第八章 动物细胞培养和生长过程

第一篇：第八章 动物细胞培养和生长过程

第八章

动物细胞生产和培养过程

8.1背景

尽管先前有许多调查者研究了动物细胞在试管中的习性。但是。1949年，这种能产生有用物质的动物细胞首次被利用。在当时，J.F Enders 证明了脊髓灰质炎病毒在培养的动物细胞中可以生长，而这种细胞源于灵长类动物的神经和非神经组织中。

简洁的总接一下这一伟大的探索工作，开始与19世纪80年代早期。根据论证白细胞能在躯体外分裂。这种细胞是通过观察注入在血清、淋巴或腹水中以切成片状的动物组织所得。（1907年）Ｒ．Hａｒｒｉｓｏｎ的悬在下面的淋巴当中的（蝌蚪骨髓）组织方法。而这种盖玻片密封在一个中间挖空的载玻片上。这项伟绩（１９１３年）由Ｃａｒｒｅｌ所继承和发展。他研发了一种维持外来物质特别是细菌培养的复杂方法，其他人很少有这种能力，然而，截至１９２８年，培养基的发展促进动物细胞的增长以至于Ｍａｉｔｌａｎｄｓ能够在装有切碎的老鼠或小鸡胚胎的试管中培养病毒。ｅｎｄｅｒｓ在脊髓灰质炎的工作中运用此方法。脊髓灰质炎的作用是有他和他的同事通过使用抗生素获得相当多的帮助，这些抗生素在十年前是非常流行的，２０世纪５０年代早期Salk发明的脊髓灰质炎疫苗是由猴子的肾和睾丸细胞在试管培养中生产的。一旦这种技术被确立，培养中生长的小鸡或其他原始的胚胎细胞生产其他疫苗。【麻疹病毒（１９５８年）。流行性腮腺炎病毒（１９５１年）、腺病毒（１９５８年）】

８．２从动物细胞培养中获得的不同产物

动物细胞过去是现在仍然是从培养动物细胞中获得最具有商业性的产物，目前，每年生产大约１．５＊１０９剂量的口啼疾疫苗，近似于纽卡斯尔病和马立克氏病的家禽疫苗。人类病毒疫苗以每年１０８剂或者较低一点的速度在运用。干扰素生产的过程也是一大规模，接近或超过这些运用于兽医疫苗的情况下，然而有利于具体的合成杂交瘤细胞相对于免疫学方面是毫无疑问的，在未来的十年里是举足轻重的。表８。１中列出已经或者可能在培养动物细胞过程中获得的主要产物，这并不是唯一的产物，而是表现着主要产物以及能在这些区域内获得的物质的类型。

８．３产物生产方法的综述

图８。１到８。３概括的描述了对于动物细胞培养体系中产物的发展。它包括三个阶段，第一个阶段是准备阶段，第二阶段是动物细胞培养阶段，第三阶段是产物的产生阶段。早某种体系上（荷尔蒙和免疫生物产物）最后一阶段是区别于单元细胞的生产方式。然而在其它方面，最后一阶段跟病毒细胞培养的传染有关或与诱生剂有关。（如干扰素，见表８。３）

对生产经营的很多努力涉及到质量控制系统，与此同时，在线和离线检测在生物技术领域中随处可见。质量控制测试的设计不仅能够确保使用的物质能够促进细胞或产物的发展，还能确保他们摆脱外来的生体，例如，污染物

图表８。２清楚的表明生长培养基的准备工作是一项艰难而又需要专门的技术的过程，当培养基所确定的组份容易控制时，最有困难的两种组份是水和血清。

水可以从多种资源中获得，甚至蒸馏和去离子作用后，水也可能包含着对细胞生长不利的物质。对此，格陵兰冰岛底部所融化的病是一种很有用的参考物质，贮备水的缺乏带来一些困难。细菌能在室温蒸馏水中达到１０５单元的含量，同时远离组成的变量，这种细菌的产物少部分可能是有毒的，在８０C贮藏的水通常被攻克，在这个温度下表面将无菌。

也可以制备没有血清的培养基，但并非所有的细胞可以再生。然而这种细胞培养基的结合对密封材料的产生没有多大用处。

以去除免疫球蛋白成分的血清在病毒生产体系方面最有用这种病毒生产体系是通过当地生产的血清包含的对生产病毒的抗体的一种体系，虽然买的和做实验的血清的价格不菲，但是室内生产是有可能的，血清质量的控制的彻底性对可靠的重复运转是很有必要的。在零下２０C贮存预先测试的血清是经常可取的，因为他能够代替新鲜血清质量减退的这些时光，（通常夏天较容易）。牛胎血清经常被应用于细胞生长发面，但是牛胎血清既贵又罕见。带有噬菌体支原体这样的物质也是最可靠的。也能成批成批的管擦牛胎血清的生长特性，由于来自幼地鼠地肾的细胞，９０％利润从成年牛的血清也可以得到。动物细胞能生长在两种不同类型的培养基上，如果多数动物细胞首次被运用到表层或者固体基质。那么他们可以被诱导分裂，正好相反，一些可能在悬浮液中被诱导自由生长，前者被称为单层细胞，应为他们在基质上形成一层厚壁细胞，即使在连续培养的添加组织也能形成，依赖基质生长的细胞被称为是悬浮细胞或非贴壁依赖性细胞。

我们认为只是生长的单层细胞比悬浮细胞有特别少的致癌基因（能使细胞致癌的基因序列），因此对于人类的消耗，这种细胞被用于生产物质，多种也证明此种 细胞比在悬浮液中的生长的细胞有能力生成更多的病毒毒性。但是如病毒或是产物从悬浮生长的细胞生产制造，那么多数过程会相对容易些，兽医所使用的产物按这种方法所得（脚嘴病毒），同时也包括a-干扰素以及有关杂交瘤细胞的免疫学生物特性。尽管在选择测试体系方面，后两种产物所使用的细胞被证明是可以致癌的，但是在生产阶段不会有什么危害，或者是优先使用单位细胞的产物。在表8.2中，有一个对于单层细胞使用有利和不利条件的总结。我们可以得出结论，在细胞类型方面能够生产商业性细胞是很有必要的。并且也需要两种必要的但不同的技术，下面将陈述两种不同的技术。

8.4单层细胞培养系统

获取基质的生产细胞系统可以被划分为两种类型，一种是增加设备单元的数量以扩大进程；另一种是多重和过程。通过增加设备的尺寸来实现扩大

8.4.1单层细胞生长的多重过程

传统的来讲，固定的玻璃瓶或者是培养皿内已经生成了单层细胞，这种瓶子有许多结构，被命名为brockway，roux ,Carrel,Baxter或Medical Flats，钠玻璃可能被使用，但是硼硅酸盐会更受欢迎，因为他尽管越复杂，但越坚硬越容易修理。那玻璃瓶也许会单独使用，但是经常固定在搁架上便于运输。能够使细胞生长在瓶的内表面而不是瓶底的系统，它的发展同样是滚瓶系统的发展。尽管所使用的矩形瓶和十字型瓶也能够转动，但是对于这个系统，圆柱型瓶被广泛使用，有许多瓶子能够达到180cm长，滚筒上边放着瓶子，而这样的滚筒放在机械支架上。一套标准的设备可以转动12个瓶子，6~10套支架可以组成一个生产单元，在意大利布雷西亚的Zooprofilattico Sperimentale大学学院有7000个瓶子在每四个培养箱里可同时转动。再次，滚动瓶系统被发展到了极限，对于已大量瓶子为媒介的细胞和病毒的生长同时还要保持无菌培养，所以这种增长是很难克服的，布雷西亚单元高度的自动化装置提高了这种方法的经济可行性。

8.4.2单层细胞生长的单元程序

20世纪60年代中期，关于单层细胞的培养单元程序得到发展，同时单元程序的发展现在已变成一项易于接受的首选的实用技术。最近，其他方面的创始人重新检查了这一系统的许多细节，结果跟随最近的发展，不同的系统将在下边描述

根据可靠的成功的多重过程的运转，被设计取代他们的单元模式跟随多重系统的基本模式，这样，在器皿中的一套弹簧片单元程序得到发展，同时使人联想到一架子的瓶子，这样的系统有一次性的聚苯乙烯、聚碳酸酯和钠玻璃组成。后期的发展是采用一叠盘子同时以直接构造的形式转动他们，要么以水平的形式转动他们，后期系统正在扩大密集利用的情况下，目前作为B或纤维素细胞干扰素的一种方式，在清理与细胞培养运行期间，这种系统的扩大反映着一系列工程技术困难与操作问题，按照这种方式装入容器的表层数量很有限，却有两种结果：

