高效液相色谱基本概念和术语

第一篇：高效液相色谱基本概念和术语

高压液相色谱HPLC培训教程(一)I．概论

一、液相色谱理论发展简况

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。

二、HPLC的特点和优点 HPLC有以下特点：

高压-压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。高速-流速为0.1~10.0 ml/min。

高效-可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：

速度快-通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。分辨率高-可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

灵敏度高-紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。柱子可反复使用-用一根色谱柱可分离不同的化合物。

样品量少，容易回收-样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

三、色谱法分类

按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。气相色谱法适用于分离挥发性化合物。GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。此外还有超临

为2.5~7.5（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。

正相色谱法与反相色谱法比较表

正相色谱法 反相色谱法 固定相极性 高～中 中～低 流动相极性 低～中 中～高 组分洗脱次序 极性小先洗出 极性大先洗出

从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）。3．离子交换色谱法

固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。

缓冲液常用作离子交换色谱的流动相。被分离组分在离子交换柱中的保留时间除跟组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外，它还受流动相的pH值和离子强度影响。pH值可改变化合物的解离程度，进而影响其与固定相的作用。流动相的盐浓度大，则离子强度高，不利于样品的解离，导致样品较快流出。离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。4．离子对色谱法

又称偶离子色谱法，是液液色谱法的分支。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。主要用于分析离子强度大的酸碱物质。

分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。

分析酸性物质常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。

离子对色谱法常用ODS柱（即C18），流动相为甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10 mmol/L的离子对试剂，在一定的pH值范围内进行分离。被测组分保时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值、离子强度有关。5．排阻色谱法

固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。常用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。

第二篇：仪器设备(液相色谱)购置报告

仪器购置申请

学院财务处、资产管理中心：

鉴于“江苏省食品安全快速检测工程技术研究开发中心”项目进展的实际需要，统筹考虑研发、社会服务和生物技术（制药）专业的资源建设，申请购置一台兼具荧光和二极管阵列检测的高效液相色谱仪，相关报告附后，请予以批准，谢谢！

食品科学系

二O一三年三月十六日

江苏省食品安全快速检测工程技术研究开发中心

液相色谱仪购置报告

一、申购背景

申请购置一台兼具荧光检测和二极管阵列检测的高效液相色谱仪，基于以下原因：

1.该台仪器的购置，是“江苏省食品安全快速检测工程技术研究开发中心”项目建设的预定计划之一，是工程中心研究、开发、第三方服务的主要设备。投入使用后，将满足新版国家标准“GB2762-2012 食品污染物限量”，“GB 2760-2011 食品安全国家标准”食品中污染物、添加剂检测的要求，其精度、准确度和检测限量是第三方检测的必须装备。

新版国家标准GB2762-2012 食品污染物限量标准自2013年6月1日正式施行。新标准逐项清理了以往食品标准中的所有污染物限量规定，整合修订为铅、镉、汞、砷、苯并[a]芘、N-二甲基亚硝胺等13种污染物在谷物、蔬菜、水果、肉类、水产品、调味品、饮料、酒类等20余大类食品的限量规定。其中对食品污染物“苯并[a]芘”规定运用高效液相色谱-荧光检测测定可以达到很好准确性、重现性和较低的检测限，达到食品中“苯并[a]芘”痕量检测的要求。

新版国家标准GB 2760-2011 食品安全国家标准“食品添加剂使用标准”对食品添加剂使用进行了严格的规定，卫生部发布的“食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单”中如罗丹明B、碱性嫩黄等禁用物质，没有国家标准检测方法。应用高效液相色谱-二极管阵列检测（可实现三维立体）可以更好更便揵的研究食品添加剂检测方法，并可同时准确定性定量。

