第一篇：实验五 细菌的生理生化
实验五 细菌的生理、生化试验
实验目的：
初步学会细菌生理、生化试验的操作、结果分析。
仪器材料：
蛋白胨水培养基、糖发酵培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、醋酸铅蛋白胨水培养基、柠檬酸盐琼脂斜面培养基等；甲基红（MR）试剂、维-培（V-P）试剂、靛基质试剂等；大肠杆菌、产气杆菌、沙门氏菌的24h纯培养物等。
微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下：
一、糖酵解试验
不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。
试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫，溴百里蓝和An-drade指示剂。
二、淀粉水解试验
某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
试验方法：以18~24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1°C培养24~48h，或于20℃培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。
淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH7.2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。
三：V-P试验
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
试验方法：
１）O’Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养48h，培养液1ml加O’Meara试剂（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液）1ml，摇动试管1~2min，静置于室温或36±1°C恒温箱，若4h内不呈现伊红，即判定为阴性。亦有主张在48~50°C水浴放置2h后判定结果者。
２）Barritt氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养4天、培养液2.5ml先加入a萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液0.6ml,再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1°C恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。
３）快速法：将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果。不产酸的培养物不能使用。
本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。
四：甲基红（Methyl Red）试验
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
试验方法：挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养于36±1°C或30°C（以30°C较好）3~5天，从第二天起，每日取培养液1ml，加甲基红指示剂1~2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定结果。
甲基红为酸性指示剂，pH范围为4.4~6.0，其pK值为5.0。故在pH5.0以下，随酸度而增强黄色，在pH5.0以上，则随碱度而增强黄色，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验。
五：靛基质（Imdole）试验
某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表
现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。
试验方法：将待试纯培养物小量接种于试验培养基管，于36±1°C培养24h时后，取约2ml培养液，加入Kovacs氏试剂2~3滴，轻摇试管，呈红色为阳性，或先加少量乙醚或二甲苯，摇动试管以提取和浓缩靛基质，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入Kovacs氏试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。
实验证明靛基质试剂可与17种不的靛基质化合物作用而产生阳性反应，若先用二甲苯或乙醚等进行提取，再加试剂，则只有靛基质或5-甲基靛基质在溶剂中呈现红色，因而结果更为可靠。
六、硝酸盐（Nitrate）还原试验
有些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨或氮气等。亚硝酸盐的存在可用硝酸试剂检验。
试验方法：临试前将试剂的A（磺胺酸冰醋酸溶液）和B（α－萘胺乙醇溶液）试液各0.2ml等量混合、取混合试剂约0.1ml、加于液体培养物或琼脂斜面培养物表面，立即或于10min内呈现红色即为试验阳性，若无红色出现则为阴性。
用α-萘胺进行试验时，阳性红色消退很快、故加入后应立即判定结果。进行试验时必须有未接种的培养基管作为阴性对照。α-萘胺具有致癌性、故使用时应加注意。
七、明胶（Gelatin）液化试验
