微生物鉴定的生理生化反应汇总

第一篇：微生物鉴定的生理生化反应汇总

微生物鉴定的生理生化反应

各种细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力不同，其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来区别和鉴定细菌的种类。利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生物化学试验或称生化反应。生物化学试验的方法很多，主要有以下几类。

一、碳水化合物的代谢试验 1．糖（醇、苷）类发酵试验

（1）原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。

(2)方法：在基础培养基中（如酚红肉汤基础培养基pH7.4）加入0.5~1.0％（w/v）的特定糖（醇、苷）类。所使用的糖（醇、苷）类有很多种，根据不同需要可选择单糖、多糖或低聚糖、多元醇和环醇等，见表6-4-1。将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中，置35℃孵育箱内孵育数小时到两周（视方法及菌种而定）后，观察结果。若用微量发酵管，或要求培养时间较长时，应注意保持其周围的湿度，以免培养基干燥。

(3)结果：能分解糖（醇、苷）产酸的细菌，培养基中的指示剂呈酸性反应（如酚红变为黄色），产气的细菌可在小倒管（Durham小管）中产生气泡，固体培养基则产生裂隙。不分解糖则无变化。

(4)应用：糖（醇、苷）类发酵试验，是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵 不同的糖（醇、苷）类，如沙门菌可发酵葡萄糖，但不能发酵乳糖，大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖。即便是两种细菌均可发酵同一种糖类，其发酵结果也不尽相同，如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖，但前者仅产酸，而后者则产酸、产气，故可利用此试验鉴别细菌。

表6-4-1 常用于细菌糖发酵试验的糖、醇类

单糖 四碳糖：赤藓糖 , 五碳糖：核糖 核酮糖 木糖

阿拉伯糖, 六碳糖：葡萄糖 果糖 半乳糖 甘露糖

双糖 蔗糖（葡萄糖＋果糖）乳糖（葡萄糖＋半乳糖）麦芽糖（两分子葡萄糖）三糖 棉子糖（葡萄糖＋果糖＋半乳糖）多糖 菊糖（多分子果糖）淀粉

醇类 侧金盏花醇 卫茅醇 甘露醇 山梨醇 非糖类 肌醇

2．葡萄糖代谢类型鉴别试验

(1)原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；能进行无氧降解的为发酵型；不分解葡萄糖的细菌为产碱型。发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖，而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵（O/F或Hugh－Leifson，HL）试验，可用于区别细菌的代谢类型。

(2)方法：挑取少许纯培养物（不要从选择性平板中挑取）接种2支HL培养管中，在其中一管加入高度至少为0.5cm的无菌液体石蜡以隔绝空气（作为密封管），另一管不加（作为开放管）。置35℃孵箱孵育48h以上。

(3)结果： 两管培养基均不产酸（颜色不变）为阴性；两管都产酸（变黄）为发酵型；加液体石蜡管不产酸，不加液体石蜡管产酸为氧化型。(4)应用：主要用于肠杆菌科与其它非发酵菌的鉴别。肠杆菌科、弧菌科细菌为发酵型，非发酵菌为氧化型或产碱型。也可用于鉴别葡萄球菌（发酵型）与微球菌（氧化型）。3．甲基红（MR）试验

(1)原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质（如醇、醛、酮、气体和水），培养基pH在 5.4以上，加入甲基红指示剂呈桔黄色。

(2)方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃孵育48h~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示剂，立即观察结果。

(3)结果判定：呈现红色者为阳性，桔黄色为阴性，桔红色为弱阳性。

(4)应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。

4．β－半乳糖苷酶试验（ONPG试验）

(1)原理：乳糖发酵过程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解。有些细菌只有半乳糖苷酶，因而只能迟缓发酵乳糖，所有乳糖快速发酵和迟缓发酵的细菌均可快速水解邻硝基酚-β-D-半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG）而生成黄色的邻硝基酚。用于枸橼酸菌属、亚利桑那菌属与沙门菌属的鉴别。

(2)方法：将待试菌接种于ONPG肉汤中，35℃水浴或孵箱孵育18~24h，观察结果。(3)结果：呈现亮黄色为阳性，无色为阴性。

(4)应用：可用于迟缓发酵乳糖细菌的快速鉴定，本法对于迅速及迟缓分解乳糖的细菌均可短时间内呈现阳性。埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、哈夫尼亚菌属、沙雷菌属和肠杆菌属等均为试验阳性，而沙门菌属、变形杆菌属和普罗威登斯菌属等为阴性。

5．VP试验

(1)原理：测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力。某些细菌如产气肠杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步脱羧形成乙酰甲基甲醇。在碱性条件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，进而与培养基中的精氨酸等含胍基的物质结合形成红色化合物。即V-P试验阳性。(2)方法：将待检菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃孵育24~48h，加入50g/Lα－萘酚（95％乙醇溶液）0.6ml，轻轻振摇试管，然后加0.2ml 400g/L KOH，轻轻振摇试管30s至1min，然后静置观察结果。

(3)结果：红色者为阳性，黄色或类似铜色为阴性。

(4)应用：主要用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别。本试验常与MR试验一起使用，一般情况下，前者为阳性的细菌，后者常为阴性，反之亦然。但肠杆菌科细菌不一定都这样规律，如蜂房哈夫尼亚菌和奇异变形杆菌的VP试验和MR试验常同为阳性。6．胆汁七叶苷水解试验

（1）原理：在10%~40％胆汁存在下，测定细菌水解七叶苷的能力。七叶苷被细菌分解生成的七叶素，七叶素与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子发生反应形成黑色化合物。

(2)方法：将被检菌接种于胆汁七叶苷培养基中，35℃孵育18~24h后，观察结果。(3)结果：培养基完全变黑为阳性，不变黑为阴性。

(4)应用：主要用于鉴别D群链球菌与其它链球菌的区别，以及肠杆菌科的某些种、某些厌氧菌（如脆弱拟杆菌等）的初步鉴别。D群链球菌本试验为阳性。7．淀粉水解试验

(1)原理：产生淀粉酶的细菌能将淀粉水解为糖类，在培养基上滴加碘液时，可在菌落周围出现透明区。

(2)方法：将被检菌划线接种于淀粉琼脂平板或试管中，35℃孵育18~24h，加入革兰碘液数滴，立即观察结果。

(3)结果：阳性反应，菌落周围有无色透明区，其它地方蓝色；阴性反应，培养基全部为蓝色。

(4)应用：用于白喉棒状杆菌生物型的分型，重型淀粉水解试验阳性，轻、中型阴性；芽胞杆菌属菌种和厌氧菌某些种的鉴定。8．甘油复红试验

(1)原理：甘油可被细菌分解生成丙酮酸，丙酮酸脱去羧基为乙醛，乙醛与无色的复红生成醌式化合物，呈深紫红色。

(2)方法：取被检菌接种于甘油复红肉汤培养基中，于35℃孵育，观察2~8d。应同时做阴性对照。

(3)结果：紫红色为阳性，与对照管颜色相同为阴性。

(4)应用：主要用于沙门菌属内各菌种间的鉴别。伤寒沙门菌、甲（丙）型副伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、孔道夫沙门菌和仙台沙门菌本试验为阴性，乙型副伤寒沙门菌结果不定，其它不常见沙门菌多数为阳性。9．葡萄糖酸氧化试验

(1)原理：某些细菌可氧化葡萄糖酸钾，生成α-酮基葡萄糖酸。α-酮基葡萄糖酸是一种还原性物质，可与班氏试剂起反应，出现棕色或砖红色的氧化亚铜沉淀。

(2)方法：将待检菌接种于葡萄糖酸盐培养基中(1ml)，置35℃孵育48h,加入班氏试剂1ml，于水浴中煮沸10min并迅速冷却，观察结果。

(3)结果：出现黄到砖红色沉淀为阳性。不变或仍为蓝色为阴性。

(4)应用：主要用于假单胞菌的鉴定和肠杆菌科菌分群。

二、氨基酸和蛋白质的代谢试验 1．硫化氢试验

(1)原理：某些细菌能分解含硫氨基酸生成硫化氢，与亚铁离子或铅离子结合形成黑色沉淀物。

(2)方法：将待检菌接种于含硫化物及亚铁离子的培养基或克氏双糖铁琼脂（KIA）中，35℃孵育18~24h，观察有无黑色沉淀出现。或用醋酸铅纸条，悬挂于KIA管中（白色滤纸，根据试管大小裁剪适当，在热的50g/L醋酸铅饱和水溶液中浸泡，然后于50~60℃烘干，121℃15min高压灭菌备用）。醋酸铅是最敏感的方法。(3)结果：有黑色沉淀物为阳性。

(4)应用：主要用于鉴别肠杆菌科细菌，如沙门菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、爱德华菌属等为阳性，其它菌属大多为阴性。但沙门菌属中亦有部分硫化氢阴性菌株，如甲型副伤寒、仙台、猪霍乱沙门菌等。2．明胶液化试验

(1)原理：细菌分泌的胞外蛋白水解酶（明胶酶）能分解明胶，使明胶失去凝固能力而液化。(2)方法：将待检菌接种于明胶培养基中，35℃孵育24h到7d或更长时间，每24h取出放入4℃冰箱约2h后，观察有无凝固。

(3)结果：如无凝固，则表示明胶已被水解，液化试验阳性。如凝固，则继续培养。

(3)应用：奇异变形杆菌、普通变形杆菌、沙雷菌属和阴沟肠杆菌等到能液化明胶，肠杆菌科中的其它细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。另外，许多假单胞菌也能产生明胶酶而使明胶液化。3．吲哚试验（靛基质试验）(1)原理：某些细菌有色氨酸酶，能分解色氨酸产生吲哚，吲哚与对二甲氨基苯甲醛形成红色的玫瑰吲哚。

(2)方法：将待检菌接种于富含色氨酸的蛋白胨水培养基中，35℃孵育24~48h，加入靛基质试剂，观察结果。

(3)结果：红色为阳性，无色为阴性。

(4)应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，如大肠埃希菌与产气肠杆菌，肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌等的鉴别。4．苯丙氨酸脱氨酶试验

(1)原理：测定细菌是否产生苯丙氨酸脱氨酶。细菌产生的苯丙氨酸脱氨酶使苯丙氨酸脱氨后生成苯丙酮酸，加入三氯化铁试剂后产生绿色反应。若延长时间，会引起退色。

(2)方法：将待检菌大量接种入苯丙氨酸培养基中，35℃孵育18~24h，滴加100g/L三氯化铁试剂4~5滴，立即观察菌落生长处有无绿色出现。(3)结果：有绿色出现为阳性。