2.该台仪器，对接香港中文大学生命科学学院“天然产物与功能食品”研究项目组，将系统开展辣椒素、花菁素、芝麻素、姜醇等天然抗氧化剂在脂肪酸、胆固醇、血脂氧化等方面的研究与应用开发。我院承担的省“六大人才高峰”项目“天然辣椒素对血脂代谢的影响研究与开发”、江苏省教育厅“青蓝工程”科技创新团队“农业投入品的监控与筛选”等相关研究内容，将主要依赖这台设备，相关合作，已于香港中文大学签署科研合作协议。

3.兼顾院级重点建设专业“生物技术及应用（制药）”需要。该专业是我院重点建设专业，2012年9月第一批学生已经入校，但是，实训资源建设缺口较大，特别是涉及到药物中间体、活性成分、功能因子等成分的分离与鉴定，高精度荧光和二极管阵列检测的高效液相色谱仪是必备工具。

二、预期效益

这台装备，是“江苏省食品安全快速检测工程技术研究开发中心”科研项目二期建设的既定内容，主要服务对象是科研、第三方检测和部分必须的专业实践，其效益主要体现在如下方面：

1.执行“江苏省食品安全快速检测工程技术研究开发中心”项目建设计划。投入运行后，我系将新增2-3个固定就（创）业岗位，满足5-7名学生的顶岗实践，全年将新增第三方检测服务营业额20-30万元。

2.提升科研质量。“天然辣椒素对血脂代谢的影响研究与开发”、“农业投入品的监控与筛选”等相关研究内容，将主要依赖这台设备，国际顶尖SCI期刊的研究报告，主要依赖这台设备，社会效益较大，价值难以量化。

3.提升专业建设水平。生物技术及应用（制药）专业实训中，涉及药物中间体、活性成分、功能因子等分离、鉴定，高精度荧光和二极管阵列检测的高效液相色谱仪是必备工具。具有培养学生的功能，是实验（训）资源建设的有效补充。

三、建议型号与附件

1.主机系统：SHIMADZU-LC20A（与香港实验室相同，数据同步）；

2.附件：二元泵，脱气机，荧光检测，二极管阵列检测，自动进样，柱温箱，氮吹仪，超声波，恒温水谷振震荡仪等。

四、经费来源

1.学院“校中园”建设专项20万元。

2.剩余款项（约20万元）拟从“食品安全快速检测工程技术研究开发中心”项目经费列支。

食品科学系 二O一三年三月十六日

第三篇：液相色谱培训小结

高效液相色谱培训小结

分析：XXX 我来研究院已经一年多，主要做基本分析操作，需要负责液相，为了严格保证分析数据的准确性，必须以严谨科学的态度对待，从制备样品过程到仪器采集过程都要非常谨慎、认真。

这次有幸得到公司提供的培训机会，去上海Agilent科技大学培训中心参加了为期四天的液相色谱培训。培训期间老师讲述了从硬件、软件及维护保养各个方面的问题，让人一下充实了不少。

通过这次的学习培训，使我对分析过程有了深入的理解，并对高效液相色谱仪的使用和维护有了更全面的了解和更多的认识，现在做总结如下：

液相色谱主要分为：溶剂柜、脱机机、泵、自动进样器(手动进样器）、柱温箱、检测器。各个模块由CAN 线进行通讯连接，使得各个模块形成一整套系统。化学工作站和仪器系统之间用LAN线连接。

一、硬件

1、在线脱气机

2、泵（我公司使用的是四元泵，当使用盐溶液和有机溶剂时，建议将盐溶液接到四元比例阀下面的通道上（A或D），有机溶剂接到上面的通道上（B或C）。如果经常使用盐溶液，建议定期用水冲洗所有的通道以去除阀口上可能出现的盐沉淀。）

3、进样器（我公司为标准自动进样器。进样体积重复性高，进样动态范围宽，连续冲洗流路并有洗针功能，降低样品残留，可以容纳不同规格的样品瓶。灵活的进样程序编程可以进行样品前处理，使用旁路可以降低延迟体积。）

