气相色谱检测瘦肉精的方法及危害

第一篇：气相色谱检测瘦肉精的方法及危害

气相色谱检测瘦肉精的方法及危害

瘦肉精是一类动物用药，有数种药物被称为瘦肉精，例如莱克多巴胺及克伦特罗等。将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。

瘦肉精的危害：瘦肉精，指的是一类动物用药，包括盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和硫酸特布他林等，属于肾上腺类神经兴奋剂。把 “瘦肉精”添加到饲料中，的确可以增加动物的瘦肉量。但国内外的相关科学研究表明，食用含有 “瘦肉精”的肉会对人体产生危害，常见有恶心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状，特别是对心脏病、高血压患者危害更大。长期食用则有可能导致染色体畸变，会诱发恶性肿瘤，至于究竟摄入多大量，如何导致恶性肿瘤，有关病例研究国内外尚无定论。但是，近几年，各地 “瘦肉精”致人中毒甚至死亡的案例时有发生。

检测方法： 感官识别法--饲喂盐酸克伦特罗比较严重的猪宰后肉色特别鲜红、后臀肌肉饱满突出，脂肪非常薄，而一般健康肉淡红色，肉质弹性好。

化学分析法--正常新鲜肉用试纸测试其酸碱度多呈中性或弱碱性，而含有盐酸克伦特罗的猪肉则偏酸性，pH值明显小于正常范围，所以酸碱度法也能测。(杂质干扰不准确)

酶联免疫法--适合对活体动物做大批量样品的快速分析，但不能实现现场检测，不做介绍。

色谱检测技术--色谱技术包括高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、气相色谱-傅里叶红外联用法(GC-FTIR)及薄层色谱法(TLC)等。目前，应用最多的是高效液相色谱法和气相色谱-质谱联用法。

为了更准确的检测出瘦肉精，在这里我们主要介绍气相色谱-质谱联用法。

对样品(动物尿液)在pH=5.2的缓冲溶液中进行提取。萃取的样液用C18和SCX小柱，固相萃取净化，分离的药物残留经过双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后用带有质量选择检测器的灵华气相色谱仪测定。

优点：检测精确度高，准确度高，效率较高，重现性好，较高的灵敏度，假阳性率低

广州市深华生物技术有限公司

本文由广州深华实验室仪器设备整合发布

广州市深华生物技术有限公司

第二篇：气相色谱培训教材

气相色谱仪培训教材

第一章

气相色谱简介

气相色谱仪的组成2

气相色谱仪的原理

基本术语

常用概念

气相色谱应用的领域

气相色谱仪的组成1.气体

载气：用于传送样品通过整个系统的气体。

检测器气体：某些检测器所需要的支持气体。

2.进样系统

将样品蒸汽引入载气

3.色谱柱

实现样品组分的分离

4.检测器

对流出柱的样品组分进行识别和响应

5.数据系统

将检测器的信号转换为色谱图，并进行定性、6.气相色谱的原理

在色谱法中存在.两相，一相是固定不动的，我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相，我们把它叫做流动相。

7.气相色谱的原理

色谱法的分离原理：.就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。使用外力使含有样品的流动相(气体、液体)通过与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。按顺序离开色谱柱进入检测器，产生离子流信号经放大后，在工作站中描绘出各组分的色谱峰。

8.基本术语

保留时间（Retention

time）：.组分从进样到出现最大值所需要的时间；

峰面积（Peak

Area）：从峰的最大值到峰底的距离；

峰高（Peak

Heigh）：峰与峰底之间包围的面积；

9.基本术语

分离度（resolution）：又称分辨率，两个相邻峰的分离程度，两个组分保留时间之差与其平均半峰宽值比值。

R＝2(tR2－tR1)/(W1＋W2)

固定相、柱温及载气的选择是气相色谱分离条件选择的三个主要方面，用于提高相邻两组分的分离度，在作定量分析时，为了能获得较好的精密度与准确度，应使R≥1.5。

10.常用概念

噪声：由于各种原.因引起的基线波动，称为基线噪声。无论在无组分流出还是有组分流出时，这种波动均存在。它是一种背景信号。噪声分短期和长期噪声二类。

漂移：基线随时间单方向的缓慢变化，称基线漂移。

响应值：组分通过检测器产生的信号。该值取决于组分的性质和浓度。气相色谱分析是用各组分的响应值（峰面积或峰高）来定量的。为此，必须掌握各组分在不同检测器上的响应特征。

