实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定

第一篇：实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定

实验20植物组织中游离氨基酸总量的测定

茚三酮显色法 氨基酸是组成蛋白质的基本单位也是蛋白质的分解产物。植物根系吸收、同化的氮素主要以氨基酸和酰胺的形式进行运输。所以测定植物组织中不同时期、不同部位游离氨基酸的含量对于研究根系生理、氮素代谢有一定意义。

一、原理 氨基酸与茚三酮共热时能定量地生成二酮茚胺。该产物显示蓝紫色称为 Ruhemans 紫。其吸收峰在 570 nm 而且在一定范围内吸光度与氨基酸浓度成正比。氨基酸与茚三酮的反应分两步进行第一步氨基酸被氧化形成 CO 2、NH 3 和醛茚三酮被还原成还原型茚三酮第二步所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和一分子氨脱水缩合生成二酮茚–二酮茚胺 Ruhemans 紫反应式如下 在一定范围内反应体系颜色的深浅与游离氨基的含量成正比因此可用分光光度法测定其含量。

二、实验材料、试剂与仪器设备 一实验材料 各种植物组织。二试剂 1.水合茚三酮试剂称取 0.6 g 再结晶的茚三酮置烧杯中加入 15 mL 正丙醇搅拌使其溶解。再加入 30 mL 正丁醇及 60 mL 乙二醇最后加入 9 mL pH5.4 的乙酸–乙酸钠缓冲液混匀贮于棕色瓶置 4 ℃下保存备用 10 d 内有效。2.乙酸–乙酸钠缓冲液 pH 5.4 称取乙酸钠 54.4 g 加入 100 mL 无氨蒸馏水在电炉上加热至沸使体积蒸发至 60 mL 左右。冷却后转入 100 mL 容量瓶中加 30 mL 冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至 100 mL。3.标准氨基酸称取 80 ℃下烘干的亮氨酸 46.8 mg 溶于少量 10 异丙醇中用 10 异丙醇定容至 100 mL。取该溶液 5 mL 用蒸馏水稀释至 50 mL 即为含氨基氮 5 μ g/mL 的标准氨基酸溶液。4.0.1 抗坏血酸称取 50 mg 抗坏血酸溶于 50 mL 无氨蒸馏水中随配随用。5.10 乙酸。三仪器设备 分光光度计分析天平研钵容量瓶试管移液管水浴锅三角瓶漏斗。

三、实验步骤 1.样品制备 取新鲜植物样品洗净、擦干并剪碎、混匀后迅速称取 0.5 1.0 g 于研钵中加入 5 mL 10 乙酸研磨匀浆后用蒸馏水稀释至 100 mL。混匀并用干滤纸过滤到三角瓶中备用。2.制作标准曲线 取 6 支 20 mL 刻度试管按表 27 – 1 操作。表 27-1 制作游离氨基酸标准曲线各试剂量及操作程序 试 剂 管 号 1 2 3 4 5 6 标准氨基酸 mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 无氨蒸馏水 mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮 mL 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗坏血酸 mL 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 每管含氮量 μ g 0 1 2 3 4 5 加完试剂后混匀盖上大小合适的玻璃球置沸水中加热 15 min 取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化而褪去当呈现蓝紫色时用 60 乙醇定容至 20 mL。混匀后用 1 cm 光径比色皿在 570 nm 波长下测定吸光度以吸光度为纵坐标以含氮量为横坐标绘制标准曲线。3.样品测定 吸取样品滤液 1.0 mL 放入 20 mL 干燥试管中加无氨蒸馏水 1.0 mL 其他步骤与制作标准曲线相同。根据样品吸光度在标准曲线上查得含氮量。