（a）磁盘双方都被使用，（b）以稀释形式生产产物正如生长培养基冲洗过后，而培养基要么达到饱和程度，要么至少半饱和程度，总共达到外面容器的容积。从已经发展的大范围多试管细胞的繁殖，我们看到了滚瓶系统的发展，系统达到2001量的大规模发展，近期的一套细胞大量生长的设备，Gyrogen有一排平行的试管组成，这种试管是从1001的量结合外界圆柱形壳在外部力量的驱动下转动。这套昂贵的设备可用来生产，但是是否合理的利用能得到经济上有力的价值好没有被证实。半空纤维中的试管收缩是唯一导致生物量的发展。对小规模来讲，在外界纤维以细胞生长的方式刺激动物组织结构或者通过纤维腔来促使营养培养基的渗漏。这是非常有可能实现的，在两种意义上，这种系统有些优势，正如废弃物质（含有细胞毒素），和产物能够从细胞当中分开，这种细胞是通过纤维的半透膜产生的。最近，这种自然系统已经发展到了0.21，同时在良好的发展计算机控制和检测系统得到了商业化的应用和发展。

目前，为了细胞和产物的生产，许多项目组利用填充层，例如B干扰素，口蹄疫病毒和猪水疱病病毒。经过玻璃球瓶内的聚苯乙烯小白球随着弹簧不锈钢带的变化而变化，然而，伴随着大多数便利的集中在辅助培养基贮藏中控制活性（PH和二氧化碳），通过循环流动的培养基，最基本的填充曾在多数系统中是很普通的，他们相对容易和扩展，这是由于处理圆柱形填充的机械故障很容易得到排除处理，正如玻璃作为一种基质。操作的可靠性得到提高，同时实验室研究的 在玻璃表层和细胞之间的关系也没有改变，更愿意不来说，当在一个熟悉的基质中形成产品时，控制新的生物产品的生产者几乎没有多大问题。

很显然，静态填充床没有他们自己的问题。跨层的斜度是相同的，检测培养细胞有一些难度，但不能放在显微镜下观察。通过检测循环的培养基的成分，（细胞生长的葡萄糖浓度，细胞分裂的乳酸脱氢酶活性好最终病毒解体），尽管后边的问题容易处理，但是不均一的多项系统问题仍然存在。

A．J.van Wezel发展了对于单层动物细胞生长的同种系统。1967年它表明细胞以火胶棉镀膜能生长在0.2mm的葡聚糖纤维素A50颗粒上，凭借微小的搅动，这种颗粒可以成悬浮状态，相对密度为1.05，同时当系统从它本身的方式搅拌时，细胞可以吸附在这种为载体上，由于这些最初的观察，众多的观察者已经表明可以达到5001的量。生长在为载体上的细胞产生物质是有可能的。最新报告表明，来自非洲的猿猴肾细胞脊髓灰质炎病毒的产量是存在一个现代的为载体表面。其他为载体有聚苯乙烯、聚丙烯甚至是玻璃微球体。然而，在大多数情况下似乎葡聚糖为载体提供了最合适的基质。

众多研究者已经能够成功可靠的用为载体系统来操作，然而，有些研究人员的实验还有很大的困难，涉及到研究者所希望生成的特殊细胞任然有些困难。特殊细胞本身是集体组成的产物，以及他生成次生产物的方法问题。源于其他合适设备与不合适设备的不当使用以及培养基选择的不恰当问题上。这些选择阶段或者是细胞与玻璃粉。首次关键性的联合或者时候起贴壁细胞的可重复性。

总之，对于基质有要求的细胞的生产，在此环境下，微载体成为首选方法。而且操作良好并且可靠，但是玻璃球的填充层能够提供一个可靠的后补系统。其他系统也会有一定的位置，为准备一种独特的细胞类型能够生长和生产产物提供的特殊的环境。

8.4.3悬浮细胞的生产过程

悬浮动物细胞的培养过程不同于细菌的培养，一条近期的评论描述了许多需要检测和控制的参数，所使用的设备是一个有较低的搅拌和通风度相当标准的发酵器。把传统方法当作一个系统，并且此系统已经增大到8000L。来自于幼地鼠肾细胞货真不同细胞的用于口啼疫病毒的商业产物，如此规模得益于仓鼠，也就是所谓的2FFA-3.同样，有Nsmalwa淋巴细胞所产生的a-干扰素，目前以同样的规模的相似设备来生产。搅拌驱使系统的最基本的修改等同于气升式发酵罐的运用。通过在发酵罐底部引进气泡来提供三料的混合。因为这些在移动也提上是非常有效的而且不会破坏细胞。传统的喷射会对动物细胞引起严重的破坏，这种喷射通过产生一些小的气泡试图增加气泡的表层区域的面积。溶氧水平在标准状况下本身下降15%一下或者上升到溶氧量以上才会有害。但在气液接口处的相互作用的细胞可能会导致细胞活性的损失。令人惊奇的是，起因于叶轮的飞快的速度造成的物理搅拌似乎没有多大伤害，然而，对于相关参数的效应和数量的研究中需要被保留着。

当传统的的不锈钢槽作为科技的主导时。科技不发达的国家可能会修改一些系统。对此通过外磁条力量来驱动，101搅拌瓶可以制造出许多有用的疫苗，（每年均有5*106剂）。印度尼西亚的泗水市安装了此系统。在此地，每个月将产生250000剂疫苗。同样Polgolla和斯里兰卡基本设备的安装也很到位。

生产细胞还是为这些细胞收集信息，动物细胞的连续培养是可行并且有用的方式。最近研究已经表明了在系统的计算机在线监测和控制的优势。购买相应的计算机硬件设备也比较容易。

然而动物细胞的连续型生产利用以及具有商业吸引力的细胞产物还，没有实现。

8.5后期过程

当动物细胞应用于原材料生产时，许多后期过程等同于蛋白质化学技术的其他领域。仍然考虑到存在些更多的独特细节的操作系统。例如，过滤、筛选操作，离心分离操作（适速），沉降操作，包析发的层析操作以及浓缩干燥（反渗透法），这些普通的加工技术很难应对，生物病毒物质的钝化，整个病毒颗粒活性子单元的产生以及用于有用物质的形成具有划时代意义。而这种划时代是以动物细胞为根据的独特的处理工程。

8.5.1钝化作用

尽管许多疫苗是由易感染的病毒粒子形成，但是一些被杀死或钝化。钝化在确保接受着没有没有危险是非常重要的，钝化药物通常使用甲醛，然而用B—丙醇酸内酯来钝化狂犬病毒。进来。用亚胺（乙炔和吖丙叮）来钝化脚口疾病病毒。然而亚胺会使脚口疾病病毒的结构发生轻微的变化。甲醛与衣壳体交联形成更稳定的结构。其他钝化法的紫外线辐射和缩水甘油醛，在所有钝化方法中，确保钝化的病毒具有单分散性是非常重要的，以至于失活剂不能阻止病毒在中型团块中有效的钝化。

8.5.2亚基的形成

病毒疫苗必须考虑接受疫苗者的危险，如果不适当的钝化可能会形成亚基。依靠亚基的裂解最终将会形成一小部分致疾病的病毒。能够形成亚基的病毒有狂犬病毒，肝炎病毒、单纯性疱疹、巨细胞病毒和流感病毒。近来，尝试从流感病毒中分离血凝素糖蛋白免疫原表明疫苗的有效性了、，尽管有效性和天然病毒不同，到目前为止，研究表明从病毒中分离出的糖蛋白的竞争性比原始病毒低。但当足够的材料管理可以得到足够的保护反应。8.5.3产品配方

活的病毒疫苗通常包含1~4种不同类型的病毒。每剂有10活性病毒，有些材料需要冷冻干燥保存再生物保护剂中像流感病毒，人或牛的牛痘病毒或血清蛋白谷氨酸盐和磷酸盐离子。另一方面，杀死的病毒疫苗大约10为一剂.这些混合物被称为佐剂，佐剂有强效的生物免疫原特性。佐剂的化学组成是不均等的，像强心苷、皂素、各种铝盐（氢氧化物，硫酸盐。磷酸盐）和一些确定的油脂，与水中悬浮的病毒均匀的发生生物交联结合形成水油乳状混合物。油水乳状物在含有去垢剂的无机盐水溶液中经过第二次乳化作用。这些物质的作用许多是一致的，他们促使身体和化学免疫系统最大速率合成大量的有用抗原。

8.6 基因工程动物细胞和细菌

在原核细胞和真核细胞中插入确定的核酸序列的能力对于细菌和动物细胞具有很广泛的意义。作为一种产物，蛋白质能够插入特定的核酸。而基于动物细胞的活的病毒疫苗形成过程不可能取代基于基因工程细菌的过程。这是清楚的，一些动物细胞生产的胰岛素和一些α-干扰素商业上用原核生物生产。另外一些像用于口蹄疫病毒

3的死的病毒疫苗，骨髓灰质炎和各种干扰素商业上可以在细胞类型生产。然而，基因工程动物细胞能够使蛋白质糖基化成为更受欢迎的基质用于人生长激素，马血溶性酶诱导物，组织血纤维蛋白溶原激活剂的生产。我们目前看到了备受争议的生物技术产业新时代的开端。现在自信的预测未来的发展前景还很难，但是这些多潜力的方法必将给我们将来制造生物产品带来很大的冲击。

第二篇：动物细胞培养总结! !!!