(4)应用：变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属均为阳性，肠杆菌科其它细菌均为阴性。5．氨基酸脱羧酶试验

(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。

(2)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，观察结果。

(3)结果：若为溴甲酚紫指示剂，则试验管紫色为阳性，黄色为阴性，对照管应为黄色。(4)应用：主要用于某些细菌种间的鉴别，如赖氨酸用于产气肠杆菌（阳性）与阴沟肠杆菌（阴性）；鸟氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和克雷伯菌（阴性）；精氨酸用于阴沟肠杆菌（阳性）和产气肠杆菌（阴性）等。6．精氨酸双水解酶试验

(1)原理：精氨酸经两次水解后,生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变碱，用指示剂指示出来。(1)方法：将待检菌接种于试验培养上，置35℃孵箱孵育1~4d，观察结果。

(2)结果：溴甲酚紫指示剂呈紫色为阳性，酚红指示剂呈红色为阳性。黄色为阴性。(3)应用：主要用于肠杆菌科及假单胞菌属的鉴定。7．尿素酶试验

(1)原理：某些细菌能产生尿素酶，分解尿素产生大量的氨，使培养基变碱。(2)方法：将待检菌接种于含有尿素的培养基中，35℃孵育18~24h，观察结果。(3)结果：红色为阳性，不变为阴性。

(4)应用：主要用于肠杆菌科变形杆菌属、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴定。

8．霍乱红试验

(1)原理：霍乱弧菌分解色氨酸生成吲哚，并能使硝酸盐还原为亚硝酸盐，当加入硫酸后生成亚硝酸吲哚，呈红色反应。

(2)方法：将待检菌接种于蛋白胨水中，置35℃孵育24h，加入浓硫酸数滴，观察结果。(3)结果：呈红色者为阳性。

(4)应用：霍乱弧菌呈阳性反应，但本试验并非霍乱弧菌所特有。凡能产生吲哚并还原硝酸盐为亚硝酸盐的细菌，均可呈现阳性反应。

三、碳源和氮源利用试验 1．枸橼酸盐利用试验

(1)原理：某些细菌能利用枸橼酸盐作为唯一碳源，而在此培养基上生长，并分解枸橼酸盐生成碳酸钠，使培养基变碱性。

(2)方法：将待检菌接种于枸橼酸盐培养基上，置35℃孵育1~4d，逐日观察结果。

(3)结果：若用溴麝香草酚兰指示剂，斜面出现菌落或菌苔，培养基变蓝色为阳性；无菌落生长，培养基绿色为阴性。

(4)应用：可用此试验作细菌种属间鉴定。埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属、克雷伯菌属通常阳性，粘质和液化沙雷菌和某些变形杆菌及枸橼酸杆菌阳性。此外，铜绿假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌和嗜水气单胞菌也能利用枸橼酸盐。

2．丙二酸盐利用试验

(1)原理：某些细菌能利用丙二酸盐作为唯一碳源，丙二酸盐被分解生成碳酸钠，使培养基变碱。

(2)方法：将待检菌接种于丙二酸盐培养基中，置35℃孵育24~48h，观察结果。(3)结果：培养基由绿色变为蓝色为阳性。颜色无变化为阴性。

(4)应用：肠杆菌科中亚利桑那菌和克雷伯菌属为阳性，枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属有不同生物型反应，其它各菌属均为阴性。

3．醋酸钠利用试验

(1)原理：细菌利用铵盐作为唯一氮源，同时，利用醋酸盐作为唯一碳源时，可在醋酸盐培养上生长，分解醋酸盐生成碳酸钠，使培养基变为碱性。

(2)方法：将被检菌接种于醋酸盐培养基中，置35℃孵育2~7d，逐日观察结果。(3)结果：培养基上有细菌生长，并变为蓝色为阳性。

(4)应用：主要用于大肠埃希菌和志贺菌属的鉴别，前者为阳性，而后者为阴性。4．马尿酸钠水解试验

(1)原理：某些细菌可具有马尿酸水解酶，可使马尿酸水解为苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸与三氯化铁试剂结合，形成苯甲酸铁沉淀。

(2)方法：将待检菌接种于马尿酸钠培养基中，置35℃孵育48h，离心沉淀，取上清液0.8ml，加入三氯化铁试剂0.2ml，立即混匀，经10~15min观察结果。(3)结果：出现恒定之沉淀物为阳性。(5)应用：主要用于B群链球菌的鉴定。

5、乙酰胺利用试验

(1)原理：许多非发酵菌产生一种脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，使培养基变碱。

(2)方法：将被检菌接种于乙酰胺培养基中，置35℃孵育24~48h，观察结果。

(3)结果：培养基由绿色变为蓝色为阳性。如不生长，或稍有生长，但培养基颜色不变为阴性。

(4)应用：主要用于非发酵菌的鉴定。铜绿假单胞菌、去硝化产碱杆菌、食酸假单胞菌为阳性，其它非发酵菌大多数为阴性。

四、酶类试验 1.氧化酶试验

(1)原理：氧化酶又称细胞色素氧化酶，是细胞色素氧化酶系统中的最终呼吸酶。此酶并不直接与氧化酶试剂起反应，而是先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。因此，本试验结果与细胞色素C的存在有关。

(2)方法：取洁净滤纸条，沾取菌落少许，加氧化酶试剂（10g/L盐酸四甲基对苯二胺水溶液或10g/L盐酸二甲基对苯二胺水溶液）1滴，1min内观察结果。也可将试剂滴加到菌落上进行试验。

(3)结果：阳性者立即变粉红色，5~10s内呈深紫色。无色为阴性。

(4)应用：用于奈瑟菌属的菌种鉴定，该属细菌均阳性。此外，也用于假单胞菌属与肠杆菌科细菌的区别，前者阳性，而后者阴性。莫拉菌属、产碱杆菌属等均为阳性。

注意事项： ①试验时应避免接触含铁物质，以免出现假阳性。②10g/L盐酸四甲基对苯二胺或10g/L盐酸四甲基对苯二胺水溶液为无色溶液，在空气中易被氧化而失效，故应经常更换新试剂，并盛于棕色瓶中，若试剂已变成深蓝色，应弃去不用。

2．触酶试验

(1)原理：触酶又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

(2)方法：取洁净玻片1张，用接种环挑取细菌，加3％H2O2 1滴，立即观察结果。(3)结果：若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。

(4)应用：大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故常用此试验来鉴定。此外，金氏杆菌属的细菌也为阴性。分枝杆菌的鉴别则用耐热触酶试验，结核分枝杆菌为阴性，戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌为阳性。

注意事项：①3％H2O2溶液要新鲜配制。②不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触酶，可致假阳性反应，③取对数生长期的细菌。3．凝固酶试验

(1)原理：凝固酶试验是鉴定葡萄球菌致病性的重要试验。致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶，一种是与细胞壁结合的凝聚因子，称结合凝固酶，它直接作用于血浆中纤维蛋白原，使发生沉淀，包围于细菌外面而凝聚成块，玻片法阳性结果是由此凝聚因子所致；另一种凝固酶是分泌至菌体外，称为游离凝固酶，它能使凝血酶原变成凝血酶类产物，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，从而使血浆凝固。试管法可同时测定结合型和游离型凝固酶。(2)方法: ①玻片法：在一张洁净玻片中央加1滴生理盐水，用接种环取待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照）制成菌悬液，若经10~20s内无自凝现象发生，则加入人或兔新鲜血浆1环，与菌悬液混合，观察结果。②试管法：于试管内加1﹕4稀释的兔或人血浆0.5ml，再加1~2个待试菌菌落，置37℃水浴，每30min观察1次结果。

(3)结果：①玻片法：5~10s内出现凝集者为阳性。②试管法：如有凝块或整管凝集出现为阳性。2h后无上述现象出现，则放置过夜后再观察。

(4)应用：本试验仅用于致病性葡萄球的鉴定。

注意事项：①玻片法为筛选试验，阳性、阴性均需进行试管法测定。②血浆必须新鲜。③应使用肝素而非枸橼酸盐作抗凝剂抗凝的血浆。④本试验也可用市购的胶乳凝集试验试剂盒测定。

4．DNA酶试验

(1)原理： 某些细菌能产生DNA酶，水解外源性DNA使之成为寡核苷酸。DNA可被酸沉淀，而寡核苷酸则不会。故在DNA琼脂平板上加盐酸后，可在菌落周围形成透明区。

(2)方法：在DNA琼脂平板上点种待检菌，35℃孵育18~24h，用1 mol/L盐酸倾注平板，观察结果。

(3)结果：如菌落周围有透明区者为阳性，无透明区为阴性。

(4)应用：主要用于肠杆菌科及葡萄球菌属某些菌种的鉴定。沙雷菌、变形杆菌和金黄色葡萄球菌DNA酶均阳性。

5．胆汁溶菌试验

(1)原理：胆汁或去氧胆酸钠能导致某些细菌溶解，一方面是由于胆汁或去氧胆酸钠降低了细菌细胞膜上的表面张力，使细菌的细胞膜破损或使菌体裂解。另一方面可能与激活细菌体内的自溶酶有关。

(2)方法：①试管法：用纯培养物制备1ml生理盐水浓菌悬液，pH调至7.0，分装两支试管，各0.5ml。其中一管加0.5ml 100g/L去氧胆酸钠为试验管，另一管加0.5ml生理盐水作对照。35℃孵育每小时观察1次结果。②平板法：在血平板上选取单个可疑菌落，作好标记，直接在菌落上加1接种环20g/L去氧胆酸钠（pH7.0），置35℃孵育30min（平板不要翻转）观察结果。

(3)结果：①试管法：在3h内液体透明为阳性。②平板法：如菌落消失，仅留下溶血区为阳性，菌落不消失为阴性。

(4)应用：用于肺炎链球菌的鉴定。6．硝酸盐还原试验

(1)原理：硝酸盐还原反应包括两个过程，其一是在合成代谢过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其它含氮化合物；另一是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。硝酸盐还原过程可因细菌不同而异。有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌等；有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如沙雷菌属；有的细菌还可以将其还原产物在合成性代谢中完全利用。硝酸盐或亚硝酸盐如果还原生成气体的终末产物如氮或氧化氮，则称为脱硝化或脱氮化作用。某些细菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐与醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮基苯磺酸，后者与α-萘胺结合生成N-α萘胺偶苯磺酸。

