植物病理学实验大纲

第一篇：植物病理学实验大纲

实验部分

实验

一、植物病原学（3学时）

实验目的：认识植物传染性病原物的主要类型及其形态特征、致病机制等，明确重要病原生物的主要分类鉴别特征及其致病特点，初步掌握不同类型病原生物的诊断和鉴定要点，学会识别诊断和防治不同类型病原物所引起病害的一般方法。

实验内容：植物病害的描述方法，包括的病害的病状和病症，病状类型主要有变色、坏死、萎蔫、腐烂、畸形等，病症主要有霉状物、点状物、粉状物等类型；非侵染型病害主要包括缺素、环境因素、药害等类型。

实验

二、植物病原真菌形态与分类（3学时）

实验目的：认识病原物致病性因素及其变异,明确寄主抗病性的类型及其复杂性,初步掌握寄主─病原物相互关系的理论学说，学会用运所学理论分析解决生产上品种抗性丧失问题及其相应的对策。

实验内容：植物病害病原物的营养体形态特征、营养体的变态与组织，真菌繁殖方式：有性无性繁殖类型，以及繁殖体孢子类型；真菌分类概述；病原生物其他类型如：原核生物、病毒、线虫、寄生性种子植物等形态特征。

实验

三、植物病害循环与病程与防治（3学时）

实验目的：认识病害循环和侵染过程，明确病害流行的时空动态、流行类型及影响因素，掌握病害预测预报的一般方法，为今后制订有效的防治病害对策提供理论依据。

实验内容：了解植物病害侵染植物原物侵染植物病发病的过程，影响病程的因素，以及植物病害循环的特点，越冬越夏场所，了解植物病害的防治方法，保护作用、治疗作用，并掌握病害防治的常用技术。

实验

四、小麦病害和杂谷病害（3学时）

实验目的：掌握小麦和杂谷主要病害的症状和病原菌形态。

实验内容：小麦三种锈病；小麦白粉病；小麦根腐病；小麦黄矮病；玉米大斑病；玉米小斑病；玉米丝黑穗；玉米病毒病等的症状标本和玻片标本。

实验

五、薯类和棉花病害（3学时）

实验目的：掌握薯类和棉花主要病害的症状和病原菌形态。

实验内容：马铃薯晚病病；马铃薯病毒病；马铃薯环腐病；棉花苗期病害；棉花枯萎病；棉花黄萎病的症状标本和玻片标本。

主要实验用书及参考书：

《普通植物病理学实验指导》，许志刚主编，中国农业出版社1997； 《农业植物病理学实验实习指导》，李宏连主编，北京农业出版社2001 《植病研究方法》，方中达主编，中国农业出版社1996

第二篇：植物病理学 实验讲稿

园艺植物病理学实验讲稿

生命科学与农林学院

2014年8月

目录

实验一

植物病害症状的观察 实验二

植物病理徒手切片制作 实验三

真菌的形态观察

实验四

鞭毛菌亚门真菌形态观察 实验五

接合菌亚门真菌形态观察 实验六

子囊菌亚门真菌形态观察 实验七

担子菌亚门真菌形态观察 实验八

半知菌亚门真菌形态观察 实验九

培养基的制作 实验十

病原菌的分离培养 实验十一

植物的抗病性鉴定

实验一

植物病害症状的观察

一、实验目的

1.认识各类病害对植物造成的危害，了解植物病害的种类及其多样性，2.初步掌握主要病害的症状表现及其特点，学会植物病害症状的描述，为今后病害的诊断奠定基础。

二、实验原理

植物病害的症状是植物患病后由于异常生理活动而发生在细胞和组织上的病理变化，最后表现为肉眼可见的形态变化。有些症状也可用嗅觉、味觉或触摸进行观察。有的症状是单个细胞表现的症状，在这类症状中，最常见的是受某种病毒侵染的植株中所见到的细胞质内含体。

植物病害的症状可区别为两类不同性质的特征：病状和病征。病状是一定的寄主植物和病原在一定外界条件的影响下相互作用结果的外部表现，是以各自的生理机能或特性为基础的，而每种生物的生理机能，都是在质上有特异性，并且是相对稳定的。病变，作为这种相互作用过程的结果，一般说其发展是定向的。病状作为病变过程的表现，其特征也是较稳定的和具有特异性的。这就是利用病状诊断植物病害的基础。

病征是由病原微生物的群体或器官着生在病体表面所构成的，它更直接地暴露了病原物在质上的特点。如真菌子实体在寄主表面形成的霉层、黑点等。由植物病毒、植原体、许多病原细菌、非侵染性植物病害等没有病征的表现。病征的出现与否和出现的明显程度，虽受环境条件的影响很大，但一经表现出来却是相当稳定的特征，所以根据病征能够正确的判定病害。不同植物的任何病害都具有其独特症状，通常在病害发生过程中按一定顺序出现。病理学家正是根据这种顺序出现的症状在田间诊断植物病害。

病状和病征，尤其是前者，作为诊断病害的依据也有其局限性。首先是许多植物病害常产生相似的病状，因此要从各方面的特点去综合判断；其次，植物常因作物品种的变化或受害器官的不同，而使病状有一定幅度的变化；第三，病害的发生发展是一个过程，有初期和后期，病状也随之而发展变化；第四，环境条件对病状和病征有一定的影响，尤其是湿度对病征的产生有显著地作用，加之发病后期病部往往会长出一些腐生菌的繁殖器官。因此，症状的稳定性和特异性只是相对的，要认识症状的特异性和变化的规律，在观察植物病害时，须认真地从症状的发展变化

中去研究和掌握症状的特殊性；观察和采集植物病害标本，仔细地区别病征的那种微小的、似同而异的特征，这样才能正确地诊断病害。

三、实验材料、试剂与器材

1.按照植物病害的病状类型（变色、坏死、斑点、腐烂、畸形）和病征类型（粉状物、霉状物、点状物、菌核、溢脓等）准备植物病害的盒装标本、瓶装浸渍标本及新鲜标本（不同类型的病状和病征的标本可根据当地的情况准备）。

2.各类症状的挂图、模型、多媒体课件等。3.实体显微镜、手持扩大镜、水果刀、载玻片等。

四、实验步骤

（一）病状的观察

1．斑点 观察玉米大斑病、棉花角斑病、棉花黑斑病、大麦条纹病、小麦根腐叶斑病、大葱或大蒜紫斑病、花生网斑病、番茄早疫病、十字花科霜霉病等标本，注意不同类型病害所表现病斑的形状、大小、颜色等的异同以及病斑上有无轮纹、花纹伴生，同时注意观察各类病斑上有无病征以及病征的特点。斑点类发生在叶、茎、果等部位，受病组织局部坏死，一般有明显的边缘。斑点中还可以伴生轮纹、花纹等特点，根据病斑的颜色、形状等特点而分为褐斑、黑斑、紫斑、角斑、条斑、大斑、小斑、胡麻斑、轮纹斑、网斑等多种类型。

2．腐烂 观察甘薯黑斑病和干腐病病薯、马铃薯晚疫病和环腐病病薯、棉苗立枯病、柑桔溃疡病等病害标本，认识该类病害对植物所造成的危害，同时掌握这类病害的病状特点。腐烂类病状发生在植物的各个部位，由于组织分解的程度不同，有软腐、干腐之分。根据腐烂的部位，有根腐、基腐、茎腐、果腐、花腐等名称，还伴随有各种颜色变化的特点，如褐腐、白腐、黑腐等。

3．萎蔫 观察棉花、黄瓜等植物枯萎病、棉花和茄子黄萎病、玉米和茄科植物青枯病、马铃薯环腐病等标本，注意区别枯萎、黄萎、青枯等病状类型，必要时可以剖开病株茎杆观察微管束是否褐变。典型的萎蔫病状是植物根、茎的维官束组织受到破坏而发生的叶片或枝条萎垂现象，皮层组织完好，萎蔫病害常无外表的病征。植物受萎蔫菌侵染后，不一定都能引起萎蔫，发病初期有半边叶片、半个枝条萎垂的现象，但更常见的是全株性萎蔫。

提示 对于萎蔫类病害病状的观察应以新鲜标本为主，有条件时最好在田间进行，这类病害发生具有一定的地域性，观察时要注意其微管束组织的病变，干标本则失去了原有的特点。

4．变色 变色主要有两种类型。一种表现为黄化，是整个植株或叶片部分地或全部地均匀褪绿、变黄，或呈现其它的颜色。多数伴生有整株或部分的畸形。另一种为花叶，病株叶片色泽浓淡不均，深绿与浅绿部分相间夹杂，一般遍及全株，上部叶片较为显著，无病征表现。比较观察烟草花叶病、苹果花叶病、小麦黄矮病、瓜类、十字花科和茄科植物的病毒病病状、注意每一种病害的病状特点。

5．畸形 畸形类病状由不同组织、器官的病变，如叶片的膨肿、皱缩、小叶、蕨叶；果实的缩果及其它畸形；整个植株的徒长、矮缩；局部器官如花器和种子的退化变形和促进性的变态等。瘤、瘿、癌、丛枝和发根也是常见的畸形病状。观察桃缩叶病、十字花科根肿病、马铃薯癌肿病、果树根癌病、桑树根结线虫病、油菜白锈病、番茄蕨叶病、枣疯病、泡桐丛枝病、玉米黑粉病、小麦粒线虫病、水稻恶苗病等，归纳各类标本的病状类型。

（二）病征的观察

1．粉状物 借助手持扩大镜或实体解剖镜观察麦类锈病、十字花科白锈病、麦类白粉病、、玉米黑粉病和麦类黑粉病等病害标本，注意粉状物的颜色、质地和着生状况等。

2．霉状物 借助手持扩大镜或实体解剖镜观察黄瓜霜霉病、甘薯软腐病、瓜类软腐病、柑桔青霉病、番茄灰霉病和番茄叶霉病等病害标本或瓶装标本。注意区别霜霉、黑霉、绵霉、青霉和灰霉等不同类型的霉状物。

3．点状物 取小麦白粉病、瓜类炭疽病、棉花茎枯病、芹菜斑枯病、苹果树腐烂病和麦类赤霉病等病害标本，借助手持扩大镜或实体解剖镜观察，注意点状物是埋生、半埋生还是表生，以及在寄主表面的排列状况、颜色等。

4．菌核 观察油菜菌核病和水稻纹枯病等病害标本，注意菌核的大小、形状、颜色、质地等，并观察菌核萌发状况。

5．溢脓 溢浓为细菌性病害特有的病征。观察水稻白叶枯病、水稻细菌性条斑病、十字花科细菌性软腐病、棉花角斑病和黄瓜角斑病等病害标本，注意溢脓的颜色、出现位置等。用剪刀将植物病组织剪成 4mm 2的小块，放于载玻片上，加一滴水，盖上盖玻片，在显微镜下观察或直接用载玻片对光观察喷菌现象。

五、实验报告及作业

将上述病害标本的发病部位，病状类型和病症类型，填于下表：

植物病害症状观察表

病害名称

发病部位

病状类型

病症类型

1.植物病害的主要特征是什么? 2.症状在病害诊断上有什么作用? 3.植物病害对农业生产的危害性如何?

