第一篇:动物实习总结
动物实习总结
开学前的一周,同学们去宁波天童参加了动物实习。这次实习中,我担任了第二队的女生队长。
作为队长,要及时与老师交流,了解接下去的安排,和男生队长做好沟通。之后把所有的安排和通知转告给所有队员,并组织同学们借还工具,以及在最后收同学们的作业。我觉得自己在这些方面做的不错。
但作为队长,我还有很多地方做得不够。由于我队女生分散在三个寝室中,了解情况比较困难。一楼的寝室由于有要好的朋友,还会去一下,但对新疆同学的关心不够。另外,在第一天昆虫的实习中,由于我们队长没有组织同学们分组,导致最后都是男生一组、女生一组,没有达到实习所希望的同学们相互间增加了解的目的。不过,这在后面两天有所改善,都采取了男女混杂的分组。还有开始几天我没有组织大家做好卫生,虽然发现了问题,却没有去解决。但最后我们寝室是第一个做完卫生的,非常干净。
建议是观鸟最好分组,大家一起声音比较响,比较乱。而且前面的同学在老师的指导下已经看到鸟了,而后面的同学连鸟在哪儿也不太清楚。当老师用单筒观察到鸟让大家看的时候,在前面同学看完了,后面同学想看的时候,鸟已经飞了的情况非常多。还有水生动物以及昆虫下午观察鉴定的时候老师还可以讲得多一些,因为上课的时候很细的分类讲得少,同学们都不太清楚。而且由于没有解剖,大家只了解外表,对它们的内部结构了解很少。在最后做检索表的时候,大多数人都是在网上找了特征后再把各物种比较一下写的检索表,实际上那个种是怎么样的其实不那么清楚。
还有,虽然我很希望带动大家利用实习的时间好好学习,但是只有一点点灯光的房间我认为这是不可能的,而且我在第一天已经提出了这个问题,但直到最后一天也没有解决。另外,一楼的电视机使那两个房间的同学不想学习,想休息的同学也不能休息,甚至我进去的时候发现10个人的寝室常常有15、6个人,非常挤,非常吵闹。有同学和我说她不太想呆在自己寝室。
这次实习让我和队员们相互间有了更多的了解,在搬运工具、捕捉昆虫以及最后的打扫卫生的过程中,让我深深的感到合作的重要性。我想这次的实习也是我大二暑假一个很好的结束方式。
第二篇:动物野外实习总结
动物野外实习总结
2013年5月30日至6月6日,我们在木论自然保护区进行一周动物野外实习。木论国家级自然保护区位于广西河池环江县西北部,与贵州省茂兰国家级自然保护区相连接,地理坐标为东经107°53′29″~108°05′45″,北纬25°06′09″~25°12′25″,属北回归线北侧。林区东西宽20·6Km,南北长11·6Km,面积10829·7公顷。木论自然保护区为喀斯特地貌,锥峰连绵,四周封闭,呈各种形状的洼地或漏斗,石山裸露面积80%以上,土壤覆盖面积不足10%,属中亚热带石灰岩常绿落叶阔叶混交林森林生态系统,覆盖率高达97·13%。据最新统计,保护区已知有维管束植物(163)科572属1048种,野生脊椎动物共有417种,隶属于5纲33目102科281属,其中兽类9目21科46属60种,鸟类17目51科129属199种,爬行类2目12科39属58种,两栖类2目7科21属35种。野外实习期间,我们大多时间都是在木论自然保护区的实验区,只有一次走到保护区的缓冲区。所以我们对于木论自然保护区的了解是不全面的。此次野外实习,我们的最大收获是看到细痣疣螈和盲鱼,还有我们见到基本是昆虫类,很少有鸟类、爬行类、两栖类,而兽类几乎没有见到。这可能的原因是我们还没有到达保护区的核心区,很多种类无法看到。让我印象深刻的场景是:我们到溶洞里,见到盲虾、螃蟹、盲鱼。黑漆漆的,大家拿着手电筒,凭着微弱的光,努力寻找盲鱼,好不容易见到的一条盲鱼,却躲在岩缝里,捉不到,它一见到光就躲起来,而我们没有光又无法看到它。之所以叫盲鱼、盲虾是因
为溶洞里常年见不到光,致使眼睛瞳孔退化。而溶洞也是一个完整的生态系统。进到溶洞内,会明显感觉到气温的下降,可以看到地表水通过岩缝渗透到溶洞内,造成岩石被侵蚀。形成大小不一,高深不同的坑洼。这些知识以前都是在书上看到的,如今亲眼所见,让人有一种说不出的震撼。
野外实习期间,我们过得很快乐,因为有老师、站长、阿姨和同学一起。白天大家一同出发,一同像寻宝一样去发现动物;晚上回来,分工合作,有的同学压标本,有的同学同阿姨一起煮饭。大家的积极性并没有因为辛苦而减弱。白天,同学们用火眼金睛快乐的寻宝;晚上,同学们侧着耳朵认真听老师讲解。每天笑声不断,我们过得充实又快乐。