(2)方法：将待检菌接种于硝酸盐培养基（内含小倒管）中，35℃孵育1~4d。将甲、乙等量混合液（用时混合）0.1ml加于试管内，立即或10min内观察结果。

(3)结果：出现红色为阳性反应。如欲观察有无氮气产生，可于培养基管内加1只小倒管，有气泡产生，则表示有氮气生成。如欲检查培养基中硝酸盐是否被分解，可取锌粉少许加入培养基内，如出现红色表明硝酸盐仍存在；若不出现红色，表示硝酸盐已被分解。

(4)应用：本试验广泛用于细菌鉴定。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；假单胞菌属中有的细菌能产生氮气，如铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、斯氏假单胞菌，有的则能还原硝酸盐为亚硝酸盐，如鼻疽假单胞菌等；厌氧菌如韦荣菌也能还原硝酸盐为亚硝酸盐。7．卵磷脂酶试验

(1)原理：细菌产生的卵磷脂酶，经钙离子作用，能迅速分解卵黄或血清中的卵磷脂形成混浊沉淀状的甘油酯和水溶性磷酸胆碱。

(2)方法：取待检菌划线接种或点种在卵黄琼脂平板上，置35℃孵育3~6h，观察结果。(3)结果：3h后在菌落周围形成乳白色混浊，即为卵磷脂酶试验阳性，6h后该混浊圈可扩大到直径5~6mm。(4)应用：该试验主要用于厌氧的鉴定。产气荚膜梭菌和诺维梭菌为阳性，其他梭菌为阴性。蜡样芽孢杆菌亦为阳性。8．磷酸酶试验

(1)原理：磷酸酶是磷酸脂的水解酶，可使单磷脂水解，其反应可根据反应基质不同而异，如用磷酸酚酞为基质，经磷酸酶水解后可释放酚酞，在碱性环境中呈红色。

(2)方法：取待检菌接种于磷酸酚酞琼脂平板上，置35℃孵育18~24h，于平皿盖内加1滴浓氨水，熏蒸片刻，观察结果。亦可用液体培养基，经孵育后，向管内加400g/L氢氧化钠溶液1滴，观察结果。

(3)结果：菌落变为红色者为阳性。

(4)应用：主要用于致病性葡萄球菌与非致病性葡萄球菌的鉴别，前者为阳性，后者为阴性。

9．脂酶试验

(1)原理：细菌产生的脂酶可分解脂肪为游离脂肪酸。在培养基中加入维多利亚蓝可与脂肪结合成为无色化合物，如果脂肪被分解，则维多利亚蓝释出，呈蓝色。

(2)方法：将待检菌接种于含维多利亚蓝的脂酶培养基中，置35℃孵育24h，观察结果。(3)结果：培养基变为深蓝色者为阳性，否则可呈无色或粉红色。

(4)应用：主要用于厌氧菌鉴定。在拟杆菌中产黑色素拟杆菌中间亚种产生脂酶，其它拟杆菌阴性；在梭菌属中诺维梭菌和产芽胞梭菌也产生此酶，其它梭菌为阴性。10．CAMP试验

(1)原理：B群链球菌（无乳链球菌）产生一种“CAMP”因子，此种物质能促进葡萄球菌的β-溶血素的活性。因此，可在两种细菌的交界处溶血力增强，出现箭头型透明溶血区。

(2)方法：在羊血或马血琼脂平板上，先以β-溶血的金黄色葡萄球菌划一横线接种。再将待检菌与前一划线作垂直接种，两者应相距1cm，于35℃孵育18~24h，观察结果。每次试验应做阴阳性对照。

(3)结果：两种细菌划线交接处出现箭头型溶血区为阳性。

(4)应用：主要用于B群链球菌（阳性）的鉴定，其他链球菌均为阴性。11．石蕊牛乳试验

(1)原理：由于牛乳内含有丰富的蛋白质和糖类，各种细菌对这些物质的分解能力不同，故可有数种不同反应，用以鉴别细菌。(2)将待检菌接种于石蕊牛乳培养基中，若为芽胞梭菌，要在培养基中加入无菌铁末，置35℃孵育18~24h，必要时可延长至14d。观察结果。

(3)结果：①产酸：发酵乳糖产酸，使指示剂变为粉红色。②产气：发酵乳糖而同时产气，可冲开上面的凡士林。③凝固：因产酸太多而使牛乳中的酪蛋白凝固。④胨化：将凝固的酪蛋白继续水解为胨，培养基上层液体变清，底部可留有未被完全胨化的酪蛋白。⑤产碱：乳糖未发酵，因分解含氮物质，生成胺及氨，培养基变碱，指示剂变为蓝色。(4)应用：主要用于梭菌、链球菌和丙酸杆菌的鉴定。

五、抑菌试验

1．Optochin敏感试验

(1)原理：Optochin(奥普托欣)是盐酸乙基氢化羟基奎宁的商品名。对肺炎链球菌有特异抑制作用，其作用机制可能是干扰叶酸生物合成作用，而对其它链球菌则无此作用。

(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，贴上一张含5μg奥普托欣纸片，置烛缸或二氧化碳孵箱，35℃ 孵育18~24h，观察结果。(3)结果：抑菌圈直径大于14mm为敏感，小于或等于 14mm为阴性。(4)应用：主要用于肺炎链球菌（敏感）与其它链球菌（耐药）的鉴别。2．杆菌肽敏感试验

(1)原理：A群链球菌对杆菌肽几乎是100%敏感，而其它群链球菌对杆菌肽通常耐药。故此试验可对链球菌进行鉴别。

(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴一张含0.04U的杆菌肽纸片，置35℃ 孵育18~24h，观察结果。

(3)结果：抑菌圈直径大于10mm为敏感，小于10mm为耐药。(4)应用：主要用于A群与非A群链球菌的鉴别。从临床分离的菌株中有5%~15%非 A群链球菌也对杆菌肽敏感，如6%的B群链球菌、7.5%的C群链球菌和G群链球菌等。3．新生霉素敏感试验

(1)原理：金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌可被低浓度新生霉素所抑制，表现为敏感，而腐生葡萄球菌则表现为耐药。

(2)方法：用棉拭子将待检菌菌悬液均匀涂布于M-H琼脂平板或血平板上，在平板中央贴含5μg/片新生霉素诊断纸片一张，置35℃孵育16~18h，观察结果。(3)结果：抑菌圈直径大于16mm为敏感，小于或等于16mm为耐药。(4)应用：主要用于葡萄球菌某些种的鉴定。4．O/129试验

(1)原理：O/129（2，4二氨基-6，7-二异丙基喋啶）能抑制弧菌属、发光杆菌属和邻单胞菌属细菌生长，而气单胞菌属和假单胞菌属细菌则耐药。

(2)方法：用棉拭子将待检菌菌悬液均匀涂布于碱性琼脂平板上，将10μg/片及150μg/片的O/129诊断纸片贴于平板上，置35℃孵育18~24h，观察结果。(3)结果：出现抑菌圈者表示敏感，无抑菌圈者为耐药。

(4)应用：主要用于弧菌属、邻单胞菌属与气单胞菌属的鉴别，弧菌属和邻单胞菌属菌为敏感，气单胞菌属菌为耐药。其它菌属有发光杆菌属为敏感，假单胞菌属为耐药。5．氰化钾试验

(1)原理：氰化钾可抑制某些细菌的呼吸酶系统。细胞色素、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶均以铁卟啉作为辅基，氰化钾与铁卟啉结合，使这些酶失去活性，使细菌生长受到抑制。(2)方法：将待检菌接种于氰化钾培养基中，同时接种一支不含氰化钾的对照培养基，置35℃孵育24~48h，观察结果。

(3)结果：细菌在氰化钾培养基中生长的（不受抑制）为阳性，不生长（抑制）为阴性。(4)应用：肠杆菌科中的沙门菌属、志贺菌属和埃希菌属细菌的生长受到抑制，而其它各菌属的细菌均可生长。

六、其它试验

1．克氏双糖铁或三糖铁琼脂培养基试验

(1)原理：克氏双糖铁(KIA)或三糖铁琼脂(TSI)培养基制成高层和短的斜面，其中葡萄糖含量仅为乳糖或蔗糖的十分之一，若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，分解葡萄糖产酸使pH降低，因此斜面和底层均先呈黄色，但因葡萄糖量较少，所生成的少量酸可因接触空气而氧化，并因细菌生长繁殖利用含氮物质生成碱性化合物，使斜面部分又变成红色；底层由于处于缺氧状态，细菌分解葡萄糖所生成的酸类一时不被氧化而仍保持黄色。细菌分解葡萄糖、乳糖或蔗糖产酸产气，使斜面与底层均呈黄色，且有气泡。细菌产生硫化氢时与培养基中的硫酸亚铁作用，形成黑色的硫化铁。

(2)方法：用接种针挑取待检菌的菌落，先穿刺接种到KIA或TSI深层，距管底3~5mm为止，再从原路退回，在斜面上自下而上划线，置35℃孵 育18~24h，观察结果。(3)结果：常见的KIA反应有如下几种： ①斜面碱性/底层碱性：不发酵碳水化合物，系不发酵菌的特征。如铜绿假单胞菌。②斜面碱性/底层酸性：葡萄糖发酵、乳糖（和TSI中的蔗糖）不发酵，是不发酵乳糖菌的特征，如志贺菌。③斜面碱性/底层酸性（黑色）：葡萄糖发酵、乳糖不发酵并产生硫化氢，是产生硫化氢不发酵乳糖菌的特征。如沙门菌、亚利桑那菌、枸橼酸杆菌和变形杆菌等。④斜面酸性/底层酸性：葡萄糖和乳糖（和TSI中的蔗糖）发酵，是发酵乳糖的大肠菌群的特征，如大肠埃希菌、克雷伯菌属和肠杆菌属。

(4)应用：鉴别肠道杆菌用。KIA或TSI对初分离出的、可疑为革兰阴性杆菌鉴定特别有用。其反应模式是许多杆菌鉴定表的组成部分，也可作为观察其他培养基反应的有价值的质控依据。

2．氢氧化钾拉丝试验

(1)原理：革兰阴性细菌的细胞壁在稀碱溶液中易于破裂，释放出未断裂的DNA螺旋，使氢氧化钾菌悬液呈现粘性，可用接种环搅拌后拉出粘丝来，而革兰阳性细菌在稀碱溶液中没有上述变化。