实验二

植物病理徒手切片制作

一、实验目的

观察植物病害病原物的形态，进行病原物的分类鉴定，研究受病组织的组织结构病变，受病植物组织与病原物的解剖学关系，以及对于难得一见病原物的保存备用等，都需将材料制成适当的显微玻片标本。因此，徒手制片技术也是植物病理学研究的重要手段之一。通过本次实验系统学习实践常用的徒手制片技术，为以后开展植物病理学的有关研究工作奠定坚实的制片技术基础。

二、实验材料、试剂和器材 1．受病植物组织

2.解剖针、刀片、剃刀、移置环、酒精灯、载玻片、盖玻片、毛笔、浅玻皿、浮载剂、70%酒精、乳酚油、展片台、光学显微镜

三、实验内容及方法

徒手制片的方法有整体封藏法、徒手切片法、组织透明制片法和涂抹制片法等多种。限于时间本实验实践最为常用的整体封藏法和徒手切片法两种。(一)

整体封藏法

对于生长在植物病部表面或培基上的菌丝体、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及线虫等，可直接择取少许封藏在适当的浮载剂中，在显微镜下观察，根据材料的特点和观察的目的可采用不同的方法封藏制片。常用的方法的概括为挑、刮、拨、撕四种。

1挑：对于在植物受病部位或基质表面生长繁茂的霉状病原体(如霜霉菌)粉状病原体(如锈菌、白粉菌)以及培养基上的许多培养菌，可用尖细的解剖针等直接挑取封埋制片，挑取病原体的量，在保证选材典型的前提下，越少越好，以免互相重叠，分辩不清。

取黄瓜霜霉病叶，小麦白粉病叶分别挑取霉状物和粉状物镜检病原菌的形态特点。

2刮：对病部病原体稀少，或用放大镜也难辩认霉层的病害标本，可采用两侧具刀的三角刮针(或可用刀片代替)刮取病原物制片。刮的方法是，用刮针的一刃，蘸浮载剂少许，在病部顺同一个方向刮取2—3次，将刮得的病原蘸在载玻片的浮载剂

中封片镜检。浮载剂在保证浮载质量的前提下要尽量少，否则少量的病原体在大滴的浮载剂中极易分散漂流，在显微镜下难以寻找。取玉米小斑病叶，在病斑背面刮制片，镜检分生孢子梗和分生孢子的形态。

3拨：对于产生在植物表皮下或半埋生于基物内的病原体孢子器官。如子囊壳、分生孢子器、闭囊壳等，可将病原体连同寄主组织一同拨下，放入浮载剂中，用两支解剖针，一支稳定材料，另一支拨出植物组织，使病原体外露制片。取小麦全蚀病或白粉病标本，拨小黑点制片，镜检子囊果的形态。

4撕：对于寄生在植物表皮细胞上的病原真菌，也可以将此有病原物的表皮撕下来制片镜检，这种方法不仅能看到病原物形态，而且可以观察病原物与寄主的解剖学关系。

在毛毛雨天自田间取回感染白粉病的麦苗(或在保温箱中取接种染病的麦苗)。用刀片割破叶背表皮再用小镊子轻轻撕下，放在浮载剂中制片镜检白粉病菌分生孢子梗、分生孢子和吸器形态。(二)徒手切片法

欲观察受病组织病变，病菌侵入和寄主体内扩展过程，以及埋生在基物内真菌子实体的形态结构等，都需将有关材料切成薄片，进行镜检，徒手切片是最常用的简便易行的方法，不需要特殊的设备，而且节省时间，切成的片子不仅可作临时观察，也可进一步制成永久性玻片标本。

徒手切片的基本用具是剃刀或刀片。切片时先选取材料并作适当的修整，以左手的食指和姆指捏住材料，中指顶住材料下端，使材料上端突出于手指以上2—3毫米。右手握稳刀，从左向右后方斜向切割。注意刀口必须以材料面垂直。否则所得切面不正。同时双手不应紧靠身体，而是要活动自如。用臂力均匀地沿刀口后部起拉向前方，连续切割4—5片后，用毛笔蘸水轻轻沿刀口取下，放入盛有水的浅玻皿中，在此过程中左手握着的材料不要放下，否则再切时难按原位置拿材料，此外，在切片过程中，必须常用毛笔蘸水湿润材料，以免材料干涸不便切割。

对于过于柔软或较薄的材料，可以夹在“夹持物”中，进行切片更为方便。新鲜胡鲜卜和马铃薯块都可作“夹持物”用。实验室中通常将通草、接骨木或向日葵的茎髓，剪成适当大小，浸于70%酒精中备用。

切割一定数量的薄片后，用移置环在浅玻皿中选取合用的材料薄片，放在载玻片的水滴中，镜检合格者即酒精灯上将水烘干并摆正材料，然后加一滴乳酚油或其浮载剂；放在展片台上略加热，镜检如无气泡，即可小心加盖片，用吸水纸吸除多余的浮载剂，最后贴好标签，平放于切片板上，待干燥适宜时封固。

徒手切片的缺点是对于微小或过大，柔软、多汁、肉质及坚硬的材料不易切取，也难制成连续切片，此外切片的厚薄也难一致。切片机切片即可克服这些缺点。

病名： 学名： 制片人： 时间：

切片的标签制法

四、实验报告及作业

1．每人交两片符合质量要求的玻片标本。

2.整体封藏法和徒手切片法两种基本徒手制片技术都在什么情况下使用? 徒手切法制片有什么优缺点? 怎样解决这种方法本身存在的问题? 附：常用浮载剂及封固剂

1.水作浮载剂：最常用，但易于干燥，仅适于暂时性检查，不易封固保存，且易形成气泡(检查材料以酒精、5%明胶、水或稀肥皂水稍浸，洗净后再以水浮载可除去气泡)。

2.乳酚油：也较常用，成分及配比如下：

苯酚结晶(加热熔化)20ml

乳酸20ml

甘油40ml

蒸馏水20ml

乳酚油不易干燥，标本可存放几天以上，为使标本易于辩别，常在其中加染料苯胺蓝(棉蓝)，用量是0.05—0.1%(也有的加0.2—0.5%的锥虫蓝等)，因其是酸性染料，可染真菌原生质而不染细胞壁，故对分隔难辨的真菌孢子等可由此染色而看清。此法一般只用观察菌态，不适于测量孢子的大小(因为乳酚油的折射率近于孢子和菌丝体，1.43左右)。另一方面，此法制片，封固比较困难(因为乳酚油易于和封固剂起化学作用而分解)，可用达马树脂(和乳酚油不起化学作用)和等量蜂蜡混配做封固剂，蜂蜡放于玻璃皿中在水槽上熔化(温度勿过高)，达马树脂在铁罐中熔化(温勿过度)，然后将蜂蜡倒入熔化的达马树脂中搅和而成(加少量的贴金胶水，可增进与玻璃的附着力)，封固时以“L”形铜棒等在煤气灯上烧热后，蘸少许封固剂在盖玻片周围封固，此封固剂干燥快，经久不坏。但由于其致癌作用而逐渐被淘汰而改用甘油乳酸液。

3.甘油乳酸液：也可加苯胺蓝等染料，其成分如下：

乳酸

500ml

甘油

1000ml

蒸馏水

500ml

4.水合氯醛碘液：成分配比如下：

水合氯醛

100g

碘化钾

5g

碘

1.5g

水

100ml

碘与碘化钾研和，加水溶解。然后与水合氯醛混合，此浮载剂较好，能使真菌组织透明，并染上颜色，能弥补乳酚油的不足，一一看清细胞壁和其它结构，此法制片只可保存几天，不宜久存，为保存，可除去碘液再用乳酚油浮载后封存。5.甘油：此浮载剂适于保存藻类、水霉菌等柔软标本将标本放在一滴10%的甘油中，加盖玻片，水分蒸发后，随时补加甘油至水分蒸发净，制成的标本玻片平放可经久不坏，(擦去多余甘油，用香脂油或其它封固剂封固，可永久保存)。6.甘油明胶：成分及配方如下：

明胶

5g

甘油

35ml

水

30ml

明胶在水中浸透，加热至35℃溶化，加甘油搅和，用纱布过滤后使用。

徒手切片及其它标本，都可用此剂浮载制片，标本染色(或不染)后，先用甘油脱水(干燥标本可不脱水)，挑取小团甘油明胶放在载片上，微加热，待其熔化而气泡消失后，将标本取出吸除去多余甘油后移入熔化的甘油明胶中，加盖玻片轻轻下压，擦去盖玻片周围的多余甘油明胶。平放十几天，干后长期保存，用香脂或其它固剂封固后长久保存。

此浮载剂对于干燥标本易出气泡，用醋酸甘油先予处理可防此弊，成分配比如下：

醋酸钾(2%水溶液)300ml

甘油

120ml

酒精

180ml

标本放在载玻片上加小滴醋酸甘油，微加热以除气泡，并蒸去大部分油剂，趁热加入小团甘油明胶，熔化后加盖玻片，其后步骤同上。

实验三

真菌的形态观察

真菌分布广泛，种类繁多，已报导的将近

45000多种，是植物病原生物中最主要的一大类群，它所引起的病害占植物病害的80%以上，尽管真菌形态差异很大，但基本结构相似，大多数真菌有营养体和繁殖体之分，营养体是指吸收养分的器官，繁殖体是指从营养体上产生的各种类型的孢子。

真菌产生孢子的机构，无论是有形性的还是无性的，统称为子实体。真菌的孢子分为无性孢子和有性孢子两类。无性孢子有游动孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子；有性孢子有休眠孢子囊、卵孢子、接合孢子、子囊孢子和担子孢子。真菌孢子的形态特征是鉴定和分类学上的重要依据，其营养体及其变态和菌组织体则是真菌分类的重要参考依据，有的还是重要的鉴别特征和分类依据。

一、实验目的

通过本次实验熟悉真菌的营养体和繁殖体的基本形态，为以后真菌病害的病原物鉴定和真菌分类奠定初步基础。

二、实验内容、材料和方法(一)真菌的营养体 1菌丝和菌丝体

除少数原始的类群以外，真菌典型的营养体是极为细小的丝状体，这种丝状体称为菌丝，生长成丛的菌丝称为菌丝体，低等真菌的菌丝是无隔的，大多数真菌是有隔的。

(1)挑取马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)或瓜果腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)制片，镜检无隔菌丝。

(2)挑取立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)制片镜检有隔菌丝。

(3)观察各种病原真菌在平面和斜面培养基上形成的菌落，注意菌落大小、形状、厚薄、质地、颜色等形态特点。2菌丝组织体

有些真菌的菌丝体，在一定的条件下或一定的发育阶段，可形成特殊的组织体，常见有菌核、子座和根状菌索。

(1)菌核：菌核是由拟薄壁组织和疏丝组织形成的一种休眠体，既是真菌贮藏养分的器官，又是真菌用以度过不良环境的休眠机构，菌核大小不一，色泽和形状也各不相同。菌核中的菌丝组织已有分化现象，外皮组织细胞排列紧密，色深壁厚，具有保护作用，为拟薄壁组织；内层细胞壁薄色淡，排列疏松，仍可维持营养作用，为疏丝组织。

肉眼观察麦角病、油菜菌核病、黄瓜菌核病和大葱菌核病标本，比较菌核形状、大小、颜色；镜检细辛菌核病的菌核制片，注意比较表皮与内部组织细胞的排列特点。

(2)子座：子座是由拟薄壁组织和疏丝组织形成的容纳子实体的座垫状结构，或由菌丝体与部分寄主组织结合而成的称为假子座。子座是真菌从营养体到繁殖体的过渡机构，除可在其上或其内形成子实体外，也有度过不良环境的作用。

肉眼观察稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)的分生孢子座；镜检苹果树腐烂病菌(Valsa mali)和稻

香

柱菌(Epichloe typhina)所形成的子座制片，注意子座形状，着生部位及内部繁殖体类别。

(3)根状菌索：少数高等真菌的菌丝体还可纠结成绳索状的组织体，形如高等植物的根，故称根状菌索，其作用是帮助菌体蔓延和抵抗不良环境，根状菌萦组织也有表皮和内部组织的分化。

肉眼观察林木上根状菌索的外部形状，注意和菌核比较，找出二者区别。

3菌丝体上分化出的吸收养分组织

(1)吸器：是寄生在细胞间的真菌，特别是一些专性寄生菌在菌丝体上形成的吸收养分的器官，形状有球状、丝状、掌状、裂片状等。

镜检小麦白粉病菌(Blumeria graminis)吸器制备片，注意吸器的形状及其形成的部位。

(2)假根：为伸入基物内的菌丝体，形如高等植物的根系，故称假根。假根除用其吸收养分外，还有固着菌体的作用。

挑取培养基中培养的甘薯软腐病菌(Rhizopus nigricans)的菌丝(注意针尖要插入培养基内)制片镜检或镜检根足霉(Rhizopus sp.)制备片，注意假根与普通营养菌丝的区别。

(3)附着胞：从幻灯片或照片观察病菌侵染寄主植物形成附着胞的形态。

(4)菌环和菌网：捕食性真菌常由菌丝分化成菌环和菌网组织来捕捉线虫等小动物，然后再由菌丝侵入线虫体内吸取营养。(二)真菌的繁殖体——孢子

真菌的繁殖方式分无性和有性两种，分别产生无性孢子和有性孢子两大类型。真菌的无性繁殖包括断裂、出芽和产生孢子等，真菌的有性生殖包括质配、核配和减数分裂三个阶段。

1无性孢子：不经过性细胞或性器官的结合便能产生孢子，称为无性孢子。真菌产生的无性孢子类型很多，主要的有游动孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子。

(1)游动孢子：游动孢子为鞭毛菌亚门真菌特有的无性孢子，产生在由菌丝顶端细胞或由菌丝分化成的孢子囊梗的顶端细胞膨大形成的孢子囊内、具鞭毛，能游动。

制片镜检用线麻粒诱发的绵霉和水霉的游动孢子囊和游动孢子，镜检番茄晚疫病菌(Phytophthora infestans)的游动孢囊梗、游动孢子囊和游动孢子。(2)孢囊孢子：孢囊孢子为接合菌亚门真菌特有的无性孢子，生成方式和游动孢子相似，也是内生的，但无鞭毛，不能游动。

