鸡新城疫疫苗研究进展[大全5篇]

第一篇：鸡新城疫疫苗研究进展

鸡新城疫疫苗研究进展

摘要：新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种烈性病毒性传染病,是当今全球范围内最严重的家禽传染病之一,也是我国所有鸡病中危害最大的一种,被国际兽疫局列为A类传染病。新城疫常呈败血症,主要特征是呼吸困难、下痢、神经机能紊乱、黏膜和粘膜出血。该病发病急、致死率高,对养禽业的发展构成严重的威胁。新城疫病毒只有一个血清型,但不同亚群和毒株在毒力、抗原性和致病性等方面存在着明显的差异。这种差异虽然不足于造成免疫失败,但有可能使一些致病毒株在免疫鸡群持续存在。目前,鸡新城疫尚无有效治疗药物，但在长期兽医临床实践中，发现用中兽医治疗有明显的效果，这对鸡新城疫疫苗研究有新的进展。

关键词：鸡新城疫传染病中兽医进展

新城疫病毒基因组为一条负链不分节段的NA单个分子,由15186个核苷酸组成,包含6基因,由3′到5′的顺序依次为NP-P-M-F-H-L,分别编码核衣壳蛋白(NP)、磷酸化的核衣相联蛋白(P)、基质蛋白(M)、血凝素神经氨酸酶(N)、融合蛋白(F)、RNA依赖的RNA聚合酶等6种病毒特异性结构蛋白。HN蛋白与F蛋白是重要的宿主保护性抗原,其中F蛋白是决定病毒毒力的主要因素,其次是HN蛋白,HN蛋白和F蛋白在决定病毒毒力方面关系密切。有强毒株和弱毒株两类。病毒分为低毒力型（即缓发型）、中等毒力型（即中发型）、强毒力型（即速发型）3型。多数高强度毒力株常属嗜内脏型新城疫病毒。

1、新城疫病原

鸡新城疫病毒（NDV）属于副粘病毒科腮腺炎病毒属。但近年来对基因组长序列的测定表明，NDV以及其他禽副黏病毒（APMV）与腮腺炎病毒属中的其他病毒之间的差别，足以把它们列为一个单独的属。BDV完整病毒料子近圆形，有囊膜，在囊膜的外层有呈放射状排列的纤突，能刺激宿主产生抑制病毒凝集红细胞的抗体和病毒中和抗体。

根据不同毒力毒株感染鸡表现的不同，可将NDV分为几种致病型：（1）速发型或强毒型毒株，在各种年龄易感染鸡引起急性致死性感染（2）中发型或中毒弄毒株，公在易感染的幼龄鸡造成致死性感染（3）缓发型即低毒型或无毒型毒株，表现为轻微的呼吸道感染或无临诊症状肠道感染。NDV的毒力分型必须进行生物学试验，即依据鸡胚平均死亡的时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）和6周龄鸡静脉接种致病指数（IVPI）来区别。

NDV的一个很重要的生物学特性就是能吸附于鸡及某些哺乳动物或人的红细胞表面，并引起红细胞凝集（HA），这种特性与病毒囊膜上纤突所含血凝素和神经氨酸酶有关。其血凝现象能被抗NDV的抗体所抑制（HI），因此可用HA和HI试验来鉴定病毒，进行免疫监测和浒病学的调查。

2、新城疫疫苗的研究及中药防治

目前已知主要的新城疫疫苗有基因工程苗、弱毒活疫苗、灭活疫苗、联苗等。

2、1 基因工程苗

基因工程苗是目前疫苗研究的热点，国内外一些实验室从20 世纪80年代末开始利用重组DNA 技术研制ND 基因工程疫苗。目前，ND 基因工程苗主要有DNA 疫苗、亚单位苗、活载

体疫苗、多肽苗和转基因植物疫苗等几种。DNA 疫苗具有能够激发机体体液免疫和细胞免疫反应、不散毒、便于储存和运输等优点。亚单位苗是将NDV 保护性抗原基因在原核或真核系统中表达所获得的产品制成的疫苗，具有安全性高，稳定性好，便于保存运输，易于批量生产的优点。活载体疫苗的载体病毒或细菌表达目标抗原可以最大限度地不受接种动物体内新城疫抗体的干扰。转基因植物疫苗的效果好，成本低、疫苗的植载体易于保存，使用方便，市场潜力巨大，发展前景十分广阔。目前，ND的基因工程苗主要有以下几种：

2．1．1 DNA疫苗

DNA疫苗是二十世纪九十年代从基因治疗领域发展起来的一种全新的疫苗，具有能够激发机体体液免疫和细胞免疫反应、不散毒、便于储存和运输等优点。新城疫病毒的F和HN蛋白基因均是新城疫病毒的保护性抗原基因。新城疫DNA疫苗将病毒HN或F基因通过表达质粒DNA导入机体细胞，借助宿主细胞表达系统表达病毒NA或F蛋白，诱发机体产生针对这些抗原的特异性免疫发应。

