猪肉中瘦肉精的检测

第一篇：猪肉中瘦肉精的检测

猪肉中瘦肉精的检测

摘 要

鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害，本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精)的几种分析检测方法，并对未来的发展方向作了展望。

关键词：瘦肉精 GC-MS HPLC ELISA 引言

瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol，CLB)【1】，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此，β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产，其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤；另外还能引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒【2】。

盐酸克伦特罗(Clenbuteerol，CLB)，又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，俗名瘦肉精，化学名为α—[(叔丁氨基)甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇盐酸盐，分子式为C12 H18Cl12N2O•HCl，相对分子质量为313.65。

目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS)、毛细管电泳法(CE)等。中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法，将GC—MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁。对于动物性食品，GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。下面将会对这三种方法逐一进行说明，并简单介绍毛细管电泳法（CE）【3】。2 动物性食品（猪肉）中盐酸克伦特罗的检测方法

2.1 气相色谱—质谱法(GC—MS)

GC—MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机结合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。GC—MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低【4】。下面将以岛津公司采用的GC—MS法检测瘦肉精为例，对仪器与试剂的选择、样品的处理方法等方面进行介绍。

2.1.1仪器与试剂

仪器：岛津GCMS—QP2010 Plus；

试剂：盐酸克伦特罗（Clenbuterol，CLB）标准品，内标（Clenbuterol—D9，CLB—D9），N，O—双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA），C18固相萃取小柱（100 mg，3 mL）标准溶液的配制：准确称取盐酸克伦特罗和内标的标准品，用甲醇配成浓度为1 mg/mL的标准储备液，放置于4℃冰箱中避光保存，使用时用甲醇稀释成1μg/mL的标准使用液和内标使用液。

2.1.2 分析条件

色谱柱：Rtx—5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)进样口温度：220℃ 柱温程序：70℃(0.6 min)—25℃/min—220℃(6 min)—25℃/min—280℃(5 min)恒线速度方式，柱流量0.9 mL/min 不分流进样，进样时间1 min 接口温度：280 ℃ 离子源温度：200 ℃ 溶剂切割时间：8 min 检测离子：

CLB：检测 m/z 86，187，243，262，CLB—D9：检测 m/z 95，187，262 以克伦特罗(m/z86)与内标峰(m/z 95)的峰面积比校准定量。

2.1.3 样品制备

精密称取(2 ± 0.01)g 己绞碎的猪肉于具塞离心管中，加入4 mL 0.1 mol/L 盐酸溶液，旋涡振荡5 min，超声10 min，12000 r/min 离心5 min后，倾出上清液，沉淀再分别用0.1 mol/L 盐酸4 mL，2 mL 两次提取，提取方法同上，合并上清液。

将上清液全部上样至C18 柱，用5 mL 水清洗小柱后，使用0.8 mL 甲醇：20 mmol/L 磷酸溶液=1：1(v/v)的酸化甲醇解析，加磷酸缓冲液调至pH=7，定容至2 mL。将该溶液以0.1 mL/min的流速推过聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）毛细管整体柱萃取后，用0.2 mL 的甲醇解析，加50 μL 的内标使用液后以氮吹仪浓缩至干。加入100 μL 甲苯和100 μLBSTFA，涡旋混匀30 s，置于微波炉中小火衍生5 min。衍生反应完成后取出冷却至室温后再加入300 μL 甲苯，充分混匀，待气质联用仪进样。

2.1.4 结论

该法在样品提取后，用C18 小柱和聚（甲基丙烯酸－乙二醇二甲基丙烯酸酯）整体柱进一步富集净化，经N，O—双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生，选择离子监测方式进行气相色谱质谱测定。

该方法具有检测限低、重现性好、回收率高、样品用量少等特点，适合于猪肉样品中盐酸克伦特罗的定性、定量测定。但GC—MS的缺点是检测过程烦琐、检测时间长、需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。

2.2 高效液相色谱法(HPLC)【5】

HPLC适合测定热不稳定和强极性的β—激动剂及其代谢产物，而且HPLC可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(MS)等系统联用，容易实现分析过程的自动化。

