实验讲稿

第一篇：实验讲稿

总论、链霉素毒性、肝脏在药物代谢中的作用

一、药理学实验课的目的和要求：

（一）目的：

（1）

使学生掌握进行药理学实验的基本方法，了解获得药理学知识的科学途径

（2）

验证药理学中的重要基本理论，更牢固地掌握药理学的基本概念。

（3）

培养对科学工作的严肃的态度、严格的要求、严密的工作方法和实事求是的作风，并初步具备客观地对事物进行观察、比较、分析、综合和解决问题的能力。

（二）要求：

（1）

实验前做好预习工作，结合实验内容，复习有关药理学、生理学和生物化学等方面的理论知识，并领会实验设计的原理。

（2）

实验时认真操作，仔细观察，并做好实验记录。

（3）

实验后整理实验结果，并进行分析思考，认真书写实验报告，并做好实验室的清洁卫生，关好水、电。

二、实验设计的基本原则

（1）

重复性

（2）对照性（3）随机性

三、药理学实验的一般方法和技术

（一）实验动物选择的原则和方法

1、首先要根据实验的目的选择实验动物

2、选用来源清楚、遗传背景明确的实验动物

3、选用容易获得、价格便宜、易于饲养与管理的实验动物

4、必须注意实验动物种类、品系的质量及健康状况是否良好

5、选用人畜共患疾病的实验物物和传统应用的实验动物

（二）实验动物的选择：

常用的实验动物有蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猫、狗。常根据不同的实验目的和要求选用不同的实验动物，所选用的动物必须能较好地反映试验药物的选择性作用并符合节约的原则。

蛙和蟾蜍：离体心肌，观察药物对心脏的作用。坐骨神经和腓肠肌，观察药物对周围神经肌肉或横纹肌的作用。

小白鼠：

1.小鼠属于脊椎动物门，哺乳纲，啮齿目，鼠科，小鼠属动物。2.成熟早，繁殖力强。3.体形小，易于饲养管理。4.性情温顺，胆小怕惊。5.对外来刺激极为敏感。6.便于提供同胎和不同品系动物。7.喜居于光线较暗的安静环境，习于昼伏夜动，喜欢啃咬。8.体小娇嫩，不耐饥饿，不耐冷热，对环境的适应性差。9.成年雌鼠在动情周期不同阶段阴道粘膜可发生典型变化。适用于需要大量动物的实验，如药物筛选，半数致死量，药物效价。大白鼠：与小白鼠相似，一些在小白鼠身上不便进行的实验可用大白鼠。

豚鼠：易致敏，常用于平喘药和抗组胺药的实验。

家兔：观察药物对心脏、呼吸的影响及农药中毒和解救实验。

猫：血压稳定，常用于血压实验。

狗：观察药物对心脏泵功能和血流动力学的影响，心肌细胞电生理研究、降压及抗休克药的研究

（三）常用的药物给药途径

1、经口给药（灌胃）

2、皮下注射

3、肌肉注射

4、腹腔注射

5、静脉注射

（四）实验动物的捉拿和给药方法

小白鼠：

捉拿法：右手提起尾部，放在鼠笼或其他糊糙面上，向后上方轻拉，迅速用左手食指和拇指捏住小鼠颈背部皮肤并以小指和手掌尺侧夹其尾根部固定于手中。给药法：

（1）

灌胃法：左手捉拿小鼠后，使口朝上，颈部轻轻拉直，右手持吸有药液的注射器，将灌胃针头从口角插入口腔，沿上腭向食道轻轻推进，如遇阻力应抽出灌胃针管重插。当推进约2－3公分时，动物安静，呼吸无异常，即可将药液缓缓推入。0.1-0.3ml/10g。

（2）

腹腔注射法：左手捉拿小鼠后，使腹部朝上。右手持盛有药液的注射器，自左腹下部插入，针头与腹壁的角度呈45度。针头进入腹腔时可有抵抗力消失感。先回抽一下无气泡或血后，轻轻推入药液。0.1-0.2ml/10g。

（3）

皮下注射法：左手捉拿小鼠固定头部，然后用左手无名指及小指将小鼠左后肢及背部压在掌面，右手持注射器，自头侧背部插入皮肤，注入药液。拔针时，轻捏针刺部位片刻，以防药液溢出。注射量0.05－0.25ml/10g。

（4）

肌肉注射法：将小鼠捉住，固定左后肢，将注射器插入大腿肌肉，在注射前，应回抽针栓，如无回血，则可给药。注射量一般为0.2ml/次。

（5）

尾静脉注射法：将小鼠置入特别鼠筒中，尾巴露出。用酒精棉球擦拭使尾血管扩张。以无名指和小指夹持尾尖，用中指托起尾巴，使之固定。选其一侧尾静脉穿刺。如针头在血管内，推注药液无阻力。否则皮肤隆起发白，阻力增大，此时应退回针头重新穿刺。注射量0.05-0.2ml/10g。家兔：

捉拿法：以右手抓住头颈部皮肤，左手托起臀部，使兔在实验者手中呈自然匐状即可。给药法：

（1）

腹腔注射法：同小鼠。

（2）

静脉注射法：一般采用耳缘静脉给药。先将家兔固定于兔箱内，拔去注射部位的兔毛，用酒精棉球涂擦耳缘静脉皮肤使血管扩张。以左手食指放在耳下将兔耳垫起，并以拇指按住耳尖部。右手持带有6号针头的注射器，尽量从血管远端刺入血管。注射时针头先刺入皮下，向前推进少许，然后刺入血管。针头刺入血管后再稍向前推进，轻轻推动针栓，若无阻力和局部皮肤发白隆起现象，即可注药。否则应将针头退出，再重新刺入血管。注射完毕，用棉球压住针眼，拔去针头。

（五）实验动物的取血方法

（1）

小白鼠、大白鼠的取血方法:

颈动静脉和股动静脉取血：将动物麻醉，暴露相应的血管，用注射器从血管中抽血或剪断血管，从血管外吸血。

心脏取血：动物仰卧位固定，用连接有4－5号针头的注射器在左侧第3－4肋间于心搏最强处穿刺，当针刺入心脏时，血液由心脏收缩的力量自动压入注射器中。也可开胸直接将注射器针刺入心脏抽取血液。

尾尖取血：即剪断尾尖，让其自行流血，依取血量的多少与次数处理方法不同。量需要较多时采用麻醉动物并辅以尾部按摩或加温浴。需多次采用时可分次剪尾。

眶动脉或眶静脉取血：先将动物倒挂压迫眼球，使眼球突出充血后，以止血钳迅速摘取眼球后，眼眶内很快流出血液，将血滴入预先加有抗凝剂的玻璃器皿内，直至不流为止。一般可取动物体重的4%－5%血液量。用毕动物死亡，只适于一次使用。

断头取血：用剪刀剪掉鼠头，立即将鼠颈向下，提取动物，并对准已准备好的盛血容器，则鼠血从颈部皮肤很快滴入容器内。

（2）

兔取血法：

心脏取血：在心搏最明显处取血。部位是胸骨左缘第3肋间隙旁约3mm处进针。

耳缘静脉取血：局部去毛，用酒精涂擦，使血管扩张，然后以粗大针头插入耳缘静脉取血。

颈动静脉和股动静脉取血：同在、小白鼠的方法。

（六）实验动物的处死方法

实验结束后，常须将动物处死，常用方法如下：

颈椎脱臼法：本法适用于小鼠，用手指压住小鼠的后头部，捏住鼠尾，用力向上牵拉，使之颈椎脱臼致死。

空气栓塞法：用注射器将空气急速注入静脉，可使动物死亡。心脏取血法：用粗针头一次大量抽取心脏血液，可到动物立即死亡。

大量放血法：处死狗时常用此法。操作用在股三角区横切约10cm长的切口，切断股动脉和股静脉。血液立刻喷出。此时可同时用自来水冲洗。动物可在3－5分钟死亡。其它方法：蛙类可断头处死，也可用探针经枕骨大孔破坏脑和脊髓处死动物。

四、处方

（一）处方的结构

处方包括下列几项：

1、病人的姓名、年龄、科别、处方日期、门诊或住院号

2、处方笺上常印有R的符号，它是拉丁文Recipe的缩写，意思是“请取”。

3、药名、剂型和份量：药名和份量应一起写，每药写一行。剂量和份量写在药名的右侧。药物的用量，固体以克（g）为单位，液体以毫升(ml)为单位。一般情况下，克(g)与毫升(ml)不必写出，其它单位，如：毫克(mg)、微克(μg)、国际单位则须注明。药量小于1单位时，在小数点前必须加零，整数后加小数点和零，以免出差错。

4、调配方法和用法：必要时必须写清调配方法。用法包括每次剂量、每日用药次数、给药途径与给药时间。

5、处方医生签名。

（二）处方的注意事项

1、处方必须认真、严肃。字迹要清楚，不得任意涂改。不得用铅笔书写。

2、药品名称一律使用经正式注册的药名或国际非专用药品名称，不可使用含义不清未经公认的药名缩写，以免造成误解或药名混淆。

3、用药方法的文字说明应准确明了。药量不应超过中国药典的极量。因特殊需要超过的，应加签医生姓名，或用“！”号示意。

4、急诊处方，须立即取药的应在处方上写“急”字。

5、处方开好，核对无误后，才可交与病人。

6、开写英文处方时，制剂名放于药名后，而拉丁文处方时，制剂名置于药名前，药名一般用第二格。

肝脏功能状态对药物作用的影响

1、目的：观察肝功能损害时戊巴比妥钠作用的影响。

2、原理：四氯化碳是一种肝脏毒物，其中毒动物常被作为中毒性肝炎的动物模型，用于观察肝脏功能状态对药物作用的影响。

3、材料：小鼠2只、鼠笼、天平、注射器、5%四氯化碳油溶液、0、25%戊巴比妥钠溶液。

4、方法与步骤：

在实验前48小时先取小鼠2只，皮下注射5%四氯化碳油溶液0.1ml/10g，造成肝脏损害。实验课中取注射过四氯化碳的小鼠和正常小鼠各1只，同样腹腔注射戊巴比妥钠50mg/kg（即0.25%的溶液0.2 ml/10g）。观察动物反应。记录各鼠的翻正反射开始消失时间和恢复时间。注射过四氯化碳的小鼠与正常小鼠的麻醉作用开始时间及麻醉持续时间有无显著差别。

5、结果

动物 甲鼠 乙鼠

给戊巴比妥时

间

麻醉开始时

间

麻醉恢复时

间

麻醉持续时

间

6、结论：肝损害鼠较正常鼠麻醉出现更早、持续时间更长。

7、实验结束后进行讨论，肝脏的功能状态对药物作用究竟产生什么样的影响？为什么？

链霉素的毒性及氯化钙的对抗作用

1、目的：观察链霉素对小白鼠的毒性反应及氯化钙的对抗作用。

2、器材：1ml注射器2副，鼠笼、天平、针头4号或5号。

3、药品：8%硫酸链霉素溶液，5%氯化钙溶液。

4、动物：小白鼠

5、方法：取小白鼠两只，称重，编号。观察小白鼠的正常活动情况，甲鼠皮下注射8%硫酸链霉素0.1 ml/10g，仔细观察给药后小鼠的反应（出现反应的时间与症状）；乙鼠先腹腔注射5%氯化钙溶液0.2 ml/10g，接着皮下注射8%的硫酸链霉素0.1 ml/10g，观察该鼠有哪些反应，并与甲鼠比较。

观察项目

鼠号

处理阶段

呼吸（次/分）

体位

四肢肌张力

甲

给药前

给链霉素后

乙

给药前

给氯化钙、链霉素

6、结论：

链霉素的急性毒性为神经肌肉接头阻滞作用，表现为小白鼠肌肉松驰、翻正反射消失、可用CaCL2解救。

7、讨论：

8、实验结束后进行讨论。

剂型对药物吸收作用的影响

目的：比较不同剂型乌拉坦液对小鼠作用之差别，认识胶浆剂的延缓药物扩散作用。

材料：小鼠2只、8%乌拉坦水溶液、8%乌拉担胶浆液（含2.5%羧甲基纤维素）

方法与步聚：性别相同、体重接近的小鼠，称体重，观察小鼠的一般情况，再分别给药。

1号：皮下注射8%乌拉坦水溶液0.2ml/10g。2号：皮下注射8%乌拉坦胶浆液0.2ml/10g。

观察小鼠对所注射药物的反应。记录小鼠出现步态蹒跚，俯伏不动或卧倒，翻正反射消失等反应的时间。结果：

组别

反应性质

起效时间

维持时间 8%乌拉坦水溶液 8%乌拉坦胶浆液

传出神经系统药物对小鼠胃肠蠕动的影响

目的：观察新斯的明、阿托品对小鼠胃肠平滑肌的作用。材料：小鼠3只、量尺、0.05%硫酸阿托品溶液、0.002%新斯的明溶液、碳素墨水

方法与步聚：小鼠3只实验前禁食12小时，称重 1号：腹腔注射0.05%硫酸阿托品溶液0.1mg/10g 2号：腹腔注射0.002%新斯的明溶液0.1mg/10g 3号：腹腔注射生理盐水0.1mg/10g

给药10分钟后，用碳素墨水0.2ml灌胃。15分钟后，将动物处死，打开腹腔，轻轻剥离肠系膜并分离出小肠。从幽门和回盲部剪断小肠，测量小肠全长和碳末运行距离，计算碳末在小肠的运行率。综合全班的结果，计算平均值。（标明自己小组的结果。）碳末运行率=幽门至远端碳末处距离（cm）/小肠全长（cm）×100% 结果

组别

小肠长度（cm）

碳末运行距离（cm）碳末运行率%

0.05%阿托品溶液

0.002%新斯的明溶液 生理盐水

抗心绞痛药的抗心肌缺氧作用

目的：观察抗心绞痛药的抗心肌缺氧作用。

原理：由于心肌耗氧量大，相对于其它器官组织更易缺氧，应用异丙肾上腺素后心肌耗氧量更为增加，故药物提高动物全身抗缺氧能力可视为药物的抗心肌缺氧作用。

材料：小鼠4只、磨口广口瓶（250ml或125ml）、0.1%普萘洛尔溶液、0.1%异丙肾上腺素溶液、0.005%硝酸甘油溶液

方法：将钠石灰10g（用小纱布包扎）放在广口瓶的底层，用以吸收小鼠呼出二氧化碳和水分，并在瓶塞磨口处涂抹适量的凡士林，以便密闭，选用同性别、体重相近的小鼠3只，称重。1号：腹腔注射生理盐水0.2ml/10g

2号：腹腔注射0.005%硝酸甘油溶液0.1ml/10g 3号：腹腔注射0.1%普萘洛尔溶液0.2ml/10g

15分钟后，再对各小鼠皮下注射0.1%异丙肾上腺素溶液0.2ml/10g，再过15分钟，将小鼠放入磨口广口瓶内，每瓶放1只，放入后立即将瓶密闭，并记录时间，计算出各小鼠的存活时间，统计各组的实验结果，分析药物作用。注意事项：

