液相学习心得

第一篇：液相学习心得

反冲色谱柱是否会降低柱效呢?

1.简单来说，绝大多数硅胶基质的色谱柱,正用反用都是一样,没有多大区别.反着用也不会对色谱柱柱效产生影响。

2.小心起见的话，建议大家看随色谱柱来的一小页的说明.上面可能都有注明该色谱柱是否可以反冲.如果没说，一般都是可以反冲的。

3.还有一个问题,就是反冲后，是把柱子调回来用，还是就这么反着用呢？

在有些色谱柱压力高的时候，反冲一段时间后，压力下降到正常。换回正常的方向没多久又开始升高，这个时候，可以考虑就将色谱柱反着用。

4.有一种情况下，色谱柱不能长期反冲，就是色谱柱前后筛板孔径不一致的时候。有些3u色谱柱入口筛板孔径可能是2u，出口0.5u。这样可以让色谱柱承受更大的压力(因为出口比较小)。这种情况下，反冲一小段时间问题不大，但是时间长了以后，可能造成有些填料被冲出色谱柱，造成柱效下降的情况。如何防止这个问题出现呢？ 还是那句话，看说明书，看手册。

RTFM！与大家共勉：）

2011.5.22 要重新开始学习色谱的一些原理和故障诊断，开这个帖子，跟大家分享一下学习笔记。欢迎大家交流。也算是对自己的一种监督。学习资料来自LCGC杂志的各个专栏。

做液相的同学基本都会碰到分叉峰.很多时候,这都意味着硬件或者方法某些地方可能出现问题.这里我们一起看看导致峰分叉的原因以及如何解决这个问题的一些指导性的方法.1.首先,我们需要判断,这到底是一个峰,还是两个峰?

A图主峰前面有一个肩峰.这到底是峰形不好,还是另外一个化合物没分开呢?

判断办法:降低该成分在样品中的浓度.B图是降低该成分浓度后,进样后得到的色谱图.如果这是一个峰,那肩峰也应该响应变小.但是,这个例子里,肩峰没有变小,这应该是另外一个化合物.这时候,我们就要考虑如何改变方法,将这两个东西分开.2.所有峰的峰形都不好.一般来说,一个样品都会出多个峰.峰形不好,绝大多数时候,在每个峰上面都会出现.比如像下面这样:

A图是所有峰都拖尾.B 图是所有峰都有肩峰,也可以说峰分叉.这种情况一般都是色谱柱头塌陷或者柱头的筛板被堵导致的.为什么导致峰型问题呢? 请看下面的图.A图是正常的柱头.B图是筛板被堵的柱头.正常情况下,所有样品分子都是均匀通过色谱柱的,形成一个对称的峰形.堵塞得情况下,有一部分样品分子进入色谱柱就会收到阻扰,导致时间拖后,形成拖尾.对于色谱柱塌陷的情况,用同样的方法,大家也不难理解.只不过这时候,是一些样品分子可能跑的比正常的快了一些.如何解决这个问题呢:

1.反冲.柱出口放空，冲20-30ml流动相。虽然柱子上都有表明使用方向, 但是对于硅胶基质的色谱柱,基本都可以反冲.将柱头污染物(泵密封圈的碎屑，样品中的污染等)冲走，就能解决问题。当然，还是要提倡大家注意样品上机之前的前处理和及时更换磨损的泵密封圈。有条件的，还是用保护柱，大不了就换保护柱，也比换色谱柱强。

2．更换或清洗筛板。现在估计做这个事情的人不多，但是谁有废柱子，想练练也未尝不可。

案例分析：

我们一起看看一个实际的例子。

根据之前说的，可能是柱头堵了，或者塌陷了。但是进一步检查，发现另有原因。方法用的150 mm 4.6 mm, 5-um C18 柱子，78% 乙腈，1.5ml/min，等度方法，进样10ul，100%乙腈溶解的样品。