四、结果计算 按下式计算样品中氨基态氮的含量。式中 C ——从标准曲线上查得的氨基态氮含量 μg。V T ——样品稀释总体积 mL。V S ——测定时样品体积 mL。W ——样品鲜重 g。思考题 1.茚三酮与所有氨基酸的反应产物颜色都相同吗 为什么 2.抗坏血酸在测定中的作用是什么 【 附注 】 1.茚三酮重结晶的方法 合格的茚三酮应该是微黄色结晶若保管不当颜色加深或变成微红色必须重结晶后方可使用。其方法如下 5 g 茚三酮溶于 15 mL 热蒸馏水中加入 0.25 g 活性炭轻轻摇动溶液太稠时可适量加水 30 min 后用滤纸过滤滤液置冰箱中过夜后即可见微黄色结晶析出用干滤纸过滤再用 1 mL 蒸馏水洗结晶一次置于干燥器中干燥后贮于棕色瓶中。2.茚三酮与氨基酸反应所生成的 Ruhemans 紫在 1 h 内保持稳定故稀释后尽快比色。3.空气中的氧干扰显色反应的第一步。以抗坏血酸为还原剂可提高反应的灵敏度并使颜色稳定。但由于抗坏血酸也可与茚三酮反应使溶液颜色过深故应严格掌握加入抗坏血酸的量。4.反应温度影响显色稳定性超过 80 ℃溶液易褪色可在 80 ℃水浴中加热并适当延长反应时间效果良好。5.谷物籽粒等含蛋白质的样品可用酸水解法将蛋白质水解后用本法测定水解液中的氨基酸含量可计算出样品蛋白质含量。

第二篇：植物组织游离脯氨酸含量的测定

植物组织游离脯氨酸含量的测定

原理

植物在逆境条件下，游离脯氨酸便会大量积累，且积累指数与植物的抗逆性有关。因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。

采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减少了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态(干或鲜样)限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。材料、仪器设备及试剂 1．材料

植物叶片

2．仪器设备

分光光度计；水浴锅：漏斗：大试管(20m1)；具塞刻度试管(20m1)注射器或滴管(5～lOml)。3．试剂

(1)3％磺基水杨酸溶液

(2)甲苯；

(3)2.5％酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mo1.L-l磷酸以3:2混合，作为溶剂进行配制，此液在4℃下2～3天有效；

‘

(4)脯氨酸标准溶液：准确称取25mg脯氨酸，用蒸馏水溶解后定容至250ml，其浓度为100ug.mL-l。再取此液10ml，用蒸馏水稀释至lOOml，即成10μg．mL-1的脯氨酸标准液。

1．标准曲线制作

（1）取7支具塞刻度试管按表9.2-1加入各试剂。混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热40min。

(2)取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以0号管匀对照在波长520nm下比色。

（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程

表9．2．1各试管中试剂加入量 试管

0

脯氨酸标准溶液(m1)

0

0．2

0．4

0．8

1．2

1．6

2．0

水(m1)

1．8

1．6

1．2

0．8

0．4

0

冰乙酸(m1)

茚三酮显色液(m1)

样品测定

（1）脯氨酸提取：取不同处理的剪碎混匀植物叶片0．2～0．5g(干样根据水分含量酌减)，分别置于大试管中，加入5m1 3％磺基水杨酸溶液，管口加盖玻璃球，于沸水浴中浸提10min。

(2)取出试管，待冷却至室温后，吸取上清液2m1，加2m1冰乙酸和3m1显色液，于沸水浴中加热40min，下步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色（向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以0号管匀对照在波长520nm下比色）。

(3)结果计算：从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度 脯氨酸含量的百分数。

脯氨酸[μg.g-1(干或鲜重)](C．V)·(a·W)－1

式中：C一提取液中脯氨酸浓度(PS)，由标准曲线求得：

V － 提取液总体积（ml）

A---测定时所吸取得体积（ml）

W-----样品重（g）

第三篇：植物组织中淀粉含量的测定

植物组织中淀粉含量的测定 2007-01-12 08:55 Ⅰ 蒽酮硫酸法

一、原理

淀粉是由葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热使其水解成葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，使单糖脱水生成糠醛类化合物，利用蒽酮试剂与糠醛化合物的显色反应，即可进行比色测定。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料 任何植物材料。

（二）试剂

浓硫酸（比重 1.84）。9.2mol/L HClO 4。

2%蒽酮试剂，同实验 24。

（三）仪器设备

电子天平，容量瓶： 100 mL 4 个、50 mL 2 个，漏斗，小试管若干支，电炉，刻度吸管 0.5mL 1 支、2.0 mL 3 支、5 mL 4 支，分光光度计，记号笔。

三、实验步骤

1.标准曲线制作

取小试管11支从0～10编号，按表24-3加入溶液和蒸馏水。

以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，见方法一或方法二，绘制相应的标准曲线。

表24-3 各试管加入标准液和蒸馏水量

管 号 0 1～2 3～4 5～6

7～8 9～10 淀粉标准液(ml)