2．1．2 亚单位苗

亚单位苗是将NDV保护性抗原基因在原核或真核系统中表达所获得的产品制成的疫苗，即利用重组DNA 技术在高效表达系统表达NDV 免疫原性基因, 并辅以佐剂而制成的疫苗，这种疫苗具有安全性高，稳定性好，便于保存运输，易于批量生产的优点。

2．1．3 活载体疫苗

虽然DNA疫苗和亚单位苗均显示了良好的免疫性能，但因受到价格的限制往往难以实际推广应用。因此，大多数学者利用痘病毒、火鸡疱疹病毒和某些细菌作为载体，插入新城疫病毒HN或F基因，通过动物接种，使接种鸡得到免疫保护。载体病毒或细菌表达目标抗原可以最大限度地不受接种动物体内新城疫抗体的干扰，随后发展了包括痘病毒、疱疹病毒、反转录病毒和沙门氏菌减毒株等活载体重组体，其中以重组痘病毒和疱疹病毒研究最为深入。2、2 弱毒活疫苗

用新城疫弱毒苗是目前许多国家用来预防鸡新城疫的常规而广泛的方法。弱毒疫苗系用鸡新城疫低毒毒株接种敏感鸡胚培养，收获感染鸡胚尿囊液，加适当稳定剂，经冷冻真空干燥制成的冻干苗。在我国使用的弱毒疫苗有两种类型：中等毒力的I系疫苗以及弱毒的Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系和V4弱毒疫苗。其中Ⅰ系苗属于中等毒力苗,免疫后鸡体产生抗体快,抗体维持时间长(3～5周),但Ⅰ系苗对雏鸡和产蛋鸡均有一定的致病力,使用时应注意。多用于60～120日龄的青年鸡的加强免疫。Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系苗等均为弱毒疫苗,通常用于青年鸡群的早期接种,而Ⅳ系苗的毒力相对Ⅱ系、Ⅲ系稍强,对鸡群具有较好的免疫保护性,是目前使用较多的弱毒苗。

2、3 灭活疫苗

灭活疫苗会使受种者产生以体液免疫为主的免疫反应，它产生的抗体有中和、清除病原微生物及其产生的毒素作用，对细胞外感染的病原微生物有较好的保护效果。灭活疫苗对病毒、细胞内寄生的细菌和寄生虫的保护效果较差或无效。灭活疫苗是经处理而致死的病原体，安全性好，免疫应激反应小。其优缺点见表1。Takada等通过鼻内接种ND灭活疫苗，能够引起局部和全身的抗体反应，对致死量的NDV强毒鼻内攻毒产生保护力，其免疫效应通过配合使用霍乱毒素B亚单位(CTB)的佐剂可得到增强。沈志强等用NDV Clone-30株病毒接种非免疫鸡胚，制备抗原液，经甲醛灭活后与纯化的天然免疫增强剂蜂胶乳化，研制成鸡ND蜂胶灭活疫苗，其安全性和免疫原性良好。目前预防鸡新城疫灭活苗使用较多的为油乳剂灭活疫苗。

2、4 联苗

目前国内外生产的鸡用联苗日渐增多，采用联苗可以减少对鸡的免疫次数和应激，可以用来防治鸡的各种疾病。2005年12月24日，我国农业部在北京宣布，我国成功研制了禽流感一新城疫重组二联活疫苗，并正式批准生产。美国在27个苗中就有18个是联合苗，日本生产的鸡所用联合苗占鸡用苗的40％，如鸡新城疫一传染性支气管炎疫苗，新城疫一鸡痘疫苗，新城疫一鼻炎疫苗等。赵恒章等通过斌验证明，新城疫一传染性支气管炎二联油乳剂灭活苗接种21日龄雏鸡后，14天后便能产生有效的保护抗体。王宏俊等经过试验，发现当NDV+AIV(H9)二联苗免疫剂量为O．5毫升／只时，免疫后2l天鸡血清中 AIV及NDV的HI抗体均大于28，并具有很好的免疫保护性，能够耐受AIV(H9亚型)及NDV F48的攻击。新城疫传染性支气管炎联合疫苗已早研制成功，并可将2 种病毒接种于同一鸡胚中生产疫苗，试验结果证明这种疫苗具有良好的免疫效果和实用价值。王丽男等对鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联活疫苗的安全性和免疫效力进行了试验，结果证明该疫苗的安全性和免疫效果良好。用常规量的1 0 倍剂量接种雏鸡未见不良反应。