4、柱温箱

5、检测器（我公司使用的是VWD检测器用于产品开发及质量控制。）

二、化学工作站

1、方法的编辑和保存

2、谱图处理及优化

3、积分参数优化

4、光谱功能

5、校正表建立，设定报告，报告设计

三、日常维护和常见色谱故障

1、溶剂准备：溶剂过滤是要防止固体颗粒损伤仪器或柱头。常用0.45um的滤膜，使用色谱纯的溶剂。定期更换溶剂，避免溶剂瓶直接日照，每两天更换或过滤溶剂，用滤膜过滤溶剂去除微生物，在使用时一定要脱气。

2、保护色谱柱

①过滤所有的溶剂和样品 ②使用保护柱

③仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液 ④在适当的溶剂中保存柱子 ⑤柱子在不使用时，两端密封保存 ⑥注意色谱柱的pH值使用范围 ⑦不要高压冲洗柱子

⑧不要高温下过长时间使用硅胶键合相

3、常见色谱故障 ① 双峰

原因：柱头塌陷或柱床运动、柱前滤芯堵塞、样品量过大、进样器流路存在分叉流路。

② 基线噪音、基线漂移

原因：检测池脏、灯能量下降、流动相脏、温度不稳定。③ 鬼峰、柱外扩散、峰扩展、拖尾峰、前伸峰、负峰 原因：流动相尤其水脏、连接接头不匹配、进样体积大、色谱柱过载、溶解样品溶剂通过色谱柱时平衡破坏。

④ 压力过高、压力过低、压力波动

原因：色谱柱过滤芯被污染、毛细管进样针或针座阻塞、阀失灵、密封垫老化、泵内有气泡。

⑤ 常规维护区域：溶剂入口、泵、检测器

四、Agilent Lab Advisor 软件

Agilent Lab Advisor是独立化学工作站之外的一个工具，这个工具提供维护、诊断、监控及警告功能。

经过这次的培训学习，使我对分析过程有了全新的认识，也解决了以前检测分析操作中遇到的问题，重新认识了许多应用方法，对仪器的操作使用维护有了新的认识，为以后的工作中更好地使用、养护仪器提供了更多理论依据。在此感谢领导，同事们对我的关心和支持，给我一个如此好的学习机会。

第四篇：高效液相色谱技术在食品安全领域中的应用

高效液相色谱技术在食品安全领域中的应用 摘要：本文综述高效液相色谱在食品安全检测中的应用。详述食品添加剂、非食品添加剂、农药残留量、抗生素药物残留量、毒素的检测等的检测技术。对于保证食品质量、维护人民健康安全有着重要意义。关键词：高效液相色谱技术；食品安全；食品添加剂；非添加剂；农药残留量；药物残留量；毒素

Research on the food safety of High Performance Liquid

Chromatography

LIU Wen-duo

(Zhongkai University of Agriculture and EngineeringCollege of light industry and food science, Guangdong

Guangzhou 510225)

Abstract: High Performance Liquid Chromatography was applied in food safety monitoring,Mainly on food additives, no allowed additives, pesticide residues, antibiotic residues, toxin and so on.It has important significance to ensure food quality and people's health.Key words: HPLC;food safey;food additives;non additivies;pesticide residues;antibiotic residue;toxin

高效液相色谱(HPLC)是 60年代后期发展起来的分离分析技术，是现代分离测定的重要手段[1]。问世以来，因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析高沸点但不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析[2]。近年来，随着色谱技术的不断发展，各种工作站软件的开发，以及与质谱等仪器的联用，大大拓宽了 HPLC的应用范围。目前很多新型专用的 HPLC仪不断出现，如氨基酸分析仪、糖分析仪、离子色谱仪等相继出现[3]。

近年来常有食品安全事故发生，例如食品添加剂超标；一些食品农药残留和有害物质超标，苏丹红事件、三鹿奶粉事件就是先例。这些产品不合格，严重影响我国的声誉和人民的安全。此时，精密的高效液相色谱仪器就发挥重要作用。本文仅就高效液相色谱质谱在食品检测中的应用进行综述，以供参考。食品添加剂的分析

