验证溶血对血清检测NSE的影响

第一篇：验证溶血对血清检测NSE的影响

验证溶血对血清检测NSE的影响

彭静

合肥市第八人民医院 检验科

[摘要]目的：探讨溶血程度对血清检测NSE的影响程度。方法：采用Elecsys 2010电化学发光仪，检测正常人血清标本及不同溶血程度的标本NSE含量。结果：当血清中Hb含量≥0.685g/L时，就会使血清NSE出现假阳性，每增加1g/L的血红蛋白，就会使NSE含量增加23.764 ug/l。结论：溶血对血清检测NSE存在严重影响，NSE含量随溶血程度的增加而增加，临床检测NSE要杜绝溶血标本。

[关键词]溶血

NSE

Hb含量

神经元特异性烯醇化酶(NSE)为糖酵解关键酶,在临床上应用非常广泛,可作为神经元损伤的标志物[ 1 ] ,也可作为肿瘤标志物用于神经母细胞瘤、小细胞肺癌、垂体腺瘤等疾病的诊断[2 ]。由于血小板和红细胞中存在其同工酶，因而标本溶血，红细胞中可释放大量的NSE ,因此溶血可导致结果偏高[3]，严重影响检测结果的真实性和可靠性。本文重点验证不同溶血标本对NSE检测的影响程度，从而给临床医生很好的判断和依据。1 资料与方法 1.1 仪器与试剂

①瑞士罗氏公司生产的Elecsys 2010全自动电化学发光分析仪及配套NSE原装试剂，质控液。

②瑞典博尔医疗有限公司生产的MEDONIC CA620 全自动血细胞分析仪及配套试剂。

1.2 检测对象及方法

①抽取正常人（体检各项指标均正常）全血7ml,其中5 ml置于促凝胶管 ml置于EDTA-K2抗凝管，将促凝胶管于离心机3000r/m离心5分钟，立即分离血清，将血清标本分成10等份，每份200ul,进行编号。

②将抗凝全血混匀，用CA620血细胞分析仪，检测其血红蛋白（Hb）含量。

③用微量加样器，分别吸取0.1 ul，0.2 ul，0.5 ul，0.8 ul，1.0 ul, 1.5 ul，2 ul,5 ul，10 ul抗凝全血，置于2-10号管，混匀。将10个样本置于-20℃冷冻2小时，使其充分溶血。

