液相色谱法为您解决“瘦肉精”检测

第一篇：液相色谱法为您解决“瘦肉精”检测

液相色谱法为您解决“瘦肉精”检测

自瘦肉精事件发生以来，北京赛恩森科技一直密切关注，通过参考各种检测方法，迅速作出了力亲实验的行动，作出并规范了动物组织中盐酸克伦特罗（瘦肉精）检测的全套解决方案。

具体测定方法如下：

1.适用范围

适用于动物肌肉和肝脏中盐酸克伦特罗药物的检测。

2.提取

将5g动物组织、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸钠溶液置于50 mL离心管中，10000 rpm均质2 min。6000 rpm下离心2 min，将上清液转至另一离心管中。用15 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并提取液。

向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的盐酸溶液，涡动1 min，然后再6000 rpm下离心1 min，收集下层水相。重复萃取一次，合并下层水相，用2.5 mol/L NaOH溶液调节pH至5.2，待净化。

3.净化

活化/平衡：依次向Welchrom® P-SCX（60mg/3mL）中加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L盐酸溶液，流出液弃去；

上样：将上述提取液加入柱中，流出液弃去；

淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液弃去，并将小柱抽干；

洗脱：用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脱，收集洗脱液，40℃下氮气吹干；

4.检测

50% 甲醇溶解残渣，涡动振荡1 min,过0.22μm滤膜，装入进样小瓶，进样10μL分析。

5.色谱条件：

仪器： LC-3010系列HPLC（二元高压梯度）

色谱柱： C18 液相色谱柱（4.6 mm x 150 mm, 3 μm）

流动相： 0.01 M磷酸缓冲液：甲醇=65:35 流速： 0.7 mL/min 进样量： 20 μL 柱温： 30 °C

检测波长： 244 nm 运行时间：11 min

如需详细信息，请致电详询。

北京赛恩森科技

2011.08.22

第二篇：肉类食品中瘦肉精的检测-液相色谱法

液相色谱法测定肉类食品中瘦肉精残留量

摘要 瘦肉精是一种动物用药，将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。近期，国内双汇火腿肠出现食品安全问题所引发的“瘦肉精”事件令国人对食品安全颇为堪忧，因此 ,对动物肉类或内脏中盐酸克伦特罗的监督检测显得十分必要。为此南京科捷应用LC-600液相色谱仪，探讨肉类样品中瘦肉精（盐酸克伦特罗）的前处理方法 ,了解本市肉品中盐酸克伦特罗的残留情况。用水提取肉品中盐酸克伦特罗残留量 ,我们用固相萃取法对肉类样品提取液进行净化和浓缩 ,可以有效去除干扰 ,简便 ,灵敏度高 ,适于在日常检测工作中推广使用。残留监测作为食品安全的重要课题。使之越来越广泛地应用于不同类型兽药、农药及毒素类有毒有害物质的检测分析之中。

关键词

瘦肉精 盐酸克伦特罗 兽药 农药残留

高效液相色谱法 1.本方法的应用范围

本方法的检测思路可供食品中农药、兽药残留检测的借鉴。如兽药残留动物源食品中硝基呋喃类残留(呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因、呋马唑酮)磺胺类药物残留(磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹嚼啉)喹诺酮类(嚼喹酸、萘啶酸)氯羟吡啶、莫能菌素和盐霉素、乙氧酰胺苯甲酯、氯霉素、伊维菌素、克伦特罗、尼卡巴嗪、土霉素、四环素、金霉素(国标GBT14931．1)阿莫西林、盘尼西林及喹乙醇等。农药残留氨基甲酸酯农药、有机磷农药、百草枯、杀草快、草甘膦及氨基膦酸、苯并眯唑类杀菌剂、利谷隆、灭草隆及敌草隆、三嗪类多种农药的检测。2.实验步骤