野外实习期间,在大家努力奋斗时,我有另外的发现。我了解到自然界中物种之间奇妙的生存关系。昆虫类为了繁衍后代而大量损害农作物或高大的乔木;昆虫类为了生存也会大量食用某种植物,使植物受害。地球上没有任何一种生物单独地生存于非生物环境中,它总是程度不同地受到周围植物、动物和微生物的影响。生物间存在竞争、寄生、捕食、共生等关系。保护区给生物提供良好的生存和繁衍环境时,农民的农作物损害日趋严重,使种植作物收益减少或无收。
但随着经济社会的发展,人类活动对自然界的影响也越来越大。野外实习期间,我了解到木论自然保护区的生态环境已受到了破坏。原始森林很少,甚至有些山头已被开荒种上桉树。而据了解,桉树对土壤的危害非常大,它的根系特别深,生长速度惊人,吸取大量土壤的有机物和大量的地下水。由于地下水减少会造成地下水位下降,所
以桉树不宜大面积种植。我们应该有长远的目光,不能只看到眼前利益。
此次野外实习使我们能更好的掌握了理论知识,理论应用于实际。使我们开阔了视野,与大自然更亲近。使我们体验到不同的人土风情,学习了很多为人处世的道理。认识了更多的动物,完成了实习任务。最重要的是培养了我们吃苦耐劳,团结合作,认真严谨的态度。我们学到很多,同时也暴露我们很多缺点和不足。今后,我们会更加努力学习,尽量把理论和实际相结合,掌握各方面的能力。
第三篇:动物野外实习总结
动物学野外实习总结心得体会
学号:094120
姓名:
班级:09级应用生物教育B班
2011年6月19日,我们开始进行动物学野外实习,动物学野外实习是生物学专业基础课程——动物学教学的一个重要环节。将课堂上的理论知识与野外实际或生产实践相结合,从而达到巩固理论知识的目的。对于高等师范院校的学生而具有特别的意义。而研究型动物野外实习教学的指导思想,不仅仅在于验证书本知识和巩固理论知识,而是更加重视理论知识的应用,强调整个过程的参与和学习,发挥学生学习的主动性,激发学生的学习兴趣和创造力,培养学生的团队精神和协作意识。同时也为我们以后走上教育岗位更好的胜任教学。动物学野外实习是动物学生教学计划中重要的组成部分,是将无脊椎动物学和脊椎动物学理论与实践相结合的重要环节。通过这次野外实习参观,我们了解了动物进化的历程,尤其是侏罗纪恐龙时代的一些鲜为人知的恐龙生活和前寒武纪生命起源与生命大爆发事件的认识。而通过观察标本,使我进一步了解动物的生活环境和生活习性。完成了这次野外实习的任务,使自己各方面的能力得到一定提高。
一、实习目的及意义
1.动物学野外实习是生物学专业基础课程。动物学教学的一个重要环节。2.对于高等师范院校的学生而言具有特别的意义
(1)师范生是未来的中小学教师,面向中小学学生,云南有丰富的动物资源,对周围环境中动物的识别具有现实的需要。
(2)野外实习的经验对于中小学教师指导学生进行探究性实验和课外兴趣活动具有很大帮助。强化生物学基础课教学,增加学生对宏观生物学的感性认识,理论联系实际。
二、实习内容概要:
无脊椎动物:环节动物:(蛭纲,多毛纲)
节肢动物:(甲壳纲,蛛形纲,多足纲,昆虫纲)脊椎动物:鱼纲(软骨鱼类,硬骨鱼类)两栖纲:(蛙类)
爬行纲:(龟鳖目,蜥蜴类,蛇类,鳄类)鸟纲:(游禽类,路禽类,猛禽类,鸣禽类,攀禽类)
哺乳纲:(灵长目,食肉目,奇蹄目,偶蹄目,长鼻目,鳍脚目)
三、野外实习阶段
这个阶段主要是进行了参观和记录各种动物的特征,各种地球上曾经出现过的生命形态,包括侏罗纪的恐龙和前寒武纪的化石群。
澄江古生物化石群博物馆:6月19日,我们到了美丽的澄江。参观在生物生命史上很有知名度的澄江古生物化石群博物馆。澄江生物化石群出现于寒武纪生物大爆发时期,除了低等植物藻类外,大量代表现生各个动物门类的动物同时出现。也就是说,大多数现生各动物门类代表在澄江生物化石群中都有其发现。而在寒武纪之前,除了分散的海绵骨针外,还没有出现过这些动物。虽经5亿多年的沧桑巨变,这些最原始的各种不同类型的海洋动物软体构造保存完好,千姿百态,栩栩如生,是目前世界上所发现的最古老、保存最好的一个多门类动物化石群;生动如实地再现了当时海洋生命壮丽景观和现生动物的原始特征,为研究地球早期生命起源、演化、生态等理论提供了珍贵证据。澄江动物化石群的发现,引起世界科学界的轰动,被称为“20世纪最惊人的发现之一”。其中以软躯体化石的罕见保存为特色,现在已经识别的化石就有120多种,有海绵动物、腔肠动物、鳃鬼动物、叶足动物、腕足动物、软体动物、节肢动物、棘皮动物、脊索动物等种类,还有一些没有命名的奇异种类。这里埋藏着距今5.3亿年的澄江动物化石群,该动物化石群再现了距今5.3亿年前海洋生物的真实面貌,为揭示地球早期生命演化的奥秘提供了极其珍贵的证据。帽天山化石带,呈带状蜿蜒分布,这条分布带长20公里,宽4.5公里,埋藏深度在50米以上。标本馆不是很大里面的种类已不是很多,但是每种动物的化石的发现都具有重大的作用。在这里我们小组进行分工记下了许多的化石名称,并通过短片的观看进一步了解到了帽天山的发现史。