一般来说，虽然10ul的纯乙腈不会引起峰形不好，但是有时候样品溶剂的极性跟流动相差异较大时，的确会引起峰形的问题。

我们怎么办呢：

1． 从最容易的办法做起，降低溶剂乙腈的比例。降到50%看看。从下图B，4min的峰可以看出，没啥改观。

2． 接下来反冲柱子，结果图C，基本没变化。算，每天再说吧。

3． 第二天来到实验室，还能干嘛呢？ 更换筛板？ 算了，直接换柱子吧。结果如D，噢，好很多噢。之前柱子肯定有问题，扔了。但是峰还是有点宽，估计还是哪儿有问题。

4． 手上忙，没时间管这个。几天过后，重新配了流动相，一跑，好了。如图E。

虽然到底什么原因导致的之前峰形的问题已经无从查找(柱子扔了，旧流动相也没了)，但是也给我们一个解决问题的步骤：

1． 确定峰形问题是所有峰都有问题，还是就是某一个峰有问题。如果所有峰都有问题，基本都是色谱柱，或者仪器管路连接的问题。如果是某一个峰有问题，那就要从方法上来考虑，是否需要改变流动相比例，pH值，色谱柱温度等等。

2． 从最简单的做起，从不需要换什么东西的方法做起。比如改变样品溶剂，反冲色谱柱等等。

3． 换东西。换保护柱，换色谱柱，换流动相(新配)。一步一步的换，有助于找到问题的根本。

4． 问题解决后，想想需不需要采取什么措施，防止类似问题的发生，比如说常换流动相啦，即时更换密封圈啦，记录进样次数了解什么时候色谱柱就不行了啊之类的

基线噪音是做液相的同学经常感到头疼的问题, 特别在做痕量分析时候.这次我们从物理,化学到电子等各个方面看看噪音的来源,以及如何减小和消除噪音.1.流动相的在线混合.所有的流动相在线混合都是从方便出发的结果, 流动相混合的不充分是基线噪音的一个重要来源.混合方式主要两种:

a.低压混合：采取时间脉冲的方式，利用比例阀，将不同流动相按一定比例混合。

b.高压混合：利用多个泵头，控制每个泵的流量，来将流动相按一定比例混合。

在流动相混合后，一般都有一个混合器(Mixer),来帮助混合的更加充分。从流动相开始混合在一起，到流动相到达色谱柱头，这一段体积叫做延迟体积(Delay Volume).Mixer体积越大，混合越好，但是相应延迟体积就越大，造成梯度的延迟。换句话说，就是流动相的变化，需要一定时间后，才能真正到达色谱柱，对分离产生影响。

a.这个现象在使用UPLC或者UHPLC的时候，会有比较明显的作用。

b.为什么相同梯度方法，在不同仪器，或者不同品牌的仪器之间转化时，保留时间可能不一样？ 其主要原因就是延迟体积的不同。

在线混合很难做到非常均一的混合效果，这个在示差检测器（RID）上的效果最明显。这也是为什么示差检测器都要求将流动相预混到一个瓶子里，不能走梯度的原因。

那如何减小因为混合而造成的基线噪音呢？

a.对于等度的方法，非常简单，预混流动相就可以了。

b.对于梯度的方法，部分预混流动相也会帮助更好的混合，怎么做呢？看下面的例子。

方法要求乙腈/水比例从10%走到85%。那可以将流动相A配成10%的乙腈，流动相B配成85%的乙腈，然后A/B梯度从0%走到100%。这就是部分预混。

c.增大Mixer的体积。一般mixer的体积从几百ul到几个ml都有，在允许的延迟时间下，更换一个体积更大的Mixer，能够有效提高混合的效率。每个色生产厂家的Mixer体积都不一样,基本都可以混用.有碰到过一个Agilent的1100基线噪音大,后来换成1050的mixer就好了,因为1050的mixer比较大一些.2．液相硬件问题造成的基线噪音。

如果液相系统某些地方的工作不正常，也可能造成基线的噪音。

a.系统有漏。特别是肉眼无法发现的微漏或者泵的内漏，会造成流速的变化和混合比例的变化，从而导致基线噪音。检查的方法就是对系统进行压力测试：将系统从某个地方用死堵堵上，如泵出口，或者自动进样器出口，将压力升高到350bar后停泵，监测压力下降的情况。一般的标准是2-3bar/min的下降是正常水平。或者15%/10min的下降。

b.梯度比例问题。可以对系统进行一个梯度测试，来检查梯度混合是否准确和一致。将A配成0.1%的丙酮，B是水。在265nm的波长下，将A的比例10%，20%，30%这样一个一个的升高，每个比例走3min。可以根据计算，看每个基线台阶上升是否准确。也可以从0-100%走一个连续的梯度，看基线上升的平滑性和线性。

