细胞工程：现代生物技术的重要组成部分，是在细胞水平研究、开发、利用各类细胞的一门技术。
灭菌：是彻底杀菌，即用物理或化学等方法，杀死物体上的一切微生物以及它们的芽孢或孢子，使物体成为无菌状态。
消毒：是非彻底杀菌，即用物理或化学等方法，杀死物体上的有害微生物，但不能杀死全部芽孢。
防腐：是抑菌过程，即用化学或物理方法，防止或抑制微生物的生长繁殖。
动物细胞机械分离法：通过适当的物理学处理手段，将动物组织解离成单个细胞的方法。
动物细胞消化分离法：通过酶或螯合剂把已经切成较小体积的组织进一步分散，使之成为小细胞团或单个细胞状态的方法。
单层细胞培养法：将解离得到的细胞，用培养液制成所需浓度后，接种培养的方法。
悬浮细胞培养法：指细胞悬浮在培养液中生长增殖的培养方法。
动物细胞传代培养：将原代培养细胞分离、稀释，并接种到新培养器内，继续扩大培养的过程。
14、细胞系：原代培养物经首次传代成功后的细胞群体，由原代培养物中的各种细胞组成。
15、有限细胞系：细胞系不能继续传代，或传代数有限，大多数二倍体细胞为有限细胞系。
16、连续细胞系：细胞系在体外培养时表现出具有无限传代的潜力，也称为无限细胞系。
17、细胞株：通过选择或克隆化培养，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的细胞群。
27、动物细胞培养用微载体：指直径在 50 微米到数百微米不等、适合动物细胞贴附和生长的微珠。
1、细胞重组：采用一定方法从活细胞中分离出细胞器及其组分，然后在体外将不同细胞来源的细胞器进行重组，并组装成有生物活性的细胞或细胞器的一门技术。
2、胞质体：除去细胞核后，由膜包裹的无核细胞。
3、核体：是与细胞质分离得到的细胞核，带有少量细胞质，并围有质膜。
4、微细胞：由一条或几条染色体、少量细胞质和完整质膜包裹而成。
8、核移植技术：利用显微操作等方法，将一个细胞的核移植到另一个细胞中，或将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换。
3、干细胞：来自胚胎、胎儿或成体内，具有无限自我更新和增殖能力以及不同程度分化潜能的一类细胞。
4、胚胎干细胞：由哺乳动物早期胚胎分离克隆出来的未分化细胞，能分化为机体的各种组织细胞，并具有形成嵌合体的能力。
5、诱导性多潜能干细胞：由已分化的体细胞诱导而来，具有类似胚胎干细胞的高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞。（181）
6、全能干细胞：可以发育成一个完整个体的干细胞，一般指哺乳动物的受精卵和 8 个细胞期以前的卵裂球。
7、亚全能干细胞：失去了发育成完整个体的能力，但仍具有形成内、中、外三个胚层来源的所有细胞类型潜能的干细胞。
13、阐述动物细胞工程的应用前景。
（1）生物制品生产
①动物细胞大规模培养技术的建立和发展，大大促进了生物活性物质、药品和疫苗的生产。
②基因重组技术及杂交廇技术的建立和发展，促进了利用动物细胞表达高质量、高价值蛋白。
③单克隆抗体在多种疾病的诊断和治疗中得到广泛应用。
（2）动物克隆
①采用动物胚胎细胞和体细胞核移植技术，成功克隆多种动物。
②动物克隆技术开发了动物繁殖等领域新途径。
③治疗性克隆也得到广泛应用。
（3）干细胞技术
①干细胞体外培养将造福人类。
②细胞治疗和组织工程。
③药物筛选。
④成体干细胞可塑性的发现。
13、简述血清对动物细胞培养的作用。