2、5 中药防治

长期以来,中药饲料添加剂在兽医临床上防治鸡新城疫病取得了较好疗效,适合于临床推广。兽医工作者通过提取中药有效成分后作为疫苗免疫佐剂应用,可大大降低疫苗与中药的使用次数和剂量,提高鸡新城疫免疫效果,从而更有效地防治鸡新城疫病。中药佐剂能显著促进淋巴细胞转化,提高血清抗体效价,多数时间点与油佐剂的效果相当,部分时间点显著强于油佐剂。目前有中药散剂防治鸡新城疫和中药煎剂防治鸡新城疫两种方法，由于我国养禽业总体水平不高,特别是在某些重大禽类传染性疾病的防治上存在较多问题。另外,当前养禽业中抗生素、化学合成药物、激素等使用不规范,禽类产品药物残留超标而影响出口,禽类排放粪便造成环境污染和破坏生态平衡等。使用了数千年的传统中药具有诸多抗生素等化药无法比拟的优点,可用于鸡新城疫、禽流感等重大禽类传染性疾病的防治。因此,为了生产更多的“健康绿色食品”,有必要进一步加强中药防治禽类疾病的科研投入,使我国养禽业走上健康、良性、持续发展的道路。

3、疫苗的使用方法及注意事项

目前我国对鸡新城疫疫苗的使用方法有：饮水免疫、注射免疫、气雾免疫、滴鼻点眼免疫等。3、1饮水免疫

首先要保证足够的饮水器，并把饮水器清洗干净，无抗菌、消毒药物残留；饮水免疫前停水2~4小时；疫苗水中不含金属离子和氯离子，可使用凉开水或蒸馏水，最好使用去离子水，并在其中加入2~3%鲜牛奶或0.2~0.3%脱脂奶粉，以稳定病毒活性。然后按要求加入疫苗，混匀后给鸡饮服。

特别注意疫苗的用水量，一般为鸡日饮水量的30%，疫苗用量高于平均用量的2~3倍，保证所有的鸡同时喝到疫苗水，并在0.5~1小时内饮完。如饮水量少，只能让一部分鸡饮上疫苗，造成免疫不均匀；饮水量太多，很长时间饮不完，造成疫苗效价降低。

3、2 注射免疫

注射前要将注射器具彻底消毒，疫苗现配现用，疫苗用灭菌生理盐水或凉开水稀释，不能用热水或含氯的自来水作稀释液，灭活疫苗要摇匀后才能使用；注射剂量要准确，不能任意加大或减少疫苗用量；注射时操作要规范，颈部皮下注射应提起皮肤掌握好角度，针头刺入皮肤与肌肉之间，避免刺伤颈骨或穿针；肌肉注射应根据鸡龄大少确定实施部位，一般胸部龙骨肌肉最厚处注射，避免破血管或内脏器官，造成骨骼损伤及死亡，腿部注射应在腿外侧无血管处，进针时顺腿骨方向刺入，避免刺伤血管神经。

3、3 气雾免疫

主要在大群免疫时应用，但不适宜于30日龄内的雏鸡和存在慢性呼吸道病的鸡群，以免诱发呼吸道系统疾患。气雾免疫时，将疫苗按规定稀释好，用喷雾器或空压机将疫苗液喷成气雾粒子。一般对6周龄以内的雏鸡气雾免疫，气雾粒子为 50μm，而对12周龄雏鸡气雾免疫时，气雾粒子取10~30μm为宜。在鸡头上为约1.5米左右喷雾，喷完后要最大限度地降低通风换气量，以保证气雾免疫效果，同时也要防止通风不良而造成 窒息死亡，一般喷雾后密闭鸡舍10~20分即可。但应注意有鸡支原体感染的鸡群，禁用喷雾接种；疫苗稀释后，应放冷暗处，必须在4小时内用完。

3、4点眼滴鼻

点眼滴鼻适用于鸡新城疫II系、III系、IV系疫苗的接种。对幼雏应用这种方法，可以避免疫苗病毒被母源抗体中和，从而取得比较良好的免疫效果，而且能保证每只鸡普遍得到免疫，且剂量一致。因此，一般认为点眼滴鼻法是鸡疫苗接种的最佳方法，尤其是鸡新城疫苗接种更是如此。用点眼滴鼻法接种时，可把1000只份的疫苗稀释于50或t00毫升生理盐水中，充分摇匀，然后在每只鸡的眼结膜或鼻孔上滴1滴(约0．05m1)。用La Sota弱毒苗0．05毫升滴鼻免疫，同时皮下注射0．3毫升油乳剂灭活苗或蜂胶苗0．5毫升，可获得90％以上的保护率，单独用其中一种苗免疫则效果低得多。

展望

随着我国养禽业的迅猛发展, 对ND 的防治越来越重要。因此研制出高效、安全、生产工艺简单、价格低廉、适用的ND 疫苗有重要意义。此外中兽药是在独特中兽医理论指导之下用于动物疾病防治,兼有营养和药用双重功效,与西药相比具有天然性、多能性、低毒副、不易产生有害残留和耐药性等优点,为动物临床广泛应用。于此同时，建立统一的兽医行政管理监督执法体系，改变现行的分散管理格局，实行从中央到地方的官方兽医制度，尽快与国际接轨，强化畜禽生产管理，加大执法力度，建立绿色畜禽产品专营市场，严格实行准入制，使合格产品进入，不合格的淘汰；扶持绿色品牌龙头企业，让绿色品牌和龙头企业结合，使 绿色品牌优势转化为经济发展优势，真正提高其质量安全水平。目前对鸡新城疫疫苗研究和中药防治，已经成为国际疫苗研究领域最热门的课题之一。