1.实验前先用水测广口瓶的容量，选用容量相等的广口瓶。2.动物的性别，体重及室温对实验影响较大，可雌雄各半，体重相差不得超过2g。

异戊巴比妥钠的抗惊厥作用

[目的]观察异戊巴比妥钠对药物性惊厥的对抗作用。[材料]5%尼可刹米溶液、0.5%异戊巴比妥钠溶液、生理盐水、小鼠2只 [方法]

小鼠2只，称重

1号：腹腔注射生理盐水0.1ml/10g

2号：腹腔注射0.5%异戊巴比妥钠溶液0.1ml/10g

10分钟后，各注射5%尼可刹米溶液0.1ml/10g。观察各鼠有无惊厥（以后肢伸直为惊厥指标）及出现惊厥的速度和程度有何不同。结果：

组别

惊厥出现时间及程度 生理盐水

0.5%异戊巴比妥钠

全血水杨酸钠二室模型药动学参数测定

目的：用比色法测定水杨酸钠血浓度，并利用测得的血药浓度数据计算二室模型的药动学参数。

器材：试管（10ml×9），离心管（10ml×11），刻度吸管，注射器，细塑料管，兔气管插管，动脉夹，小玻棒，试管架，玻璃蜡笔，移液吸管，普通剪刀及手术刀，弯血管钳，线，天平，分光光度计，离心机，电脑。

药品：10%及0.04%水杨酸钠溶液，三氯化铁和三氯醋酸混合液，3%戊巴比妥钠溶液，0.5%肝素，生理盐水，0.2%肝素生理盐水。

动物：兔

方法：1.术前准备：取离心管11支，编0－10号，各加入三氯化铁和三氯醋酸混合液2ml，9号管再加入0.04%水杨酸钠标准溶液0.6ml，10号管再加蒸馏水0.6ml。

2.称重，麻醉（3%戊巴比妥钠静脉注射，1ml/kg或25%乌拉坦腹腔麻醉，1ml/kg），固定，分离左侧颈总动脉，在耳缘静脉注射1%肝素生理盐水（0.5ml/kg）后再做动脉插管供采血用。

3.用干燥注射器从颈总动脉取血0.6ml加入0号管。

4.从已分离出的左颈总动脉对侧的耳缘静脉注射10%水杨酸钠溶液2ml/kg（弹丸式注射）在给药完毕后的第1、3、5、10、20、50、80和110分钟从颈总动脉分别取血0.6ml，依次加入第1－8号管中，振荡。每次采血后洗净注射器，用肝素生理盐水湿润备用。

5.用小玻棒搅拌0－8号管各1分钟，分别加入蒸馏水5ml再搅拌1分钟，3000转/分，离心10分钟，移液管取上清液6ml备用，9、10号管各加蒸馏水5ml，摇匀备用。

6.在分光光度计上，以波长510nm，1cm光径比色皿，10号管调零，测0－9号管光密度d0-d10。

7.将所得数据依次输入电脑，可得相应二室模型的药动学参数及曲线。

注意事项：

1、10%水杨酸钠溶液注射要快，准确（使Vmax=0）。

2、每次取血前放掉一些血，采血准确及时，采血后应洗净注射器，用肝素生理盐水湿润备用。

3、搅拌顺序应从低浓度向高浓度。

扭体法和药物剂量、给药途径对药物作用的影响及录像

一、扭体法：

1、目的：观察镇痛药的镇痛作用并联系其临床应用。

2、动物：小白鼠，同性别，健康鼠。

3、器材：烧杯、镊子、天平、1ml注射器、鼠笼

4、药品：0.2%哌替啶生理盐水溶液、生理盐水、2%苦味酸、0.6%冰醋酸溶液。

5、方法和步骤：取体重相近同性别小鼠2只，分别称重，标记，分成2组。腹腔注射给药，甲组给生理盐水0.1ml/10g，乙组给哌替啶20mg/kg(0.2%，0.1ml/10g)，20分钟或30分钟后，每只鼠腹腔注射0.5%冰醋酸溶液0.1ml/10g，观察15分钟内小鼠是否出现扭体反应（痛苦症状，表现为伸展后肢，收缩腹部、躯体扭曲、使腹肌间歇性地收缩等症状）并记录10分钟或15分钟内出现扭体反应次数，综合全实验室结果，求甲、乙二组各鼠10或15分钟内出现的平均扭体反应次数，并计算药物镇痛的百分率。

甲组平均扭体反应次数－用药组平均扭体反应次数

药物镇痛百分率＝

×100%

甲组平均扭体反应次数

组别

鼠别

药物及剂量

15分钟内平均扭

镇痛百分率

体反应次数

甲

乙

二、给药途径对药物作用的影响

1、目的：观察以不同给药途径给予同剂量的尼可刹米时，所引起药理作用的差别。

2、材料：小鼠4只、鼠笼、天平、注射器、小鼠灌胃针头、注射针头、0.25%硫喷妥钠溶液。

3、方法与步骤：取性别相同、体重相近的小鼠4只，以1、2、3、4编号，分别称重，观察各鼠的一般情况，依次给药。1号鼠 以灌胃法给予0.25%硫喷妥钠溶液(0.2ml/10g)。2号鼠 以皮下注射法给予0.25%硫喷妥钠溶液(0.1ml/10g)。3号鼠 以腹腔注射法给予0.25%硫喷妥钠溶液(0.2ml/10g)。

4号鼠 4号鼠 腹腔注射0.025 %氯丙嗪0.1 ml/10g，10分钟后腹腔注射硫贲妥钠0.2mg/10g(0.25%溶液0.2ml/10g)

每次给药后立即记下当时时间，密切观察小鼠的反应。动物首次出现惊厥时，也立即记下时间。从给药到首次出现惊厥的一段时间为药物作用的潜伏期。比较4只小白鼠结果的差别。

鼠号 性别

体重 硫喷妥钠剂量

给药途径 作用潜伏期最后结果

4、对实验结果进行讨论。

抗心律失常及血压实验

一、目的：

1、观察酚妥拉明、肾上腺素、心得安对血压的影响

2、观察酚妥拉明对肾上腺素的升压翻转作用

3、观察大剂量肾上腺素所到的心律失常及心得安的对抗作用。

4、观察中毒剂量强心苷所致心律失常及利多卡因的抗心律失常作用。

二、原理：略

三、步骤：

1、取一只家兔，称重，腹腔注射乌拉坦（20%乌拉坦5ml/kg）。麻醉后将兔仰卧固定于手术台上。

2、剪去兔颈部正中毛，切开正中颈部皮肤，分离左侧颈总动脉，耳缘静脉注射0.1%肝素1ml/kg。进行动脉插管，在其远心端用丝线结扎，近心端用动脉夹夹住，向心方向插与换能器相联的充满抗凝剂的塑料插管，丝线结扎固定。

3、记录正常血压变化，然后依次给药（每次给药后要注入少量生理盐水以冲洗管内残留药物，待血压等指标恢复到原水平或平稳后再给下一药物）观察血压变化

给药顺序：1/10000 肾上腺素0.1% ml/kg →1%酚妥拉明0.1% ml/kg →

1%酚妥拉明0.1% ml/kg ＋1/10000 肾上腺素0.1% ml/kg →0.1%普萘洛尔0.5ml/kg →0.1%普萘洛尔0.5ml/kg＋1/10000 肾上腺素0.1% ml/kg

4、在家兔的四肢皮下插入心电电极。(红—右前，蓝—左前，黑—右下)

5、观察心电图变化。

给药顺序：1/5000 肾上腺素1ml/kg →(窦律恢复5分钟后)0.1%普萘洛尔0.5ml/kg(记录1分钟后)→1/5000 肾上腺素1ml/kg6、观察强心苷对心脏毒性及利多卡因的抗心律失常作用：快速推注去乙酰毛花苷4~7支/只，一出现心律失常立即停止给药，并马上缓慢静推0.3%利多卡因2~3ml/只。

四、对实验结果进行讨论。

氯丙嗪对乙醚麻醉的影响

【目的】

观察氯丙嗪对中枢抑制剂乙醚麻醉的影响，了解乙醚吸入麻醉方法。【材料】

密闭玻璃麻醉箱（或玻璃罩）、秒表、注射器（2ml）.【药品】

0.5%氯丙嗪、麻醉乙醚、生理盐水。【实验动物】

200～300g的大鼠。【方法和步骤】

(1)体重相近之大鼠两只，观察一般生活状况后一只腹腔注射氯丙嗪5ml/100g；另一只作为对照给予相同容量的生理盐水腹腔注射。30min后观察一般活动状态并进行麻醉实验。

(2)两只大鼠分别放入两只等体积的密闭玻璃麻醉箱(或玻璃罩)内，观察和记录两只大鼠有关兴奋、兴奋期的持续时间和进入麻醉的时间。

【实验结果】

自行列表记录结果 【注意事项】

（1）

药液一定要注入腹腔，避免溢出。（2）

氯丙嗪和生理盐水注射器避免混用。

肾上腺素对普鲁卡因毒性的影响

【目的】观察肾上腺素对皮下注射普鲁卡因毒性的影响，了解血管收缩药对预防局麻药中毒的作用。

【器材】小白鼠、2%盐酸普鲁卡因注射液，含1：20000肾上腺素的2%盐酸普鲁卡因、注射器2付

【方法与步骤】取性别相同、体重相近的健康小白鼠2只，称重后分别标记。甲鼠皮下注射2%普鲁卡因0.2ml/10g，乙鼠皮下注射含肾上腺素之普鲁卡因0.2ml/10g。观察两鼠发生惊厥的潜伏期及死亡率（综合全班实验结果）。

口服与腹腔注射硫酸镁的作用比较

【目的】观察硫酸镁口服与注射给药的作用有何不同，掌握硫酸镁口服与注射给药对机体的作用。

【动物】小鼠2只。【药品】12%MgSO4。

【器材】大烧杯、天平、1ml注射器、小鼠灌胃器。

【方法】取小鼠2只，1只由腹腔注射12%MgSO4 0.1ml/10g（1.2g/kg），另一只灌胃给予同样剂量（1.2g/kg）的MgSO4。观察并记录动物出现的症状。

【注意事项】被灌胃给药的小鼠如果也出现抑制，甚至呼吸麻痹而死亡，系由技术操作失误，可能是将灌胃针头穿透食管或胃脏，使MgSO4进入胸腔或腹腔所致。应及时补作。

第二篇：实验专题讲稿

第一课时

同学们好，今天我们来复习实验专题。

实验是物理这门学科的基础，它几乎贯穿在初中所有章节的内容当中，研究近年来全国各地中考实验题的变化，我们发现，现在的中考实验题的考查重点：

1、基本仪器的使用

2、实验的原理、实验方法和操作过程

3、探究能力、分析能力和应用能力

初中物理课堂实验大体可以分成两类，一类是测量性实验，这类实验的主要目的是完成对物体的某一物理量的测量工作。如测量物体的运动速度、测物质的密度、测力的大小、测量物体的温度、测定值电阻的阻值、测灯泡的电阻、测灯泡的电功率等。另一类是探究性实验，其目的是通过实验来探寻某一方面的物理规律。如：探究杠杆的平衡条件、影响摩擦力大小的因素、液体内部压强的规律、二力平衡因条件、影响动能大小的因素、影响电阻大小的因素、欧姆定律、焦耳定律、电磁铁的磁性强弱影响因素、磁场对电流的作用等。这一讲我们重点来复习一下测量性实验。

测量性实验可以分为直接测量和间接测量。有些物理量可以通过我们已经学过的实验器材直接测量得到，如：长度测量、温度测量等。同学们复习时应重点把握测量工具的正确使用和读数方法、减小误差的方法。而有些物理量在初中阶段我们无法直接测量出来，必需通过其它量的测量再利用所学的物理知识计算得到我们所需要的这个物理量。这样的测量方法属于间接测量。主要的实验有：测量物体的运动速度、测量物质的密度、测导体的电阻、灯泡的电功率、滑轮组的机械效率等等。关于这类测量同学们应该抓住其中的重点：就是测量的原理。以上实验测量原理的共同点是，通过另两个相关量的测量再利用公式计算完成测量任务。

复习中我们除了要注重对实验原理的复习，同时还要重点复习实验的过程。尤其要注意实验中某些特殊器材的使用和操作中的细节。我们来看这道例题：

这道题综合考查了电路的连接、滑动变阻器的使用方法、滑动变阻器的作用以及滑片的移动会对电表示数造成什么样的影响等。整个实验中滑动变阻器起到了非常重要的作用，有它在，才使得我们的实验教程更科学，实验结果更准确。纵观初中的电学实验，我们发现很多电学实验中都要用到滑动变阻器，那它在不同的电路中又分别起到了什么作用呢？我们一起来复习一下，一共有四个电学实验都用到了滑动变阻器，它们分别是：探究电流与电压和电阻关系即欧姆定律的实验、测量定值电阻阻值的实验、测量灯泡电阻的实验和测灯泡电功率的实验。这四个实验中，滑动变阻器都有一个共同的作用就是“保护电路”。具体来讲就一是保护用电器不会被烧坏；二是保护电表的示数不能超过相应的量程。

欧姆定律的探究实验是从两个方面来进行的，当探究电流与电压的关系时，应该使用同一个电阻同时改变定值电阻两端的电压再看电压改变时电流会发生什么样的变化。当探究电流与电阻的关系时，应该更换不同阻值的电阻，同时控制定值电阻两端电压一定，再看电流会发生什么样的变化。最终综合得出结论。这两方面的探究都是用滑动变阻器来调节电压表的示数，但一次是为了改变它的示数，而另一次是为了控制它的示数不变，而且都是利用滑动变阻器实现多次实验从而找到普遍规律。在测量定值电阻阻值的实验中通过调节滑片同样可以改变待测电阻两端电压，这样做是为了多次测量取平均值，从而减小实验误差。而测灯泡电阻时，滑动变阻器可以改变灯泡两端电压，多次实验后我们发现每次测得的灯泡电阻间的差距比较大，从而发现灯泡电阻受温度的影响比较明显。而定值电阻则不同，它的阻值比较稳定，当电压改变时电阻几乎没有明显地变化，所以我们用多次测量取平均值的方式来减小测量误差，但测灯泡电阻时，由于电压的改变改变了灯泡的亮度，我们实验用的灯泡是白炽灯，它属于热光源，亮度改变本身就因为它的温度发生明显变化所造成的，所以这就导致它的电阻在电压不同时发生明显的变化，因而这个实验不能多次测量取平均值。而这就是我们在做这个实验时多次测量后发现的问题。在测灯泡电功率的实验中，同样当灯泡两端电压发生改变时，我们也发现灯泡的亮度发生了改变，同时通过计算也发现灯泡的实际功率也有明显的改变，从而发现灯泡的亮度是由实际功率决定的，实际功率越大，灯泡越亮。这个实验中也不能取平均值。