挑取黑根霉(Rhizopus sp.)制片(或取制备片)镜检孢子囊梗，孢子囊和孢囊孢子，注意观察孢子囊的形态及其着生位置及孢囊孢子的形态，颜色和产生的数目。(3)分生孢子：子囊菌亚门真菌和大部分半知菌亚门真菌都产生分生孢子，分生孢子外生在分生孢子梗上，形状、大小、颜色不一，单生，链生或集生，分生孢子梗

有的散生，有的束生，有的产生在分生孢子盘上或分生孢子器内，产生在分生孢子器内的分生孢子也叫器孢子。

取玉米大斑病(Exserohilum turcicum)的病叶，用刀片轻轻刮取病斑上的霉状物制片镜检分生孢子梗和分生孢子或挑取斜面培养基上培养的小麦根腐病菌(Bipolaris sativum)制片镜检分生孢子梗和分生孢子，另取苹果灰斑病(Phyllosticta pirina)制片镜检分生孢子器和器孢子，注意分生孢子的形状，色泽，细胞数目及着生情况。(4)厚垣孢子：镜检厚垣孢子制备片，菌丝中或孢子中个别细胞膨大、细胞壁加厚的孢子即厚垣孢子。

2有性孢子：由两个不同的性细胞或性器官相结合而产生的孢子叫有性孢子，有性孢子主要有以下4种。

(1)卵孢子：部分鞭毛菌亚门真菌的有性孢子，由菌丝上产生的两种异形配子囊交配产生。制片镜检谷子白发病菌(Sclerospora graminicola)的卵孢子或镜检大豆霜霉病菌(Peronospora manshurica)卵孢子制备片，注意卵孢子形状、大小、颜色，孢壁形态。

(2)接合孢子：为接合菌亚门真菌的有性孢子，由两个同形配子囊交配而成。镜检毛霉(Mucor)接合孢子制片，注意接合孢子的大小，形状，颜色及表现特点。(3)子囊孢子：为子囊菌亚门真菌产生的有性孢子，由两个异形配子囊交配生成，子囊孢子产生在子囊内，多为8个，子囊除极少数子囊菌裸生外，多数子囊菌生于子囊果中。取山楂白粉病(Podosphaera oxyacanthae)病叶，用解剖针将白粉上的小黑点(闭囊壳)仔细拨至载玻片上的水滴中，加盖片并轻轻压破闭囊壳，镜检闭囊壳，子囊、子囊孢子和附属丝的形态，特别注意子囊的数目和附属丝的特点，另取油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotium 132)制备片，镜检子囊盘、子囊和子囊孢子。

(4)担孢子：为担子菌亚门真菌的有性孢子，由菌丝结合后减数分裂而成，外生于担子或先菌丝上。挑取萌发的玉米丝黑穗病菌(Sphacelotheca reiliana)制片镜检冬孢子、先菌丝及担孢子的形态，另取小麦腥黑穗病菌(Tilletia caries)冬孢子萌发的制备

片，镜检冬孢子、先菌丝及担孢子的形态，比较两种黑粉病菌的区别。

另外还有一种有性孢子为休眠孢子囊，由两个游动配子结合而成，为二倍体，萌发时减数分裂释放出单倍体的游动孢子。如壶菌、根肿菌可产生休眠孢子囊，根肿菌产生的休眠孢子囊萌发时通常只释放出一个游动孢子，有时也称为休眠孢子。

三、实验报告及作业

1绘有隔菌丝，无隔菌丝和菌核剖面图。

2绘分生孢子、孢囊孢子、卵孢子及子囊孢子的形态图。 3菌丝有无隔膜是否反应一定的进化关系? 4菌核和子座在形态和功能上有何不同?

5真菌吸器的有无与寄生性的强弱是否有一定关系?

6分生孢子和孢囊孢子的生成过程，形成数量(与产孢细胞比较)及着生部位等方面

有何不同?

7卵孢子、接合孢子、子囊孢子和担子孢子在有性生殖过程中形成的时期有何不同?

实验四

鞭毛菌亚门真菌形态观察

鞭毛菌是一类低等真菌，其中不少是水生的。它们的共同特征是无性繁殖时产生有鞭毛的游动孢子。根据菌体的形态和游动孢子鞭毛的特征分为根肿菌纲、壶菌纲、丝壶菌纲和卵菌纲。其中与植物病害关系较为密切的有根肿菌纲、壶菌纲、卵菌纲。

一、实验目的

了解鞭毛菌亚门中根肿菌纲、壶菌纲和卵菌纲真菌的主要形态特征，掌握与植物病害有关的重要属的形态特征、分类依据及所致病害的症状特点，同时学习使用检索表来鉴定病菌，为分类鉴定打下初步基础。

二、实验仪器与用品

显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备；载玻片、盖玻片、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、吸水纸、解剖刀、挑针、镊子、纱布、刀片、通草、酒精灯、无菌水等。

三、实验材料

1．芸苔根肿菌（Plasmodiophora brassicae）2.马铃薯粉痂菌（Spongospora subterranea）3．禾谷多粘霉（Polymyxa graminis）

4.玉蜀黍节壶菌（Physoderma maydis）

5．串囊水霉（Saprolegnia.monilifera）

6.稻绵霉（Achlya oryzae）

7.瓜果腐霉（Ｐythium aphanidermatum）

8.致病疫霉（Phytophthora infestans）

9.禾生指梗霉(Sclerospora graminicola)

10.葡萄霜霉病菌（Plasmopara viticola）

11.寄生霜霉（Peronopora parasitica）

12.瓜类霜霉病菌（Pseudoperonospora cubensis）

13.莴苣盘梗霉（Bremia lactucae）

14.十字花科白锈病菌（Albugo candida）

以上病害标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片，多媒体教学课件（包括幻灯片、录象带、光盘等影像资料）以及水霉和腐霉游动孢子形成与释放的录相带等。

四、实验内容和方法

（一）根肿菌纲（Plasmodiophoromycetes）

1.芸苔根肿菌 取甘蓝根肿菌切片，镜检切片中的病原菌。有的寄主细胞内可见到许多堆集在一起的鱼籽状颗粒，是病菌的休眠孢子。休眠孢子近球形。

2.马铃薯粉痂菌 镜检马铃薯粉痂病菌切片，在寄主根的皮层组织的受害细胞中可看

到病原菌的休眠孢子，球形至多角形，多个休眠孢子聚集呈海绵状或空心球。

3.禾谷多粘霉 选取有褐点的根，用解剖刀或镊子撕取小麦根基皮层，制成临时玻片，镜检。病菌的休眠孢子常有规律地呈条状排列。

提示 被寄生的表皮细胞呈褐色小点，必须仔细观察才能见到。

（二）壶菌纲（Chytridiomycetes）

玉蜀黍节壶菌（Physoderma maydis）观察由玉蜀黍节壶菌引起的玉米褐斑病标本。用针挑取受害病组织内呈黄色粉末状物制成临时玻片，或对病组织作徒手切片，镜检可见到许多金黄色扁球状的休眠孢子，休眠孢子椭圆形，一面扁平有盖。

（三）卵菌纲(Oomycetes)水霉目(Saprolegniales)

1.串囊水霉 引起水稻烂秧，又称水稻烂秧水霉菌。孢子囊圆筒形或棍棒状，层出式，即新的孢子囊从老的空孢子囊内基部长出，游动孢子具明显的两游现象。

2.水稻烂秧绵霉菌 孢子囊圆筒形或棍棒状，合轴分枝，新的孢子囊从老孢子囊的基部外侧长出，呈聚伞形排列，游动孢子第一个活动时期很短，休止孢在孢子囊顶部孔口处聚集成团。

霜霉目（Peronosorales）

1.腐霉属（Pythium）观察瓜果的腐烂病病果上的白色菌丝体，将生长旺盛的小块菌丝体移至清水中培养24～48h，菌丝顶端即形成大量游动孢子囊，用针挑取在清水中培养过的菌丝，观察腐霉菌的游动孢子囊，丝状、姜瓣状或球状等，顶生或间生，无特殊分化的孢囊梗。孢子囊不脱落，萌发时在其顶端产生一管状物，原生质经管状物排出而形成泡囊。游动孢子产生在泡囊内。

2.疫霉属（Phytophthora）取马铃薯或番茄晚疫病标本制片观察。孢囊梗2~3支成丛自气孔伸出，假轴状分枝，小梗基部膨大，多次产生孢子囊，使孢子囊梗上部呈节状；孢子囊近球状、卵形或梨形等，具乳突。

3.霜疫霉属（Peronophthora）取荔枝霜疫霉病标本挑取霉层观察，孢囊梗直立，双叉锐角分枝，孢囊梗多级有限生长。孢子囊柠檬形、椭圆形，乳突明显。

4.霜霉属（Peronospora）取十字花科植物（油菜、白菜等）的霜霉病标本从叶背面刮取霉层观察，孢囊梗二叉状锐角分枝，末端尖锐。

按照寄生霜霉的观察方法，选取禾生指梗霉、葡萄霜霉病菌、瓜类霜霉病菌、莴苣盘梗霉等材料，对照下列检索表，制片观察各种霜霉病的病原菌或观察病菌永久玻片标本，掌握霜霉科几个常见属的主要形态特征。霜霉科主要属的检索表

1.孢囊梗粗壮，上部为重复2～3次的不规则二叉分枝…………指梗霉属（Sclerospora）1.孢囊梗较细……………………………………………………………………………………2 2.孢囊梗单轴分枝，小轴与主轴成直角，分枝末端平钝………单轴霉属（Plasmopara）2.孢囊梗呈现锐角二叉分枝……………………………………………………………………3 3.分枝两侧不对称，顶端尖锐……………………………假霜霉属（Pseudoperonospora）3.分枝两侧对称…………………………………………………………………………………4 4.分枝顶端尖细……………………………………………………… 霜霉属（Peronospora）4.分枝顶部膨大，呈盘状，具3～4个指状周生小梗…………………盘梗霉属（Bremia）5.白锈菌属（Albugo）镜检苋菜白锈病菌组织切片，或取以上病叶徒手切片制成临时玻片镜检。孢囊梗平行排列在寄主表皮下，短棍棒形，孢子囊串生。白锈菌危害症状是在寄主表面产生乳白色或粉状的疱斑，这是病菌在寄主表皮下形成的孢子囊堆，白色粉状物是成熟的孢子囊。

五、实验报告及作业

1.鞭毛菌亚门真菌的共同特征和分类依据是什么？

2.以营养体、无性繁殖、有性生殖来比较鞭毛菌亚门三个纲的区别。

3.观察十字花科蔬菜根肿病菌、马铃薯粉痂病菌、禾谷多粘霉菌、玉米褐斑病菌、水霉菌或绵霉菌，绘休眠孢子囊或游动孢子囊图。

4.绘瓜果腐霉病菌、马铃薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白锈病菌孢囊梗、孢子囊，卵孢子图。

5.绘瓜类霜霉病菌、莴苣霜霉病菌、葡萄霜霉病菌孢囊梗、孢子囊图。6.详绘大白菜霜霉病和粟白发病的病原形态图（包括无性繁殖和有性生殖）。7.卵菌纲真菌有哪些特点？结合它们的生物学特性、寄生性及病害特点说明本纲真菌进化的情况。

实验五

接合菌亚门真菌形态观察

接合菌亚门真菌的共同特征是有性生殖产生接合孢子。大多数是腐生的，少数可以引起农产品的腐烂。接合菌营养体为发达的无隔菌丝体，无性繁殖产生具细胞壁的孢囊孢子，有性生殖产生接合孢子。孢子囊的形态、孢囊孢子释放以及寄生性等是重要的分类依据。

一、实验目的

通过实验掌握接合菌的一般形态及其所致病害的症状类型，了解同宗配合和异宗配合的含义及同型配子囊、异型配子囊的差别。

二、实验仪器与用品

显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备；灭菌培养皿、载玻片、盖玻片、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、吸水纸、解剖刀、挑针、镊子等。

三、实验材料

甘薯软腐病新鲜标本、挂图、病原菌永久玻片，多媒体教学课件（包括幻灯片、录象带、光盘等影像资料）等；根霉属的甘薯软腐病、犁头霉和毛霉“﹢、﹣”菌株的斜面培养物或培养皿平板培养物；三角瓶装PDA培养基。