动物细胞培养总结 一．实验准备

1.实验器械、器皿的清洗和消毒（1）清洗和包装

离心管(1.5ml，2ml,15ml)若干，冻存管若干放进铝饭盒，用牛皮纸包裹，系紧棉绳，用笔在饭盒上和牛皮纸上标记盒内所装物品名称、数量、日期和所属人名称。

蓝枪头两盒，黄枪头白枪头各一盒用牛皮纸包裹，用棉绳扎紧。取适量蒸馏水于4L玻璃瓶，瓶盖拧松半圈。

过滤器，250ml玻璃瓶，500ml玻璃瓶用自来水毛刷洗涤剂刷洗，蒸馏水润洗，烘干。

过滤器两部分分别包裹，先将瓶口部位用锡纸包裹后，再罩以牛皮纸，再用棉布密包起来，用棉绳扎紧。

玻璃瓶拧下瓶盖，瓶身浸酸。浸酸时应注意安全，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁以便浸酸结束后清洗耐酸手套，防止走动时酸液滴到地板上不好清洗。瓶口慢慢沉入液面下，注意缓慢降低瓶身，使液体慢慢浸入瓶内，以免产生气泡溅出酸液，发生危险。浸酸时器皿要充满酸液，勿留气泡，浸泡过夜。取出瓶身时，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁，取出后将瓶身放入盆内水中在转移至水池边清洗，以免酸液滴落地板不好清洗。换水洗几次，待水澄清后开始冲洗，每瓶都用自来水灌满，倒掉，重复15次，再用蒸馏水漂洗5次，去离子水漂洗3次，烘干备用。（2）消毒灭菌

1>全自动高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，放入物品，瓶类物体须拧松盖子后放最上面一筐，盖上灭菌锅盖，拧紧盖子至温度显示栏的左上角有一红点亮灯，按start开始升温。若灭有无菌水或玻璃瓶待降温至常温再打开，打开后立即拧紧，无菌水瓶口封上封口膜。若没灭瓶类物品，降温至80度左右即可打开灭菌锅，须戴上线手套取出。

2>手提式高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，检查设定是否为121度20分钟，放入物品，盖上灭菌锅盖，注意导气管一定插到锅底并不能堵塞，用手对称地拧紧锅盖螺栓，再用扳手继续拧紧。加温升压之前，先打开排气阀门，加温约半小时后见排气阀处开始排残留在锅内的冷空气，排气五分钟，关闭排气阀，继而开始升压。灭菌后不要立即打开气阀放气以免水汽喷出。待自然降温至常压才能打开气阀。

玻璃瓶须拧紧，饭盒，枪头灭菌后放入烘箱烘干备用。2.无菌间消毒及设备检查

用84消毒液拖地，用原液按照1：29的比例兑水，抹布、拖把擦洗。配400ml 75%酒精于盆中，用酒精棉仔细擦拭CO2培养箱，超净台，超净台内物品，显微镜，桌面，若培养箱内未培养细胞可以再打开高温灭菌模式将培养箱灭菌一次。

用蒸馏水擦拭清洗水浴锅内壁，注意底座不要沾水。检查CO2总压力表，若读数不足四分之一提前预定CO2瓶，换瓶时需要扳手。CO2培养箱最下层的增湿盘须定期观察加水，将增湿盘内注入1/2无菌蒸馏水，并将盘直接放置在培养箱中央。启动培养箱，培养箱接通电源，增湿盘加水，连接好气体供给，检查有无漏气，输入系统设置。设置温度和二氧化碳。

紫外照射无菌间30分钟，注意屋内不要有人以及培养基等试剂。3.细胞培养用液的配置及分装

RPM1640培养基配制：将干粉型RPM1640培养基溶于总量1/3的去离子水中，再用1/3水冲洗包装内2次，倒入培养基中，以保证所有干粉都溶解成培养液，根据产品说明的要求和实验补加谷氨酰胺和NaHCO3 ,倾斜三角瓶轻轻放入转子，用磁力搅拌器搅拌2h。用泵使培养基在超净台内通过灭菌的过滤器，过滤除菌，分装后置4度冰箱保存备用。使用前调pH至7.0，加双抗于培养液中浓度为1%，使用时加胎牛血清10%FBS.胎牛血清FBS的处理：使用前应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体，将胎牛血清放入56度水浴中30分钟，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。分装前提前2天放4度冰箱解冻，溶解完全后于超净台内分装为25ml每管，留2管放四度备用，余下放-20度冻存。配制含血清培养基或冻存液前务必提前一天取出分装后的血清四度溶解备用，血清融化很慢。

5%NaHCO3溶液配制：5g NaHCO3，100ml蒸馏水，NaHCO3溶于水后，过滤除菌。0.25%胰蛋白酶液200ml在超净台内分装成每管1ml或2ml，封口膜封口，-20度备用。

双抗溶液配制：80万单位青霉素加4ml灭菌D-Hanks液，即成20万单位/ml溶液。100万单位链霉素加5ml灭菌的D-Hanks液，即成20万单位/ml溶液。两溶液各取0.5ml混合，加入9mlD-Hanks液，则成含青链霉素各1万单位/ml，分装后置于4度冰箱保存备用。

二．操作步骤 注意事项：

1、所有实验用的器械，仪器灭菌，消毒，烘干。

2、打开溶剂，培养瓶瓶盖时，瓶口及瓶盖在酒精灯上烤一下。

3、用完溶剂，培养瓶时，瓶口及瓶盖也要在酒精灯上烤一下。

4、所有物品放入超净台需用酒精棉擦拭，包括手伸出窗口拿取物品再回到窗内时需要重新用酒精棉擦拭。开始工作：

1、实验前换紫外照过的白大褂和拖鞋。

2、戴橡胶手套，75%乙醇擦手，然后用75%乙醇擦一下台面，点燃酒精灯。

3、取待用的细胞，旋紧瓶盖。

4、胰酶消化缓慢时可以将细胞置于5%CO2、37度培养箱中1min-2min，目的是提高酶活性，促进消化。1.细胞复苏

提前预冷离心机，设参数为4度，1000r/min,5min。

将枪头，装有离心管的饭盒，垃圾盒放入超净台，酒精棉擦一遍超净台台面和移液器尤其枪口，以防别人用枪时不慎沾染脏污堵塞枪口。超净台和房间照15分钟紫外，照紫外的同时取出无血清培养基和含血清培养基37度水浴加热。

关闭紫外，打开风机，升高窗高，点燃酒精灯，用镊子从饭盒中取2个15ml离心管放至试管架，每管加入3ml无血清培养基，提前剪好2条封离心管的封口膜备用。

戴上橡胶手套再套上线手套，用镊子从液氮中取出塑料冻存管，用手拿冻存管迅速浸入37度水浴中，剧烈急速摇晃冻存管，因为有防水胶布缠裹不用担心进水染菌，使其急速融化，注意管内冻存细胞的融化情况。基本转为液态时将冻存管取出，摘下线手套，冻存管转移至超净台内，用酒精擦手，擦拭冻存管尤其管口，撕下胶布和封口膜，再擦拭管口，整个溶解过程尽量在30s至1min内完成。(注意：这一步对细胞存活率至关重要。既要尽快融化以减少融化过程对细胞的损害，又要尽可能减少细胞在较高温度停留的时间以减少DMSO对细胞的毒害，切不可将冻存管放在烧杯内不管。)打开冻存管管盖，逐滴加入1ml无血清培养基，轻柔地将冻存管内的细胞悬液吸取出来，转移至已备好的离心管内，轻轻摇混匀，盖上管盖，轻轻地上下颠倒混匀。封上封口膜。

低俗离心1000r/min,5min。小心地吸出上清液，要求上清液尽可能吸走，同时又不触及管底沉淀的细胞。（较高要求时可以用手指轻弹离心管管底，将细胞团分散，加入10ml无血清培养基混匀离心10min弃上清再洗一次，有助于减少DMSO残留。）加3至5ml培养液至沉淀的细胞，轻轻摇晃使分散成细胞悬液，将细胞转移至培养瓶中，拧紧盖子，转移至培养箱中再反旋拧松半圈，以利于瓶口内外进行气体交换，注意取出培养瓶时须先拧紧瓶口。37度恒温箱中培养。第二天观察细胞生长情况。培养基瓶盖过火，拧紧后封上封口膜。收好物品，擦一遍台子，灭酒精灯。2传代培养

附着型胞(adherentcell)传代培养

离心法提前预冷离心机，设置好参数4度，1000r/min,5min。倒液法不需要。

将灭菌枪头，装有离心管的饭盒，新培养皿/瓶,垃圾盒放入超净台，酒精棉擦一遍超净台台面和移液器尤其枪口，以防别人用枪时不慎沾染脏污堵塞枪口。超净台和房间照15分钟紫外，照紫外的同时从冰箱取出PBS,胰酶，含血清培养基于37度水浴加热。关闭紫外，打开风机和照明，升高窗高，点燃酒精灯，将所需试剂先擦瓶底，放在台子上再擦侧壁一圈，擦瓶口瓶盖，撕下封口膜，再仔细擦一遍瓶口。用喷过酒精的塑料筐将细胞培养瓶拧紧盖子拿到超净台旁的椅子上放平放稳，每三瓶/皿一摞拿入超净台先擦最下面一个的底部，擦好后放在台面上，擦一摞的侧面一圈，在分别擦底面顶面瓶口，直到所有培养瓶各个面及瓶口擦好，注意不要擦到有marker标记字迹的部位，酒精会擦掉字迹，若擦到字迹待酒精干后立即补写上以防事后记不清。