(1)仪器和设备

①LC-600高效液相色谱仪整套配置如下

P600宝石恒流泵 1台 UV600紫外检测器

1台 7725i六通进样阀 1只 WS600色谱工作站

1套

②匀浆机 ③旋转蒸发仪 ④电子天平：0.01mg ⑤紫外分光光度计 ⑥离心机 ⑦固相萃取仪 HGC-8 ⑧固相小柱（2）试剂

①盐酸克伦特罗标准品 ②乙醚；分析纯 ③正己烷：分析纯 ④甲醇：色谱纯 ⑤盐酸克伦特罗标准液 ⑥lmol／I。盐酸溶液 ⑦0．05mol／L乙酸缓冲液 ⑧0．3mol／L乙酸缓冲液 ⑨lmol／LNaOH溶液 ’ ⑩甲醇液：甲醇—重蒸水(75+25)(2)仪器和设备

②匀浆机 ③旋转蒸发仪 ④电子天平：0.01mg ⑤紫外分光光度计

⑥离心机 ⑦固相萃取仪 HGC-8 ⑧固相小柱(3)测定步骤

①提取和净化 取组织样品10g，加入30ml lmol／L盐酸溶液匀浆，超声波振荡3h，5000r／mln的速度离心10min，—上清液用lmo]／LNaOH溶液滴至碱性，乙醚或正已烷抽三3次，抽提液在水浴锅上蒸发至5ml后上Silioa小柱，以除去大部分杂质，洗脱液上Alu—mina A小柱，将待测成分吸附在小柱上，用0．05mol几乙酸缓冲液(pH7．0)洗涤小柱3次，o．3mol／L乙酸缓冲液洗脱待测成分，冷冻干燥，用0．5ml甲醇液溶解后取100uL供高效液相色谱仪检测。②测定

a．色谱条件

色谱柱：C18柱，250mmX4.6mm 流动相：甲醇—水(75+25)流速：0．65ml／mill 检测波长：243nm 进样量：100uL b．色谱测定 分析样品按上述仪器操作条件供高效液相色谱仪分析。③空白试验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。(4)检测限和回收率

本方法在猪的肌肉和肝脏组织中的检测限为0．001ug/g’回收率范围为80％±20％

第三篇：瘦肉精检测

通许县动物卫生监督所关于

外销生猪“瘦肉精”检测的报告

开封市动物卫生监督所：

为了保证畜产品质量安全，保障人民身体健康，全面推进和谐社会的创建，2010年6月21日，通许县畜牧局下发文件开展世博会期间整顿生猪经营处等检疫秩序活动，特别是重点开展 “瘦肉精”的检测工作，坚决杜绝在饲料中使用莱克多巴胺及克伦特罗等违禁药物，整顿和规范饲料、兽药市场，严厉打击假冒伪劣产品，实现全县生猪生产的安全无污染，确保外销到市场的是“放心猪”。

通许县动物卫生监督所认真学习贯彻了县局文件精神，开展以“瘦肉精”和重大动物疫病为主的检测检验；加大对使用“瘦肉精”的打击力度，建立生猪疫病防治体系，确保生猪及其加工产品的质量安全。对检测出“瘦肉精”的生猪产地在3个月内禁止外销，经检测合格后重新申请进入市场。逐步推行生猪产品市场准入制度、“一猪一标一码”标识管理制度。对生猪“瘦肉精”进行重点抽检，检验中凡发现有“瘦肉精”的生猪均进行销毁，并向产地通报和封停该地生猪进入市场。

据汇总统计，2010年6月至8月份我县共外销生猪8603头。分批次发往浙江省慈溪市、江苏省无锡市、安徽省和县、浙江省宁波市、江苏省常州市、广东省湛江市、安徽省合肥市、安徽省淮南市、安徽蒙城县等九个城市和地区。“瘦肉精”检测全部呈现阴性。其中6月份外销生猪2053头，抽检生猪尿样110多个，检测结果全部呈现阴性，合格率达到100%。7月份外销生猪3190头，抽检生猪尿样160多个，检测结果全部呈现阴性，合格率达到100%。8月份外销生猪3360头，抽检生猪尿样170多个，检测结果全部呈现阴性，合格率达到100%。