从以上所讲到的一系列问题我们应该注意到，滑动变阻器在不同的实验中的作用既有相同点，也有不同点，看似都是为了多次实验，但最终目的又各有不同。纵观初中所有的物理实验，也有很多实验也是要多次实验的，它们的目的有的是为了寻找普遍规律，有些是为了多次测量取平均值减小误差，还有的是为了多次实验彼此进行比较看能否有所发现。同学们在复习时也应该注意进行这方面的归纳和总结。同时，一些实验中的特殊器材为什么要用它，怎样用好它，使用时应该注意哪些问题，也应该成为同学们复习的重点。

好，下面请同学们完成以下几道习题。

同学们，我们下一讲再见！

第二讲

同学们好，上一讲我们重点复习的是测量性实验，这一讲我们来进行探究性实验的复习。这一类实验的目的是通过实验来探寻物理规律，并以此来学习探究物理问题的基本方法，培养同学们的科学的探究能力、对实验信息的处理分析能力和应用实验结论解决实际问题的能力。同学们复习时应该重点积累探究的基本方法，包括控制变量法、转换法、等效替代法、实验推理法等。同学们应该注意每一个实验各自使用了哪一种或哪几种实验方法，同时还应该注意每一种探究方法具体的操作要求、注意事项。

首先我们来看什么是控制变量法。物理学中在探究某一物理现象与多个因素（多变量）间的关系时，把多因素的问题变成多个单一因素问题分别探究，每一次只改变其中的某一个因素，同时控制其余几个因素不变，从而研究被改变的这个因素对事物的影响，分别研究之后再综合分析，这种探究方法叫控制变量法。这种方法也是近年来中考的热点，同时也是我们以后探究其它物理问题所常用的方法之一。这种方法在很多实验中都被用到，比如：探究液体蒸发的快慢与哪些因素有关、探究滑动摩擦力的大小与哪些因素有关、探究液体压强的大小与哪些因素有关等等。

第二种常用的探究方法是转换法。有些实验中我们发现，有些物理现象不容易观察，或有些物理量不便于直接测量出来，于是我们就用容易观察到的物质或现象，来显示不易观察到的物质和现象，或者用容易测量的物理量来显示不易测量的物理量之间的关系。这样的方法就叫转换法。

下面我们来看这道例题。本题的前两问考的就是控制变量法，当探究动能与速度的关系时就应该控制小球的质量不变而只改变小球滚到水平桌面的速度。同时在本实验中，小球到达水平桌面的速度是通过小球静止释放时的高度来控制的。所以，如果探究动能与物体质量的关系时，就要保持小球滚到水平面的速度相同，也就是小球释放的高度相同，而改变小球的质量。在这个实验中，小球的动能大小我们是没法测量，不便于直接比较的，所以就通过小球撞击木块后，比较木块滑行的距离来判断小球动能的大小。这里就用到了转换法。当然这也不是唯一可以转换的方式，同学们也可以想想还有没有其它方式可以用来衡量小球动能的大小呢？同样，也可以思考一下，还有没有其它方式可以控制小球的速度大小？例如就有人想到了用一跟压缩的弹簧来推动小球，弹簧的压缩程度不同时，小球被推出的速度就不同，我们课堂上的实验方法并不是唯一的，大家可以把视野放得更开阔一些。第三种常用的探究方法是等效替代法。在保证某种效果相同的前提下，将复杂的物理问题和物理过程转化为等效的、简单的、易于研究的物理问题和物理过程，这种探究方法我们称之为等效替代法。例如在探究平面镜成像实验时就用到了等效替代法。请看例题。

实验中我们用到了一支等大的蜡烛来代替像，而只有等大的蜡烛并且只在放在适当的位置才能使它与点燃蜡烛的像完全重合。此时，该蜡烛在大小和位置上就与像是等效的。

透过玻璃观察蜡烛A/其实看到的也是光穿过玻璃板折射后形成的虚像，这种虚像的位置跟实际蜡烛的位置会出现错位现象，是必对实验的等效性造成影响。玻璃板越厚，这种错位现象就越明显，因此这两种玻璃应该选择薄一些的。当玻璃板背后的蜡烛与像完全重合时，就说明平面镜所成的像与物体的大小相等。当玻璃板放置得不够竖直时，蜡烛的像将成显在空中，另一支蜡烛在桌面上无论移动到什么位置都无法与像完全重合，就不能起到替代像的作用。

第四种探究方法：实验推理法。一些物理规律，由于受实验条件限制，无法直接用实验验证，需要先进行实验，再根据实验发展趋势进行合理推理得出结论，这探究方法叫实验推理法。如牛顿第一定律的得出、真空不能传声等。

针对近年来中考实验题的考查重点和变化趋势，同学们在复习时应该抓住以下重点：

1、注重对实验的方法和原理的复习。

2、重点复习实验的操作过程，实验的操作规范，特殊器材的使用方法和它在实验中的作用。

3、注重知识间的迁移与整合，利用所学知识解决在实验中遇到的问题。

4、培养科学的探究能力、对实验信息的处理分析能力和应用实验结论解决实际问题的能力。

下面请同学们完成以下几道习题。今天的课就上到这里，同学们，再见！

第三篇：植物病理学 实验讲稿

园艺植物病理学实验讲稿

生命科学与农林学院

2014年8月

目录

实验一

植物病害症状的观察 实验二

植物病理徒手切片制作 实验三

真菌的形态观察

实验四

鞭毛菌亚门真菌形态观察 实验五

接合菌亚门真菌形态观察 实验六

子囊菌亚门真菌形态观察 实验七

担子菌亚门真菌形态观察 实验八

半知菌亚门真菌形态观察 实验九

培养基的制作 实验十

病原菌的分离培养 实验十一

植物的抗病性鉴定

实验一

植物病害症状的观察

一、实验目的

1.认识各类病害对植物造成的危害，了解植物病害的种类及其多样性，2.初步掌握主要病害的症状表现及其特点，学会植物病害症状的描述，为今后病害的诊断奠定基础。

二、实验原理

植物病害的症状是植物患病后由于异常生理活动而发生在细胞和组织上的病理变化，最后表现为肉眼可见的形态变化。有些症状也可用嗅觉、味觉或触摸进行观察。有的症状是单个细胞表现的症状，在这类症状中，最常见的是受某种病毒侵染的植株中所见到的细胞质内含体。

植物病害的症状可区别为两类不同性质的特征：病状和病征。病状是一定的寄主植物和病原在一定外界条件的影响下相互作用结果的外部表现，是以各自的生理机能或特性为基础的，而每种生物的生理机能，都是在质上有特异性，并且是相对稳定的。病变，作为这种相互作用过程的结果，一般说其发展是定向的。病状作为病变过程的表现，其特征也是较稳定的和具有特异性的。这就是利用病状诊断植物病害的基础。

病征是由病原微生物的群体或器官着生在病体表面所构成的，它更直接地暴露了病原物在质上的特点。如真菌子实体在寄主表面形成的霉层、黑点等。由植物病毒、植原体、许多病原细菌、非侵染性植物病害等没有病征的表现。病征的出现与否和出现的明显程度，虽受环境条件的影响很大，但一经表现出来却是相当稳定的特征，所以根据病征能够正确的判定病害。不同植物的任何病害都具有其独特症状，通常在病害发生过程中按一定顺序出现。病理学家正是根据这种顺序出现的症状在田间诊断植物病害。

病状和病征，尤其是前者，作为诊断病害的依据也有其局限性。首先是许多植物病害常产生相似的病状，因此要从各方面的特点去综合判断；其次，植物常因作物品种的变化或受害器官的不同，而使病状有一定幅度的变化；第三，病害的发生发展是一个过程，有初期和后期，病状也随之而发展变化；第四，环境条件对病状和病征有一定的影响，尤其是湿度对病征的产生有显著地作用，加之发病后期病部往往会长出一些腐生菌的繁殖器官。因此，症状的稳定性和特异性只是相对的，要认识症状的特异性和变化的规律，在观察植物病害时，须认真地从症状的发展变化

中去研究和掌握症状的特殊性；观察和采集植物病害标本，仔细地区别病征的那种微小的、似同而异的特征，这样才能正确地诊断病害。

三、实验材料、试剂与器材

1.按照植物病害的病状类型（变色、坏死、斑点、腐烂、畸形）和病征类型（粉状物、霉状物、点状物、菌核、溢脓等）准备植物病害的盒装标本、瓶装浸渍标本及新鲜标本（不同类型的病状和病征的标本可根据当地的情况准备）。

2.各类症状的挂图、模型、多媒体课件等。3.实体显微镜、手持扩大镜、水果刀、载玻片等。

四、实验步骤

（一）病状的观察

1．斑点 观察玉米大斑病、棉花角斑病、棉花黑斑病、大麦条纹病、小麦根腐叶斑病、大葱或大蒜紫斑病、花生网斑病、番茄早疫病、十字花科霜霉病等标本，注意不同类型病害所表现病斑的形状、大小、颜色等的异同以及病斑上有无轮纹、花纹伴生，同时注意观察各类病斑上有无病征以及病征的特点。斑点类发生在叶、茎、果等部位，受病组织局部坏死，一般有明显的边缘。斑点中还可以伴生轮纹、花纹等特点，根据病斑的颜色、形状等特点而分为褐斑、黑斑、紫斑、角斑、条斑、大斑、小斑、胡麻斑、轮纹斑、网斑等多种类型。

2．腐烂 观察甘薯黑斑病和干腐病病薯、马铃薯晚疫病和环腐病病薯、棉苗立枯病、柑桔溃疡病等病害标本，认识该类病害对植物所造成的危害，同时掌握这类病害的病状特点。腐烂类病状发生在植物的各个部位，由于组织分解的程度不同，有软腐、干腐之分。根据腐烂的部位，有根腐、基腐、茎腐、果腐、花腐等名称，还伴随有各种颜色变化的特点，如褐腐、白腐、黑腐等。

3．萎蔫 观察棉花、黄瓜等植物枯萎病、棉花和茄子黄萎病、玉米和茄科植物青枯病、马铃薯环腐病等标本，注意区别枯萎、黄萎、青枯等病状类型，必要时可以剖开病株茎杆观察微管束是否褐变。典型的萎蔫病状是植物根、茎的维官束组织受到破坏而发生的叶片或枝条萎垂现象，皮层组织完好，萎蔫病害常无外表的病征。植物受萎蔫菌侵染后，不一定都能引起萎蔫，发病初期有半边叶片、半个枝条萎垂的现象，但更常见的是全株性萎蔫。

提示 对于萎蔫类病害病状的观察应以新鲜标本为主，有条件时最好在田间进行，这类病害发生具有一定的地域性，观察时要注意其微管束组织的病变，干标本则失去了原有的特点。

4．变色 变色主要有两种类型。一种表现为黄化，是整个植株或叶片部分地或全部地均匀褪绿、变黄，或呈现其它的颜色。多数伴生有整株或部分的畸形。另一种为花叶，病株叶片色泽浓淡不均，深绿与浅绿部分相间夹杂，一般遍及全株，上部叶片较为显著，无病征表现。比较观察烟草花叶病、苹果花叶病、小麦黄矮病、瓜类、十字花科和茄科植物的病毒病病状、注意每一种病害的病状特点。

5．畸形 畸形类病状由不同组织、器官的病变，如叶片的膨肿、皱缩、小叶、蕨叶；果实的缩果及其它畸形；整个植株的徒长、矮缩；局部器官如花器和种子的退化变形和促进性的变态等。瘤、瘿、癌、丛枝和发根也是常见的畸形病状。观察桃缩叶病、十字花科根肿病、马铃薯癌肿病、果树根癌病、桑树根结线虫病、油菜白锈病、番茄蕨叶病、枣疯病、泡桐丛枝病、玉米黑粉病、小麦粒线虫病、水稻恶苗病等，归纳各类标本的病状类型。

（二）病征的观察

1．粉状物 借助手持扩大镜或实体解剖镜观察麦类锈病、十字花科白锈病、麦类白粉病、、玉米黑粉病和麦类黑粉病等病害标本，注意粉状物的颜色、质地和着生状况等。

2．霉状物 借助手持扩大镜或实体解剖镜观察黄瓜霜霉病、甘薯软腐病、瓜类软腐病、柑桔青霉病、番茄灰霉病和番茄叶霉病等病害标本或瓶装标本。注意区别霜霉、黑霉、绵霉、青霉和灰霉等不同类型的霉状物。

3．点状物 取小麦白粉病、瓜类炭疽病、棉花茎枯病、芹菜斑枯病、苹果树腐烂病和麦类赤霉病等病害标本，借助手持扩大镜或实体解剖镜观察，注意点状物是埋生、半埋生还是表生，以及在寄主表面的排列状况、颜色等。

4．菌核 观察油菜菌核病和水稻纹枯病等病害标本，注意菌核的大小、形状、颜色、质地等，并观察菌核萌发状况。

5．溢脓 溢浓为细菌性病害特有的病征。观察水稻白叶枯病、水稻细菌性条斑病、十字花科细菌性软腐病、棉花角斑病和黄瓜角斑病等病害标本，注意溢脓的颜色、出现位置等。用剪刀将植物病组织剪成 4mm 2的小块，放于载玻片上，加一滴水，盖上盖玻片，在显微镜下观察或直接用载玻片对光观察喷菌现象。

五、实验报告及作业

将上述病害标本的发病部位，病状类型和病症类型，填于下表：

植物病害症状观察表

病害名称

发病部位

病状类型

病症类型

1.植物病害的主要特征是什么? 2.症状在病害诊断上有什么作用? 3.植物病害对农业生产的危害性如何?