四、实验内容和方法

（一）甘薯软腐病症状观察

受害甘薯变软腐烂，有时散发出酒味，病薯表面长出白色、灰色至黑色毛状物。仔细观察，能见到白色菌丝体中有许多小黑点。小黑点是病菌的孢子囊。

用针挑取霉层制片、镜检，观察孢子囊、孢囊孢子、孢囊梗及囊轴、假根的形态。

（二）匐枝根霉培养物的镜检观察

用挑针仔细地从培养的匐枝根霉菌中挑取少许连有培养基的培养物，制成临时玻片，在低倍镜下检查。或者用实体解剖镜直接观察培养皿上的菌体。观察菌丝的形态和具有分枝的孢囊梗及其基部的假根，孢囊梗之间有匍枝状的菌丝相连，在孢囊梗基部有深入寄主细胞或基质中分枝状的假根。在每一个孢囊梗的顶端产生一个圆球状的孢子囊，用高倍镜观察孢子囊内部的构造，在未成熟的孢子囊内，往往只有大量的小颗粒体，接近成熟的或成熟的孢子囊内则充满了许多褐色圆形的孢囊孢

子。孢子囊壁破裂后，孢子散出，露出锣锤形的囊轴。

（三）接合孢子观察

取根霉属和犁头霉属接合孢子玻片观察，并注意原配子囊、配囊柄及配子囊的发育特点。成熟的接合孢子深褐色，表面粗糙。犁头霉菌的接合孢子在配子囊柄的着生处有附属丝，注意观察配囊柄的形状及大小。

（四）异宗配合现象观察

取融化了的PDA培养基、灭菌培养皿置于铺有湿纱布的桌上，在洒精灯火焰附近，按无菌操作要求，将培养基倒进灭菌培养皿内，每个 9cm 皿内倒入10～15ml培养基，冷却后即成平板。取具有“﹢、﹣”性征分化并有亲和性的匐枝根霉、犁头霉或毛霉两个菌株，分别按下列图示方式接种到三个培养皿的平板上，在培养皿的底部写上所接种的菌株编号、接种日期，在 25°C 温箱中培养一周，观察异宗配合现象。记录哪个培养皿中形成了接合孢子。

五、实验报告及作业

1.接合菌亚门真菌的主要特点是什么？与鞭毛菌亚门有何区别？

2.根据+、-菌株平板接种培养结果，说明其产生接合孢子的原因？

3.何为同型配子囊、异型配子囊？

4.哪些接合菌与病虫害的生物防治有关？怎样利用它们？

5.绘匍枝根霉菌孢子囊、孢囊梗、孢囊孢子、假根、匍匐菌丝和接合孢子形态图。

实验六

子囊菌亚门真菌形态观察

子囊菌是一类高等真菌。菌丝体一般都很发达，有隔膜，具分枝，有的菌丝体可以形成菌核、子座等机构。子囊菌的共同特点是有性生殖产生子囊和子囊孢子。子囊菌所致病害的种类很多，其中许多是重要的经济作物病害。子囊菌亚门分纲的主要依据是子囊果及子实层的有无、子囊果的类型、子囊的特征等。据此分6个纲：半子囊菌纲、不整囊菌纲、核菌纲、腔菌纲、盘菌纲和虫囊菌纲。

一、实验目的

通过实验，了解子囊菌亚门各个纲病原菌的主要形态特征，掌握子囊菌中与植物病害有关的重要属的形态特征、分类依据及所致主要病害的症状特点。

二、实验仪器与用品

显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备；灭菌培养皿、载玻片、盖玻片、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、吸水纸、解剖刀、挑针、镊子、纱布、刀片、通草、擦镜纸、无菌水等。

三、实验材料

1.桃缩叶病(Tapharina deformans)和李袋果病(T.pruni)2.散囊菌(Eurotium sp.)3.禾白粉病菌(Blumeria graminis)

4.向日葵白粉病菌(Erysiphe cichoracearum)5.瓜白粉病菌(Sphaerotheca fuliginea)

6.桃白粉病菌(Podosphaera tridactyla)7.洋槐白粉病菌(Microsphaera sp.)

8.桑里白粉病菌(Phyllactinia corylea)9.葡萄白粉病菌(Uncinula necator)

10.甘薯黑斑病菌(Ceratocystis fimbriata)11.玉蜀黍赤霉菌(Gibberella zeae)

12.苹果树腐烂病菌(Valsa mali)13.小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis)14.黑麦麦角菌(Claviceps purpurea)15.竹多腔菌(Myriangium haraeanum)

16.葱叶枯病菌(Mycosphaerella sp.)17.苜蓿轮纹病菌(Pleospora herbarum)

18.核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）

19.紫云英菌核病菌(S.trifoliorum)

以上病害标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片、多媒体教学课件（包括幻灯片、录象带、光盘等影像资料）。

四、实验内容和方法

（一）半子囊菌纲(Hemiascomycetes)

外囊菌属(Taphrina)取桃缩叶病或李袋果病材料作临时玻片，在显微镜下检

查。可看见子囊在寄主叶片的表皮下排列成栅栏状，形成无包被的子囊层，子囊下有足胞，常含孢子4～8个。子囊圆筒形，近球形或椭圆形。

（二）不整囊菌纲(Plectomycetes)

散囊菌属(Eurotium)观察示范镜下散囊菌的闭囊壳、子囊或散在闭囊壳内的子囊孢子。闭囊壳壁薄，只有2~3层细胞构成。子囊孢子单胞、近圆形。

（三）核菌纲(Pyrenomycetes)白粉菌目(Erysiphales)

本目是专性寄生菌。白粉菌侵染植物可引起多种植物的白粉病。白粉菌菌丝表生，在寄主体表扩展蔓延。一般在叶部引起褪绿或黄色斑，以后叶面出现白色或灰白色的粉状物，即白粉菌的无性繁殖形成的分生孢子。生长后期，在病部形成许多黑色小颗粒。这些小黑点是白粉菌的闭囊壳。闭囊壳有附属丝，附属丝呈丝状，其形态因种而异。闭囊壳内子囊数目也不一样，一至多个。附属丝的形状和子囊数目的多少是分属的依据。

选取小麦白粉病、向日葵白粉病、瓜白粉病、桃白粉病、洋槐白粉病、桑里白粉病、葡萄白粉病等不同材料。在实体解剖镜下观察闭囊壳及附属丝的轮廓及形态。挑取闭囊壳作临时玻片，在显微镜下检查。注意闭囊壳的形状、有无孔口、闭囊壳表面附属丝的形状和着生部位。然后轻轻挤压盖玻片，使闭囊壳破裂。观察闭囊壳内的子囊，数数是单子囊还是多子囊。

对照下列检索表，观察各种白粉病的病原菌永久玻片或标本，掌握白粉菌科几个常见属的主要形态特征及所致病害症状。白粉菌主要属检索表

1.闭囊壳内单个子囊……………………………………………………………………………2 1.闭囊壳内多个子囊……………………………………………………………………………3 2.附属丝菌丝状…………………………………………………… 单囊壳属(Sphaerotheca)2.附属丝刚直，较粗，顶端二叉状重复分枝，分枝末端螺旋状卷曲………… ………………………………………………………………叉丝单囊壳属(Podosphaera)3.附属丝菌丝状…………………………………………………………………………………4 3.附属丝非菌丝状………………………………………………………………………………5 4.附属丝发育不良，较短……………………………………… 布氏白粉菌属（Blumeria）

4.附属丝较长………………………………………………………………粉菌属(Erysiphe)5.附属丝刚直，基部膨大，顶端尖锐…………………………………球针壳属(Phyllactinia)5.附属丝基部不膨大……………………………………………………………………………6 6.附属丝粗，刚直，顶端二叉状重复分枝，分枝末端卷曲……叉丝壳属(Microsphaera)6.附属丝不分枝，顶端卷曲………………………………………… 钩丝壳属(Uncinula)

球壳菌目（Sphaeriales）

1.长喙壳属(Ceratocystis)观察甘薯黑斑病菌培养物，挑取病菌灰白色物中间深褐色或黑色毛刺状小点，观察病菌的子囊壳。子囊壳深色、球形，有长颈，开口处有须状物，称口须。轻压盖玻片将子囊壳压破，成熟的子囊孢子头盔状，子囊壁早期胶化消解。

2.赤霉属（Gibberella）取培养在麦粒上的玉蜀黍赤霉菌子囊壳，制成临时玻片镜检，在显微镜下观察。子囊壳蓝色或紫色，散生或聚生。子囊孢子多个细胞，梭形。

3.黑腐皮壳属（Valsa）取苹果树腐烂病菌切片镜检，子囊壳埋生在子座内，有长颈伸出子座。子囊孢子单细胞，香蕉形。

4.顶囊壳属（Gaeumannomyces）观察小麦全蚀病害标本，注意病株基部根系生长不良，茎基部叶鞘枯腐，叶鞘内有黑色小颗粒状物，即病菌的子囊壳。取含有子囊壳叶鞘做切片，置显微镜下观察子囊壳形态，子囊壳顶端有短喙；子囊孢子细线状，多细胞。

5.麦角菌属（Claviceps）取黑麦麦角菌切片，置显微镜下观察，头状子座内壁周围有瓶状子囊壳，子囊壳开口向外。子囊壳内有子囊和子囊孢子。子囊细长，子囊孢子线形。

（四）腔菌纲(Loculoascomycetes)

1.多腔菌属（Myriangium）取竹多腔菌切片置显微镜下观察，可见到很发达的子囊座组织。子囊球形，单生，子囊孢子有纵横隔膜, 砖格状。

2.球腔菌属（Mycosphaerella）取葱叶枯病菌切片，置显微镜下观察,单腔多子囊。子囊圆柱形至棍棒形，有双层壁。子囊初期束生，后平行排列；子囊孢子椭圆形，双胞。

3.格孢腔菌属（(Pleospora)取苜蓿轮纹病病菌切片，置显微镜下观察，囊孢子长圆

形或卵圆形，砖格状（多细胞，有纵横分隔）。

(五)盘菌纲(Discomycetes)核盘菌属（Sclerotinia）取油菜菌核病菌子囊盘切片，置显微镜下观察，子囊盘具长柄；子囊孢子椭圆形或纺锤形。观察油菜菌核病症状及菌核萌发标本，菌核球形至豆瓣形，鼠粪状，一般生子囊盘4～5个。菌核上形成的子囊盘具长柄。

五、实验报告及作业

1.子囊菌亚门各纲的主要特征是什么？ 2.绘外囊菌属和散囊菌属的形态图。

3.白粉属和单丝壳属、叉丝壳属和叉丝单囊壳属的主要区别是什么？ 4.绘白粉属、叉丝单囊壳属、球针壳属、钩丝壳属的形态图。5.绘赤霉属、多腔菌属、核盘菌属形态图。6.子囊菌有性繁殖体的病征类型和特点是什么？

实验七

担子菌亚门真菌形态观察

担子菌亚门真菌一般称作担子菌，是真菌中最高等的。其共同特征是有性生殖产生担孢子。担子菌亚门的分纲依据是担子果的有无，担子果的发育类型可分为三个纲：冬孢菌纲、层菌纲、腹菌纲。与植物病害关系密切的是冬孢菌纲。根据担子的来源及特征，担孢子的数目及位置，冬孢菌纲分为锈菌目和黑粉菌目。锈菌的分类主要依据冬孢子的形态，排列和萌发的方式。而黑粉菌的分类主要依据冬孢子的萌发方式，孢子的分隔，排列及其大小，形状及是否有不孕细胞等进行分类。

一、实验目的

通过实验了解担子菌亚门冬孢菌纲主要病原菌的形态特征，掌握锈菌目和黑粉菌目中与植物病害有关的重要属的形态特征、分类依据及所致主要病害的症状特点。

二、实验仪器与用品

显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备，灭菌培养皿、载玻片、盖玻片、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、吸水纸、解剖刀、挑针、镊子、纱布、蒸馏水滴瓶、通草、刀片、擦镜纸、酒精灯、无菌水、PDA培养基等。

三、实验材料

锈菌目（Uredinales）：

1.菜豆锈菌（Uromyces.appendiculatus）2.禾柄锈菌（Puccinia graminis f.sp.tritici）3.禾叶锈菌（Puccinia recondita）

4.禾条锈菌（Puccinia striiformis）

5.梨胶锈菌（Gymnosporangium haraeanum）6.蔷薇多胞锈菌（Phragmidium rosae-multiflorae）7.亚麻锈菌（Melampsora lini）