有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸，失去凝胶性质而液化。
试验方法：挑取18~24h待试菌培养物，以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基。于20~22℃培养7~14天。明胶高层亦可培养于36±1℃。每天观察结果，若因培养温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观察其是否被细菌液化，如确被液化，即为试验阳性。平板试验结果的观察为在培养基平板点种的菌落上滴加试剂，若为阳性，10~20min后，菌落周围应出现清晰带环。否则为阴性。
八、尿素酶（Urease）试验
有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。
试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇均，于36±1℃培养10，60和120min，分别观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养2，4和24h分别观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。
九、氧化酶（Oxidase）试验
氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。
试验方法：在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1~2滴，阳性者Kovacs氏试剂呈粉红色~深紫色，Ewing氏改进试剂呈蓝色。阴性者无颜色改变。应在数分钟内判定试验结果。
十、硫化氢（H2S）试验
有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。
试验方法：在含有硫代硫酸钠等指示剂的培养基中，沿管壁穿刺接种，于36±1℃培养24~28h，培养基呈黑色为阳性。阴性应继续培养至6天。也可用醋酸铅纸条法：将待试菌接种于一般营养肉汤，再将醋酸铅纸条悬挂于培养基上空，以不会被溅湿为适度；用管塞压住置36±1℃培养1~6天。纸条变黑为阳性。
十一、三糖铁（TSI）琼脂试验
试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。
本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
十二、硫化氢-靛基质-动力（SIM）琼脂试验
试验方法：以接种针挑取菌落或纯养物穿刺接种约1/2深度，置36±1℃培养18~24h，观察结果。培养物呈现黑色为硫化氢阳性，混浊或沿穿刺线向外生长为有动力，然后加Kovacs氏试剂数滴于培养表面，静置10min，若试剂呈红色为靛基质阳性。培养基未接种的下部，可作为对照。
本试验用于肠杆菌科细菌初步生化筛选，与三糖铁琼脂等联合使用可显著提高筛选功效。
第二篇：生化实验
1．火
（1）酒精及其它可溶于水的液体着火时，可用水灭火
（2）汽油、乙醚、甲苯等有机溶剂着火时，应用石棉布或砂土扑灭，绝对不能用水，否则反而会扩大燃烧面积。
（3）电起火，不能用水和二氧化碳灭火器，应切断电源或用四氯化碳灭火器。2．烧伤
（1）强碱烧伤：先用大量水冲洗，再用5%的硼酸溶液和2%的乙酸溶液冲洗。（2）强酸烧伤：先用大量水冲洗，再用5%的碳酸氢钠或5%的氢氧化铵冲洗。
氨基酸的分离鉴定纸层析法
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。层析溶剂由有机溶剂和水组成。物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示的：
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统；层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。
在操作过程中，手不要摸滤纸。点样直径不超过3mm。
点样的一端朝下, 扩展剂的液面需低于点样线1cm。
即时取出滤纸, 以免出现氨基酸层析跑到滤纸的外面不能检测。
蛋白质及氨基酸的呈色反应 双缩脲反应
紫红色
肽键 可用于蛋白质的定性或定量测定 一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。茚三酮反应
除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。此反应的适宜pH为5~7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。该反应十分灵敏，1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。黄色反应
含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。
坂口反应
与精氨酸反应呈红色，精氨酸是唯一呈此反应的氨基酸，反应极为灵敏 醋酸铅反应
蛋白质分子中常含有半胱氨酸和胱氨酸，含硫蛋白质在强碱条件下，可分解形成硫化钠。硫化钠和醋酸铅反应生成黑色的硫化铅沉淀。若加入浓盐酸，就生成有臭味的硫化氢气体。
蛋白质分子中常含有半胱氨酸和胱氨酸，含硫蛋白质在强碱条件下，可分解形成硫化钠。硫化钠和醋酸铅反应生成黑色的硫化铅沉淀。若加入浓盐酸，就生成有臭味的硫化氢气体。
蛋白质的等电点测定和沉淀反应
当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液pH值称为此种蛋白质的等电点。