二○一○年九月八日

主题词：瘦肉精 抽检 报告

通许县动物卫生监督所二○一○年九月八日印

第四篇：(瘦肉精)检测制度

第十节

屠宰企业违禁药物（瘦肉精）检测制度

（适用实行瘦肉精企业自检的地区）

一、为规范生猪定点屠宰厂（场）待宰生猪尿样违禁药物“瘦肉精”的日常检验工作，制定本制度。

二、定点屠宰厂（场）必须有满足日常检测需要的工作场所及实验室，并应保持光线充足，通风良好，室内环境整洁，基本设施齐全。

实验室必须配备能满足检测工作需要的检测人员和审核人员。

三、检测人员必须经过有关单位的培训，能独立操作，包括样本的采取和检测。

四、定点屠宰厂（场）必须建立瘦肉精检测台帐，并建立人员岗位责任制，所有检测设施、器材、记录等都要专人妥善保管。

五、严格执行省政府的有关要求，生猪宰前必须进行瘦肉精检测，并实行每批必检制度（一个检疫证号为一批）。

六、检测结果应在屠宰厂（场）内固定场所以醒目方式对外公示。

七、若检测出现阳性结果，屠宰厂（场）必须将检测结果立即报送当地动物防疫监督机构处理。

八、检测方法按照《动物组织中盐酸克伦特罗的测定 气相色谱/质谱法》NY/T 468-2006的规定执行。

九、屠宰厂（场）应自觉接受屠宰管理机构和动物防疫监督机构对检测工作开展监督检查、指导。

第五篇：瘦肉精检测方法

目前，检测瘦肉精的方法主要有四种，即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）、毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）。而我国结合自己的实际情况，2001年农业部首先组织制定了饲料中盐酸克伦特罗的测定标淮。该标准选择确定了两种：即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）。其中将HPLC法作为检测瘦肉精的半确证性方法，其最低检测限为 0．05μg/kg，优点是检测精确度高，而且假阳性率低；缺点是检测过程烦琐、检测时间长，需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。而GC一MS法优点是能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析。GC－MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低，已将GC－MS法定为检测瘦肉精的确证性方法。GC－MS法的缺点同HPLC相似。

(1)试剂和材料 以下所有试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂；水为符合GB／T6682规定的二级水。

①盐酸克伦特罗对照品：含盐酸克伦特罗不得少于98．5％

②盐酸

③无水甲醇

④氢氧化钠

⑤磷酸二氢钾

⑥磷酸

⑦盐酸溶液 取盐酸4．2ml，加水至1000ml，即得。

⑧o．5mol／L磷酸二氢钾溶液 取磷酸二氢钾68g，加水800ml溶解并用磷酸调pH值至3．O，用水稀释至1000ml，即得。

⑨0．05mol几磷酸二氢钾溶液 取磷酸二氢钾6．88，加水800ml溶解并用磷酸调pH值至3．0，用水稀释至1000mi，即得。

a．氢氧化钠溶液 取氢氧化钠48，加水使溶解成100mi，即得。

b．盐酸克伦特罗对照品储备液(1mg／mi)准确称取28．3mg盐酸克伦特罗对照晶至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至25ml，一20~C以下保存，有效期1年。

⑩盐酸克伦特罗对照品工作液(10ttg／mi)取lmg／mi储备液o．5ml到50mi量瓶中，加水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。

⑾盐酸克伦特罗对照溶液(100ng／m1)取1(ug／m1工作液o．5ml到：50mi量瓶中水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。

⑿盐酸克伦特罗检测试剂盒(2～8~C冰箱中保存)