8.花椒鞘锈菌（Coleosporium xanthoxyli）9.松栎锈菌（Cronartium quercum）

10.枣层锈菌（Phakopsora zizyphi-vulgaris）

黑粉菌目（Ustilaginales）：

1.小麦散黑粉菌（Ustilago tritici）

2.玉蜀黍黑粉菌（U.maydis）

3.丝轴黑粉菌（Sphacelotheca reiliana）

4.高粱坚粒黑粉菌（Sphacelotheca sorghi）5.高粱散粒黑粉菌（Sphacelotheca cruenta）6.高粱团黑粉菌（Sorosporium ehrenbergii）7.小麦网腥黑穗菌（Tilletia caries）

8.小麦光腥黑穗菌（Tilletia tritici）9.稻尾孢黑粉菌（Neovossia horrida）

10.稻叶黑粉菌（Entyloma oryzae）11.小麦条黑粉菌（Urocystis tritici）

以上病菌引起的病害标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片和病菌的PDA培养物;多媒体教学课件（包括幻灯片、录象带、光盘等影像资料）。

四、实验内容和方法

（一）冬孢子萌发试验

冬孢菌纲不同类型冬孢子萌发方法是不同的，几种常见的冬孢子的萌发方法如下：

1．小麦网腥黑穗菌和光腥黑穗菌 将冬孢子撒在保湿器皿内的用1%硝酸钙液润湿的滤纸上，在17～ 22℃ 下培养，每天于日光灯下照射4h，3d后检查萌发情况。

2．小麦条锈病菌 取带冬孢子病叶在0.5～1%柠檬酸中浸15min，再放于两层潮湿的滤纸之间，于-2~-5℃ 下冷冻5d后，挑取冬孢子置于水滴内，在冰箱内（4℃）保存48h即可萌发。

（二）锈菌目（Uredinales）

1.单胞锈菌属（Uromyces）观察菜豆锈病或茭白锈病标本，挑取冬孢子制成玻片观察。冬孢子具柄，单细胞。

2.柄锈菌属 观察小麦杆锈病、小麦叶锈病或小麦条锈病标本，冬孢子堆黑色。将有冬孢子堆的寄主叶片组织切下，制切片于显微镜下观察。冬孢子有一隔膜，分隔处稍缢缩，柄不胶化。

4.胶锈菌属（Gymnosporangium）从用水浸泡过的胶锈菌冬孢子角上用挑针挑取冬孢子制片观察，冬孢子双胞，分隔处不缢缩或稍缢缩。柄丝状，很长，含胶质。

5.多胞锈属（Phragmidium）挑取玫瑰锈病组织上的冬孢子，制片观察，冬孢子多细胞，通常下部膨大易胶化。

6.栅锈菌属（Melampsora）取亚麻锈菌病组织制作徒手切片观察。冬孢子无柄，集成壳状或垫状，冬孢子仅侧面结合成一层，埋生于寄主表皮下。

7.鞘锈菌属（Coleosporium）取花椒锈病组织制作切片观察，冬孢子堆生于叶背或排列成环状，圆形黄褐色。冬孢子无柄，集成壳状或垫状的孢子粒，集生于寄主表皮层下。

8.柱锈菌属（Cronartium）取马尾松锈病标本制片观察，冬孢子堆生于叶背，毛状，冬孢子梭形。

9.层锈菌属（Phakopsora）取枣锈病组织制作切片观察，冬孢子堆呈黑色，冬孢子

排成2～4层，长椭圆形或多角形。

（三）黑粉菌目（Ustilaginales）

1.黑粉菌属（Ustilago）孢子堆外露，很少由寄主组织长期包裹，担子分隔，担孢子生在担子每一细胞的侧面。

挑取小麦散黑粉（穗）病组织上的冬孢子制成玻片观察。冬孢子球形或近球形。另取冬孢子萌发切片观察。冬孢子萌发产生4个细胞的担子，从担子的不同细胞分别生出丝状分枝，不产生担孢子。

挑取玉米瘤黑粉病组织上的冬孢子制片观察，冬孢子球形至卵形。另取冬孢子萌发切片观察。冬孢子萌发时产生有隔担子，担子顶端或分隔处侧生梭形的担孢子。

2.轴黑粉菌属（Sphacelotheca）冬孢子堆周围有膜（不孕菌丝），中央有寄主组织，担子分隔，担孢子生在担子每一细胞的侧面。

挑取高粱丝黑穗病组织上的冬孢子制片观察。冬孢子卵圆形或球形，暗褐色，有时混生有不孕细胞，不孕细胞无色透明。

取高粱坚粒黑穗病标本观察。孢子堆生于子房中，冬孢子多圆形或近圆形，不孕细胞长圆形至近圆形。

取高粱散粒黑穗病标本观察。冬孢子堆有由菌丝体组成的灰白色被膜，冬孢子球形，分散。

3.团黑粉菌属（Sorosporium）观察高粱长粒黑穗病标本，病粒（即菌瘿）外层包有一层浅黄色薄膜。孢子堆结合成孢子球，孢子球的结合很松。稍加压就分散，无不孕细胞。

4.腥黑粉菌属（Tilletia）取小麦网腥黑穗病或小麦光腥黑穗病标本观察。冬孢子单生，孢子堆成熟时呈粉未状，冬孢子较小。孢子堆生于子房内，外包果皮，内部充满黑紫色粉状孢子，有腥味。

5.尾孢黑粉菌属（Neovossia）取水稻粒黑穗病标本挑片观察，孢子堆寄生于子房内，产生黑粉。挑取黑粉制片，显微镜下可见，孢子球形，常有一部分未成熟的透明孢子。

6.叶黑粉菌属（Entyloma）取水稻叶黑粉病标本，切片观察。孢子堆生于叶的两面，圆形至长条形。孢子多角形，结合紧密。取萌发的担孢子玻片观察，担孢子顶

生于担子上，纺锤形。

7.条黑粉菌属（Urocystis）取小麦秆黑粉病标本，制片观察。一至多个厚垣孢子集结成牢固的孢子球，孢子球外有淡色而小的不孕细胞包围。

五、实验报告及作业

1.绘黑粉菌属、腥黑粉菌属和条黑粉菌属冬孢子形态图。2.绘腥黑粉菌属冬孢子萌发图。

3.绘柄锈菌属、单胞锈菌属、栅锈菌属和胶锈菌属冬孢子形态图。

实验八

半知菌亚门真菌形态观察

半知菌亚门真菌的种类很多，其中不少是植物病害的重要病原菌。半知菌的分类主要是根据无性阶段的形态特征，包括分生孢子的形态、载孢体的类型、产孢方式等。半知菌亚门分3个纲。芽孢纲：营养体为单细胞或发育程度不同的菌丝体或假菌丝，通过产生芽孢子繁殖；丝孢纲：营养体是发达的菌丝体，分生孢子不产生在分生孢子盘或分生孢子器内；腔孢纲：分生孢子产生在分生孢子盘或分生孢子器内。与植物病害关系比较密切的是丝孢纲和腔孢纲。

一、实验目的

通过实验认识半知菌子实体的类型及重要致病菌属的形态特征，掌握常见植物病原半知菌属的鉴别特征。

二、实验仪器与用品

显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多媒体教学设备，灭菌培养皿、载玻片、盖玻片、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、吸水纸、解剖刀、挑针、镊子、纱布、刀片、通草、酒精灯、放大镜，恒温箱，方木块，剪刀等。

三、实验材料

半知菌引起的病害标本或新鲜材料、挂图、病原菌永久玻片和病菌的PDA培养物；多媒体教学课件（包括幻灯片、录象带、光盘等影像资料）。

丝孢纲（Hyphomycetes）

1.立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）

2.齐整小核菌（Sclerotium rolfsii）

3.稻梨孢（Pyricularia oryzae）

4.玉蜀黍平脐蠕孢（Bipolaris maydis）

5.玉米大斑突脐蠕孢（Exserohilum turcicum）

6.大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）

7.芸苔链格孢（Alternaria brassicae）

8.球座尾孢（Cercospora personata）

9.梨黑星孢（Fusicladium virescens）

10.灰葡萄孢（Botrytis cinerea）

11.粉红聚端孢（Trichothecium roseum）

12.意大利青霉（Penicillium italicum）

13.褐孢霉（Fulvia fulva）

14.尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）

腔孢纲（Coelomycetes）

1.胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）2.葡萄痂圆孢（Sphaceloma ampelinum）

3.梨壳囊孢（Cytospora carphosperma）

4.芹菜生壳针孢（Septoria apiicola）

5.高粱生壳二孢（Ascochyta sorghina）

6.甜菜蛇眼病菌（Phoma beta）

7.梨叶点霉（Phyllosticta pyrina）

四、实验内容和方法

（一）丝孢纲

1.丝核菌属（Rhizoctonia）观察预先培养的棉花立枯病菌或小麦纹枯病菌菌落。菌核褐色至黑褐色。挑取菌丝制片观察，菌丝粗壮，菌丝分枝呈直角，分隔处常缢缩。

2.小核菌属（Sclerotium）取花生白绢病或小麦、大豆、棉花、烟草等白绢病菌标本或培养观察，病菌菌丝白色绢丝状；菌核圆形至长圆形，褐色至黑色，表面暗色，中心无色，组织致密，干时极硬，彼此无菌丝相连。

3.梨孢属（Pyricularia）取水稻稻瘟病标本，用挑针挑取病叶上的霉状物制片观察。分生孢子梗细长，淡褐色，顶部以合轴式延伸，呈曲膝状，分生孢子多胞，梨形。

4.平脐蠕孢属（Bipolaris）取玉米小斑病叶，挑取病斑上的霉层观察。分生孢子梗单生或丛生，上部呈曲膝状弯曲；分生孢子蠕虫形或长椭圆形，多胞，脐点稍微突出，平截状。

5.突脐蠕孢属（Exserohilum）取玉米大斑病病叶，用挑针挑或刮取其上的黑色霉状物制片，置显微镜下观察。其分生孢子梗暗色，具分隔，一般少分枝，上部呈曲膝状。分生孢子棱形，多胞，脐点明显突出于基细胞外部。

提示 观察时注意与平脐蠕孢属的区别，主要在于其脐点是否突出。

6．镰孢属（Fusarium）取瓜类枯萎病菌培养观察，气生菌丝白色，绒毛状，在PDA培养基上底部呈淡黄色或淡紫色；挑针挑取培养物制片观察，小型分生孢子量大，无色，卵圆形，单胞，偶尔双胞；大型分生孢子无色，纺锺形或镰刀形，1～5个隔膜，基部有时有一显著的突起，称足胞。

提示 有时可观察到厚垣孢子，顶生或间生于菌丝体上。

7.轮枝孢属（Verticillium）取培养好的棉花黄萎病菌平皿，直接放于显微镜载物台上观察，其分生孢子梗细长直立具分隔，呈轮状分枝。分生孢子梗呈直角分枝，分生孢子单胞，生于分枝顶端。

提示 培养菌用的培养基不宜太厚以便透射光能穿透，平皿放到载物台上小心移动，使视野覆盖菌落边缘，这样才能找到理想的轮状分枝结构。

8.链格孢属（Alternaria）取白菜黑斑病病叶，用挑针挑取病斑上的黑色霉状物制片，显微镜下观察。分生孢子长棍棒状，具纵横分隔，呈砖格状，顶端有一长条形喙状细胞。

9.尾孢属（Cercospora）取芹菜早疫病（斑点病）病叶，挑取霉层制片，分生孢子梗不分枝或少有分枝；分生孢子单生，鞭状，具多数分隔。

10.黑星孢属（Fusicladium）挑取梨黑星病叶上的煤烟状霉层制片，分生孢子梗暗色，顶部稍屈曲，孢痕明显；分生孢子淡褐色，1～2胞，瓜子形。

提示 注意分生孢子梗的孢痕，在显微镜透射光源照射下呈现亮点。

11.葡萄孢属（Botrytis）取黄瓜或番茄灰霉病标本，挑取其上的灰霉状物制片观察。分生孢子梗顶端分枝，末端膨大并产生小突起，其上着生多数分生孢子，外观呈葡萄穗状。

12.聚端孢属（Trichothecium）取棉铃红粉病标本，挑取霉层制片观察，分生孢子梗直立，少分隔或不分隔，分生孢子无色双胞，洋梨形，常以基部交错相连的方式在孢子梗顶端聚集成孢子链。

13.青霉属（Penicillium）取柑桔青霉病标本或病菌培养，挑片观察。分生孢子梗集结成束，“扫帚状”分枝，分枝末端为瓶状小梗，生孢子着生在瓶状小梗上。褐孢霉属（Fulvia）取番茄叶霉病标本，挑取霉层制片显微镜下观察。分生孢子梗基部细，上部粗，分生孢子串生，孢子链常分枝并有芽状突起。

