临床定量PCR实验室设计建设及管理

第一篇：临床定量PCR实验室设计建设及管理

临床定量PCR实验室设计建设及管理SICOLAB

一、近年来，PCR技术在临床医学中得以快速应用，特别是在肝炎、结核、艾滋病、性病、SARS等病原微生物诊断以及部分遗传性疾病诊断和癌症的辅助诊断等方面的应用。

二、临床定量PCR实验室管理

临床定量PCR实验室由卫生部管理，依据国家卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）《临床基因扩增检验实验室工作规范》、（卫检字[2002]8号）、《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》（2002-1-14）、《临床基因扩增实验室申请表》及《临床基因扩增实验室验收表》执行。实验室申办程序包括：

（1）填写调查表，由省临检中心审核；

（2）正式填写申请表，上报卫生部临检中心；

（3）评审由卫生部、省专家参加，并报省卫生厅备案；（4）合格单位名单由卫生行政部门在媒体公示。临床定量PCR实验室应具备以下条件：标准的实验室设计设置、专业的技术人员、标准操作程序（SOP）和质量管理文件等。

1、实验室设置及人员管理在实验室设计上，建立单流向、一体化的临床定量PCR实验室是安全准确进行基因扩增检验和保障生物安全的重要措施。其具有理想的布局结构、标准的风向设置、严谨的防护措施、简明洁净的外观、合适的环境条件与参数等。它具体包括建设好“3个实验区”（试剂准备区、标本制备区和PCR扩增区及其各自缓冲区）和“3个系统”（单向气流控制系统、单向物品传送系统、生物安全控制系统）。对于人员管理，首先应制定一系列规章制度。检验人员要严格遵守操作规程，制定日常工作中的质量控制流程，严格执行查对制度和考核制度，具有实事求是的工作作风。检验人员必须满足以下条件：

（1）经有资质的单位培训，考试合格取得上岗证后持证上岗。（2）专业主管为本科以上学历和中级以上职称3a以上工作经历。（3）工作人员须有专业技术职称。

（4）培训单位须由省卫生厅指定，经卫生部临检中心认可。

2、实验室操作规程的规范化建立符合当今实验室的管理模式，形成管理文件，包括质量手册、质量体系程序文件和标准操作程序（SOP）等。质量手册主要包括目录、批准页、前言、质量方针、组织结构、人员管理、实验室设施环境、仪器设备、生物防护措施、标准操作程序、标本管理、记录、报告、应急处理及实验室的工作制度等。SOP文件是最具体、最具可操作性，也是使用频率最高的文件，其精髓就是使所有与实验室检验质量有关的环节都有章可循，要让每一个操作人员都了解并严格遵照执行管理制度和标准操作程序。此外，所有实验的原始资料均应存档；所有的记录均应规范登记在册；原始登记表应记录试剂来源、批号，质控血清的来源及测定值，并注明是否在控；检验者及审核者应签名。如果实验结果对临床诊断有决定意义，其样本应留存，至少要与病历的保存期一致。规范化的管理和操作保证了实验结果的准确性和可靠性，而且便于各项数据资料的核实。

三、临床定量PCR实验室的质量控制

PCR技术自Mullis创立以来广泛应用于多种疾病检测，但PCR测定不同于一般临床检测，由于其灵敏性很高，即使有极少量DNA污染也会造成假阳性，因此对实验条件要求非常严格。检验者在操作过程中必需牢固树立“无基因观念”，严格操作规程，防止一切可能的污染，包括以前的扩增产物、天然基因组DNA、试剂配置、气溶胶、实验所用的器具等。一旦发生污染，实验即不能进行，而且查找污染源非常困难，因此避免发生污染重在预防，并贯穿于PCR检测的全过程。因此质量控制在PCR检测过程中尤为重要。