昆明动物博物馆:6月25号我们参观昆明动物博物馆,昆明动物博物馆库存标本56万号,展示标本数量为2277号,包括国家一二级重点保护动物90余种,还有许多珍惜、濒危种、观赏种、药用种、资源种及食用种等,实为无价之宝。展览规模庞大,展品丰富精致,充分展现了云南“动物王国”的风采。通过动物的姿态标本、骨骼标本、皮张标本、浸泡标本、生态景观等,按照动物的进化、生息和分布规律,集中反映这些动物的特征、习性、分布等,体现物种和生境的多样性、生物与环境的统一、人与自然的和谐。在这次参观的过程中我们小组的成员认真的做笔记,听讲解员的讲解,可以说每个人都有很大的收获。
圆通山 :6月26日下午,我们到圆通山动物园参观并很详细地记录了各种很有代表性的各种世界各地的野生动物。动物园饲养有猴、熊猫、犀鸟、狮子、亚洲象、金钱豹、斑马、孟加拉虎、孔雀、丹顶鹤等珍禽异兽500多种,还有孔雀园,鸟园,水族馆,陈列各种鱼类。我们认真观察记录了动物的生活习性和特征,对于有些本土不分布的动物,我们观察动物的特征与常见的种类对比,对照课本内容,加深对各种动物的深刻印象。特别是在鸟园里,我们看到了各种各样的种,包括黑天鹅Cygnus atratus、银耳相思鸟Leiothrix argentauris黄胸织布鸟Baya Weaver、金雕Aquila chrysaetos等47个种的鸟类。其中最引人注目的是动物的展区,这已是我们这次参观的重点,通过我们小组成员的认真统计与记录我们了解到全园有动物140多种,大小近千只如大象、野牛、还有来自国外的袋鼠等等。但是给我感触最深的一点是在动物园中的动物都缺乏一种在自然界中的灵气。
禄丰恐龙博物馆:6月29日,我们去了禄丰恐龙博物馆。禄丰恐龙生活在一亿八千万年前的晚三迭纪,大约又在八千万年前突然消失了。它是中生代地球上早期恐龙起源、演化的重要组成部分。禄丰恐龙分属于蜥龙目和乌龙目两大家族,包括禄丰龙、云南龙、兀龙、芦沟龙、中国龙和大地龙等六个属的至少八个种,体形有大有小,食性有素食者和肉食者之分。禄丰恐龙时代较早,代表性强,是阐明恐龙起源、演化和发展的珍贵化石证据。我们到禄丰县城参观了恐龙博物馆的各种恐龙化石和已经组装起来的恐龙完整化石,那时一个伟大的时代,我们在恐龙博物馆里看到了四只组装完整的恐龙化石和各种恐龙骨骼化石,然后,我们又坐车到达化石采集地点,在那里,我们看到了真正完整的恐龙化石:两具还在土里的恐龙完整化石。恐龙留给我们太多的谜,现在我还在思索问什么禄丰恐龙没有恐龙蛋化石的存在。为什么所有出土的恐龙无一例外的头偏向东北方。在禄丰现在发现并被记录的恐龙化石有:
1.双脊龙
Diclophosaurus 1999年12月在禄丰县金山镇黑龙潭村后山出土出土,身长6米,时代为晚三迭纪,距今1.8亿年前大型的兽脚类肉食恐龙。
2.新洼金山龙
Jinshanosaunus Xinwaenyis 1999年12月在禄丰县金山镇黑龙潭村后山出土出土,身长8.6米,高4.2米,时代为中生代晚三迭纪,距今1.8亿年前,大型原晰脚类恐龙。
3.巨型禄丰龙
Lufengosauvus magnus 1994年6月在禄丰县金山镇清凉山出土,身长8.2米,高2.5米,时代为晚三迭纪,距今1.8亿年前,属大型原晰脚类恐龙。
4.禄丰龙
Lufengosawrus huene 1989年在禄丰县大荒田恐龙山出土,身长为2.4米,时代为中生代晚三迭纪,距今1.8亿年前,标本为未成年个体。
5.许氏禄丰龙
Lufengosaurus huenei 1999年4月在禄丰县金山镇新洼村恐龙山发现,身长5.4米,高3米,时代为中生代晚三迭纪,距今1.8亿年前。四 实习心得
通过此次实习,我在知识和技能上获得了丰收。在实习,我们巩固在课堂上所学动物学知识,不仅使我以前所学的课本知识在自然界中得到了验证与加深,而且对各门各纲的动物的分类有了清楚的辨别,更通过与动物的近身接触了解了它们的形态特征和生活习性,更对它们的存在价值有了新的反思与认识。