相对响应因子：又称相对响应值（s）就是表明组分响应特征的指标。它是指某一组分与相同量参比物质，两者响应值之比。

灵敏度：指通过检测器物质的量变化时，该物质响应值的变化率。

.检测限：将产生两倍噪声信号时，单位体积的载气或单位时间内进入检测器的组分量

称为检测限。

线性：不同类型检测器的响应值与进入检测器组分浓度、质量或质量流量之间的关系。

线性范围：进入检测器的组分量与其响应值保持线性关系，或是灵敏度保持恒定所覆

盖的区间。

11.气相色谱应用的领域

GC是一种极为广泛.和重要的分析方法，范围从石油化工、环境保护，到食品分析、医疗卫生等

第二章

气相色谱仪的主要组成部分

气路部分

进样口

色谱柱

检测器

1.气路

气体：载气（用于.传送样品通过整个系统的气体）和检测器气体（部分检测器所需要的支持气体）。

载气纯度要求99.999%以上

气体的选择

根据检测器类型而选择.（不同检测器使用载气不同效果不同，FPD

和ECD可以选择氮气、氦气及氩气做载气，但是氮气效果更好）

惰性（所使用的气体不能和样品发生反应）

纯净（气体的纯度可避免背景因素的影响）

干燥

捕集阱

脱水管：用来脱去气体中微量的水分。

烃类捕集阱：用于捕集气源中少量烃类。起源中的烃类会提高检测器本底输出，增大噪声。

脱氧管：用来脱去气体中微量的氧气。微量的氧气会破坏色谱柱，特别是毛细管柱，同时，氧气也会降低电子捕获检测器的性能。

捕集阱的安装

安装捕集阱尽量靠近仪器位置。

安装之前先将管路吹扫干净防止没必要的消耗。

安装顺序先脱水再脱烃后脱氧（脱烃和脱氧管可以捕集水份，成本比脱水管高，且难再生），定期更换

减压阀压力：推荐0.4MPa

1kPa=0.145psi=0.01bar

管路的选择

使用铜管和不锈钢管连接管路。

管路使用前应用溶剂冲洗并使用载气干燥。

定期对外加接头检漏。

塑料管不能用于管路连接（会渗透氧气及其他污染物，同时会对检测组分有干扰）

2.进样口

进样口类型

进样口：使样品以一种可重复的方式注入的装置

填充进样口

分流/不分流进样口

程序升温气化进样口

挥发进样口

冷柱头进样

2.1

分流/不分流进样口——分流模式

分流模式用于含量较高组分分析

载气进入进样口后经总流量阀控制分两部分，一部分通过隔垫表面吹扫流出，另一部分经进样口进入衬管，在衬管中与样品气体混合后小部分进入色谱柱，大部分经分流出口放空，分流是通过分流平板的凹槽流出的。分流比为分流流量与柱流量的比值。

优点

防止柱污染

适用范围广

灵活性大

分流比可调

分流歧视

在分流比一定条件下，不同样品组分实际的分流比是不同的，这样就会造成进入色谱柱的样品组成不同于原来的样品组成，从而影响定量分析的准确度。

造成分流歧视的原因有：

.不均匀汽化

.不同样品组分在载气中的扩散速度不同

.分流比的大小

.注意色谱柱的初始温度，防止样品发生部分冷凝

.还要保证色谱柱安装时柱入口端超过分流点。

分流进样口参数设置

.温度：接近或等于组分中最重组分的沸点，保证组分快速汽化

.载气流速：氮气20-40cm/s

.分流比：20:1-200:1

分流比小分流歧视效应小，溶剂峰变宽，分流比大溶剂峰窄分流歧视效应大

衬管的选择

分流进样口可采用多种衬管，用于分流进样的衬管大都不是直通的，常见的管内都填充玻璃毛。

填充玻璃毛主要为了:

.增大与样品接触的比表面积，保证样品完全汽化。

.减小分流歧视。

.防止固体颗粒和不挥发组分进入色谱柱。

2.2

分流/不分流进样口——不分流模式

不分流模式用于痕量组分分析

不分流进样和分流进样采用同一个进样口，将分流气路的电磁阀关闭，使样品全部进入色谱柱。不分流进样不仅可以提高分析灵敏度，而且可以消除分流歧视。然而，在实际工作中，不分流进样应用远没有分流进样普遍，只有在分流进样不能满足分析要求时（主要是灵敏度要求），才考虑使用不分流进样。

这就要引入溶剂效应的概念。

溶剂效应

样品汽化后的体积相对于柱内载气流量太大，汽化的样品中溶剂是大量的，不可能瞬间进入色谱柱，结果溶剂峰就会严重拖尾，使早流出组分的峰被掩盖在溶剂溶剂拖尾峰中，加大分析难度，这一现象被称为溶剂效应。

为了消除溶剂效应，可以采用瞬间不分流技术，在进样开始时关闭分流阀，使系统处于不分流状态，待大部分样品在衬管中汽化进入色谱柱后，在某指定时间开启分流阀，使系统处于分流状态，这样，将衬管中剩余的蒸汽吹扫出衬管。就可以很大程度消除进样体积大和柱流量小引起的溶剂拖尾。所以说不分流进样不是绝对的不分流，而是分流与不分流的结合。

瞬间不分流时间的确定

这里，确定一个从进样到开启分流阀的时间是很关键的。这一时间（称瞬间不分流时间或分流延迟时间、溶剂吹扫时间）应足够长，以保证绝大部分样品进入色谱柱，避免分流歧视影响；同时又要尽可能短，以最大限度地消除溶剂拖尾，使早流出峰的分析更为准确。在实际工作中，常常是根据待测组分沸点和浓度等来确定一个优化的折中点。大多采用0.75分钟（即从进样到开启分流阀的时间为0.75分钟），通常能保证95%以上的样品进入色谱柱。

衬管的选择

选择直通式衬管，以保证样品在衬管中尽可能少地稀释。

对于相对“脏”的样品，为保证分析的重现性和保护色谱柱不被污染则需填充玻璃毛。但由于不分流进样时样品在衬管中滞留的时间比分流进样长，热不稳定化合物的分解可能性大，玻璃毛必须经过硅烷化处理，且及时清洗更换。

溶剂的选择

由于进样口温度、色谱柱初温、溶剂吹扫时间和进样体积都与溶剂沸点有关，所以不分流进样对样品溶剂有严格要求，一般来讲，使用高沸点溶剂比低沸点溶剂有利，因为溶剂沸点高时，容易实现溶剂聚焦，且可使用较高的色谱柱初始温度，还可以降低针尖歧视及衬管的压力突变。另外，溶剂的极性一定要与样品的极性相匹配，且要保证溶剂在所有被测组分之前出峰，溶剂还要与固定相匹配，才能实现有效的溶剂聚焦。