④用Elecsys 2010分析仪检测NSE原装质控，确定其仪器状态是否稳定。将1-10号样本分别置于Elecsys 2010检测NSE含量。

1.3 结果判断

NSE原装质控范围9.58-15.60 ug/l ,正常人群参考范围为0.00-16.30 ug/l。2 结果

全血HB含量为145 g/l，NSE原装质控测定值为11.61 ug/l，在控，仪器处于稳定状态。

1-10号血清管HB含量及其测得NSE值见下表

加入全血量 0

0.1

0.2

0.5

0.8

1.0

1.5

2.0

5.0

10.0（ul）

Hb含量

0 0.076 0.145 0.363 0.580 0.725 1.087 1.450 3.625

7.250（g/l）

NSE值

9.81 11.88 13.96 20.60

24.25

29.86 37.06 50.89 92.55 182.10（ug/l）讨论

烯醇化酶是催化糖原酵途径中甘油分解的最后的酶。由3个独立的基因片段编码3种免疫学性质不同的亚基α、β、γ，组成5种形式的同工酶αα、ββ、γγ、αγ、βγ。二聚体是该酶分子的活性形式，γ亚基同工酶存在于神经元和神经内分泌组织，称为神经元特异性烯醇化酶（NSE）。因为NSE参与了糖酵解，使癌肿组织糖酵解作用增强，细胞增殖周期加快，细胞内的NSE释放进入血液增多，导致此酶在血清内含量增多，小细胞肺癌也是一种分泌NSE的神经内分泌性质的肿瘤。所以，NSE是小细胞肺癌，神经母细胞瘤最敏感、最特异的肿瘤标志物[4 ].其中，NSE水平升高以小细胞肺癌(SCLC)最为显著(86 72± 98 2 μg L),灵敏度为 82 4 % ,特异性为 95 5 % [5]。另外，NSE在Whims瘤、乳腺癌、胃癌、淋巴瘤中也可有表达，68.7%的转移性精原细胞瘤患者在行睾丸切除术前血清NSE水平可见升高。所以NSE检测的准确性对临床诊断非常重要。而在红细胞、浆细胞和血小板中也有NSE存在，若静脉穿刺抽血后的60分钟内未进行红细胞分离，那么NSE便会释放到血清中，或由于抽血不顺利等其他原因造成标本溶血都会对检测结果影响非常大，本试验结果显示，当正常血清NSE为9.81 ug/l，Hb浓度为0.363 g/l时，NSE浓度就会出现假阳性（20.60 ug/l），每增加1g/L的血红蛋白，就会使NSE含量增加23.764 ug/l。按照这个比例，即使正常血清检测值为0，当Hb浓度≥0.685 g/l，NSE就会出现假阳性（≥16.3 ug/l）。而含有0.685 g/l的Hb，血清肉眼可见微红色。所以当临床采集标本困难，尤其是采集儿童患者，造成标本溶血，而又必须检测时，临床医生和检验人员可以根据溶血程度来大致判断NSE的真实水平。当然，规范采血、及时分离血清，避免溶血，才能得出准确而可靠的肿瘤指标含量。

[1] De Giorgio CM.Neurom-specific enolase,marker of acute neuronal injury,is increased in complex partial-status epilepticus [J].Epilepsia,1996,37(7):606-609 [2] 晏勇，王学峰，陈阳美，等.癫痫患者血清神经元特异性烯醇酶的测定 [J]；中华神经科杂志；1999，32（1）：34-36.[3] 张亚松;肖登岩;麦富巨.温度、时间及溶血对全血标本中NSE测定的影响[J];医学临床研究；2008，25（7）：1193-1194

[4] Ebraheim NA ,Mekhail AO ,Gargasz SS,et al.Ankle fractures involving the fibula proximal to the distal tibiofibular syndesmosis[J].J Bone Jt Surg,1997,18:512-513.[5]

陈社安,陈斌鸿,胡维维,庞丹梅.血清NSE、CYFRA21-1检测对肺癌诊断的临床应用 《广西医学》2004年07期

第二篇：血清标本溶血对血液生化指标的影响

血清标本溶血对血液生化指标的影响45

血清标本溶血对血液生化指标的影响；李大磊1，史文华1，刘志峰1,2；1山东省天然药物工程技术研究中心；2烟台大学药学院山东省烟台市264005；摘要：目的探讨血清标本溶血对血液生化检验结果的影；关键词：溶血；生化检验；；Theinfluenceofhemolysiso；LIDa-lei1，SHIWen-hua1，LI；1．ShandongEngineerin

血清标本溶血对血液生化指标的影响 李大磊1，史文华1，刘志峰1,2 1山东省天然药物工程技术研究中心 2烟台大学药学院 山东省烟台市 264005 摘要：目的 探讨血清标本溶血对血液生化检验结果的影响，为药物安全性评价的长期毒性试验数据的分析提供一定的依据。方法 采用全自动生化分析仪检测10份正常大鼠血液标本在溶血前和溶血后血清葡萄糖(GLU)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐（Cre）、尿素氮(BUN)、胆固醇(CHO)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、钙（Ca++）、镁（Mg++）、钠（Na+）、钾（K+）、氯（Cl-）的值，并进行了比较和统计分析。结果 溶血后AST、TBIL、ALT、K+的值比溶血前的值高，具有统计学意义；Cre的值比溶血前的值低，统计差异显著；GLU、TP、ALB、BUN、CHO、ALP、Ca++、Mg++、Na+、Cl-的值溶血前后未见明显统计学意义的改变。结论 溶血对血清AST、TBIL、ALTK+、Cre有明显的干扰影响，提请在分析测定结果时注意溶血情况。