1.1 甜味剂

天然甜味剂有蔗糖、葡萄糖、甘草酸钠盐等，人工甜味剂有糖精及其钠盐，环已基氨基磺酸钠和甘精。甘精毒性大 , 各国都禁止使用, 我国准许使用糖精钠、环已基氨基磺酸钠、天门冬酰丙氨酸甲脂、麦芽糖酸、D-山梨糖酸、甘草和甜味菊等。糖精钠是使用历史最长的人工合成甜味剂之一，WHO制订的ADI为 0～2.5 mg/ kg。单独测定食物中的糖精钠方法较简单，使用反相色谱柱，以甲酸： 0.02 mol / L乙酸铵（5：95）为流动相，紫外检测器，波长选择 230 nm，可以很容易地获得结果，这是国家标准检验方法[4]。

甘草苷系天然甜味剂，溶于水、乙醇中，不溶于乙醚、氯仿。采用反相离子对分配型 HPLC法可同时测定食品中甘草苷和糖精钠，操作简便、迅速。其条件为Chrosorb RP-18(5μm)柱，流动相为乙醇：0.05 M磷酸二氢钠（2 ：3）溶液中含 0.02MCTA，用磷酸调pH为 3，紫外检测器，波长选择 245 nm[5]。

1.2 着色剂

为了改善食品的感官性状，允许在食品中添加一定限量的食用色素。食用色素可分为食用天然色素和合成色素，天然色素来源于植物色素和动物色素，一般较为安全。合成色素常以苯、甲苯、萘等化工产品为原料合成。由于合成色素大都有慢性毒性或致癌性，必须严格

控制使用种类及含量。我国允许使用的 8种合成色素,都是水溶酸性色素。采用径向加压柱 u Bondapak C18反相柱，以甲醇：0.02 M乙酸铵为流动相，可将除新红外的 7种合成色素同时分离定量。用液体阴离子交换树脂 Amberlite LA乙晴（50：50），流速为 1.5mL/mL，检测波长 243nm，结果三聚氰胺的保留时间为6.9 min，空白无干扰。检出限为1.0ug（行标为2.0μg），有实用意义。

李延志等[10]采用 HPLC-DAD 法快速筛查蛋白质食品非法添加三聚氰胺。其方法是样品以 1% 三氯乙酸提取，用 2% 乙酸铅沉淀蛋白，离心后，上清液荆 0.45µm 滤膜过滤，直接上机进行HPLC分析。本法检出限为 0.28mg/kg，线性范围： 0.05~1.6mg/L，该法灵敏、准确，可推广使用。

张俊燕等[11]报道饲料中三聚氰胺的检测方法。采用 Agilent 1100 HPLC-DAD 检测器，波长 240 nm 和北京Agela 离子交换固相萃取柱。样品经0.1%三氯乙酸提取，离心，上清液过 PCX 小柱，净化后做 HPLC 分析或衍生后做 HPLC-MS 分析。结果按照2007 年美国 FDA的 HPLC-UV 方法测定三聚氰胺，用国产 AgelaANB 亲水色谱柱，分离效果良好。最低检出限：HPLC-UV 法为 2µg、HPLC-MS法为 0.5µg，大大提高灵敏度，而 FDA 原法由于流动相中加入离子对试剂而不能直接用 HPLC-MS分析。

WC Andersen 等[12]采用超高效液相色谱串联四级杆质谱法测定鮎鱼组织中的三聚氰胺，结果满意。陈晓东等[13]亦曾建立乳及乳制品中三聚氰胺的HPLC-MS-MS测定方法。样品用三氯乙酸和乙晴提取，经阳离子交换固相萃取柱（SPE）净化后，HPLC-MS-MS 法确证和测定。外标法定量。结果在 0.01~0.5µg/mL 范围内呈线性关系。r=0.9999，检出限（LOQ）为 0.01µg/kg，本法加样回收率为80.4%~107.4%。RSD=9.4%。可满足检测要求。