实验二

植物病理徒手切片制作

一、实验目的

观察植物病害病原物的形态，进行病原物的分类鉴定，研究受病组织的组织结构病变，受病植物组织与病原物的解剖学关系，以及对于难得一见病原物的保存备用等，都需将材料制成适当的显微玻片标本。因此，徒手制片技术也是植物病理学研究的重要手段之一。通过本次实验系统学习实践常用的徒手制片技术，为以后开展植物病理学的有关研究工作奠定坚实的制片技术基础。

二、实验材料、试剂和器材 1．受病植物组织

2.解剖针、刀片、剃刀、移置环、酒精灯、载玻片、盖玻片、毛笔、浅玻皿、浮载剂、70%酒精、乳酚油、展片台、光学显微镜

三、实验内容及方法

徒手制片的方法有整体封藏法、徒手切片法、组织透明制片法和涂抹制片法等多种。限于时间本实验实践最为常用的整体封藏法和徒手切片法两种。(一)

整体封藏法

对于生长在植物病部表面或培基上的菌丝体、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及线虫等，可直接择取少许封藏在适当的浮载剂中，在显微镜下观察，根据材料的特点和观察的目的可采用不同的方法封藏制片。常用的方法的概括为挑、刮、拨、撕四种。

1挑：对于在植物受病部位或基质表面生长繁茂的霉状病原体(如霜霉菌)粉状病原体(如锈菌、白粉菌)以及培养基上的许多培养菌，可用尖细的解剖针等直接挑取封埋制片，挑取病原体的量，在保证选材典型的前提下，越少越好，以免互相重叠，分辩不清。

取黄瓜霜霉病叶，小麦白粉病叶分别挑取霉状物和粉状物镜检病原菌的形态特点。

2刮：对病部病原体稀少，或用放大镜也难辩认霉层的病害标本，可采用两侧具刀的三角刮针(或可用刀片代替)刮取病原物制片。刮的方法是，用刮针的一刃，蘸浮载剂少许，在病部顺同一个方向刮取2—3次，将刮得的病原蘸在载玻片的浮载剂

中封片镜检。浮载剂在保证浮载质量的前提下要尽量少，否则少量的病原体在大滴的浮载剂中极易分散漂流，在显微镜下难以寻找。取玉米小斑病叶，在病斑背面刮制片，镜检分生孢子梗和分生孢子的形态。

3拨：对于产生在植物表皮下或半埋生于基物内的病原体孢子器官。如子囊壳、分生孢子器、闭囊壳等，可将病原体连同寄主组织一同拨下，放入浮载剂中，用两支解剖针，一支稳定材料，另一支拨出植物组织，使病原体外露制片。取小麦全蚀病或白粉病标本，拨小黑点制片，镜检子囊果的形态。

4撕：对于寄生在植物表皮细胞上的病原真菌，也可以将此有病原物的表皮撕下来制片镜检，这种方法不仅能看到病原物形态，而且可以观察病原物与寄主的解剖学关系。

在毛毛雨天自田间取回感染白粉病的麦苗(或在保温箱中取接种染病的麦苗)。用刀片割破叶背表皮再用小镊子轻轻撕下，放在浮载剂中制片镜检白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形态。(二)徒手切片法

欲观察受病组织病变，病菌侵入和寄主体内扩展过程，以及埋生在基物内真菌子实体的形态结构等，都需将有关材料切成薄片，进行镜检，徒手切片是最常用的简便易行的方法，不需要特殊的设备，而且节省时间，切成的片子不仅可作临时观察，也可进一步制成永久性玻片标本。

徒手切片的基本用具是剃刀或刀片。切片时先选取材料并作适当的修整，以左手的食指和姆指捏住材料，中指顶住材料下端，使材料上端突出于手指以上2—3毫米。右手握稳刀，从左向右后方斜向切割。注意刀口必须以材料面垂直。否则所得切面不正。同时双手不应紧靠身体，而是要活动自如。用臂力均匀地沿刀口后部起拉向前方，连续切割4—5片后，用毛笔蘸水轻轻沿刀口取下，放入盛有水的浅玻皿中，在此过程中左手握着的材料不要放下，否则再切时难按原位置拿材料，此外，在切片过程中，必须常用毛笔蘸水湿润材料，以免材料干涸不便切割。

对于过于柔软或较薄的材料，可以夹在“夹持物”中，进行切片更为方便。新鲜胡鲜卜和马铃薯块都可作“夹持物”用。实验室中通常将通草、接骨木或向日葵的茎髓，剪成适当大小，浸于70%酒精中备用。

切割一定数量的薄片后，用移置环在浅玻皿中选取合用的材料薄片，放在载玻片的水滴中，镜检合格者即酒精灯上将水烘干并摆正材料，然后加一滴乳酚油或其浮载剂；放在展片台上略加热，镜检如无气泡，即可小心加盖片，用吸水纸吸除多余的浮载剂，最后贴好标签，平放于切片板上，待干燥适宜时封固。

徒手切片的缺点是对于微小或过大，柔软、多汁、肉质及坚硬的材料不易切取，也难制成连续切片，此外切片的厚薄也难一致。切片机切片即可克服这些缺点。

病名： 学名： 制片人： 时间：

切片的标签制法

四、实验报告及作业

1．每人交两片符合质量要求的玻片标本。

2.整体封藏法和徒手切片法两种基本徒手制片技术都在什么情况下使用? 徒手切法制片有什么优缺点? 怎样解决这种方法本身存在的问题? 附：常用浮载剂及封固剂

1.水作浮载剂：最常用，但易于干燥，仅适于暂时性检查，不易封固保存，且易形成气泡(检查材料以酒精、5%明胶、水或稀肥皂水稍浸，洗净后再以水浮载可除去气泡)。

2.乳酚油：也较常用，成分及配比如下：

苯酚结晶(加热熔化)20ml

乳酸20ml

甘油40ml

蒸馏水20ml

乳酚油不易干燥，标本可存放几天以上，为使标本易于辩别，常在其中加染料苯胺蓝(棉蓝)，用量是0.05—0.1%(也有的加0.2—0.5%的锥虫蓝等)，因其是酸性染料，可染真菌原生质而不染细胞壁，故对分隔难辨的真菌孢子等可由此染色而看清。此法一般只用观察菌态，不适于测量孢子的大小(因为乳酚油的折射率近于孢子和菌丝体，1.43左右)。另一方面，此法制片，封固比较困难(因为乳酚油易于和封固剂起化学作用而分解)，可用达马树脂(和乳酚油不起化学作用)和等量蜂蜡混配做封固剂，蜂蜡放于玻璃皿中在水槽上熔化(温度勿过高)，达马树脂在铁罐中熔化(温勿过度)，然后将蜂蜡倒入熔化的达马树脂中搅和而成(加少量的贴金胶水，可增进与玻璃的附着力)，封固时以“L”形铜棒等在煤气灯上烧热后，蘸少许封固剂在盖玻片周围封固，此封固剂干燥快，经久不坏。但由于其致癌作用而逐渐被淘汰而改用甘油乳酸液。

3.甘油乳酸液：也可加苯胺蓝等染料，其成分如下：

乳酸

500ml

甘油

1000ml

蒸馏水

500ml

4.水合氯醛碘液：成分配比如下：

水合氯醛

100g

碘化钾

5g

碘

1.5g

水

100ml

碘与碘化钾研和，加水溶解。然后与水合氯醛混合，此浮载剂较好，能使真菌组织透明，并染上颜色，能弥补乳酚油的不足，一一看清细胞壁和其它结构，此法制片只可保存几天，不宜久存，为保存，可除去碘液再用乳酚油浮载后封存。5.甘油：此浮载剂适于保存藻类、水霉菌等柔软标本将标本放在一滴10%的甘油中，加盖玻片，水分蒸发后，随时补加甘油至水分蒸发净，制成的标本玻片平放可经久不坏，(擦去多余甘油，用香脂油或其它封固剂封固，可永久保存)。6.甘油明胶：成分及配方如下：

明胶

5g

甘油

35ml

水

30ml

明胶在水中浸透，加热至35℃溶化，加甘油搅和，用纱布过滤后使用。

徒手切片及其它标本，都可用此剂浮载制片，标本染色(或不染)后，先用甘油脱水(干燥标本可不脱水)，挑取小团甘油明胶放在载片上，微加热，待其熔化而气泡消失后，将标本取出吸除去多余甘油后移入熔化的甘油明胶中，加盖玻片轻轻下压，擦去盖玻片周围的多余甘油明胶。平放十几天，干后长期保存，用香脂或其它固剂封固后长久保存。

此浮载剂对于干燥标本易出气泡，用醋酸甘油先予处理可防此弊，成分配比如下：

醋酸钾(2%水溶液)300ml

甘油

120ml

酒精

180ml

标本放在载玻片上加小滴醋酸甘油，微加热以除气泡，并蒸去大部分油剂，趁热加入小团甘油明胶，熔化后加盖玻片，其后步骤同上。

实验三

真菌的形态观察

真菌分布广泛，种类繁多，已报导的将近

45000多种，是植物病原生物中最主要的一大类群，它所引起的病害占植物病害的80%以上，尽管真菌形态差异很大，但基本结构相似，大多数真菌有营养体和繁殖体之分，营养体是指吸收养分的器官，繁殖体是指从营养体上产生的各种类型的孢子。

真菌产生孢子的机构，无论是有形性的还是无性的，统称为子实体。真菌的孢子分为无性孢子和有性孢子两类。无性孢子有游动孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子；有性孢子有休眠孢子囊、卵孢子、接合孢子、子囊孢子和担子孢子。真菌孢子的形态特征是鉴定和分类学上的重要依据，其营养体及其变态和菌组织体则是真菌分类的重要参考依据，有的还是重要的鉴别特征和分类依据。

一、实验目的

通过本次实验熟悉真菌的营养体和繁殖体的基本形态，为以后真菌病害的病原物鉴定和真菌分类奠定初步基础。

二、实验内容、材料和方法(一)真菌的营养体 1菌丝和菌丝体

除少数原始的类群以外，真菌典型的营养体是极为细小的丝状体，这种丝状体称为菌丝，生长成丛的菌丝称为菌丝体，低等真菌的菌丝是无隔的，大多数真菌是有隔的。

(1)挑取马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)或瓜果腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)制片，镜检无隔菌丝。

(2)挑取立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)制片镜检有隔菌丝。

(3)观察各种病原真菌在平面和斜面培养基上形成的菌落，注意菌落大小、形状、厚薄、质地、颜色等形态特点。2菌丝组织体

有些真菌的菌丝体，在一定的条件下或一定的发育阶段，可形成特殊的组织体，常见有菌核、子座和根状菌索。

(1)菌核：菌核是由拟薄壁组织和疏丝组织形成的一种休眠体，既是真菌贮藏养分的器官，又是真菌用以度过不良环境的休眠机构，菌核大小不一，色泽和形状也各不相同。菌核中的菌丝组织已有分化现象，外皮组织细胞排列紧密，色深壁厚，具有保护作用，为拟薄壁组织；内层细胞壁薄色淡，排列疏松，仍可维持营养作用，为疏丝组织。

肉眼观察麦角病、油菜菌核病、黄瓜菌核病和大葱菌核病标本，比较菌核形状、大小、颜色；镜检细辛菌核病的菌核制片，注意比较表皮与内部组织细胞的排列特点。

(2)子座：子座是由拟薄壁组织和疏丝组织形成的容纳子实体的座垫状结构，或由菌丝体与部分寄主组织结合而成的称为假子座。子座是真菌从营养体到繁殖体的过渡机构，除可在其上或其内形成子实体外，也有度过不良环境的作用。

肉眼观察稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)的分生孢子座；镜检苹果树腐烂病菌(Valsa mali)和稻

香

柱菌(Epichloe typhina)所形成的子座制片，注意子座形状，着生部位及内部繁殖体类别。

(3)根状菌索：少数高等真菌的菌丝体还可纠结成绳索状的组织体，形如高等植物的根，故称根状菌索，其作用是帮助菌体蔓延和抵抗不良环境，根状菌萦组织也有表皮和内部组织的分化。

肉眼观察林木上根状菌索的外部形状，注意和菌核比较，找出二者区别。

3菌丝体上分化出的吸收养分组织

(1)吸器：是寄生在细胞间的真菌，特别是一些专性寄生菌在菌丝体上形成的吸收养分的器官，形状有球状、丝状、掌状、裂片状等。

镜检小麦白粉病菌(Blumeria graminis)吸器制备片，注意吸器的形状及其形成的部位。

(2)假根：为伸入基物内的菌丝体，形如高等植物的根系，故称假根。假根除用其吸收养分外，还有固着菌体的作用。

挑取培养基中培养的甘薯软腐病菌(Rhizopus nigricans)的菌丝(注意针尖要插入培养基内)制片镜检或镜检根足霉(Rhizopus sp.)制备片，注意假根与普通营养菌丝的区别。

(3)附着胞：从幻灯片或照片观察病菌侵染寄主植物形成附着胞的形态。

(4)菌环和菌网：捕食性真菌常由菌丝分化成菌环和菌网组织来捕捉线虫等小动物，然后再由菌丝侵入线虫体内吸取营养。(二)真菌的繁殖体——孢子

真菌的繁殖方式分无性和有性两种，分别产生无性孢子和有性孢子两大类型。真菌的无性繁殖包括断裂、出芽和产生孢子等，真菌的有性生殖包括质配、核配和减数分裂三个阶段。

1无性孢子：不经过性细胞或性器官的结合便能产生孢子，称为无性孢子。真菌产生的无性孢子类型很多，主要的有游动孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子。

(1)游动孢子：游动孢子为鞭毛菌亚门真菌特有的无性孢子，产生在由菌丝顶端细胞或由菌丝分化成的孢子囊梗的顶端细胞膨大形成的孢子囊内、具鞭毛，能游动。

制片镜检用线麻粒诱发的绵霉和水霉的游动孢子囊和游动孢子，镜检番茄晚疫病菌(Phytophthora infestans)的游动孢囊梗、游动孢子囊和游动孢子。(2)孢囊孢子：孢囊孢子为接合菌亚门真菌特有的无性孢子，生成方式和游动孢子相似，也是内生的，但无鞭毛，不能游动。

挑取黑根霉(Rhizopus sp.)制片(或取制备片)镜检孢子囊梗，孢子囊和孢囊孢子，注意观察孢子囊的形态及其着生位置及孢囊孢子的形态，颜色和产生的数目。(3)分生孢子：子囊菌亚门真菌和大部分半知菌亚门真菌都产生分生孢子，分生孢子外生在分生孢子梗上，形状、大小、颜色不一，单生，链生或集生，分生孢子梗

有的散生，有的束生，有的产生在分生孢子盘上或分生孢子器内，产生在分生孢子器内的分生孢子也叫器孢子。

取玉米大斑病(Exserohilum turcicum)的病叶，用刀片轻轻刮取病斑上的霉状物制片镜检分生孢子梗和分生孢子或挑取斜面培养基上培养的小麦根腐病菌(Bipolaris sativum)制片镜检分生孢子梗和分生孢子，另取苹果灰斑病(Phyllosticta pirina)制片镜检分生孢子器和器孢子，注意分生孢子的形状，色泽，细胞数目及着生情况。(4)厚垣孢子：镜检厚垣孢子制备片，菌丝中或孢子中个别细胞膨大、细胞壁加厚的孢子即厚垣孢子。

2有性孢子：由两个不同的性细胞或性器官相结合而产生的孢子叫有性孢子，有性孢子主要有以下4种。

(1)卵孢子：部分鞭毛菌亚门真菌的有性孢子，由菌丝上产生的两种异形配子囊交配产生。制片镜检谷子白发病菌(Sclerospora graminicola)的卵孢子或镜检大豆霜霉病菌(Peronospora manshurica)卵孢子制备片，注意卵孢子形状、大小、颜色，孢壁形态。

(2)接合孢子：为接合菌亚门真菌的有性孢子，由两个同形配子囊交配而成。镜检毛霉(Mucor)接合孢子制片，注意接合孢子的大小，形状，颜色及表现特点。(3)子囊孢子：为子囊菌亚门真菌产生的有性孢子，由两个异形配子囊交配生成，子囊孢子产生在子囊内，多为8个，子囊除极少数子囊菌裸生外，多数子囊菌生于子囊果中。取山楂白粉病(Podosphaera oxyacanthae)病叶，用解剖针将白粉上的小黑点(闭囊壳)仔细拨至载玻片上的水滴中，加盖片并轻轻压破闭囊壳，镜检闭囊壳，子囊、子囊孢子和附属丝的形态，特别注意子囊的数目和附属丝的特点，另取油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotium 132)制备片，镜检子囊盘、子囊和子囊孢子。

(4)担孢子：为担子菌亚门真菌的有性孢子，由菌丝结合后减数分裂而成，外生于担子或先菌丝上。挑取萌发的玉米丝黑穗病菌(Sphacelotheca reiliana)制片镜检冬孢子、先菌丝及担孢子的形态，另取小麦腥黑穗病菌(Tilletia caries)冬孢子萌发的制备

片，镜检冬孢子、先菌丝及担孢子的形态，比较两种黑粉病菌的区别。

另外还有一种有性孢子为休眠孢子囊，由两个游动配子结合而成，为二倍体，萌发时减数分裂释放出单倍体的游动孢子。如壶菌、根肿菌可产生休眠孢子囊，根肿菌产生的休眠孢子囊萌发时通常只释放出一个游动孢子，有时也称为休眠孢子。

三、实验报告及作业

1绘有隔菌丝，无隔菌丝和菌核剖面图。

2绘分生孢子、孢囊孢子、卵孢子及子囊孢子的形态图。 3菌丝有无隔膜是否反应一定的进化关系? 4菌核和子座在形态和功能上有何不同?