HPLC 法【6】中常用的检测器有电化学检测器、紫外检测器。

2.2.1 材料与仪器

甲醇：色谱纯；

试验用水：均为超纯水； 其余试剂：均为分析纯；

盐酸克伦特罗标准品：中国药品生物制品检定所；

盐酸克伦特罗标准溶液： 取盐酸克伦特罗标准品24.98 mg置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配成含盐酸克伦特罗1 mg/mL的标准贮备液，贮于冰箱中，不同浓度的系列标准溶液由标准储备液稀释而得；

Dionex AT330(美国)高效液相色谱仪：由P680四元泵、UVD170U紫外检测器和AT330恒温箱组成；

超声波提取器(SB25200BTD)； 离心机(6 000 r/min)；

DSY22型电热恒温水浴锅。

2.2.2 色谱条件

色谱柱采用Diamonsil ODS2C18 柱(5 μm，150 mm ×4.6 mm I.D)；检测波长为244 nm； 流动相甲醇∶水=26 ∶74；流速1.0 mL /min； 柱温30 ℃；进样量20μL。

2.2.3 样品制备

取10 g绞碎肉试样，加0.1 mol/L高氯酸20 mL 匀浆，超声提取20 min，80℃ 加热30 min，冷却后离心(4 000 r/min)15 min。沉淀加0.1 mol/L高氯酸5 mL洗涤、离心，将上清液合并，用1 mol/L氢氧化钠调pH至11，加入25 mL乙醚，振荡提取20 min，回收有机相，再用20 mL乙醚重复萃取2次，合并有机相，蒸发至干。用0.1 mol/L HC1溶解，纯水定容至10 mL。

2.2.4 结论

目前，中国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证性方法，最低检测限范围为1～15ng/g，其优点是专属性好、选择性强、检测精确度较高，而且假阳性率低，与GC—MS 法相比样品不必衍生【7】；缺点是样品处理时间长，检测

过程烦琐、难于操作，需贵重仪器，在实际应用中受到一定的限制【8】。2.3 酶联免疫吸附法(ELISA）

目前，检测CLB较高效的免疫分析技术是ELISA技术。早在1992年，Oriundi就通过ELISA法对尿液和血清中的β—兴奋剂残留进行直接分析，该方法既适于实验室大量样品的检测，也适于屠宰场地少量样品的迅速检测【9】。目前，英国的Randox Laborato—ries Ltd和德国的r—biopharm公司均开发出了检测肉品、饲料中CLB残留的ELISA试剂盒。中国在应用EIA检测CLB方面的研究起步晚，但近几年取得了明显的进展，目前已有几种试剂盒研制开发成功【10】。

2.3.1 测定原理

“瘦肉精”（克仑特罗）竞争酶标免疫检测的基础是抗原抗体反应。酶联板的微孔包被有针对兔抗克仑特罗特异性抗体的羊抗体【11】（第2抗体）。加入兔抗克仑特罗特异性抗体（第1抗体）与第2抗体结合而被固定，洗涤后加入标准液或样品溶液与酶结合物（酶标记抗原），标准液或样品中的游离抗原与酶标抗原竞争兔抗克仑特罗特异性抗体上有限的结合位点【12】。通过洗涤除去没有与特异性抗体结合的酶标抗原，加入酶基质（过氧化脲）和发色剂（四甲基联苯胺）并孵育，结合到板上的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的底物。加酸终止反应后，颜色由蓝色转变为黄色。【13】在单波长450纳米处测吸光度，吸收光强度与样品中的克仑特罗浓度成反比。

2.3.2 样品制备

取粉碎的肉样5克，与25毫升50 mmol/L HCl混合，振荡1.5小时。称6克均质物，加入离心管中。10~15℃条件下4 000转/分钟或更高的转速离心15分钟。转移上清液到另1个离心管中，加300微升1摩尔/升氢氧化钠混合15分钟。加入4毫升500毫摩尔/升磷酸二氢钾缓冲液（pH值3.0），简单混合，并在4℃保存至少1.5小时或过夜。10~15℃条件下4 000转/分钟或更高的转速离心15分钟。分离全部上清液，使其升至室温，然后用C18柱纯化【14】。