(2)方法：取1滴40g/L氢氧化钾水溶液（应新鲜配制）于洁净玻片上，取新鲜菌落少许，与氢氧化钾水溶液搅拌混匀，并每隔几秒钟上提接种环，观察能否拉出粘丝。(3)结果：用接种环拉出粘丝者为阳性，仍为混悬液者为阴性。

(4)应用：主要用于革兰阴性菌与易脱色的革兰阳性菌的鉴别。大多数革兰阴性菌于5~10s内出现阳性反应，有的则需30~45s，假单胞菌、无色杆菌、黄杆菌、产碱杆菌、莫拉菌等大多数在10s内呈阳性，不动杆菌、莫拉菌反应较慢，大多数菌株在60s内出现阳性，而革兰阳性菌在60s以后仍为阴性。

第二篇：微生物与生化药学专业

微生物与生化药学专业

2009年硕士研究生入学复试具体实施办法

生物与制药工程学院“微生物与生化药学”专业2009年硕士研究生入学复试办法按《武汉工业学院2009年硕士研究生复试办法》执行，具体实施办法如下：

一、复试内容

1、综合面试：包含外语听说能力测试、专业知识考核和面试及实践环节测试等复试内容。

（1）外语听说能力测试：主要包括专业外语和日常用语两方面的考核，采取口试形式，满分为100分。

（2）专业知识考核：满分为100分。重点考查考生对专业理论与技能及相关知识的掌握是否扎实、深厚和宽广，是否具备本专业研究生入学的基本要求。考核设天然药物资源利用、药物设计与合成、药物的微生物转化和提取、微生物与生化药物四个方向的问题。

（3）面试及实践环节测试：采取口试形式，满分为100分。主要考查政治思想品德、专业综合知识、实践动手能力、科学思维、创新能力和反应的能力等。

（4）计分方法：总分＝外语听说能力测试成绩×20%＋专业知识考核成绩×40%＋面试及实践环节测试成绩×40%。

说明：考生复试程序为：首先进行专业知识考核的考试，然后进行逐个面试。面试部分先进行英文自我介绍，导师提问，最后进行实践环节测试。

2、同等学历加试

同等学历加试科目：生物工程专业加试“生物工艺原理”和“分子生物学”；

制药工程专业加试“药剂学”和“药理学”。均采取笔试形式，满分为100分，答题时间为120分钟。

二、复试时间及地点

1、综合面试：4月13日上午9:00进行专业知识及综合面试。地点为生工学院会议室。

2、同等学历加试： 4月14日上午9:00－11:00，药理学、生物工艺原理；下午2：00～4：00，药剂学、分子生物学，地点为生工学院会议室。

三、复试次序

考生的个人复试次序按研究生处提供的名单次序进行。考生在参加复试时，应提供复试通知书、毕业证书（应届生带学生证）、个人身份证和准考证。

四、分次复试安排

4月13日以后调剂我硕士点的考生采用分阶段复试方式，灵活复试时间，一考生到校时间为主。

五、复试小组

组长：陈平

成员：刘志国陶兴无赵静国缪礼鸿钟方旭刘军闫达中张红菱

记录员：王继刚

联系电话：027－83956793联系人：王老师

武汉工业学院生物与制药工程学院

2009.04.10

第三篇：考研生理生化资料总结

词解释；01.根压——植物根系的生理活动使液流从根部上升；04.内聚力学说——以水分具有较大的内聚力保证由；05.矿质营养——植物对矿物质的吸收、转运和同化；06.必需元素——指在植物营养生理上表现为直接的；08.离子对抗——在发生单盐毒害的溶液中，如加入；09.平衡溶液——对植物生长有良好作用而无毒害作；10.还原氨基化——还原氨直接使酮酸氨基化而形成；1 01.根压——植物根系的生理活动使液流从根部上升的压力 02.蒸腾作用——水分通过植物体表面（如叶片等），以气体状态从体内散失到体外的现象 03.水分临界期——指在植物生长发育过程中对缺水最为敏感，最易受害的阶段

04.内聚力学说——以水分具有较大的内聚力保证由叶至根水柱不断来解释水分上升原因的学说

05.矿质营养——植物对矿物质的吸收、转运和同化，通称为矿质营养

06.必需元素——指在植物营养生理上表现为直接的效果、如果缺乏时则植物生育发生障碍，不能完成生活史、以及去除时植物表现出专一的、可以预防和恢复的症状的一类元素 07.单盐毒害——溶液中只有一种金属离子对植物起有害作用的现象

08.离子对抗——在发生单盐毒害的溶液中，如加入少量其他金属离子来减弱或消除单盐毒害的作用叫离子对抗

09.平衡溶液——对植物生长有良好作用而无毒害作用的溶液

10.还原氨基化——还原氨直接使酮酸氨基化而形成相应氨基酸的过程 11.胞饮作用— —物质吸附在质膜上，然后通过膜的内折而转移到细胞内的攫取物质及液体的过程

12.通道蛋白 ——在细胞质膜上构成圆形孔道的内在蛋白 13.植物营养临界期 —— 14.C3途径——以RUBP为CO2受体，CO2固定后的最初产物为PGA的光合途径为C3途径

15.交换吸附——根部细胞在吸收离子的过程中，同时进行着离子的吸附与解吸附的过程，总有一部分离子被其它离子所置换，所以细胞吸附离子具有交换性质

16.C4途径——以PEP为CO2受体，CO2固定后最的初产物是四碳双羧酸的光合途径为C4途径。

17.光系统——由不同的中心色素和一些天线色素、电子供体和电子受体组成的蛋白色素复合体。

18.反应中心——由中心色素、原初电子供体及原初电子受体组成的具有电荷分离功能的色素蛋白复合体结构。

19.荧光现象——叶绿素溶液在透射光下呈绿色，在反射光下呈红色的现象

20.磷光现象——当去掉光源后，叶绿素溶液和能继续辐射出极微弱的红光，它是由三线态回到基态时所产生的光。这种发光现象称为磷光现象。21.爱默生效应——如果在长波红光（大于685nm）照射时，再加上波长较短的红光（650nm），则量子产额大增，比分别单独用两种波长的光照射时的总和还要高。

22.光合作用——绿色植物吸收光能，同化CO2和水，制造有机物质并释放O2并积蓄能量的过程

23.聚光色素——没有光化学活性，只有收集光能的作用，并将之传到反应中心色素的色素 24.光合磷酸化——叶绿体在光下把无机磷和ADP转化为ATP形成高能磷酸键的过程 25.光补偿点——光合过程中吸收的CO2和呼吸过程中放出的CO2等量时的光照强度。26.光饱和点——增加光照强度，光合速率不再增加时的光照强度。

27.呼吸作用——生活细胞内某些有机物在有氧和无氧条件下进行彻底或不彻底的氧化分解，并释放能量过程

28.呼吸链——呼吸代谢中间产物的电子和质子，沿着一系列有顺序的电子传递体组成的电子传递途径，传递到分子氧的总过程

29.三羧酸循环——丙酮酸在有氧的条件下，通过一个包括三羧酸和二羧酸的循环而逐步氧

化分解，直到形成水和CO2为止的过程

30.巴斯德效应——氧可以降低糖类的分解代谢和减少糖酵解产物的积累的现象叫巴斯德效应

31.P/O——一对电子通过电子传递链每消耗1个氧原子与所用去的磷酸的比值 32.氧化磷酸化作用——氧化过程中伴随着ATP的合成，即氧化作与磷酸化作用同时进行的 过程

33.植物生长物质——是指一些调节植物的生长发育的物质，它包括植物激素和植物生长调节剂

34.植物生长调节剂——指具有一些激素活性人工合成的物质 35.植物生长调节物质——指在植物体内合成的、能调节植物生长发育的非激素类的生理活性物质。36.激素受体——能与激素特异地结合，并引起特殊生理效应的蛋白质类物质

37.生长素结合蛋白——机位于质膜上的生长素受体，可使质子泵将膜内质子泵膜外，引起质膜的超级化，胞壁松弛。也有位于胞基质和核质中，促进mRNA的合成。

38.植物激素—— 一些在植物体内合成，并从产生之处运到别处，对生长发育产生显著作用的微量有机物

39.自由生长素——易于从各种溶剂中提取的生长素

40.束缚生长素——指没有活性，需要通过酶解、水解或自溶作用从束缚物质释放出来的生长素

41.乙烯的“三重反应”——指乙烯使黄花豌豆幼苗变矮，变粗和横向生长。42.生长抑制剂——抑制植物顶端分生组织生长、破坏顶端优势的生长调节剂 43.生长延缓剂——抑制植物亚顶端分生组织生长、抑制节间伸长的生长调节剂

44.植物生长——:是指植物体积和重量（干重）上的不可逆增加，是由细胞分裂、细胞伸长以及原生质体、细胞壁的增长而引起。45．再分化——指离体培养中形成的处于脱分化状态的细胞团再度分化形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官、甚至最终再形成完整植株的过程。

46.植物细胞全能性——植物体的每一个细胞携带着一套完整的基因组，并有发育成完整植株的潜在能力

47.植物组织培养——指在无无菌条件下，将外植体接种到人工配制的培养基中培育离体植物组织、器官或细胞，以及培育成植株的技术。48.生长温周期现象——植物对昼夜温度周期性变化的反应

49．生长的相关性——植物各部分间在生长上相互依赖有相互制约的现象 50.顶端优势——植物顶端在生长上占有优势并抑制侧枝或侧根生长的现象 51．光形态建成——光控制植物生长、发育和分化的过程

52．光敏色素——在植物体内存在着一种吸收红光和远红光并且可以互相转化的光受体蛋白，具有红光吸收型（Pr）和远红光吸收型（Pfr）两种形式，其中Pfr型具有生理活性，参与光形态建成、调节植物生长发育

53．光受体——是指植物体中存在的一些微量色素，能够感受到外界的光信号，并把光信号放大使植物做出相应的反应，从而影响植物的光形态建成

54.向性运动——是由光、重力等外界因素刺激而产生决定运动方向的，生长引起的不可逆高等植物运动

55.感性运动——是由外界刺激或内部时间机制而引起的、但不能决定运动方向的高等植物运动

56.生理钟——又称生物钟，指植物内生节奏调节的近似24小时的周期性变化节律。

57.春化作用——用低温促使植物开花的作用叫春化作用 58.光周期现象——植物对白天和黑夜的相对长度的反应

59.双重日长植物——花诱导和花形成两个过程很明显地分开，要求不同日常的植物 60.识别反应——花粉落在雌蕊柱头上能否正常萌发并导致受精，决定于双方的亲和性，即它们之间的“认可”和“拒绝”称为识别反应