5真菌吸器的有无与寄生性的强弱是否有一定关系?

6分生孢子和孢囊孢子的生成过程，形成数量(与产孢细胞比较)及着生部位等方面

有何不同?

7卵孢子、接合孢子、子囊孢子和担子孢子在有性生殖过程中形成的时期有何不同?

实验四

鞭毛菌亚门真菌形态观察

鞭毛菌是一类低等真菌，其中不少是水生的。它们的共同特征是无性繁殖时产生有鞭毛的游动孢子。根据菌体的形态和游动孢子鞭毛的特征分为根肿菌纲、壶菌纲、丝壶菌纲和卵菌纲。其中与植物病害关系较为密切的有根肿菌纲、壶菌纲、卵菌纲。

一、实验目的

了解鞭毛菌亚门中根肿菌纲、壶菌纲和卵菌纲真菌的主要形态特征，掌握与植物病害有关的重要属的形态特征、分类依据及所致病害的症状特点，同时学习使用检索表来鉴定病菌，为分类鉴定打下初步基础。

二、实验仪器与用品

显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备；载玻片、盖玻片、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、吸水纸、解剖刀、挑针、镊子、纱布、刀片、通草、酒精灯、无菌水等。

三、实验材料

1．芸苔根肿菌（Plasmodiophora brassicae）2.马铃薯粉痂菌（Spongospora subterranea）3．禾谷多粘霉（Polymyxa graminis）

4.玉蜀黍节壶菌（Physoderma maydis）

5．串囊水霉（Saprolegnia.monilifera）

6.稻绵霉（Achlya oryzae）

7.瓜果腐霉（Ｐythium aphanidermatum）

8.致病疫霉（Phytophthora infestans）

9.禾生指梗霉(Sclerospora graminicola)

10.葡萄霜霉病菌（Plasmopara viticola）

11.寄生霜霉（Peronopora parasitica）

12.瓜类霜霉病菌（Pseudoperonospora cubensis）

13.莴苣盘梗霉（Bremia lactucae）

14.十字花科白锈病菌（Albugo candida）

以上病害标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片，多媒体教学课件（包括幻灯片、录象带、光盘等影像资料）以及水霉和腐霉游动孢子形成与释放的录相带等。

四、实验内容和方法

（一）根肿菌纲（Plasmodiophoromycetes）

1.芸苔根肿菌 取甘蓝根肿菌切片，镜检切片中的病原菌。有的寄主细胞内可见到许多堆集在一起的鱼籽状颗粒，是病菌的休眠孢子。休眠孢子近球形。

2.马铃薯粉痂菌 镜检马铃薯粉痂病菌切片，在寄主根的皮层组织的受害细胞中可看

到病原菌的休眠孢子，球形至多角形，多个休眠孢子聚集呈海绵状或空心球。

3.禾谷多粘霉 选取有褐点的根，用解剖刀或镊子撕取小麦根基皮层，制成临时玻片，镜检。病菌的休眠孢子常有规律地呈条状排列。

提示 被寄生的表皮细胞呈褐色小点，必须仔细观察才能见到。

（二）壶菌纲（Chytridiomycetes）

玉蜀黍节壶菌（Physoderma maydis）观察由玉蜀黍节壶菌引起的玉米褐斑病标本。用针挑取受害病组织内呈黄色粉末状物制成临时玻片，或对病组织作徒手切片，镜检可见到许多金黄色扁球状的休眠孢子，休眠孢子椭圆形，一面扁平有盖。

（三）卵菌纲(Oomycetes)水霉目(Saprolegniales)

1.串囊水霉 引起水稻烂秧，又称水稻烂秧水霉菌。孢子囊圆筒形或棍棒状，层出式，即新的孢子囊从老的空孢子囊内基部长出，游动孢子具明显的两游现象。

2.水稻烂秧绵霉菌 孢子囊圆筒形或棍棒状，合轴分枝，新的孢子囊从老孢子囊的基部外侧长出，呈聚伞形排列，游动孢子第一个活动时期很短，休止孢在孢子囊顶部孔口处聚集成团。

霜霉目（Peronosorales）

1.腐霉属（Pythium）观察瓜果的腐烂病病果上的白色菌丝体，将生长旺盛的小块菌丝体移至清水中培养24～48h，菌丝顶端即形成大量游动孢子囊，用针挑取在清水中培养过的菌丝，观察腐霉菌的游动孢子囊，丝状、姜瓣状或球状等，顶生或间生，无特殊分化的孢囊梗。孢子囊不脱落，萌发时在其顶端产生一管状物，原生质经管状物排出而形成泡囊。游动孢子产生在泡囊内。

2.疫霉属（Phytophthora）取马铃薯或番茄晚疫病标本制片观察。孢囊梗2~3支成丛自气孔伸出，假轴状分枝，小梗基部膨大，多次产生孢子囊，使孢子囊梗上部呈节状；孢子囊近球状、卵形或梨形等，具乳突。

3.霜疫霉属（Peronophthora）取荔枝霜疫霉病标本挑取霉层观察，孢囊梗直立，双叉锐角分枝，孢囊梗多级有限生长。孢子囊柠檬形、椭圆形，乳突明显。

4.霜霉属（Peronospora）取十字花科植物（油菜、白菜等）的霜霉病标本从叶背面刮取霉层观察，孢囊梗二叉状锐角分枝，末端尖锐。

按照寄生霜霉的观察方法，选取禾生指梗霉、葡萄霜霉病菌、瓜类霜霉病菌、莴苣盘梗霉等材料，对照下列检索表，制片观察各种霜霉病的病原菌或观察病菌永久玻片标本，掌握霜霉科几个常见属的主要形态特征。霜霉科主要属的检索表

1.孢囊梗粗壮，上部为重复2～3次的不规则二叉分枝…………指梗霉属（Sclerospora）1.孢囊梗较细……………………………………………………………………………………2 2.孢囊梗单轴分枝，小轴与主轴成直角，分枝末端平钝………单轴霉属（Plasmopara）2.孢囊梗呈现锐角二叉分枝……………………………………………………………………3 3.分枝两侧不对称，顶端尖锐……………………………假霜霉属（Pseudoperonospora）3.分枝两侧对称…………………………………………………………………………………4 4.分枝顶端尖细……………………………………………………… 霜霉属（Peronospora）4.分枝顶部膨大，呈盘状，具3～4个指状周生小梗…………………盘梗霉属（Bremia）5.白锈菌属（Albugo）镜检苋菜白锈病菌组织切片，或取以上病叶徒手切片制成临时玻片镜检。孢囊梗平行排列在寄主表皮下，短棍棒形，孢子囊串生。白锈菌危害症状是在寄主表面产生乳白色或粉状的疱斑，这是病菌在寄主表皮下形成的孢子囊堆，白色粉状物是成熟的孢子囊。

五、实验报告及作业

1.鞭毛菌亚门真菌的共同特征和分类依据是什么？

2.以营养体、无性繁殖、有性生殖来比较鞭毛菌亚门三个纲的区别。

3.观察十字花科蔬菜根肿病菌、马铃薯粉痂病菌、禾谷多粘霉菌、玉米褐斑病菌、水霉菌或绵霉菌，绘休眠孢子囊或游动孢子囊图。

4.绘瓜果腐霉病菌、马铃薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白锈病菌孢囊梗、孢子囊，卵孢子图。

5.绘瓜类霜霉病菌、莴苣霜霉病菌、葡萄霜霉病菌孢囊梗、孢子囊图。6.详绘大白菜霜霉病和粟白发病的病原形态图（包括无性繁殖和有性生殖）。7.卵菌纲真菌有哪些特点？结合它们的生物学特性、寄生性及病害特点说明本纲真菌进化的情况。

实验五

接合菌亚门真菌形态观察

接合菌亚门真菌的共同特征是有性生殖产生接合孢子。大多数是腐生的，少数可以引起农产品的腐烂。接合菌营养体为发达的无隔菌丝体，无性繁殖产生具细胞壁的孢囊孢子，有性生殖产生接合孢子。孢子囊的形态、孢囊孢子释放以及寄生性等是重要的分类依据。

一、实验目的

通过实验掌握接合菌的一般形态及其所致病害的症状类型，了解同宗配合和异宗配合的含义及同型配子囊、异型配子囊的差别。

二、实验仪器与用品

显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备；灭菌培养皿、载玻片、盖玻片、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、吸水纸、解剖刀、挑针、镊子等。

三、实验材料

甘薯软腐病新鲜标本、挂图、病原菌永久玻片，多媒体教学课件（包括幻灯片、录象带、光盘等影像资料）等；根霉属的甘薯软腐病、犁头霉和毛霉“﹢、﹣”菌株的斜面培养物或培养皿平板培养物；三角瓶装PDA培养基。

四、实验内容和方法

（一）甘薯软腐病症状观察

受害甘薯变软腐烂，有时散发出酒味，病薯表面长出白色、灰色至黑色毛状物。仔细观察，能见到白色菌丝体中有许多小黑点。小黑点是病菌的孢子囊。

用针挑取霉层制片、镜检，观察孢子囊、孢囊孢子、孢囊梗及囊轴、假根的形态。

（二）匐枝根霉培养物的镜检观察

用挑针仔细地从培养的匐枝根霉菌中挑取少许连有培养基的培养物，制成临时玻片，在低倍镜下检查。或者用实体解剖镜直接观察培养皿上的菌体。观察菌丝的形态和具有分枝的孢囊梗及其基部的假根，孢囊梗之间有匍枝状的菌丝相连，在孢囊梗基部有深入寄主细胞或基质中分枝状的假根。在每一个孢囊梗的顶端产生一个圆球状的孢子囊，用高倍镜观察孢子囊内部的构造，在未成熟的孢子囊内，往往只有大量的小颗粒体，接近成熟的或成熟的孢子囊内则充满了许多褐色圆形的孢囊孢

子。孢子囊壁破裂后，孢子散出，露出锣锤形的囊轴。

（三）接合孢子观察

取根霉属和犁头霉属接合孢子玻片观察，并注意原配子囊、配囊柄及配子囊的发育特点。成熟的接合孢子深褐色，表面粗糙。犁头霉菌的接合孢子在配子囊柄的着生处有附属丝，注意观察配囊柄的形状及大小。

（四）异宗配合现象观察

取融化了的PDA培养基、灭菌培养皿置于铺有湿纱布的桌上，在洒精灯火焰附近，按无菌操作要求，将培养基倒进灭菌培养皿内，每个 9cm 皿内倒入10～15ml培养基，冷却后即成平板。取具有“﹢、﹣”性征分化并有亲和性的匐枝根霉、犁头霉或毛霉两个菌株，分别按下列图示方式接种到三个培养皿的平板上，在培养皿的底部写上所接种的菌株编号、接种日期，在 25°C 温箱中培养一周，观察异宗配合现象。记录哪个培养皿中形成了接合孢子。

五、实验报告及作业

1.接合菌亚门真菌的主要特点是什么？与鞭毛菌亚门有何区别？

2.根据+、-菌株平板接种培养结果，说明其产生接合孢子的原因？

3.何为同型配子囊、异型配子囊？

4.哪些接合菌与病虫害的生物防治有关？怎样利用它们？

5.绘匍枝根霉菌孢子囊、孢囊梗、孢囊孢子、假根、匍匐菌丝和接合孢子形态图。

实验六

子囊菌亚门真菌形态观察

子囊菌是一类高等真菌。菌丝体一般都很发达，有隔膜，具分枝，有的菌丝体可以形成菌核、子座等机构。子囊菌的共同特点是有性生殖产生子囊和子囊孢子。子囊菌所致病害的种类很多，其中许多是重要的经济作物病害。子囊菌亚门分纲的主要依据是子囊果及子实层的有无、子囊果的类型、子囊的特征等。据此分6个纲：半子囊菌纲、不整囊菌纲、核菌纲、腔菌纲、盘菌纲和虫囊菌纲。

一、实验目的

通过实验，了解子囊菌亚门各个纲病原菌的主要形态特征，掌握子囊菌中与植物病害有关的重要属的形态特征、分类依据及所致主要病害的症状特点。

二、实验仪器与用品

显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备；灭菌培养皿、载玻片、盖玻片、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、吸水纸、解剖刀、挑针、镊子、纱布、刀片、通草、擦镜纸、无菌水等。

三、实验材料

1.桃缩叶病(Tapharina deformans)和李袋果病(T.pruni)2.散囊菌(Eurotium sp.)3.禾白粉病菌(Blumeria graminis)

4.向日葵白粉病菌(Erysiphe cichoracearum)5.瓜白粉病菌(Sphaerotheca fuliginea)

6.桃白粉病菌(Podosphaera tridactyla)7.洋槐白粉病菌(Microsphaera sp.)