用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制成各种不同pH值的缓冲液。向缓冲液溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点 蛋白质的沉淀反应
在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反应可分为两类。
（1）可逆的沉淀的反应
此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。
（2）不可逆沉淀反应
此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度
考马斯亮蓝G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰(max)位置由465 nm变为595 nm，溶液颜色也由棕黑色变为蓝色。通过测定595 nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。吸光度与蛋白质含量成正比。灵敏度高，测定快速简便，干扰物质少。
微量凯氏定氮法
有机物与浓硫酸共热，有机氮转变为无机氮（氨），氨与硫酸作用生成硫酸氨，后者与强碱作用释放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此过量酸液被中和的程度，即可计算出样品的含氮量。
中和程度用滴定法来判断，分回滴法和直接法两种。
（1）回滴法：用过量的标准酸吸收氨，其剩余的酸可用标准NaOH滴定，由盐酸量减去滴定所耗NaOH的量即为被吸收的氨之量。此法采用甲基红做指示剂。
（2）直接法：用硼酸作为氨的吸收溶液，结果使溶液中[H+]降低，混合指示剂（PH4.3－5.4），黑紫色变为绿色。再用标准酸来滴定，使硼酸恢复到原来的氢离子浓度为止，指示剂出来淡紫色为终点，此时所耗的盐酸量即为氨的量。
样液：1g卵清蛋白溶于0.9%NaCl液，并稀释至100ml。如有不溶物，离心取上清液备用。
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
本实验是以醋酸纤维素薄膜作为支持体的区带电泳。
方法是将少量新鲜血清用点样器点在浸有缓冲液的乙酸纤维素薄膜上，薄膜两端经过滤纸与电泳槽中缓冲液相连，所用缓冲液pH值为8.6，血清蛋白质在此缓冲液中均带负电荷，在电场中向正极泳动。
由于血清中不同蛋白质带有的电荷数量及分子量不同而泳动速度不同。带电荷多及分子量小者泳动速度快；带电荷少及分子量大者泳动速度慢，从而彼此分离。
电泳后，将薄膜取出，经染色和漂洗，薄膜上显示出五条蓝色区带，每条带代表一种蛋白质，按泳动快慢顺序，一般经漂洗后，薄膜上可呈现清晰的5条区带，由正极端起，依次为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白。
经洗脱比色观察不同蛋白质的区带。
1、醋酸纤维素薄膜一定要充分浸透后才能点样。点样后电泳槽一定要密闭。电流不宜过大，以防止薄膜干燥，电泳图谱出现条痕。
2、缓冲溶液离子强度不应小于0.05或大于0.07。因为过小可使区带拖尾，过大则使区带过于紧密。
3、电泳槽中缓冲液要保持清洁(数天过滤)两极溶液要交替使用；最好将连接正、负极的线路调换使用。
4、通电过程中，不准取出或放入薄膜。通电完毕后，应先断开电源后再取薄膜，以免触电。
酶的特性
温度对酶活力的影响
大多数动物酶的最适温度为37－40℃，植物酶的最适温度为50－60℃。高温失活，低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。pH对酶活性的影响
唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。唾液淀粉酶的活化和抑制
酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。
血糖的定量测定
动物血液中的糖主要是葡萄糖，其含量较恒定。用硫酸锌和氢氧化钠除去被检测血中的蛋白质制成无蛋白血滤液。当将血滤液与标准铁氰化钾溶液共热时,一部分铁氰化钾还原成亚铁氰化钾，并与锌离子生成不溶性化合物。
向混合物中加入碘化物后，用硫代硫酸钠溶液滴定所释放的碘。即可知剩余的铁氰化钾量。血糖越多，剩余的铁氰化钾越少，所消耗的硫代硫酸钠也越少。硫代硫酸钠溶液用量与血糖的关系可以由经验确定下来的数字表查出。对照组要多一些，且要先查表再相减
脂肪酸的β－氧化
样品中丙酮的含量=(V1-V2)x C Na2S2O3 x 1/6 V1—滴定对照所消耗的Na2S2O3 的体积 V2—滴定样品所消耗的Na2S2O3 的体积 C—Na2S2O3 的浓度
维生素C的定量测定
2，6-二氯酚靛酚滴定法
用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素 C的酸性浸出液进行氧化还原滴定,染料被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,如无其他干扰物质存在，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原性抗坏血酸量成正比。
过氧化物酶的作用 过氧化物酶能催化过氧化氢释出新生氧以氧化某些酚类和胺类物质，例如氧化溶于水中的焦性没食子酸生成不溶于水的焦性没食子橙（橙红色）；氧化愈创木脂中的愈创木酸成为蓝色的愈创木酸的臭氧化物。
目前测定蛋白质含量的方法有很多种，下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋白质测定方法：
物理性质：紫外分光光度法。