此外，由于大量使用的三聚氰胺大部分以原形直接或是随着粪便排入海洋中，对海洋生物造成潜在威胁，对生态环境造成破坏，已成为新的重要污染物。XU Ying-jiang等[14]建立固相萃取-超高效液相色谱串联质谱测定海水及沉积物中的三聚氰胺的方法。检出量为

0.5µg /kg，适合海水及沉积物中痕量三聚氰胺的测定。

2.2食品中苏丹红的检测

苏丹红属偶氮染料，系化工合成染色剂。主要用于蜡染、油彩等产品。苏丹红进入人体后分解还原成致癌芳香胺，对健康造成很大危害。

温忆敏等[15]参照欧盟和我国国家标准方法经研究和改进，建立食品中苏丹红系列化合物和对位红的 HPLC 测定法。样品经有机溶剂提取、氧化钼吸附、梯度洗脱等进行测定，并采用光谱-色谱法，重点对洗脱剂强度与萃取活性关系、色谱优化条件等进行研究。该方法可同时测定食品中苏丹红 1、2、3、4 及红 7B、黑 B、对位红等。最低检出限均可达到 0.01mg/g，符合有关法规的要求。

刘志权等[16]应用超高效液相色谱质谱联用（UPLC-ESI-MS-MS）法建立快速测定苏丹红 1~4的含量。实验采用UPLC-ESI-MS-MS 串联四级杆质谱仪，多粒子反应监测（MRM）定量法。通过对样品预处理、色谱条件和质谱参数的优化选择，建立的同步测定食品苏丹红 1~4 含量方法，重复性好、灵敏度高、准确可靠。本法苏丹红 1~4 的最低检出限分别为0.1µg/kg、0.1µg/kg、0.2µg/kg、1.0µg/kg，线性范围在 1.0~100ng/mL，r=0.9900，加样回收率为 87.0%~109%，可用于样平的实际检测。

宁肃骏等[17]建立食品中对位红、苏丹红 1~4的 UPLC-ESI-MS-MS 测定方法，以氘代苏丹红为内标进行定量。试样经提取，再经液液萃取和固相萃取（Waters Oasis MAX）净化，上机进样测定。本法线性范围在 0~100µg/kg，r=0.9900，定性定量检出限均为 1.0µg/kg，加样回收率为 78%~112.4%。经辣椒酱等 7 种食品检测，结果满意。本法灵敏度高，特别适合于低含量复杂样品中苏丹红的分析。食品中农药物残留量的检测

3.1 食品中农药残留量的检测

为防治病虫害，农业上广泛使用各种农药，其残留量超标将严重影响人们的健康。林子掩等[18]采用自制硅藻土固相萃取柱，建立固相萃取-高效液相色谱（SPE-HPLC）法，同时测定蔬菜中甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯、溴氰菊酯等农药的残留方法。4 中蔬菜样品测定的回收率分别为卷心菜 80.7%~106.2%、花菜80.5%~102.6%、红萝卜63.0%~109.3%、青椒 74.9%~109.0%。RSD 均为 14.5。对于控制蔬菜质量有实用意义。

WEN Yuyun 等[19]应用高效液相荧光检测器（HPLC-FL）测定茶叶中甲氰菊酯等 5 种菊酯类农药的残留量。实验以乙晴-水(74：26)为流动相，流速为 1.2mL/min，梯度洗脱，柱后衍生化，FLD 检测，激发波长：221 nm，发射波长：320 nm，本法线性范围在 0.04~8.0μg/g，RSD为3.4%~6.4%，检出限为0.012~ 0.048μg/g（重）。结果完全符合欧盟标准的要求，为出口茶叶质量提供保证。