关键词：溶血；生化检验；

The influence of hemolysis on sericem biochemical tests LI Da-lei1，SHI Wen-hua1，LIU Zhi-feng1,2 1．Shandong Engineering Research Center for Natural Drugs, Yantai, Shandong 264003 2．School of Pharmacy, Yantai University, Yantai, Shandong 264005 Abstraet：Aim To observe the influence of hemolysis on the results of biochemical tests.Methods The blood collected from the rat divided into 2 samples, one of which is to process hemolysis serum, the other is to process normal serum.The serum biochemical data were detected respectively, which include glucose(GLU), alanine aminotransferase(ALT), aspartate aminotransferase(AST), total protein(TP), albumin(ALB), creatinine(Cre), Blood uric nitrogen(BUN), cholesterol(CHO), alkaline phosphal ase(ALP), total bilinibin(TBIL), calcium(Ca++), magnesium(Mg++), natrium(Na+), kalium(K+), chlorin(Cl-).The data were treated with paired-test.Resluts The level of serum AST, TBIL, ALT and K+ increased in hemolysis samples than normal.The level of serum Cre in hemolysis samples is lower than normal.There is no significant difference in serum GLU, TP, ALB, BUN, CHO, Ca++, Mg++, Na+ and Cl-.These results indicate that hemolysis could interfere the results of serum AST, TBIL, ALT, K+ and Cre.The significance of hemolysis on serum biochemical analysis should be regarded in drug safety evaluation.Key words ：Hemolysis；Biochemical analysis 在新药安全性评价的长期毒性试验中，血液生化指标的分析对药物毒性作用的了解和毒作用靶器官的判断具有重要的意义，是评价药物毒性的重要依据之一。

长期毒性试验的血液生化分析具有其特殊性，例如动物尤其是小动物的采血是不可重复的；血液生化测定结果的统计分析受数据资料数的限制等。在工作中往往因各种原因导致标本溶血，溶血样本不参与结果分析往往使统计资料数偏少，因此血清标本溶血时主要影响哪些指标，测定结果是否可以参与统计数据的分析，是所有药物安全性评价工作者需要了解的问题。为了能及时客观地分析生化指标的变化是否具有临床意义，应当详细了解标本溶血对各项血液生化指标的影响。目前国内尚未见标本溶血对药物安全评价所要求的十几项血清生化指标影响的报道，本文观察了药物安全评价长期毒性试验中需要测定的生化指标在标本溶血前后检测结果的变化，旨在为标本溶血时血液生化结果分析提供一定的参考依据，尽量增加生化测定数据的可利用性。材料与方法 1.1 动物来源 SD大鼠，清洁级。由山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，动物合格证号为：鲁动质字D20021133。

1.2 仪器与试剂

AUTOLAB全自动生化分析仪（AMS，意大利）。血清电解质分析仪(MEDICA，美国，EASYLYTE PLUS)，试剂原装。血糖（GLU）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（Cre）、尿素氮（BUN）、胆固醇（CHO）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBIL）、镁、钙血液生化分析试剂盒，均购自中生北控生物科技股份有限公司。

1.3 溶血的血清标本的制备

取SD大鼠10只，雌雄各半。禁食不禁水12小时，用水合氯醛麻醉后腹主动脉取血6ml，分别注入两支干燥试管各3ml。其中一支让其自然凝固，另一支在血液凝固前用金属棒搅拌

使其溶血，然后以3 000 r*min-1离心10min，取上清液分别为未溶血和溶血的血清标本。

1.4 生化指标的测定

用葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖(GLU)、连续监测法测定谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)、双缩脲法测定总蛋白(TP)、溴甲酚绿法测定白蛋白(ALB)、苦味酸法测定肌酐（Cre）、两点动力法测定尿素氮(BUN)、酶比色法测定胆固醇(CHO)、连续监测法测定碱性磷酸酶(ALP)、重氮法测定总胆红素(TBIL)、邻甲酚酞络合酮比色法测定Ca++、二甲苯胺蓝法测定Mg++的值，以上指标均用AUTOLAB全自动生化分析仪测定。用EASYLYTE PLUS测定血清电解质Na+、K+、Cl-的值。结果

溶血后AST、TBIL、ALT、K+的值比溶血前的值高；Cre的值比溶血前的值低，GLU、TP、ALB、BUN、CHO、Ca++、Mg++、Na+、Cl-的值在溶血前后未见明显改变（表1）。