室内质量控制室内质量控制是指一个实验室内（荩荩下转第87页荩荩）部对所有影响质量的各个环节进行系统控制。目的是控制本试验室常规工作的精密度，提高常规工作前后的一致性。临床PCR实验室应开展所有检验项目的室内质量控制，并做好记录和分析[5]。PCR检测包括标本采集、核酸提取、基因扩增、产物检测等步骤，每个步骤都应有相应的质控措施。其中最关键的是标本采集和核酸提取，按照卫生部临床检验中心《临床基因扩增实验室工作规范》严格执行。室内质控贵在坚持，重在不断总结提高。3.2室间质量评价室间质量评价是实验室质量控制体系中的重要部分，是保证患者检验结果及其报告的准确性和可靠性，以及各实验室间结果可比性的重要手段。卫生部临床检验中心组织的全国性室间质量评价活动现已扩展到细菌、免疫、血液、体液、治疗药物监测、分子诊断等领域。临床PCR实验室应积极参加省、市及卫生部临床检验中心组织的各项活动，如实验室室间质量评价、质量评价总结会议、研讨会和学习班，各医院间相互学习、沟通和交流，不断改进和完善本实验室的质量管理。实事求是地汇报室间质评结果，认真地研究反馈的评价信息。接受卫生部或省临检中心的现场调查，如果1个质评项目连续2次成绩不合格，整改并停止项目收费3个月。及时发现问题，做好失控分析和记录，找出问题所在，采取相应措施，力求实验室结果准确、可靠、及时、可比，更好地服务于临床。

随着PCR实验室管理方法的不断完善，新试剂盒的相继推出，实验室设备的改良及实验方法的不断改进，定量PCR技术已经发展成为日益强大和用途广泛的技术。此外，PCR技术不同于常规的检验技术，必须按照PCR实验室的一系列要求开展工作才能保证操作的安全性和结果的可靠性。可以预计，PCR技术将会给临床医学检验方法带来一场巨大的变革，并逐步进入我国卫生机构的各级实验室，更好地为临床某些疾病的早期诊断和治疗提供服务。

第二篇：临床中PCR扩增的实验室设计

临床基因扩增（PCR）实验室设计

★

介绍了什么叫做基因扩增实验室以及基因扩增实验室是如何保证实验结果的安全性和可靠性的。并从平面布置、通风空调系统设计、污染的预防与控制几个方面探讨了基因扩增实验室设计的主要特点和应注意的问题。

★概述

临床基因扩增实验又称PCR实验，是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点，因此被临床医生广为认可，已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。但是，这种实验需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视，因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。本文主要从临床基因扩增检验实验室的平面布局，空调通风系统设计、气流控制和污染的防制几个方面对实验室设计中的主要特点进行了阐述。临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染。因此，实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。下面就对这几个方面分别进说明。

PCR实验室平面布局

临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。

实验室通风空调系统设计及压力控制

PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。1.试剂贮存和准备区

该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。2.标本制备区

该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。

3.扩增反应混合物配制和扩增区

该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。4.扩增产物分析区

该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。

本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。

污染的预防与控制

PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。1.工作区域的严格划分

（1）各个实验区域设置合理；

（2）各个实验区域要有明显的标记（如，醒目的门牌或不同的地面颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。2.合理的系统设置

（1）合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统；（2）严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。3.规范的操作（1）临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作；

（2）在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外，操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施；

（3）清洁工作及时、正确。实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外，对一些实验设备还应进行高压消毒处理。4.严格的管理

（1）严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门；

（2）在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服（如，不同颜色），当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域；

（3）尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。（4）扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等；

（5）扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。

5.完备的实验室配套设施

完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件，应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器，如，超净工作台、离心机、加样器等。

第三篇：PCR实验室设计及建设要求-SLD中检实验室技术

PCR实验室设计及建设要求

PCR实验指的是基因扩增实验，其特点是能将微量的DNA大幅增加，是分子生物学研究和实验的常规方法，PCR实验室广泛应用于生物学各个领域，例如：乙型肝炎，禽疫病、艾滋病检测，癌基因的检测和诊断，个体识别，DNA指纹，亲子鉴定及法医物证等等。SLD中检实验室技术就PCR实验室设计和建设要求逐一给大家解释：

