李祖敏个人工作总结

第一篇：李祖敏个人工作总结

2008年个人工作总结

李祖敏

本年度，我主要负责民族小学、职教中心、舟白小学、中塘小学、南海小学、实验小学的会计工作，一年来，本人能够遵纪守法、认真学习、努力钻研、扎实工作，以勤勤恳恳、兢兢业业的态度对待本职工作，在会计岗位上较好地完成了本职工作。现在我把一年来完成工作的情况作简单总结。

一、完成的主要工作

1、认真做好会计核算工作，一是严格按照《会计法》、《会计基础工作规范》办理日常会计业务，正确进行会计核算，按时完成、上报会计月报表。二是每月末及时写出财务分析，对各段财务情况进行分析，找出存在的问题和差距，为学校提出可行性建议，不断完善财务管理。三是定期对学校资产进行清理，每月对学校现金、银行存款、有价证券、材料、资产进行核对，确保帐实相符，指导报帐员做好出纳现金帐，银行日记帐，专户存款帐。加强国有资产管理，从2007年资产清查数为依据，协助学校做好固定资产登记、管理工作，对新增资产及时入帐，并督促学校加强管理，每季度与学校核对一次固定资产情况，充分发挥资产的使用效益。四是认真对各校往来帐进行了清理，根据情况，收集资料对权责非常清楚的可在应收应付中对冲的往来帐，及时冲销；对数额大，权责不太明晰，须报请财政处理的及时报请财政处理。

2、完成了2009年预算工作。与报帐员一起参考去年的收入支出情况，认真2009年可能发生的未预见情况，广泛征求学校各部门和领导意见，做好了2009年财务预算工作。

3、严格按照区教委财务科和区财政局的要求，及时准确地完成了2009年决算工作，做到了帐、表数据一致，科学、合理

4、严格按照档案整理的要求，按时整理了各种会计档案，保证了会计档案真实、完整、安全。

5、第三次“普九”债务清理涉及与我有关学校三所，项目7个，其中区级项目6个，市级项目1个，跨越时间长（有的项目从2003年开始，到2007年结束），经手人员多，会计处理不规范，清理难度大，但与学校报帐会计一道认真对学校债务进行了清理、收集整理相关印证材料，及时完成了第三次“普九”债务清理兑现工作。

二、总结一年来的工作，主要取得了以下几点成绩

1、会计核算逐步规范，教育财务集中核算凸显优势。通过集中办公，同事之间相互学习，取长补短，业务素质得到较大提高。严格按照《会计法》、《会计基础工作规范》办理日常会计业务，会计工作得到有序进行，确保了会计信息真实可靠。所经手的六套会计帐逐渐规范、简洁，呆滞帐大幅减少，能够清楚明了反映学校经济活动往来情况。

2、预算管理得到加强。在日常工作中经常要求学校按预算执行，并在每月末对学校收支情况和预算进行分析，找出其中差距，及时把情况通过书面和电话通报给学校，便于学校及时了解掌握，学校经费超支现象得到有效控制。

3、财务管理逐步规范，学校内部控制不断完善。

4、资产管理，特别是货币资金管理逐步完善，违规使用大额现金现象得到控制，保证帐实相符。

三：工作中存在的问题及今后工作目标

1、资产管理还有不到位，由于资产帐与资产实物不在同一地点，本人下学校时间又少，无法保证资产同时入库入入帐，特别是不通过采购途径获得的资产，更无法保证帐实相等（如捐赠取得的资产）。未对资产进行定期盘库，不了解资产损溢情况。来年应加强资产管理，协助学校对资产进行定期盘库，保证国有资产安全。

2、职教中心往来帐过于复杂，很难清楚其中关系，还有很多未处理以至于会计不清楚学校具体有多少钱可用，到底还有那些款未付。下年度应集中对职教中心的往来帐进行清理，逐步核销呆滞帐，掌握学校具体帐面情况。

3、未做到义务教育保障经费全部用用于公业务开支。六所学校有两所把义务教育保障经费挪作他用，涉及金额8万于元，在来年应加强预算执行力度，严格经费使用用途，保证专款专用。