Table 1 The influence of sample hemolysis on biochemical tests（X±SD）biochemical datum AST(IU/L)ALT(IU/L)T-BIL(mg/dl)K+(mmol/l)ALP(IU/L)Cre(mg/dl)GLU(mg/dl)Cl-(mmol/l)TP(g/L)ALB(g/L)BUN(mg/dL)CHO(mg/dl)Ca++(mg/dl)Mg++(mg/dl)Na+(mmol/l)3 讨论

3.1.谷草转氨酶(AST)人红细胞中AST活性约为血浆中的40倍[1]。当标本溶血时，势必引起血清中AST活性的升高，从而使溶血标本的结果明显高于未溶血标本。AST主要是作为肝损伤的敏感指标，Normal Serum 131.5±19.5 42.8±8.5 0.13±0.05 4.6±0.3 255.5±112.4 0.83±0.18 105.5±22.4 107.4±3.7 60.2±4.6 17.2±1.8 20.5±3.8 48.7±6.9 18.8±7.2 1.5±0.8 133.8±1.9 Hemolysis serum 247.7±27.4** 49.9±6.3** 0.49±0.18** 5.9±0.5** 243.1±108.9** 0.61±0.19** 98.7±21.5* 109.0±2.6* 61.2±2.9 17.2±1.3 21.6±4.9 50.7±6.0 20.9±7.8 1.7±0.7 134.9±4.4 % 91.7 18.9 315.0 27.2-5.1-27.7-5.1 1.5 2.1 0.8 4.9 4.6 27.0 42.1 0.8 Compared with normal serum *P<0.05;**P<0.01.测定结果的偏高会导致假阳性的产生，严重影响了药物毒性的判断。故溶血标本AST的测定结果不能用于统计结果分析，若出现溶血标本，应当在报告中注明。

3.2 谷丙转氨酶(ALT)细胞内ALT含量比血浆中高约7倍，因此溶血后ALT含量测定的增高主要来源于细胞内ALT的大量释放。可见与AST相比，ALT受溶血影响轻些，故对样品的要求低一些，如果标本溶血不很严重，可以参与统计资料的处理，但在分析结果时要注意考虑溶血的影响。

3.3 总胆红素(TBIL)中生北控生物科技股份有限公司的测定试剂盒是用重氮法测定总胆红素的，最后生成红紫色的偶氮胆红素，主要在波长为540nm～560nm处有光吸收。而血红蛋白在波长540nm～550nm处有光吸收[2]，恰与偶氮胆红素的比色波长相近。因此溶血后红细胞破裂时大量血红蛋白进入血清，势必造成总胆红素测定值的升高，是总胆红素测定的正向干扰因素。此外，由于血红蛋白与重氮试剂反应形成的产物可破坏偶氮胆红素，溶血对重氮法测定胆红素同时存在负向干扰，使测定结果偏低，但该作用较轻微[3]，因此溶血后由于血红蛋白对测定结果的干扰，胆红素的测定结果往往偏高。

3.4 钾（K+）

钾是细胞内液的主要阳离子，约98％的钾存于细胞内，红细胞内钾浓度约为105mmol/L，而血清中仅有3.5 mmol/L～5.4 mmol/L[4]。因此溶血造成血清钾测定的增高主要来源于红细胞内中钾的大量释放。有报道表明血清游离血红蛋白在 2.5～2.8g / L时血清钾增高14%～16%，血清游离血红蛋白达 6.6g / L时血清钾增高可达41%[5]，因此在分析血清钾的结果时引起注意。

3.5 肌酐（Cre）

中生北控生物科技股份有限公司的测定试剂盒是采用苦味酸法测定Cre的。而苦味酸特异性较差，易受其它还原性物质影响，主要是维生素C、酮体、丙酮酸等假肌酐干扰[4]。假肌酐物质亦可与苦味酸形成颜色反应，导致测定值发生偏差。这种假肌酐物质红细胞中最多，血清中较少，故溶血后红细胞中假肌酐物质的释放是造成测定值发生偏差的主要原因。