溶剂聚焦

.主要使溶剂峰变窄

.峰型美观

.不会脱尾及变宽

.影响分离效果

.不分流进样是分析高沸点痕量组分的首选方法。

不分流进样口参数设置

.温度：可以比分流进样稍低，但要保证待测组分瞬间完全汽化。温度过低会造成高沸点组分损失，温度过高会造成样品分解。

.载气流速：流速应高一点，分流出口的流量一般为30

至60ml/min

.溶剂吹扫时间：0.75分钟。

分流/不分流进样口——维护

.定期更换进样垫。

.更换或清洗衬管。

.更换O型环。

.清洗分流平板。

.清洗更换进样针

3.色谱柱

填充柱以一些材料.填充来吸附或吸收，由铜、不锈钢或硅酸硼玻璃制成，内径大约2-4mm，长度为0.5-10m。

.毛细管柱内壁覆盖一种吸附或吸收材料，由熔融石英制成，内径细0.05-0.75mm，长度最长可达150m。

.气相色谱中，固定相是一种固体材料，称为气固色谱法，用于永久气体和低分子量的烃类分析。固定相是粘性液体时（一般是聚合物），称为气液色谱法，气液色谱法占整个气相色谱分析应用的90%左右。

.通过样品在固定相的分配或不同溶解度实现分离.组分基于不同的极性而分离（偶极力的作用），固定相可由其化学结构不同而引起的不同极性排序。

.通常遵循“相似相溶”或同极性相互作用。

.色谱柱越长分离效果越好。

.分离指标

.柱效：色谱柱形成尖锐峰的能力

.分离度：色谱柱将两个峰彼此分开的能力

.选择性：色谱柱确认两个峰化学或物理性质差别的能力

.影响分离指标的因素

.柱内径

.长度

.柱流量

.炉箱温度

.柱子固定相类型。

.确保所分析组分与柱子的固定相有相互作用的能力。

.理论塔板：分离理论假定色谱柱被分为一些板，简单理解为组分与固定相之间有相互作用的时刻

.如何提高柱效

.使用内径更小的色谱柱。

.减小固定相百分组成。

.减小固定相液膜厚度。

.减小进样量。

.选用更长的色谱柱。

.使用程序升温改善后流出组分峰形。

.长度：色谱柱的柱效与色谱柱的长度成正比，分辨率是色谱柱长度的平方根，保留时间与长度称正比。

.直径：色谱柱的直径越小，效率越高，可加快分析速度；色谱柱的直径越大，可容纳的样品量越大，但效率会下降。

.液膜厚度：液膜厚度影响分离的质量，膜厚越厚，色谱柱样品的容量越大，保留时间越长，峰越宽，效率越低，柱流失越大。

柱温操作

.恒温

在整个分析过程中，柱箱温度保持恒定，升温速率为零，导致后流出的峰展宽。

.程序升温

针对组分有较宽的沸点范围时使用，减少分析时间并使峰变窄，可设定多阶程序升温，导致增加了柱流失，引起基线漂移。

.保存

.色谱柱不使用时要密封保存。

.堵上柱子两端，以保护柱子中固定液不被氧气和其他污染物所污染。

.重新安装色谱柱时注意安装方向，.安装时从柱头截去少许以确保隔垫碎屑不会堵塞在柱子内。

以下情况需老化：

.新柱应老化除去残留的溶剂。

.色谱柱中残留有杂质。

.长期不用的色谱柱应老化去除存放过程中变性的固定相。

.步骤：

.将检测器端色谱柱取下，用接口堵住检测器入口；通入载气，设定程序升温循环老化（最高温度比色谱柱的温度上限低20℃），老化时间为2-3小时。

.设置老化温度及时间时考虑的因素：温度足够高以除去不挥发物质，温度足够低以延长柱寿命和减小柱流失，老化温度越低老化时间应越长。

安装色谱柱

.选择尺寸合适的密封垫材料；

.在色谱柱安装前对柱端口进行切割，保证柱端口清洁平整；

.根据仪器制造厂商的指标，确定色谱柱安装于进样口和检测器时插入适当的距离；

.毛细柱必须固定在柱架上，任何部分都不能接触柱箱壁；

.安装好后确保所有接头不泄露。

3.检测器

气相色谱检测器.是一种能检测气相色谱流出组分及其变化的器件。检测器通常由传感器和检测电路组成。传感器是利用被测物质的各种物理性质、化学性质以及物理化学性质与载气的差异，来感应出被测物质的存在及其量的变化。检测电路是将传感器产生的各种信号转变成电信号的装置。从传感器送出的信号是多种多样的，有电阻、电流、电压、离子流、频率、光波等。检测电路的作用是测定出这些参数的变化，并将其变成可测量的电信号。

常用检测器的工作原理

.热导检测器：把载气流分为两部分，分别流经一对参比热导丝，当样品通过其中一根热导丝时，样品稀释了载气而使热导丝升温，其电阻相对于参比热导丝发生了变化，它对所有与载气的热电导有差异的化合物均有响应。

.氢焰检测器：样品在氢气、空气火焰中燃烧产生离子，离子被收集后转换成电流。氢焰检测器对大多数有机物都有响应，而多数无机物和一些带杂原子的有机物响应很小或没有响应。