⒀固相萃取柱C，s：100mglml含碳量≥17％

(2)仪器和设备

①酶联免疫反应读数仪

②分析天平精度0．00001g

③天平精度0．01g

④冷冻离心机

⑤50mi具塞离心管

⑥匀浆机

⑦微型振荡器

⑧回旋振荡器

⑨微量移液器 单道20uL，50ul，100uL；多道50～250uL，⑩干热浓缩器

①空气压缩机

(3)测定步骤

①试料的制备(尿)

取供试尿lml，于3000r／min离心l0min，上清液作为供试试料，直接供酶联免疫测定法测定。

取空白尿lml，于3000r／min离心l0min，上清液作为空白试料，直接供酶联免疫测定法测定。

取空白尿2ml，于3000r／min离心l0min，上清液1.0ml添加l00ug／L的克伦特罗对照溶液20／H。作为2ug/l空白添加试料，直接供酶联免疫测定法测定。

②试料的制备(肝)

取约l00g新鲜或冷冻后融化的空白或供试猪肝,用匀浆机以10000r／rain匀浆1-2min，使均匀呈糊状，一20~C以下冰箱中贮存备用。

取均浆后的供试肝样，作为供试试料。

取均浆后的空白肝样，作为空白试料。

取均浆后的空白肝样(1土0．05)e添加l00ng／m1的克伦特罗对照溶液20tzL作为2ng／g空白添加试料。

a：提取(肝)取(1士o．05)z试料，置50ml离心管中；加盐酸溶液5.0mi，旋涡混匀，中速振荡1．5h；在10—15~C下以4000r／mill以上速度离心15min；上清液移人另一50ml离心管中，加入氢氧化钠溶液300gL，混匀，振荡15min；加0.5mol／l磷酸二氢钾溶液4。0ml，混匀，2—8~C放置过夜；取上述溶液于10～15~C以4000r／111113以上的速度离心15min，上清液备用。

b．净化(肝)C，固相萃取柱依次用无水甲醇3mi、0.05mol／L磷酸二氢钾溶液2mi预洗，不使柱床干涸；将备用上清液全部过柱；用0.05mol／L磷酸二氢钾溶液2ml淋洗，挤干，弃去所有淋洗液；用无水甲醇2mi洗脱，流速控制在0.5ml／mm以下，挤干，收集洗脱液；于50～60~C下用氮气或空气缓缓吹干洗脱液；残余物用水1.0ml溶解，以4000r／mill以上的速度离心15rain，清液作为试样溶液供酶联免疫测定法测定。

③测定

a．室温应控制在19～30~C。

b．取在19—30~C放置1—2h的试剂盒，按每个标准溶液和试样溶液至少两孔计算所需酶联板条的数量，插入框架。每个微孔加入用缓冲溶液100倍稀释的抗体100~tL，封口膜封板，室温孵育30min。

c倒出孔内液体，将酶联板倒置在吸水纸上拍打，使孔内没有残余液体。用多道移液器加水250pL到酶联板的微?L内，稍后倒出孔内液体，再将酶联板倒置在吸水纸上拍打，如此重复操作洗板3次。

d．分别吸取标准溶液、空白试料、空白添加试料和供试试料各20uL，分别放入不同微孔底中央，并在每孔内加入用缓冲溶液100倍稀释的酶结合物100~I。，在微型振荡器上混匀，用封口膜封好，室温孵育30min。

e．倒出孔内液体，将酶联板倒置在吸水纸上拍打，使孔内没有残余液体，重复洗板3次。

f．用多道移液器加入用底物缓冲溶液10倍稀释的底物100uL，室温避光孵育15min。

g．用多道移液器每孔加终止液100uL。

h．在1h内将酶联板放于酶标仪内，于450nm波长处测定吸光度值。

(4)计算 用数据分析软件对结果进行分析，绘出标准曲线，并得出试料中克伦特罗的含量。

(5)灵敏度和回收率

本方法的平均检测下限为0.1mg／Kg。

本方法在1ug／kg添加浓度水平上猪尿回收率范围为60％一120％，猪肝回收率范围为40％～120％。