其次,我感受到了团队合作的重要性。动物学实习时间很短,但工作量不少。我们小组分工合作,各尽其责,在整个实习过程中显得尤为重要,特别是在记录名录时,大家互相协作,培养了我们团结协作的精神,这将有利于我以后的学习和工作。因为实验工作往往不是一个人的事情,是一个团队在完成一个项目,在工作的过程中如何去保持和团队中其他同学的交流和沟通也是相当重要的。合理的分工可以使大家在工作中各尽所长,团结合作,配合默契,共赴成功。
最后,通过此次实习,我不仅学到了知识,而且也认识到自己知识的缺乏,这也对了我以后的学习方法和态度起了警示作用。还要学会理论联系实际。
第四篇:动物医学专业毕业实习总结
实习总结
本人于2010年4月至六月,在江西省宜春市高安市(县)新街镇五鑫牧业有限公司进行了为期两个月半的生产实习活动。通过本次实习了解真正的生产活动当中是怎样进行的,为以后工作做好心理以及生理准备。
五鑫牧业有限公司是一家集种猪生产与肥猪生产于一体的综合性生产企业,分为种猪场和肥猪场两个场区,本次实习活动是在肥猪场进行的,通过本次生产活动基本了解了从配种一直到肥猪出栏的全过程,由于只有短暂的两个半月,所以无法详细的了解各个细节,只是走马观灯似的了解一下基本生产流程。主要通过生活和生产两方面对实习进行一个简单的总结,毕竟生活是必不可杀,不能一味只谈生产方面,这样接显得太片面了。
首先,对生活方面做一下总结,在猪场生活是一件很枯燥而单调的一件事,也许是呆在学校习惯了一下子不适应猪场生活,在这里没有很多的朋友,没有好的信息来源,没有好吃的饭菜,只有很多的猪哥猪姐,我所在的猪场只有几个同龄人,还包括我一同学,我是幸运的,还有一个同学在身边,还有几个同班同学只能一个人孤零零的与猪畅谈。在猪场里有一种落难的感觉,一下子从十层大楼落到地面,这种感觉很不好受。住的地方没有电灯只能用手电来照明,热的时候没有风扇,还好我带来一手提,虽然没有网络,但还能单机吗。有时还可以发发短信,每天的生活就是猪场,单机,吃饭,睡觉等,心情好时两人结伴去镇上买一点东西,这是我们最开心的一件事。总之还好,毕竟不是来度假的,是来学习的。
下面进入实习生产这个主题。原先的安排侧重点是关于血清学检测方面,由于条件的限制只能以了解生产流程为主了。实习主要从配种一直到肥猪出栏这一条主线进行的,主要包括查情,人工受精,测孕,妊娠,生产,保育,育肥这七大部分组成,当然还包括其他方面;例如;消毒,疫苗接种,饲料生产,疾病控制,保健等。实习方式;在每个部分待一段时间,跟着生产师傅学习,了解这部分生产基本要领,注意事项,以及相关事宜。等把这部分了解的差不多在转移到下一个部分。由于时间有限呆在各个环节的时间不是很长,所以了解的不是很全面,只是大概的了解了一下,下面就一待在每个环节所学知识进行一简单的总结。
1.查情
所谓查情就是检查母猪发情,通过这个环节把发情母猪挑选出来,赶到人工受精舍进行人工受精。查情方式;把公猪赶到母猪栏内,使公主与母猪充分接触,观察母猪的各种反应,每天两次上下午各一次。
母猪一般会出现以下特征;1)静立反应2)怕跨现象3)外阴红肿,有少量分泌物。
注意事项;1)断奶母猪一般在断奶后3-7天内发情,了解断奶日期这有利于发情检查,断奶母猪由于刚从产房转出,故要进行适当的运动,改善营养使母猪快速适应新环境。以减少应激反应。
2)查情过程当中发现有阴道流脓或其他疾病应及时进行处理,能治疗的进行治疗,不能得则要淘汰处理。
3)长期不发情的母猪,则要公猪对母猪进行追逐,母猪加强运动,改善营养等刺激母猪发情。
2.人工受精
把发情母猪赶到人工受精舍的限位栏内,受精时间在早上或者傍晚最好,一般在24小时内,间隔在8小时以上进行两次人工受精,这样更有利于受孕。人工受精方式;在母猪限位栏前赶一头公猪刺激母猪,首先对母猪外阴及周围进行清洗及消毒(庆大霉素稀释液),人工受精人员站在母猪后,一手按在母猪背部,一手拿输精管(输精管头部进行过轮滑)以逆时针方向螺旋向上插进母猪子宫内,使输精管头部卡在子宫内为宜,然后把输精袋连接到输精管上,用手上提输精袋,使精子自然流入子宫内,3-5分钟完成输精过程为宜,然后折叠输精管插在阴道内一段时间再取下。注意事项;1)精子质量检查,活力在70%以上为合格,畸形和死亡率少于15%,输精量在80ml--100ml左右,精子量30万左右。
2)输精过程当中要按摩母猪背部和外阴,尽量模仿自然交配过程。
3)注意母猪流脓以及疾病。
3.检孕