一、PCR实验室布局

1、PCR实验室原则上分为：①试剂准备区；②样品制备区；③扩增区；④扩增产物分析区，共四个单独的工作区域。并设有专用走廊，各工作区域应设缓冲间，工作区与缓冲间宜安装连锁装置。

2、不同功能的工作区应是分隔独立的，各工作区有明显的标志，不能直通，如果紧密连接，需安装物品传递窗。

①试剂准备区和样品制备区为扩增前区；

②扩增区和扩增产物分析区为为扩增后区，即从：试剂准备区——样品制备区——PCR扩增室——产物分析室，不得逆向流动。

3、实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。

4、各工作区的顶部应该安装紫外灯，紫外灯波长一般为254mm,配置要求为每20㎡一支40W的紫外灯。

二、实验室各区功能及主要设备

1、试剂准备区：

①主要进行试剂的制备，分装和主反应混合液的制备。试剂盒用于样品制作的材料应直接运送至该区域。②试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的试剂。③本区主要设备有冰箱，天平，离心机，加样器，振荡器等。④本区对气流压力的控制，并没有严格的要求，一般为+10Pa。

2、样品制备区：

①主要进行样品的保存，核酸提取，贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。

②本区主要设备有冰箱，生物安全柜，离心机，加样器，振荡器等。③本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染，压力一般设计为+10Pa。

3、扩增区：

①主要进行DNA扩增项目。

②已制备的DNA模板(来自样品制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂准备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。

③本区主要设备有：冰箱，加样器，离心机，扩增仪等。

④本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶从本区漏出，压力一般设计为-25Pa。

4、扩增产物分析区： ① 主要进行扩增产物的测定。

②本区主要设备有加样器，洗板机、酶标仪和水浴箱等。

③本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域，压力一般设计为-25Pa。

三、PCR实验室通风系统及压力控制

①各区域之间应具备单间的实验工艺流、气流、物流与人流，形成单向流程的保护屏障。避免实验室之间的相互干扰，也防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。

②PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式，严格控制送风、排风的比例，以保证整个实验区的压力要求。

四、PCR实验室装饰

①实验室围护结构应牢固，气密性好;②所有阴阳角宜采用圆弧过度;③墙体内壁光洁，不积尘、易清洗、易消毒、耐腐蚀;④地面使用环氧树脂自流坪或PVC卷材，材料应满足光洁、耐腐蚀、无缝隙、无渗漏的基本要求。

五、PCR实验室注意事项

1、区域大小设置：样品制备区要放置生物安全柜和低温冰箱，空间应大一些。而试剂准备区，扩增区，扩增产物分析区，空间可以相对小一些。

2、应急装置配备：试剂准备区，样品制备区应设紧急洗眼器，以保证操作人员的安全。

以上内容是SLD中检实验室技术给各位分享的PCR实验室设计及建设要求的内容，想要了解更多实验室规划设计、建设施工、运营管理、认证/认可等知识，请继续关注SLD中检实验室官方网站的最新资讯。

第四篇：301医院 PCR实验室建设说明

301中国人民解放军总院临床药学 实验室工程装饰设计施工说明

一、工程概况

本工程为301中国人民解放军总院临床药学实验室改造工程,本工程位于门诊大楼后侧1层,本工程包括:上部PCR净化区、下侧试剂存储准备区全面改造。及相邻辅房装饰、通风改造,具体施工范围参见装饰图纸。净化区墙板采用50厚岩棉夹芯彩钢板围护结构,配以净化铝合金附;顶板为50厚单面玻镁手工彩钢板吊顶底标高2.5米;地面为2mn厚PVC地板。辅房吊顶为600×600矿棉板吊顶,墙体做粉刷处理。

二、设计依据

1、《医疔机枘临床基因扩增检验实验室管理办法》(2010修订)

2、《洁净室施工及验收规范》(GB5059591-2010)