4、考虑问题不周全，有时只着眼于自己的本职工作。

2009年应加强业务学习，规范财务管理，使所负责五所学校会计工作符合《会计法》和《中小学会计制度》以及教育核算中心的各项规定；不断完善财务内控制度，根据中心制度要求，严格财务审核，充分发挥会计监督职能作用；努力开源节流，为学校增收节支当好参谋，充分发挥会计的管理作用。

2009年1月25 日

第二篇：班主任工作总结(李祖波)

2009——2010班主任工作总结

——李祖波

班主任工作其实是一门艺术，一项颇具技巧性的工作。不仅是教书，还要育人；不仅是是老师，还要是朋友。只要用心，用爱就会体会到学生们的爱戴、尊重与支持。在这短暂的一年工作中，就自己的工作经历简单谈几点心得和感受：

一、亲近篇

自己也是从学生时代过来，当时那种对老师的崇拜 心里，人皆有之。俗话说“桃李不言，下自成蹊”，在教育工作中，我一直坚信这点，坚定地与学生亲近。我要以自己的人格魅力来影响我的学生。但是天有不测风云，计划赶不上变化，一切都比我想象的糟糕多了，特别是在分班以后。学生都来自偏远山区，各方面行为都极不规范，他们对老师好像感觉不是很好，这可能是从低年级一直以来留下的“祸根”。分班以后，我们班理所当然地从顺数第一成了倒数第一，这标志着我平时必须付出更大的努力。每到空闲时间，我就来与他们聊天，以一种非常委婉的语气，毫无架子，和他们交流，谈谈以前的琐事，谈谈对学校的感受，让他们感觉到，在思源他们是温暖的。在这过程中，我用眼睛去观察，用耳朵去倾听，用心去体会，耐心，细心，真心，热心地干好各项学生工作。大概一个月时间，差不多对每个学生都有个大致了解，谁比较外向，内向，爱好，性格等，为以后工作开展奠定基础。在与他们交流中我发现，他们这个时代的中学生很有特点，但也很特殊，今后真的得三思而后行了。

二、培养篇

创建良好的班风，肯定要有小部分同学的带头作用。农村的孩子，大多数都比较内向害羞。比如早读时，叫科代表领读，可是声音总是那么小，可能是还不习惯。自己声音这么小怎么可能把大家都带动起来？我决定亲自坚持一周去带他们早读，当学生觉得自己班主任都能够这么大声地领读，当然慢慢地嗓门也就放开了，虽然发音不是那么准，至少已经大胆迈出了一步。在班干部培养方面当然也是民主选举，可是结果却不尽人意，除了有3位同学愿意主动担任班干部外，其余的同学都快把头贴在桌面了。后来不得不采取备用方案，先指定，试用期一个月，接下来是找他们谈话交流，大力表扬他们的优点，鼓励他们大胆的工作，尽量当老师的小助手，给他们充分的空间展示自己，指点他们工作的同时，更要严格要求干部个人在知识，能力上去取得更大的进步，在纪律上以身作则，为求从各方面给全班起到模范带头作用。一月之后，基本都能够胜任各自工作，基本达到预期目标。

三、调查篇

很多事情都得自己去深入调查，仔细分析，采取各种手段才能够达到事半功倍的效果。纵观全班学生结构，主要集中在本号镇，群英乡，而且好像有分派现象，特别是群英乡学生，刚开始很难交流，你说10句她也不会冒一句，你说好说歹都没反应，真的是无从下手。后来从教过他们的老师那了解到很多情况，也从其他班的学生了解到他们的学习生活情况，原来很多学生都有特殊情况，有单亲的，有父母病重的，家庭特别贫困的等。这一切外在因素对他们的人格都有一定的影响，多多少少会有些心里问题。后来不断与他们沟通，让他们从心里接受自己，这也对以后工作的开展奠定了基础。