化学性质：凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry法等。染色性质：考马斯亮蓝染色法、银染法。其他性质：荧光法。
一、凯氏定氮法： 根据蛋白质的含氮量来测定蛋白质的含量
公式:每g样品中含氮克数 × 6.25 ×100
二、比色法：利用蛋白质与不同试剂的呈色反应，测定蛋白质的含量，如双缩尿法和酚试剂法（lowry’s method）。
三、紫外分光光度法：利用蛋白质对280nm紫外光有最大的吸光度而采用
第三篇：生理实验复习资料
生理实验复习资料2（蓝林）
1．为何肌肉收缩在一定范围内可随刺激强度的增加而增强？
从阈刺激起始，随着刺激强度的增加，肌肉收缩也相应地增大。当刺激强度增加到一定限度时，肌肉收缩也达到最大限度，如再增大刺激强度，肌肉收缩力就不再增大。其原因同上一题。
2．用阈强度和阈上刺激分别刺激单根神经纤维与神经干时，其记录的电变化有何不同？为什么？
用阈强度和阈上刺激分别刺激单根神经纤维与神经干时，动作电位幅度不相同。①用不同的刺激强度刺激神经干时，动作电位的幅度将随刺激强度的增大而呈等级性反应。神经干是由许多条兴奋性不同的神经纤维组成，即兴奋性高的纤维先兴奋，随着刺激强度的增大，兴奋的纤维越来越多。当刺激达到某一最适强度时，可使神经干中所有的纤维都兴奋，此时动作电位的幅度就先到最大值，再增大刺激强度，动作电位幅度不再增大。在神经干上记录的是许多神经纤维兴奋所形成的复合动作电位。②单根神经纤维的动作电位呈“全或无”现象。刺激强度未达到阈值不产生动作电位。一旦达到阈值，就产生固定幅度的动作电位。再给予阈上刺激，动作电位幅值也不随之增大。
3．电刺激坐骨神经－腓肠肌标本的神经后，从电刺激神经到引起肌肉收缩的整个过程中依次发生了哪些生理活动？
从坐骨神经接受刺激到发生肌肉收缩历经下列变化过程：①刺激引起坐骨神经产生动作电位；②动作电位沿坐骨神经以跳跃式传导至末梢；③兴奋在神经-肌肉接头处的传递，即：突触前膜去极化引起Ca2+内流→Ca2+内流触发神经递质Ach释放→Ach经扩散与接头后膜上的N2型Ach受体结合，出现Na+内流为主的离子跨膜流动，形成终板电位→终板电位电紧张传播，引起周围肌膜产生动作电位；④骨骼肌兴奋收缩－耦联，肌细胞胞质内Ca2+浓度迅速增高；⑤胞质内Ca2+与肌钙蛋白结合，诱发肌丝滑行，肌肉收缩；⑥肌质网膜上Ca2+泵活动的结果，使胞质内Ca2+浓度恢复，肌肉出现舒张。4．在蛙心灌注实验中，逐级升高任氏液K＋浓度时，心肌的兴奋性和传导性有何变化？为什么？有何意义？ 制备离体蛙心灌流模型。用蛙心夹连接心尖和张力传感器，调节放大倍数，进行下列实验项目：（1）描记一段蛙心正常收缩曲线。
（2）向套管中加入1%KCl 1～2滴，观察蛙心活动有何变化？然后继续加入1%KCl 1～2滴，观察蛙心活动有何变化？ 结果发现，心肌的兴奋性出现双向变化。当细胞外液K＋浓度轻度升高时，心肌细胞膜内外K＋浓度差减小，K＋外流减少，心肌细胞静息电位或最大复极电位轻度减小，与阈电位之间差距减小，心肌兴奋性升高。当细胞外液K＋过度升高时，心肌细胞静息电位或最大复极电位绝对值显著减小，心肌膜上的Na+通道部分或大量失活，心肌兴奋性减低，甚至丧失。
心肌兴奋性传导速度将逐渐减慢。其机制是当细胞外液K＋浓度逐渐升高时，心肌细胞静息电位或最大复极化电位绝对值显著减小，Na+（或Ca2+）内流的驱动减小，并且Na+（或Ca2+）通道部分失活，心肌动作电位0期Na+（或Ca2+）内流的速度和量减小，0期去极化的速度和幅度减小，局部电流形成减慢，强度减小，局部电流影响范围小，故兴奋传导减慢。严重的高血钾可引起房室交界和心房肌传导阻滞，严重时引起心室内传导阻滞，心脏停跳。5．试述影响动脉血压的因素。影响动脉血压的因素有：
（1）搏出量：在心率与外周阻力恒定的情况下，搏出量可以增加动脉内血容量，升高收缩压；虽然舒张压也升高，但不如收缩压，脉压也有轻度增加。因此，收缩压的高低主要反映心脏搏出量的多少。
（2）心率：如心率加快则使心舒期缩短，心舒期末主动脉内存留血量增加。因此心率加快时，舒张压的升高大于收缩压的升高，故脉压减小。当心率减慢时，结果相反。可见，心率主要影响舒张压。
（3）外周阻力：外周阻力增加时，阻止动脉血液流向外周，使心舒期末动脉内存留的血量增加。因此，以舒张压增加为主。同理，外周阻力降低时，血压降低也以舒张压为明显。可见，舒张压的高低主要反应外周阻力的大小。
（4）主动脉和大动脉的顺应性：大动脉弹性扩张主要是缓冲血压，使收缩压降低，舒张压升高。故当大动脉硬化时，顺应性变小，缓冲能力减弱，收缩压升高而舒张压降低，脉压增大。
（5）循环血量和血管系统容量的比例：失血时，循环血量减少，而血管容量改变不大，体循环平均压下降，使回心血量减少，心输出量减少，动脉血压下降。如循环血量不变，血管容量增加，也可使回心血量减少，动脉血压下降。
6．在严重缺O2、CO2潴留、酸中毒、窒息情况下，机体是如何维持动脉血压的？
在严重缺O2、CO2潴留、酸中毒、窒息对体循环血管的直接作用是扩张血管，降低动脉血压。但机体可通过颈动脉体和主动脉体化学感受性反射维持动脉血压，维持心脑等重要生命器官血液供应。正常情况下，化学感受器反射主要是调节呼吸运动，对心血管活动不起明显调节作用。但血液中O2分压降低，CO2分压升高及pH值降低，可激活颈动脉体及主动脉体内的化学感受器。传入冲动分别沿窦神经和主动脉神经上传到延髓的心血管中枢及呼吸中枢，引起呼吸加深加快，并因此使心率加快，心肌收缩增强，心输出量增多；同时使交感缩血管紧张增强，使外周血管收缩，外周阻力加大，动脉血压升高，皮肤、骨骼肌、腹腔内脏和肾脏的血流量减少，心、脑血流量增加，从而维持了动脉血压和心脑的血液供应。7．在动物实验中，夹闭一侧颈总动脉后，动脉血压有何变化？为什么 夹闭一侧颈总动脉后，动脉血压会出现升高。