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第二篇：新城疫疫苗

新城疫疫苗 症状：产蛋量急剧下降，蛋质变差，蛋壳颜色变浅，软壳蛋明显增加，产蛋量下降维持 10-24天后，又逐渐回升。部分成鸡有拉稀而无神经症状，病鸡气喘甩头，有呼吸罗音，严重者导致呼吸困难，但死亡率较少。

鉴别诊断：1.精神萎靡，采食减少，呼吸困难，饮水增多。常有“咕噜”声，排黄绿色稀便；

2.发病后部分鸡出现转脖、望星、站立不稳或卧地不起等神经症状，多见于发病的雏鸡和育成鸡；

3.产蛋鸡产蛋减少或停产，软皮蛋、褪色蛋、沙壳蛋、畸形蛋增多，卵泡变形、卵泡血管充血、出血。

4.腺胃乳头出血，肠道表现有枣核状紫红色出血、坏死灶。喉头和气管黏膜充血、出血，有粘液；

实验室诊断：血凝和血凝抑制试验，ELISA、PCR。

防治：

1、使用新城疫疫苗，2、肌肉注射香港奥邦禽优乐，治疗量：0.5ml/公斤，如果能配合倍力健注射或饮水效果更佳。一天一次，即可控制大群。个别严重的病例单独挑出来一天注射一次，两用两天即可治愈。

第三篇：禽流感疫苗研究进展

禽流感疫苗研究进展

摘要 对禽流感的预防，必须在采取严格的生物安全措施的同时，加强必要的免疫措施。对不同类型禽流感疫苗的研究现状、优越性与局限性进行了综述。

关键词 禽流感；疫苗；研究进展

最近，亚洲一些国家不断暴发的禽流感（Avian influenza，AI）事件引起了人们对全球一系列动物和公众健康问题的极大关注，最近的联合国粮农组织（FAO）罗马提交会议指出[1]，当面临AI大流行威胁时，采取大规模扑杀感染动物的措施会丧失很大一部分食物来源，使地方养禽业遭受严重打击，显得不太合理。对禽流感的预防，必须努力集中在采取严格的生物安全措施的同时，加强必要的免疫措施。免疫能减轻临床症状，降低死亡率，减少病毒的扩散和提高群体对感染的抵抗力，从而控制禽流感病毒（Avian influenza vinus，AIV）的广泛传播[2]。然而，如果疫苗的使用和管理不当，不仅达不到预期的效果，还会污染环境，威胁公众健康。因此，研制安全、高效的AIV疫苗是专家们为之不懈努力的目标。

理想的疫苗应具有高的生物保护容量，同时消除环境污染和易感动物感染的可能性。总的来说，对于AIV疫苗的发展，以下几种设计思路均已被采用或尝试。

1全病毒灭活疫苗

由于AIV基因组的抗原漂移，AIV疫苗仅能提供70%的保护力。针对这种特点，AIV灭活疫苗通常制备成针对几种不同亚型AIV的多价疫苗，己证明1种灭活疫苗可以至少包括4种不同的AIV亚型。同只含单一亚型的疫苗比，多价疫苗并没有减弱对同一种HA亚型AIV攻击的有效保护[3]，而且各亚型抗原之间不产生免疫干扰。AIV灭活疫苗能使免疫鸡群在感染AIV野毒时有效地减轻损失，并显著减少可能存在于鸡群和环境中的病毒数量，缩短其存活时间，是AI防治的主动措施、关键环节和最后防线。而且灭活疫苗具有制备工艺简单、免疫效果确实、免疫持续期长等特点，许多国家已将其作为商品化的AIV疫苗应用于家禽中。我国己研制成功不同亚型的AIV疫苗，且证明具有良好的免疫保护作用。但灭活苗本身存在一些缺陷[4]，主要是：影响疫情监测；存在散播病毒的风险；免疫剂量较大，制备成本高。其最突出的缺点是不能诱导产生有效的粘膜免疫抗体和细胞免疫应答，因而无法有效地抑制呼吸道中AIV的复制。近年来，人们试图从技术上突破此缺点，筛选并利用同亚型弱毒疫苗株代替高致病性毒株制备灭活苗，是灭活苗研制中的努力方向之一。例如用2种不同的病毒同时感染鸡胚可导致片段间的重排而有可能产生所期望的疫苗株，这些疫苗种子株获得了抗原相关毒株相应的HA和NA基因，和A/Puerto Rico/8/34（H1N1）中的6个基因片段[5]。这些PR/8/34的片段赋予病毒弱毒所以能在鸡胚中迅速生长，适合作为灭活疫苗的生产。