①丰富的营养物质；②促进细胞生长繁殖；③细胞贴附；④细胞保护；⑤培养基缓冲
30、阐述无血清培养基的主要种类和补充成分。
（1）无血清培养基的主要种类
①一般意义上的无血清培养基
②无动物来源培养基
③无动物蛋白培养基
④化学组分限定培养基
（2）无血清培养基的补充成分。①激素和生长因子
②结合蛋白
③贴壁成分
④微量元素和低分子量营养成分
⑤酶抑制剂
12、简述动物悬浮细胞培养法的一般步骤。
①分散细胞团块；②计数细胞；③加入培养液；④接种细胞；⑤培养细胞
23、简述适合动物细胞培养的生物反应器应具备的条件。
①混合系统设计良好；②反应器内空间利用率高；③能严格保证无菌环境；④能精确控制；
⑤便于观察和采样
28、简述动物细胞微载体培养系统的特点。
①细胞产率高；②易于控制；③易于分离、收获细胞；④反应器改进容易；⑤适合多种贴壁
细胞培养
29、简述动物细胞微载体培养系统的缺点。
①易受剪切损伤；②价格贵；③需要较高的接种细胞量；④老化后易脱落；⑤需要加入血清
45、阐述微载体动物细胞培养的主要步骤。
①微载体的选择。主要根据所用细胞种类和培养目的来进行。
②微载体浸泡。使微载体水化膨胀。
③微载体消毒。常用高压蒸汽灭菌。
④接种。应该使用对数生长期、分散的单细胞。
⑤培养。在培养器内加入培养液、微小球和细胞。
⑥观察。培养液开始呈酸性时，需要换液，观察细胞生长情况。
⑦细胞计数。采用消化法后计数。
⑧传代培养。消化化后进行传代培养。
⑨分离细胞与收获。通常采用酶消化法，分离细胞一般采用离心法.46、阐述大规模动物细胞培养技术的应用和存在的问题。
（1）应用。①主要生产有重要价值的产品，已经成为生物医药高技术产业的重要部分。
②主要产品有疫苗、干扰素、单克隆抗体、基因重组产品等。
（2）存在的问题
①细胞密度和产物浓度低。
②长时间培养时，细胞分泌产物能力易丢失。
③长时间培养时，产物活性易降低。
④培养成本高。
⑤对细胞代谢和生长特性的基础研究比较欠缺。
⑥在线监测技术不完善。
3、简述动物细胞化学诱导融合优势。
①来源方便；②使用简便；③不需要特殊仪器设备；④融合效率高
6、简述动物细胞融合后融合细胞的筛选方法。
①基于酶缺陷型细胞和药物抗性的杂交筛选；
②基于营养缺陷型细胞所建立的杂交筛选；
③由温度敏感突变型细胞所建立的杂交筛选；
④应用荧光激活细胞分选仪进杂交细胞筛选
7、简述单克隆抗体的技术流程。
①亲本选择；②细胞融合；③杂交细胞的筛选；④克隆培养；⑤单克隆抗体生产
8、简述单克隆抗体制备过程中细胞融合的步骤。
①脾细胞和鼠骨髓瘤细胞的混合；②逐滴加入 PEG；③终止 PEG 作用；④用 HAT 悬浮细胞；
⑤分装融合细胞
11、简述影响胞质体制备的因素
①细胞密度；②细胞松弛素剂量；③离心温度；④离心速度；⑤离心时间
15、简述核移植的一般操作程序。
①核受体和核供体的制备；②核移植；③重组胚的活化；④培养；⑤胚胎移植
16、简述核供体细胞对核移植效率的影响因素。
①细胞周期；②细胞类型；③细胞分化程度；④传代次数；⑤供体动物年龄
23、简述动物克隆技术中存在的问题。
①成功率低②克隆动物的遗传问题；③可应用性；④技术不成熟⑤基础理论研究还很薄弱
24、阐述核移植的一般操作程序。
①核受体细胞的制备。大多采用去核的 MⅡ 期卵母细胞为受体。
②核供体细胞的制备。核供体细胞应该是完整的二倍体、基因组，能正常发育。
③细胞核移植。常用胞质内注射和透明带下注射两种方法。