3．流动相脱气不好造成的基线噪音。

对流动相进行脱气，不仅仅是为了防止系统里面气泡的产生。流动相脱气越好，基线就会越好。如今最常用的脱气方式是在线脱气机，但是有的时候脱气并不彻底。所以当有基线噪音问题是，可以考虑采取多种的脱气方式。

4．系统洁净程度。

前面1-3点讲的都是内在原因，造成的基线噪音或者波动。如果你前面的原因都找过了，问题还没有解决，就得考虑一下是不是流动相里面是否有杂质了。如何检查判断是否为流动相的问题呢？

a.每次更换一种流动相，看基线结果。

b.重新配置所有流动相。这种方式比较快，但可能无法找到根本原因。

要特别注意在流动相的配置过程中，是否引入了污染，比如使用了不干净的玻璃器皿什么的。更换溶剂的品牌和批次也是方法之一。

色谱柱长期使用造成的污染有时候也会造成基线波动。有些时候样品里面可能有些保留非常强的组分，可能在色谱柱上很长时间才慢慢被冲出来，这时候已经不是一个峰了，而是基线的干扰或者波动了。

避免这种问题的方法：在每批样品后，用甲醇或者已经长时间冲洗色谱柱。另外，专柱专用也是一个好的习惯。如果一根色谱柱上作很多不同的样品，也可能导致互相之间的污染和影响。

5．电路的噪音。

对于UV检测器来说，就是采样频率不合适而产生的噪音。现在随着超高效液相的普及，检测器的采样频率也越来越高，有的可以达到80Hz以上。但是如果一味追求高采样频率，可能对灵敏度没有任何帮助，反倒产生比较大的噪音。(我们后面可能会有一起专门检测器的时候,会更详细的讨论这个的原因)

一般来说，我们需要保证一个色谱峰上面有15-20个点，来保证比较平滑的峰形和比较准确的定量结果。如果我的一个峰的时间宽度是0.5min，就是是30s，那只要保证1Hz的采样频率就足够了。如果在UPLC上面，一个峰的时间宽度是0.05min，也就是3s,就需要10Hz以上的采样频率。那80Hz的采样频率什么时候用呢？ 你的一个峰只有0.5s的时候。

理论上的计算是这样的

N=16（T/W）^2

N是柱效。T是保留时间。W是峰宽。

一般色谱如果柱效12000的塔板数。在5min的时候，出峰宽度大概计算出来时11s。你可以根据计算结果来调整检测器的合适的采样频率。

第二篇：高效液相色谱基本概念和术语

高压液相色谱HPLC培训教程(一)I．概论

一、液相色谱理论发展简况

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。

二、HPLC的特点和优点 HPLC有以下特点：

高压-压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。高速-流速为0.1~10.0 ml/min。

高效-可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：

速度快-通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。分辨率高-可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

灵敏度高-紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。柱子可反复使用-用一根色谱柱可分离不同的化合物。

样品量少，容易回收-样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

三、色谱法分类

按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。气相色谱法适用于分离挥发性化合物。GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。此外还有超临

为2.5~7.5（2~8），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。有报告新商品柱可在pH 1.5~10范围操作。

正相色谱法与反相色谱法比较表

正相色谱法 反相色谱法 固定相极性 高～中 中～低 流动相极性 低～中 中～高 组分洗脱次序 极性小先洗出 极性大先洗出

从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）。3．离子交换色谱法

固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。

缓冲液常用作离子交换色谱的流动相。被分离组分在离子交换柱中的保留时间除跟组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外，它还受流动相的pH值和离子强度影响。pH值可改变化合物的解离程度，进而影响其与固定相的作用。流动相的盐浓度大，则离子强度高，不利于样品的解离，导致样品较快流出。离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。4．离子对色谱法

又称偶离子色谱法，是液液色谱法的分支。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。主要用于分析离子强度大的酸碱物质。

分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。

分析酸性物质常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。

离子对色谱法常用ODS柱（即C18），流动相为甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10 mmol/L的离子对试剂，在一定的pH值范围内进行分离。被测组分保时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值、离子强度有关。5．排阻色谱法

固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。常用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。

第三篇：仪器设备(液相色谱)购置报告

仪器购置申请

学院财务处、资产管理中心：

鉴于“江苏省食品安全快速检测工程技术研究开发中心”项目进展的实际需要，统筹考虑研发、社会服务和生物技术（制药）专业的资源建设，申请购置一台兼具荧光和二极管阵列检测的高效液相色谱仪，相关报告附后，请予以批准，谢谢！