0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸 馏 水（ml）

2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0

淀粉含量（mg）

0 40 80 120 160 200 2.样品提取 称取 50 ～ 100 mg 粉碎过 100 目筛的烘干样品，置于 15 mL 刻度试管中，加入 6 ～ 7 mL 80 ％乙醇，在 80 ℃水浴中提取 30 min，取出离心（3000 rpm）5 min，收集上清液。重复提取两次（各 10 min）同样离心，收集三次上清液合并于烧杯，置于 85 ℃恒温水浴，使乙醇蒸发至 2 ～ 3 mL，转移至 50 mL 容量瓶，以蒸馏水定容，供可溶性糖的测定。

向沉淀中加蒸馏水 3 mL，搅拌均匀，放入沸水浴中糊化 15 min。冷却后，加入 2 mL 冷的 9.2 mol/L 高氯酸，不时搅拌，提取 15 min 后加蒸馏水至 10 mL，混匀，离心 10 min，上清液倾入 50 mL 容量瓶。再向沉淀中加入 2 mL 4.6 mol/L 高氯酸，搅拌提取 15 min 后加水至 10 mL，混匀后离心 10 min，收集上清于容量瓶。然后用水洗沉淀 1 ～ 2 次，离心，合并离心液于 50 mL 容量瓶用蒸馏水定容供测淀粉用。

3.测定 取待测样品提取液 1.0 mL 于试管中，再加蒽酮试剂 5 mL，快速摇匀，然后在沸水浴中煮 10 min，取出冷却，在 620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，从标准曲线查出淀粉含量（mg）。

四、结果计算 ：含量（%）=100*C*VT/V1*1000*W

式中： C ——从标准曲线查得淀粉量，mg。V T ——样品提取液总体积 , mL。V 1 ——显色时取样品液量，mL。W ——样品重，g。

0.9 ——由葡萄糖换算为淀粉的系数。

Ⅱ 碘-淀粉比色法

一、原理

对于淀粉含量较少的植株样品，也可采用碘–淀粉比色法。淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中，当碘化钾和硝酸钙共存时，碘能以碘–淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。将此沉淀溶于碱液，并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液进行比色。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料 任何植物材料。

（二）试剂 ． 80 ％硝酸钙溶液。． 0.5 ％碘液：称 5.00 g 结晶碘和 10.00 g 碘化钾，放入研钵混合干研，然后加 10 mL 蒸馏水研至全部碘溶解，将溶液全部转入 1000 mL 容量瓶定容后，贮于磨口试剂瓶。

3 ． 5 ％含碘硝酸钙溶液：取 10 mL 80 ％的硝酸钙溶液，加入 160 mL 水再加入 3 mL 0.5 ％的碘液混匀，现用现配。．标准淀粉溶液：称取纯淀粉 50 mg 于研钵中，加 3 mL 80 ％硝酸钙溶液，研细并转移到 100 mL 的三角瓶中，用 15 mL 80 ％的硝酸钙溶液冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中。将三角瓶置于沸水浴中煮沸 5 min，冷却后全部转入 50 mL 容量瓶中并定容。此液为 1 mg/mL 的淀粉标准液。． 0.1 mol/L NaOH。6 ． 0.1 mol/L HCl。