轻轻倒掉旧培养液，注意不要使液体倒流回来冲击细胞，挂在外壁的残留液滴用酒精棉擦掉,培养瓶可以轻轻翻转瓶子使细胞生长的面在上，顶面在下，液体留至顶面后直接倒掉液体。加1ml PBS，注意枪冲着不长细胞的培养皿侧壁或翻转培养瓶朝瓶的顶壁或侧壁打入PBS，尽量不碰到瓶口或培养皿，若怀疑碰壁，弃掉枪头。轻轻摇晃培养皿或瓶，使PBS沾到所有细胞，洗涤细胞一遍，轻轻倒掉PBS。

加入0.25%胰蛋白酶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，若是高倍胰酶先稀释（0.25%为1X胰酶），37℃作用数分钟。等待消化期间准备好新的培养皿/瓶，每25cm2小皿/瓶加入2ml含血清培养基。消化中的皿盖好盖子或瓶拧紧盖子，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状，有10%细胞漂动时，倒掉胰酶溶液，加入1ml(25cm2小皿/瓶)含血清之新鲜培养基终止胰酶作用。(若细胞将要分离而呈现圆粒状且80%细胞漂动，则不移去胰酶，在胰酶作用后，加入适量含血清之新鲜培养基终止胰酶作用，吹打成细胞悬液转移至离心管，封上封口膜，离心后再吸掉上清液。）

轻轻摇晃培养瓶使细胞自瓶壁脱落，以吸管上下轻轻吸放数次以打散细胞团块，注意吹打时有系统性的将所有面积都打到不要集中只吹打一处而一些地方没吹打到，吸和吹时枪头都不要离开液面以减少气泡，气泡多破裂时对细胞有冲击且会增加体积不利于操作，培养瓶吹打时操作角度小不方便，用倒液法（10%细胞漂动即倒掉胰酶加含血清培养基终止消化）时吹打细胞要用二档多吹打几次，用皿或离心法（80%细胞飘动不弃胰酶直接加含血清培养基再离心弃上清）时细胞很容易脱落，可以用一档轻轻吹打，保证所有面积都吹打到即可。混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，拧紧瓶盖，镜下观察细胞数量多，培养液澄清，若细胞密度过低将影响生长可适当补充细胞悬液，若细胞密度过大将影响迅速生长一天后即需传代，可根据实验适当添加培养基或细胞悬液使生长速度符合预期，转移至CO2培养箱，拧松半圈瓶盖，37度培养。试剂瓶瓶盖过火，拧紧后封上封口膜。密封收好物品。擦一遍台子，灭酒精灯。

3细胞换液

取待用的细胞，旋紧瓶盖。

弃去旧的培养液，把培养瓶放回原处。

用微量枪加入适量的PBS缓冲液，缓慢荡洗一下细胞，然后将PBS缓冲液弃掉。

用微量枪加入适量的细胞培养液于培养瓶中。旋紧瓶盖。将细胞置于5%CO2、37度培养箱，反旋拧松瓶盖半圈，培养。

4细胞冻存 1>准备工作：

提前一天将血清FBS从-20度取出放在4度冰箱解冻。选取对生增生期细胞（镜下密密麻麻，胞体突触明显），在收集细胞24h前换液一次。

进入细胞室前，首先用75%酒精擦试工作台，接着紫外灭菌30，过后，关闭紫外灯，通风10min。从冰箱中取出胰酶、PBS缓冲液、培养基，血清37度水浴。取出室温放置的DMSO。找到防水的医用胶布，滤菌膜，针管和所需枪头饭盒等物品，喷一遍酒精，放入台子照紫外。2>开始工作：

实验前在更衣间换上紫外照过的白大褂和拖鞋。戴上橡胶手套，75%乙醇擦手，然后用75%乙醇擦一下台面，点燃酒精灯。酒精擦拭胰酶、PBS缓冲液、培养基放入超净台。过火镊子取出离心管于试管架，剪好封口膜备用。用滤菌膜和针管过滤DMSO以除菌。

75%无血清培养基，20%的血清，5%过滤除菌的DMSO，混匀配制成所需的冻存液。

取待用的细胞，旋紧瓶盖。

弃去旧的培养液，挂壁残液注意用酒精棉擦去，用微量枪朝不长细胞的侧壁或顶部打枪，加入适量的PBS缓冲液，缓慢荡洗一下细胞，然后将PBS缓冲液弃掉。用微量枪朝不长细胞的侧壁或顶部打枪，加入适量胰酶约2ml，弃掉枪头。消化数分钟，等待期间，用过火镊子从饭盒中取出冻存管和管盖标记好细胞名称和冻存日期，直立于台面备用。

用微量枪加入适量的完全培养液冲洗（吹散细胞）细胞，将瓶底粘着的细胞吹散下来，再将细胞悬液移入的离心管中，封口，标签。离心5min，1000转/min。

细胞离心毕，拆封，瓶口及瓶盖在酒精灯上烤一下，弃去上清液。用微量枪将冻存液平均加入离心管中，混匀离心管中细胞冻存液。用微量枪将含细胞的冻存液移入冻存管中，封口膜封口，防水医用胶布再缠一圈，标签时间，细胞名称。

冻存，需缓慢冻存，先放置4度冰箱20min，然后放置-20度冰箱30min，再置于-80度冰箱过夜，最后置于液氮灌-196度中保存。5 铺板和细胞计数

用传代方法制成细胞悬液。倒掉培养基，用PBS液洗涤后，0.25%的胰蛋白酶液消化，加入培养液吹打制成待测细胞悬液转至离心管，封上封口膜，离心1000r/min,5min。

等待离心其间，取细胞计数板，盖玻片酒精擦拭，均在酒精灯上烤一下，将盖玻片盖在细胞计数槽上，使覆盖细胞计数板上的上下两个“十字”区域。取一只新的15ml离心管，做好标记，摆放好。离心毕，拆封，瓶口及瓶盖在酒精灯上烤一下，弃去上清液，加入全培养液吹散沉淀细胞成细胞悬液，拧紧管盖，上下颠倒混匀。用枪吹打混匀离心管中含完全培养液的细胞，再从离心管中取1ml细胞悬液移入新的15ml离心管，加入4ml完全培养液，即稀释五倍，吹打混匀细胞悬液，上下颠倒混匀细胞悬液。

上下颠倒混匀新15ml离心管内细胞悬液，计数前将待测液吹打均匀，用微量枪从新15ml离心管中取出细胞悬液（约10μl），滴入计数板上盖玻片的一侧缝隙旁，虹吸作用液体会吸入盖玻片下（不能有气泡，不然会影响细胞计数，注意滴入悬液量不能太大致使细胞悬液流入旁边的槽中），镜下观察细胞，数出计数板四角大方格中的细胞数（16个小格×4个大格），用计数器计数（约200个）

细胞数 万个/mL原液=（4大方格细胞数之和/4）×稀释倍数（常稀释5倍，若细胞过多不能数清则加大稀释倍数，不断调整新离心管中细胞悬液的细胞浓度，直至镜下观察细胞数目符合要求。）每皿/瓶需铺板50-100万个细胞，根据细胞计数算出每皿所细胞悬液需毫升数，加入悬液时注意混匀，不得有气泡，吸时注意每次枪尖是否都吸满液体。每皿加入细胞悬液后，用含血清培养基补足至2ml/皿/瓶。24h后观察细胞长至八成满时即可加药处理。

6检验判断细胞状态与加药处理

细胞复苏或传代后24内不可传代，传代4小时后开始贴壁。1>培养基颜色澄清度：

正常生长的细胞培养基澄清透明，倾斜使培养基聚集，对着灯看可透光，若出现丝状沉淀或倾斜培养基对着灯看出现浑浊不透光且镜下细胞之外的部分有密密麻麻的小黑点，很可能是染菌，应弃掉。若镜检在细胞之外部分有一些浑浊，可能因为细胞代谢旺盛分泌物堆积，或者因为消化时间不够以至于过度强硬吹打细胞，造成细胞损伤产生大量细胞碎片，应换液。

新鲜培养基呈粉红色，代谢代谢旺盛的细胞的培养基会变黄，此时若细胞贴壁应换液，若此时细胞已长满，应传代。2>密度：

细胞密度过低，镜下观察稀稀疏疏，则生长缓慢，甚至死亡。较大的细胞密度可促进细胞之间相互作用，促进细胞增殖生长。密度过大，密密麻麻，部分细胞不能伸展成圆形，必须传代，此时不传代，一两天后细胞状态持续不好，开始死亡，镜检漂浮细胞增多。3>状态：