食品科学系

二O一三年三月十六日

江苏省食品安全快速检测工程技术研究开发中心

液相色谱仪购置报告

一、申购背景

申请购置一台兼具荧光检测和二极管阵列检测的高效液相色谱仪，基于以下原因：

1.该台仪器的购置，是“江苏省食品安全快速检测工程技术研究开发中心”项目建设的预定计划之一，是工程中心研究、开发、第三方服务的主要设备。投入使用后，将满足新版国家标准“GB2762-2012 食品污染物限量”，“GB 2760-2011 食品安全国家标准”食品中污染物、添加剂检测的要求，其精度、准确度和检测限量是第三方检测的必须装备。

新版国家标准GB2762-2012 食品污染物限量标准自2013年6月1日正式施行。新标准逐项清理了以往食品标准中的所有污染物限量规定，整合修订为铅、镉、汞、砷、苯并[a]芘、N-二甲基亚硝胺等13种污染物在谷物、蔬菜、水果、肉类、水产品、调味品、饮料、酒类等20余大类食品的限量规定。其中对食品污染物“苯并[a]芘”规定运用高效液相色谱-荧光检测测定可以达到很好准确性、重现性和较低的检测限，达到食品中“苯并[a]芘”痕量检测的要求。

新版国家标准GB 2760-2011 食品安全国家标准“食品添加剂使用标准”对食品添加剂使用进行了严格的规定，卫生部发布的“食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单”中如罗丹明B、碱性嫩黄等禁用物质，没有国家标准检测方法。应用高效液相色谱-二极管阵列检测（可实现三维立体）可以更好更便揵的研究食品添加剂检测方法，并可同时准确定性定量。

2.该台仪器，对接香港中文大学生命科学学院“天然产物与功能食品”研究项目组，将系统开展辣椒素、花菁素、芝麻素、姜醇等天然抗氧化剂在脂肪酸、胆固醇、血脂氧化等方面的研究与应用开发。我院承担的省“六大人才高峰”项目“天然辣椒素对血脂代谢的影响研究与开发”、江苏省教育厅“青蓝工程”科技创新团队“农业投入品的监控与筛选”等相关研究内容，将主要依赖这台设备，相关合作，已于香港中文大学签署科研合作协议。

3.兼顾院级重点建设专业“生物技术及应用（制药）”需要。该专业是我院重点建设专业，2012年9月第一批学生已经入校，但是，实训资源建设缺口较大，特别是涉及到药物中间体、活性成分、功能因子等成分的分离与鉴定，高精度荧光和二极管阵列检测的高效液相色谱仪是必备工具。

二、预期效益

这台装备，是“江苏省食品安全快速检测工程技术研究开发中心”科研项目二期建设的既定内容，主要服务对象是科研、第三方检测和部分必须的专业实践，其效益主要体现在如下方面：

1.执行“江苏省食品安全快速检测工程技术研究开发中心”项目建设计划。投入运行后，我系将新增2-3个固定就（创）业岗位，满足5-7名学生的顶岗实践，全年将新增第三方检测服务营业额20-30万元。

2.提升科研质量。“天然辣椒素对血脂代谢的影响研究与开发”、“农业投入品的监控与筛选”等相关研究内容，将主要依赖这台设备，国际顶尖SCI期刊的研究报告，主要依赖这台设备，社会效益较大，价值难以量化。

3.提升专业建设水平。生物技术及应用（制药）专业实训中，涉及药物中间体、活性成分、功能因子等分离、鉴定，高精度荧光和二极管阵列检测的高效液相色谱仪是必备工具。具有培养学生的功能，是实验（训）资源建设的有效补充。

三、建议型号与附件

1.主机系统：SHIMADZU-LC20A（与香港实验室相同，数据同步）；

2.附件：二元泵，脱气机，荧光检测，二极管阵列检测，自动进样，柱温箱，氮吹仪，超声波，恒温水谷振震荡仪等。

四、经费来源

1.学院“校中园”建设专项20万元。

2.剩余款项（约20万元）拟从“食品安全快速检测工程技术研究开发中心”项目经费列支。

食品科学系 二O一三年三月十六日

第四篇：液相培训总结-1218

岛津高效液相色谱培训小结

2017年12月12日—15日我参加了岛津企业管理（北京）有限公司北京分析中心组织的高效液相色谱LabSolutiongs DB/SC课程培训。非常感觉公司领导提供这样的学习机会，使我们能系统地学习液相的知识，增强自身技能，提高工作能力。这次培训主要从液相色谱仪基础知识、LabSolutions DB/CS软件操作两大块去分析讲解。