.电子捕获检测器：通过Ni63放射源发射的低能电子被阳极收集产生电流，化合物捕获这些电子导致电流降低而产生一个信号。电子捕获检测器对碱金属化合物响应非常灵敏。

.火焰光度检测器：硫、磷化合物在氢气、氧气火焰中燃烧产生光发射。带有滤光片的光电倍增器只选择需要的波长来检测这种发射。火焰光度检测器对农药检测尤其有用。

.氮磷检测器：当燃烧的样品通过氮磷检测器中铷盐珠时，产生离子。氮磷检测器对农药中含N、P的检测非常灵敏。

.质量选择检测器：样品被电子流轰击后产生离子，这些离子按它们的质荷比（M/Z）被分离后，测量器质量数和丰度值。这种检测器可以通过选择适当的质量而使其选择性强。

.响应指标：

.灵敏度：单位含量样品的响应值，组分响应值与含量构成的直线的斜率，直线的最小值定义为最低检出限，响应高灵敏度大。

.选择性：衡量检测器对某些类型化合物是否有响应。检测器区分不同类别组分的能力。FID会识别任何烃的存在，ECD只可检测电负性较大的物质类型，如氟化物、氯化物、溴化物或碘化物等。NPD更具选择性，只可检测出有机氮或磷组分的存在，其他组分被忽略。

.动态范围：检测器提供的能正确定量的样品浓度范围，含量与电子捕获检测器。。

.电子捕获检测器是一种具有高灵敏度的离子化检测器。它的选择性高，仅对其有电负性的物质有信号，电负性越强，灵敏度越高。.当电负性组分进入检测器时，与电子碰撞并捕获电子导致电流改变并产生信号

电子捕获检测器操作注意事项：

.尾吹气不可采用氢气或氦气，一定使用氮气；

.微量的氧气会影响基线稳定性；

.将检测器出口通向室外；

.一旦检测器污染，只能热清洗。

.热清洗步骤：

.关闭炉温，从检测器端取下色谱柱。

.用色谱柱螺母塞住检测器连接口。

.检测器温度设定为350℃-375℃，尾吹气设为60ml/min。

.保持热清洗几小时后将系统冷却至正常操作温度。

火焰光度检测器

.原理

.利用富氢火焰使含硫或磷杂原子的有机物分解，形成激发态分子，当它们回到基态时，发射出一定波长的光，此光强度与被测组分量成正比，所以它是以物质与光的相互关系为机理的检测方法，属于光度法。火焰光度检测器是一种高灵敏度和高选择性的检测器。

.对于硫采用394nm或384nm滤光片，对磷用526nm滤光片，然后经光电倍增管把光强度变成电讯号进行测量

.气体设置

.尾吹气：尾吹气是从色谱柱出口处直接进入检测器的一路气体，又叫辅助气，毛细管柱大都采用尾吹气。.这是因为毛细管柱的柱内载气流量太低（常规柱为1-3ml/min），不能满足检测器的最佳操作条件（一般检测器要求20ml/min的载气流量）。在色谱柱后增加一路载气直接进入检测器，就可保证检测器在高灵敏度状态下工作。尾吹气的另一个重要作用是消除检测器死体积的柱外效应。经分离的化合物流出色谱柱后，可能由于管道体积增大而出现体积膨胀，导致流速缓慢，从而引起谱带展宽，加入尾吹气后就消除了这一问题。

.操作的注意事项

.更换滤光片前，关闭光电倍增管电压；

.最高操作温度严格按照厂商指标设置；

.避免使用腐蚀性强的氯化有机溶剂。

氮磷检测器

.原理

.在一个氢气/空气等离子体环境下，氮磷检测器的铷珠被电加热至600-800℃，形成了催化活性的固体表面，有机氮或有机磷化合物分子被导入到催化活性表面周围，被催化称负离子及电子形成微电流，输出的电流正比与收集到的离子数，用静电计测量并将其转化为数字形式，传输到一个输出设备。

.参数设置

.推荐温度设为325-335℃，设置较高的检测器温度好处：灵敏度有所提高，检测器上端的绝缘环和密封圈的污染减轻，检测器系统包括废气出口保持干净，铷珠可以在较低的电压下激发。

.操作注意事项

.安装新铷珠初期手动调节铷珠电压，选择较小的铷珠电压；

.设置较小的氢气流量；

.溶剂峰通过铷珠时关闭氢气；

.如果检测器长期未使用，先烘烤然后再加电压；

.使用高纯氮气、氢气和空气以确保检测器的正常使用（纯度99.999%以上）；

.如果灵敏度异常，不要轻易增加铷珠电压，检测收集极、喷嘴、陶瓷环和金属密封圈是否需要清洗。

第三章

校正与定量

校正

定量

定量的方法

校正

.概念：是利用某个峰的峰高或峰面积来确定其对应组分的浓度或含量。

.必要性：当检测器灵敏度针对不同的组分而变化时需要进行校正。

.检测器对同一组分不同含量响应值发生变化时需要进行校正。

.校正的过程：

.首先准备混合标样，准确知道组分浓度；

.运行混合标样；建立校正表；

.运行待测样品并用校正表分析它；

.需要时进行重新校正。

*

对于需要时进行重新校正可以理解为使用质控样品衡量

.单级校正

.对每个峰只做一次校正。

.单级校正即单点校正，仅有一个浓度的标样。

.单级校正定量结果不准确，但其简单、快速。

.单级校正适用以下情况：

.做简单的粗定量；

.当未知样品的浓度小于且接近于标样浓度时，所得定量结果较准确；

.主要用于检出实验，即不需要准确定量未知样品含量，只关心未知样品是否达标。

.多级校正

.对每个峰需要做至少两次校正。

.多级校正即多点校正，纠正了单级校正的缺点，可以进行准确定量，将标样等梯度稀释，运行每一级稀释好的标样，在每一级上进行校正，先准备一个浓度必须高于未知样品浓度，而且最终标样的浓度范围应包含未知样品浓度。