镜下观察细胞，当左右上下移动镜头时漂动的是未贴壁细胞或死细胞，固定不动的是贴壁细胞，贴壁细胞是活细胞。

状态良好的贴壁SY5Y细胞有圆形的胞体和细细分支的突触，突触分明。状态不好的SY5Y细胞，突触不明显，看不到什么细细的分支，甚至成圆形。

消化时快离壁的细胞呈亮亮的圆形。

加药前应提前计算好药品浓度体积，根据实验处理要求的浓度换算出每皿应加药品稀释液体积和无血清培养基体积，列成表格以备加药时明确操作。将药品储备液稀释成稀释液，再与相应体积的无血清培养基在离心管中混合好。加COS时，倒掉含血清培养基，PBS荡洗一遍，加以混合好的药品。加COS 3小时后加Ab，Ab须提前37度水浴5小时，加药时采用半数放液法，弃去1ml原培养基，加入1ml已混合好的药品。

第三篇：《动物细胞培养》教学反思

动物细胞培养教学反思

杨建波

赛课已经结束，但我的表现并不好。首先，引入新课不够精彩，没有激发学生的求知欲。我觉得应该以演员SELINA演习时皮肤大面积烧伤,治疗通常是取健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，如何来治疗该病人作为问题引起同学们讨论，引出这节课的主要内容——动物细胞培养。在此之前学生已经学过了植物组织培养，因此我先回顾植物组织培养的原理并提出了一个问题：动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养成新个体？引导同学们思考两者之间的异同。在讲述培养过程时，学生阅读课本自主总结和借助课件展示过程，帮助学生理解培养的过程及把握注意事项。本堂课上完后，我发现了自己有不少缺点和不足，需要在以后的教学中加以改正：1．没有充分发挥学生的主体地位。新课程的理念是要转变教师和学生的角色，让学生成为课堂的主导者，而本节课仍然以传统的教学模式为主，仍然是教师为主体。在实际教学过程中，主观的想引导学生探究问题，思考问题，得出结论，而事实上学生回答问题答不到点子上，我就匆匆的把答案公布了，没有真正做好引导工作。2．没有充分调动学生的积极性。课堂教学的气氛对整堂课的教学质量是至关重要的，纵观整节课，学生对问题的思考、回答等积极性不高。3．时间安排不够紧凑。导致最后讲动物细胞培养技术的应用时时间紧，讲得比较匆忙。当然本节课的成功之处是采用了多媒体教学，使课堂的知识容量比较大，对前面学过的内容可以比较快的复习，真正做到温故而知新。

第四篇：绿豆生长过程观察日记

绿豆生长过程观察日记1

2月1日星期天晴

林老师带来了两种绿豆，其中一种是泡过的，没泡过的绿豆是深绿色的，小小一颗，很硬。泡过的绿豆变大了，颜色变浅了，软软的。

2月2日星期一晴

绿豆的皮被撑破了，李都裂开两半，中间长出了一根芽，大概2厘米，很像气球。豆芽是白色的，尖尖的一头是黄色的。

2月3日星期二晴

豆瓣没有变化，绿豆皮脱落了，豆芽长了，弯弯曲曲的，另一头露出了一点叶子，像一条蛇的舌头。

2月4日星期三晴

豆芽已经有12厘米长了，叶子长长了，另一头长出了根，像老鼠的尾巴。

豆芽的生长过程真有趣!

绿豆生长过程观察日记2

9月30日星期四晴

今天，妈妈为我买了一些黄豆，我把它泡在水里，泡了一个夜晚之后，它原本圆乎乎的身体变成了扁扁的椭圆形，而且黑黑的小嘴巴也露了出来。

10月4日星期一阴

昨天我回到了奶奶家，可是黄豆宝宝没人跟我们一起旅行。所以，我一回到奶奶家，就赶紧泡了一盆黄豆。泡了10个小时以后，黄豆宝宝们已经张开嘴巴吐出了一点点小芽，要是他能长得更快一点的话，那该多好呀！

晚上，我给豆芽宝宝洗澡的时候，豆芽宝宝们的芽变得更长了。我心想：豆芽宝宝们怎么长得这么快呀，难道是奶奶家的水有魔法吗？真希望明天它能更加茂盛啊。

10月5日星期二阴

早晨，我打开盖子，发现豆芽宝宝的芽，有的一厘米，有的两厘米，有的已经三厘米了。它们有的芽弯弯的像老奶奶走路的身影，有的直直的，像一棵棵挺拔的小树，不知道明天它们这群小可爱们能变成什么样子呢？

绿豆生长过程观察日记3

今天放学回家，我把一些绿豆放进有水的碗里，想让绿豆发芽。

圆圆的绿豆像个害羞的小娃娃，把碧绿的“衣裳”拉的紧紧的，好像不想让我们看到她白白的皮肤呢!

过了几天，绿豆娃娃探出了白白胖胖的脑袋，脱下了绿色的“衣裳”，真可爱呀!

又过了几天，绿豆芽也忍不住钻了出来。哈哈，我的目的`达成了，OK!再养几天就行了!

大约过了一星期，绿豆芽又长出了一大截，但芽的顶端却枯了一些。我暗暗祈祷，可爱的绿豆芽不要枯萎……

绿豆娃娃给我的生活增添了色彩!

绿豆生长过程观察日记4

上个星期，老师让我们每各人都回家种几颗绿豆来看，并把绿豆种成绿豆芽，我们异口同声得说：“好的。”

今天，我一回家就科学老师布至的作业完成了。晚饭我看了一下绿豆长大了没有?我满怀期待的跑了进去，一看果然绿豆的皮已经很软了我想：“我的绿豆已经长成了绿豆芽，一定要好好得照顾它不让绿豆芽死掉，让它活着。”

过了几天，我又去看绿豆芽，没想道绿豆芽竟然长成了一个又长又壮的绿豆芽，像一个士兵保卫祖国，让和平之神永住人间。

从上个星期一到这个星期三，我的绿豆芽已经长成了一个豆芽，我很开心自己能种出豆芽来。

我通过这件事，我明白了只有付出了，才有会有回报。

绿豆生长过程观察日记5

听说绿豆芽可以自己发芽，我就迫不及待地想亲手试试。

我找来纸巾、盒子、清水和绿豆。我先把纸浸湿铺在盒子底部，然后把绿豆铺在纸巾上，再撒些水放到阴凉避光处。准备工作就完成了。

过了一个晚上，我发现，绿豆吸饱了水分，圆滚滚的，像一个贪吃的胖娃娃。我轻轻地摸了一下，感觉软软的，滑滑的。我有点好奇，它明天会怎样呢？看完后，我又把它放回原处。

第二天早上我一醒来，就惊喜地发现，绿豆变胖了，表皮炸开了。嫩绿的芽儿悄悄地探出头来，我闻了闻，有一股淡淡的豆香，令人心旷神怡。

第三天，绿豆把水分都吸光了，体积扩大了一倍，她的外衣被脱下来了，露出光滑圆润的肚皮，趴在洁白的纸巾床上，它的芽儿大约有五厘米长，而且芽儿的方向都是朝着太阳的方向生长，我真高兴。

种绿豆芽要细心照料，还要有耐心，细心观察，才能培育出好的绿豆芽。

绿豆生长过程观察日记6

10月14日星期四阴转小雨

看，我的小绿豆发芽了，小绿豆把绿色的外衣脱了下来，换上了雪白的衣裳，还长出了绿色的矮矮的小苗。小苗虽然不高，但这也是小绿豆成长的第一步。希望它快快长大吧！

10月17日星期日阴转雨

哇，小绿豆又长高两厘米了，绿色的衣服不见了，露出了白白的绿豆仁，还长出一条“小辫子”，光滑的绿豆仁仿佛在对我说：“不要用力摸我，我会疼的”。我拿起水壶，轻轻地给它浇了点水，明天希望绿豆快快长大吧。

10月18日星期一阴转晴

看呀，我的小绿豆的辫子又长了三厘米，就像一根丝绒一样，虽然不长，这样是它成长的足迹。希望它快快长成豆芽，让我……哈，不能让绿豆知道。

绿豆生长过程观察日记7

9月20日星期四晴

今天，我看见奶奶拿出了一把绿豆，把它们放进了85度左右的水里，我想，是要让绿豆出芽吗？我一问奶奶，果然是！然后我就兴致勃勃地开始了观察绿豆的成长。

9月21日星期五晴

用温水速度快，豆芽在一夜之间悄悄探出了头。绿豆看起来像一只只刚刚长出尾巴的小蝌蚪，还胀得大大的。

9月23日~25日阴

绿豆圆滚滚的小肚子上裂开了一条缝。豆芽就从这条缝里钻出来，它已经长得有两厘米高了。因为今天是我和爸爸照料绿豆，粗心的爸爸和我忘了给绿豆所在的瓶子盖上盖子，所以绿豆长出了嫩绿的芽。以后不能这么粗心了。