3.6 血清葡萄糖(GLU)中生北控生物科技股份有限公司的测定试剂盒是采用葡萄糖氧化酶法测定GLU，葡萄糖氧化酶法的特异性较强，干扰物较少，而过氧化氢酶易受到其它物的影响，如维生素C、谷胱苷肽均因能竞争H2O2而导致负偏差[4]。3.7碱性磷酸酶(ALP)中生北控生物科技股份有限公司的测定试剂盒是采用连续监测法测定ALP的。连续监测法测定ALP是通过在405nm处连续监测生成的黄色对硝基酚氧离子，根据单位时间内吸光度的增加来算出ALP的活力，因此排除了血红蛋白在波长540nm～550nm处光吸收的影响。故溶血样本ALP测定结果降低的原因可能是红细胞破裂逸出了抑制ALP或底物反应的物质。

3.8 氯（Cl-）

血浆中氯约为103mmol/L，红细胞中氯约为49~54mmol/L。溶血会导致细胞内的氯离子转移到血清中，从而引起了血清氯离子测定值得升高。[4] 3.9溶血后对测定结果无明显影响的项目主要包括总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、胆固醇(CHO)、Ca++、Mg++和Na+。溶血后测定结果与未溶血时比较无统计学差异（P>0.05）。可能原因是这些项目的测定方法受溶血影响不大，因此在新药的安全评价时可以列入统计资料中进行统计分析和结果判定。

3.10 溶血原因及其防止

高亚英[6]等认为溶血的原因主要是操作不当和抽血器具不合格造成的。结合我们日常工作分析造成溶血的可能原因主要包括：（1）由于抽血困难，采血时定位进针不准、针尖在血管中探来探去造成血肿等而发生溶血。（2）注射器和针头连接不紧，采血时空气进入，在抽取的血标本中混有泡沫，这种混有泡沫的血标本，放置一定时间后泡沫破裂或迅速干燥，造成血细胞破坏而发生溶血。（3）血标本在运输过程中过度振荡或贮存不当。（4）不合格的塑料制品会因聚合不完全而具有毒性，这种毒性可造成溶血；（5）试管质量粗糙。

因此，在采血、检验过程中必须注意细心操作，并注意注射器、针头和试管的质量。样本发生溶血后血清谷草转氨酶(AST)不能参与统计结果的处理，其他指标在参与统计结果处理时，注意分析溶血的影响，并在数据中加以标注。

参考文献

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第三篇：溶血会影响哪些检测结果（最终版）

溶血会影响哪些检验结果

检验人都知道，在标本采集、处理过程中，红细胞破坏造成溶血。原因有很多，包括采血不顺、压脉带过紧、抗凝血混匀用力过猛、离心破管等等。溶血会影响部分检验结果。在此，我查阅文献，汇总一下，与大家分享。

一、生化项目

（1）结果偏高的项目

溶血对乳酸脱氢酶（LDH）的影响最大，可使测定值升高达100-180；其次是肌酸激酶（CK），高达 约69倍；；再次，是血清磷（P）和钾（K），前者为50倍，后者为20-30倍。还有谷草转氨酶（AST），10-30倍；肌酸激酶同工酶（CK-MB）15倍；谷丙转氨酶（ALT），7倍。其他受到影响但影响程度尚不明确的有钠（Na），镁（Mg），铁（Fe），氯化物（CL），总蛋白（TP），α-羟丁酸脱氢酶（HBDH），低密度脂蛋白（LDH）等。

（2）结果偏低的项目

溶血导致某些项目的测定结果偏高外，还可导致有的项目值偏低。如γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）。

（3）影响不大的项目

多种文献报道显示，白蛋白（Alb）和高密度脂蛋白（HDL）受溶血的影响不大。

二、凝血项目

溶血标本检测的凝血酶原时间（PT），凝血酶时间（TT）要比不溶血的标本测定值分别升高约7.22%和26.26%；血浆纤维蛋白原（Fg）则降低约9.88%。溶血后结果的改变与溶血程度无明显比例关系。促凝血检测 结果受溶血因素影响,但不随溶血程度的增加而成简单的线性改变。活化部分凝血活酶时间（APTT）升高约8.48%，但也有人认为溶血对此项目影响不大。

三、免疫项目

在免疫项目检测中，溶血对化学发光法或时间分辨免疫荧光法所检测的项目的影响报道较多。其中，神经元特异性烯醇化酶（NSE）的影响最大，可使结果升高达到20倍。其次，对前列腺特异抗原（PSA）、游离T3（FT3）、游离T4（FT4）、心肌肌钙蛋白I（cTn）、肌红蛋白（MYO）也有一定影响。再者，有研究显示，溶血本身对胰岛素水平影响不大，但由于红细胞内含有胰岛素降解酶，溶血后该酶释放，随着溶血时间的延长，胰岛素不断降解，从而导致浓度降低。对于ELISA方法的影响，有研究认为HIV抗体检测实验中，溶血可造成约3.75%的标本出现假阳性。