2基因工程亚单位疫苗

亚单位疫苗是提取AIV具有免疫原性的抗原蛋白，加入佐剂而制成。这种疫苗安全性好，能刺激机体产生足够的免疫力，只是抗体持续时间短，且成本高。谢快乐等曾用台湾AIV分离株（H8N4）的HA和NP制备了复合亚单位疫苗，同时制备了灭活的油佐剂疫苗。当以疫苗诱生的HI抗体作为评价标准时，发现2种疫苗的差别不明显，只是在加强免疫后，亚单位疫苗的HI抗体水平的升高比油佐剂疫苗明显[6]。随着基因工程技术的不断发展，将免疫原性基因导入表达载体，经诱导可获得大量表达的免疫原性蛋白，提取所表达的特定多肽，加入佐剂即制成基因工程亚单位疫苗，这样可大大降低疫苗的成本。Kodihalli等研制了火鸡H5N2病毒NP/HA和ISCOM的复合亚单位疫苗，用其免疫火鸡，21d可产生较高的抗体滴度，并且T、B淋巴细胞被激活，可以对同源和异源（H6N1）亚型病毒的攻击产生保护作用，在攻毒后3d，可清除火鸡肺部和泄殖腔的病毒[7]。另外，将AIV的基因插入杆状病毒表达载体，利用重组病毒在昆虫细胞中表达的AIV蛋白来制备AIV的亚单位疫苗也已研究成功。Crawford等利用杆状病毒表达系统生产H5、H7亚型AIV的重组HA佐剂疫苗，免疫3周龄白色Rock鸡，用同亚型HPAIV攻击，结果重组HA佐剂疫苗组所有的鸡只均不发病，而未免疫组鸡只全部死亡，且经H5亚型病毒的重组亚单位疫苗免疫过的鸡攻毒后都不排毒[8]。

基因工程亚单位疫苗产生的抗体不针对病毒的内部蛋白，因此不会干扰AIV的血清学调查，而且其不存在毒力返强、散毒和环境污染的问题，是安全性很好的疫苗。重组杆状病毒表达的HA亚单位疫苗在禽类表现出良好的免疫原性，免疫后只诱导HA特异性抗体应答，不影响疫情监测，显示出了一定的应用前景。

3重组活载体疫苗

鸡痘病毒作为禽用疫苗病毒载体，具有外源基因容量大、可对表达的外源蛋白进行正确加工修饰、严格的宿主特异性和生物安全性等优点[9-11]，利用对禽类致病性很弱的痘苗病毒或禽痘病毒作载体，构建含有免疫原性基因的重组病毒，用此重组病毒作疫苗，可在动物体内复制，并不断地表达出免疫原性蛋白，从而诱导禽类产生针对目标病原的免疫保护力。Webster（1995）和Swaynes（1997）先后构建了含A/Ty/Ire/1378/83（H5N8）HA基因的禽痘病毒重组疫苗，用其免疫仔鸡，用在墨西哥分离的致死性强毒H5N2攻击，试验结果证明该苗可对H5N2提供0%～100%的保护[12]；冀德君、刘红旗等应用表达H9亚型 AIV HA的重组鸡痘病毒疫苗及其传代后第20、30代疫苗免疫5日龄无特定病原（SPF）鸡群，攻毒后第5天各免疫组排毒的鸡数与对照组相比显著减少[13]；程坚等用表达H9亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒在7日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡上进行的免疫效力试验亦表明，重组鸡痘疫苗能显著抑制静脉攻毒后免疫鸡从泄殖腔的排毒，效果与AIV全病毒灭活苗相当[14]。贾立军用构建的表达H5N1 HA的重组鸡痘疫苗免疫SPF鸡和无母源抗体的商品鸡，免疫鸡可抵抗H5N1亚型HPAIV的致死性攻击，诱导95%～100%的免疫保护[15]。陈平用构建的高效表达H9亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒颈部皮下免疫1日龄SPF鸡，攻毒后试验结果表明，rFPV-Ps-HA明显抑制了病毒的排出[16]。以上试验均表明，携带AIV HA基因的重组鸡痘疫苗具有良好的效果。

同灭活苗相比，携带HA基因的重组活载体疫苗不仅可提供相当的保护效果，而且具有一些独特的优点：安全性高；可通过刺种和皮下注射接种途径进行免疫，使用方便；免疫应激小；用量少，不需添加佐剂，成本大大降低；而且抗体持续时间长，效果好，用其免疫家禽，既可刺激宿主产生体液免疫，又能刺激宿主产生细胞免疫[17]。基因重组的鸡痘疫苗的最大优点是不干扰血清学调查，因此该重组疫苗适用于监测野毒感染[4]。

4DNA疫苗

Ulmer等[18]报道了小鼠肌肉注射含有编码甲型流感病毒核蛋白（NP）的重组质粒后，不仅产生抗NP的特异性IgG抗体，而且诱导CTL反应，可有效地保护小鼠抗不同亚型分离时间相隔34a的流感病毒的攻击。Pertmer发现，流感病毒NP基因的核酸疫苗激活机体的免疫反应不受母源抗体的干扰[19]。同样，在有母源抗体存在的情况下，HA和NP基因均能有效激活细胞免疫应答反应。我国研制的H7亚型HA基因DNA疫苗，在极小的使用剂量下即可成功诱导免疫保护反应，并有效阻断同源MPAIV在机体内的感染和排毒 [20]。大量的动物试验都说明在合适的条件下，DNA接种后既能产生细胞免疫又能产生体液免疫[21-24]，于是，DNA疫苗技术应运而生，并逐渐显示出它作为第3代疫苗的优越性。与传统疫苗相比DNA疫苗有许多优点：能长时间表达抗原；具有与天然抗原相同的构象和免疫原性，可同时激发机体产生细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫应答，而且不受母源抗体的干扰；结构简单，制备方便；稳定性好，易于保存和运输；能够克服由于免疫系统发育不完善而导致的免疫力低下的缺陷；可用于制备多价疫苗或联苗。