心脏射出的血液经主动脉弓、颈总动脉而到达颈总动脉窦。当血压升高时，该处动脉管壁受到机械牵张而扩张，从而使主动脉弓和颈动脉窦血管壁外膜上作为压力感受器的感觉神经末梢兴奋，引起减压反射，使血压下降。当血压下降使窦内压降低，减压反射减弱，使血压升高。在实验中夹闭一侧颈总动脉后，心脏射出的血液不能流经该侧颈动脉窦，使窦内压力降低，压力感受器受到刺激减弱，经窦神经上传中枢的冲动减少，减压反射活动减弱，因而心率加快、心缩力加强、回心血量增加、心输出量增加；阻力血管收缩，外周阻力增加，导致动脉血压升高。
8．电刺激家兔完整的减压神经时动脉血压有何变化？若再分别刺激减压神经向中端及向心端又会引起什么结果？为什么？
主动脉弓压力感受器的传入纤维一般均在迷走神经中上传到中枢，但家兔主动脉弓压力感受器的传入纤维却自成一束，在颈部与迷走神经及颈交感神经伴行，称之为减压神经。电刺激家兔完整的减压神经或切断后的减压神经向中端，其传入冲动相当于压力感受器的传入兴奋，传入延髓心血管中枢将引起减压反射的加强，使心率减慢，心输出量减少，外周血管阻力降低，动脉血压下降；刺激减压神经的外周端对动脉血压无影响，因为减压神经是传入神经。
9．电刺激家兔迷走神经向心端引起动脉血压如何变化？机制是什么？
电刺激家兔迷走神经向心端即刺激支配心脏的迷走神经，其末梢释放的递质是乙酰胆碱（Ach）, Ach与心肌细胞膜上的M胆碱受体结合，可导致心率减慢，心房肌收缩力量减弱，心房肌不应期缩短，房室传导速度减慢，甚至出现房室传导阻滞，即负性变时、变力和变传导效应，导致血压下降。10．静脉注射肾上腺素或乙酰胆碱之后血压会发生什么变化，为什么？
静脉注射肾上腺素，血压先升高后降低，然后再逐渐恢复。肾上腺素对心脏的作用是使心率加快，兴奋传导速度增加，心肌收缩力加强和心输出量增加。对血管的作用则主要取决于血管平滑肌上受体的分别情况：对α受体占优势的皮肤、肾脏、肠胃等内脏的血管，肾上腺素使之收缩；而对以β受体占优势的骨骼肌、肝脏和心脏冠脉等血管，小剂量的肾上腺素则使之舒张，而大剂量时才出现缩血管反应。静脉注射肾上腺素后，开始血液中浓度较高，对心脏和α受体占优势的血管发生作用，使心跳加快，心肌收缩力加强，心输出量增加，皮肤、肾脏、肠胃等内脏的血管收缩，所以血压升高。随着血中肾上腺素的代谢，其浓度逐渐降低，对α受体占优势的血管作用减弱，而对β受体占优势的骨骼肌、肝脏和冠脉血管发生作用，使之扩张，引起血压下降。最后肾上腺素逐渐消失，血压也逐渐恢复正常。静脉注射乙酰胆碱后，血压会降低。乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M2型胆碱能受体结合，通过第二信使cGMP提高K+通道开放程度，减少细胞内cAMP，降低Ca2+通道开放程度，使静息电位水平下降，兴奋性降低；窦房结P细胞静息电位水平下移，外向电流Ik衰减减慢，心率减慢；复极化进程加速，Ca2+内流减少，房室结传导慢，且心肌收缩减弱，故血管平滑肌舒张，使血压下降。11．切断家兔双侧颈迷走神经对呼吸的影响如何 为什么 ? 切断家兔双侧颈迷走神经后，呼吸变深变慢。兔的肺牵张感受器较为敏感，正常的呼吸受肺牵张反射的调节，阻止吸气活动过长，加速吸气动作和呼气动作的交替。迷走神经中含有肺牵张反射的传入纤维。切断两侧迷走神经后，中断了肺牵张反射的传入通路，肺牵张反射作用被消除，呼吸变深变慢。12．试述动脉血中CO2分压升高，O2分压下降，对呼吸有何作用 机制如何
血中PCO2增高，PO2、pH下降均可使呼吸运动增强，但其机制有所不同。CO2为很强的呼吸兴奋剂，其作用通过两条途径：一是刺激延髓腹外侧的中枢化学感受器（CO2能透过血脑屏障，加强脑脊液中H+对此感受器的作用），这是主要途径；另一是刺激外周化学感受器，冲动沿窦神经和主动脉神经传入延髓呼吸中枢，诱发反射性呼吸加深加快；CO2减少时呼吸减弱，但血PCO2过高反能抑制呼吸中枢。血PO2下降作用于外周化学感受器引起反射性呼吸兴奋，缺氧对呼吸中枢的直接作用是抑制。pH降低、H+增高亦通过外周与中枢化学感受器两种途径兴奋呼吸中枢。虽然中枢化学感受器的生理刺激是H+，但H+通过血脑屏障缓慢，限制了它的中枢效应。
13．静脉注入3%乳酸2 ml，家兔的呼吸运动有何变化
家兔注入2 ml的3%乳酸后，血中H＋浓度升高，pH下降，通过外周化学感受器，反射性地引起呼吸加快加深。
14．家兔吸入CO2后呼吸运动有何变化 为什么
家兔吸入CO2，可使呼吸运动加深加快，肺通气量增加。因为CO2兴奋呼吸是通过刺激中枢化学感受器和外周化学感受器两条途径而起作用的，并且以兴奋中枢化学感受器为主。
15．小肠运动的形式有几种？各有何生理作用？小肠运动受哪些因素的调节？ 小肠的运动形式有：
（1）紧张性收缩，小肠平滑肌经常处于紧张状态，这种紧张性是小肠运动的基础。如果小肠紧张性降低，肠腔易于扩张，混合食糜无力，推送食糜也慢；反之，紧张性升高，推送和混合食糜就加快。（2）分节运动，主要作用是使食糜与消化液充分混合，便于进行化学性消化；它还使食糜与肠壁紧密接触，有利于营养物质的吸收。此外，分节运动还能挤压肠壁，有助于血液和淋巴的回流。（3）蠕动，肠段的一种速度缓慢的波浪式推进运动。
（4）摆动，以纵行肌为主的节律性舒缩活动。在草食动物中摆动较为明显。小肠运动的调节：
①内在神经丛的作用：食糜对肠壁的机械和化学刺激，通过肌间神经丛联系的局部反射，引起平滑肌的蠕动。
②外来神经的作用：副交感神经兴奋能加强小肠运动，交感神经则抑制其运动，上述作用还依肠肌当时的机能状态而定。③体液因素的作用：除乙酰胆碱和去甲肾上腺素外，P物质、脑啡肽和 5-羟色胺都有刺激小肠运动的作用。16．为什么小肠是最重要的吸收部位？
小肠之所以成为吸收的最重要部位，是因为它具备以下条件：（1）小肠内集中了许多重要的消化液，如胰液、胆汁、小肠液等。其中的各种消化酶，对食物的各种成分都能进行彻底消化。（2）小肠具有广泛的吸收面积。人的小肠长约5～7m，小肠黏膜上有环状皱褶，皱褶上又有大量绒毛，绒毛外的柱状上皮细胞顶端还有许多微绒毛，这些结构最终可使小肠面积增加约600倍，达200 m2左右。（3）食物在小肠内停留时间较长（3～8h），可作充分地消化和吸收。（4）小肠绒毛内有毛细血管和中央乳糜管，利于代谢物质的吸收并进入血液和淋巴。