一般在人工受精后20天左右进行,主要观察返情现象以及借助B超等手段检查母猪是否受孕,以便后续处理。
4妊娠
母猪在人工受精舍待35天左右后,转到妊娠舍,在妊娠主要注意母猪的流产。妊娠舍的饲养方式是重中之重,这对于母猪是否能顺产,仔猪出身重及仔猪发育有重大影响。一般前期正常给料,预产期前一个月加料以增加仔猪出身重。
5.生产
预产期前7天,把母猪从妊娠舍赶到产房使母猪适应产房的环境,预产期前一两天开始减少饲料量,产后慢慢再增加饲料量。刚产下的仔猪要断脐带,断尾,剪虎牙,擦拭干净仔猪身体再放入保温箱内在几个小时内一定要让仔猪吃到初乳,保证仔猪获得母源抗体,以健康生长。如果母猪无法顺产,则要注射缩宫素,还是无法产下,则要进行徒手掏仔(特别是后备母猪),母猪产后要注射抗菌消炎的药及营养母猪,由于母猪产后虚弱,容易感染细菌及病毒,所以要提高母猪机体免疫力。
仔猪的饲养管理,刚出生的母猪容易得黄百痢及其他因素引起的腹泻,尤其是在出生后两周内特别严重,故要做好这方面的工作,如果仔猪无法吃到初乳或者足够的奶则要寄养仔猪于给其他母猪,一窝仔猪太多的话也可寄养给其他母猪。
产房要注意保温,在仔猪出生7天后适当的喂养叫槽料,使仔猪适应饲料为2周后的断奶做准备,28天后把仔猪转入保育栏。
6.保育
刚转入的仔猪要注意应激反应,保育栏主要注意饲料的更换及疾病控制,应在这个阶段母源抗体减弱,仔猪机体机体免疫力弱容易感染细菌和病毒。故在这个阶段要特别注意。为减少成本必须更换饲料,这进一步使机体免疫力消弱。所以在这一阶段要细心的照料仔猪,加强仔猪机体免疫力。
7.育猪
从保育栏转入肥猪栏后,由于应激在保育栏没有发病的猪,很可能就会发病,在这一时期加强机体免疫力,很有必要。
8.预防
消毒时控制疾病发生一种很有效的预防手段,全场要进行定期消毒,特别是产房和保育栏。
疫苗接种要注意本产和周围地区过去几年发生过怎样的疾病,通过这些制定有效的疫苗接种程序,特别像猪瘟,蓝耳病,圆环病毒,细小病毒,肺炎支原体,口蹄疫,链球菌等常见疾病,这些病一旦发生将造成大面积的感染和重大经济损失。9疾病
一旦发生像严重传染病之类的,要严格隔离病猪,死亡猪要合理处理,未发生病的猪要做好预防工作。
通过两个月的猪场学习,基本了解到了生产程序,但未能深入,只能以自己浅薄的见解总结一下,特别是疫苗接种和疾病控制这两方面更加的未深入。下面谈论一下我个人的看法或者观点。
就目前养猪业发展来看,疾病发生率越来越高,疾病变异性逐年上升,就我所在实习的场而言疾病已到了一个非常严重的地步(个人观点仅供参考)。造成这种现象的原因我归纳为一下几点;1)抗生素和其他药物的乱用,使细菌及病毒的耐药性越来越强,另一方面也造成变异。
2)疫苗接种程序不合理,疫苗质量有问题,疫苗注射人员技术不过关。
3)引进带病种猪,没有自繁自养。
4)管理不当,例如;人员随便进出生产区域,引进霉变饲料等
5)没用专业人士指导(特别是小规模养殖户)。
6)兽药开发跟不上,许多场用的还是人用药物。
7)没有保健工作,一味的节约成本,到最后损失反而加大。
针对以上几点我认为;要养好猪预防保健是关键,没有比这更加重要的了。许多场的老板为节约成本,想着法子的省钱,预防保健没有做好,一旦发病又乱用抗生素,前期效果可能还有,耐药性一旦产生就无药可用,到最后猪还是死了,药费加死猪的成本足够做预防保健了好几次了。一个养殖场没有专业人士是一件非常不合理的事情。专业人士可以最大限度的调动资源,利用资源,减少资源的浪费。现在猪的疾病多种多样已不是以前养猪业,凭借一点经验就可以养好猪,经验固然重要,但是疾病的多变性,不得不采用先进的技术,才能正确的诊断疾病。
第五篇:动物病原微生物实验室检验实习总结
山西农业大学
教学实习总结
专 业 动物检疫
年 级
班 级
姓 名 学 号
指导教师 赵宇军
职 称 副教授
动物病原微生物实验室检验实习总结
实习时间:2012年5月8日至8月13日
实习地点:山西农业大学兽医微生物与免疫学实验室
指导老师:赵宇军
实习内容:时间过的很快,转眼间三年的大学生活就结束了,我们动物检疫专业的同学从五月份开始了为期3个多月的教学实习,在众多辅导老师之中,我有幸跟随我校动物科技学院预防系的赵宇军教授进行学习。实习地点为我校兽医微生物与免疫学实验室。实习内容自行选择。在老师的带领下我进行了大肠杆菌的实验室检测和食物中金黄葡萄球菌的检验。下面我们来回顾这次实验。
大肠杆菌的实验室检测
一、培养基配置