溶血对有些项目的影响仍然存在争议，例如血钙（Ca）、尿素氮（BUN）、肌酐（CR）、碱性磷酸酶（ALP）、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHO）、葡萄糖（Glu）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）。这可能与检测方法不容有关，也可能与试验标本的溶血程度有关。

总之，作为检验人，我们要明确受溶血影响的检验项目，在实际工作中注意观察标本质量，以避免给临床提供不可靠的的实验室数据。同时，溶血对部分项目的影响尚不明确，我们不妨继续研究，提供数据以供同仁参考。

第四篇：标本溶血对ELISA检测乙肝表面抗原的影响

标本溶血对ELISA检测乙肝表面抗原的影响

在临床检测中，常常遇到溶血的标本。溶血对ELISA检测乙肝表面抗原（HBsAg）究竟是否有影响，各文献报道很不一致，本文对标本溶血的原因及其对ELISA检测乙肝表面抗原的影响进行简要的讨论。1 标本溶血的原因

溶血是临床检验中最常见的一种干扰和影响因素。溶血可分为体内溶血和体外溶血［1］。体内溶血可由物理因素（如人工心脏瓣膜或大血管手术后）、化学因素（如恶性疟）和药物毒性反应等因素引起。体外溶血可由物理因素（抽血时负压过大、水浴温度过高、冰冻、振荡等机械性破坏）、化学因素（血样接触表面活性剂）和代谢因素（如遗传病引起红细胞脆性增加）引起。

在临床上常见的引起标本溶血的原因包括 ［2］ :由于病人严重脱水、低血容量休克等原因导致穿刺困难造成的溶血;由于抽血器具质量不合格如真空管负压不够或塑料试管质量较差导致的溶血;用干燥管采血为了尽快分离血清用竹签搅拌不当引起的溶血等。2 标本溶血对乙肝表面抗原检测的影响

一些研究没有发现标本溶血对HBsAg检测的影响。李穗芬 ［3］ 对20例HBsAg阴性和10例HBsAg阳性病人的溶血和非溶血标本包括10例OD值在临界值附近的标本进行了对照，结果非溶血和溶血标本的阴、阳性结果完全一致。20例HBsAg阴性和10例OD值在临界值附近的样本，溶血与对应非溶血标本OD值间差异没有显著性;10例HBsAg阳性样品，溶血标本OD值明显大于对应非溶血标本OD值。因此得出结论，标本溶血不影响HBsAg结果的判定，只是使HBsAg阳性标本的OD值提高。许斌等［4］ 对HBˉsAg强阳性样品的非溶血与溶血（Hb浓度为241g/L）标本的A值作了对照后未发现两者有统计学差异，得出结论:溶血对HBsAg的检测没有影响（严格意义上应表述为:溶血对HBsAg强阳性标本的检测没有影响）。单桂秋等［5］ 的研究也显示，HBsAg阳性样品的非溶血与溶血标本的A值间经t检验差异无显著性。

其他的一些研究则发现，溶血对HBsAg的检测有影响。钱厚明等 ［6］发现，在17例溶血标本中，初检的5例HBsAg阳性标本，经重新抽血复检后有2例仍为阳性，另3例转阴。认为是溶血导致了假阳性的出现。刘玉振等 ［7］ 研究发现，溶血对HBsAg的检测有影响，当红细胞浓度>25%造成的溶血可导致假阳性。龙宪和等［8］ 研究发现，无论在健康人还是乙肝病毒感染者中，溶血均导致了ELISA一步法检测HBsAg假阳性结果的出现，而采用二步法则可以保证结果判读无误。标本溶血对乙肝表面抗原检测影响的可能机制

溶血是由于各种原因造成红细胞破坏，胞内血红蛋白（Hb）等物质和细胞内液进入血清。溶血对ELISA的影响主要是反应孔对溶血血清中Hb的非特异性吸附和溶血时细胞内液对血清的稀释作用。单桂秋等［5］ 的实验也证明了溶 血对血清具有稀释作用。