定量

定量是利用峰面积或峰高来确定样品中化合物的含量。

.定量分析过程

.了解你所分析的化合物；

.建立一个分析的方法；

.运行一个或多个已知浓度的样品，得到相应的响应值；

.分析未知浓度的样品，得到相应的响应值；

.将未知浓度样品的响应值与已知浓度的该样品的响应值进行比较，确定其浓度。

.定量的方法

.百分比法

.归一化法

.外标法

.内标法

.外标百分比法

.内标百分比法

.响应因子

.响应因子与组分的含量及其他组分的存在无关；在分析条件一定的条件下，响应因子为物质的特性；响应因子可以校正检测器响应。

.百分比法

.常用于粗定量，或组分简单、结构相似的混合物分析，并且不需要建立校正表。

.外标法

.当校正样和未知样品在同样的条件下分析时，未知样品的结果与校正样的结果相比较从而计算出未知物的含量，该方法是基本的定量方法，使用该方法时每次运行的进样量必须是一致的。

.使用此法的前提假设是标样中、未知样品中待测组分的响应因子相同。这就要求仪器必须具有良好的稳定性，而且应定期进行重新校正，否则标样的响应因子和未知样品的响应因子不相等，就无法进行准确定量。

外标法优、缺点

.优点：

.可以校正检测器的响应。

.只对欲分析的组分峰做校正。

.无需所有峰都能被检测到。

.缺点：

.进样量必须准确。

.仪器必须有良好的稳定性。

.需定期做重新校正。

.内标法

.内标法是将内标物加到一定量的被分析样品混合物中，然后对含有内标物的样品进行色谱分析。

内标法优、缺点

.优点：

.进样不严格要求。

.只对欲分析的组分峰做校正

.校正检测器的响应

.缺点：

.必须加一个组分进到样品。

内标物的选择

.选择的标准

.样品中不存在该组分。

.可迅速容易得到。

.化学性质和样品相似。

.与样品有相似的响应值（浓度范围）。

.不会与样品发生反应。

.在感兴趣组分附近流出。

.可得到分离良好的峰。

.色谱性质稳定。

外标法与内标法比较

外标法是用标准品.的峰面积或峰高与其对应的浓度做一条标准曲线,测出样品的峰面积或峰高,通过该标准曲线上查对应的浓度,内标法是对应外标法说的,外标法是用样品和标准品对比,但是有时我们很难保证样品和标准品进的体积是一样的,毕竟要有误差,这时候就用内标法,就是在外标法的基础上,在样品和标准品里在加入一种物质,通过加入物质的峰面积或峰高的变化,就可以看出我们标准品和样品进样体积的差别,如果进样体积很难掌握,就用内标法,可以消除进样体积的误差。内标法工作曲线的横、纵坐标分别为含量比和峰面积比；而外标法工作曲线的横、纵坐标分别为含量和峰面积。

定量的方法

.归一化法

.假定

–

所有组分都流出。

–

所有组分都被检测到。

.优点

缺点

进样量不要求严格。

所有组分峰都要流出。

需测量所有的组分。

必须校正所有的峰。

第四章

仪器故障排除

不出峰与灵敏度降低

基线问题

色谱峰问题

分辨率降低

保留时间不重复

不出峰与灵敏度降低

.不出峰故障

.在选定操作条件下，给色谱仪注入规定的样品，在记录的谱图上没有相应的色谱峰出现的现象。

.灵敏度异常故障

.虽然出峰，但大小却与原来的已知谱图相差甚大。

.排除故障步骤

.操作条件重复性检查：核实操作条件是否与原条件接近。

.检查检测器有无反应：检测器响应检查应检测器类型而异。

.进样针及进、取样技术检查：进样针有无泄漏，抽取样品时抽取了空气或抽取样品后没及时进样造成样品挥发。

.载气堵、漏检查。

.进样口安装不当，载气样品流入不合理。

.仪器启动后零点基线的调整检查。

.检测器连线及工作条件检查。

基线问题

基线漂移一般是指基线向单方向持续升高或降低，最常见的原因是色谱柱固定性流失，色谱柱固定相流失是当色谱柱在其使用温度上限时基线的升高。在较低的柱温下如果有色谱峰，噪声过高，基线漂移或基线升高等现象，就不是色谱柱的流失造成的。此类现象主要是由于柱效降低，例如柱污染等引起的。

.基线波动

.基线波动的原因比较多，进样口、色谱柱、检测器、载气问题等都有可能导致基线的波动。

.基线噪声

.基线噪声增加最主要的原因

–

进样口、色谱柱和检测器污染

–

检测器相关部件老化、设置不正确。

色谱峰问题

.色谱峰问题出现的表现

.前伸峰

.拖尾峰

.鬼峰

.分裂峰

.色谱峰大小改变

.拖尾峰

.色谱峰系中最常见的问题

.鬼峰

.气相色谱分析中出现鬼峰，也就是色谱图中的“

额外峰”，一般不是由于柱流失所引起，通常是由于污染引起的。另外在评价鬼峰时考查其峰宽是很重要的。宽的峰，有时候是原先样品中的组分在色谱柱中慢慢洗脱导致的；窄的峰，可能是由于进样口污染等引起的。