下学期时，有位同学老是周一才返校，而且是老是打瞌睡。我的直觉告诉我，他肯定一晚没休息，很可能上网去了，但我不能够直截了当批评他，怕适得其反，后来找到他要好的朋友，借他QQ，下周日晚上，在网上等到12点多，他终于上线了，我的猜测没有错，然后以他朋友的身份和他聊了会，最后快下线时，我才表明身份，他的头像立马暗了下去。第二天一大早他就来了，还是那么疲倦，略带些惊恐。我也只叫他过来，然后嘘寒问暖几句，叫他把这几周周日晚上都干什么去了，写在纸上中午前交给我。中午时他交来了，写了好长一篇，原来他也是初涉网络，一时好奇，又有几 个朋友的怂恿，止不住内心的好奇，一时难以自拔，写了他以前如何，现在如何，还保证以后再也不去了。我相信了他，当然他也做到了。而且还主动为班级做很多事情，所以，在调查问题清楚以后，采取正确的方法，可能会事半功倍。

四、成长篇

刚刚走上工作岗位就担任班主任工作，对学生来说是一个成长过程，对自己更是难得的成长机会。在这一年的琐碎工作中，不但让自己学会了用心去体会，还学会了用心去教育他人。在学习成绩上以前的倒数第一已经不复存在，而且还有两人进去年级100名，平均成绩也提高很多，每位同学进步都很大。我对他们的要求是，你每天都要进步一点点，就像走路，走得最远的不是走得最快的，而是不停走的人。行为规范上，以前的长发脱鞋，现在已经变得整齐干净。现在几乎不用我强调卫生区卫生了，因为经常和他们一起干，教他们该怎么做，怎样做。虽然分到的卫生区是全校最难打扫的地方，还有教学楼厕所。当你身体力行时，学生们感觉是不一样的，他们再也不觉得你高高在上，所以现在他们都在课下叫我大哥。和学生共同成长才是最愉快的事情。

五、收获篇

俗话说：一份耕耘，一份收获。当你用心去播种，施肥，管理之后，肯定会收获一份喜悦。一开始分到一个后近班，就好比分到一块贫瘠的土地，它更需要你加倍的汗水去浇灌它，你用心去管理它，它一样可以结出丰硕的果实。首先，在学习成绩上，他们已经不再是倒数第一，每个人都努力了，都进步了，文化知识有了收获，这也使我感到欣慰。在各项活动中，他们也不逊色，特别是在首届校运会上，积极参与，他们团结在一起，在接力赛中女子第一，男子第三，如果不是因为主力队员在预赛中受伤，很有可能双冠。同样我也收获了尊重，他们不再像开学一样把老师想象得那么难以接近，我成了无话不谈的朋友，也让我收获了育人的经验，懂得了如何去体谅人，怎样与不同的人交流，这一切都成为了我们师生之间宝贵的财富。

六、反馈篇

一年的时间，想起来很长，过起来真的很快，在经历过许多风风雨雨后，又即将迎来新的曙光。这一年，给我和我亲爱的学生们都留下了许多美好而难忘的回忆，同时也给了我许多宝贵的意见。在这一年中，有许多的喜怒哀乐，我都把它记录下来。教育也是需要不断反思，这就需要很多反馈信息，平时教育可以做记录。眼看毕业在即，最近几天我叫同学们每人都写一篇一年来，你对学校，老师，同学，朋友的感受，也可以提意见或建议。这使我对自己又有了更清醒的认识，就好像照镜子一样，很清晰地发现自己不足之处。看着那一张张沉甸甸的纸，有感动，也有触动，也有感慨，原来我还有很多做得不到位的地方。比如一位走读的同学写道：老师，你是一位很优秀的老师，你上课很有吸引力，幽默，我们都很喜欢你的课，可是作为班主任，你有时候好像忽视我们走读生，很多事情我们都不知道，你也没通知到我们，因为我们晚上不上晚修。希望你以后当班主任可以多关注一下我们走读生，你一定可以成为一名更优秀的老师。刹那间，我心灵触动了一下，回想起自己一年的所作所为，真的有时候忽略了他们，因为他们不用来上晚修，很多时候都是在晚修时候通知一些事情，第二天因为忙一些事情可能就忘记了。我一定好好吸取这些宝贵的意见，让自己能够真正的快速成长起来。不断地反思，不断进取，努力做好一名教师的同时，也使自己成为一名合格的班主任。