徐远金等[20]应用 SPE-HPLC-ESI-MS法同时测定疏菜中痕量甲胺磷、敌百虫、马拉硫磷、对硫磷等7种有机磷农药残留量。并根据测得的二级质谱离子碎片，研究7种有机磷农药的裂解规律。样品提取液经固相萃取后，采用用C18 柱分离。以0.1%甲酸乙酯-0.1% 甲酸水溶液为流定量动相，线性梯度洗脱，以保留时间和质荷比对分离出的组分予以定性确证，以峰面积进行定量。结果表明7种农药的浓度与其峰面积在一定范围内呈良好的线性关系。检出限为0.002~0.090µg/kg，RSD=3.1%~5.2%。此法简便、快速、灵敏，适于蔬菜中 7 种有机磷农药残留量的测定。

3.2 食品中药物残留量的检测

我国一些水产养殖地区由于放养密度高、环境污染严重等原因，致使水生动植物发病率增加，有的渔民为追求经济效益最大化，常在饲料中添加四环素类抗生素药物，致使水产品中这些抗生素残留增加，目前其残留危害已引起世界范围内的广泛关注。

程雪梅等[21]采用 HPLC-MS-MS 法分析海产品中的四环素类药物残留。由于浓度很低，样品经 2% 高氯酸提取，固相柱萃取，以乙晴-水-三氯乙酸体系为流动相，采用电喷雾离子检测器进行质谱分析。结果金霉素、四环素、土霉素、强力霉素的检出限分别为 0.008 mg/kg 和 0.062mg/kg。可以满足海产中四环素类抗生素残留测定的要求。

周艳明等[22]指出，有些抗生素如赤霉素，目前我国尚无标准测定方法，出于实际需要，并为国标提供方法，建立草莓中赤霉素残留量的 HPLC 测定方法。样品采用 80% 甲醇提取，经液液萃取，净化，以紫外检测器测定。结果表明，本法最低检出限为0.017 mg/kg，加样回收率为 82.8%~106.6%，RSD为3.2%~4.1%。方法准确可靠、简便可行。亦可用于其它水果中赤霉素的检测。

孙志刚等[23]应用 HPLC-SEI-MS 法测定水产品中甲羟孕酮残留量。实验样品先用乙酸乙酯提取，氮气吹干，乙晴溶解，正己烷除脂，中性氧化铝小柱净化，流动相为乙晴 c-0.1% 甲酸（70：30），RP18 柱分离，通过MS-MS测定。本法检出限为0.03µg/kg，定量检出限为 0.1µg/kg，可满足我国出口检测要求。

XIAX X 等[24]采用液相色谱质谱联用测定家禽和猪肉、鸡蛋中甲硝唑、替硝唑、洛硝唑和异丙硝唑的含量；DAESELEIRE E 等[25]应用液相色谱质谱联用法，快速同时鉴定和测定鸡蛋中洛硝唑、甲硝唑和地美硝唑的含量，结果满意。YINJu-can等[26]采用固相萃取柱净化处理后进行液相色谱-大气压化学电离源串联四级杆质谱，在正离子模式下(HPLC-APCI(+)-MS/MS)对动物源性食品鸡肉、猪肉、牛肉中甲硝唑等 9 种硝基咪唑类药物及其代谢物残留量进行分析。最低检测量为 0.5μg /kg。上述方法简便快速、灵敏可靠、专属性好，为质量控制提供可靠的方法。

杜振霞等[27]应用超高效液相色谱-串联四级杆质谱（UPLC-MS/MS）同时测定牛肉组织中环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星等 3 种氟喹诺酮类兽药残留。样品经萃取后测定，检出限均为0.05μg/L，定量限为0.1μg/L。

ZHANGJian-li 等[28,29]采用 LC-MS/MS 法同时检测保健品中非法添加的阿卡波糖、二甲双胍等10种降糖药和安定、硝基安定等 8 种镇静催眠药。前者检出限为 20mg/kg，后者检出限为 1mg/kg。方法简便快速、准确可靠，适于保健品中非法添加的化学类降糖类药的常规检测。