C18柱纯化样品必须在室温条件下，并严格控制过柱时流速。用3毫升甲醇洗涤柱子，控制流速为1滴/秒。用2毫升洗涤液（50毫摩尔/升磷酸二氢钾缓冲液pH值3.0）洗涤柱子。将肉样的全部上清液进柱，控制流速为每4秒1滴。用2毫升洗涤液，洗涤柱子，流速为1滴/秒。用正压除去残留的流体并用空气或氮气吹2分钟，干燥柱子。用1毫升甲醇洗脱样品，控制流速为每4秒1滴。在50~60℃并在弱空气或氮气流下完全蒸发甲醇溶剂【15】。用1毫升蒸馏水溶解干燥的残留物，取20微升进行分析。取10克饲料样品，用10毫摩尔/升盐酸溶解，连续震荡10分钟，用滤纸过滤，在滤液中加入120微升1毫摩尔/升氢氧化钠进行中和，检查pH值，用氢氧化钠控制pH值在6.5~7.5之间，取上清液20微升进行分析，稀释倍数为25。

2.3.3 测定步骤

所有试剂及样品在开始检测前必须回升至室温，测定操作在20~24℃下进行。用盒中缓冲液以体积1∶10的比例稀释实际用量的克仑特罗抗体浓缩液，稀释前混匀抗体，不要猛烈振荡。取出试验需要数量的微孔板条，足够标准品和样品，标准品和样品做2个平行试验，记录标准品和样品的位置。剩余的微孔板条

放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，2~8℃冷藏。

每个微孔底部加100微升稀释后的抗体溶液，室温孵育微孔板15分钟，避免光线照射。孵育的同时进行酶标记物的稀释，洗板，甩出孔中液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打，直到纸上无明显水迹（拍打3次），以保证完全除去孔中的液体。

用250微升蒸馏水充入孔中，再次甩掉微孔中液体，并在吸水纸上拍打，重复操作2次。加洗涤水的移液器管尖必须置于微孔上方约0.5厘米处打出洗涤水，避免将板孔中的游离抗体带入洗涤水中。洗板后立即进行下步操作，不要让板孔干燥【16】。加入20微升标准品和处理好的样品到各自的微孔底部，标准品和样品做2个平行实验。加入100微升稀释的酶标记物至微孔底部，轻轻震荡微孔，并在桌面上作圆周运动以混匀。移液器管尖不要接触到孔中的混合物，避免交叉污染。室温孵育微孔板30分钟，避免放置，尽可能每隔10分钟轻轻振荡1次，准备好酶基质，并注意避光放置。

在洗板过程中加洗涤水的移液器置于微孔板上方0.5厘米处打出洗涤水，避免将板孔中的游离酶标记物带入洗涤水中。不要让板孔干燥，迅速加入100微升酶基质到每个孔中，操作步骤要迅速，避免反应时间相差过长。移液器管尖不要接触微孔中的混合物，避免交叉污染。室温暗处孵育微孔板15分钟，暗处避光放置，同时，准备好反应停止液。每孔加入100微升反应停止液，混匀，60分钟内用酶标仪测量450纳米处波长吸光度值【17】。

2.3.4 结论

ELISA的优点是灵敏度高、操作简便、检测迅速、价格便宜；缺点是仍不能实现现场检测，而且假阳性率高。

故而，ELISA方法只是一种大范围的筛选方法，它不能起到定性和定量的作用，检测结果出现可疑，可以用其他检测方法进行定性和定量分析。

2.4 毛细管电泳法（CE）【18】

毛细管电泳法（CE）非常适用于难以用传统的液相色谱法分离的离子化样品的分离与分析。优点是有很大的灵活性许多分离参数如缓冲液的组成和pH 值毛细管的类型以及所使用的电场的波形都可以调节，操作简便，所需样品量极少，一般只需几纳升。缺点是检测时间仍很长，不能满足在线检测，仪器复杂、缺乏配套的检测器 CLB检测技术的未来趋势和发展方向

当前，造成盐酸克伦特罗屡禁不止的原因之一就是国内外检测CLB 的方法、手段还不完善，还没有建立准确、迅速、方便、精确的检测方法。鉴于目前国内外检测CLB 各种方法的进展情况以及CLB 滥用及残留的严峻性，建立一种克服上述各种检测方法缺点的简便、快速、精确、可实现在线检测的CLB 技术势在必行。