17．简述胃运动的形式及其生理意义。
胃运动功能在于接受和贮存从食管来的食物，还可以机械地磨碎块状固体食物，并使食物与胃液充分混合，直至成为一种半流体混合物－食糜，以适宜的速度逐次地、小量地将食糜分批排入小肠。消化期主要运动形式有2种。（1）胃的容受性舒张：当进食时，咀嚼和吞咽食物对咽、食管等处感受器的刺激，可反射性地引起胃底和胃体肌肉的舒张，该运动形式被称为胃的容受性舒张。舒张后的胃容量可增加到1.5L，使胃适应于大量食物的拥入，从而更好地完成容受和贮存食物的机能。（2）胃的蠕动：食物进入胃后约5min，蠕动即开始。蠕动是从胃的中部开始，有节律地向幽门方向进行。在人其频率为3/min，每次需1min左右到达幽门。因此，通常是一波未平，一波又起。蠕动的主要的生理意义是，一方面使食物与胃液充分混合，以利于胃液发挥作用；另一方面，则可搅拌和粉碎食物，并推进胃内容物通过幽门进入十二指肠内。胃在消化期存在移行性复合运动，其生理意义在于它的Ⅲ时相出现强烈的收缩活动，加速胃排空，把胃内容物“清扫”入十二指肠，接着沿小肠向下“清扫”。同时还伴有胃酸分泌等，为下一次消化做好准备。18．胆汁成分中与消化有关的物质是什么？它具有什么作用？胆汁的分泌和排出是如何调节的？
胆汁的成分：胆汁中除水外，还有胆色素、胆盐、胆固醇、卵磷脂以及血浆中所有的无机盐，胆汁中没有消化酶。
胆汁的作用：
⑴胆汁中的胆盐、胆固醇和卵磷脂等可做为乳化剂，减低脂肪的表面张力，增加胰脂肪酶的作用面积。⑵胆汁达到一定浓度后，可聚合成微胶粒，与脂肪分解产物形成水溶性复合物，作为运载工具，促进不溶于水的脂肪分解产物的吸收。
⑶促进脂溶性维生素A,D,E,K的吸收。此外，它在十二指肠可中和一部分胃酸，它还作为促进胆汁自身分泌的体液因素。胆汁分泌的调节
⑴神经因素的作用：
进食动作或食物对胃、小肠的刺激，均可通过神经反射引起肝胆汁分泌的少量增加和胆囊的轻度收缩。迷走神经释放乙酰胆碱可直接作用于肝细胞和胆囊，增加胆汁分泌和引起胆囊收缩，还可通过释放胃泌素引起肝胆汁分泌增加。⑵体液因素的作用：
①胃泌素的作用：它可通过血液循环直接作用于肝细胞，也可先引起胃酸的分泌，后者再作用于十二指肠粘膜，使之释放促胰液素而作用于肝细胞，引起胆汁分泌增加。②促胰液素的作用：可刺激肝细胞引起肝胆汁的分泌。
③胆囊收缩素的作用：可兴奋胆囊平滑肌，使其强烈地收缩，从而排出胆汁。④胆盐的作用：胆盐经过肝肠循环后回到肝脏，刺激肝细胞分泌胆汁。
19、静脉注射37℃的20％葡萄糖溶液10 ml，计数每分钟尿分泌的滴数。
结果发现，静脉注射清水后，尿量增加。因为，血液被稀释，血浆晶体渗透压下降，位于下丘脑的渗透压感受器可感受这种变化，转而引起抗利尿激素分泌减少，肾远曲小管和集合管对水的重吸收减少，于是尿液被稀释，尿量增加，从而使体内多余的水被排除体外。这就是水利尿的产生机制。
静脉注射葡萄糖溶液后，由于肾小管内的葡萄糖含量超过肾小管重吸收的能力，葡萄糖将不能完全被吸收，小管液渗透压升高，结果导致尿量增多。这就是渗透性利尿的产生机制。20.电刺激家兔迷走神经外周端，尿量有何变化？为什么？
电刺激家兔迷走神经外周端，其末梢释放的递质是乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M胆碱受体结合，改变离子通道的通透性和心肌动作电位，使心脏活动抑制，出现负性变化，心输出量减少，血压下降，肾小球毛细血管压降低，有效滤过压减小，肾小球滤过率减少，所以尿生成减少。21．静脉注射肾上腺素对尿量有何影响？
肾上腺素作用于肾血管平滑肌的肾上腺素能受体，引起肾血管收缩，使肾血流量减少，肾小球的有效滤过压下降，肾小球滤过率降低。增加近端小管和髓袢上皮细胞重吸收Na+、Cl-和水。因此，静脉注射肾上腺素可使尿量减少。
22．饮大量生理盐水或清水后，尿量发生什么变化 为什么
正常人一次饮用1000ml清水后，经过0.5h，尿量就开始增加，到第1h末，尿量可达最高值；随后尿量减少，2～3h后恢复到原来水平，此现象称为水利尿。其原因是：大量饮清水后，使血浆晶体渗透压下降和血容量增加，引起抗利尿激素分泌减少，以致远曲小管和集合管对水的重吸收减少，尿量增加。如果饮用的是生理盐水，因为是等渗溶液，仅改变血容量而不会改变血浆晶体渗透压，抗利尿激素抑制程度轻，故其尿量少于饮清水后的水利尿排出的尿量。
23．大量出汗后尿量会发生什么变化？为什么？
尿量减少。因为汗液为低渗液体，大量出汗造成机体水分的丢失大于电解质的丢失，使血浆晶体渗透压升高，对渗透压感受器刺激增强，抗利尿激素释放增多，促进远曲小管和集合管对水的重吸收，尿量减少。24.胰岛素和胰高血糖素是如何相互作用来维持机体血糖稳定的？
胰岛素通过促进组织细胞摄取葡萄糖，增强糖原合成和减少糖异生，而使血糖降低。胰高血糖素的作用与胰岛素相反，通过促进糖原分解和增强糖异生，使血糖升高。胰高血糖分泌有利于机体防止低血糖的发生。血糖水平是调节胰岛素和胰高血糖素分泌的最主要因素。血糖水平持续升高时，胰岛β细胞合成与释放胰岛素增加，而胰岛α-细胞分泌胰高血糖素减少，使血糖降低；而当血糖降低时，胰岛素分泌量迅速降低，而胰高血糖素分泌量大增，使血糖回升。实验设计题
1．请设计实验证明纤维蛋白原在凝血中的作用。
取新鲜血液50 ml放入烧杯中，用带有开叉橡皮管的玻棒搅动，以除去其中的纤维蛋白，结果血液不凝固。说明去除纤维蛋白后血液不发生凝固，纤维蛋白原在凝血中具有重要的作用。2．请设计实验证明加速或延缓血液凝固的方法。