（二）腔孢纲

1.炭疽菌属（Colletotrichum）取苹果炭疽病标本制片观察，分生孢子盘埋生于寄主表皮下，垫状无刚毛，成熟后突破表皮，分生孢子梗平行排列成一层，分生孢子单胞。

提示 切片时最好用新鲜采集的标本，如果标本干燥可用蒸馏水湿润一下再进行切片，切出的丝条越薄越好，若用乳酚油作浮载剂效果更好。

2.痂圆孢属（Sphaceloma）取葡萄黑痘病标本，切片观察，孢子梗排列紧密，自盘状子座基部产生；分生孢子盘黑色；分生孢子梗极短，紧密排列于子座上，分生孢子无色单胞，中部缢缩，内含1—2个油球。

3．壳囊孢属（Cytospora）取梨树腐烂病病树皮，徒手切片观察，子座暗褐色，多腔室，似迷宫状，分生孢子器着生于瘤状子座组织内；分生孢子香蕉形。分生孢子与胶体物质混合，吸水膨胀后连同孢子自孔口挤出成为分生孢子角。

4．壳针孢属（Septoria）取芹菜斑枯病病叶，做徒手切片，分生孢子器球形；分生孢子无色，针状，多胞。

提示 分生孢子的横隔须经染色后才能观察清楚；切片操作的最后一步即将切片放到载物台上时再加水浮载样品，这样立即观察可看到分生孢子自孔口向外喷射的现象。

5.壳二孢属（Ascochyta）取高粱粗斑病标本制作切片观察，分生孢子器黑色，分生孢子器扁球形，分生孢子圆筒形，双胞无色。

6．茎点霉属（Phoma）取甜菜蛇眼病标本，切片观察，分生孢子器着生于寄主表皮下，呈轮纹状排列，分生孢子器球形，分生孢子无色单胞，卵圆形。

7．叶点霉属（Phyllosticta）多寄生于叶上。取苹果灰斑病叶，制作徒手切片观察，分生孢子器球形，有孔口，分生孢子极小（小于15μm），卵圆形。

提示 叶点霉属的形态与茎点霉属很难区分，应结合发病部位一起认识。

五、实验报告及作业

1.绘梨孢属、尾孢属和镰孢霉属的分生孢子梗和分生孢子形态图。2.绘炭疽菌属、盘二孢属的分生孢子盘和分生孢子形态图。

实验九

培养基的制作

一、实验目的

了解培养基的配制原理，掌握培养基的制备方法。

二、实验原理

在植物病理学研究工作中经常要使用各种不同的培养基。培养基是按照生物生长繁殖所需要的各种营养，用人工方法配制而成的营养基质。其中含有碳源、氮源、无机盐、维生素以及水份等。微生物在培养基上生长繁殖还必须在最适pH范围内才能生长得更好，因此对不同种类的微生物应将培养基调节到一定的pH值范围。

培养基的种类很多，不同的微生物所需要的培养基不同。依物理性状可分为液体的、固体的和半固体的三种。固体培养基是在液体培养基中加入1.5～2%的琼脂，半固体培养基是加入0.2～0.5%的琼脂。琼脂（agar）又称琼胶或洋菜，是由海藻加工而成，其化学性质稳定，一般微生物均不能分解利用。它在 95℃ 热水中溶化成溶胶，冷却到 45℃ 以下时又重新凝固，故一般实验中常用它作为凝固剂。

根据营养物质来源的不同，培养基可分为天然、半合成和合成培养基三类。天然培养基是以自然界原有的有机物为材料经灭菌后制成，如马铃薯、胡萝卜、水果、大麦粒、高粱粒等。半合成培养基中既有一些天然的有机物质，又有一些成分简单或明确的化合物。如常用的马铃薯葡萄糖培养基（PDA），肉汁胨培养基（NA）等。合成培养基是由一些成分明确的化合物配制而成的，没有任何成分不明确的物质，常用于研究微生物的生理生化性状，如查氏（Czapek）培养基等。

根据培养基用途不同，可分为生长繁殖培养基、富集培养基、贮存培养基、选择性培养基和鉴别培养基等。在植物病理学研究中，最常用培养基有马铃薯葡萄糖培养基，主要用于分离培养病原真菌。

在培养基配制完之后，必须经过灭菌，以便彻底杀死其中原有的一切微生物。

三、实验材料、试剂与仪器

1．材料 马铃薯。

2．试剂 葡萄糖、琼脂等。

3．仪器与用品 高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（或酸度计）、试管、铝锅、搅拌棒、三角瓶、烧杯、漏斗、量筒、纱布、棉花、天平等。

四、实验步骤

PDA培养基（马铃薯葡萄糖培养基）配方

去皮马铃薯 200g

葡萄糖 20g 琼脂 15～20g

蒸馏水 1000ml 自然pH

在PDA培养基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖，这样配制的培养基也称为PSA培养基。1．称量 称量去皮马铃薯 200g，葡萄糖 20g，琼脂15-20g。

提示 琼脂加入的量取决于琼脂的质量，质量好的 15g 就够了，质量差的应适当增加。另外，在夏天气温较高时，适当增加用量。

2．将马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000ml，煮沸30min。用纱布滤去马铃薯残渣。

3．将马铃薯滤液放回锅中，加入琼脂，加热熔化。

提示在琼脂融化的过程中，需要用玻璃棒不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。

4．加入葡萄糖。葡萄糖容溶解后，加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容至1000ml。

提示 通常在制作培养基的锅内用红蓝铅笔标记出不同体积的刻度，1000ml，2000ml等，在定容时直接将水加至已标记的刻度即可。

5．分装 根据不同的实验目的，可将配制的培养基分装于试管内或三角瓶内。分装试管，其量为管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。

6．加塞 在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脱脂的经弹松的棉花，棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，故在植物病理学研究工作中普遍使用。正确的棉塞是形状、大小、松紧与管口或瓶口完全适合，过紧时妨碍空气流通，操作不便；过松则达不到滤菌的目的且棉塞过小往往容易掉进试管内。正确的棉塞头较大，约有1/3在外，2/3在试管内。分装过程中注意不要使培养基沾染在管（瓶）口上以免浸湿棉塞，引起污染。如不使用棉塞也可用橡皮塞或特制的金属、塑料试管帽，为让空气可以自由进出，橡皮塞不要过紧，灭菌前应夹一纱线在管口。

7．包扎 加塞后，将试管用线绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等

8．灭菌 将上述培养基以0.103Mpa，121C , 高压蒸气灭菌20min。

9．搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至 50C 左右（以防斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

培养基经灭菌后，必须放在 37℃ 温箱培养24h，无菌生长者方可使用。PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/LNaOH或1mol/LHCl溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。

提示 pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制低pH的琼脂培养基时，若预先调好pH并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整pH。

五、实验报告及作业

各组上交按计划制备的培养基。

1．为什么有的培养基要调pH值，有的可以不调

2．加压蒸气灭菌为什么比干热灭菌所要求的温度低、时间短

3．想一想，试一试，将几只试管包扎在一起比较牢固？

第三篇：园艺植物病理学教学实习大纲

《园艺植物病理学》实习教学大纲

课程编号:

课程名称：《园艺植物病理学》实习教学

课程类型：专业必修教学实习

英文名称：Horticultural Plant Pathology practice

适用专业：园艺专业

总 学 时：0.5周一、课程的性质、目的和任务

1、《园艺植物病理学》是园艺专业的一门专业必修课。本课程主要讲授园艺植物病害的基本概念、症状类型、发生原因、病害发生发展规律，植物与病原物之间的相互作用机制以及植物病害防治的基本原理等。其实习目的是使学生更好的理论联系实际，准确认识病害，诊断病害，分析病害发生流行因素，学会园林植物、花卉、蔬菜等园艺植物病害诊断的基本技术，为今后解决生产实践中问题，指导病害的防治与研究，打下坚实的基础。

二、课程教学的基本要求

1、实习教学方式：采取校内外集中实习方式，在植物病害盛发期带领学生到植物病害发生比较典型的地区进行实地观察，校内外采集蔬菜、果树、花卉病害。采集的标本则带回实验室进行病原形态观察、制片和病害鉴定。

2、每班为4-5组，以小组为单位领取标本夹、绳、纸一套，放大镜、剪子、小刀各一把。

3、标本采集应注意：①症状典型、单一，不与其他病混杂。②症状最好有病症（真菌、细菌）。③及时晾晒，压制标本，以免卷叶或发霉。

4、每组交合格标本10种以上，每种10份以上。

三、课程教学内容

2、田间采集病害：采集蔬菜、果树、花卉等各种病害。

3、晾晒、压制病害标本：对于易卷叶病害，边采集边压制；其他病害利用休息时间集中压制，晾晒，力争提高标本质量。

4、鉴定标本：利用显微镜进行室内鉴定所采集病害。

5、将鉴定准确的标本分类：将鉴定标本分类，一部分装盒（瓶）补充过去年久褪色或不合格标本；大部分装袋，供学生用作实验材料。

四、实习指导书

1、教材：园艺植物病理学，及实验指导。

2、真菌、细菌、线虫学等鉴定手册及图谱

五、实习教学成绩考核

1、点名：早晚点名，不参加者或参加2天以下者不及格。

2、交标本：每组交标本少于10种以下不及格。

根据交标本及出席情况，成绩分：及格和不及格。结合本课程期末考试给综合成绩。

六、实习教学注意事项

1、加强实习纪律，注意群众影响。一切行动听指挥。不准私自擅离班级，禁止早出晚归，不准爬山，游泳，做到安全第一。班长、组长各负其责，及时清点人数，发现问题，及时汇报。注意群众影响，在实习期间，不准男女同学搭肩搂腰，谈情说爱。

2、爱护庄稼，严禁违犯群众纪律，不准采摘无病瓜果，践踏庄稼，违者包赔损失，各人负责。

第四篇：华农普通植物病理学实验指导

实验

一、植物病害的认识

一、目的要求

通过室内、外观察，对什么是病害，病害的病状表现，病害发生原因及条件，病害对农业生产的危害性等问题，有一个感性认识，从而加深对病害基本概念的理解，并为病害的诊断打下基础。

二、内容及方法

症状是植物生病后所表现的病态。病状和病征总称为症状，病状是指植物本身所表现出来的不正常的疾病状态（如植株矮缩、黄化、萎蔫、坏死、斑点等），病征是指植物病部上病原物所构成的宏观外貌（如霉状物、粉状物、溢脓等）。

症状是诊断病害的佐证，也是病害命名的依据之一，有的病害病状显著（如花叶病等），有的病害则病征显著（如白粉病等），有的病害则二者都显著（如黑穗病、甘薯软腐病等），不少病害就是以病状（如水稻徒长病、花生丛枝病等）或病征（如小麦黑穗病、锈病、白粉病等）命名的。

通过下列病害症状的观察，初步掌握植物病害症状的主要类型。根据病害的表现，可把病状分为：变色、坏死、腐烂、萎蔫和畸形五类：

（一）变色类：植物受害后，局部或全株失去正常的绿色，称为变色。1．黄化——植物绿色部分的叶绿素形成受抑制呈退绿或被破坏呈黄化。2．花叶——植物绿色部分局部的叶绿素受抑制或破坏，呈现黄绿相间。3．条纹——黄色部分呈条状称为条纹。

4．红叶——叶绿素形成受抑制，花青素形成过旺，叶片变成红色或紫色。

（二）班点状：植物的细胞和组织受到病原物的破坏而死亡，形成各式各样的病斑。由于病斑的颜色不同，有黑斑、褐斑、灰斑、白斑等。病斑的形状不一，有圆形、椭圆形、棱形、不规则形等。有时具有轮纹或花纹，有的病斑受叶脉限制而形成角斑。有的沿叶脉发展而形成的条纹或条斑。有的病斑周围有明显的边缘，有的边缘不明显。在根、茎、叶、叶柄、果和穗等部位都可以发生坏死性病斑。

（三）腐烂类：植物组织细胞受到病原物的破坏和分解而发生腐烂。如根腐、茎基腐、块茎和块根腐烂等。

1．软腐和干腐——含水分较多的软柔组织，有的细胞间的中胶层被病原物所分泌的酶所分解，导致细胞分离，组织崩溃，造成软腐或湿病，组织腐烂后，水分散失而干硬收缩，成为干腐。