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目前，对于DNA疫苗存在着安全方面的考虑：质粒DNA低水平整合到宿主基因组的潜在危险性；DNA疫苗载体携带的抗生素基因可能导致的生物学后果；产生针对双链DNA的抗体；引起免疫耐受。针对上述四种潜在的危害性，美国FDA、WHO及EU都对DNA疫苗的研制制定了一些指导性规定，为DNA疫苗的研究、生产及应用指明了方向。由于DNA疫苗代价相对较高，且不适于集约化养殖的群体免疫，因此可考虑改进DNA疫苗生产工艺和优化疫苗接种方式来开发出价格低廉、实用化的DNA疫苗。其中应用减毒胞内菌运送DNA疫苗的途径取得了一些令人振奋的结果。已经有了一些比较好的减毒沙门氏菌菌株作为禽类DNA疫苗的运送载体的研究报道，张小荣等以减毒沙门氏菌运送H5亚型AIV DNA疫苗的生物学特性研究表明，该疫苗具有良好的安全性和免疫原性，能同时激发细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫应答[25]，这类疫苗仍在探讨中，需对这类疫苗进行进一步优化，才能最终筛选出真正适合临床应用的疫苗。

5RNA复制子疫苗

随着DNA疫苗的深入研究，人们担心DNA会整合到宿主细胞基因组上，造成致癌隐患。此外，DNA通过核膜较为困难，限制了其作用的发挥，在一定程度上阻碍了DNA疫苗的推广应用。于是，人们又设想用RNA替代DNA作基因疫苗，近年来开发的RNA复制子载体应运而生。该RNA复制子可以不依赖于宿主细胞而自主复制，包含病毒基因组5’和3’末端的顺式作用元件、全部非结构蛋白基因编码区（包括复制酶编码基因），而结构蛋白基因被缺失，由外源基因取代，这种重组病毒粒子可以很容易地携带达3kb的外源RNA，并且感染的细胞谱较广，包括非分裂细胞[26]。Vignuzzi等[27]将A型流感病毒A/PR/8/34（ma）株的NP基因插入塞姆利基森林病毒（SFV）载体上构建RNA疫苗，7～8周龄的C57BL/6老鼠肌肉注射10μg SFV RNA，3～4周后再加强1次，共免疫3次。第3次免疫后1～3周，由鼻腔攻入100pfu的A/PR/8/34（ma）病毒。试验结果不仅有较高的中和抗体出现，而且诱导了有效的CTL反应，试验小鼠能有效清除肺部的病毒。大量的研究证实DNA/RNA复制子比常规DNA疫苗的免疫原性好[28]，可以产生更强的抗体应答和更多的CTL前体，而且使用比常规DNA疫苗免疫剂量低100倍的复制子疫苗就可以产生与常规DNA疫苗相当的免疫效力。可见，RNA复制子载体的特点包括：复制效率高，用量远远低于常规DNA疫苗；可同时诱导抗体应答和CTL应答；安全性好，RNA复制子在胞浆内复制，避免了核的参与，不存在整合进宿主基因组的可能性；RNA复制子导致转染细胞的溶解，避免了有自主复制能力的病毒的产生；复制子系统能自主复制，可针对多种病原进行连续免疫，而不受己有载体病毒抗体的干扰。

6冷适应流感弱毒疫苗

用野毒株感染鸡胚在较低温度下（25～30℃）培养，连续传代后可较快的使病毒的致病力减弱，从而获得冷适应流感弱毒病毒供体。通过在表达靶HA和NA的野生型病毒和病毒供体如A/Ann Arbor/6/60（H2N2）之间的基因重排可以获得减毒的冷适应性病毒株，病毒的这些特征与多基因的突变有关。滴鼻免疫减毒的冷适应性的流感活疫苗，能引起全身和局部粘膜的免疫反应，显示出保护效力[29]。这些活的减毒病毒显示出高水平的表型和基因稳定性，不会转变成接近的相关血清学阴性毒株。已经获得H5N1 和H9N2/Ann供体的重组冷适应性病毒。这些病毒不会对哺乳动物和鸡致病[30]。虽然现在流行的肌注禽流感疫苗能够有效地诱导相关病毒特异的血清血凝抑制IgG抗体，他们却不能刺激鼻腔产生分泌型IgA抗体[31]。因为分泌型IgA能与异源型的流感毒株交叉反应，活的减毒的禽流感疫苗能够广泛地提供针对抗原变异株的交叉保护，一旦新的流感毒株流行时它将非常有用[32，33]。美国对冷适应流感弱毒疫苗的研制己有30多年的历史，但由于担心其安全性，至今仍未被批准使用。俄罗斯是目前全球唯一人流感冷适应流感弱毒疫苗获准使用的国家，该疫苗己在数亿儿童中使用，证实能提供良好的保护，并无不良反应。到目前为止，无论俄罗斯还是全球，没有流感病毒扩散的迹象[34，35]，但活的AIV疫苗病毒仍有与人类共感染毒株发生基因重组，或毒力返强，造成新的流感毒株出现的可能，对其大面积的推广使用，还需在生物安全性方面加以时间上的验证。