以上是我对自己一年来班主任工作的大致总结，也是自己工作的一点点心得体会。诚然，在教育学生“学会生存，学会学习，学会关心，学会做事，学会生活，学会做人”的过程中，班主任工作的内容是复杂的，人物是繁重的。但是，只要我们真诚地捧着一颗“爱心”，加深理论修养，在实践中不断完善自己，形成系统科学的工作方法，相信完全能够快速成长起来。

第三篇：李元敏心得体会

李元敏心得体会

4月15日上午，我参加了李元敏同志先进事迹霍城县报告会，此前，《伊犁日报》刊登了《自治州召开学习李元敏先进事迹动员大会》、《让李元敏先进事迹家喻户晓深入人心》等文章，我在读报时想，李元敏是谁？她的事迹为什么在全州范围内被学习宣传？她到底是怎样的一个人？带着好奇和敬意，我认真听取了报告会上李元敏先进事迹报告团的精彩演讲。

报告会上，李元敏在宣讲席滔滔不绝地讲述她在盖买村所经历的点点滴滴，宣讲席到听众坐席的距离早已不是距离，听众的心已完全置身于李元敏的故事之中，她在诉说的过程中几度哽咽，甚至流泪，在场听众也被她的真情实意所感染，默默地倾听、感受、流泪。在台下做笔记的我终于明白这位衣着朴素、和蔼可亲的大姐是怎样的人，下定决心要向她学习，把她的精神当作我的灯塔，引领我在思想上、工作上、生活上树立良风正貌。

学习李元敏同志的“笑”

李元敏面对困难保持微笑，她所在的伊宁县胡地亚于孜乡盖买村素有“盖买盖买，喜根吉开买”的评价，意为“盖买盖买，谁都不愿来”，盖买村实在是太穷了。可是李元敏面对这样一个条件差、问题多、经济薄的村依然以微笑面对，用乐观的精神鼓舞自己、鼓舞全村干部和群众，要对自己有信心，要对盖买村的未来有信心，通过发展种植经济作物、开展村民技能培训等渠道帮助困难群众增收致富，调动起全村群众干事创收的积极性，让她的笑成为每个群众的笑。

李元敏面对群众保持微笑，在入户走访的过程中始终把自己当成群众的亲姐妹，和少数民族群众打成一片，对每个群众反映的问题和提出的意见都微笑相对、积极解决，并能讲一口流利的维吾齤尔语，甚至有时忘记了汉语怎么说，就是这样的服务态度让李元敏成为维吾齤尔族群众真正的好朋友、好姐妹。

李元敏用微笑诠释了乐观精神和公仆意识，想想身为一名公务员的我，有时在工作中遇到困难就打退堂鼓，甚至敷衍塞责、临阵逃脱。有时碰到汉语不好、年龄大的群众来办事，就有些不耐烦、甚至颐指气使、冷言冷语。究其根本，还是缺乏“敢叫日月换新天”的奋斗精神，缺乏“俯首甘为孺子牛”的服务意识，缺乏党性修养锻炼。要把李元敏的精神当作一杆皮鞭，时刻鞭策自己，对待工作多一些微笑，少一些抱怨；对待群众多一些微笑，少一些冷淡。群众路线是党的根本工作路线和生命线，走群众路线先从微笑做起，把群众放在心上，把心放在群众身上用微笑破除压力壁垒和干群隔阂。

学习李元敏同志的“效”

李元敏干工作突出实效，从不搞虚假、浮夸，千方百计为群众办实事，把一个问题突出的后进村变成了全县的“治村强村”示范村。2012年4月，村里的4个砂场合同到期，续签合同没人搭理李元敏，她把4个砂场的路给堵了。砂场老板拿出合同，承包20年缴费4万元，违约赔偿100万元损失。李元敏一把将合同撕掉。“一年承包费15万元！”李元敏说，还有两个条件，村里低保户与“五保户”用砂石全部免费送到家，村民用全部半价。村里当年进账44万元。通过“一事一议”，李元敏给172户村民划了宅基地，铺设9公里柏油路，把全村25公里的泥巴路全部铺上砂石。在分割盖买村的吉里格朗河上架起一座宽12米、长94米的钢桥，解决村民出行难题。