9月26日~27日晴

绿豆脱掉了大衣，豆芽长得挺高了，卷卷的，像盘羊头上的角，也像姑姑的波浪卷头发。

9月28日星期六晴

豆芽完全长好了，可以吃了，我太开心啦！

通过这次观察，让我收获到只要认真观察，就有很多惊奇的发现，同时让你获取更多知识。

绿豆生长过程观察日记8

我是一个很爱观察的小女孩！这一天我被我的好朋友请到她家看一看她种的绿豆芽。

10月2号，就是放国庆假的第二天，我们把绿豆芽泡在一个碗里，什么都没有出现。一天后，小绿豆就把绿衣裳脱下来，白嫩嫩的，像蝌蚪一样。

第二天，芽变长了一些，衣服全部脱下来了，就像一颗小珍珠一样，闪闪发光，可真美。好朋友小丽说道：“小绿豆芽，不，是大绿豆芽都长这么大了，可真是神一样的快呀！”

到了2、3天，小豆芽有的长有的短。我找了一个最长的和最短的，最长的有25。5厘米长，最短的也有12。9厘米。比起前几天那可真是“大有长进”呀！个个都长出了长长的白白的头发。

啊，美丽的绿豆芽，你可真美丽漂亮，但你还是要变成我的美餐呀！

绿豆生长过程观察日记9

8月18日星期三晴

前几天刚学到绿豆种在水里会自己长大，我就开始做了实验，今天我是第一天观察绿豆，绿豆本来是小小的、圆圆的、还有点浅绿色。但是过了两天我发现泡了水以后就慢慢长长了，扁扁的、而不再是穿着之前的绿衣裳，而是脱掉绿衣换成了黄布衣。

8月22日星期六晴

又两天之后的下午我突然发现黄豆有了一些变化！它的一个地方有一点鼓起来了，我仔细看了看好像发芽了，而且还很多很多，我很高兴的`对它们说你们快快长大吧、都要长的高高的…

8月24号星期一阴天

转眼见又几天过去了，我发现它的芽越长越高，而且都排的整整齐齐的像是一个个士兵，又好看又威武。我静静地看着黄豆芽一直再回想，怎么刚出来的时候它也没几公分长，它也就每天喝了点水怎么会每天都长高呢？黄豆芽的变化真的太大了，原来我们生活中有很多东西都在变化，只是平时没有观察而已，我以后要好好学习去发掘更多我所不知道的东西。

绿豆生长过程观察日记10

XX月XX日星期一雨

今天，我放学到了家，我迫不及待地冲进家门，不管三七二十一就问：妈妈绿豆在哪里?妈妈回答：在柜子里自己拿。我从柜子里拿出绿豆，拿好盒子，把绿豆和水倒了进去了。我坐下来仔细观察，一点儿发现也没有，可是我希望明天要有变化!

XX月XX日星期二晴

今天，我高高兴兴地回到家中看见小绿豆有一两颗发芽了，我很开心。发现皮脱了，我想它们换水可是又想了想还是不要了吧!我猜明天绝对会全发芽!

XX月XX日星期三晴

今天，我回到家，果然不出我所料，绿豆全发芽了，发现皮都浮在水面上，我用手一个一个地拾起来，猜两三天后绝对长成小苗儿!

XX月XX日星期四晴

今天，回到家里看见小芽儿一点变化也没有，我有点不高兴了，我从水里拾起了大约有100多个皮，我知道小芽儿不变原因了，因为有太多的皮让它们不能生长了，所以它们没有变化。我今天有了新的收获!

绿豆生长过程观察日记11

今天，我把绿豆放在一个装着水的杯子里，我很期待，想看生出来的样子是怎么样的。

第二天中午，我发现绿豆分开了两半，中间伸出了一条又尖又长的豆芽。

第三天傍晚，看见绿豆的皮掉了，变白了，那条又尖又长的嫩芽长长了大约一厘料米。

第四天晚上，我将一些硬硬的又圆又绿豆放进一个装着少许水的塑料杯子里，绿豆的形状很小，我想：明天醒来，它会变成什么样子呢?我真希望快点看见它长大的样子。

第五天，放学回家，我急忙跑去看看绿豆怎么样了，我仔细地看了看，发现绿豆有一些皮脱了下来，旁边悄悄地伸出了一条很短、白色的小芽，还发现我放的水少了，这是为什么呢?我急忙去问爸爸：“爸爸，我放的水怎么变少了”，这是为什么呢?爸爸说：“你再仔细看看绿豆是不是变胖了，因为绿豆喝了杯子里的水慢慢长大了。”

绿豆生长过程观察日记12

2月1日星期天晴

今天，我们和老师一起观察绿豆。我观察到这两颗绿豆有点不同。没泡过的绿豆是深绿色的，有点硬。而另一颗泡过的颜色变浅了，大了一倍，有点软。

2月2日星期一晴

我们又在观察昨天的绿豆，看豆子有了不同的变化。豆子变大了，把绿衣服撑破了，芽长出来了，像个钩子一样，颜色是白色的，尖尖的一头有点黄。

2月3日星期二阴

豆瓣没有变化，有的绿豆自动脱皮了，豆芽变弯了，长出了一点小叶子，像鸡嘴巴一样。

2月4日星期三晴

豆芽生命力顽强，已经有12厘米长了，变直了，尖尖的一头又长又细，叶子长了大半。

终于吃到豆芽了，味道有点苦。但是我觉得，豆芽的生长真有趣!

绿豆生长过程观察日记13

我喜欢吃绿豆芽，所以我打算自己种，下面来和我一起看看吧！

首先需要准备豆子、纸巾、清水和塑料盒子。先把纸巾浸湿，铺在盒子底部，把泡好的豆子分类别均匀铺在纸巾上，再洒一些清水，放到阴凉避光处，这样就可以了。

20xx年10月1日星期二晴

我把豆子泡了一个晚上，看到他们吸饱了水，圆滚滚的像个贪吃的胖子一样。我摸了摸她那水润的皮肤，它变得软软的，滑溜溜的，我的心里充满了好奇，再过一天会变成什么样子呢？我渐渐开始开心起来。

20xx年10月2日星期三晴

第二天早上，我惊奇地发现又变胖了，而且长出了芽儿。它好奇想探出头来，观看整个世界。我闻了闻，淡淡的豆香味散发出来，好闻极了！

20xx年10月3日星期四晴

第三天，豆子吸足水份，变得大大的。外表已经变成白色了，芽都向着太阳的地方生长，我的心情感到无比激动。

这次的观察日记让我明白了只要你用心观察，就一定有所收获。

绿豆生长过程观察日记14

上星期，老师发给了我们一些绿豆，让我们拿回去种，观察这些绿豆是怎么发芽的。

看，这些绿豆是椭圆形的，深绿的颜色里吐出一点黑，中间有一个小点，那是它的种脐，你摸上去会觉得硬硬的。

回到家，我不慌不忙地找来一个盒子，把花盆里的土挖出来，放到盒子里，再把绿豆放进土里，盖上一层薄薄的土，浇上水，等待它慢慢发芽。

第二天，天刚亮，我就起床了。我走到阳台一看，哇，绿豆钻出了土面。我高兴得一蹦三尺高!绿豆已经脱下了紫得有点发黑的旧衣，换上了淡黄的新衣裳，我高兴极了。我摸了摸土，有点干，急忙给它浇水，让土湿润。

第三天早晨，豆芽已经顶着子叶伸了出来，子叶的末尾长出了两片细长的绿叶。它们有的低着头，像一位害羞的小姑娘;有的抬着头，像在仰望天空。

第四天，我发现了豆芽已经长得很高了。两片绿叶像小鸭的嘴巴在嘎嘎叫，真有趣。

通过种绿豆，我知道了绿豆的生命力很顽强。种绿豆给我带来很多乐趣!

绿豆生长过程观察日记15

我是一颗绿豆，一颗想变成豆芽的绿豆。

从小我妈妈就告诉我：“能成为豆芽的绿豆，是幸运的绿豆，有很多绿豆还没来得及成为绿豆芽就被煮成绿豆汤了！”我心想：我一定要通过自己的努力变成豆芽，体验人生的全过程。

机会终于来临了！我的小主人要挑一些绿豆做豆芽菜。在他挑选的时候，我又蹦又跳吸引了他的注意力，我被选中了！

我和其它被选中的小伙伴们一起被放进了一个盛着水的盆子里，小主人还给我们还盖上一层厚厚的“被子”。我和小伙伴们在里面拼命的喝水，膨胀的就像一个绿胖子，衣服都被我撑破了。就是这样也不能阻止我，我还是不停地喝呀喝，喝呀喝……

第二天一早，我的衣服完全被撑破了，我的身体被穿上了一件透明的雨衣。我仍然不停地喝水。晚上的时候，一个小芽从我身上冒出来，细细的、软软的，像弯弯的月牙。我继续喝水，不停的长大。

两天过去了，我的小芽已经有五厘米高了，我已经变成了一根健康强壮的豆芽！

第五篇：豆芽的生长过程日记

豆芽的生长过程日记

豆芽的生长过程日记1

我见过许多人种绿豆，可我却没钟过。我虚心向妈妈请教了发绿豆芽的方法，然后就按照妈妈的方法去做准备。

我首先把绿豆拿出来。绿豆的颜色是绿油油的.，他们的形状是椭圆形的，而且大小不一。我把绿豆泡在一个碗里，这些绿豆活蹦乱跳的，怎么都沉不下去，我帮了它们一把，终于沉下去了。