61.蒙导花粉——亲和的花粉可使柱头不能识别不亲和的花粉，被称为蒙导花粉

62.单性结实——有些植物的胚珠不经受精，子房仍然能继续发育成为没有种子的果实，称为单性结实

63.休眠——种子在合适的萌发条件下仍不萌发的现象

64.骤跃变型结实——指在成熟期出现呼吸跃变现象的果实。65.非骤变型果实——指在成熟期不出现呼吸跃变现象的果实 66.后熟——种子在休眠期内发生的生理、生化过程 67.层积处理——对一些蔷薇科和松柏科植物的种子，用湿砂将种子分层堆积在低温处1至3个月，经后熟才萌发的催芽技术

68.衰老——衰老是植物生命周期的最后阶段，是成熟的细胞，组织，器官和整个植株自然地终止生命活动的一系列机能衰败过程

69.脱落——脱落是指有机体发育过程中，在结构和生理功能方面出现进行性的衰退变化，其特点是有机体对环境的适应能力逐渐减弱，但不立即死亡

70.逆境——又称胁迫，指对植物生存和生长不利的各种环境因素的总称

71.抗逆性——植物对逆境的抵抗和忍耐能力，简称为抗性。抗性是植物对环境的一种适应性反应，是在长期进化过程中形成的。

72.交叉抗性——植物经历了某种逆境后，能提高对另一些逆境的抵抗能力，这种对不同逆境间相互适应作用，称为交互适应。73．渗透调节——植物细胞通过主动增加溶质降低渗透势，增强吸水和保水能力，以维持正常细胞膨压的作用。

74．冻害——温度下降到零度以下，植物体内发生冰冻，因而受伤甚至死亡的现象

75．冷害——零度以上低温，虽无结冰现象，但能引起喜植物的生理障碍，使植物受伤甚至死亡的现象

76．逆境蛋白——由逆境因素和紫外线等诱导植物体内形成新蛋白质（酶）。

77．大气干旱——空气极度干燥，相对湿度极低，根系吸水赶不上蒸腾失水，因而发生水分亏缺现象。

78.钙调素——一种耐热的球蛋白

79.临界暗期——引起短日照植物或长日照植物成花反应的最低或最高暗期极限称为临界暗期

80.短日植物——每日在短于一定临界日长的日照下才开花的植物

81.衬质势——是细胞胶体物质亲水性和毛细管对自由水束缚而引起水势降低的值（以负值表示）

82.代谢源——指叶子，它制造出光合产物并输送到其他器官

83.生长的相关性——植物在生长过程中各部分间的相互制约与协调现象

简 答 题 01.植物体内水分存在状态与代谢活力有何关系？

答：自由水参与各种代谢作用，它的含量制约着植物的代谢强度，自由水占总含水量的百分比越大，植物代谢越旺盛；束缚水不参与代谢作用，但植物要求低微的代谢强度去度过不良的外界条件，因此，束缚水的含量与植物抗性大小有密切关系。02.简述蒸腾作用的部位及生理意义？

答：蒸腾作用的部位有（1）植物幼小时，暴露在地面上的全部表面都能蒸腾；植物长大后蒸腾作用发生在茎枝上的皮孔和叶片。蒸腾作用的生理意义有（1）它是植物水分吸收和运输的主要动力；（2）它对吸收矿物质和有机物以及它们在植物体内的运输都是有帮助的；（3）它能降低叶片的温度。

03.根系吸水的方式、动力？ 答: 根系吸水的途径有三条：（1）质外体途径；（2）跨膜途径；（3）共质体途径.。根系吸水的动力有根压和蒸腾拉力。04.气孔开关假说有哪些？

答：气孔开关假说有（1）淀粉—糖转化学说；（2）无机离子吸收学说；（3）苹果酸生成学说

05．植物必需的矿质元素应具备哪些条件？ 答：植物必需的矿质元素应具备下列条件：（1）如缺乏该元素，植物生育发生障碍，不能完成生活史（2）除去该元素，则表现出专一的缺乏症，而且这种缺乏症是可以预防和恢复的；（3）该元素在植物营养生理上表现为直接的效果。06．植物吸收矿质元素的方式？ 答：（1）离子通道运输；（2）载体运输；（3）离子泵运输；（4）胞饮作用。06． 植物吸收矿质元素的特点？ 答：植物吸收矿质元素的特点有：（1）一方面与吸水有关系，另一方面又有其独立性；（2）对不同离子的吸收还有选择性；〔3〕会出现单盐毒害和离子对抗现象。07． 试述植物细胞对矿质元素的被动吸收和主动吸收的机理？ 答：植物细胞对矿质元素的被动吸收 08． 02抑制光合作用的原因？ 答：（1）加强氧与CO2对RUBP的结合竞争，提高光呼吸速率。（2）氧能与NADP+竞争接受电子，使NADPH合成量减少，使碳同化需要的还原能力减少。（3）氧接受电子后形成的超氧阴离子会破坏光合膜。（4）在强光下氧参与光合色素的光氧化，破坏光合色素 09． 作物为什么会出现午休现象？

答：植物种类不同，生长条件不同，造成光合午休的原因也不同。有以下几种原因：（1）中午水分供给不足，气孔关闭。（2）CO2供应不足。（3）光合产物淀粉等来不及分解运走，累积在叶肉细胞中，阻碍细胞内CO2的运输。（4）中午时的高温低湿降低了碳同化酶的活性。（5）生理钟调控。

10． C4比C3植物的光呼吸低，简述原因？ 答：光呼吸是由RUBP加氧酶催化RUBP加氧造成的。C4植物在叶肉细胞中只进行由PEP羧化酶催化的羧化活动，且PEP羧化酶对CO2亲和力高，固定CO2的能力强，在叶肉细胞形成C4二羧酸之后，再转运到维管束鞘细胞，脱羧后放出CO2，就起到了“CO2泵”的作用，增加了维管束鞘细胞中的CO2浓度，抑制了鞘细胞中的Rubisco的加氧活性并提高了它的羧化活性，有利于CO2的固定和还原，不利于乙醇酸的形成，不利于光呼吸进行，所以C4植物光呼吸值很低。而C3植物，在叶肉细胞内固定CO2，叶肉细胞的CO2/O2的比值低，此时，RUBP加氧酶活性增强，有利于光呼吸的进行，而且C3植物中RUBPP羧化酶对CO2 亲和力低，此外，光呼吸是释放的CO2不易被重新固定。

11． 把大豆和高粱放在同一密闭照光室内，一段时间后会出现什么现象，为什么？ 答：大豆首先死亡，一段时间后高粱也死亡。因为大豆是C3植物，它的CO2补偿点高于C4植物高粱。随着光合作用的进行，室内的CO2浓度越来越低，当低于大豆的CO2补偿点时，大豆便没有净光合只有消耗，不久便死亡。此时的CO2浓度仍高于高粱的CO2补偿点，所以高粱仍然能够进行光合作用，当密闭室内的CO2浓度低于高粱的CO2补偿点时，高粱便因不能进行光合作用而死亡。

12． 长时间无氧呼吸，植物为什么会死亡？

答：长时间无氧呼吸，植物会死亡的原因有三点：（1）无氧呼吸产生酒精，使细胞只的蛋白质发生变性；（2）无氧呼吸利用葡萄糖产生的能量很少，植物要维持正常生理需要，就要消耗更多的有机物；（3）没有丙酮酸氧化过程，许多由这个过程的中间产物形成的物质就无法继续合成。

13． 氧为何抑制糖酵解和发酵？

答：糖酵解和发酵都是糖类物质在无氧的情况下分解成不彻底的氧化产物，同时释放能量的过程。而氧可以降低糖类的分解代谢和减少糖酵解产物的积累，在氧气充足的情况下，产生较多的ATP和柠檬酸，降低ADP和Pi的水平。ATP和柠檬酸是负效应物，抑制磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的活性，糖分分解就慢，糖酵解和发酵也就受到抑制。

14． 试述收缩蛋白学说与细胞质泵动学说的主要内容？这两个学说主要解决了运输方面的哪些问题？

答：筛分子内腔的细胞质呈几条长丝，形成胞纵连束，纵跨筛分子，在束内呈环状的蛋白质反复地有节奏的收缩和张弛，就产生一种蠕动，把细胞质长距离泵走，糖分就随之流动的学说被称之为细胞质泵动学说。而收缩蛋白学说认为，筛分子的内腔有一种由微纤丝相连的网状结构。微纤丝是由具收缩能力的P蛋白收缩丝所组成。微纤丝一端固定，一端游离于筛管细胞质内，微纤丝似鞭毛一样颤动。收缩蛋白的收缩与伸展可能是同化产物沿筛管运输的动力，它影响原生质的流动。这两个学说主要解决了植物同化产物在筛分子内腔的运输问题。15． 何为压力流动学说？实验依据是什么？有哪些不足之处？

答：德国E.Munch1930年提出的学说，主张筛管液流是靠源端和库端的膨压差建立起来的压力梯度来推动的。实验依据有：利用快速冷冻和固定技术的试验证明P蛋白沿着长轴分布在细胞壁附近，而不会堵塞开放的筛孔；Knoblauch等利用共聚焦激光扫描显微镜，加入与蔗糖结合的绿色荧光染料，观察到蚕豆叶片的韧皮部是活的，有运输蔗糖的功能。该学说的不足之处在于不能解决单一筛管能否同时进行双向运输蔗糖的问题，且对于裸子植物同化产物的长距离运输不适用。16． 为什么“树怕剥皮”？

答：有机物的运输主要是由韧皮部担任的，如被剥皮，则同化产物的运输受阻，而且剥口下端也长不出枝条，时间一长，根系原来贮存的有机物消耗完毕，根部就会饿死，从而导致整个植株的死亡。

17． 束缚态的生长素在植物体内有何作用？

答：束缚态的生长素在植物体内的作用可能有下列几个方面：（1）作为贮藏形式；（2）作为运输形式；（3）解毒作用；（4）调解自由生长素含量。18． 乙烯在生产上有何作用？

答：乙烯在生产上的作用有（1）果实催熟和改善品质；（2）促进次生物质排出；（3）促进开花

19． 乙烯诱导果实成熟原因是什么？ 答： 乙烯与质膜的的受体结合之后，能诱发质膜的透性增加，使氧气容易通过质膜进入细胞质，诱导水解酶的合成，使呼吸作用增强，分解分解有机速度加快，达到促使果实成熟的作用。