李元敏一心为民、务求实效的工作作风是一面旗帜，值得我们每一个人效仿。看看李元敏，再看看自己，如果是我面对砂场老板的威逼利诱，是否还能坚守信念、保护群众利益？如果是我在盖买村工作，是否还能真心实意为群众办事、解决实际困难？剖析自我，存在问题不容忽视，有时工作不在状态，干不动了就逛淘宝、玩手机。撰写信息夸夸其谈、文风不实，下村入户就是为了完成任务，不对群众嘘寒问暖。这一条条问题的产生还是因为自身存在形式主义，没有树立真抓实干的工作作风，没有理清“想要、做到、得到”的因果关系。李元敏是个实在人，干得都是实在事，她明白“一堆奖杯不如老百姓的口碑”的道理，作为学历高、有文化、有涵养的党员干部没有理由不懂得这个道理，要牢记为民服务的宗旨，把群众的事当成自己的事来办，办得让群众满意、办得让党组织放心，让群众得上真真切切的实惠，让教育实践活动扎扎实实的践行。

学习李元敏同志的“孝”

小孝治家，大孝治国。李元敏的“孝”无疑是一种大孝。在盖买村，维吾齤尔族群众知道“杰米拉”是谁，却很少有人知道李元敏是谁。“杰米拉”是维吾齤尔族村民给李元敏起的名字。李元敏把自己当成盖买村群众的亲女儿，用“孝心”服务群众，感动每一位村民。

李元敏曾与丈夫骑摩托车把得病的买合布里赞·卡斯木送到医院，垫付500元的医疗费，还掏钱为她的两个女儿置办嫁妆，主持了两个女儿的婚事，为她的丈夫办了丧事。买合布里赞·卡斯木把她当作自己的大女儿。在村里，像她这样的维吾齤尔族“妈妈”李元敏还有很多。

村民们说：“‘杰米拉’人是公家的，家里的东西也是公家的。”她家的打草机、拖拉机、粉碎机、挤奶机、铁锹、雨靴等，村民随时可以用，她还贴油钱。

李元敏就是用这种“舍小家顾大家”的情怀，用“意莫高于爱民，行莫厚于乐民”的大孝，帮助和感动着盖买村群众。如果说焦裕禄是一面镜子，那李元敏在镜中展示的就是美丽，她的境界是常人难以企及的，与之相比、自愧不如。自己在生活中对待父母、长辈可以说尊敬、关心、孝顺，可要是把这种付出带到工作中，带到乡村里去，带进百姓家，心中多少有些不情愿，即使愿意也心有余而力不足。李元敏的伟大之处就在于她能把小爱做成博爱、把恩惠做成恩泽、把小孝尽做成大孝，像这样的“女儿”，哪个“妈妈”不爱惜、不拥护？她的工作有什么理由不被群众所肯定？不是所有人都有心力去献大爱、施大恩、尽大孝，唯有汲取其精神内涵，努力吸收“高尚养分”，时刻以她为榜样，把群众当朋友、当爹娘，尽己所能为群众办好事、办实事，努力做到说话有威信、办事有人跟。

第四篇：李慧敏个人简历

个人简历

我叫李慧敏，女，现年44岁，中共党员。大学本科学历，中学高级教师。现任逍遥镇初级回民中学校长。

自参加工作以来，忠诚于人民的教育事业，积极贯彻党的教育方针，全面落实教育发展观，怀着一颗真挚的心，为人师表、无私奉献、开拓创新、锐意进取、努力专研业务，不断提高自己的政治思想觉悟和业务素质，取得了令人瞩目的成绩。

多年来，在生活中，我始终以一个党员的标准，严于律己、宽以待人。在工作中，兢兢业业、勤勤恳恳，坚持原则，清正廉洁，多次被评为“优秀共产党员”、“先进工作者”。我始终本着“敬业勤勉，埋头苦干，精益求精”的原则，一如既往，再接再厉。我始终保持平常心，不把自己当学校的“官”，只把自己当学校的领路“人”；始终怀揣真实心、乐做实在事、甘为人梯，把工作做到极致，让细节孕育精彩；始终坚守责任心，种好自己的责任田。既把学校当作耕耘的乐土，又把学校当作自己成长的沃土，一身轻松地践行“国家把整个的学校交给你，你要用整个的心去做整个的校长”的毕生追求。多次被评为先进工作者，受到了省教育局的表彰。