（三）仪器设备

分析天平，研钵，容量瓶，量筒，三角瓶，水浴，小漏斗，电炉，离心机，离心管，试剂瓶。

三、实验步骤 ．称取 1 ～ 3 g 叶片，剪碎放入研钵，加 5 mL 80 ％的硝酸钙溶液，研磨成糊状移入 100 mL 的三角瓶中，用 10 mL 80 ％的硝酸钙冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中，瓶口盖上小漏斗，在沸水浴上煮沸 3 ～ 5 min（叶片含淀粉少的 3 min，含淀粉多的 5 min），使样品中淀粉转变为胶体溶液。．给三角瓶中加 20 mL 蒸馏水，混合液转入离心管中离心（2000 ～ 3000 rpm）2 ～ 3 min，将离心后的淀粉胶体浑浊液移入 100 mL 容量瓶（淀粉含量少时，可移入 50 mL 容量瓶），三角瓶及离心沉淀物用 5 ～ 10 mL 热蒸馏水冲洗并同样离心，离心液并入容量瓶中（共洗 2 ～ 3 次）定容，即为淀粉提取液。．取 5 ～ 10 mL 淀粉待测液，加入到盛有 2 mL 0.5 ％碘液的离心管中，混匀静置 15 min 后离心（3000 rpm）5 min，弃上清液。沉淀用 5 ％的含碘硝酸钙溶液冲洗两次，向冲洗后的沉淀中加入 10 mL 0.1 mol/L 的 NaOH 混匀，将离心管浸入沸水内 5 min，使沉淀溶解。将溶液转入 50 mL 容量瓶中，加入 0.3 mL 0.5 ％碘液，用 30 mL 左右的水冲洗并入容量瓶，加入 2 mL 1mol/L 的盐酸，用水定容并显色，在 590 nm 波长处测定光密度。4 ．绘制标准曲线 取标准淀粉溶液（1 mg/mL）0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于 6 个离心管中，用 80 ％硝酸钙溶液将各管的体积补足至 5 mL，再向各管加入 2 mL 0.5 ％碘液，混匀静置 15 min 后离心，其他操作同样品测定步骤，显色后在 590 nm 波长下测定光密度。此系列溶液的淀粉含量分别为 0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mg，然后以光密度为横坐标，以淀粉含量为纵坐标绘制标准曲线。

四、结果计算 ：含量（%）=100*C*VT/V1*1000*W 式中： C ——从标准曲线查得淀粉量，mg。V T ——样品提取液总体积 , mL。V 1 ——显色时取样品液量，mL。W ——样品重（g）。

III 旋光法（谷物淀粉含量的测定）

一、原理： 酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮，可使淀粉轻度水解。同时钙离子与淀粉分子上的羟基络合，这就使得淀粉分子充分地分散到溶液中，成为淀粉溶液。淀粉分子具有不对称碳原子，因而具有旋光性，可以利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度（α），旋光度的大小与淀粉的浓度成正比，据此可以求出淀粉含量。溶提淀粉溶胶所用的酸性氯化钙溶液的pH值必须保持2.30，密度须为1.30，加时间的长短也要控制在一定范围。因为只有在这些条件下，各种不同来源的淀粉溶液的比旋度［α］才都是203°，恒定不变。样品中其他旋光性物质（如糖分）须预先除去。

二、材料、仪器设备及试剂：

（一）材料：面粉或其他风干样品

（二）仪器设备：1.植物样品粉碎机；2.离心机；3.分析天平；4.粗天平；5.旋光仪及附件；6.三角瓶；7.分样筛（100目）；8.布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵；9.离心管；10.小电炉。

（三）试剂：

三、实验步骤：

1.样品准备：（1）称取样品：将样品风干、研磨、通过100目筛，精确称取约2.5g样品细粉（要求含淀粉约2g，请参考附注估计），置于离心管内。（2）脱脂：加乙醚数ml到离心管内，用细玻棒充分搅拌，然后离心。倾出上清液并收集以备回收乙醚。重复脱脂数次，以去除大部分油脂、色素等（因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难）。大多数谷物样品含脂肪较少，可免去这个脱脂手续。（3）抑制酶活性：加含有氯化高汞的乙醇溶液10ml到离心管内，充分搅拌，然后离心，倾去上清液，得到残余物。（4）脱糖：加80％乙醇10ml到离心管中，充分搅拌以洗涤残余物（每次都用同一玻棒），离心，倾去下清液。重复洗涤数次以去除可溶性糖分。

2.溶提淀粉：（1）加醋酸－氯化钙：先用醋酸氯化钙溶液约10ml加到离心管中，搅拌后全部倾入250ml三角瓶内，再用醋酸氯化钙溶液50ml分数次洗涤离心管，洗涤液并入三角瓶内，搅拌玻棒也转移到三角瓶内。（2）煮沸溶解：先用蜡笔标记液面高度，直接置于加有石棉网的小电炉上，在4min～5min内迅速煮沸，保持沸腾15min～17min，立即将三角瓶取下，置流水中冷却。煮沸过程中要时加搅拌，勿令烧焦；要调节温度，勿使泡沫涌出瓶外；常用玻璃将瓶侧的细粒擦下；并加水保持液面高度。