21． 种子萌发必需的外界条件有哪些？第一、三阶段靠什么吸水？种子萌发时吸水可分为哪三个阶段？

答：种子萌发必须的外界条件有：（1）足够的水分；（2）充足的氧气；（3）适当的温度；（4）某些植物种子的萌发还受光的影响。种子萌发时吸水可分为三个阶段：（1）急剧的吸水；（2）吸水的停止；（3）胚根长出后的重新迅速吸水。第一阶段细胞主要靠吸胀性吸水；第三阶段是靠渗透性吸水。

24．土壤中缺氮时为什么根冠比会增大？

答：氮素是由根系从土壤中吸收后再供应地上部分的。因此，土壤缺氮是对地上部分生长的影响就比对根的影响大。另外，缺氮时地上部分蛋白质合成减少，积累的糖分多，这样对根系供应的糖分也增多，促进了根系的生长，故使根冠比值增大。25．光敏色素作用的模式主要有哪两类假说？ 答：（1）膜作用假说认为光敏色素能改变细胞中一种或多种膜的特性或功能而参与光形态建成，从而引发一系列的反应。显然光敏色素调控的快速反应都与膜性质的变化有关；（2）基因调节假说认为光敏色素对光形态建成的作用，是通过调节基因表达来实现的。一般认为光敏调空的长期反应与基因表达有关。

26． 高山上的树木为什么比平地长得矮小？ 答：（1）高山上水分较少，土壤也较瘠薄，肥力较低，造成植物因缺少水、肥而生长不良。（2）气温也较低，且昼夜温差大，夜间温度过低，造成植物代谢缓慢，因而表现出植生长缓慢。（3）高山风力较大，使植株受到的机械刺激多，体内激素平衡不利植物生长发育。（4）高山顶上空气中灰尘较少，光照较强，紫外光也较多，由于强光特别是紫外光抑制植物生长，因而高山树木生长缓慢而矮小。

27． 种子萌发时，有机物质发生哪些生理、生化变化？ 答：种子萌发时，有机物质发生的生理、生化变化有：（1）淀粉的转化。淀粉在淀粉酶、麦芽糖酶作用下转变成葡萄糖（或磷酸葡萄糖）。（2）脂肪的转化。脂肪在脂肪酶作用下转变为甘油和脂肪酸，再进一步转化为糖。（3）蛋白质的转化。胚乳或子叶内贮藏的蛋白质在蛋白质酶和肽酶的催化下，分解为氨基酸。（4）植酸的动员。植酸在植酸酶的作用下分解为肌醇和磷酸。

28．生物钟有何特征？ 答：（1）需要光暗交替作为启动信号，一旦节奏启动了，就可以在稳恒条件下持续一段时间。（2）具有内生的近似昼夜节奏，约为22小时至28小时。（3）生物钟有自调重拨功能。若日夜颠倒，则可自行调整，而适应于新的环境节奏。还可重新拨回。（4）生物钟的周期长度对温度钝感。

29．植物产生向光性弯曲的原因是什么？

答：植物的向光弯曲是由于向光面的生长与背光面生长的不均匀所致。究其原因目前主要有两种一种观点认为由于生长素分布不均匀，单方向的光照会引起生长素向背光面移动，以至引起背光面生长素含量增多，而较高浓度的生长素促进茎细胞生长，因而背光面比向光面生长快，而表现向光弯曲。生长素向背光面移动的原因可能与光照引起器官尖端的不同部位产生电势差有关。向光面带负电荷、背光面带正电荷，弱酸性的生长素阴离子被正电荷吸引移向背面。另一种观点认为是由于抑制物质分布不均匀而造成的。30．常言道：“根身叶茂”是何道理？ 答：所谓“根身叶茂”，有以下理由：（1）地上部分生长需要的水分和矿物质主要是由根系供给的。另外根系还能合成多种氨基酸、细胞分裂素等供应地上部分。因此，根发育得好，对

地上部分生长有利。（2）植物地上部分对根的生长也有促进作用，叶片中制造的糖类、生长素、维生素等也可以供应根，以利于根的生长。因此，地上部分长不利，根系也长不好，反之，根系生长不好，地上部分也不可能生长的好，它们是相互依赖相互促进的。31．含羞草受震动后叶子下垂的机理是什么？

答：含羞草受震动后几秒钟内叶子就下垂，机理是，由于复叶叶柄基部的叶枕中细胞紧张度发生变化的结果。在解剖结构上，叶枕的上半部的细胞胞壁较厚，而下半部组织较薄，下半部组织的胞间隙也比上半部的大。在震动刺激下，叶枕下半部细胞的透性增大，水分和溶质由液泡中透出，进入胞间隙，因此下半部组织细胞的紧张度下降，组织疲软，而上半部组织此时仍保持紧张状态，复叶下垂。

32． 植物生长的最适温度和协调温度有何不同？

答：植物生长的最适温度是指植物生长最快的温度，这个温度对于植物健壮生长来说，往往不是最适宜的。因为植物生长最快时，物质较多用于生长，消耗太快，没有在较低温度下生长那么结实。在生产实践上培育健壮的植株，常要求在比生长最适温度略低的温度，即“协调的最适温度”下进行。

33． 什么是春化作用？如何证明植物感受低温的部位是茎间生长点？

答：春化作用就是用低温促使植物开花的作用。将芹菜种植在高温的温室中由于得不到花分化所需要的低温，不能开花结实。但是以橡皮管缠绕芹菜茎的顶端，管内不断通过冰冷的水流，使茎的生长点获得低温，就能通过春化，可以开花结实。反之，将芹菜种植在冰冷的室内，而使茎生长点处于高温下，也不能开花结实。34． 赤霉素与春化作用有何关系？

答：小麦、油菜、燕麦等多种作物经过春化处理后，体内赤霉素含量增多。一些需要春化的植物未经低温处理，如施用赤霉素也能开花。这表明赤霉素可以某种方式代替低温的作用。35． “南麻北种”有何利弊，为什么？

答：麻类是短日植物，南种北引可推迟开花，营养生长期长，使麻杆生长较长，提高纤维产量和质量，但因为北方地区较难满足短日作物麻类成花所需的短日条件，因而南麻北种会延迟开花，种子不能及时成熟。若在留种地采用苗期短日处理方法，可解决留种问题。36．举例说明光周期在农业生产实践中的应用？ 答：（1）光周期的人工控制，可以促进和延迟开花；（2）在温室中延长或缩短日照强度，控制作物花期，可解决花期不遇问题，对杂交育种也将有很大的帮助；（3）引种。37． 种子成熟时主要发生哪些生理、生化变化？ 答：种子成熟时主要发生的生理、生化变化有：（1）从植株营养器官转运过来的可溶性低分子化合态养料被逐渐转化为不溶性高分子化合态物质积累起来；（2）呼吸作用由强到弱，由高到低；（3）种子内的内源激素由少变多，再由多变少；（4）种子的含水量随着种子的成熟而逐渐减少。

38． 在逆境中，植物体内积累脯氨酸有何作用？ 答：在逆境中，植物体内积累脯氨酸的作用有：（1）作为渗透调节物质，用于保持胞质溶胶与环境的渗透平衡，防止水分散失；（2）保持膜结构的完整性。39． 外施ABA提高植物抗逆性的原因？ 答：外施ABA提高植物抗逆性的原因有：（1）减少膜的伤害；（2）减少自由基对膜的破坏；（3）改变体内代谢；（4）减少水分丧失。

40． 零上低温对植物组织的伤害大致可分哪几个步骤？ 答：零上低温对植物组织的伤害大致可分为两个步骤：第一步是膜相的改变，第二步是由于膜损坏而引起代谢紊乱，导致死亡。41． 提高作物抗旱性的途径？

答：（1）播种前对萌动种子进行干旱锻炼；（2）利用根冠比的特征选择出不同抗旱性的作物品种，或作为抗旱育种的亲本，加速抗旱育种的步骤；（3）控制土壤水分；（4）施用植物激素。

论 述 题：

1．病毒对在植物生理生化的影响如下：①水分平衡失调，许多植物感病后发生萎焉或猝倒。②呼吸作用加强。染病组织一般比健康组织的呼吸速率可增加许多倍，且氧化磷酸化截偶联，大部分能量以热能形式释放出去，所以染病组织的温度大大升高。③光合作用下降。染病后，叶绿体破坏，叶绿体含量减少，光合速率显著下降。④生长改变。有些植物染病后由于IAA、GA增加，引起植物徒长，偏上生长，形成肿瘤等。

2．作物抗病的生理基础是：①加强氧化酶（抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶）的活性，可以分解毒素，促进伤口愈合，抑制病菌水解酶活性。②植物染病后产生过敏性组织坏死，使有些只能寄生于活细胞的病原菌死亡。③产生抑制物质。如马铃薯植株产生绿原酸，可以防止黑疤病菌的感染，亚麻的根分泌一种含氰化物的物质，抑制微生物的呼吸。④作物还具有免疫反应。即在病菌侵入时，体内产生某种对病原菌有毒的化合物（多为酚类化合物）防止病菌侵染。此外，作物内还含有一些化学物质，如生物碱、单宁、苦杏仁苷等，对侵入的病菌有毒杀作用或防御反应，能减轻病害。3．植物渗透调节物质可分为两大类：一是由外界引入细胞中的无机离子，包括钾、钠、钙、镁、氯等；二是在细胞内合成的有机溶质，主要是蔗糖、山梨醇、脯氨酸、甜菜碱等。其主要生理功能包括： ⑴维持细胞膨胀压变化不大，利于其他生理生化过程进行；⑵维持气孔开放，以保证光合作用较正常的进行。