3、《洁净厂房设计规范》(GB50073-2013)

4、《生物安全实验室建筑技术规范》(GB50346-2011)

5、甲方提供的相关图纸及甲乙方双方所签订的合同

三、施工材料要求

1、对工程所用的各种材料、设备、配件要根据设计及用料表进行反复核对、检查,对不符合要求的材料、设备、配件要及时更换，杜绝不耐用及质量达不到技术要求的材料、设备及配件用到工程中去

2、各种材料进厂后,要按照其不同的规格及使用顺序分别存放。材料存放地要避免妨碍工程的顺利施工。要注意防濑、防损、防盗。

四、墙内装饰,吊顶,竖板

1、放样前应复核土建结构的实际尺寸，并对照图纸检查与图纸不符合的地方,以便作出相应的调整。要求没单间的尺寸偏差单面墙长度小于5米的不应大于5‰,单面墙长度大于5m的不应大于3%。

2、地槽铝底座处须紧贴地面,与放样线尺寸不大于3m。如因地面不平而造成地槽铝不能紧贴地面时,应在地槽铝下加垫片处理。地槽铝每隔800-1000mm.用钢钉或用射钉枪进行固定。确保地槽铝纵横对接处达到90度,以保证两块立板的互相垂直,并进而保证圆弧线安装紧密

3、墙板的安装要求平整、严密,板与板之间的连接缝隙控侧在3mm之内,并保证每单间房的墙板缝隙各板之间一致，墙板上下一致。墙角垂直交接,墙板的垂直偏差不大于2‰。每一面墙的墙板立完后,应将全部墙板进行拉线校正,保证每块墙板的高度一致在安装好垂直交接的墙板后,应及时地用圆弧底座将垂直交接的墙板固定好。圆弧线底座每隔250-300m)用自攻螺丝进行固定。

4、顶板安装应在墙板主体基本完成后进行。顶板与墙板的连接要平整、严密,加载符合后,应保持平整。如顶板的跨度较大,则应用吊筋加固。顶板吊直径为8-10m.吊)的安装应根据现场的实际,灵活安装。如现场实际不允许使用吊筋,吊挂加固也可用8-10号多股铁丝代替。

五、窗、门铝合金的安装

1、门、窗所采用的密封胶条均采用优质胶条。不得使用老化无弹性、易折断的劣质胶条密封用胶采用硅玻璃脉及优质密封胶。

2、成品钢制净化密闭门到达现场后,需确认外观完整度、门体严密性后,放置于指定区城安装前确认核实门体开启方向,依据设定编号顺次安装。

3、在墙板、顶板安装完毕后,应在开孔安装风口、灯具的同时,安装R50圆弧线。圆弧线的两边应紧贴墙板和顶板。两条圆弧线之间应连接紧密,不得留有缝隙,各处阴角均用三维角过渡,各处阳角均用R50圆角过渡;地面圆弧线的门缝用大的,实验室区城上下有地圆线。

4、所用开孔位置应考虑开孔是否适应生产的需要,风口、灯具距离是否保持对称美观。

5、用专用工具在放样位量开孔，开孔放置上下偏差。所有正、长方形的开孔均用铝型材收边。收边的型材角均为45度。

6、风口、灯具安装时,应保持四周平整,结合严密。各类管道、线管进入洁净区域,其密封处理严密可靠。

7、在揭掉彩钢板保护膜前,应对房间进行清扫,除尘。待除尘完毕后,开始揭掉保护膜。清理撕下的薄膜及一切多余物,再次进行严格的清扫和擦洗。

8、彩钢板安装完成后,应进行打胶密封工作,打胶前应对需嵌填位的表面和间槽,进行严格清理,除去杂质、油污确保粘贴密实。打胶先打顶板上部,待上部拼缝完成后,再进行下部及墙板与各角的打胶。

六、地面

1、本工程净化区地面为2mm厚PVC地板。

2、维护和保养:严禁带钉的鞋子在地面上行走;严禁硬物,硬件在地面上刻划;