分辨率降低

.分辨率与分离度及峰宽有关

保留时间不重复

保留时间的重复性是.指3次或5次进同一样品，其保留时间与它们的平均值的相对偏差值。如果这一相对偏差值超过了可接受的范围，就认为保留时间不重复。

.引起保留时间不重复的最可能原因

.一个是柱温不稳定

.另一个是流速有变化

.其他原因还有

.进样技术不佳

.进样量过大及柱损伤等

.检测器的故障不会造成保留时间的不重复

农残检测技术

有国标法，行标法，我们经常用的是行业标准检测，这里以NY/T761-2008为例。

.试样制备，按GB/T

8855标准抽取样品，取可食部分粉碎后制成待测样，在-20℃—-16

℃条件下保存

.农药标准溶液配制

.单一农药标准溶液：准确称取一定量的农药标准品，用溶剂配制成大浓度的单一标准储备液，储存在-18

℃以下冰箱中，使用时根据各农药在对应检测器上的响应值，稀释成所需的标准

工作液

.农药混合标准溶液：对于多组分农药，可根据各农药在仪器上的响应值，将各组分的单个农药储备液按一定量注入同一容量瓶中，稀释成所需质量浓度的标准工作液。

有机磷类农药的测定

.原理

.试样中有机磷类农药经乙腈提取，提取液经过滤、浓缩、净化后，用丙酮定容，经毛细柱分离，火焰光度检测器磷滤光片检测，通过保留时间定性，外标法定量。

.提取

.经乙腈提取的试样通过高速匀浆后过滤，滤液经分层后，收集一定量的上层乙腈相。

.净化

.将提取的上层乙腈相蒸发近干后，用丙酮多次冲洗并转移后定容，供测定。

.如果定容后的样品溶液过于浑浊，应用0.2μm滤膜过滤后再进行测定。

有机氯及拟除虫菊酯菊酯类农药的检测

.原理

.试样中有机氯、拟除虫菊酯类农药用乙腈提取，提取液经过滤、浓缩后，采用固相萃取柱分离、净化，淋洗液经浓缩后，通过毛细柱分离，电子捕获检测器检测，保留时间定性，外标法定量。

.提取

.试样经乙腈提取，过滤、浓缩后待净化。

.净化

.将待净化溶液通过固相萃取柱（弗罗里矽柱）后收集洗脱液，准确定容，待测。

.固相萃取柱

.活化（使用活化试剂活化萃取柱）、上样（将样品注入）、淋洗（用淋洗液将杂质洗掉）、洗脱（用洗脱液洗脱样品）

第三篇：气相色谱教案

程序升温气相色谱法分离多组分混合样品

一、实验目的

1、加深对气相色谱仪器分析方法基本原理的理解，掌握分析实验的基本知识和技能。

2、学会正确使用温岭分析仪器厂的GC-9790型气相色谱仪。

3、初步学会根据分析样品探讨和摸索程序升温实验的操作条件。

4、正确处理数据和表达实验结果，对问题进行一定的探讨和解决。

5、了解苯的同系物毛细管程序升温气相色谱分析方法。

二、实验原理

色谱法是一种重要的分离分析方法，是利用混合物不同组分在两相中具有不同的分配系数（或吸附系数、渗透性等），当两相作相对运动时，不同组分在两相中进行多次反复分配实现分离后，通过检测器得以检测，进行定性定量分析（一般是以保留时间定性，峰面积定量）。气相色谱法（gas chromatography，GC）是采用气体作为流动相的一种色谱法。

典型的气相色谱仪流程：具有稳定流量的载气，将进样后的样品在汽化室汽化后，带入色谱柱得以分离，不同组分先后从色谱柱流出，经过检测器和记录仪，得到由代表不同组分及浓度的色谱峰组成的色谱图。其组成有5部分，包括：载气系统（气源、净化器、气体流量控制和测量等）、进样系统（进样器和汽化室）、分离系统（色谱柱和温控柱箱）、检测系统（检测器）、记录和数据处理系统（放大器、记录仪和色谱数据处理系统）。

程序升温是指在色谱进样后，在一次样品分析的时间周期内，按一定的速度以预先设定好的升温程序使整个色谱柱随分析时间的延长呈现线形或非线形升温，从而使样品中的各个组分实现完全的分离。使用程序升温来分析多组分、宽沸程的样品时，在一个分析周期内，按预定的加热速率，柱温随分析时间的增加而呈线形（或非线形）增加，就会使样品中的各个组分的分配系数都处于连续变小的状态，使它们在气相中的浓度不断的提高，检测器可在较短的时间内连续接收到高浓度的各个组分，使其都在最佳柱温（或称保留温度）下逸出，而获得满意的分离度和相接近的柱效，并缩短了总分析时间。目前在气相色谱各类操作方式中，程序升温方式在70%以上。程序升温的条件，包括起始温度、维持起始温度的时间、升温速率、最终温度、维持最终温度的时间，通常都要反复实验加以选择。

三、仪器及色谱条件

仪器型号：温岭分析仪器厂的GC—9790气相色谱仪

色谱柱：内径0.53mm，长30m的SE-54大口径交联石英毛细管柱 样品：分析纯的苯、甲苯、二甲苯的混合物 色谱条件：

1、柱温：采用二阶程序升温，其升温程序如：从60℃以10℃/min的升温速率升至90℃，然后以2℃/min的升温速率升至110℃保持1分钟即可。

2、汽化室温度：180℃；检测器温度：180℃；进样量：0.02uL；空气压力：0.02Mpa；氮气压力0.02Mpa；氢气压力：0.13Mpa； 注：压缩空气由天津医疗器械二厂生产的WM-2A型无油气体压缩机提供，氢气由北京惠普分析技术研究所生产的GCD-300B型氢气发生器提供，高纯氮气由昆明梅塞尔公司提供。