3.沉淀杂质和定容：（1）加沉淀剂：将三角瓶内的水解液转入100ml容量瓶，用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三角瓶瓶，并入容量内，加30％ZnSO41ml混合后，再加15％K4Fe（CN）61ml，用水稀释至接近刻度时，加95％乙醇一滴以破坏泡沫，然后稀释到刻度，充分混合，静置，以使蛋白充分沉淀。（2）滤清：用布氏漏斗（加一层滤纸）吸气过滤。先倾清溶液约10ml于此滤纸上，使其完全湿润，让溶液流干，弃去滤液，再倾清溶液进行过滤，用干燥的容器接受此滤液，收集约50ml，即可供测定之用。

4.测定旋光度：用旋光测定管装满滤液，小心地按照旋光仪使用说明，进行旋光度的测定。淀粉（％）＝α×N×100/{[α]20D×L×(W－K)}×100 式中：α：用钠光时观测到的旋光度；［α］20 D：淀粉的比旋度，在这种方法条件下为203°；L：旋光管长度（cm）；W：样品质量（g）；K：样品水分含量（％）；N：稀释倍数；100：换算为百分率。也可以不用上列公式计算，改用工作曲线来求得淀粉含量，这样准确度高些。

Ⅲ、淀粉含量的测定

一、目的

掌握植物组织中淀粉含量测定的原理和方法。

二、原理

淀粉用盐酸水解转化成葡萄糖后，测定葡萄糖含量，根据葡萄糖含量换算成淀粉含量。

三、材料、仪器设备及试剂

材料、仪器设备及试剂与上述蔗糖的测定相同，另增加碘试剂；100ml、250ml容量瓶。碘试剂（碘化钾—碘溶液）的配制：称取碘化钾20g及碘10g溶于100ml蒸馏水中。使用前需稀释10倍。

四、实验步骤

1.葡萄糖标准曲线制作与上述还原糖含量测定相同。2.淀粉的水解

取上述还原糖含量测定中经85﹪乙醇浸提后的全部淀粉残渣，放入100ml三角瓶中，加 入6mol·L－1盐酸10ml，混匀，在沸水浴中加热10min－30min（用碘试剂检查淀粉水解程度，直至不显蓝色为止），再加蒸馏水20ml,摇匀并过滤于100ml容量瓶中，过滤后残渣再用蒸馏水冲洗3次，一并过滤入容量瓶，定容至100ml。准确取出10ml过滤液置入250ml容量瓶中，加酚酞2滴，用10﹪NaOH中和至微红色，用蒸馏水定容至250ml，待测。

3.还原糖含量测定

取4 支25ml刻度试管，编号，其中3支（三个重复）分别加入待测液2ml,1支空白管加2ml蒸馏水代替样品液，然后各管再加入DNS试剂1.5ml，摇匀，混合液在沸水浴中加热5min，然后用自来水冷却，各加入21.5ml蒸馏水使总体积为25ml，摇匀，在520nm波长下测定吸光度（A）值。