4．植物在逆境条件下合成的逆境蛋白有：⑴热激蛋白f，可以和受热激伤害后变性蛋白质结合，维持它们的可溶状态或使其恢复原有的空间构象和生物活性。热激蛋白也可以与一些酶结合成复合体，使这些酶的热失活温度明显提高；⑵低温诱导蛋白，亦称冷击蛋白，它与植物抗寒性的提高有关。由于这些蛋白具有高亲水性，所以具有诚少细胞失水和防止细胞脱水的作用；⑶渗条蛋白，有利于降低细胞的渗透势和防止细胞脱水，提高植物的抗盐性和抗旱性；⑷病程相关蛋白（PRs），与植物局部和系统诱导抗性有关。还能抑制真菌孢子的萌发，抑制菌丝生长，诱导与其他防卫系统有关的酶的合成，提高其抗病能力。5.植物器官脱落与植物激素有何关系？ 答：（1）生长素：实验证明，叶片年龄增长，生长素含量下降，便不能阻止脱落的发生。Addicott等提出脱落的生长素梯度学说，认为不是叶片内生长素的绝对含量，而是横过离层区两边的生长素的浓度梯度影响脱落。梯度大，即远轴端生长素含量高，不易脱落；梯度小时，即近端生长素含量高于或等于远轴端的量，则促进脱落。此外，已证明有些果实的自然脱落与生长素含量的降低也密切相关。在生长素产生少的时期，往往引起大量落果。（2）脱落酸：幼果和幼叶的脱落酸含量低，当接近脱落时，它的含量最高。主要原因是可促进分解细胞壁的酶的活性，抑制叶柄内生长素的传导。（3）乙烯：棉花子叶在脱落前乙烯生成量增加一倍多，感病植株乙烯适放量增多，会促进脱落。（4）赤霉素：促进乙烯生成，也可促进脱落。细胞分裂素延缓衰老，抑制脱落。2.北方小麦与南方小麦相比，哪个蛋白质含量高？为什么？

答：北方小麦蛋白质含量高。因为水分供应不良对淀粉合成的影响比对蛋白质的影响大。在小麦成熟期，北方雨量及土壤水分比南方少，所以北方小麦蛋白质含量高。3.导致脱落的外界因素有哪些？ 答：（1）氧浓度 氧分压过高过低都能导致脱落。高氧促进乙烯的形成，低氧抑制呼吸作用；（2）温度异常温度加速器官脱落。高温促进呼吸消耗。此外，高温还会引起水分亏缺，加速叶片脱落；（3）水分干旱缺水会引起叶、花、果的脱落。这是一种保护性反映，以减少水分散失。干旱会促进乙烯、脱落酸增加，促进离层形成引起脱落；（4）光照 光照弱脱落增加，长日照可以延迟脱落，短日照可以促进脱落；（5）矿质元素缺Zn、N、P、K、Fe等都可能导致脱落。

4．目前有关植物衰老机理的假说有哪些，并叙述自由基伤害假说的基本内容。

答：关于植物衰老机理的假说有三种：一是营养亏缺假说；二是植物激素调空理论；三是自由基伤害假说。自由基伤害假说是人体和动物衰老机理的众多学说之一。该学说认为衰老过程即氧代谢失调、自由基累积的过程。研究表明，植物细胞通过多种途径产生超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢、单线态氧等活性氧。同时，植物细胞本身具有清、清除自由基活性氧的酶保护系统和非酶保护系统。在正常情况下，细胞自由基活性氧的产生与清除处于动态平衡状态，自由基活性氧浓度很低，不会引起伤害。但在植物衰老劣变过程中，特别是处于干旱、高盐、SO2等逆境条件下，这种平衡遭到破坏，结果自由基活性氧的浓度超过了伤害”阈值“导致蛋白质、核酸的氧化破坏，特别是膜脂中不饱和双链酸最易受自由基的攻击发生过氧化作用；过氧化过程产生新的自由基，会进一步促进膜脂质过氧化，膜的完整性受到破坏，最后导致植物伤害或死亡。5.花粉管为什么能向着胚囊定向生长？ 答：一般认为这是由于花粉管的向化性运动所引起的。生长的花粉管从顶端到基部存在着由高到低的Ca2+浓度梯度。这种Ca2+梯度的存在有利于控制高尔基体小泡的定向分泌、运转与融合，从而使合成花粉管壁和质膜的物质源源不断地运到花粉管顶端，以保持顶端的极性生长。雌性生殖单位中的助细胞与花粉管的定向生长有关。棉花的花粉管在雌蕊中生长时，花粉管中的信号物质如赤霉素会引起一个助细胞的首先解体，并释放出大量的Ca2+，造成花柱与株孔间的Ca2+梯度，而Ca2+则被认为是一种向化性物质，因此，花粉管会朝Ca2+浓度高的方向生长，最后穿过株孔，进入胚囊。此外，花粉管可能有向电性生长。7.授粉后雌蕊中生长素含量剧增的只要原因是什么？

答：只要不是花粉带进去的，而是因为花粉中含有使色氨酸转变成吲哚乙酸的酶体系，花粉管在伸长过程中，能将这些酶分泌到雌蕊组织中去，因此，会引起花柱和子房形成大量生长素

8.影响植物花器官形成的条件有哪些？

答：1.内因(1)营养状况 营养是花芽分化以及花器官形成与生长的物质基础。其中的碳水化合物对花的形成尤为重要，C/N过小，营养生长过旺，影响花芽分化。(2)内源激素 花芽分化属内源激素的调控。2.外因(1)光照 光照对花器官形成有促进作用。在植物花芽分化期间，若光照充足，有机物合成多，则有利于花芽分化。此外，光周期还影响植物的育性。(2)温度 一般植物在一定的温度范围内，随温度升高而花芽分化加快。温度主要影响光和作用、呼吸作用和物质的转化及运输等过程，从而间接地影响花芽的分化。低温还影响减数分裂期花粉母细胞的发育，使其不能正常分裂。(3)水分 不同植物的花芽分化对水分的需求不同，如对稻麦等作物来说，孕穗期对缺水敏感，此时缺水影响幼穗分化；而对果树而言，夏季的适度干旱可提高果树的C/N比，反而有利于花芽分化。(4)矿质营养 缺氮，花器官分化慢且花的数量减少；氮过多，营养生长过旺，花的分化推迟，发育不良。在适宜的氮肥条件下，如能配合施用磷、钾肥，并注意补充锰、钼、硼等微量元素，则有利于花芽分化。

9.花粉和柱头之间的相互识别的机制是什么？

答：花粉的识别物质是外壁蛋白中的糖蛋白，它在花粉湿润后几秒钟内就迅速释放出来。而雌蕊的识别物质是柱头表面的亲水性蛋白质薄膜，它具有粘性，易于捕捉花粉。当亲和花粉落到柱头上时，花粉就释放出外壁蛋白并扩散入柱头表面，与柱头表面蛋白质膜相互作用，认可后花粉管伸长并穿过柱头，沿花柱引导组织生长并进入胚囊受精。如果是不亲和的花粉则不能萌发，或花粉关生长受阻，或柱头乳突细胞产生胼胝质阻碍花粉管穿过柱头

10.如何用实验证明植物感受光周期的部位，以及光周期刺激可能是以某种化学物质来传递的？ 答：植物在适宜的光周期诱导后，成花部位是茎端的生长点，而感受光周期的部位却是叶片。这一点可以用对植株不同部位进行光周期处理后观察对开花效应的情况来证明：①将植物全株置于不适宜的光周期条件下，植物不开花而保持营养生长；②将植物全株置于适宜的光周期下，植物可以开花；③只将植物叶片置于适宜的光周期条件下，植物正常开花；④只将植物叶片置于不适宜的光周期下，植物不开花。用嫁接实验可证明植物的光周期刺激可能是以某种化学物资来传递的：如将数株短日植物苍耳嫁接串联在一起，只让其中一株的一片叶接受适宜的短日光周期诱导，而其它植株都在长日照条件下，结果数株苍耳全部开花。

第四篇：菌种生化反应检查标准操作规程

菌种生化反应检查标准操作规程

依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。

范围：适用于大肠杆菌表达的重组人基因工程产品。

目的：通过生化试验鉴定所用的菌种是否为标准的大肠杆菌。

原理：枸椽酸盐利用试验原理：枸椽酸盐培养基中仅含一种氮源（铵盐）和唯一碳源（枸椽酸钠）一般细菌能利用磷酸二氢铵作为氮源，但不一定能分解枸椽酸盐而取得碳源，因此可否利用该盐，能将不同细菌鉴别。

吲哚试验原理：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚，吲哚本身没有颜色，不能直接观察，所以加入二甲基氨基苯甲醛试剂，使之与吲哚作用形成红色的玫瑰吲哚。

甲基红试验原理：大肠杆菌和产气杆菌在糖代谢中都能分解葡萄糖产生丙酮酸。产气杆菌能将两个分子丙酮酸脱羧生成一个分子中性乙酰甲基甲醇，故培养物中形成酸类较少，使酸碱度PH可在5.4以上，因此加入甲基红指示剂后呈桔黄色，是为甲基红试验阴性，而大肠杆菌能进一步分解丙酮酸，产生酸类较多，使培养物的酸碱度在PH4.5或更低，故甲基红指示剂呈红色，是为甲基红试验阳性。

V-P试验原理：测定细菌分解葡萄糖后能否产生乙酰甲基甲醇，产气杆菌可使丙酮酸脱羧变为中性的乙酰甲基甲醇，在碱性条件下被空气中的氧气氧化成二乙酰，后者又与培养基蛋白胨中精氨酸所含胍基起作用，生成红色化合物，称为U-P试验阳性。