8.桑里白粉病菌(Phyllactinia corylea)9.葡萄白粉病菌(Uncinula necator)

10.甘薯黑斑病菌(Ceratocystis fimbriata)11.玉蜀黍赤霉菌(Gibberella zeae)

12.苹果树腐烂病菌(Valsa mali)13.小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis)14.黑麦麦角菌(Claviceps purpurea)15.竹多腔菌(Myriangium haraeanum)

16.葱叶枯病菌(Mycosphaerella sp.)17.苜蓿轮纹病菌(Pleospora herbarum)

18.核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）

19.紫云英菌核病菌(S.trifoliorum)

以上病害标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片、多媒体教学课件（包括幻灯片、录象带、光盘等影像资料）。

四、实验内容和方法

（一）半子囊菌纲(Hemiascomycetes)

外囊菌属(Taphrina)取桃缩叶病或李袋果病材料作临时玻片，在显微镜下检

查。可看见子囊在寄主叶片的表皮下排列成栅栏状，形成无包被的子囊层，子囊下有足胞，常含孢子4～8个。子囊圆筒形，近球形或椭圆形。

（二）不整囊菌纲(Plectomycetes)

散囊菌属(Eurotium)观察示范镜下散囊菌的闭囊壳、子囊或散在闭囊壳内的子囊孢子。闭囊壳壁薄，只有2~3层细胞构成。子囊孢子单胞、近圆形。

（三）核菌纲(Pyrenomycetes)白粉菌目(Erysiphales)

本目是专性寄生菌。白粉菌侵染植物可引起多种植物的白粉病。白粉菌菌丝表生，在寄主体表扩展蔓延。一般在叶部引起褪绿或黄色斑，以后叶面出现白色或灰白色的粉状物，即白粉菌的无性繁殖形成的分生孢子。生长后期，在病部形成许多黑色小颗粒。这些小黑点是白粉菌的闭囊壳。闭囊壳有附属丝，附属丝呈丝状，其形态因种而异。闭囊壳内子囊数目也不一样，一至多个。附属丝的形状和子囊数目的多少是分属的依据。

选取小麦白粉病、向日葵白粉病、瓜白粉病、桃白粉病、洋槐白粉病、桑里白粉病、葡萄白粉病等不同材料。在实体解剖镜下观察闭囊壳及附属丝的轮廓及形态。挑取闭囊壳作临时玻片，在显微镜下检查。注意闭囊壳的形状、有无孔口、闭囊壳表面附属丝的形状和着生部位。然后轻轻挤压盖玻片，使闭囊壳破裂。观察闭囊壳内的子囊，数数是单子囊还是多子囊。

对照下列检索表，观察各种白粉病的病原菌永久玻片或标本，掌握白粉菌科几个常见属的主要形态特征及所致病害症状。白粉菌主要属检索表

1.闭囊壳内单个子囊……………………………………………………………………………2 1.闭囊壳内多个子囊……………………………………………………………………………3 2.附属丝菌丝状…………………………………………………… 单囊壳属(Sphaerotheca)2.附属丝刚直，较粗，顶端二叉状重复分枝，分枝末端螺旋状卷曲………… ………………………………………………………………叉丝单囊壳属(Podosphaera)3.附属丝菌丝状…………………………………………………………………………………4 3.附属丝非菌丝状………………………………………………………………………………5 4.附属丝发育不良，较短……………………………………… 布氏白粉菌属（Blumeria）

4.附属丝较长………………………………………………………………粉菌属(Erysiphe)5.附属丝刚直，基部膨大，顶端尖锐…………………………………球针壳属(Phyllactinia)5.附属丝基部不膨大……………………………………………………………………………6 6.附属丝粗，刚直，顶端二叉状重复分枝，分枝末端卷曲……叉丝壳属(Microsphaera)6.附属丝不分枝，顶端卷曲………………………………………… 钩丝壳属(Uncinula)

球壳菌目（Sphaeriales）

1.长喙壳属(Ceratocystis)观察甘薯黑斑病菌培养物，挑取病菌灰白色物中间深褐色或黑色毛刺状小点，观察病菌的子囊壳。子囊壳深色、球形，有长颈，开口处有须状物，称口须。轻压盖玻片将子囊壳压破，成熟的子囊孢子头盔状，子囊壁早期胶化消解。

2.赤霉属（Gibberella）取培养在麦粒上的玉蜀黍赤霉菌子囊壳，制成临时玻片镜检，在显微镜下观察。子囊壳蓝色或紫色，散生或聚生。子囊孢子多个细胞，梭形。

3.黑腐皮壳属（Valsa）取苹果树腐烂病菌切片镜检，子囊壳埋生在子座内，有长颈伸出子座。子囊孢子单细胞，香蕉形。

4.顶囊壳属（Gaeumannomyces）观察小麦全蚀病害标本，注意病株基部根系生长不良，茎基部叶鞘枯腐，叶鞘内有黑色小颗粒状物，即病菌的子囊壳。取含有子囊壳叶鞘做切片，置显微镜下观察子囊壳形态，子囊壳顶端有短喙；子囊孢子细线状，多细胞。

5.麦角菌属（Claviceps）取黑麦麦角菌切片，置显微镜下观察，头状子座内壁周围有瓶状子囊壳，子囊壳开口向外。子囊壳内有子囊和子囊孢子。子囊细长，子囊孢子线形。

（四）腔菌纲(Loculoascomycetes)

1.多腔菌属（Myriangium）取竹多腔菌切片置显微镜下观察，可见到很发达的子囊座组织。子囊球形，单生，子囊孢子有纵横隔膜, 砖格状。

2.球腔菌属（Mycosphaerella）取葱叶枯病菌切片，置显微镜下观察,单腔多子囊。子囊圆柱形至棍棒形，有双层壁。子囊初期束生，后平行排列；子囊孢子椭圆形，双胞。

3.格孢腔菌属（(Pleospora)取苜蓿轮纹病病菌切片，置显微镜下观察，囊孢子长圆

形或卵圆形，砖格状（多细胞，有纵横分隔）。

(五)盘菌纲(Discomycetes)核盘菌属（Sclerotinia）取油菜菌核病菌子囊盘切片，置显微镜下观察，子囊盘具长柄；子囊孢子椭圆形或纺锤形。观察油菜菌核病症状及菌核萌发标本，菌核球形至豆瓣形，鼠粪状，一般生子囊盘4～5个。菌核上形成的子囊盘具长柄。

五、实验报告及作业

1.子囊菌亚门各纲的主要特征是什么？ 2.绘外囊菌属和散囊菌属的形态图。

3.白粉属和单丝壳属、叉丝壳属和叉丝单囊壳属的主要区别是什么？ 4.绘白粉属、叉丝单囊壳属、球针壳属、钩丝壳属的形态图。5.绘赤霉属、多腔菌属、核盘菌属形态图。6.子囊菌有性繁殖体的病征类型和特点是什么？

实验七

担子菌亚门真菌形态观察

担子菌亚门真菌一般称作担子菌，是真菌中最高等的。其共同特征是有性生殖产生担孢子。担子菌亚门的分纲依据是担子果的有无，担子果的发育类型可分为三个纲：冬孢菌纲、层菌纲、腹菌纲。与植物病害关系密切的是冬孢菌纲。根据担子的来源及特征，担孢子的数目及位置，冬孢菌纲分为锈菌目和黑粉菌目。锈菌的分类主要依据冬孢子的形态，排列和萌发的方式。而黑粉菌的分类主要依据冬孢子的萌发方式，孢子的分隔，排列及其大小，形状及是否有不孕细胞等进行分类。

一、实验目的

通过实验了解担子菌亚门冬孢菌纲主要病原菌的形态特征，掌握锈菌目和黑粉菌目中与植物病害有关的重要属的形态特征、分类依据及所致主要病害的症状特点。

二、实验仪器与用品

显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备，灭菌培养皿、载玻片、盖玻片、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、吸水纸、解剖刀、挑针、镊子、纱布、蒸馏水滴瓶、通草、刀片、擦镜纸、酒精灯、无菌水、PDA培养基等。

三、实验材料

锈菌目（Uredinales）：

1.菜豆锈菌（Uromyces.appendiculatus）2.禾柄锈菌（Puccinia graminis f.sp.tritici）3.禾叶锈菌（Puccinia recondita）

4.禾条锈菌（Puccinia striiformis）

5.梨胶锈菌（Gymnosporangium haraeanum）6.蔷薇多胞锈菌（Phragmidium rosae-multiflorae）7.亚麻锈菌（Melampsora lini）

8.花椒鞘锈菌（Coleosporium xanthoxyli）9.松栎锈菌（Cronartium quercum）

10.枣层锈菌（Phakopsora zizyphi-vulgaris）

黑粉菌目（Ustilaginales）：

1.小麦散黑粉菌（Ustilago tritici）

2.玉蜀黍黑粉菌（U.maydis）

3.丝轴黑粉菌（Sphacelotheca reiliana）

4.高粱坚粒黑粉菌（Sphacelotheca sorghi）5.高粱散粒黑粉菌（Sphacelotheca cruenta）6.高粱团黑粉菌（Sorosporium ehrenbergii）7.小麦网腥黑穗菌（Tilletia caries）

8.小麦光腥黑穗菌（Tilletia tritici）9.稻尾孢黑粉菌（Neovossia horrida）

10.稻叶黑粉菌（Entyloma oryzae）11.小麦条黑粉菌（Urocystis tritici）

以上病菌引起的病害标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片和病菌的PDA培养物;多媒体教学课件（包括幻灯片、录象带、光盘等影像资料）。

四、实验内容和方法

（一）冬孢子萌发试验

冬孢菌纲不同类型冬孢子萌发方法是不同的，几种常见的冬孢子的萌发方法如下：

1．小麦网腥黑穗菌和光腥黑穗菌 将冬孢子撒在保湿器皿内的用1%硝酸钙液润湿的滤纸上，在17～ 22℃ 下培养，每天于日光灯下照射4h，3d后检查萌发情况。

2．小麦条锈病菌 取带冬孢子病叶在0.5～1%柠檬酸中浸15min，再放于两层潮湿的滤纸之间，于-2~-5℃ 下冷冻5d后，挑取冬孢子置于水滴内，在冰箱内（4℃）保存48h即可萌发。

（二）锈菌目（Uredinales）

1.单胞锈菌属（Uromyces）观察菜豆锈病或茭白锈病标本，挑取冬孢子制成玻片观察。冬孢子具柄，单细胞。

2.柄锈菌属 观察小麦杆锈病、小麦叶锈病或小麦条锈病标本，冬孢子堆黑色。将有冬孢子堆的寄主叶片组织切下，制切片于显微镜下观察。冬孢子有一隔膜，分隔处稍缢缩，柄不胶化。

4.胶锈菌属（Gymnosporangium）从用水浸泡过的胶锈菌冬孢子角上用挑针挑取冬孢子制片观察，冬孢子双胞，分隔处不缢缩或稍缢缩。柄丝状，很长，含胶质。

5.多胞锈属（Phragmidium）挑取玫瑰锈病组织上的冬孢子，制片观察，冬孢子多细胞，通常下部膨大易胶化。

6.栅锈菌属（Melampsora）取亚麻锈菌病组织制作徒手切片观察。冬孢子无柄，集成壳状或垫状，冬孢子仅侧面结合成一层，埋生于寄主表皮下。

7.鞘锈菌属（Coleosporium）取花椒锈病组织制作切片观察，冬孢子堆生于叶背或排列成环状，圆形黄褐色。冬孢子无柄，集成壳状或垫状的孢子粒，集生于寄主表皮层下。

8.柱锈菌属（Cronartium）取马尾松锈病标本制片观察，冬孢子堆生于叶背，毛状，冬孢子梭形。

9.层锈菌属（Phakopsora）取枣锈病组织制作切片观察，冬孢子堆呈黑色，冬孢子

排成2～4层，长椭圆形或多角形。

（三）黑粉菌目（Ustilaginales）

1.黑粉菌属（Ustilago）孢子堆外露，很少由寄主组织长期包裹，担子分隔，担孢子生在担子每一细胞的侧面。

挑取小麦散黑粉（穗）病组织上的冬孢子制成玻片观察。冬孢子球形或近球形。另取冬孢子萌发切片观察。冬孢子萌发产生4个细胞的担子，从担子的不同细胞分别生出丝状分枝，不产生担孢子。

挑取玉米瘤黑粉病组织上的冬孢子制片观察，冬孢子球形至卵形。另取冬孢子萌发切片观察。冬孢子萌发时产生有隔担子，担子顶端或分隔处侧生梭形的担孢子。

2.轴黑粉菌属（Sphacelotheca）冬孢子堆周围有膜（不孕菌丝），中央有寄主组织，担子分隔，担孢子生在担子每一细胞的侧面。

挑取高粱丝黑穗病组织上的冬孢子制片观察。冬孢子卵圆形或球形，暗褐色，有时混生有不孕细胞，不孕细胞无色透明。

取高粱坚粒黑穗病标本观察。孢子堆生于子房中，冬孢子多圆形或近圆形，不孕细胞长圆形至近圆形。

取高粱散粒黑穗病标本观察。冬孢子堆有由菌丝体组成的灰白色被膜，冬孢子球形，分散。

3.团黑粉菌属（Sorosporium）观察高粱长粒黑穗病标本，病粒（即菌瘿）外层包有一层浅黄色薄膜。孢子堆结合成孢子球，孢子球的结合很松。稍加压就分散，无不孕细胞。

4.腥黑粉菌属（Tilletia）取小麦网腥黑穗病或小麦光腥黑穗病标本观察。冬孢子单生，孢子堆成熟时呈粉未状，冬孢子较小。孢子堆生于子房内，外包果皮，内部充满黑紫色粉状孢子，有腥味。

5.尾孢黑粉菌属（Neovossia）取水稻粒黑穗病标本挑片观察，孢子堆寄生于子房内，产生黑粉。挑取黑粉制片，显微镜下可见，孢子球形，常有一部分未成熟的透明孢子。

6.叶黑粉菌属（Entyloma）取水稻叶黑粉病标本，切片观察。孢子堆生于叶的两面，圆形至长条形。孢子多角形，结合紧密。取萌发的担孢子玻片观察，担孢子顶

生于担子上，纺锤形。

7.条黑粉菌属（Urocystis）取小麦秆黑粉病标本，制片观察。一至多个厚垣孢子集结成牢固的孢子球，孢子球外有淡色而小的不孕细胞包围。

五、实验报告及作业

1.绘黑粉菌属、腥黑粉菌属和条黑粉菌属冬孢子形态图。2.绘腥黑粉菌属冬孢子萌发图。

3.绘柄锈菌属、单胞锈菌属、栅锈菌属和胶锈菌属冬孢子形态图。

实验八

半知菌亚门真菌形态观察

半知菌亚门真菌的种类很多，其中不少是植物病害的重要病原菌。半知菌的分类主要是根据无性阶段的形态特征，包括分生孢子的形态、载孢体的类型、产孢方式等。半知菌亚门分3个纲。芽孢纲：营养体为单细胞或发育程度不同的菌丝体或假菌丝，通过产生芽孢子繁殖；丝孢纲：营养体是发达的菌丝体，分生孢子不产生在分生孢子盘或分生孢子器内；腔孢纲：分生孢子产生在分生孢子盘或分生孢子器内。与植物病害关系比较密切的是丝孢纲和腔孢纲。

一、实验目的

通过实验认识半知菌子实体的类型及重要致病菌属的形态特征，掌握常见植物病原半知菌属的鉴别特征。

二、实验仪器与用品

显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备，灭菌培养皿、载玻片、盖玻片、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、吸水纸、解剖刀、挑针、镊子、纱布、刀片、通草、酒精灯、放大镜，恒温箱，方木块，剪刀等。