生物传感器技术(Biosensor，BS)【19】和滴金免疫技术(DIGFA)【20】是两种快速、高效的残留物分析技术，如能研究、开发运用到检测生物样品中CLB的残留可能会产生理想的效果。

纳米材料是非常敏感的化学和生物传感器，固定有能选择性结合靶分子的生物探针的纳米传感器称为纳米生物传感器。它们能和生物芯片、免疫技术、标记

技术等技术手段结合，从而使检测更加高效、简便。与液质联用分析克伦特罗的方法相比，基于碳纳米管的无标记电化学免疫传感器免除了样品分析前的固相萃取及纯化步骤，使得操作方法更简便。与ELISA 法相比，该传感器同样具有样品处理简单及高能量的优点。此外，该传感器的方法很少受到基质效应的影响，或者至少比在ELISA 方法中的影响小【21】。

纳米金免疫标记技术，是蛋白质等高分子被吸附到纳米金颗粒表面的包被过程，由于金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，用于定性或半定量的快速免疫检测方法中【22】。

可以预见的是，在未来一定会有更加灵敏、快捷、方便的检测方法问世，从而使猪肉中瘦肉精的检测问题得到彻底解决。

参考文献

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[【2】 丁芳林，张朝辉，谭胜国，廖三赛，高效液相色谱法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的研究，食品与机械，2007年10月，第23卷第5期

【3】 张清安 范学辉，动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留危害及其检测方法研究进展，食品与发酵工业，2004 Vol.30 No.9(Total 201)【4】 柳显文，韩学颖，瘦肉精”检测原理及操作步骤，养殖技术顾问，2012年1月

【5】 蒋剑，盛毅，方智，罗薇，瘦肉精检测方法研究进展，草食家畜（季刊），2012 年3 月第1 期（总第154 期）【6】蒋珊;毛慧玲;;GC-MS法测定猪肝、猪尿中盐酸克伦特罗残留量 研究[J];安徽农业科学;2007年33期

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【8】裴艳涛,孙继国,林密,苏小庚;动物性产品中“瘦肉精”残留的检测方法研究进展[J];动物科学与动物医学;2004年01期

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【15】宋广林;“瘦肉精”害人[J];中国食物与营养;2001年03期 【16】张志刚;邹忠爱;;无公害猪肉安全控制模式探讨[A];福建省科协第六届学术年会卫星会议“增强科技创新能力，促进优质畜牧业发展” 研讨会论文集[C];2006年

【17】汪伟;食品安全之忧成就沈阳“天价猪肉”[N];粮油市场报;2011年

【18】杨正慧;气相色谱—质谱法检测β-受体激动剂残留量的方法研究[D];吉林大学;2012年

【19】陈瑞清;;液相色谱质谱联用技术及其在食品中兽药残留检测的应用[A];首届中国兽药大会动物药品学暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008学术年会论文集[C];2008年

【20】谢静;;肉类食品中激素残留检测技术的研究[J];肉类研究;2009年11期

【21】李英;;我国动物源性食品安全保障战略[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集（下册）[C];2009年

【22】徐江涛;王志亮;鲍恩东;;新城疫检测技术研究进展[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年

第二篇：瘦肉精检测

通许县动物卫生监督所关于

外销生猪“瘦肉精”检测的报告

开封市动物卫生监督所：

为了保证畜产品质量安全，保障人民身体健康，全面推进和谐社会的创建，2010年6月21日，通许县畜牧局下发文件开展世博会期间整顿生猪经营处等检疫秩序活动，特别是重点开展 “瘦肉精”的检测工作，坚决杜绝在饲料中使用莱克多巴胺及克伦特罗等违禁药物，整顿和规范饲料、兽药市场，严厉打击假冒伪劣产品，实现全县生猪生产的安全无污染，确保外销到市场的是“放心猪”。