到了第二天，我发现绿豆芽变大了，而且脱了一半衣服，身体白白胖胖的。看起来嫩白嫩白的，我非常期待绿豆芽能快点长大，所以每隔几分钟我就会来看看绿豆芽，可是绿豆芽依旧没有变化。

过了两天，绿豆芽变长了，他们忍不住，所以把衣裳都给脱了下来。它们可真像一个个蝌蚪在水里游来游去啊！

过了几天，绿豆芽全部长出了笔直的茎，最长的有20厘米，最短的有13厘米，又过了几天，绿豆芽低垂着头，叶子像荷叶一样，可爱极了。

啊！绿豆芽可真漂亮，希望还能再种一次。

豆芽的生长过程日记2

20xx年10月11日星期二晴

前几天的语文课上，教师布置一项让我们亲自培育观察豆芽的日记。

我一到家，拿出一袋绿豆，从里面挑出来了品质优良的绿豆。我把豆子放在一个塑料杯子里浸泡。

第二天，豆子就有了变化。昨日还是一颗颗绿色小不点，今日已经变成了乎乎的大块头。然后我又拿了一个塑料杯，下头钻了几个小孔，我把豆子放在杯子里，然后拿了一块湿毛巾，盖在塑料杯上头，用过滤的自来水冲洗。？

第三天早晨，我匆匆忙忙地跑到阳台去看绿豆，想给它冲洗一下。听奶奶说，豆芽培育必须勤冲洗，至少一天一次。豆子已经脱去了身上的绿衣裳，像一个个胖小子脱去了绿大衣，露出了大肚皮。并且每颗豆子都冒出了一根又细又白又嫩的.芽。我高兴得手舞足蹈，我的实验成功了。

豆芽的生长过程日记3

我喜欢吃豆芽炒猪肉，妈妈说绿豆芽长大就是豆芽，所以我想尝试一下。

我拿了100颗绿豆，又拿了一颗装有水的瓶子，然后把绿豆都放了进去。绿豆的颜色是绿色的，形状是椭圆形的，非常的小。我并不信绿豆会长成豆芽，第二天我来到了我种绿豆的地方，绿豆变大了，脱下了它自己的外套，露出了白白胖胖的身体，还长出了嫩芽，我慢慢地相信了，我期待它会不会长出豆芽来。

过了两天，绿豆的芽变长了。全部的绿豆都脱下了绿外套，绿豆的芽像极了蝌蚪，非常的'可爱。过了几天我惊讶地发现绿豆已经长成了豆芽的样子，笔直的茎，长度已有二十四点五厘米，最短的也有十五点五厘米。

啊！绿豆，我喜欢你，你给我带来了惊喜，同时我也喜欢大自然的神奇。

豆芽的生长过程日记4

今天，我把一些黑豆豆放进爸爸刚买回来的小锅里。我和姥姥把小豆豆放进去，又找来一块手绢盖在小豆豆身上，记得要把手绢弄湿一点。

x月25日星期一天气晴

我早晨起来看看小豆豆，它们有的都破皮了，露出里面淡淡的绿色豆豆。

x月26日星期二天气晴

今天是发豆芽的第三天，小豆豆发出了一点点小芽芽。小芽芽绿油油的'，有点弯曲，像弯曲的小蛇。

x月27日星期三天气晴

到了第四天，小苗苗长长了一点了。虽然长长了一点，但是还不能吃。因为，它们还没长大呢。

1月28日星期四天气晴

第五天，我觉得小苗苗又长长了一点。但是，还是不能吃。可我心情很高兴，因为它们又长大了一点。

x月29日星期五天气晴

第六天，小芽芽又长长了一点。它们长的就像水波纹一样，弯弯曲曲的。今天，姥姥有点失望了。因为，都一个星期了小苗苗还是这么小，和前几天有点一样，长的不快。姥姥认为这些豆豆不是很好呢，期待明天苗苗们更会长大一点。

豆芽的生长过程日记5

听说有些豆子可以无土栽培，我也试了试。

我做了一些准备工作，先把纸巾浸湿铺在盒子底部，把泡了一晚上的豆子分类别均匀的撒在纸巾上就好了。

在第一天，这些豆子被泡了一晚后，黄豆涨的太大了，有些豆子露出了自己洁白的肚皮，圆滚滚的，软软的，滑滑的质感让我充满好奇心想知道为什么会这样。

在第二天，我惊奇的发现豆子炸得更厉害了点，肚皮露得也大了点，他们像睡着的人一样，懒懒地趴在我给它们做的一张“小床儿”上。这时候，我用鼻子嗅了嗅，嗅到了一股无法用句子来形容的清香。

第三天，我大多数时间是在校园，我趁放学时间，迅速溜到小豆子旁边，这时，我大吃了一惊它们像吃饱了东西一样，整整大过了原来大小的一倍大。它们貌似脱下了衣服，露出洁白光滑的身体，趴在床上睡觉似的'。这些芽儿有的往左长，有的往右长，还有的向上长，但它们始终向阳生长。感觉芽儿的长度长了五厘米似的，量了之后发现有的还真是五厘米，我心想：感觉自己好棒，很厉害。

种了它们，我感到很开心，很激动，我也明白了大自然很厉害，这一切，都是大自然造出来的，我的豆子也一样。

豆芽的生长过程日记6

我喜欢吃绿豆芽，所以我打算自己种，下面来和我一起看看吧！

首先需要准备豆子、纸巾、清水和塑料盒子。先把纸巾浸湿，铺在盒子底部，把泡好的豆子分类别均匀铺在纸巾上，再洒一些清水，放到阴凉避光处，这样就可以了。

20xx年10月1日星期二晴

我把豆子泡了一个晚上，看到他们吸饱了水，圆滚滚的像个贪吃的胖子一样。我摸了摸她那水润的皮肤，它变得软软的，滑溜溜的，我的心里充满了好奇，再过一天会变成什么样子呢？我渐渐开始开心起来。

20xx年10月2日星期三晴

第二天早上，我惊奇地发现又变胖了，而且长出了芽儿。它好奇想探出头来，观看整个世界。我闻了闻，淡淡的豆香味散发出来，好闻极了！

20xx年10月3日星期四晴

第三天，豆子吸足水份，变得大大的.。外表已经变成白色了，芽都向着太阳的地方生长，我的心情感到无比激动。

这次的观察日记让我明白了只要你用心观察，就一定有所收获。

豆芽的生长过程日记7

绿豆是一种又小又不起眼的豆科植物，然而它的生长过程又十分的奇妙。

绿豆小小的、绿绿的，抓一把放在手心里，数都数不清楚。绿豆的头上有一个棕色的小口子，那是用来开启生长的大门。

绿豆喜欢在比较湿润的地方生根发芽，它也可以在浅水里长大。种植绿豆芽的过程非常有趣，首先要营造绿豆发芽的环境，拿一块布打湿，放到透明的器皿里，接着把绿豆撒在布上，最后在绿豆上面再覆盖一块布。

过了一天，喝饱水的绿豆像一个个胖娃娃，露出白白的肚子。新生的小芽迷你又可爱，像一个逗号。又过几天，芽慢慢长高，会把绿豆顶起来，这些小芽是多么的强壮啊！再过两三天，芽的.颜色会稍稍发紫，那是一个奇妙的成长过程。

一星期后，小绿豆芽成为了一根根的大绿豆芽。这些绿豆芽可以长十厘米以上，大大的叶子绿油油的，显得很健壮，完全张开的叶子，像一个舞者在劈叉。绿豆芽们笔直地站在那里，好像一个个整装待发的士兵。但有几根绿豆芽也会长歪，也许是因为阳光没有照射到豆芽，豆芽头一歪，伸到了阳光下。

绿豆虽然很小，但它的成长经历非常神奇。我也懂得了一个道理：生活中，只要用心观察，就会发现很多奇妙、有趣的事。

豆芽的生长过程日记8

12月3日星期六晴

今天，我去菜市场买绿豆，因为我要做“绿豆生长的实验”。绿豆小小的，有的圆，穿着绿衣裳，中间还有一条从小白线。它的身姿硬硬的，滑溜溜的，我把它放在一个不大不小的杯子里，放上舒适的水，他们都在水里懒洋洋地睡大觉。

12月4日星期日晴

今天，绿豆芽又长大了许多，它们的身体软软的，有些脱掉了它们的旧衣裳，有些长出了一条小尾巴，像刚出生的小蛇，还有些只脱掉了一半，还有一半在自己身上，真嫩！

12月5日星期一多云

今天要上学，所以我早上和中午没有观察小绿豆芽。放学了，我去看绿豆芽，发现它们的`尾巴长长了许多，还有的连小尾巴都没有长出来······

12月8日星期四阴

连续几天，小豆芽变成了大豆芽。身体已经有10多厘米长了，妈妈说：“再过两天，就可以吃了。”我心里一阵高兴，想到马上就可以吃自己养的绿豆芽了，兴奋不已。

豆芽的生长过程日记9

10月23日星期一晴

第一则

今天，王玮老师让我们回家去泡制绿豆芽。首先我准备了一个菜盆，其次把一块纱布放到菜盆里，再把绿豆撒到纱布上，最后把水倒到纱布的外边缘，让小小的绿豆补充水分。

10月24日星期二晴

第二则

早上，我早早地起床来观察我泡制的绿豆，发现绿豆的'肚子上长出了一根根的小白芽，绿豆的整个身体变成了Q形状。

10月25日星期三晴

第三则

今天早上，我去看了看我泡制的绿豆芽，看到它们的小芽越长越长了，已经不是Q形状了，而是长了“一条条小尾巴”。还有他们绿色的外衣也慢慢地脱掉了。

10月26日星期四晴

第四则

早上，我又去看了我的绿豆芽，它们绿色的外衣，已经全部脱掉了，变成了一张张的小白脸，而且小尾巴也越来越长了，然后我用尺子去测量，豆芽的小尾巴已经有8厘米长，希望再过一天就能吃了。