三、实验材料

半知菌引起的病害标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片和病菌的PDA培养物；多媒体教学课件（包括幻灯片、录象带、光盘等影像资料）。

丝孢纲（Hyphomycetes）

1.立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）

2.齐整小核菌（Sclerotium rolfsii）

3.稻梨孢（Pyricularia oryzae）

4.玉蜀黍平脐蠕孢（Bipolaris maydis）

5.玉米大斑突脐蠕孢（Exserohilum turcicum）

6.大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）

7.芸苔链格孢（Alternaria brassicae）

8.球座尾孢（Cercospora personata）

9.梨黑星孢（Fusicladium virescens）

10.灰葡萄孢（Botrytis cinerea）

11.粉红聚端孢（Trichothecium roseum）

12.意大利青霉（Penicillium italicum）

13.褐孢霉（Fulvia fulva）

14.尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）

腔孢纲（Coelomycetes）

1.胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）2.葡萄痂圆孢（Sphaceloma ampelinum）

3.梨壳囊孢（Cytospora carphosperma）

4.芹菜生壳针孢（Septoria apiicola）

5.高粱生壳二孢（Ascochyta sorghina）

6.甜菜蛇眼病菌（Phoma beta）

7.梨叶点霉（Phyllosticta pyrina）

四、实验内容和方法

（一）丝孢纲

1.丝核菌属（Rhizoctonia）观察预先培养的棉花立枯病菌或小麦纹枯病菌菌落。菌核褐色至黑褐色。挑取菌丝制片观察，菌丝粗壮，菌丝分枝呈直角，分隔处常缢缩。

2.小核菌属（Sclerotium）取花生白绢病或小麦、大豆、棉花、烟草等白绢病菌标本或培养观察，病菌菌丝白色绢丝状；菌核圆形至长圆形，褐色至黑色，表面暗色，中心无色，组织致密，干时极硬，彼此无菌丝相连。

3.梨孢属（Pyricularia）取水稻稻瘟病标本，用挑针挑取病叶上的霉状物制片观察。分生孢子梗细长，淡褐色，顶部以合轴式延伸，呈曲膝状，分生孢子多胞，梨形。

4.平脐蠕孢属（Bipolaris）取玉米小斑病叶，挑取病斑上的霉层观察。分生孢子梗单生或丛生，上部呈曲膝状弯曲；分生孢子蠕虫形或长椭圆形，多胞，脐点稍微突出，平截状。

5.突脐蠕孢属（Exserohilum）取玉米大斑病病叶，用挑针挑或刮取其上的黑色霉状物制片，置显微镜下观察。其分生孢子梗暗色，具分隔，一般少分枝，上部呈曲膝状。分生孢子棱形，多胞，脐点明显突出于基细胞外部。

提示 观察时注意与平脐蠕孢属的区别，主要在于其脐点是否突出。

6．镰孢属（Fusarium）取瓜类枯萎病菌培养观察，气生菌丝白色，绒毛状，在PDA培养基上底部呈淡黄色或淡紫色；挑针挑取培养物制片观察，小型分生孢子量大，无色，卵圆形，单胞，偶尔双胞；大型分生孢子无色，纺锺形或镰刀形，1～5个隔膜，基部有时有一显著的突起，称足胞。

提示 有时可观察到厚垣孢子，顶生或间生于菌丝体上。

7.轮枝孢属（Verticillium）取培养好的棉花黄萎病菌平皿，直接放于显微镜载物台上观察，其分生孢子梗细长直立具分隔，呈轮状分枝。分生孢子梗呈直角分枝，分生孢子单胞，生于分枝顶端。

提示 培养菌用的培养基不宜太厚以便透射光能穿透，平皿放到载物台上小心移动，使视野覆盖菌落边缘，这样才能找到理想的轮状分枝结构。

8.链格孢属（Alternaria）取白菜黑斑病病叶，用挑针挑取病斑上的黑色霉状物制片，显微镜下观察。分生孢子长棍棒状，具纵横分隔，呈砖格状，顶端有一长条形喙状细胞。

9.尾孢属（Cercospora）取芹菜早疫病（斑点病）病叶，挑取霉层制片，分生孢子梗不分枝或少有分枝；分生孢子单生，鞭状，具多数分隔。

10.黑星孢属（Fusicladium）挑取梨黑星病叶上的煤烟状霉层制片，分生孢子梗暗色，顶部稍屈曲，孢痕明显；分生孢子淡褐色，1～2胞，瓜子形。

提示 注意分生孢子梗的孢痕，在显微镜透射光源照射下呈现亮点。

11.葡萄孢属（Botrytis）取黄瓜或番茄灰霉病标本，挑取其上的灰霉状物制片观察。分生孢子梗顶端分枝，末端膨大并产生小突起，其上着生多数分生孢子，外观呈葡萄穗状。

12.聚端孢属（Trichothecium）取棉铃红粉病标本，挑取霉层制片观察，分生孢子梗直立，少分隔或不分隔，分生孢子无色双胞，洋梨形，常以基部交错相连的方式在孢子梗顶端聚集成孢子链。

13.青霉属（Penicillium）取柑桔青霉病标本或病菌培养，挑片观察。分生孢子梗集结成束，“扫帚状”分枝，分枝末端为瓶状小梗，生孢子着生在瓶状小梗上。褐孢霉属（Fulvia）取番茄叶霉病标本，挑取霉层制片显微镜下观察。分生孢子梗基部细，上部粗，分生孢子串生，孢子链常分枝并有芽状突起。

（二）腔孢纲

1.炭疽菌属（Colletotrichum）取苹果炭疽病标本制片观察，分生孢子盘埋生于寄主表皮下，垫状无刚毛，成熟后突破表皮，分生孢子梗平行排列成一层，分生孢子单胞。

提示 切片时最好用新鲜采集的标本，如果标本干燥可用蒸馏水湿润一下再进行切片，切出的丝条越薄越好，若用乳酚油作浮载剂效果更好。

2.痂圆孢属（Sphaceloma）取葡萄黑痘病标本，切片观察，孢子梗排列紧密，自盘状子座基部产生；分生孢子盘黑色；分生孢子梗极短，紧密排列于子座上，分生孢子无色单胞，中部缢缩，内含1—2个油球。

3．壳囊孢属（Cytospora）取梨树腐烂病病树皮，徒手切片观察，子座暗褐色，多腔室，似迷宫状，分生孢子器着生于瘤状子座组织内；分生孢子香蕉形。分生孢子与胶体物质混合，吸水膨胀后连同孢子自孔口挤出成为分生孢子角。

4．壳针孢属（Septoria）取芹菜斑枯病病叶，做徒手切片，分生孢子器球形；分生孢子无色，针状，多胞。

提示 分生孢子的横隔须经染色后才能观察清楚；切片操作的最后一步即将切片放到载物台上时再加水浮载样品，这样立即观察可看到分生孢子自孔口向外喷射的现象。

5.壳二孢属（Ascochyta）取高粱粗斑病标本制作切片观察，分生孢子器黑色，分生孢子器扁球形，分生孢子圆筒形，双胞无色。

6．茎点霉属（Phoma）取甜菜蛇眼病标本，切片观察，分生孢子器着生于寄主表皮下，呈轮纹状排列，分生孢子器球形，分生孢子无色单胞，卵圆形。

7．叶点霉属（Phyllosticta）多寄生于叶上。取苹果灰斑病叶，制作徒手切片观察，分生孢子器球形，有孔口，分生孢子极小（小于15μm），卵圆形。

提示 叶点霉属的形态与茎点霉属很难区分，应结合发病部位一起认识。

五、实验报告及作业

1.绘梨孢属、尾孢属和镰孢霉属的分生孢子梗和分生孢子形态图。2.绘炭疽菌属、盘二孢属的分生孢子盘和分生孢子形态图。

实验九

培养基的制作

一、实验目的

了解培养基的配制原理，掌握培养基的制备方法。

二、实验原理

在植物病理学研究工作中经常要使用各种不同的培养基。培养基是按照生物生长繁殖所需要的各种营养，用人工方法配制而成的营养基质。其中含有碳源、氮源、无机盐、维生素以及水份等。微生物在培养基上生长繁殖还必须在最适pH范围内才能生长得更好，因此对不同种类的微生物应将培养基调节到一定的pH值范围。

培养基的种类很多，不同的微生物所需要的培养基不同。依物理性状可分为液体的、固体的和半固体的三种。固体培养基是在液体培养基中加入1.5～2%的琼脂，半固体培养基是加入0.2～0.5%的琼脂。琼脂（agar）又称琼胶或洋菜，是由海藻加工而成，其化学性质稳定，一般微生物均不能分解利用。它在 95℃ 热水中溶化成溶胶，冷却到 45℃ 以下时又重新凝固，故一般实验中常用它作为凝固剂。

根据营养物质来源的不同，培养基可分为天然、半合成和合成培养基三类。天然培养基是以自然界原有的有机物为材料经灭菌后制成，如马铃薯、胡萝卜、水果、大麦粒、高粱粒等。半合成培养基中既有一些天然的有机物质，又有一些成分简单或明确的化合物。如常用的马铃薯葡萄糖培养基（PDA），肉汁胨培养基（NA）等。合成培养基是由一些成分明确的化合物配制而成的，没有任何成分不明确的物质，常用于研究微生物的生理生化性状，如查氏（Czapek）培养基等。

根据培养基用途不同，可分为生长繁殖培养基、富集培养基、贮存培养基、选择性培养基和鉴别培养基等。在植物病理学研究中，最常用培养基有马铃薯葡萄糖培养基，主要用于分离培养病原真菌。

在培养基配制完之后，必须经过灭菌，以便彻底杀死其中原有的一切微生物。

三、实验材料、试剂与仪器

1．材料 马铃薯。

2．试剂 葡萄糖、琼脂等。

3．仪器与用品 高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（或酸度计）、试管、铝锅、搅拌棒、三角瓶、烧杯、漏斗、量筒、纱布、棉花、天平等。

四、实验步骤

PDA培养基（马铃薯葡萄糖培养基）配方

去皮马铃薯 200g

葡萄糖 20g 琼脂 15～20g

蒸馏水 1000ml 自然pH

在PDA培养基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖，这样配制的培养基也称为PSA培养基。1．称量 称量去皮马铃薯 200g，葡萄糖 20g，琼脂15-20g。

提示 琼脂加入的量取决于琼脂的质量，质量好的 15g 就够了，质量差的应适当增加。另外，在夏天气温较高时，适当增加用量。

2．将马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000ml，煮沸30min。用纱布滤去马铃薯残渣。

3．将马铃薯滤液放回锅中，加入琼脂，加热熔化。

提示在琼脂融化的过程中，需要用玻璃棒不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。

4．加入葡萄糖。葡萄糖容溶解后，加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容至1000ml。

提示 通常在制作培养基的锅内用红蓝铅笔标记出不同体积的刻度，1000ml，2000ml等，在定容时直接将水加至已标记的刻度即可。

5．分装 根据不同的实验目的，可将配制的培养基分装于试管内或三角瓶内。分装试管，其量为管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。

6．加塞 在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脱脂的经弹松的棉花，棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，故在植物病理学研究工作中普遍使用。正确的棉塞是形状、大小、松紧与管口或瓶口完全适合，过紧时妨碍空气流通，操作不便；过松则达不到滤菌的目的且棉塞过小往往容易掉进试管内。正确的棉塞头较大，约有1/3在外，2/3在试管内。分装过程中注意不要使培养基沾染在管（瓶）口上以免浸湿棉塞，引起污染。如不使用棉塞也可用橡皮塞或特制的金属、塑料试管帽，为让空气可以自由进出，橡皮塞不要过紧，灭菌前应夹一纱线在管口。

7．包扎 加塞后，将试管用线绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等

8．灭菌 将上述培养基以0.103Mpa，121C , 高压蒸气灭菌20min。

9．搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至 50C 左右（以防斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

培养基经灭菌后，必须放在 37℃ 温箱培养24h，无菌生长者方可使用。PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/LNaOH或1mol/LHCl溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。

提示 pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制低pH的琼脂培养基时，若预先调好pH并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整pH。

五、实验报告及作业

各组上交按计划制备的培养基。

1．为什么有的培养基要调pH值，有的可以不调

2．加压蒸气灭菌为什么比干热灭菌所要求的温度低、时间短

3．想一想，试一试，将几只试管包扎在一起比较牢固？

第四篇：实验中学法制讲稿

中小学生法制演讲稿

金洲实验学校法制副校长：余顺刚

老师们、同学们：

大家好！

常言道：“没有规矩不成方圆。”法律就是调整人们行为的“规矩”。随着社会的发展，法律的作用愈来愈重要，与人们生产生活的关系愈来愈密切。在一定意义上说，市场经济就是法制经济。在对外交往中，法律也是调整国与国之间关系的重要行为规范和准则。作为21世纪主人的青少年朋友，学习、掌握必要的法律知识，是依法治国、构建和谐社会，实现新世纪宏伟蓝图、振兴中华的需要，也是维护人类和平，促进世界发展的需要。

青少年是祖国的未来，党和政府历来十分重视青少年法制教育。党中央、国务院批转的全国第五个五年普法规划将少年儿童的法制教育列为重要内容。广大青少年应当抓住这一有利时机，积极接受法制教育，努力学习法律知识。

第一，通过学习法律知识，迈好人生的第一步。人生的路很漫长，打好基础是人生之旅的关键所在。青少年时代正是长身体、学知识的重要时期，只有学习了法律知识，才能知道什么是合法，什么是违法，学会分辨是非，识别善恶，从小养成遵纪守法的良好习惯。

第二，通过学习法律知识，争做新世纪合格公民。21世纪的中国将是一个法制更加完备的社会，要求每一个公民具有较高的法律素质。广大青少年只有学法懂法，才能树立民主法制观念，明确公民的权利与义务，才能依法办事，依法维护自身权益，成为适应社会发展需要的合格公民。

第三，通过学习法律知识，努力成为中国特色社会主义事业的合格接班人。21世纪建设中国特色社会主义的时代重任和使命将落到青少年朋友的肩上。加强社会主义民主，健全社会主义法制，依法治国，是建设有中国特色社会主义事业的重要组成部分。为了更好地肩负并完成历史赋予的重任，青少年儿童必须用科学的理论武装头脑，必须具有坚定的信念和广泛的知识面，不仅要学习、掌握科学知识，而且要学习和掌握法律知识，增强法制意识。唯有如此，才能使我国实现依法治国的法制目标，才能保障我们伟大祖国的长期稳定、经济腾飞，才能实现中华民族的伟大复兴。今天学校组织给同学们上法制课，通过听讲课、受警示、学法律，从发生在青少年身边的典型事例，与青少年密切相关的法律知识，一点一滴积累，持之以恒学法、守法、用法、护法，逐步树立法制观念，增强法制意识，养成遵纪守法的良好习惯，争做一名新世纪的合格公民。