通许县动物卫生监督所认真学习贯彻了县局文件精神，开展以“瘦肉精”和重大动物疫病为主的检测检验；加大对使用“瘦肉精”的打击力度，建立生猪疫病防治体系，确保生猪及其加工产品的质量安全。对检测出“瘦肉精”的生猪产地在3个月内禁止外销，经检测合格后重新申请进入市场。逐步推行生猪产品市场准入制度、“一猪一标一码”标识管理制度。对生猪“瘦肉精”进行重点抽检，检验中凡发现有“瘦肉精”的生猪均进行销毁，并向产地通报和封停该地生猪进入市场。

据汇总统计，2010年6月至8月份我县共外销生猪8603头。分批次发往浙江省慈溪市、江苏省无锡市、安徽省和县、浙江省宁波市、江苏省常州市、广东省湛江市、安徽省合肥市、安徽省淮南市、安徽蒙城县等九个城市和地区。“瘦肉精”检测全部呈现阴性。其中6月份外销生猪2053头，抽检生猪尿样110多个，检测结果全部呈现阴性，合格率达到100%。7月份外销生猪3190头，抽检生猪尿样160多个，检测结果全部呈现阴性，合格率达到100%。8月份外销生猪3360头，抽检生猪尿样170多个，检测结果全部呈现阴性，合格率达到100%。

二○一○年九月八日

主题词：瘦肉精 抽检 报告

通许县动物卫生监督所二○一○年九月八日印

第三篇：(瘦肉精)检测制度

第十节

屠宰企业违禁药物（瘦肉精）检测制度

（适用实行瘦肉精企业自检的地区）

一、为规范生猪定点屠宰厂（场）待宰生猪尿样违禁药物“瘦肉精”的日常检验工作，制定本制度。

二、定点屠宰厂（场）必须有满足日常检测需要的工作场所及实验室，并应保持光线充足，通风良好，室内环境整洁，基本设施齐全。

实验室必须配备能满足检测工作需要的检测人员和审核人员。

三、检测人员必须经过有关单位的培训，能独立操作，包括样本的采取和检测。

四、定点屠宰厂（场）必须建立瘦肉精检测台帐，并建立人员岗位责任制，所有检测设施、器材、记录等都要专人妥善保管。

五、严格执行省政府的有关要求，生猪宰前必须进行瘦肉精检测，并实行每批必检制度（一个检疫证号为一批）。

六、检测结果应在屠宰厂（场）内固定场所以醒目方式对外公示。

七、若检测出现阳性结果，屠宰厂（场）必须将检测结果立即报送当地动物防疫监督机构处理。

八、检测方法按照《动物组织中盐酸克伦特罗的测定 气相色谱/质谱法》NY/T 468-2006的规定执行。

九、屠宰厂（场）应自觉接受屠宰管理机构和动物防疫监督机构对检测工作开展监督检查、指导。

第四篇：瘦肉精检测方法

目前，检测瘦肉精的方法主要有四种，即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）、毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）。而我国结合自己的实际情况，2001年农业部首先组织制定了饲料中盐酸克伦特罗的测定标淮。该标准选择确定了两种：即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）。其中将HPLC法作为检测瘦肉精的半确证性方法，其最低检测限为 0．05μg/kg，优点是检测精确度高，而且假阳性率低；缺点是检测过程烦琐、检测时间长，需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。而GC一MS法优点是能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析。GC－MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低，已将GC－MS法定为检测瘦肉精的确证性方法。GC－MS法的缺点同HPLC相似。

(1)试剂和材料 以下所有试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂；水为符合GB／T6682规定的二级水。

①盐酸克伦特罗对照品：含盐酸克伦特罗不得少于98．5％

②盐酸

③无水甲醇

④氢氧化钠

⑤磷酸二氢钾

⑥磷酸

⑦盐酸溶液 取盐酸4．2ml，加水至1000ml，即得。

⑧o．5mol／L磷酸二氢钾溶液 取磷酸二氢钾68g，加水800ml溶解并用磷酸调pH值至3．O，用水稀释至1000ml，即得。

⑨0．05mol几磷酸二氢钾溶液 取磷酸二氢钾6．88，加水800ml溶解并用磷酸调pH值至3．0，用水稀释至1000mi，即得。

a．氢氧化钠溶液 取氢氧化钠48，加水使溶解成100mi，即得。

b．盐酸克伦特罗对照品储备液(1mg／mi)准确称取28．3mg盐酸克伦特罗对照晶至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至25ml，一20~C以下保存，有效期1年。