五、结果计算

根据待测液的吸光度从上述标准曲线中查出其相应的还原糖含量，然后按下公式计算出样品中还原糖（葡萄糖）含量和淀粉含量的百分率。

淀粉水解液总量（ml）从标准曲线上查得还原糖(mg)×————————————

测定时水解液用量（ml）

还原糖（﹪）= ———————————————————————————×100

（葡萄糖）样品重（mg）

粗淀粉含量（﹪）= 葡萄糖含量 × 0.9

式中系数0.9依据淀粉（C6 H10 O5）n水解时吸收n 个分子水。

第四篇：生物化学--实验九血浆胆固醇总量的测定

一、授课题目：血清总胆固醇的测定（硫磷铁法）讲授学时数：3学时

二、授课教师姓名： 孙千鸿 单位：昆医海源学院生化，化学综合实验室

职称：助教 职务：

三、使用教材（包括名称、主编、版次、出版社、出版时间）： 《生物化学实验教程》

四、本次授课的目的、要求（掌握、熟悉、了解）：

1、掌握血清胆固醇的测定的原理，临床意义。

2、熟悉血清胆固醇的测定的方法。

五、本次授课的重点、难点： 重点：血清胆固醇的测定的方法。难点：血清胆固醇的测定的原理。

六、教学方法和教学手段：

1、联系相关课程内容，引入后续内容的方式。

2、引导式、启发式教学方法。

3、以示教为主。

4、激发学生的学习兴趣，以学生动手操作为主。

七、本次授课的设计方案，包括：

1、各部分内容的讲授时间分配、拟采用的教学方案、多媒体及板书设计、专业外语词汇等。

A、本次授课分为八部分内容讲授，各部分内容的讲授时间分配、拟采用的教学方案如下：

1）联系相关课程内容，讲授血清中总胆固醇的分类、来源。（4分钟）

2）以引导式教学介绍影响血清总胆固醇水平的多种因素。（2分钟）3）为了激发学生的实验兴趣，以启发式教学方式着重讲解血清总胆固醇升高的临床意义。（5分钟）

4）讲解硫磷铁法测定血清总胆固醇含量的原理。（5分钟）5）以实际操作演示实验的操作步骤。（15分钟）6）实验结果的分析，强调计算公式。（3分钟）7）实验的注意事项。（5分钟）8）布置下次实验预习内容（1分钟）

B、板书设计： 1）目的要求： 2）实验原理： 3）实验操作： 4）注意事项： 5）结果与讨论： 6）预习下次实验：

2、重点和难点的讲授方法、时间分配等。1）实验原理（16分钟）

a、联系相关课程内容，介绍血清中总胆固醇的分类、来源以及去路。（4分钟）

b、以引导式教学方式，以引导式教学介绍影响血清总胆固醇水平的多种因素。（2分钟）

c、为了激发学生的实验兴趣，以启发式教学方式着重讲解血清总胆固醇升高的临床意义。（5分钟）

d、讲解硫磷铁法测定血清总胆固醇含量的原理。（5分钟）2）实验操作（15分钟）

a、以实际操作演示抽提滤液的制作过程，强调混匀的操作要领。（5分钟）

b、以实际操作示教，详细介绍离心机的使用，强调离心前平衡的重要性。（2分钟）

c、以实际操作示教，样品的加入，强调加样顺序，混匀时的注意事项。（5分钟）

d、复习分光光度计的使用，比色后记录数据。（3分钟）3）引导学生对实验数据进行计算，并分析结果。（3分钟）5）强调实验注意事项。（5分钟）a、硫磷铁试剂的酸性极强，强调同学们操作小心且缓慢，硫磷铁试剂沿试管壁缓慢加入。

b、采取旋转式混匀方式，防止强酸溅出，并且混匀后再进行冷却。c、本实验呈色反应受水分影响，试管及操作过程要保持干净。d、实验过程中如有强酸溅出，强调处理方法：保持冷静，先用干布擦拭，再用水冲洗。

八、课堂小结：

1、颜色出现后可进行比色，以免因为颜色的消退而影响结果的准确性，且显色后勿将试管置于强光下，因为光线会加快褪色。

2、旋转式混匀方法掌握得不够好，多组同学在数据上偏差较大。

3、培养学生查阅文献的能力，掌握血清胆固醇等物质测定的临床意义。

九、本次授课内容的参考资料（教科书、专著、期刊等）：

1、《临床生物化学与生物化学检验》，主编周新，人民卫生出版社，第三版，2006年6月。

2、《临床医学检验与技术（中级）》，主编全国卫生专业技术资格考试委员会，人民卫生出版社，第一版。

3、《生物化学检验分册》，主编梁淑新，军事医学科学出版社，第一版，2007年4月。

十、复习思考题或课后作业：

1)本实验操作中特别需要注意些什么？为什么？

2)酯类难溶于水，将它们均匀分散在水中则形成乳浊液，为什么正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？

3）影响血清胆固醇浓度的因素有那些？

附：指导教师意见（本栏仅限有指导教师的青年教师填写）

指导教师签名： 年 月 日

第五篇：GB 5009.124-2016_食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定

GB 5009.124-2016 食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定

基本信息

【英文名称】暂无 【标准状态】现行 【全文语种】中文简体 【发布日期】1994/3/18 【实施日期】2017/6/23 【修订日期】2016/12/23 【中国标准分类号】X09 【国际标准分类号】暂无

关联标准

【代替标准】GB/T 5009.124-2003 【被代替标准】暂无 【引用标准】暂无

适用范围&文摘

本标准规定了用氨基酸分析仪(茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪)测定食品中氨基酸的方法。本标准适用于食品中酸水解氨基酸的测定包括天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸共16种氨基酸。