当前，未成年人包括在校学生犯罪问题，仍然是危害社会治安的一个不容忽视的问题。今天我用几个案例，说明一个道理：中学生应该学法、懂法，应该在德、智、体各方面健康成长。

根据我国《刑法》第14条规定，未成年人年满14周岁已具有刑事责任能力。一旦被受害者起诉，将根据情节轻重，最高刑期高达5年。

2009年5月14日10时30分许，受害人危某与其朋友在铜盘路一网吧上网时，被一名男子持刀从身后割喉，生命垂危，被送至武警总院抢救。刑侦大队于5月15日凌晨在铜盘路后营村201号2楼一出租房内将其抓获，同日上午，在福州某中学抓获林某、欧某等2名涉案嫌疑人。经审理，查明今年4月中旬，危某伙同他人因琐事在铜盘路持械追打杨某等人，杨某怀恨在心并将此事告诉林某等人。案发当日8时许，林某到铜盘路一网吧上网时，看见受害人危某等人也在网吧内上网就打电话通知欧某，欧某又将此事告诉杨某，杨某即在铜盘路永辉超市购买了一把水果刀，并将刀藏入挎包到了网吧，通过林某指点确认，杨某走到危某身后，掏出水果刀割其脖子一刀的事实。目前，3名犯罪嫌疑人均已抓获，他们都将面临牢狱之灾。

近期我地相继发生两起学生受伤害事件，造成了一死一重伤的严重后果，社会影响极为恶劣。

2009年12月23日16时，第十四中学初一(8)班学生张某在放学途中经过大同新村时被一群少年围殴，头部及手部多处受伤。

2009年12月26日19时，美佛儿学校初二(9)班学生李某(男，17岁，到该校高中部科技楼四层上网时，被该校高三(2)班余某、陈某、黄某三位同学殴打，李某用水果刀将余某、黄某刺伤，值班老师发现后立即组织人员将两人送到市医院抢救。余某经抢救无效死亡，黄某正在接受治疗。

某地区两天时间，先后发生两起校园暴力恶性案件，引起相关部门的高度重视。2010年1月21日，洪梅镇洪梅中学一初二男生在放学途中被同校学生群殴，至今仍躺在医院昏迷不醒。

1月22日中午12时左右，市区一所中学的一名高二男生在市区刺桐公园附近，被社会青年砍伤致生命危险。

某区近期也发生一起学生暴力恶性案件。

2010年2月4日3时许，陈某(男，16岁，系一中学学生，在一网吧内被人捅伤后经抢救无效死亡。案件发生后，市公安局迅速锁定该案6名犯罪嫌疑人，经民警做家属的思想工作，犯罪嫌疑人姚某(16岁)、马某(15岁)、董某(17岁)、李某慈(16岁、)、李某守(17岁)、兰某(16岁)分别于2月5日、23、24日到市公安局投案自首，并供认于4日3时许因纠纷在一网吧结伙持匕首捅伤陈某右腿大动脉，致陈某经抢救无效死亡的犯罪事实。

上述案件的发生，反映出当前少数在校学生法制观念淡薄，随身携带刀具现象比较突出，非法携带管制刀具是违法行为。

近年来，校园暴力案件频频发生，且呈逐年上升趋势。经过对案件的认真分析，它们有以下特点：一是案件起因小，许多都是鸡毛蒜皮的小事引起的；二是作案手段和后果均很严重；三是被告人大多性格较为内向。

中学时代，是人生中最为灿烂的时代，对朋友的向往最为强烈，对友谊的憧憬最为多彩，都希望有朋友共享欢乐，又希望有朋友分担痛苦。

那么，同学们听了这几个案例，我们应当从中受到哪些启示呢？应当怎样才能与同学融洽相处呢?如何解决人际矛盾，才能使自己成为集体中受欢迎和愉快的成员呢？我想最起码要牢记以下5句话，15个字：这就是：慎交友、立大志、善慎独、敢维权、要坦白。

1、慎交友。和人交往，一定要慎重，牢记古人忠告：“近朱者赤，近墨者黑”。不要和那些心术不正的人交往，更不要和校外的劣迹者同流合污。

2、立大志。每个青少年都应加强思想品德修养。人的行为，是受思想支配的，没有良好的思想，就不会有正确的行为。学校教育中的思想政治课，法制课不是空的假的，而是实实在在的道理，我们要从中悟出做人的理想价值，不仅学会做学问，学本事，更重要的是要学会做人。要懂的用道德、法律规范自己的行为，不使用暴力或胁迫手段来获取不义之财以满足自己好逸恶劳的生活，从而走上犯罪道路。古人云：“君子爱财，取之有道”。道在何处？我认为，勤劳致富，才是正道。上好高中，考上大学，学好本领，参加工作获取报酬，才是正道。相反，坑、蒙、拐、骗、偷、抢等手段弄钱，那就是邪门歪道，轻则受到道德的谴责，重则要受到法律的追究。我们应该立大志，苦学成才，长大报效祖国，用劳动所得改善自己的生活。

3、善慎独。我提醒同学们一定要有独立思考的能力。遇事该怎么做，不该 怎么做，要有自己的主见，且不可盲从。

4、敢维权。每一个青少年都应学法、知法、懂法用法，学会用法律武器保护自己的合法权益。刑法对正当防卫作了规定，即为了国家、公共利益、本人或他人的人身、财产和其他权利免受正在进行的不法侵害，而采取的制止不法侵害的行为，对不法侵害的人造成损害的，属于正当防卫，不负刑事责任。对正在进行行凶、杀人、抢劫、强奸、绑架及其它严重危及人身安全的暴力犯罪，采取防卫行为，造成不法侵害人伤亡的，不属于防卫过当，不负刑事责任。就学校而言，如果每个同学都充满正义感，见义勇为，碰到类似抢劫的情况，挺身而出，人人喊打，我们就能创造一个安定团结的学习环境。犯罪分子就没有藏身之地。

5、要坦白。一旦做错了事，甚至犯了法，就要坦白地向老师、学校、有关机关把事情讲清楚，争取从宽处理。今天的几个案例中，被告人有的能如实供述犯罪过程，才被依法从轻发落，判了缓刑。所以，我奉劝同学们最好是从小学法、懂法、守法，万一触上法网，就应该主动坦白、自首，如实交待，争取从宽处理。已经踩上犯罪边缘线以及准备实施此类行为的同学，如果再不悬崖勒马，亡羊补牢，那么，上述那些犯罪嫌疑人的今天，就是你的明天，因为谁把法律当儿戏，谁就必然亡于法律。

最后，祝愿青少年朋友们，同学们，勤奋学习，只争朝夕，时刻准备着，为创造中华民族更加灿烂辉煌的明天而努力。

第一，以诚待人、实事求是，不虚伪浮夸，不轻率鲁莽。既要力求在集体中做出成绩，但又不能自视清高，孤芳自赏。第二，要主动接近同学，广泛交友，不搞小圈子，不排斥异己。不以己度人，不以性格差异、家庭背景、成绩优劣、观点异同作为交友的标准。如果不平等待人，那会使自己陷于孤穴。

第三，善于控制情绪，不滥用感情。遇到不愉快的事不要迁怒他人有了激动的情感想抒发还得看时间、场合、对象。

第四，要善待同学，正视客观环境。对同学要学会尊重体谅。不要贬低议论他人。人际交往中的大忌就是背后对人指指点点，这是恶化人际关系的一个主要原因。对同学、对环境不要过高要求，要学会宽大容忍，要善于处理矛盾，学会谦让妥协、不要总是以自我为中心。

中小学生法制演讲稿

金洲实验学校法制副校长：余顺刚

同学们、青少年朋友们：

你们好！

今天应邀参加学校举行的法制课，很高兴，借此机会从发生在青少年身边的典型事例，与青少年密切相关的一些法律知识，讲上几方面，与大家共勉。

常言道：“没有规矩不成方圆。”法律就是调整人们行为的“规矩”。随着社会的发展，法律的作用愈来愈重要，与人们生产生活的关系愈来愈密切。在一定意义上说，市场经济就是法制经济。在对外交往中，法律也是调整国与国之间关系的重要社会规范。作为21世纪主人的青少年朋友，学习、掌握必要的法律知识，是实现新世纪宏伟蓝图、振兴中华的需要，也是维护人类和平，促进世界发展的需要。

青少年是祖国的未来，党和政府历来十分重视青少年法制教育。党中央、国务院批转的全国第五个五年普法规划将少年儿童的法制教育列为重要内容。广大青少年应当抓住这一有利时机，积极接受法制教育，努力学习法律知识。

第一，通过学习法律知识，迈好人生的第一步。人生的路很漫长，打好基础是人生之旅的关键所在。青少年时代正是长身体、学知识的重要时期，只有学习了法律知识，才能知道什么是合法，什么是违法，学会分辨是非，识别善恶，从小养成遵纪守法的良好习惯。

第二，通过学习法律知识，争做新世纪合格公民。21世纪的中国将是一个法制更加完备的社会，要求每一个公民具有较高的法律素质。广大青少年只有学法懂法，才能树立民主法制观念，明确公民的权利与义务，才能依法办事，依法维护自身权益，成为适应社会发展需要的合格公民。

第三，通过学习法律知识，努力成为中国特色社会主义事业的合格接班人。21世纪建设中国特色社会主义的时代重任将历史地落到青少年朋友的肩上。加强社会主义民主，健全社会主义法制，依法治国，是建设有中国特色社会主义事业的重要组成部分。为了更好地肩负并完成历史赋予的重任，少年儿童必须用科学的理论武装头脑，必须具有坚定的信念和广泛的知识面，不仅要学习、掌握科学知识，而且要学习和掌握法律知识，增强法制意识。唯有如此，才能使我国实现依法治国的法制目标，才能保障我们伟大祖国的长期稳定、经济腾飞，才能实现中华民族的伟大复兴。

今天学校组织给同学们上法制课，通过听讲课、受警示、学法律，从发生在青少年身边的典型事例，与青少年密切相关的法律知识，一点一滴积累，持之以恒学法、守法、用法、护法，逐步树立法制观念，增强法制意识，养成遵纪守法的良好习惯，争做一名新世纪的合格公民。

第五篇：数字信号处理实验讲稿

邯 郸 学 院

讲 稿

2010 ～2011 学年 第 一 学期

分院(系、部)： 信息工程学院 教 研 室： 电子信息工程 课 程 名 称： 数字信号处理

授 课 班 级： 07级电子信息工程

主 讲 教 师： 王苗苗 职

称：

助教（研究生）

使 用 教 材： 《数字信号处理》

制 作 系 统：

Word2003

邯郸学院制

实验一..Matlab仿真软件介绍

一、实验目的

熟悉Matlab仿真软件

二、实验设备和元器件

含Matlab仿真软件的计算机

三、实验内容和步骤

1、学习Matlab仿真软件的安装

2、熟悉Matlab仿真软件的操作环境

3、直接在Matlab仿真软件的命令窗口实现数值计算

4、编写M文件

四、实验报告要求

按照《Matlab程序设计》模板提交实验报告

五、预习要求

1、熟悉Matlab仿真软件

2、参阅Matlab及在电子信息类课程中的应用（第2版）唐向宏 电子工业出版社

实验二 离散信号和系统分析的Matlab实现

一、实验目的

1、Matlab实现离散信号和系统分析

2、进一步熟悉Matlab软件操作

二、实验设备和元器件

含Matlab仿真软件的计算机

三、实验内容和步骤

1、利用Matlab产生离散信号

2、利用Matlab计算离散卷积

3、利用Matlab求解离散LTI系统响应

4、利用Matlab计算DTFT

5、利用Matlab实现部分分式法

6、利用Matlab计算系统的零极点

7、利用Matlab进行简单数字滤波器设计

四、实验报告要求

按照《Matlab程序设计》模板提交实验报告

五、预习要求

预习课本上的相关内容

实验三 利用Matlab实现信号DFT的计算

一、实验目的

1、Matlab实现信号DFT的计算

2、进一步熟悉Matlab软件操作

二、实验设备和元器件

含Matlab仿真软件的计算机

三、实验内容和步骤

1、利用Matlab计算信号的DFT

2、利用Matlab实现由DFT计算线性卷积

四、实验报告要求

按照《Matlab程序设计》模板提交实验报告

五、预习要求

预习课本上的相关内容

实验四 利用Matlab实现滤波器设计

一、实验目的

1、Matlab实现实现滤波器设计

2、进一步熟悉Matlab软件操作

二、实验设备和元器件

含Matlab仿真软件的计算机

三、实验内容和步骤

1、利用Matlab实现模拟低通滤波器的设计

2、利用Matlab实现模拟域频率变换

3、利用Matlab实现脉冲响应不变法

4、利用Matlab实现双线性变换法

5、利用Matlab实现数字滤波器设计

四、实验报告要求

按照《Matlab程序设计》模板提交实验报告

五、预习要求

预习课本上的相关内容

实验五 利用Matlab实现FIR滤波器设计

一、实验目的

1、Matlab实现实现滤波器设计

2、进一步熟悉Matlab软件操作

二、实验设备和元器件

含Matlab仿真软件的计算机

三、实验内容和步骤

1、利用Matlab实现窗函数法

2、利用Matlab实现频率取样法

3、利用Matlab实现优化设计

四、实验报告要求

按照《Matlab程序设计》模板提交实验报告

五、预习要求

预习课本上的相关内容

实验六..随机信号功率谱估计的Matlab实现

一、实验目的

1、Matlab实现实现滤波器设计

2、进一步熟悉Matlab软件操作

二、实验设备和元器件

含Matlab仿真软件的计算机

三、实验内容和步骤

1、利用Matlab实现随机序列

2、利用Matlab计算相关函数的估计

3、利用Matlab进行非参数功率谱估计

4、利用Matlab进行AR模型功率谱估计

四、实验报告要求

按照《Matlab程序设计》模板提交实验报告

五、预习要求

预习课本上的相关内容

实验七..数字滤波器结构的Matlab实现

一、实验目的

1、Matlab实现实现滤波器设计

2、进一步熟悉Matlab软件操作

二、实验设备和元器件

含Matlab仿真软件的计算机

三、实验内容和步骤

1、利用Matlab实现数字滤波器直接型设计

2、利用Matlab实现数字滤波器级联设计

3、利用Matlab实现数字滤波器并联型设计

4、利用Matlab实现数字滤波器格型设计

四、实验报告要求

按照《Matlab程序设计》模板提交实验报告

五、预习要求

预习课本上的相关内容

实验八....利用Matlab实现信号小波分析

一、实验目的

1、Matlab实现实现滤波器设计

2、进一步熟悉Matlab软件操作

二、实验设备和元器件

含Matlab仿真软件的计算机

三、实验内容和步骤

1、小波测试信号

2、分解与重构滤波器组

3、离散小波变换

4、离散小波反变换

5、基于小波的信号去噪

6、基于小波的信号压缩

四、实验报告要求

按照《Matlab程序设计》模板提交实验报告

五、预习要求

预习课本上的相关内容