七、其他

1本工程均以毫米(mm)计算单位

2、本工程所用材料,规格,质量,施工要求及验收标准均应符合国家有关施工及设计标准

3、图中未尽事宜请参照国家现行施工安装验收规范执行。

附：工程图纸

第五篇：标准的PCR实验室建设方案

标准的PCR实验室建设方案

发布时间： 2009-11-5 10:15:17

一、主体结构

主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝，从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固，线条简明，美观大方，密封性好。

二、标准的三区分隔和气压调节

将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区，同时各区通过气压调节，使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。

可打开缓冲区Ⅰ，缓冲区Ⅱ和 PCR 扩增区的排风扇往外排气，在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口，空气通过回风口向室内换气。

三、消毒

在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯，供消毒用。

在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯，对实验桌进行局部消毒。

四、机械连锁不锈钢传递窗

试剂和标本通过机械连锁不锈钢（不建议使用电子连锁方式）传递窗传递，保证试剂和标本在传递过程中不受污染（人物分流）。

五、地面

地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面，整体性好。便于进行清扫，耐腐蚀。没有条件的也可采用水磨石地面，或大块的瓷砖（至少800mm×800mm）接缝需要小于2mm。

六、照明

灯具要选用净化灯具，能达到便于清洗、不积尘的特点。

在建设的过程中应注意：

（1）规范的安装流程和全面的服务流程。

（2）严格按照规范科学设计的安装流程。

（3）安装前需要确定以下安装条件，如：电源电压，电源进线位置，电话网络线进线位置，进水水压，最小安装空间，地面平整度，通风孔、进水管和下水管的位置等，理想状态的空间尺寸和通风口尺寸。

临床基因扩增（PCR）实验室设计探讨

发布时间： 2009-4-10 10:39:25

简介： 介绍了什么叫做基因扩增实验室以及基因扩增实验室是如何保证实验结果的安全性和可靠性的。并从平面布置、通风空调系统设计、污染的预防与控制几个方面探讨了基因扩增实验室设计的主要特点和应注意的问题。

关键字：基因扩增 基因扩增实验室

相关站中站： 洁净实验室/生物实验室概述

临床基因扩增实验又称PCR实验，是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点，因此被临床医生广为认可，已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。但是，这种实验需要有能保证绝对安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对临床基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视，因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。本文主要从临床基因扩增检验实验室的平面布局，空调通风系统设计、气流控制和污染的防制几个方面对

实验室设计中的主要特点进行了阐述。

临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染。因此，实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。下面就对这几个方面分别进说明。2 PCR实验室平面布局

临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。

各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。PCR实验室平面布置示意图如图1所示。

图1 PCR实验室平面布置示意图 3 实验室空调通风系统设计及压力控制

PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。3.1 试剂贮存和准备区

该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。

对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。3.2 标本制备区

该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。

本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。3.3 扩增反应混合物配制和扩增区

该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常在第一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，第二次加样必须在本区内进行。

本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。3.4 扩增产物分析区

该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。本区是最主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。4 污染的预防与控制

PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染，首先应是预防，而不是排除。4.1 工作区域的严格划分

（1）各个实验区域设置合理；

（2）各个实验区域要有明显的标记（如醒目的门牌或不同的地面颜色等），以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。4.2 合理的系统设置

（1）合理的空调通风系统设置，尽量采用全送全排的空调系统；

（2）严格的气流压力控制，保证不同的实验区内不同的压力要求。4.3 规范的操作

（1）临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训，经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作；

（2）在实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。此外，操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施；

（3）清洁工作及时、正确。实验工作结束后，必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外，对一些实验设备还应进行高压消毒处理。4.4 严格的管理

（1）严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门；

（2）在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服（如不同颜色），当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域；

（3）尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。

（4）扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等；

（5）扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别注意实验人员的安全防护。4.5 完备的实验室配套设施

完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件，应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心机、加样器等。