（1）取试管3支，一支做对照，另两支分别加少量棉花，或涂少许液体石蜡。加1 ml新鲜家兔静脉血到三支试管内，每30 s轻轻地倾斜试管一次，记录三管的凝血时间。结果发现，加少量棉花使血液与粗糙面接触，促进凝血因子的激活，进而加速凝血。涂少许液体石蜡使血液与光滑面接触，延缓血液凝固。（2）取试管3支，分别加入新鲜血液1 ml，然后分别置于37℃水浴、室温和冰水中，比较3管的凝血时间。结果发现，37℃水浴适当增加温度可加快酶促反应而使血凝加速。反之，冰水低温可延缓血液凝固。（3）取试管3支，一支做对照，另2支分别加入3滴3.8％柠檬酸钠和5％草酸钾，然后再向各管加入1 ml新鲜血液，混合后观察血凝情况。往加入柠檬酸钠和草酸钾的两管分别再加1％CaCl2 1～2滴。结果发现，加入3.8％柠檬酸钠和5％草酸钾可与血液中Ca2+结合成为络合物或沉淀的化学物质，减少血液中Ca2+从而起到抗凝作用。再加1％CaCl2 1～2滴后，血液发生凝固。
（4）取一支试管放肝素8单位，再加入新鲜血液1 ml，摇匀后，观察其结果。结果发现，肝素能抑制凝血酶的活性而延缓血液凝固。（5）取新鲜血液50 ml放入烧杯中，用带有开叉橡皮管的玻棒搅动，以除去其中的纤维蛋白，观察血液能否凝固。结果发现，去除纤维蛋白后血液不发生凝固。3．血清与血浆的主要区别是什么？
血浆是指经过抗凝处理过的血液经离心沉淀得到的淡黄色半透明液体，血清是指末经抗凝处理的血液发生凝固，待血凝块收缩后得到的淡黄色上清液。所以，血浆和血清的主要区别是：制备血浆的血液经过了抗凝处理，未发生凝血，故血浆中含较齐备的凝血因子；而制备血清的血液，未经抗凝处理，发生了凝血，所以其中的凝血因子因消耗而减少，某些凝血因子甚至耗竭。此外，血清中还含血管内皮细胞和血小板在凝血过程中释放的活性物质。
4．设计实验证实心肌有较长的有效不应期。
（1）动物和设备的准备：破坏蛙的脑和脊髓，使之背位固定于蛙板上，剪开胸部皮肤、肌肉和胸骨，暴露心脏。用蛙心夹连接心尖和张力传感器并调节好紧张度，刺激电极接触心室；刺激参数选单刺激、波宽1 ms、强度增加达到阈值。
（2）描记一段正常蛙心收缩曲线。
（3）在心室收缩期给于一个阈上刺激，记录其反应。
（4）在心室舒张早期、中期、晚期各给予一次阈上刺激并记录其反应。
结果发现，在收缩期间不能接受任何刺激而出现新的兴奋和收缩。而心肌的舒张期（不包括舒张早期）则处于相对不应期，该期中能接受阈上刺激，并出现一个期前收缩，随后有一代偿性间歇，因此心肌具有相当长的有效不应期，比整个收缩期还略长。
5．设计实验分析蛙心兴奋的正常起搏点及传导方向，各部分自律性的高低。
（1）动物和设备的准备：破坏蛙的脑和脊髓，使之背位固定于蛙板上，剪开胸部皮肤、肌肉和胸骨，暴露心脏。用蛙心夹连接心尖。
（2）将蛙心翻向头端或提起心尖，观察蛙心各部的收缩顺序，并记录其收缩频率。
（3）在主动脉之下穿线，将心脏翻向头端，用丝线在心房和静脉窦之间结扎，此结扎称为斯氏第一结扎。观察此时心房、心室搏动均停止，但静脉窦仍搏动。
（4）待心脏恢复搏动后，用丝线在心房和心室之间结扎，此结扎称为斯氏第二结扎。此时心室搏动停止，但心房和静脉窦仍搏动。
蛙心传导系统各部分都具有自律性，其中以静脉窦（哺乳动物为窦房结）的自律性最高，房室交界次之，心室内的传导组织最低。故静脉窦为蛙心兴奋和搏动的正常起搏点。静脉窦的兴奋沿心房传至房室交界，再经房室束和浦金野氏纤维传至心肌。如在不同部位阻断传导，则出现正常收缩节律的障碍。6．设计实验证实组织胺和肾上腺素对毛细血管的影响
取蟾蜍一只，破坏蛙脑和脊髓后将蛙固定在蛙板上，在腹侧部剪一切口，拉出一段小肠，将肠系膜展开，并用大头针将其固定在蛙板的圆孔周围。其上滴加任氏液，防止干燥，然后进行以下项目：（1）在低倍镜下观察小动脉、小静脉和毛细血管中血流情况，分辨其流速、方向和特征。
（2）滴1滴0.01%肾上腺素于肠系膜血管上，观察血管口径及血流速度的变化。发生变化后，速以任氏液冲洗。
（3）滴1滴0.01%组织胺于肠系膜血管上，观察血管口径及血流速度的变化。
结果发现，滴加肾上腺素后，血管口径变小，血流速度加快。肾上腺素对α受体和β受体都有作用，因此肾上腺素对血管的作用则取决于在血管平滑肌上哪种受体占优势，对以α受体占优势的血管，如皮肤和内脏的血管等，肾上腺素使之收缩。滴加组织胺后，血管口径变大，血流速度减慢，因为组胺有强烈的舒血管作用。
7．设计实验证明胰岛素和肾上腺素调控血糖水平的不同作用。
（1）选择体重约20g的小白鼠3只，禁食24h。皮下注射1～2单位胰岛素后观察小鼠的活动，有无不安，呼吸局促，痉挛，甚至休克现象的发生。
（2）待小白鼠出现低血糖症状如惊厥时，留1只作对照，其余2只分别进行腹腔注射(或尾静脉注射)20％葡萄糖1ml和皮下注射(或尾静脉注射)0.01％肾上腺素0.1ml，观察并记录结果。
结果发现，注射胰岛素后因血糖浓度迅速下降动物可出现精神不安、抽搐、休克等表现，这些症状几乎全是低血糖对神经系统作用的后果。脑组织对低血糖比较敏感，需要量非常多，因此如果血糖浓度降低，会使神经组织的正常代谢受到限制，对交感神经产生刺激而引起一系列交感神经异常兴奋的症状。
对注射胰岛素引起以上症状，最有效的办法就是立即静脉注射葡萄糖溶液，动物因血糖水平即刻升高，低血糖症状会立刻纠正。也可皮下注射0.01％肾上腺素，此法纠正低血糖症状较慢。机理是进入体内的肾上腺素与胰岛β细胞α受体结合，抑制胰岛素的释放；亦可直接作用于肝脏、肌肉等组织，使糖原异生，糖原和脂肪分解增加，提高血糖水平。
8．设计实验证明肾上腺对动物生命活动及应激反应的生理作用。
（1）取实验鼠20只，称重并编号，分成4组，每组5只。第一组为对照组（假手术组），其余为肾上腺摘除组。手术操作参见第一章实验手术方法。
（2）四组动物在相同条件下单笼饲养。室温20～25℃，喂以高热量和高蛋白饲料，饮水充足。
（3）摘除肾上腺后动物水盐代谢和存活率的影响：手术后，动物分成以下四个大组，按下表给予相应处理一周并将记录每天情况：
第四篇：生化实验计划