在成绩面前我永不满足，一定要立足本职，着眼未来，努力工作，拼搏进取，无私奉献，争取为我们逍遥教育的振兴和发展做出自己的不懈努力。

逍遥镇回民中学

第五篇：沙祖敏实习论文

六盘水市牛O型、A型、亚Ⅰ型口蹄疫及隐性感

染免疫抗体调查

送检单位:六盘水疫病预防控制中心

送检材料:牛血清样本

检测时间：6月24日至7月8日 检测地点:三教三楼

检测内容：为了解该地区牛主要疫病免疫水平及隐性感染情况，六盘水市动物疫病预防控制中心特采集六盘水市临床健康牛血清，于2012年6月24日送检至贵州大学三教三楼实验室进行相关血清学监测，检测牛主要疫病隐性感染抗体和免疫抗体阳性率。

一、实验步骤

（一）、牛O型口蹄疫检测

1、先按1:25稀释PBST浓缩液1000毫升，40毫升PBST浓缩液+960毫升蒸馏水。

2、稀释血清1：32，20微升待检血清+620微升PBST于1.5毫升印管内，在吸取血清样本时要充分混匀，加好样后瞬时离心。

3、取50微升稀释好的血清到血清稀释板中，第11，12列作阴性，阳性，病原对照孔。第11列各孔加50微升PBST,再加阳性血清50微升，等比稀释，第12列前两孔各加50微升PBST，再加阴性血清50微升，等比稀释。

4、A型口蹄疫病毒抗原按1：6的比例稀释。

5、每孔各加稀释好的病毒抗原50微升，第10列对照孔最后四孔各加100微升。6、4摄氏度过夜。

7、用包被缓冲液按1：1000稀释病毒免抗血清，在ELISA包被板上每孔加50微升，室温过夜。

8、用洗涤液（1xPBST）洗ELISA板5次，在吸水纸上甩干，抗原体反应从4摄氏度取出放置5分钟后，将各孔血清病毒混合物按次序转移至ELISA板上，每孔50ul，封板，37摄氏度温1小时。

9、同上洗板5次，甩干。用豚鼠抗血清稀释液稀释A型口蹄疫病毒豚鼠抗血清至工作浓度1：1000,每孔加50微升，封板，37摄氏度温育1小时。

10、同上洗板5次，甩干。用PBST稀释兔抗豚鼠酶结合物至工作浓度1：500, 每孔加50微升，封板，37摄氏度温育1小时。

11、同上洗板5次，每孔加50微升底物溶液，(务必要加双氧水，每10毫升加100微升双氧水)，37摄氏度温育15分钟。每孔再加50微升硫酸

终止液终止反应，立即在492nm波长下读取光吸收值。【结果判定】

1、实验认可标准

每次实验，每块板必须设病毒抗原对照和阴阳性血清对照。病毒抗原对照至少两个孔的492nm值为1.0以上，最好在1.0-2.0范围内；阳性对照抗体滴度应是1:1024+-1滴度；阴性对照抗体滴度应小于1:4.2、病毒抗原对照平均429nm值50%计算

抗原对照是4孔。弃去最高和最低值，计算剩余2孔的平均值再除以2，即50%对照值。该值即为临界值，表示了阻断50%反应的对照值。

3、结果判定

以病毒抗原对照平均值得50%为临界值，被检血清稀释孔的值大于临界值的孔位阴性孔，小于或等于临界值的孔位阳性孔，阳性孔492nm波长值等于临界值时所对应的稀释度为该份血清的抗体滴度。例如病毒抗原对照平均值为1.2，则其50%为0.6。若某一待检血清在1:128时492nm波长值为0.6，则该份血清的抗体滴度为1:128.若临界值处于两个之间，如处于1:64与1:128之间，则该抗体滴度取中间值为1:90。

ELISA抗体滴度与免疫动物攻毒保护的关系：牛、羊;抗体滴度》=1:128,99%以上保护《1:16不保护；1:22-90.50%保护。猪：》=1:64,99%以上保护；《1:4不保护；1：4-45,50%保护。

