬菌体载体

30.M13噬菌体是（）

A．单链DNA噬菌体B．双链DNA噬菌体

C．RNA噬菌体D．都不是

31、B．表达型载体C．穿梭载体D．噬菌体载体

五．问答题

1．分子克隆中常用的工具酶有哪些？各有何用途？

2．何谓载体？分子克隆中常用的载体有哪些？理想的载体应具备哪些条件？

3．何谓PCR？试述PCR基本技术原理和影响因素。

4．常用的核酸探针有哪些类型？各有何优缺点？

5．将目的DNA与载体DNA连接起来的方法有哪些？并用文或图表示各种连接过程。

6．简述原核生物与真核生物基因组结构特点。

9．体外重组常用的连接方法有哪些？各有何优缺点？

13．何谓核酸杂交？常用的杂交方法有哪些？

28.何谓宿主细胞？分子克隆中常用的宿主细胞有哪些？宿主细胞应具备哪些条件？

31.简述重组体导入哺乳动物细胞的方法

35、DNA损伤修复有哪些类型？试述各类型的修复方式。

第五篇：分子生物学实习总结

分子生物学实习总结

三天的分子生物学实习，我能认真听老师的讲解和很好的按照老师的安排完成实验。期间，接触和学习到了很多有关分子生物学实验的方法、仪器的使用、技术，而且对分子生物学实验有一个大致的了解，学习到很多以前没有接触过的知识。

这几天来做的不足的地方有：

1.预习不够充分。只是浏览了实验报告上的原理、操作等内容，并没有深入了解每一个步骤的操作会对实验有什么的作用和影响。实验失败了，不能自主找到原因。

2.实验操作过程不够细心。实验要求十分细心，严谨和专注。实验中很多细小的地方还是没有很好的注意到。

3.遇到不懂的没有及时发问。实验就是一个让我们实操的过程，一边操作一边巩固书本上的知识。过程中，遇到不明白的地方应该及时问别人活着自己翻阅资料，力求把实验弄透彻。

但是我还是有很多收获的：

1.对分子生物学实验有了了解。例如实验的基本的流程和操作，常用的方法等基础知识已经有了一定了解，对以后的实验会有一定的帮助。

2.最基本的移液枪、离心机、涡旋器等的使用还有实验中的PCR仪、电泳等有一定的认。3.学会了严谨和细心。实验所用的材料都是比较昂贵的，而且实验只要一步错了，就得重做。所以需要非常严谨。不仅仅是分子生物学实验，其他实验也要求，所以培养这个有点对以后的实验非常有好处。

4.学会了坚持。很多次因为实验做的时间很长，大家都会很累，但是，还是要坚持，一点点累都受不了是不能把实验做好的。开始慢慢了解到做科研的人员的辛酸，长时间整天呆在实验室做实验，这需要很大的毅力。

5.把握实验机会，让自己学得更多。实验过程中，只要有实操的机会，我都会去操作。因为说和做是不一样的。而且在操作中能加深巩固知识和学得更加深入。

三天的分子生物学实习虽然很累，因为要天天去院楼，而却实验时间都比较长。但是还是很有意义的，因为学习到很到东西，收获了很多。

老师也为我们准备了很多的材料和准备，实验才做得那么快和顺利，其实，实验室简化了很多了，而且我们所做的实验都是已经设计好的，按照操作做就行了。如果时间和资金允许，应该设立一些自主完成的实验，这样可以培养我们更加多的能力，开阔知识面和拓宽思维。