我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌,培养后可在LB固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤:
1.称量:准确称取各成分。蛋白胨0.5g,酵母提取物0.25g,氯化钠0.5g,加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g琼脂。
2.溶化:加热熔化,用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂,整个过程不断用玻棒搅拌,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。3.调pH:用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。
4.灭菌:在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基,加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好,放入灭菌锅内,1kg压力灭菌15min。5.倒平板:灭菌后,待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是:①将灭过菌的培养皿放在火焰旁,右手拿装有培养基的三角瓶,左手拔出棉塞;②右手拿三角瓶,使三角瓶的瓶口迅速通过火焰;③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖;④待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置。
二、灭菌和消毒 1.无菌技术:①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒;②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌;③为避免周围微生物污染,实验操作应在酒精灯火焰旁进行;④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。2.消毒方法:①日常生活经常用到的是煮沸消毒法;②对一些不耐高温的液体,则使用巴氏消毒法;③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果,然后使用紫外线进行物理消毒;④实验操作者的双手使用酒精进行消毒。3.灭菌方法:①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法;②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅;③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯。
三、细菌的分离
采用划线分离法,其操作步骤是:将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态,在火焰旁将培养皿稍微打开。在此同时,用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液,迅速送入培养皿内,在平板培养基的一边,作第1次平行划线 3~5条,转动培养皿约70°角,用烧过冷却的接种针,通过第1次划线部分作第2次平行划线,然后再用同样方法,通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线时,接种针应与平板表面成30°角左右。不要使接种针碰到培养皿边缘,也不要将培养基划破。划线完毕后,盖上皿盖,倒置于恒温箱培养。
四、菌落和菌种种类的辨认 细菌的菌落表面一般是光滑而湿润的,有黏稠性,多数透明或半透明,但也有细菌的菌落表面是干燥、有褶皱的;放线菌由于有纤细的菌丝并可产生孢子,所以菌落表面是紧密的绒状、坚实多皱,长孢子后就成粉末状,由于菌丝和孢子有多种色素,所以在菌落培养基底部和菌落表面都有不同的颜色,菌落不易用接种环挑动;酵母菌落类似于细菌菌落,表面光滑而湿润,有黏稠性但大多呈乳白色,少数呈红色。
食品中金黄葡萄球菌的检测方法