四、操作步骤

1、按正常操作规程打开氮气，在仪器内流通；

2、打开色谱的电源开关，分别按实验条件设置柱温、汽化室温度、检测器温度；

3、待汽化室、检测室温度达到设定温度时，打开空气、氢气，点火；

4、待各条件都达到设定值后，进样；

5、依次按下色谱仪的“起始”键、记录仪以及工作站的 “起始”键，仪器开始进行分析；

6、测量完成后，切断空气、氢气，设置柱温到室温，待柱温降至室温后，关闭色谱电源，切断氮气，结束实验。

五、思考与讨论题（4、5题必做，其余任选三题）

1、如何对分离样品进行定性和定量分析？

2、为什么可用程序升温的方法来分离多组分、宽沸点的样品？

3、常见色谱柱的种类、性能和适用范围？

4、求3、4峰(或任意相邻峰)的分离度？

5、用第1、5峰（或任意两个峰）分别计算理论塔板数，并进行结果比较。

6、进样操作应注意哪些事项？在一定的色谱条件下，进样量的大小是否会影响色谱峰的保留时间和半峰宽度？

7、热导检测器和氢焰检测器的工作原理是什么？

8、什么是色谱的保留时间、校正保留时间？保留时间受哪些因素影响？为什么会有死时间、死体积，其关系如何？

第四篇：瘦肉精检测方法

目前，检测瘦肉精的方法主要有四种，即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）、毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）。而我国结合自己的实际情况，2001年农业部首先组织制定了饲料中盐酸克伦特罗的测定标淮。该标准选择确定了两种：即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）。其中将HPLC法作为检测瘦肉精的半确证性方法，其最低检测限为 0．05μg/kg，优点是检测精确度高，而且假阳性率低；缺点是检测过程烦琐、检测时间长，需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。而GC一MS法优点是能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析。GC－MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低，已将GC－MS法定为检测瘦肉精的确证性方法。GC－MS法的缺点同HPLC相似。

(1)试剂和材料 以下所有试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂；水为符合GB／T6682规定的二级水。

①盐酸克伦特罗对照品：含盐酸克伦特罗不得少于98．5％

②盐酸

③无水甲醇

④氢氧化钠

⑤磷酸二氢钾

⑥磷酸

⑦盐酸溶液 取盐酸4．2ml，加水至1000ml，即得。

⑧o．5mol／L磷酸二氢钾溶液 取磷酸二氢钾68g，加水800ml溶解并用磷酸调pH值至3．O，用水稀释至1000ml，即得。

⑨0．05mol几磷酸二氢钾溶液 取磷酸二氢钾6．88，加水800ml溶解并用磷酸调pH值至3．0，用水稀释至1000mi，即得。

a．氢氧化钠溶液 取氢氧化钠48，加水使溶解成100mi，即得。

b．盐酸克伦特罗对照品储备液(1mg／mi)准确称取28．3mg盐酸克伦特罗对照晶至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至25ml，一20~C以下保存，有效期1年。

⑩盐酸克伦特罗对照品工作液(10ttg／mi)取lmg／mi储备液o．5ml到50mi量瓶中，加水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。

⑾盐酸克伦特罗对照溶液(100ng／m1)取1(ug／m1工作液o．5ml到：50mi量瓶中水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。

⑿盐酸克伦特罗检测试剂盒(2～8~C冰箱中保存)

⒀固相萃取柱C，s：100mglml含碳量≥17％

(2)仪器和设备

①酶联免疫反应读数仪

②分析天平精度0．00001g

③天平精度0．01g

④冷冻离心机

⑤50mi具塞离心管

⑥匀浆机

⑦微型振荡器

⑧回旋振荡器

⑨微量移液器 单道20uL，50ul，100uL；多道50～250uL，⑩干热浓缩器

①空气压缩机

(3)测定步骤

①试料的制备(尿)

取供试尿lml，于3000r／min离心l0min，上清液作为供试试料，直接供酶联免疫测定法测定。

取空白尿lml，于3000r／min离心l0min，上清液作为空白试料，直接供酶联免疫测定法测定。

取空白尿2ml，于3000r／min离心l0min，上清液1.0ml添加l00ug／L的克伦特罗对照溶液20／H。作为2ug/l空白添加试料，直接供酶联免疫测定法测定。

②试料的制备(肝)

取约l00g新鲜或冷冻后融化的空白或供试猪肝,用匀浆机以10000r／rain匀浆1-2min，使均匀呈糊状，一20~C以下冰箱中贮存备用。

取均浆后的供试肝样，作为供试试料。

取均浆后的空白肝样，作为空白试料。

取均浆后的空白肝样(1土0．05)e添加l00ng／m1的克伦特罗对照溶液20tzL作为2ng／g空白添加试料。

a：提取(肝)取(1士o．05)z试料，置50ml离心管中；加盐酸溶液5.0mi，旋涡混匀，中速振荡1．5h；在10—15~C下以4000r／mill以上速度离心15min；上清液移人另一50ml离心管中，加入氢氧化钠溶液300gL，混匀，振荡15min；加0.5mol／l磷酸二氢钾溶液4。0ml，混匀，2—8~C放置过夜；取上述溶液于10～15~C以4000r／111113以上的速度离心15min，上清液备用。

b．净化(肝)C，固相萃取柱依次用无水甲醇3mi、0.05mol／L磷酸二氢钾溶液2mi预洗，不使柱床干涸；将备用上清液全部过柱；用0.05mol／L磷酸二氢钾溶液2ml淋洗，挤干，弃去所有淋洗液；用无水甲醇2mi洗脱，流速控制在0.5ml／mm以下，挤干，收集洗脱液；于50～60~C下用氮气或空气缓缓吹干洗脱液；残余物用水1.0ml溶解，以4000r／mill以上的速度离心15rain，清液作为试样溶液供酶联免疫测定法测定。