（二）、牛A型口蹄疫检测

1、先按1:25稀释PBST浓缩液1000毫升，40毫升PBST浓缩液+960毫升蒸馏水。

2、稀释血清1：32，20微升待检血清+620微升PBST于1.5毫升印管内，在吸取血清样本时要充分混匀，加好样后瞬时离心。

3、取50微升稀释好的血清到血清稀释板中，第11，12列作阴性，阳性，病原对照孔。第11列各孔加50微升PBST,再加阳性血清50微升，等比稀释，第12列前两孔各加50微升PBST，再加阴性血清50微升，等比稀释。

4、A型口蹄疫病毒抗原按1：6的比例稀释。

5、每孔各加稀释好的病毒抗原50微升，第10列对照孔最后四孔各加100微升。6、4摄氏度过夜。

7、用包被缓冲液按1：1000稀释病毒免抗血清，在ELISA包被板上每孔加50微升，室温过夜。

8、用洗涤液（1xPBST）洗ELISA板5次，在洗水纸上甩干，再将抗原抗体混合物从抗原抗体反应板上按次序转移至ELISA板上的相应孔，每孔50微升，封板，37摄氏度温育1小时。

9、同上洗板5次，甩干。用豚鼠抗血清稀释液稀释A型口蹄疫病毒豚鼠抗血清至工作浓度1：1000,每孔加50微升，封板，37摄氏度温育1小时。

10、同上洗板5次，甩干。用PBST稀释兔抗豚鼠酶结合物至工作浓度1：1000, 每孔加50微升，封板，37摄氏度温育1小时。

11、同上洗板5次，每孔加50微升底物溶液，(务必要加双氧水，每10毫升加100微升双氧水)，37摄氏度温育15分钟。每孔再加50微升终止液终止反应，立即在492nm波长下读取光吸收值。【结果判定】

1、实验认可标准

每块板设4孔病毒抗原对照。病毒抗原对照不加任何血清，直接用PBST稀释至使用浓度，与血清或病毒抗原复合物同步加入ELISA板孔，50ul每孔，病毒抗原对照值应在1.5+-0.5范围内。阳性对照抗体效应在1:1024+-1滴度以内；阴性对照抗体效应《1:8。

2、病毒抗原对照平均429nm值50%计算

抗原对照是4孔。弃去最高和最低值，计算剩余2孔的平均值再除以2，即50%对照值。该值即为临界值，表示了阻断50%反应的对照值。

3、结果判定

以病毒抗原对照平均值得50%为临界值，被检血清稀释孔的值大于临界值的孔位阴性孔，小于或等于临界值的孔位阳性孔，阳性孔492nm波长值等于临界值时所对应的稀释度为该份血清的抗体滴度。例如病毒抗原对照平均值为1.2，则其50%为0.6。若某一待检血清在1:128时492nm波长值为0.6，则该份血清的抗体滴度为1:128.若临界值处于两个之间，如处于1:64与1:128之间，则该抗体滴度取中间值为1:90。ELISA抗体效价》=1:128，判为A型口蹄疫抗体阳性。

ELISA抗体效价与保护力的关系：牛、羊：抗体效价》=1:128,99%保护，效价《=1:16，不保护；效价在1:22-90间，50%保护。

（三）、牛亚洲I型口蹄疫检测

1、先按1:25稀释PBST浓缩液1000毫升，40毫升PBST浓缩液+960毫升蒸馏水。

2、稀释血清1：32，20微升待检血清+620微升PBST于1.5毫升印管内，在吸取血清样本时要充分混匀，加好样后瞬时离心。

3、取50微升稀释好的血清到血清稀释板中，第11，12列作阴性，阳性，病原对照孔。第11列各孔加50微升PBST,再加阳性血清50微升，等比稀释，第12列前两孔各加50微升PBST，再加阴性血清50微升，等比稀释。