10月27日星期五晴

第五则

今天下午，我去看了我的绿豆芽，他们已经长得非常长了，都长了叶子，我想是可以吃了，相信我泡制的绿豆芽，今天一定是餐桌上的佳肴！

豆芽的生长过程日记10

10月5日星期一晴天

我开始种绿豆了。把三颗绿豆放进一个玻璃杯里，加了一点儿水，把杯子放在桌子上。看见水中的绿豆，似乎和刚刚放下去的绿豆没什么两样。我见每颗绿豆上都有一条黑色的线，我想：大概嫩叶都是从这条黑线里钻出来的吧!

10月6日星期二晴天

试验的第二天，我早早地起了床，刷好牙洗好脸，匆匆地向书房跑去。只见一颗绿豆的皮裂开了一条缝，露出了淡白色的肉。这时，我的脑海中出现了一个问题：这个皮怎么裂开啦?它是不是被水淹死了?我带着疑惑问爸爸为什么，爸爸说：“可能是快发芽了吧。”我悬着的心终于放了下来。

10月7日星期三晴天

试验的第三天，我像往常一样起了床去观察绿豆。我看见一颗绿豆有一半的`肉挤出来了，嫩嫩的肉是米白色的，像一个白白嫩嫩的小姑娘。可是，我想：为什么另外两颗却不露出肉来呢?我想不出来，便去问姐姐，姐姐说：“可能是因为生命力太差了吧!”我不信，我又去问爸爸，爸爸竟然也这么说。现在我信了，我下定决心说：“我一定要把这唯一会发芽的一颗抚养长大。”

豆芽的生长过程日记11

9月24日星期二阴

吃过晚饭，妈妈让我把绿豆用热水洗一下，我意识到了，这是要泡豆芽了！

洗完后，妈妈让我找最大的豆子来，放到碗里，用水泡上。就这样，我的小绿豆，在水里睡了一夜。

9月25日星期三阴

今天，我特意起的很早，来观察我的小绿豆，可是，这个结果并没有让我很伤心，我的小绿豆涨得像一个个小足球，我问妈妈：“为什么我的`小豆子没有发出小芽呀？妈妈！”妈妈说：“泡豆子要有耐心呀！宝贝！”看来是我太着急了，泡豆子需要耐心！

9月28日星期日晴

过了几天，我的小绿豆终于有变化了，它们变成了一只只小蝌蚪，长出了一条小尾巴，我开心地跑过去，找到妈妈，我着急地告诉她：“妈妈，小绿豆发芽了！”妈妈笑了笑，让我继续耐心的观察。

9月30日星期二晴

今天，我的小绿豆芽已经6厘米长了，马上就可以吃了，我非常开心，真想知道明天会发生什么有趣的事儿，关于小绿豆的。

经过这几天的观察，让我明白了无论做什么事，都要细致，有耐心，你会有更多的发现！

豆芽的生长过程日记12

吃过晚饭，我在书里看到了豆子发芽，那我就试一试吧！

妈妈曾经说：“发豆芽时，一定先用热水泡，再用凉水泡。”我说办就办，不一会儿，我做完了，心里非常激动，因为豆芽马上要发芽了！到了晚上我猛地想起豆子，我急忙跑到厨房，我仔细一看，哇！豆子裂开了一条缝，我想那条缝里要长出一个“小尾巴”了，我就非常高兴。

流星赶月，第二天便来到了，只听妈妈说：“快看一下豆子，发芽了没？”我变飞快地来到厨房，喔！豆子长出了一个小小的'嫩芽，我用直尺一量，这个嫩芽一共五毫米，就像一个小逗号，可爱极了！但是有几个豆子连裂缝都没有，已经与世长辞了，真可惜！妈妈解释道：“这些豆子叫实豆，它们发不了芽。”原来如此。

又过了一天，他们居然一点儿也不长，是不是病了？我的心里非常着急，我想：小豆子，慢点长，不着急。

一个星期过去了，奇迹发生了，这些豆子都长出了一厘米的嫩芽，太棒了，它们不但长出了嫩芽，而且外皮都掉了，豆子好似在说：“好热，我把衣服脱掉！”在晚上，妈妈拌了凉菜，我亲自把豆芽放在凉菜里，拌完后，我吃了一口，心里比吃了蜜还甜…

我不但泡成了豆芽，还明白了一个道理：世上无难事，只怕有心人。

豆芽的生长过程日记13

我很喜欢吃绿豆芽，于是妈妈别出心裁地说：“我们来一起种绿豆芽吧！还可以观察它的生长过程。”

说干就干，我兴奋地跑进厨房，抓起一大把绿豆，仔细观察。我发现绿豆和米粒差不多大小，有绿色的“外衣”，摸上去硬硬的'，很像一颗绿色的小石子。妈妈给我找来了一个小器皿，我吧许多绿豆放到器皿里，开始加水。我怕绿豆不够喝，就加了满满一盆水，妈妈连忙把水倒掉，一边倒一边说：“不用加这么多水，绿豆喝太多会涨死的，只要没过绿豆就可以了。”我按正确方法加水，然后把器皿放到阳台上。所有工作准备就绪，等着发芽喽！

第二天一早，我迫不及待地来到阳台，我发现小绿豆都长得胖胖的，喝饱了水。”绿衣服”都撑破了，露出白白的“小肚皮”。

第三天，我又发现豆豆们有了新变化。“绿外衣”裂开得更大了，白色的"肚皮”上面又长了一根白白胖胖的“小尾巴”。还散发着一股淡淡的清香。我高兴极了。

接下来的几天，我都给小豆豆们洗澡、换水。观察“小尾巴”有没有长长，直到有一天，“小尾巴”长到七八厘米长了，妈妈说：“这下可以炒一盘绿豆芽了。”我在厨房外流着口水，等待着美味出现……

豆芽的生长过程日记14

12月3日 星期六 晴

今天，我去菜市场，买了一些绿豆，因为我要做“绿豆芽生长实验”绿豆芽小小的，是椭圆形的，穿着一件绿油油的衣裳，它的`身体滑溜溜的，硬硬的。我把它们放在了一个盆子里，再放进适当的水，她们就可以在水里睡觉。

12月4日 星期日 晴

今天早上，我去看绿豆芽，发现绿豆芽长大了许多，绿豆芽已经喝饱水了，身体变得软绵绵的了。它们有的已经脱皮了，有的已经长出了小尾巴，像小蝌蚪一样，还有的一半脱皮了还有一半还穿在身上。

12月5日 星期一 多云

今天放学回家，好多绿豆芽的尾巴长长了许多，可是还有一些绿豆芽才敢刚刚脱掉自己的衣服呢！

12月8日 星期四 阴

连续几天，绿豆芽的尾巴最长的有13厘米多，最短的也有5、6厘米了，妈妈说：“我们马上可以吃豆芽了。”我高兴地说：“这就是我们的劳动成果。”

豆芽的生长过程日记15

2月16日星期六多云

昨日晚上，妈妈帮我把黄豆泡了。今日一早，妈妈把剩余的水过滤掉，留下一点水，之后把盛黄豆的盆子拿到温暖的地方，最终用湿棉布盖上。过后，每隔一小时，我就去看，咦？怎样还没有发芽？妈妈安慰我，哪有那么快呀！我只好放下了。晚上我再去看，呀！好像有点意思了

2月17日星期日多云

今日一早我准备给黄豆淋点水（保证豆子的湿润，豆芽才能长得好），啊！总算是长出来一点了。我看着其中一颗黄豆，叫了起来。只见黄豆长出了一小段须子，就想破壳的小鸟的尖嘴巴似的伸了出来。真快呀！晚上再来看吧！先吃早饭吧！我想着，心里一阵激动傍晚，我再去看黄豆的时候，它们的小须子有两三厘米长了。这时，我想起我小时候不爱吃豆芽，妈妈突发奇想，跟我说：哎！儿子，你看，这像不像个6呀！像不像个9！来，吃一个6，吃一个9！

想到往事，我不禁有点期盼黄豆芽能像超市卖的`豆芽那样长的那么长，那该多好呀。

2月18日星期一晴

今日我再去给豆芽淋水的时候，发现豆子有点发黑了。妈妈，你快来，豆子怎样了？妈妈摸了一下，怎样有点发粘？妈妈又闻了一下豆子，呀！怎样一股发霉的味道？看来你的豆芽梦破灭。