2．立枯及猝倒——幼苗的根或茎基腐烂、幼苗直立枯死而不倒伏，称为立枯，幼苗迅速整株倒伏称为猝倒。

（四）萎蔫：植株的根或茎部的维管束受病原物的侵害，大量菌体堵塞导管或产生毒素，阻碍或影响水分运输，使枝叶失去膨胀状态而下垂，叶片枯黄，凋萎，以致植株死亡。

（五）畸形：植物受害后，发生增生性或抑制性的病变，造成不正常的形态结构的状态，称为畸形。

1．肿瘤——植物受害后，组织细胞增生，生长发育过度，病部膨大而形成肿瘤。2．丛枝和发根——枝或根过度分枝，产生丛枝或发根现象。

3．矮缩、皱缩——植物受病后，发生抑制性病变，生长发育不良，使植株或器官萎缩、皱缩。4．畸形、卷叶、线叶和叶变——病部组织发育不均匀，呈现扭曲畸形、卷叶、叶片畸形变成细线状，称为线叶。有的器官转化为叶状，称为叶变。

病原物的营养体或繁殖体在植物病部上的宏观结构，称为症征，主要有下列几类：

①霉状物——真菌的繁殖体或营养体在植株病部上表现为明显的霉层，因颜色不同，有绿霉（柑桔青绿霉病），黑霉（甘薯软腐病），灰霉（稻瘟病），赤霉（小麦赤霉病，水稻徒长病）等，有些呈白色或灰色如霜状，则称为霜霉（霜霉病）。

②粉状物——真菌的繁殖体在病部上表现各种粉状结构。1．白粉状物——在病部上呈白粉状，如白粉病。2．黑粉状物——在病部上呈黑色粉状，如黑穗病。

3．锈色粉状物——自病部表皮下泡状病斑破裂后，散出鲜黄色或深褐色粉末，状如铁锈。如锈病。

③小黑粒或小黑点——病原真菌的繁殖体在植物病部产生表面较粗糙的黑色小点（分生孢子盘），如炭疽病、或产生表面较光滑的黑色粒状结构（分生孢子器、子囊壳），称为小黑粒，如黄麻立枯病、小麦白粉病，小麦赤霉病等。

④菌核——病原真菌的营养体在植物受病部位的表面或组织内，形成形状及大小不一的团粒结构，如水稻纹枯病、菌核杆腐病等。

⑤菌脓状物或胶状物——病原细菌在病部常涌出黄色或污白色的脓状或粘胶状溢滴，或用水挤压病部常见污白色混浊液，如水稻白叶枯病，花生青枯病等。

三、注意事项

1．症状及为害情况，常因病原和寄主的种类及不同的发病部位、不同的生育期及环境条件的不同而有差异。

2．细心观察和比较健株与受害后的异常表现，比较各种类型症状的差异及特点。

四、作业

1． 思考题：

①什么叫病害？病害与虫害，机械伤有何不同？ ②认识病害的症状有何意义？ 实验二 植物原真菌——鞭毛菌亚门（Mastigomycotina）

鞭毛菌亚门的真菌多为水生，少数为土生和陆生。

低等的鞭毛菌其营养体为原质团。其它为无隔、多核、发达的菌丝体。

无性繁殖均较发达，产生孢子囊和游动孢子。游动孢子有一根或二根鞭毛，前生、后生或侧生，鞭毛又分尾鞭和茸鞭二种，是鞭毛菌分类的主要依据之一。

有性生殖均以同形配偶子配合产生休眠孢子（囊）或异形配偶配合产生卵孢子。

根据鞭毛特点，鞭毛菌亚门分为四个纲：

1．根钟菌纲（Plasmodiophoromycetes）不等长双根尾鞭。2．壶菌纲（Chytridiomycetes）后生单根尾鞭。3．丝壶菌纲（Hyphochytridiomycets）前生单根茸鞭。4．卵菌纲（Oomycetes）侧生一根尾鞭一根茸鞭。

一、实验内容和材料

1．根肿菌目（Plasmodiophorales）——芸苔根肿菌（Plasmodiophora brassicae）。和十字花科根肿病。2．壶菌目（Chtridiales）——玉米节壶菌（Physoderma maydis）和玉米褐斑病。

3．水霉目（Saprolegniales）——水霉属（Saprolegnia）和绵霉属（Achlya）及水稻绵腐病（烂秧）。4．霜霉目（Peronosporales）

（1）瓜果绵腐菌（Pythium aphanidermatum）和猝倒病。

（2）致病疫霉菌（Phytophthora infestans）和马铃薯晚疫病。（3）荔枝霜疫霉菌（Peronophthora litchii）和荔枝霜疫霉病。

（4）禾生梗霉菌（Sclerospora graminicola）和谷子白发病。

（5）古巴拟霜霉菌（Pseudoperonospora cubensis）和黄瓜霜霉病。

（6）寄生霜霉菌（Peronospora parasitica）和十字花科霜霉病。

（7）白锈菌（Albugo candida）和十字花科白锈病。

（8）1~2个霜霉病未鉴定的标本，要求鉴定到属。

二、实验方法与步骤

1． 显微镜观察十字花科根肿病组织切片，有无见到膨大的根细胞内不定形的芸苔根肿菌的原质团？有无见到根细胞内有大量圆球形、厚壁、密集呈鱼卵块状的休眠孢子囊堆？（绘图）

观察白菜根肿病标本，根部的症状属何种类型？地上部表现什么症状？

2．显微镜观察玉米褐斑病组织切片，有无见到病组织的细胞内有许多扁球形、深黄色的菌体，这是什么？菌体上有盖状的痕迹这又是什么？

观察玉米褐斑病标本，病斑发生在什么部位，有什么特点？

3．显微镜观察水霉菌和绵霉菌玻片（或新鲜材料），比较两个属的孢子囊释放游动孢子和孢子囊再生方法有何不同？

观察水霉菌或绵霉菌的卵孢子，雄器和藏卵器是什么形状？如何配合？藏卵器内有几个卵球？

观察水稻绵腐病（烂秧）标本，表现什么特征？症状属何种类型？

4．从培养皿内挑取少许瓜果绵腐菌制成玻片，在显微镜下观察其菌丝体，有无分隔？有无见到姜瓣状或不规则形的孢子囊（绘图）？孢子囊如何释放游动孢子的？有无见到排孢管和泡囊？

雄器和藏卵器如何配合？藏卵器内有几个卵球？ 观察蔬菜苗期猝倒病和瓜果绵腐病的标本，其症状属何种类型？

5．显微镜观察致病疫霉菌玻片，其孢子囊梗与Pythium有何不同？有无见到呈节状膨大的部分？孢子囊什么形态？（绘图）

观察马铃薯晚疫病的标本，病块茎和病叶各表现什么特征？有无见到病叶上的霉轮？这是什么？

6．从培养皿上挑取少许荔枝霜疫霉菌制片，在显微镜下观察注意其孢子囊梗与Phytophthora的有何不同？有无见到卵孢子，什么形态？

观察荔枝霜疫霉病的标本，叶部、花穗和果实等部位各表现什么症状？有无见到霉状物？

7．显微镜观察禾生指梗霉的玻片，其孢子囊梗有何特征？孢子囊什么形态？

取谷子白发病株，有无见到病部有许多黄色粉末状物，这是什么？取一块载玻片滴一滴清水其上，轻轻抖动病株让黄色粉末状物落在水滴上，制成玻片在显微境下观察，卵孢子什么形态？颜色？外壁分多少层？观察谷子白发病各阶段的症状（灰背、白尖、白发）。

8．显微镜观察十字花科白锈组织切片，可见到寄主表皮下面的孢子囊堆，什么形状？孢子囊便什么形状？孢子囊如何着生？病组织内有无见到卵孢子，什么形状？外壁有无花纹？

观察十字花科白锈病标本，叶部和花梗上的症状有何区别？病征有什么特点？

9．任意选取所供的1~2种作物霜霉病标本（黄瓜霜霉病、白菜霜霉病、葡萄霜霉病、菠菜霜霉病、莴苣霜霉病等），挑取病斑背面的霜霉状物少许制成玻片，在显微境下观察，注意其孢子囊梗分枝的方式，孢子囊的形态，查霜霉菌科分属检索表，鉴定出其属名。

观察上述各种霜霉病的标本，注意叶部和茎部的症状有无区别比较其病斑形态和霜霉状物的颜色有无不同？

附：霜霉科主要属简明分类检索表

1．孢囊梗菌丝状，短，很少分枝······················ 指梗疫霉属（Sclcrophthora）1．孢囊梗分枝明显······················· 2 2．孢囊梗上部膨大，分枝呈指掌状·············· 指梗霉属（Sclerospora）2．孢囊梗细长，直径均匀···················· 3 3．孢囊梗单轴，直角分枝，顶端平切状············ 单轴霉属（Plasmopara）3．孢囊梗叉状锐角分枝········· ··········· 4 4．分枝不对称···················

· 假霜霉属（Pseudoperonospora）4．分枝两侧对称························ 5 5．顶端尖细······················· 霜霉属（Peronospora）5．顶端膨大呈掌状，上生小梗，小梗上生孢子囊······· 盘梗霉属（Beremia）

三、作业

1．指明绘图的，按要求绘出，并注明所绘各部分的名称。2． 未知霜霉病菌分属鉴定。实验三

植物病原真菌——接合菌亚门（Zygomycotina）

接合菌亚门的真菌大多数为腐生菌，少数寄生于人、动物、植物及其它真菌上。有一类与高等植物的根共生，结合成互为有利的共生体——内生菌根。

接合菌的营养体多数为发达的、多分枝的无隔菌丝体。无性繁殖在孢子囊内形成不动的孢囊孢子。

有性生殖多以同形配偶囊接触配合的方式产生接合孢子。

接合菌亚门包括接合菌纲（Zygomycetes）和毛菌纲（Trichomycetes）。其中接合菌纲的毛霉目（Mucorales）内有一些是植物的兼寄生菌。

一、实验内容和材料

毛霉目，毛霉科（Mucoraceae）

1．匍枝根霉菌（Rhizopus stolonifer）和番薯软腐病。2．生长在培养基上的毛霉属（Mucor）或犁头霉属（Absidia）。3．接合菌有性生殖异宗结合形成接合孢子的示范材料。

二、实验方法与步骤

1．显微境观察匍枝根霉的营养体和无性繁殖体，注意分清其匍伏枝、假根、孢囊梗、孢子囊、孢囊孢子、囊轴等各部，观察匍枝根霉的接合孢子（绘图）。

观察番薯软腐病标本，其症状属何种类型？

2．从培养皿中挑取少许毛霉或犁头霉的菌落制成玻片，在显微境下观察，与根霉有何差别？ 3．观察接合菌异宗结合的示范材料，在（＋＋）（――）和（＋－）三个组合中哪一个组合才能产生接合孢子。

三、作业

绘匍枝根霉的无性阶段和接合孢子图，并注明各部分名称。实验四 植物病原真菌——子囊菌亚门（Ascomycotina）

子囊菌是真菌中种类最多的一个亚门，多数为腐生菌，也有不少植物的寄生菌，引起许多重要的植物病害。有一些寄生在昆虫上可作生防菌。子囊菌的营养体除一些低等的种类为单细胞或不发达的丝状体外，大多数均为分枝发达的有隔菌丝体。菌丝体有的还可以构成菌核、子座和子实体等各种组织结构。

无性繁殖：多数子囊菌的无性繁殖很发达，低等的以芽殖方式产生芽孢子。多数子囊以分生孢子梗产生各种类型的分生孢子。

有性生殖：子囊菌有性生殖的共同特征是通过多种方式进行性结合后均产生囊状结构的子囊，子囊内再形成一定数目的子囊孢子。低等的子囊菌其子囊为裸生的。多数子囊菌的子囊形成于发育不同、形态有别的组织结构——有性子实体（子囊果）内，子囊的壁有单层和双层的。

子囊菌亚门便根据其子囊果的类型、子囊壁是单层还是双层等特点分为6个纲。1．半子囊菌纲（Hemiascomycetes）2．不整囊菌纲（Plectomycetes）3．核菌纲（Pyrenomycetes）4．腔菌纲（Loculoascomycetes）5．盘菌纲（Discomycetes）6．虫囊菌纲（Laboulbeniomycetes）

一、实验内容和材料

除虫囊菌纲外的五个纲，以核菌纲和腔菌纲为主。1．畸形外囊菌（Taphrina deformans）和桃缩叶病。2．紫红曲霉（Monascus purpureus）的闭囊壳玻片。3．禾白粉菌（Erysiphe graminis）和小麦白粉病。4．待鉴定的几种白粉菌标本。

5．番薯长喙壳菌（Ceratocystis fimbriata）和番薯黑斑病。6．围小丝壳菌（Glomerella cingulata）和炭疽病。7．黑腐皮壳菌（Valsa）和树木腐烂病。8．玉蜀黍赤霉菌（Gibberella zeae）和小麦赤霉病。9．痂囊腔菌（Elsinoe）和疮痂病。