金黄色葡萄球菌是一种引起人类和动物化脓感染的重要致病菌,也是造成人类食物中毒的常见致病菌之一。本菌广泛分布于自然界,如空气、土壤、水及其它环境中。在人类和动物的皮肤及外界相通的腔道中,也经常有本菌存在。据报导,在正常人群中的带菌率可达30%~80%,其中皮肤带菌率为8~22%,鼻腔和咽喉部等上呼吸道的带菌率在40~50%以上,因此其可通过各种途径和方式,尤其是经工作人员的手和上呼吸道而污染食品。由于致病金黄葡萄球菌能产生肠毒素,故一旦细菌污染食品,并在合适的温度环境下,细菌可以大量繁殖并产生肠毒素,从而引起消费者食物中毒。
我国对金黄色葡萄球菌目前采用的方法是以国家标准GB.4789-10-84及检验检疫系统行业标准SN.0172-92作为依据。整个检测过程获得最终结果须时5天左右,既费时又费力,并造成货物积压,也影响货物的及时出运,并使货主的仓储成本提高,造成较大的经济损失。
多年来很多食品微生物实验室都在探索和寻找一些准确性高,并快速的检测方法,最近我们分别从美国3M公司和法国生物梅里埃公司获得两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌的培养基,其名称为:
① Petrifilm RSA.Count Plate(由美国3M公司研制生产),是一种薄膜型快速检测金黄色葡萄球菌的计数平板。
② Baird-parker + RPF Agar.(由法国生物梅里埃公司研制生产的用Baird-Parker琼脂加免血浆纤维蛋白原的金黄色葡萄球菌检测计数平板)。
一、实验原理
Petrifilm.RSA.测试薄膜是由二部分组成。第一部分是由黄金色葡萄球菌培养基片,此培养基中含有经修正的Barid-Parker,营养成分加上以冷水可溶解的胶质。第二部分是一种耐热核酸酶(TNase)反应片,含有DNA及甲苯胺兰(Toluidine Blue-O)及四唑指示剂(Tetraeolium)。此指示剂有助于菌落的计数及确定葡萄球菌耐热核酸酶的存在。
耐热去氧核糖核酸(deoxyribonulcas Dnase)为产毒金葡菌之典型特征,此酶非常耐热,在100℃加热30min,不易丧失活性,在130℃之下,其D值为16.6min,此酶之分子量为16800,等电点PH为9.6,耐热去氧核糖酸与检测血浆凝固酶相似,是一种鉴定金黄色葡萄球菌的方法,在Petrifilm.RSA 检测片上,耐热DNA酶反应看起来,呈粉红色环带包围着一个红色或兰色的菌落。
Petrifilm.RSA检测片,必须与Peyrifilm耐热核酸酶反应片一起使用,单独使用将不会显示菌落,因为具有辅助计数菌落的指示剂是在反应片上,而不是在Petrifilm.RSA检测片上。
Baird-parker + RPF agar,这一培养基中含有丰富的营养成分,其中以氯化锂代替亚碲酸钾,使菌落颜色呈黑色,RPF补充有兔血浆和牛纤维蛋白原,以便检测凝固酶活力,胰酶可以抑制全部或部分围绕凝固酶阳性菌落周围沉淀晕环纤维蛋白的溶解,因此凡存在血浆凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌,将在培养基中呈现有晕环的黑色菌落,即可确认,并作计数。
二、实验步骤
材料和方法:
本次实验采用以下3种试剂:
1.美国3M公司提供的Petrifilm.Rapid.S.aureus Count Plate.2.法国生物~梅里埃公司提供的Baird-Parker + RPF agar.3.实验室自配Baird-Park琼脂(英国Oxoid)及新鲜兔血浆。
菌种来自美国菌种保存中心(America TyP Culture Collection)。金黄色葡萄球菌共10株菌株,其菌号分别为:
ATCC 27661 ATCC 27664 ATCC 13565 ATCC 51704
ATCC(K)12600 ATCC(R)65389 ATCC 25923 ATCC 29213 ATCC 8095 ATCC 12598
非金黄色葡萄球菌菌种5株,其菌号分别为:
ATCC 51813(大肠杆菌)、ATCC 624(无乳链球菌)、ATCC 51816(阴沟肠杆菌)、ATCC 6051(枯草杆菌)、ATCC 49214(肠炎沙门氏菌)、自然食品检样,任意购自市场。
本次实验是以同一测试样品经均质并通过无菌生理盐水作10倍递增稀释后取1至2个稀释度同时接种上述三种培养基作平行实验,在取得最终结果后相互进行比对。