在ELISA试验中，酶标反应板孔包被物的浓度是一个相对定值，抗原抗体反应存在最适比例和后带现象，因此，HBsAg浓度与A值只是在一定的范围内呈一定的线性关系;当HBsAg达到一定浓度时A值的变化进入平台期;当HBsAg浓度太高时，A值反而会降低。因此，溶血可以使HBsAg浓度很高的样品的A值升高（在一定程度上解决了后带现象）;当HBsAg浓度与A值呈线性关系时才会因溶血的稀释作用使A值下降;当HBsAg浓度近临界值时，可能造成假阴性。

Hb具有类过氧化物酶活性，其作用与辣根过氧化物酶类似，如果反应孔非特异吸附Hb而残留，则可催化底物显色，使本底A值升高甚至造成假阳性。如果洗涤质量好，则可能大大减少或排除非特异性吸附的干扰。单桂秋等［5］ 的实验未体现血中Hb非特异性吸附的影响。龙宪和等 ［8］ 采用二步法操作可以排除溶血释出的Hb对HBsAg检测的影响也说明洗板质量在ELISA检测中的重要性。

总之，溶血对ELISA检测HBsAg有一定的影响，影响的性质及其大小因所使用的试剂、测定方法、标本HBsAg的有无及浓度高低、洗板的质量好坏而异。参考文献 靳敏.溶血对临床生化检验影响的探讨.广西医学，2002，24（9）:1363-1364.2 张小洁，刘建芝.真空采血标本溶血原因分析及预防措施.护士进修杂志，2001，16（3）:180.3 李穗芬.标本溶血对乙肝表面抗原检测的影响.广州医药，2001，32（5）:65.4 许斌，朱虎定.ELISA检测HBsAg影响因素的探讨.临床检验杂志，2000，18（4）:232.5 单桂秋，苏建婷.溶血及脂浊样品对ELISA检测乙肝表面抗原的影响.临床检验杂志，1999，17（2）:102-103.6 钱厚明，赵江燕，张燕.应重视ELISA检测HBsAg灰区范围内样品的复检.上海医学检验杂志，2002，17（3）:156.7 刘玉振，张淑琴，马宏伟.溶血对抗-HCV、HBsAg等测定结果的影响.中国输血杂志，1999，12（1）:32-33.8 龙宪和，童华诚.溶血对乙型肝炎五项血清标志物检测结果的影响.中华医学检验杂志，1996，19（1）:47-48.作者单位:430061武警湖北总队医院检验科

第五篇：4.28标本溶血对乙肝表面抗原检测的影响

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溶血对乙型肝炎表面抗原检测的影响

乙型肝炎表面抗原的检测是诊断乙肝的主要指标，随着检验技术的不断发展酶联免疫法因其简便，灵敏度高，特异性强，不需要特殊设备的特点，而被广泛应用[1]。溶血是临床检验中最常见的一种干扰和影响因素[2]。除常见的红细胞破坏外，血小板、白细胞等血细胞破坏释放的某些胞内成分也可干扰或影响临床检验结果的判定。由于各种原因造成的溶血，非特异性物质对试验造成影响，致使检验结果出现假阳性，现分析如下 1资料与方法

1．1 一般资料

14例乙肝患者检查，86例健康人体检。

1．2试 剂

乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法 ELISA)，上海科华生物技术有限公司生产。

1．3方法

1．3．1 溶血血清制备，将待测血清放置于低温冰箱(-40℃)内冻20min后,取出融化,以3000r/min离心10mi n，分离溶血血清。溶血和不溶血各1份。

从冰箱取出试剂盒室温放置30min，微孔反应条中每孔加入待测标本50μL，设阴阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照(或阳性对照)各1滴,并设空白对照 1孔。然后每孔加入酶结合物1滴(空白对照除外)，充分混匀，封板，置37℃避光孵育30min，弃孔内液体，洗板5次后拍干。每孔加显色剂A和B各1滴，充分混匀，封板，置37℃避光孵育15min,目测比色，肉眼判断结果：显蓝色为阳㈩，无色为阴性㈠。