⑩盐酸克伦特罗对照品工作液(10ttg／mi)取lmg／mi储备液o．5ml到50mi量瓶中，加水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。

⑾盐酸克伦特罗对照溶液(100ng／m1)取1(ug／m1工作液o．5ml到：50mi量瓶中水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。

⑿盐酸克伦特罗检测试剂盒(2～8~C冰箱中保存)

⒀固相萃取柱C，s：100mglml含碳量≥17％

(2)仪器和设备

①酶联免疫反应读数仪

②分析天平精度0．00001g

③天平精度0．01g

④冷冻离心机

⑤50mi具塞离心管

⑥匀浆机

⑦微型振荡器

⑧回旋振荡器

⑨微量移液器 单道20uL，50ul，100uL；多道50～250uL，⑩干热浓缩器

①空气压缩机

(3)测定步骤

①试料的制备(尿)

取供试尿lml，于3000r／min离心l0min，上清液作为供试试料，直接供酶联免疫测定法测定。

取空白尿lml，于3000r／min离心l0min，上清液作为空白试料，直接供酶联免疫测定法测定。

取空白尿2ml，于3000r／min离心l0min，上清液1.0ml添加l00ug／L的克伦特罗对照溶液20／H。作为2ug/l空白添加试料，直接供酶联免疫测定法测定。

②试料的制备(肝)

取约l00g新鲜或冷冻后融化的空白或供试猪肝,用匀浆机以10000r／rain匀浆1-2min，使均匀呈糊状，一20~C以下冰箱中贮存备用。

取均浆后的供试肝样，作为供试试料。

取均浆后的空白肝样，作为空白试料。

取均浆后的空白肝样(1土0．05)e添加l00ng／m1的克伦特罗对照溶液20tzL作为2ng／g空白添加试料。

a：提取(肝)取(1士o．05)z试料，置50ml离心管中；加盐酸溶液5.0mi，旋涡混匀，中速振荡1．5h；在10—15~C下以4000r／mill以上速度离心15min；上清液移人另一50ml离心管中，加入氢氧化钠溶液300gL，混匀，振荡15min；加0.5mol／l磷酸二氢钾溶液4。0ml，混匀，2—8~C放置过夜；取上述溶液于10～15~C以4000r／111113以上的速度离心15min，上清液备用。

b．净化(肝)C，固相萃取柱依次用无水甲醇3mi、0.05mol／L磷酸二氢钾溶液2mi预洗，不使柱床干涸；将备用上清液全部过柱；用0.05mol／L磷酸二氢钾溶液2ml淋洗，挤干，弃去所有淋洗液；用无水甲醇2mi洗脱，流速控制在0.5ml／mm以下，挤干，收集洗脱液；于50～60~C下用氮气或空气缓缓吹干洗脱液；残余物用水1.0ml溶解，以4000r／mill以上的速度离心15rain，清液作为试样溶液供酶联免疫测定法测定。

③测定

a．室温应控制在19～30~C。

b．取在19—30~C放置1—2h的试剂盒，按每个标准溶液和试样溶液至少两孔计算所需酶联板条的数量，插入框架。每个微孔加入用缓冲溶液100倍稀释的抗体100~tL，封口膜封板，室温孵育30min。

c倒出孔内液体，将酶联板倒置在吸水纸上拍打，使孔内没有残余液体。用多道移液器加水250pL到酶联板的微?L内，稍后倒出孔内液体，再将酶联板倒置在吸水纸上拍打，如此重复操作洗板3次。

d．分别吸取标准溶液、空白试料、空白添加试料和供试试料各20uL，分别放入不同微孔底中央，并在每孔内加入用缓冲溶液100倍稀释的酶结合物100~I。，在微型振荡器上混匀，用封口膜封好，室温孵育30min。