LabSolutions DB/CS软件操作包括三部分：数据采集、数据处理、管理工具。

数据采集：主要包括分析方法和运行控制，是我们操作中最常用的。方法的组成：方法信息、仪器/采集参数、数据分析参数、运行时选项表。它包括分析一个样品所需要的所有参数。运行控制讲解了系统配置及仪器开关机的设置。

数据处理：这部分是数据分析处理和报告生成。讲解了通过利用再解析、浏览器对数据进行分析处理，以及报告模板编辑、报告集的创建和模板编辑。

老师通过上机演练，向我们详细讲解数据采集和数据处理中的方法的建立、数据采集、报告生成等内容。并让我们自己上机操作，对几个样品进行检测，利用建立标准曲线对样品定量分析的方法来掌握方法的建立、数据采集、报告生成和报告集建立的操作。

管理工具：管理工具主要是对仪器系统进行设置，是液相仪的使用基础。包括六个部分：安全策略、项目管理、用户管理、仪器管理、系统设置、数据备份与恢复。安全策略主要用于设定LabSolutions系统中，关于设置密码、软件登录方法、未经授权的访问对应方法、审查追踪功能、文件访问限制和在分析结果中显示签名等信息。因为法规对这部分有要求，因此对这部分进行了详细讲解。

通过这部分的学习，对LabSolutions软件有了更深入和全面的了解，从液相基本的数据采集和数据处理，再到软件的系统管理。在实际应用中能更好的去设置和使用。

液相色谱仪基础知识包括四部分：色谱基础知识、硬件基础知识、定量基础知识、维护基础知识。

色谱基础知识:从色谱的起源和发展，到高效液相色谱的简易流程图和它的原理及特点，如疏水性，流动相，固定相极性对分离度的影响，相互作用力，水，有机溶剂的选择及缓冲盐的配制。以及高效液相色谱的分类，包括反相色谱，离子对色谱，正相色谱，离子交换色谱，尺寸排阻色谱等。通过这堂课的学习，增强了我们的理论知识，对高效液相色谱的原理大有了解。其中讲解的各种因素对分离度的影响，对我们在平时的工作中，在流动相的选择和其他实验条件的摸索有很大帮助。

硬件基础知识:学习高效液相色谱构成高效液相色谱构成:(1)储液瓶和溶剂；(2)脱气机；(3)输液泵；(4)色谱柱；(5)检测器；(6)数据处理系统。每一部分都有相关使用要求：流动相要选择恰当，pH要符合范围，流动相使用前要过滤和脱气。对于不同性质的样品要选择不同的色谱柱以及对色谱柱的维护，如果走过缓冲盐，那一定要先用高比例的水来置换掉里面的盐后才能用有机溶剂来冲洗，在使用缓冲盐之前也要用高比例的水来冲洗。

检测器分为通用型和高选择性、高灵敏度的。高选择性、高灵敏度：紫外可见光检测器，二极管阵列检测器，荧光检测器。通用型：示差折光检测器，电导检测器，蒸发光散射检测器，质谱检测器等。其次，因分离的目的不同对检测器的要求也不同。如果是定量，要用选择性高，灵敏度高的检测器，如果是定性或制备，则可选择通用型的。

定量基础知识:详细阐述了定量分析的基本要求，基本公式，常用定量方法(面积归一法、外标法、内标法、标准加入法)，并通过LC Solution软件的应用来讲解样品检测方法的建立。常用定量方法一般分为四个步骤：一是设置仪器控制参数，包括泵参数、色谱柱参数、检测器参数等；二是根据采集的信号设置积分功能，主要是优化积分参数；三是设置校正参数，主要是对化合物进行定量分析，计算其含量;四是设置报告参数，主要是结果的输出模式。

维护基础知识：主要是液相色谱常见问题及故障排除经验，日常使用中的注意点及基本维护，容易出故障的部件及常见故障的排除等。这些问题，都是我们平时工作时经常遇到的，学习了这方面的知识和经验，能指导我们在日常工作中保证仪器处于顺畅的工作状态，有效降低仪器发生故障的频率，延长仪器的使用寿命，保障检测工作的顺利进行。最后，就这四天的培训进行了理论知识的考核，并对试题进行讲解分析。并和我们一起培训的同行就日常工作中遇到的实际问题与老师进行交流讨论，从实际应用中把所学到的知识进一步巩固。