④重组胚的活化。一般重组胚电融合时所施加的电脉冲在诱导融合时，具有激活重组胚的作用。
⑤重组胚的培养。有体内和体外培养两种方式。
⑥重组胚的胚胎移植。胚胎移植后的妊娠率和产仔率是判断移植效率的最终标准。
⑦核移植后代的鉴定。一般从形态、性别上鉴定，还可采用分子生物学技术鉴定。
25、阐述动物克隆技术的意义及存在的问题。
（1）动克隆技术的意义
①促进生物学基础问题的研究 ②加速良种繁育，保护濒危动物 ③培育转基因克隆动物，生产生物药物 ④与基因和干细胞技术结合，开展治疗性克隆
（2）动物克隆技术中存在的问题
①成功率低②克隆动物的遗传问题③可应用性④技术不成熟⑤基础理论研究还很薄弱
18、简述胚胎干细胞的形态学特征。
①细胞体积小；②核大；③核质比例高；④核仁明显；⑤体外培养呈集落状生长
19、简述用于胚胎干细胞鉴定的分子特征。
①碱性磷酸酶（AKP）；②转录因子 Oct-4；③端粒酶；④阶段性特异性胚胎细胞表面抗原（SSEA）
20、简述动物细胞分离纯化的常用技术。
①利用细胞体积；②利用细胞密度；③选择性细胞凝集；④基于不同黏附特性；⑤利用细胞
表面标志
简述诱导多潜能干细胞（iPS）的应用前景。
①细胞核重编程机制的研究；②临床医学研究；③新药研发及筛选；④其他物种 iPS 细胞的建立
28、阐述干细胞的概念、干细胞的分类和生物学特点。
（1）干细胞是指来自胚胎、胎儿或成体内，具有无限自我更新和增殖能力以及不同程度分
化潜能的一类细胞。
（2）干细胞的分类
①根据来源分为胚胎干细胞、成体干细胞和诱导性多潜能干细胞。
②根据分化潜能分为全能干细胞、亚全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞
（3）干细胞的生物学特点有：
①自我更新能力。指分裂后子代干细胞能保持与自己相同的基因型与表型，维持未分化状
态并具有相同的分化潜能。
②分化能力。指分裂后转变为形态、机能、化学构成上与自己相异的子代细胞。
③增殖能力。指通过细胞有丝分裂实现细胞数量的扩增。
29、阐述胚胎干细胞的应用前景和存在问题。
胚胎干细胞：由哺乳动物早期胚胎分离克隆出来的未分化细胞，能分化为机体的各种组织细
胞，并具有形成嵌合体的能力。
（1）胚胎干细胞的应用前景
①探讨胚胎发育的调控机制。②临床应用。可用于临床细胞、组织和器官的修复和移植治疗，建立动物模型等。③建立药物筛选和研究平台 ④动物克隆及改良
（2）存在的问题
①维持胚胎干细胞未分化状态的机制及定向诱导分化的调控机制尚不清楚。②临床治疗存在安全性问题 ③器官克隆与移植仍有待于技术上的突破。④面临伦理、宗教和社会学问题
30、阐述什么是组织工程及理想种子细胞的标准。
组织工程：是将细胞工程和材料科学相结合，利用具有较好生物相容性的材料，按缺损组织
或器官的结构要求制成模型或支架放在体外培养系统中，使细胞沿着模型或支架不断生长扩
增，构建成新的组织、器官。
理想种子细胞的标准主要包括：
①来源广，数量充足 ②容易培养，黏附力大，增殖力强，可大量扩增 ③遗传背景稳定，具备特定的生物学功能 ④纯度高，具有特定功能的细胞占主导 ⑤免疫排斥反应极小或无免疫排斥反应 ⑥分子结构和功能与再生组织的正常细胞相似⑦临床上易取得，供体损伤小，具有实用性 ⑧植入体内能高质量地修复组织并能保持良好的远期效果
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