3.3 食品中毒素的检测

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，其基本结构都有二呋喃环和氧杂萘邻酮,如毒素B1、G1和 M1等。日常 HPLC检测这些物质时采用 C18柱，流动相为甲醇：0.01M KH2PO4(1：1),荧光检测器，λEx360 nm，λEm245 nm。柳洁等[30]采用ODS Hy 2persil 5μm，125 mm×4 mm柱，流动相为甲醇：乙腈：水 = 15 ：13 ：72，荧光检测器λEx 360 nm，λEm 440 nm，检测出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和 M1，检测限达到 0.02 μg。

海产品贝毒大田软海绵酸（OA）是一种小分子海洋聚醚类腹泻性贝毒素。多由海洋甲藻产生。常蓄积于贝、螺等海洋生物体内，食用后易引起腹泻性为主的食物中毒，且 OA 为强烈的致癌因子，对人类健康构成严重威胁。卢士英等[31]建立 ELSIA和HPLC-MS/MS同时测定花蛤和扇贝等 OA 的 2 种方法。前者检测线性范围在0.4~2.5μg /L，后者为10~800μg /L。前者灵敏度为 0.18μg /L，后者为μg /L。经 10 种海产品样品检验，结果 ELISA 法检出蛤蜊样品的含量为3.82μg/100g，扇贝的含量为 2.32μg /100g； HPLC-MS/MS 法检出蛤蜊样品的含量为 3.42μg /100g。所建立的 2 种方法皆可用于海产品腹泻性贝毒 OA限量标准检测。小结

HPLC作为一种十分有效的分析分离手段，已广泛地用于食品安全等领域，其技术也在不断改进与发展，发展具有专家系统的智能多模式多柱的色谱系统是当今色谱发展的重点，即色谱专家系统将是一个必然趋势。

HPLC另一个发展趋势是联用技术的发展。目前人们所面临的问题, 往往很难再用单相分析分离方法解决, 而常需用色谱、质谱、光谱、核磁等多种方法综合加以解决。随着计算机技术的发展。多仪器联用形式已成为现实，如 GC-LC、MS串联质谱法分析海产品中四环素类药物残留

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第五篇：高效液相色谱系统中气泡对检测的影响及其解决方法

高效液相色谱系统中气泡对检测的影响及其解决方法

在我们进行液相色谱分析时，有时会遇到这样一个问题：系统的流路中存在气泡。

由于气泡的存在，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。

造成上述现象的主要原因有三条：一是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡；二是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净；三是在注入样品时不注意混入了空气。

为了避免这类问题的出现，液相色谱实际分析过程中必须重视对流动相进行脱气处理。常用的脱气方法有以下几种：

1.吹氦脱气法 使用在液体中比空气溶解度低的氦气，在0.1Mpa压力下，以约60ml/min流速通入流动相10-15min以驱除溶解的气体。此法使用于所有的溶剂，脱气效果较好，但在国内因氦气价格较贵，本法使用较少；

2.加热回流法 此法的脱气效果较好；

3.抽真空脱气法 此时可使用微型真空泵，降压至0.05-0.07MPa即可除区溶解的气体。显然使用水泵连接抽滤瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成过滤机械杂质和脱气的双重任务。由于抽真空会引起混合溶剂组成的变化，故此法适用于单一溶剂体系脱气。对多元溶剂体系应预先脱气后再进行混合，以保证混合后的比例不变。

4.超声波脱气法 它是目前实验室使用最广泛的脱气方法，将配制好的流动相连同容器一起放入超声波水漕中脱气10-20min即可。该方法操作简便，基本能满足日常分析的要求。

5.在线真空脱气法 把真空脱气装置串联到储液系统中，并结合膜过滤器，实现了流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。此法的脱气效果明显优于上述几种方法，并适用于多元溶剂体系。

其二，在液相色谱系统开始工作前，可以用注射器连接恒流泵的排空阀，抽入流动相，将流路中的空气驱赶干净。

其三，在注入样品前注意排出样品注射器中的空气。