1．3．2 最后结果应用统计软件SPSS13.0进行分析。2结果

2．1 14 例溶血和不溶血乙型肝炎阳性结果完全一致。

2．2 68 例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原阴性结果完全一致。

2．3 18 例溶血雨不溶血乙型肝炎表面抗原结果不一致，出现假阳性。经二步法：从冰箱取出试剂盒室温放置30min。微孔的反映条件中各加入50μL待测液，并分阴阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照或阳性对照，各一滴，并设空白对照1孔，37℃避光孵育30min，弃空内液体、洗版5次拍干，每孔加酶结合物1滴（空白组除外），充分混匀，封板，然后在 37℃避光孵育30min，弃空内液体，本文档由www.xiexiebang.com云轩亭论文网整理提供！

洗版5次，拍干，加显色剂A和B各一滴，充分混匀，封板，然后在37℃避光孵育15min,目测比色并判断结果：HbsAg显蓝色为阳性，无色为阴性，结果均为阴性。结果经SPSS13.0分析，见表1：

表1 血液标本ELISA检测结果分析 乙肝患者（人）

检测结果 阳性（﹢）阴性（﹣）

F P 3讨论

3．1 引起溶血的常见原因及对策：

采血时发生的溶血：1注射器和容器不干燥，不清洁；2注射器与针头连接不好；3压脉带捆扎时间过长，淤血过久[3]；4抽血消毒时酒精未干就进行抽血；5穿刺不顺利损伤组织过多；6抽血速度过快针尖在静脉中探来探去；7血液注入容器中时未取下针头，或用力推出产生大量气泡；8在有血肿的地方采集血样；9渗透压的改变；10为了尽快分离血清，用竹签搅拌不当引起的溶血等；11用干燥管采血等。病人自身的因素；1病人自身有溶血性疾病；2由于病人严重脱水、低血容量休克等原因导致穿刺困难造成的溶血。

弄清楚了溶血的常见原因，在临床上，我们就要积极的避免这些因素的发生，定位准确因素，对症下药，规范要求，熟练操作，避免人为因素导致溶血的发生，从而使检测更加的准确。

3．2 溶血标本采用酶联免疫法（ELISA）检测

乙型肝炎表面抗原易出现假阳性分析原因．可能是溶血血清中含有过氧化酶物质（红细胞或血红蛋 白中的亚铁血红素），能与聚 乙烯孔内预包被的抗原或抗体结合，在洗涤过程难以完全洗脱；也可能是谷胱甘肽等过氧化物酶的作用，谷胱甘肽广泛存在于人体组 织和细胞中，当溶血时，细胞内的过氧化物酶进入血浆，并大量吸附于细胞碎片及纤维蛋白原上，从而增加加样后微孔板洗涤的难度[4]，同辣根过氧化物酶作用相似，其可使过氧化氢释放出原生态氧，从而催化底物甲联苯胺生成可溶性物质显色，使乙型肝炎表面抗原易出现假阳性。由于一步法洗涤步骤往往难以完全洗脱，残留的过氧化物酶催化底物四甲基联苯胺显蓝色，使

Ag产生假阳性。二步法首先将血清洗掉，残留的过氧化物酶含量极微。温

健康人（人）溶血 18 68

1284.44 0．000

不溶血 0 86 溶血 14 0-2．4 溶血对阴性标本检测易出现假阳性，阳性标本无影响。本文档由www.xiexiebang.com云轩亭论文网整理提供！

育过程中不会与酶结合物所含抗原与抗体结合，再经第二次洗涤，大大降低了残留的可能性，保证了结果的准确无误。

3．3 对待结果要严谨

经过统计分析，见表1，我们可以看出，对于HbsAg阳性的标本检测溶血与不溶血的检测没有差别；对于健康者的检测，溶血与不溶血的检测，P<0.001,结果有统计学意义，说明两者间存在差异，这就要求我们的检验医师在对“健康者”的检测时，要慎重，出现假阳性后，建议采用二步法进一步检测，而对于新兵体检等要求严格的体检来说，直接采用 二步法检测；对于乙肝表面抗原阳性的溶血标本，其结果一定要慎重，务必做到准确无误，否则，会给患者带来极大的痛苦，造成极大的经济损失和精神压力。

参考文献：