上述三种培养基的接种方法是按生产商所提供的使用说明进行操作,另外Baird-Parker Agar 培养基是按SN0172-92标准进行操作。
A、本次实验共测试已知标准菌种共15株,其中葡萄球菌10株,其他菌种5株(包括大肠杆菌、阴沟肠杆菌、肠炎沙门氏菌、枯草杆菌和无乳链球菌)。
B、测试自然食品检样共101只(其中包括肉11只、肉类14只、水产品17只、牛奶25只、蔬菜22只、豆制品12只)。
三、实验结果:
A、被检菌种10株,金黄色葡萄球菌在三种培养基上都能检出生长情况良好,同一稀释度的菌液,除个别菌株外在3种培养基计数检测结果基本都在一个数量级上,无显著差异。而5株非金黄色葡萄球菌的菌株在三种培养基上全部不能生长。
B、自然食品检样共接种101只,每一检样同一稀释浓度分别同时种三种培养基,最终共检出金黄色葡萄球菌45只,占全部检样的44.5%,其中Petrifilm RSA 检出阳性结果为42只,占全部阳性检样的93.3%,Baird-Parker+RPF Agar.检出阳性结果26只,占全部阳性检样的57.7%。Baird-Parker.Agar 检出阳性结果32只,占全部阳性检样的71.1%。
四、实验讨论
1.用15株标准菌在3种培养基中的检测,10株金黄色葡萄球菌以同一浓度接种,结果生长良好,其最终计数基本一致,定位在同一数量级,5株非金黄色葡萄球菌接种上述三种培养基全部不长,说明上述三种培养基对金黄色葡萄球菌选择良好。
2.以101只自然样品同一均质稀释液,同时接种三种培养基,从最终结果来看,对金黄色葡萄球菌的阳性检出率为44.5%
3.从检测程序来年,Petrifilm.RSA及Baird-Parker+RPF.Agar.都在样品接种后28~30h观察结果,并不必再做证实试验,而如以Baird-Parker Agar检测,须在接种后48h观察平板,并挑取可疑菌落转种到营养肉汤中,在经18-24h后做血浆凝固酶或耐热DNA酶试验进行证实,最终计数,前后约须80h。
4.从本次试验中观察,使用上述三种培养基对食品中金黄色葡萄球菌含量的直接计数检测,其样品接种液的含量拟控制在100个/ml以内,比较容易分清并计数,如菌量过浓,则将会影响最后的读数,因此对新送的被检样品,如在不了解污染的情况下一般必须要做2个以上的稀释度,同时分别接种,才能获得较为满意的结果。
而在Baird-Parker+RPF Agar及Baird-Parker.Agar接种时必须将1ml样液作三只平板涂布(0.3、0.3、0.4ml)这样就会造成手续繁琐试剂消耗较大,但Baird-Parker.RPF.培养基也可以1ml样液作倾注培养,并作计数。
5.在整个测试过程中,我们发现,按使用说明对Petrifilm.RSA.及Barid-Parker+RPF.Agar,操作规定在接种24h后观察结果,此时往往由于菌落长得经较小,特征瓜不明显,但如果继续放置一夜以后金葡萄菌落特征明显,并可能会经第一天观察数量有所增加,这样可以提高检测结果的可信度。
6.由于对上述两种培养基的试用期间我们尚未获得供应商的报价,故无法测算每一样品的测试成本价格。但可以予计上述两面种快速检测培养基的耗材费用要高于常规经典方法(Baird-Parker Agar)的费用。
7.通过本次实验,我们感到使用美国3M公司生产的Petrifilm.RSA Plate培养基和法国生物-梅利埃公司生产的Baird-Parker RPF.Agar培养基检测中的金黄色葡萄球菌。可以比目前常规检测方法时间可缩短一半。并可以明显节省大量人力。这完全符合实验室快速检测的要求,尤其是对基层较简陋的实验室条件中,更显其使用方便的优越性。
实习总结:通过这次严谨而有序的实验实习,为我们先前在教学中学习到的知识提供了一个实际的操作实施平台,也为今后在这方面检验技术的工作起到了指引作用。在过去的学习中,我们并不了解具体的病原微生物实验室检验技术的具体流程,注意事项等等非常关键和必须的防御手段。通过此次生产实习,使我们对以前所不熟知的问题有了深入的认识,也对目前的情况有所思考和感悟。在我看来,动物检疫人员在我国国民生活中起到了关键作用,民以食为天,没有认真负责的实验检测,将给社会带来巨大的饮食灾难,为此,我感到非常自豪和骄傲。在今后的工作学习中,我将一如既往的认真下去,无愧自己的职责和称号。
在此感谢我院的各级领导,特别是我的指导老师赵宇军教授。