e．倒出孔内液体，将酶联板倒置在吸水纸上拍打，使孔内没有残余液体，重复洗板3次。

f．用多道移液器加入用底物缓冲溶液10倍稀释的底物100uL，室温避光孵育15min。

g．用多道移液器每孔加终止液100uL。

h．在1h内将酶联板放于酶标仪内，于450nm波长处测定吸光度值。

(4)计算 用数据分析软件对结果进行分析，绘出标准曲线，并得出试料中克伦特罗的含量。

(5)灵敏度和回收率

本方法的平均检测下限为0.1mg／Kg。

本方法在1ug／kg添加浓度水平上猪尿回收率范围为60％一120％，猪肝回收率范围为40％～120％。

第五篇：瘦肉精相关检测标准汇总

瘦肉精相关检测标准汇总

央视曝光双汇济源分公司收购含“瘦肉精”猪肉，瘦肉精再次引起人们的关注，因此汇总整理出瘦肉精相关检测标准，供大家参考。

GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定

本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。本标准也适用于生物材料(人或动物 血液、尿液)中克伦特罗的测定。本方法检出限：第一法气相色谱—质谱法为0.5μg/kg;第二法高效液相色谱法为0.5μg/kg；第三法酶联免疫法为0.5μg/kg。线性范围：第一法气相色谱—质谱法为0.025ng～2.5ng；第二法高效液相色谱法为0.5ng～4ng；第三法酶联免疫法为 0．004ng～0.054ng。

GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法

本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱（HPLC）方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中莱克多巴胺含量的测定。

GB/T21036-2007饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸多巴胺含量的测定。

GB/T22147-2008饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的测定液相色谱质谱联用法

本标准规定了同步测定饲料中β-激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法。GB/T21313-2007动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法

本标准规定了β-受体激动剂类兽药残留检测的制样方法和高效液相色谱/质谱确证方法。本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾等动物源性食品以猪屎中克伦特罗、沙丁胺醇、妥布特罗、特布它林、非诺特罗、福莫特罗、莱克多巴胺、异丙喘宁等8种β-受体激动剂类残留量的高效液相色谱-质谱/质谱测定。

GB/T22286-2008动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法

本标准规定了动物源性食品中沙丁胺醇(salbutamol)、特布他林（terbutaline）、塞曼特罗（cimat-erol）、塞布特罗（cimbuterol）、莱克多巴胺（ractompamine）、克仑特罗（clenbuterol）、溴布特罗（brombu-terol）、苯氧丙酚胺（isoxsuprine）、马布特罗（mabuterol）、马贲特罗（mapenterol）、溴代克仑特罗（brom-chlorbuterol）残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。

本标准适用于猪肝和猪肉中沙丁胺醇，特布他林、塞曼特罗、塞布特罗、莱克多巴胺、克仑特罗、溴布特罗、苯氧丙酚胺、马布特罗、马贲特罗、溴代克仑特罗残留量的检验。

NY438-2001饲料中盐酸克仑特罗的测定

本标准规定了以高效液相色谱(HPLC)法和气相色谱-质谱(GC-MS)法测定饲料中盐酸克仑特罗的方法，规定GC-MS法为仲裁法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸克仑特罗的测定与仲裁。HPLC法的最低检测限为0.5ng(取样5g时，最低检测浓度为0.05mg/kg)。GC-MS法最低检测限为0.025ng(取样5g时，最低检测浓度为0.01mg/kg)。

NY/T933-2005尿液中盐酸克仑特罗的测定胶体金免疫层析法 本标准规定了用胶体金免疫层析法检测尿液中盐酸克仑特罗。本标准适用于猪、牛尿液中盐酸克仑特罗的快速检测。检测限为3ng/mL。

NY/T468-2006动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱-质谱法

该标准替代NY/T 468-2001 动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱-质谱法本标准规定了以气相色谱/质谱（GC/MS）法测定动物组织中盐酸克伦特罗残留的方法。本标准适用于动物肝组织中盐酸克伦特罗的测定。方法的检出限为2.0ug/kg。

NY/T1030-2006饲料中沙丁胺醇的测定气相色谱-质谱法

本标准规定了用气相色谱/质谱法（GC/MS）测定饲料中沙丁胺醇的含量。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料中沙丁胺醇的测定，最低检测浓度为0.02mg/kg。