7复制缺陷型流感病毒疫苗

用反向遗传系统可获得减毒的AIV，在流感流行时对疫苗的供给可能会起很关键的作用。病毒的HA和NA基因被克隆并插入到质粒中，通过去除HA的多个碱性氨基酸裂解位点序列使其减毒，插入了HA和NA的质粒与携带A/PR8/34病毒内部基因的质粒共转染细胞系产生相应的非致病性疫苗株。采用该方法产生的疫苗不仅能产生保护性抗体，而且能诱导很强的细胞免疫，是另一个很有发展前途的活疫苗。此疫苗能够在几个星期内获得，从而能应付紧急流感大流行事件来临时疫苗的需求。Watanable等[36]利用反向遗传学从cDNA获得NS2蛋白缺失的病毒粒子，用其感染细胞时，能在细胞内表达病毒蛋白但不能形成有感染力的病毒粒子，用此方法制成的疫苗能保护离最后1次免疫3个月后的老鼠接受10或100 LD50的攻击（9只老鼠存活8只）。其它获得复制缺陷型流感病毒疫苗的途径是使M2基因缺失[37]。此缺失疫苗在组织培养物中生长良好，但在老鼠体内有限生长，因此是一潜在的活疫苗候选。虽然重组减毒的H5病毒在小鼠中只具有限的神经毒力，但其符合理想模式的疫苗设计特点――不会致死鸡胚、减弱的毒力、对模型动物具有易感性，已经开始运用于生产，不过在疫苗生产技术被采用之前仍有一些规章，安全性以及合法性问题需要考虑和克服。在生产人用疫苗时用于转染的哺乳动物细胞系（如vero细胞）的质量必须符合标准。用反向遗传系统产生的病毒可能被认为是“基因改良的有机体”，因此各个国家强加了一些地方和民众的安全性法则限制其研究和发展，而且高科技的反向遗传技术的使用权被保留，需要经过许可才能采用此方法生产商业化疫苗。

8表位疫苗

根据病毒的抗原表位来研制表位疫苗，尤其是为易变异的病毒疫苗的研制提供了方向。Levi等[38]将流感病毒的3个表位：Ｂ细胞表位HA91-108、CTL表位NP147-158、Th细胞表位NP55-69分别插入沙门氏菌的鞭毛蛋白基因中构建了3个真核表达质粒，鼻腔免疫小鼠。3种质粒混合免疫组可以诱导长期的免疫应答，并且可以完全抵抗病毒的致死性攻击。Thomson等[39]以1个真核表达质粒投递了10个CTL抗原表位，其中包括NP基因的3个表位：NP50-

58、NP147-155、NP366-374和NS1基因的1个表位NS1152-160，免疫鼠后通过Cr51释放试验，检测这些表位显示该质粒诱导了强的CTL应答，并且可以清除感染的病毒。

表位疫苗不仅提供了一种更有效地利用病原体中各个抗原成分的方法，而且对于流感病毒这种高度变异的病毒来说，一方面可以通过选择具有交叉保护性的表位来达到预防多个毒株的目的，另一方面可以通过对流行毒株的监测来及时合成表位，实现对变异毒株的控制。

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9转基因植物疫苗

宋长征等利用转基因马铃薯表达AIV HA蛋白[40]。利用电击穿孔转化法，将含有AIV HA基因的表达质粒pHAO（其中含35S启动子和来源于大豆植物存储蛋白基因的vspB终止末端，另有抗性标记）导入农杆菌EHA105，转化细菌再感染马铃薯的幼茎外植体，转化植株再生和温室栽培。Westernblot分析表明，83%的转化植株在其马铃薯块茎组织中表达了重组HA，表达量占总蛋白量的0.03%～0.04%。结果显示，用转基因马铃薯生产口服AIV疫苗是有前景的。

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第四篇：一起典型鸡新城疫成功治疗的心得体会

成功治愈一例典型鸡新城疫病的心得体会

刘朝华

随着众多惠农支农政策的实施和深入人心，激起了我市广大农民养殖的新高潮，各乡镇养殖业蓬勃发展。与此同时，动物疾病的发生发展与过去相比变得更复杂和频繁，市畜牧局积极开展技术推广服务，多次深入各养殖场所，进行技术指导和疫病诊断治疗，有效地保障了广大养殖户的经济效益，现将最近成功治疗一例鸡典型新城疫病整理出来以供广大同仁交流和探讨。