这次的培训，让我学到了很多有关液相分析仪器的知识，使我们对液相专业理论知识有了更深的理解和认识，实际操作能力得到了进一步的提升，为我们能更好的胜任自己的工作，打下坚实的基础。我们将不断学习专业知识、不断完善自我，提高自身综合能力，将所学知识应用于实际工作当中，为公司奉献自己的一份力量。

樊 佳 2017年12月18日

第五篇：液相色谱培训小结

高效液相色谱培训小结

分析：XXX 我来研究院已经一年多，主要做基本分析操作，需要负责液相，为了严格保证分析数据的准确性，必须以严谨科学的态度对待，从制备样品过程到仪器采集过程都要非常谨慎、认真。

这次有幸得到公司提供的培训机会，去上海Agilent科技大学培训中心参加了为期四天的液相色谱培训。培训期间老师讲述了从硬件、软件及维护保养各个方面的问题，让人一下充实了不少。

通过这次的学习培训，使我对分析过程有了深入的理解，并对高效液相色谱仪的使用和维护有了更全面的了解和更多的认识，现在做总结如下：

液相色谱主要分为：溶剂柜、脱机机、泵、自动进样器(手动进样器）、柱温箱、检测器。各个模块由CAN 线进行通讯连接，使得各个模块形成一整套系统。化学工作站和仪器系统之间用LAN线连接。

一、硬件

1、在线脱气机

2、泵（我公司使用的是四元泵，当使用盐溶液和有机溶剂时，建议将盐溶液接到四元比例阀下面的通道上（A或D），有机溶剂接到上面的通道上（B或C）。如果经常使用盐溶液，建议定期用水冲洗所有的通道以去除阀口上可能出现的盐沉淀。）

3、进样器（我公司为标准自动进样器。进样体积重复性高，进样动态范围宽，连续冲洗流路并有洗针功能，降低样品残留，可以容纳不同规格的样品瓶。灵活的进样程序编程可以进行样品前处理，使用旁路可以降低延迟体积。）

4、柱温箱

5、检测器（我公司使用的是VWD检测器用于产品开发及质量控制。）

二、化学工作站

1、方法的编辑和保存

2、谱图处理及优化

3、积分参数优化

4、光谱功能

5、校正表建立，设定报告，报告设计

三、日常维护和常见色谱故障

1、溶剂准备：溶剂过滤是要防止固体颗粒损伤仪器或柱头。常用0.45um的滤膜，使用色谱纯的溶剂。定期更换溶剂，避免溶剂瓶直接日照，每两天更换或过滤溶剂，用滤膜过滤溶剂去除微生物，在使用时一定要脱气。

2、保护色谱柱

①过滤所有的溶剂和样品 ②使用保护柱

③仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液 ④在适当的溶剂中保存柱子 ⑤柱子在不使用时，两端密封保存 ⑥注意色谱柱的pH值使用范围 ⑦不要高压冲洗柱子

⑧不要高温下过长时间使用硅胶键合相

3、常见色谱故障 ① 双峰

原因：柱头塌陷或柱床运动、柱前滤芯堵塞、样品量过大、进样器流路存在分叉流路。

② 基线噪音、基线漂移

原因：检测池脏、灯能量下降、流动相脏、温度不稳定。③ 鬼峰、柱外扩散、峰扩展、拖尾峰、前伸峰、负峰 原因：流动相尤其水脏、连接接头不匹配、进样体积大、色谱柱过载、溶解样品溶剂通过色谱柱时平衡破坏。

④ 压力过高、压力过低、压力波动

原因：色谱柱过滤芯被污染、毛细管进样针或针座阻塞、阀失灵、密封垫老化、泵内有气泡。

⑤ 常规维护区域：溶剂入口、泵、检测器

四、Agilent Lab Advisor 软件

Agilent Lab Advisor是独立化学工作站之外的一个工具，这个工具提供维护、诊断、监控及警告功能。

经过这次的培训学习，使我对分析过程有了全新的认识，也解决了以前检测分析操作中遇到的问题，重新认识了许多应用方法，对仪器的操作使用维护有了新的认识，为以后的工作中更好地使用、养护仪器提供了更多理论依据。在此感谢领导，同事们对我的关心和支持，给我一个如此好的学习机会。