内容：

1材料、设备

1．1 材料：

1．1．1 菌种：PBV888/DH5α，来源于主种子批或工作种子批。

1．1．2注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005年版要求。

1．1．3 试剂

蛋白胨

氯化钠NaCl分析纯

葡萄糖C6H12O6分析纯

溴麝香草酚兰C27H28Br2O5S分析纯

对二甲基氨基苯甲醛C9H11NO分析纯

戊醇C5H15O分析纯

浓盐酸HCl分析纯

甲基红C15H15N3O2分析纯

无水乙醇CH3CH2OH分析纯

氢氧化钠NaOH分析纯

氢氧化钾KOH分析纯

α-萘酚C10H7OH分析纯

硫酸镁MgSO4•7H2O分析纯

磷酸氢二钾K2HPO4分析纯

磷酸二氢铵NH4H2PO4分析纯

枸椽酸钠C6H5Na3O7·2H2O分析纯

琼脂粉分析纯

1．2 器皿

盐水瓶、中试管、胶头滴管、烧杯、量筒（100ml、500ml、1000ml）、吸管（10ml）、试剂瓶（250ml、500ml）。

1．3 仪器、设备

PH计PHC-3C型上海大中分析仪器厂

电子秤ES-200A型沈阳腾龙电子仪器公司

电子天平ACS太原

恒温培养箱HG303-5B型湖北省黄石市医疗器械厂

水浴箱6 LiterLKB

生物安全台Ⅱ级A型安徽蚌埠净化设备厂

1．4 其它材料

硫酸纸、牛皮纸、片带、橡皮膏、吸球（1ml及10ml）玻棒、接种环、透气栓。2方法

2．1 准备工作

2．1．1 工作环境：在十万级洁净室内进行，确认场地清场合格，摘下“清场合格”标志牌，挂上“使用中”标志牌。

2．1．2 器皿清洁要求

经本室洗刷间处理烤干后用二层硫酸纸、一层牛皮纸包好，用线绳系紧，经121.3℃，60分钟高压蒸汽灭菌备用。

2．1．3调试仪器设备

2．1．3．1 确认PH计运行状态良好，已挂有“备用”标志牌。

2．1．3．2 确认电子秤运行状态良好，已挂有“备用”标志牌。

2．1．3．3 确认电子天平运行状态良好，已挂有“备用”标志牌。

2．1．3．4 确认培养箱运行状态良好，已挂有“运行”标志牌。

2．1．3．4 确认水浴箱运行状态良好。已挂有“备用”标志牌。

2．1．4溶液及培养基的配制：

2．1．4．11N NaOH 100ml

摘下电子秤“备用”标志牌，挂上“运行”标志牌，接通电源，校零。

用电子秤称取NaOH 4克，加注射用水80ml溶解，用量筒定容至100ml，置试剂瓶中，标明溶液名称、浓度、体积、批号、配制日期，放室温待用。

2．1．4．21%的溴麝香草酚兰（BTB）100ml

摘下电子天平“备用”标志牌，挂上“运行”标志牌，接通电源，校零。用电子天瓶称取1克溴麝香草酚兰，加1N NaOH 1.6ml，加注射用水定容至100ml。置试剂瓶中，标明溶液名称、浓度、体积、批号、配制日期，放室温待用。

2．1．4．30.4%的溴麝香草酚兰（BTB）100ml

用电子天平称取溴麝香草酚兰0.4克加1N NaOH 0.64ml，加注射用水至100ml装入试剂瓶中，标明名称、浓度、体积、批号、配制日期，放室温待用。

2．1．4．4 95%乙醇500ml

量取475ml无水乙醇，加注射用水定容500ml，装入试剂瓶中，标明名称、浓度、体积、批号、配制日期，放室温待用。

2．1．4．5 甲基红试剂 500ml

用电子天平称取甲基红0.1克，溶于95%乙醇300ml，然后加注射用水定容至

500ml，置试剂瓶中，标明溶液名称、浓度、体积、批号、配制日期，放室温待用。

2．1．4．6 枸氏试剂 100ml

摘下水浴箱“备用”标志牌，挂上“运行”标志牌，接通电源，设定56℃，预热。用电子天平称取对二甲基氨基苯甲醛5克，加入到75ml戊醇内，置于56℃水浴中，不断摇动使其溶解，取出冷却后徐徐滴入浓盐酸25ml，滴加时随滴随摇，以免骤热。放置一夜，即成淡褐色透明液体，置250ml试剂瓶中，标明名称、浓度、体积、批号、配制日期，保存于冷暗处或冰箱内。

2．1．4．7 40%氢氧化钾溶液100ml

用电子秤称取40克KOH，充分溶于80ml注射用水，补足体积至100ml，摇匀，盛于250ml试剂瓶中，标明溶液名称、浓度、体积、批号、配制日期、放室温待用。

2．1．4．8 6% α-萘酚酒精溶液100ml

用吸管吸取6mlα-萘酚，用无水乙醇定容至100ml，置250ml试剂瓶中，标明名称、浓度、体积、批号、配制日期，放室温待用。

2．1．4．9 75%乙醇的配制

取无水乙醇75ml，用注射用水定容至100ml，混匀，装入250ml试剂瓶中，贴标签，标明液体名称、浓度、体积、批号、日期。室温备用。

2．1．4．10 培养基的配制

2．1．4．10．1 蛋白胨水培养基（吲哚试验用）1000ml：

摘下pH计“备用”标志牌，挂上“运行”标志牌。用电子秤称取蛋白胨10克，NaCl 5克，加入800ml注射用水，混匀，调PH值7.4-7.6，定容1000ml，115.6℃，30分钟高压灭菌。

2．1．4．10．2 葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红和U-P试验用）1000ml

用电子秤分别称取蛋白胨5克，葡萄糖5克，磷酸氢二钾5克，加800ml注射用水，混匀，调PH7.2-7.4，定容1000ml，115.6℃，30分钟高压灭菌。

2．1．4．10．3 枸椽酸盐培养基1000ml

用电子天平分别称取NaCl5克，MgSO4·7H2O 0.2克，磷酸氢二钾1克，磷酸二氢铵1克，枸椽酸钠2克，琼脂20克，溶于注射用水1000ml，调PH6.8-7.2，加入1% BTB指示剂10ml，摇匀，115.6℃，30分钟高压灭菌。

2．2操作步骤

2．2．1 吲哚试验

2．2．1．1 摘下生物安全台“备用”标志牌，挂上“运行”标志牌。用75%酒精棉擦拭台内，接通电源，打开风机，吹30分钟。在生物安全台内，将蛋白胨水培养基用吸管分装于灭菌中试管，每管2ml。用接种环（经火焰灭菌，冷却后）取细菌接种于蛋白胨水培养基中，盖上透气栓。

2．2．1．2 于37℃恒温培养箱中培养48小时后取出，每管加2-3滴枸氏试剂，轻轻振摇，使戊醇分散于液体中，将培养物静置，待戊醇升至培养液面后，如有吲哚存在，就可以被提取在戊醇层中，反应呈玫瑰红色者为阳性，以“+”表示，仍呈黄色者为阴性以“-”表示。

2．2．2 甲基红试验

2．2．2．1 在生物安全台中将葡萄糖蛋白胨水培养基分装于灭菌中试管中，每管2ml。用接种环（火焰灭菌，冷却后）接种细菌于葡萄糖蛋白胨水培养基中，用透气栓盖好。

2．2．2．2 37℃恒温培养箱培养2-3天后，取出滴加甲基红试剂2-3滴，可立即观察，显现红色为阳性，用“+”表示，否则为阴性，用“-”表示。

2．2．3 V-P试验

2．2．3．1 在生物安全台中将葡萄糖蛋白胨水培养基用吸管分装于灭菌中试管中，每管2ml。用接种环（火焰灭菌，冷却后）取细菌，接种于该培养基中，用透气栓盖好。

2．2．3．2 37℃恒温培养箱培养2-3天取出后，在每管中加入0.4ml 4%的KOH和1ml 6% α-萘酚酒精溶液，混匀，室温下静置5-15分钟，如出现红色为阳性，以“+”表示，否则为阴性以“-”表示。

2．2．4 枸椽酸盐利用试验

2．2．4．1 将灭菌后的枸椽酸盐培养基冷却至50℃左右，在生物安全台中用吸管分装于试管中，每管5ml，倾斜放置。斜面培养基冷却后，用接种环（经火焰灭菌，冷却后）取细菌，接种于该斜面培养基中，用透气栓盖好。

2．2．4．2 37℃恒温培养箱中培养24小时，观察，有菌生长，培养颜色由绿

变为深兰者为阳性，以“+”表示，否则为阴性以“-”表示。

工作场地摘下“使用中”标志牌，挂上“待处理”标志牌。结果判定

3．1判定标准

吲哚、甲基红、U-P及枸椽酸盐利用四项试验，合称为IMVIC试验，鉴别大肠杆菌的结果应为“++--”。

3．2判定结果

判定结果经二人复核，填写检定记录，注明菌种名称、批号、判定日期、检定结果、工作者及复核者等。

4清场

4．1配液清场

4．1．1称取药品之后将药品瓶盖好，放回药品柜中。

4．1．2将电子秤、电子天平和PH计切断电源后，清洁干净，放回原处，填写使用记录，摘下“运行”标志牌，挂“备用”标志牌。生物安全台，用75%酒精棉擦拭台内，继续吹10分钟后，关闭风机，切断电源，摘下“运行”标志牌，挂上“备用”标志牌，并填写使用记录。

4．1．3清洁操作台面，用专用抹布擦净。

4．1．4地面用专用拖布拖净。

4．2操作清场

4．2．1试验完毕，含细菌的中试管121.3℃，60分钟高压灭菌。

4．3 清场结束后，由车间工序负责人或质量监督员检查合格后，摘下“待处理”标志牌，挂上“清场合格”标志牌，并填写清场记录。注意事项

5．1 各种培养基的标识一定要醒目，以免判定时失误。

5．2 清场时，必须将带菌的器皿先送高压灭菌处理后，再送洗刷组处理。

5．3 所有工作均应经二人复核，并及时填写工作记录。

第五篇：2013微生物与生化药学复试

复试分为三部分：

分科面试、英语笔试、专业课笔试分科面试

考试内容比较随机，2012年考试内容有：

①考看视频回答问题：视频为配制培养基、使用灭菌锅。要回答的问题好像是操作注意事项，和不同菌种使用的培养基，比如培养放线菌使用的培养基等。

② 实验操作部分：显微镜的使用和斜面划线接种，两个任选一，抽签方式。③专业英语笔试：20min，20个选择题，有关生物方面的专业词汇，还有个词条提示。

④面试：英语口试（自我介绍），与老师交流，老师提问问题

注：听说2013年的入学面试与2012年不同，没有①和②，而是换成看图片辨认仪器；还有专外笔试换成翻译文献，是去年获得诺贝尔奖的文章，有关G蛋白欧联受体，30min，翻译几段，涉及专业词汇。面试部分，面试部分比较灵活，题型随机，我觉得事先准备个英文自我介绍比较好，不一定怎么考。英语笔试（为四六级考试形式，有听力，阅读比较简单，我感觉听力的语速介于四六级之间，我们考试那年的考试形式与四六级不太一样，不是边听变涂卡，而是一下听完，然后再涂卡，可能每年都会有点不一样，这个需要练习一下）专业课笔试：包含三科，即分离纯化，生物技术制药，发酵工艺学原理 ①分离纯化，我复习的是课本，不是所有的章节都考到了，记得我们那年考题里有些什么大分子和小分子的分离纯化方法的简答题，有些关于分离纯化的名词解释

②发酵工艺学原理，看的是课件，不记得考过什么了

③生物技术制药，看的是课本与课件，课件看的稍多些，这科的重点是基因工程部分，好像还有些关于抗体的东西。

可以在学校复印社买到以上三门课的复习资料，如课件，期末试题，或者有人总结的笔记资料等，也有些重复的题，但是好像每年考的都不一样。另外可以看一些关于微生物的复习材料。