NY/T1460-2007饲料中盐酸克仑特罗的测定酶联免疫吸附法

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中盐酸克仑特罗的测定。SN/T1116-2002进出口饲料中克伦特罗、沙丁胺醇残留量的检验方法液相色谱法

本标准规定了进出口饲料中克伦特罗、沙丁胺醇残留量检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。本标准适用于进出口全价饲料和预混饲料中克伦特罗、沙丁胺醇残留量的检验。

SN/T1924-2007进出口动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法

本标准规定了动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的制样和测定方法。本标准适用于动物源性食品肌肉和肝脏中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测本标准2011年7月1日起被SN/T1924-2011代替。

农业部958号公告-3-2007动物源食品中莱克多巴胺残留量的测定高效液相色谱法-质谱法 本标准适用于猪肌肉、猪肝和猪肾中莱克多巴胺残留量的测定。

农业部958号公告-4-2007动物组织及动物尿液中莱克多巴胺残留检测方法气相色谱-质谱法 本标准适用于猪肌肉、猪肝、猪尿和牛尿中莱克多巴胺残留量的测定。

农业部958号公告-8-2007牛可食性组织中克仑特罗残留检测方法气相色谱-质谱法 本标准适用于牛的肌肉、肝脏、肾脏中克仑特罗残留量的定量检测。

农业部1025号公告-6-2008动物性食品中莱克多巴胺残留检测酶联免疫吸附法

本标准规定了检测动物性食品中莱克多巴胺残留量的酶联免疫吸附测定法。本标准适用于猪肉、猪肝和猪尿液中莱克多巴胺残留量的检测。

农业部1025号公告-11-2008猪尿中β-受体激动剂多残留检测液相色谱-串联质谱法

本标准适用于猪尿中克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和西马特罗单个或混合物残留量的检测。农业部1025号公告-16-2008动物尿液中盐酸克伦特罗残留检测气相色谱-质谱法

本标准规定了动物尿液中盐酸克伦特罗残留量检测的制样和气相色谱-质谱的测定方法。本标准适用于猪尿中盐酸克伦特罗的残留量检测。农业部1025号公告-18-2008动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法

本标准适用于猪肝、猪肉、牛奶和鸡蛋中特步他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、克仑特罗、妥布特罗和喷布特罗单个或混合物残留量的检测。

农业部1031号公告-3-2008猪肝和猪尿中β-受体激动剂残留检测气相色谱-质谱法

本标准规定了猪肝和猪尿中β-受体激动剂类药物（马布特罗、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、班布特罗和莱克多巴胺）含量检测的制样和气相色谱质谱法的测定方法。本标准适用于猪肝和猪尿中β-受体激动剂类药物（马布特罗、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、班布特罗和莱克多巴胺）含量的检测。

农业部1063号公告-3-2008动物尿液中11种β-受体激动剂的检测液相色谱-串联质谱法

本标准规定了动物尿液中克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、齐帕特罗、氯丙那林、特步他林、西马特罗、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、班布特罗等11种β-受体激动剂的液相色谱--串联质谱测定方法。本标准适用于动物尿液中克仑特罗等11种β-受体激动剂的测定。方法检测限为0.1ng/mL，定量限为0.2ng/mL。

农业部1063号公告-6-2008饲料中13种β-受体激动剂的检测液相色谱-串联质谱法

本标准规定了饲料中克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、齐帕特罗、氯丙那林、特布他林、西马特罗、西布特罗、马布特罗、溴布特罗、克仑普罗、班布特罗、妥布特罗等13种β-受体激动剂的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于饲料中克仑特罗等13种β-受体激动剂残留量的测定。方法检测限为0.01mg/kg，定限量为0.05mg/kg。

农业部1063号公告-7-2008饲料中8种β-受体激动剂的检测气相色谱-质谱法

本标准规定了测定饲料中8种β-受体激动剂的气象色谱-质谱法（GC-MS）。本标准适用于配合饲料中氯丙那林、马布特罗、特步他林、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、齐帕特罗、班布特罗、莱克多巴胺的测定。本方法的定量限和检出限：莱克多巴胺为0.5mg/kg和0.1mg/kg,其他7种类药物分别为0.05mg/kg0.01mg/kg。