③测定

a．室温应控制在19～30~C。

b．取在19—30~C放置1—2h的试剂盒，按每个标准溶液和试样溶液至少两孔计算所需酶联板条的数量，插入框架。每个微孔加入用缓冲溶液100倍稀释的抗体100~tL，封口膜封板，室温孵育30min。

c倒出孔内液体，将酶联板倒置在吸水纸上拍打，使孔内没有残余液体。用多道移液器加水250pL到酶联板的微?L内，稍后倒出孔内液体，再将酶联板倒置在吸水纸上拍打，如此重复操作洗板3次。

d．分别吸取标准溶液、空白试料、空白添加试料和供试试料各20uL，分别放入不同微孔底中央，并在每孔内加入用缓冲溶液100倍稀释的酶结合物100~I。，在微型振荡器上混匀，用封口膜封好，室温孵育30min。

e．倒出孔内液体，将酶联板倒置在吸水纸上拍打，使孔内没有残余液体，重复洗板3次。

f．用多道移液器加入用底物缓冲溶液10倍稀释的底物100uL，室温避光孵育15min。

g．用多道移液器每孔加终止液100uL。

h．在1h内将酶联板放于酶标仪内，于450nm波长处测定吸光度值。

(4)计算 用数据分析软件对结果进行分析，绘出标准曲线，并得出试料中克伦特罗的含量。

(5)灵敏度和回收率

本方法的平均检测下限为0.1mg／Kg。

本方法在1ug／kg添加浓度水平上猪尿回收率范围为60％一120％，猪肝回收率范围为40％～120％。

第五篇：瘦肉精检测方法

瘦肉精检测

中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名盐酸克伦特罗；是一种平喘药。该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。盐酸双氯醇胺；克喘素；氨哮素；氨必妥；氨双氯喘通；氨双氯醇胺。英文名：Clenbuterol;Spiropent;Planipart;NAB365；4-Amino-3,5-dichloro-alpha-(((1,1-dimethylethyl)amino)methyl)benzenemethanolCAS号：37148-27-9

分子式：C12-H18-Cl2-N2-O

理化特性

白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦，熔点161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。

编辑本段

瘦肉精检测方法

GB/T 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定气相色谱-质谱法（GC-MS）

GC-MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。Fente C.A等用GC-MS法检测牛毛中CLB的残留，最低检测限为5ng/g；Pteer Batioens应用气相色谱－串联质谱法(GC-MS-MS)对牛、羊、猪组织

中的CLB含量进行检测，最低检测限为2ng/g；刘琪等用GC-MS法（EI离子源）检测猪尿中的CLB，检测限为0.5ng/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基吗啉衍生物检测尿提取物中的CLB，衍生物用电脉冲方式或化学离子化方式扫描，会产生更高的灵敏度。另外，GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。因此，我国将GC-MS法定为检测CLB的确证性方法（NY/T468~2001）。

高效液相色谱法（HPLC）

HPLC适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代谢产物，而且，HPLC可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(MS)等系统联用，容易实现分析过程的自动化。黄士新等(1995)应用紫外检测器，在λ=243nm，色谱柱：shimpackCLC-ODS150×6.0mn，流速：1mL/min，柱温：室温30℃的条件下检测猪肝脏和猪肉中的CLB残留，最低检测限可达2ng/g[4]。国外有人应用HPLC(二极管阵列检测器)测定动物性食品中CLB残留，测得最低检测限为1.26ng/g，回收率达98.9%[5]。目前，我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证性方法，最低检测限范围为1～15ng/g，其优点是专属性好、选择性强、检测精确度较高，而且假阳性率低；缺点是样品处理时间长，检测过程烦琐、难于操作，需贵重仪器，在实际应用中受到一定的限制。

酶联免疫吸附法（ELISA）

利用免疫学抗原抗体特异性结合和酶的高效催化作用，通过化学

方法将植物辣根过氧化物酶（HRP）与克伦特罗（CL）结合，形成酶偶联克伦特罗。将固相载体上已包被的抗体（羊抗兔IgG抗体）与特异性的抗克伦特罗抗体结合，然后加入待测克伦特罗和酶偶联克伦特罗，它们竞争性与克伦特罗抗体结合，洗涤后加底物，根据有色物的变化计量待测克伦特罗量。若待测克伦特罗多，则被结合的酶偶联克伦特罗少，有色物量就少。用目测法或比色法测定样品中的克伦特罗含量，比色的最佳波长为450 nm，参比波长应大于600 nm。胶体金免疫层析法（Colloidal gold immunochromatography）利用竞争法胶体金免疫层析技术，检测液中的Clen与金标垫上的金标抗体结合形成复合物，若Clen在检测液中浓度低于灵敏度值，未结合的金标抗体流到T区时，被固定在膜上的Clen-BSA偶联物结合，逐渐凝集成一条可见的T线；若Clen浓度高于灵敏度值，金标抗体全部形成复合物，不会再与T线处Clen-BSA偶联物结合形成可见T线。未固定的复合物流过T区被C区的二抗捕获并形成可见的C线。C线出现则表明免疫层析发生，即试纸有效.液相色谱—质谱/质谱法（HPLC-MS/MS）

参见SN/T 1924—2007 进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方法。

本标准适用于动物源性食品肌肉和内脏中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测。

试样中的药物残留采用pH5.2的乙酸铵缓冲液提取，同时加入β-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶进行酶解后，提取液经C18和SCX

双SPE柱净化，液相色谱—质谱进行测定，内标法定量。