2016-2017学年第一学期生物化学教研室实验室工作计划
一、指导思想
坚持以邓小平理论和“三个代表”的重要思想及科学发展观为指导，践行社会主义核心价值观,开展教育教学改革，全力推进以高等卫生职业教育为核心的素质教育，抓好教育教学管理工作。
二、工作计划
（一）实验室日常管理计划
1、牢固树立“教学中心”意识，对实验室的仪器耗材进行精确登记备案，以便为《生物化学》实验做好后勤服务。
2、严格执行仪器使用人使用仪器必须登记的规章制度。
3、严格执行及时更新实验耗材的规章制度。
4、严格执行实验安全条例，做好实验室安全意识宣讲，做到实验室安全零事故。
5、严格执行实验室值日制度。
6、严格执行实验室卫生制度，保持实验室卫生整洁，给学生提供一个良好的实验环境。
7、严格执行学院规定及时批改实验报告。
8、切实做好实验课的示教工作。
（二）实验室师资队伍建设
1、开展政治学习和业务学习，特别是学习社会主义核心价值体系和人才培养水平评估标准，提高教师的政治品德和业务素养，组织教师开展高等卫生职业教育理念讨论，切实转变教学理念，改变教学方式，提高教学水平。
2、加强实验指导教师的管理和培养，提高实验实训的准备能力和指导水平。
3、加强实验指导教师的安全责任意识。
生物化学教研室 2016年9月
第五篇：生化实验心得
生化实验心得
刘欣怡
201100140057 2011级生物基地班
我很喜欢做实验，并且乐于锻炼自己的动手能力。
本学期的生化实验，虽然只从第二周上到第十五周，但是我收获了很多并且留下了深刻的印象。对于本次实验心得的撰写，我将分为以下3个部分来进行：本学期实验回顾、本学期实验总结以及对于生化实验课的支持和建议。
一、本学期实验回顾：
本学期的生化实验课上，我们一共进行了11次实验，分别是Folin-酚试剂法测定血清蛋白质含量、酵母RNA的提取、醋酸纤维薄膜电泳、紫外吸收法测定RNA含量、聚酰胺薄膜层析、纤维素酶活力的测定（三硝基水杨酸法）、还原糖和总糖含量的测定（三硝基水杨酸法）、酶最适PH的测定、费林试剂热滴定糖、肌糖原酵解作用、微量凯氏定氮法。这些实验具有代表性，是典型的生化实验。在这些实验中，涵盖了以前无机实验和有机实验的基础实验操作，还有全新的实验操作以及实验仪器。
在这学期的生化实验课上，我既复习并熟练了大一无机实验和有机实验的基本实验操作和仪器（比如移液管、滴定管、蒸馏等），又学习并掌握了许多新操作以及新仪器的使用，比如紫外分光光度计、离心机、聚酰胺薄膜、热滴定、凯氏定氮仪器等。最重要的是，我学习并掌握了一些重要的实验方法和原理，比如Folin-酚试剂法、紫外吸收法、三硝基水杨酸法、费林试剂与糖的反应、微量凯氏定氮法等。掌握了这些实验原理以及方法，有利于我们在以后中灵活运用设计实验。
总体来说，本学期生化实验教会了我测定蛋白质、糖、核酸的方法，电泳和层析分离物质、如何测定酶的相关特性、验证肌糖原酵解作用、如何提取RNA。
二、本学期实验总结
通过这学期的生化实验，我的实验技能的到了大大地提升，同时，实验中的细节、注意事项以及老师拓展的知识令我获益匪浅，也让我深深地认识到科学是非常严谨的，尤其是在做实验的时候，要全神贯注，井井有条，否则很容易出差错，而这个小小的差错很有可能就使实验前功尽弃，既耽误时间又浪费试剂。
回顾这一学期我的实验课程，每一次我都能完成实验任务。大多数都比较顺利，小组内两人也大多配合默契，但是有一些美中不足的地方。有的一些实验比较麻烦，实验步骤较为繁琐，我们在做实验时偶尔会产生不耐烦的思想，只想着抓紧结束，但是在这种时候往往更容易出差错。我有两次记忆很深，一次是在测定纤维素酶活力（三硝基水杨酸法）时，没能及时贴上空白标签，导致又重新制作空白，拜拜浪费了时间；另一次是在鉴定肌糖原酵解作用时，实验步骤较为繁琐，并且老师对黑板上的简易实验步骤进行了多个补充，其中一点是要在水浴后取出大块肉再加下一步骤的试剂，结果我们当时产生了不耐烦情绪，就直接加了试剂而没有取出大肉块。对于这两次情况，虽然对最终的实验结果没有产生什么明显的影响，但是，它实实在在体现了自己的操作并不是很严谨，需要注意和努力。
在本学期生化实验报告的撰写中，我重点注意老师强调的实验分析部分。上课认真听老师的实验讲解并认真记录有关的可能实验结果的分析。在课后撰写实验报告时对这些点重点分析和总结，有时甚至是查找相关资料然后再进行分析。通过这一些列的做法，我的实验分析能力得到了提升，我能在讨论实验结果或者实验操作时找到更好、更精确的切入点，能得出更好的结论。
同时，本学期老师将我们分为两人一组来进行实验，两人之间的磨合和合作是一种锻炼，对今后很有帮助。
三、对于生化实验课的支持和建议
我非常感谢老师在这一学期中的辛勤劳动。老师在课前为我们做好实验准备很不容易，配试剂等都很辛苦。谢谢老师您了。
我觉得咱们的额生化实验课设计的挺好的。两人一组可以分工合作，加快实验效率，同时又避免了因为同组同学人数多而有的同学无事可做的现象。老师在课上讲解实验时，有关实验步骤、实验可能结果、实验注意事项的分析、讲解和拓展令我获益匪浅，有利于培养我的实验思维并且拓宽了知识视野。
建议方面，我想和老师提的一点建议其实是有关实验器材方面的。对于老师所提到的有关节约试剂、减少材料浪费等事项我非常赞同，并且大多数时候器材和试剂都很全（这和大一的无机实验和有机实验相比条件进步了很多），只是希望咱们的一些其他实验仪器能更全面一点，举一个例子，可以使用的紫外分光光度计只有3台，有些过少，实验中要等待的时间较长，并且有的仪器还不是很准确，对于我们的实验造成了一定的困扰，希望老师能将实验室内有些问题的仪器同一修一修。
总之，我很喜欢咱们的生化实验课，并且从中学到了很多知识、实验方法和应用，锻炼了实验操作，形成了实验要耐心、细心、恒心的观念。同时还培养了团队意识和合作观念。我获益匪浅。
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