2009年6月23日，天气炎热，正当午时，公司正准备下班，***镇***村农庄老板***心急火燎地来市局求助技术人员救治其发病鸡群，刘朝华、金先鹏同志立即顶着午时炎热，赶往家升农庄。该农庄建有两栋鸡场，分建在两个不同高度，到高处的鸡舍必须途经低处的鸡舍，发病鸡在高处鸡舍，为1年期日龄土鸡，约520余只，发病6天，死亡约200余只，按照目前他们对外销售的土鸡价格每只50元计算，初步估计已损失10000余元；低处的鸡舍存笼约1000只，为30日龄的土鸡，尚未发病，从疫病流行防控角度讲，该鸡群属于高危发病鸡群。所有的鸡都已免疫新支120疫苗和法氏囊疫苗，我们进入高处的发病鸡舍，大部分鸡已放入山林，地面有30多只死鸡，采食量不及平时正常量的1/3，地面上鸡只排出的黄绿色水样粪便清晰可见，病鸡精神萎靡，有甩鼻症状，近前接近，可听见“咯咯”声音，体温44度，羽毛松乱，闭目缩颈呆立，有个别病鸡有扭头神经症状，我们现

场解剖了一只死鸡和一只严重病鸡，见十二指肠卵黄蒂处淋巴滤泡及盲肠扁桃体肿大出血，形成枣核样黄色溃疡，肠道粘连严重；死鸡腺胃乳头顶端有明显肿胀出血，全身黏膜、浆膜出血，口腔鼻腔喉气管有大量混浊液，肌胃角质膜有明显小米粒大出血点，我们用手机对死鸡的腺胃乳头进行拍照，留取图谱。（见手机照片）卵泡破裂膜腔内有蛋黄液。

结合以上临床症状与解剖情况，我们初步认为是免疫失败，诊断为这是一起非常典型的新城疫疫病例，针对鸡场前一段使用常规治疗不明显，我们提出采取强化免疫方法进行治疗，同时辅以中成药，综合施治的方法。

具体为：

1、对发病鸡群，按每羽5倍量紧急注射新城疫1系疫苗强化免疫，在注射前、中、后，用“参芪多”葡萄糖粉进行饮水口服。

2、对高危未发病仔鸡群，按3倍量用新城疫2系疫苗点眼强化免疫，同样在免疫前、中、后，用“参芪多”葡萄糖粉进行饮水口服。

3、对场地及周边地区进行清扫消毒，掩埋病死鸡。五天后了解家升农庄老板获知，注射疫苗和使用参芪多后第一天死了41只、第二天死亡8只、第三天死亡6只第四天开始停止死亡，该场1200只土鸡﹙大小两批﹚五天后都已治愈，精神正常，采食正常，为该场挽回经济损失三万余元。

经过这次典型鸡新城疫的成功临床诊断治疗，笔者深深体会

到：

1、新城疫乃然是当前养鸡的重要杀手，尽管经过了政府部门几十年的重点计划免疫防控，但它的破坏性仍不可小觑，应当重点预防和控制。

2、用新城疫的多联苗进行免疫时，为保证新城疫免疫效果，最好再用新城疫单联苗加强巩固一次。

3、新城疫的发病治疗，用西药治疗极其有限，用超剂量新城疫单联苗强化免疫效果显著。

4、用中成药“参芪多”进行新城疫辅助治疗效果很好，这不光在家升农庄，在金湖下方村徐新强鸡场，在金湖黄坪村黄炳学鸡场等多个养殖场的使用效果都非常显著。该药主要由黄芩、参芪多糖、太子参提取物、牛磺酸、干扰素诱导剂等成份构成，可以激活机体免疫中枢，诱导体细胞产生干扰素、T淋巴细胞、B淋巴细胞等多种抗原的应答反应，促进抗体的迅速生成，可有效干扰病毒合成和繁殖，并大大提高机体细胞免疫水平及体液免疫水平，提高巨噬细胞的数量和吞噬功能，迅速吞噬病毒、细菌和炎性细胞。

面对蓬勃发展的畜牧生产形势，我们畜牧工作者必须更新理念，提高技术服务水平，积极营造多方共赢的有偿服务机制，让畜牧服务机构在畜牧业的发展中不断受益。

2009年7月14日

第五篇：新城疫病毒

新城疫病毒 新城疫病毒（NDV）属于副黏病毒科，腮腺炎病毒属。DNV对外界环境的抵抗力较强，对乙醚、氯仿敏感，其所有毒株都能凝集多种禽类和哺乳类动物的红细胞。本病的传播途径主要是呼吸道和消化道。一年四季发生，各种日龄鸡都能感染发病，大多3～5天死亡；在免疫鸡群中可散在发生非典型新城疫。新城疫病毒治疗，肌肉注射香港奥邦禽优乐，治疗量：0.5ml/公斤，即可治愈。