4、亚洲I型口蹄疫病毒抗原按1：5的比例稀释。

5、每孔各加稀释好的病毒抗原50微升，第12列最后四孔各加病毒抗原100微升，作为抗原对照。6、4摄氏度过夜。

7、用包被缓冲液按1：1000稀释病毒免抗血清，在ELISA包被板上每孔加50微升，室温过夜。

8、用洗涤液（1xPBST）洗ELISA板5次，在洗水纸上甩干，再将抗原抗体混合物从抗原抗体反应板上按次序转移至ELISA板上的相应孔，每孔50微升，封板，37摄氏度温育1小时。

9、同上洗板5次，甩干。用豚鼠抗血清稀释液稀释A型口蹄疫病毒豚鼠抗血清至工作浓度1：1000,每孔加50微升，封板，37摄氏度温育1小时。

10、同上洗板5次，甩干。用PBST稀释兔抗豚鼠酶结合物至工作浓度1：1000, 每孔加50微升，封板，37摄氏度温育1小时。

11、同上洗板5次，每孔加50微升底物溶液，(务必要加双氧水，每10毫升加100微升双氧水)，37摄氏度温育15分钟。每孔再加50微升终止液终止反应，立即在492nm波长下读取光吸收值。【结果判定】

1、实验认可标准

每块板设4孔病毒抗原对照。病毒抗原对照不加任何血清，直接用PBST稀释至使用浓度，与血清或病毒抗原复合物同步加入ELISA板孔，50ul每孔，病毒抗原对照值应在1.5+-0.5范围内。阳性对照抗体效应在1:1024+-1滴度以内；阴性对照抗体效应《1:8。

2、病毒抗原对照平均429nm值50%计算

抗原对照是4孔。弃去最高和最低值，计算剩余2孔的平均值再除以2，即50%对照值。该值即为临界值，表示了阻断50%反应的对照值。

3、结果判定

以病毒抗原对照平均值得50%为临界值，被检血清稀释孔的值大于临界值的孔位阴性孔，小于或等于临界值的孔位阳性孔，阳性孔492nm波长值等于临界值时所对应的稀释度为该份血清的抗体滴度。例如病毒抗原对照平均值为1.2，则其50%为0.6。若某一待检血清在1:128时492nm波长值为0.6，则该份血清的抗体滴度为1:128.若临界值处于两个之间，如处于1:64与1:128之间，则该抗体滴度取中间值为1:90。ELISA抗体效价》=1:128，判为A型口蹄疫抗体阳性。

ELISA抗体效价与保护力的关系：牛、羊：抗体效价》=1:128,99%保护，效价《=1:16，不保护；效价在1:22-90间，50%保护。

（四）、牛口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC-ELISA检测

1、使用前将试剂盒恢复到室温，避免阳光直射或放置在30摄氏度以上 的环境中。

2、取出试剂盒中的样品稀释板。A1、B1两孔作为阴性对照，C1、D1两孔作为阳性对照孔，其余孔作检测孔，每孔一个样品。

3、在稀释板的A1、B1、C1、D1孔中加入200微升样品稀释液，在相应的孔中分别加如10微升阴、阳性对照血清。在稀释其它各孔中加入155微升样品稀释液，在相应的各孔中分别加入5微升待检样品血清。用加样器重复吹吸数次。稀释每个样品时必须使用不同的吸头。

4、取出抗原包被板。

5、分别从稀释板上取稀释后的对照血清和被检血清各100微升，加至抗原包被板的相应孔中，加盖或封膜后，置于37摄氏度孵育60分钟。

6、洗涤工作液配制：按需要量，用离子水或双蒸水将洗涤液作25倍稀释。

7、用洗涤工作液洗涤抗原包被板，每孔加300微升，洗涤6次，拍干。

8、酶结合物工作液配制：用酶结合物稀释液将酶结合物作100倍稀释，现配现用。

9、每孔加100微升酶结合物工作液，加盖或封膜后，置37摄氏度下孵育30分钟。

10、重复7。

11、TMB底物工作液配制：将TMB底物B液和TMB底物A液等量混合。现配现用。

12、每孔加入100微升TMB底物工作液，加盖或封膜后，置37摄氏度下孵育15分钟。

13、每孔加入100微升终止液，并轻轻振荡混匀。

14、在15分钟内，用酶联读数仪测定在450nm波长下的OD值。