10．球腔菌（Mycosphaerella）和瓜类褐斑病。11．黑星菌属（Venturia）和瓜类褐斑病。

12．核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）和十字花科蔬菜菌核腐烂病。

二、实验方法与步骤

（一）半子囊菌纲，外囊菌目（Taphrinales）

显微境观察桃缩叶病的组织切片，有无见到病叶角质层下有一层排列整齐的裸生子囊层，子囊内有几个子囊孢子？有无见到成熟子囊基部的脚胞？（绘图）注意病叶的栅栏组织发生何种变形？病叶属何种病变？

（二）不整囊菌纲，散囊菌目（Eurotiales）

显微境观察紫红曲霉菌的闭囊壳玻片，其外壁有几层细胞，是紧密的还是松散的？闭囊壳内有无见到完整的子囊，为什么不易见到？

（三）核菌纲

1．白粉菌目（Erysiphales）

（1）显微镜观察白粉菌的分生孢子玻片（或挑取少许禾谷类作物白粉病的白粉状物制片），分生孢子呈什么状态着生？什么形态？

挑取白粉病叶上的小黑粒点制片，在显微镜下观察，有无见到褐色圆球形的闭囊壳？附属丝什么形状？在低倍视野下用小针尖对准成熟的闭囊壳，轻压盖玻片将闭囊壳的外壁压破，闭囊壳内有几个子囊，什么形状？有无见到成熟的子囊孢子，什么形状？每个子囊内有几个子囊孢子？（绘一压破的闭囊壳图，有附属丝、子囊、子囊孢子）显微镜观察禾白粉菌吸器玻片，什么形状？

（2）观察所供的几种植物的白粉病标本，其症状有何共同特点？

任选1~2种白粉病标本，挑取其上的黑褐色小粒点制成玻片，在显微镜下观察，查下列检索表，鉴定出其属名。附：白粉菌科主要属简明分属检索表 1．闭囊壳内有多个子囊 2 1．闭囊壳内只有一个子囊 3 2．附属丝针形，基部膨大 球针壳属（Phyllactinia）2．附属丝菌丝状 白粉属（Erysiphe）

3．附属丝顶部卷曲呈钩状 钩丝壳属（Uncinula）3．附属丝顶部呈叉状分枝 叉丝壳属（Microsphaera）4．附属丝菌丝状，不分枝 单丝壳属（Sphaerotheca）4．附属丝顶部呈叉状分枝 叉丝单囊壳属（Podosphaera）

球壳菌目（Sphaeriales）

（1）显微镜观察番薯长喙壳菌，有无见到具一根长喙的子囊壳？子囊壳内有无完整的子囊？为什么不易见到？子囊孢子什么形状？（绘图）

从病组织上挑取少量黑色霉状物制片，在显微镜下观察，可见到几种类型的内生分生孢子？其形状和细胞壁的厚薄有无区别？

观察番薯黑斑病标本，病苗和病薯块表现什么症状？病部有无见到黑色刺状物和霉层？（2）在显微镜下观察围小丝壳菌引起的炭疽病切片，注意其子囊壳与子座的关系，子囊壳什么形状、颜色？子囊什么形状，如何排列，子囊间有无侧丝？子囊孢子什么形状，单胞？多胞？有无颜色？

观察各种植物的炭疽病标本，有什么病征？

（3）显微镜下观察苹果树腐烂病组织切片，有无见到黑色子座组织，子囊壳什么形状，有无长颈，与子座的关系怎样？子囊内有几个子囊孢子，什么形状、单胞或多胞？有无颜色？ 观察黑腐皮壳菌的无性阶段（Cytospora）、分生孢子器什么形状？有无见到发达的子座组织，孢子器有几个腔室？分生孢子什么形状？单胞、多胞？有无色泽？

观察果树腐皮病标本，属何种类型的症状？病部有无见到黑色小粒点或孢子角？

（4）显微镜观察小麦赤霉病穗的组织切片，注意子囊壳与子座的关系？子囊壳什么形状、颜色？子囊什么形状？有无见到子囊间的拟侧丝？子囊内有几个子囊孢子，怎样排列？子囊孢子什么形状、颜色、有几个分隔？（绘图）

观察小麦赤霉病标本，病穗上有无见到粉红色霉层和蓝黑色小粒点，是什么？ 3．

（四）腔囊菌纲

1．多腔菌目（Myriangiales）

显微镜观察痂囊腔菌引起的疮痂病组织切片，可见到子座内有许多散乱排列的子囊腔，每个子囊腔内有几个子囊？什么形状？子囊壁是单层还是双层的？子囊孢子什么形状，有几个分隔？ 观察柑桔疮痂病、葡萄黑痘病标本，在叶、茎和果实上的症状有何特点？ 2．座囊菌目（Dothidiales）

显微镜观察瓜褐斑病组织切片，子座内的假囊壳什么形状？假囊壳内的子囊什么形状？如何排列？子囊孢子什么形状，单胞还是双胞？有无色（绘图）

观察瓜褐斑病标本，茎部和叶部的症状为何不同，有无见到黑色小粒点，是什么？ 3．格孢腔菌目（Pleosporales）

显微镜观察梨或苹果黑星病组织切片，假囊壳什么形态？假囊壳内的子囊什么形态？如何排列？有无见到子囊间的拟侧丝？子囊孢子在子囊内如何排列？什么形状？什么颜色？双细胞是否大小均等？（绘图）

观察黑星病标本，叶、枝、果实等部的症状各有何特征？

（五）盘囊菌纲，柔膜菌目（Helotiales）

观察核盘菌的菌核萌发形成子囊盘的标本，每一菌核可形成几个子囊盘？子囊盘外观呈什么形状？

显微镜观察核盘菌子囊盘切片，子囊盘可分为子实层、囊层基和囊盘被等部分，仔细观察子囊层的构造，子囊什么形状？如何排列？有无见到子囊间的侧丝？子囊内有几个子囊孢子，什么形状？单胞还是多胞（绘图）

观察核盘菌引起的十字花科作物菌核腐烂病标本，寄主被害部的症状属何种类型？有无见到黑色鼠粪状的菌核？

三、作业

1．上述指明的绘图。2．白粉菌鉴定到属的结果。

实验五 植物病原真菌——担子菌亚门（Basidiomycotina）

担子菌亚门的真菌其中低等的多为寄生或专性寄生菌（活物营养寄生菌），引起许多重要的植物病害，如多种作物上的黑粉病和锈病，高等担子菌多数为腐生的，亦有一些兼寄生菌，一些高等担子菌与高等植物的根共生联结成互为有利的外生菌根。

担子菌的营养体为发达的，分枝有隔菌丝体。一些担子菌的菌丝体上有锁状联合。高等担子菌的营养体能组织成结构紧密的大型子实体，如蘑菇。

担子菌的无性繁殖除锈菌产生双核的夏孢子外，多数都不很发达。有性生殖配合方式简单，性结合后从担子上形成外生型的担孢子。

担子菌根据担子果有无和担子果的发育类型分为三个纲。1．冬孢菌纲（Teliomycetes）2．层菌纲（Hymenomycetes）3．腹菌纲（Gasteromycetes）

一、实验内容和材料

仅做冬孢菌纲

1．栅锈属（Melampsora）和亚麻锈病（M.lini）。

2．柄锈属（Puccinia）和小麦秆锈病（P.graminis）、条锈病（P.striiformis）和叶锈病（P.recondita）3．单孢锈属（Uromyces）和豆类锈病。

4．胶锈属（Gymnosporangium）和苹果锈病（G.yamadai）的性子器和锈子腔阶段以及桧柏上的冬孢子角。

5．黑粉属（Ustilago）和腥黑粉属（Tilletia）典型的冬孢子萌发玻片。6．黑粉菌的主要属及其引起的黑粉、黑穗病。

（1）黑粉属：小麦散黑穗病（Ustilago tritici）或玉米黑粉病（U.maydis）。（2）轴黑粉属（Sphacelotheca）和高梁或玉米丝黑穗病（S.reiliana）。（3）腥黑粉属：小麦腥黑穗病（Tilletia caries）。（4）条黑粉属（Urocystis）和小麦杆黑粉病（U.tritici）。

二、实验方法与步骤

（1）锈菌目（Uredinales）

1.显微镜观察观察亚麻锈病的组织切片，有无见到寄主角质层下排列整齐的冬孢子堆？冬孢子什么形状？有没有柄？相互如何联结的？

观察亚麻锈病标本，表现什么症状？

2．显微镜观察并比较小麦三种锈病的冬抱子有何差别？（给其中一个冬孢子图）

显微镜观察小麦锈菌的夏孢子，什么形状、什么颜色，有无见到外壁的微刺？有无见到发芽孔？（绘图）

观察小麦三种锈病标本，比较其夏孢子堆和冬孢子堆有何差别？

3．从豆类锈病病叶上挑取少许夏孢子和冬孢子分别制片，在显微镜下观察，（绘图）和柄锈属的冬孢子比较有何不同？

4．显微镜观察苹果锈病组织切片，可见到病叶的表面有瓶状的性子器，有无见到性抱子和受精丝？病叶的背面有袋状的锈子腔，锈孢子是如何着生？ 从桧柏上的冬孢子堆挑取少量胶状物制片，在显微镜下观察，有无见到有长柄、双细胞的冬孢子（绘图）？从细胞壁的厚薄程度、冬孢子柄的长短、是否胶化等，比较胶锈属和柄锈属的冬孢子，有什么不同？

观察苹果锈病在苹果叶上和桧柏枝条上的症状，分别为胶锈菌的什么发育阶段？

（二）黑粉菌目（Ustilaginales）

1．显微镜观察黑粉菌属和腥黑粉属的冬孢子萌发的玻片，比较它们的萌发方式有什么不同（担子有无分隔、担孢子侧生还是顶生、担抱子的数目和形态）。（绘图）

2．取小麦散黑穗病或玉米黑粉病、高粱或玉米丝黑穗病、小麦黑穗病和小麦秆黑粉病的标本，分别挑取少许黑粉状物制片，在显微镜下观察，比较黑粉属、轴黑粉属、腥黑粉属和条黑粉属的冬孢子有什么不同。（绘2个属的冬孢子图）

观察上述各种黑穗、黑粉病的标本，注意其发病部位，是局部性的还是全株性？

三、作业

上述指明的几个绘图。

实验六

植物病原真菌——半知菌亚门（Deuteromycotina）

半知菌亚门的真菌很多是腐生的。有些在工业上有重要的用途；有些是人和动物的寄生菌；还有一些可引起重要的植物病害。

其共同特点是不进行或自然情况下不常进行有性生殖；营养体除少数为单细胞外，大多数为发达的有隔菌丝；无性繁殖产生各种类型的分生孢子。

半知菌根据其营养体、无性繁殖体的形态以及分生孢子发育的特点分为三个形式纲。芽孢纲（Blastomycetes）：营养体单细胞，以芽殖方式产生芽孢子。

丝孢纲（Hyphomycetes）：营养体为菌丝体，分生孢子产生于散生的孢子梗或分生孢子座上。还有一些不产生任何分生孢子，只有营养菌丝和菌核。

腔孢纲（Coelomycetes）：营养体为菌丝体，分生孢子产生于孢子盘上或孢子器内。

一、实验内容和材料

（一）丝孢纲

1．稻梨形孢菌（Pyicularia oryzae）和稻瘟病。

2． 黄萎轮枝菌（Verticilium albo-atrum）或大丽花轮枝菌（V.dahliae）和植物的黄萎病。3． 长蠕孢属（Bipolaria）和玉米小斑病（B.maydis）。4．尾孢属（Cercospora）和芹菜叶斑病（C.apii）。5．镰孢属（Fusarium）和植物的枯萎病。

6．立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）和植物的幼苗立枯病。7．齐整小核菌（Sclerotium rolfsii）和植物的白绢病。

（二）腔孢纲

8．刺盘孢属（Colletotrichum）和盘长孢属（Gloeosporium）和植物的炭疽病。9．茎点属（Phoma）或大茎点属（Macrophoma）和果实的黑腐病。10．壳针孢属（Septoria）和芹菜斑枯病（S.apii）。

二、实验方法和步骤

1．显微境下观察稻梨孢菌的玻片，分生孢子梗什么形态？分生孢子什么形状？有几个分隔？有无颜色？（绘图）

2．显微镜观察轮枝菌的玻片，分生孢子梗什么形态？怎样分枝？

3．显微镜观察玉米小斑病菌，分生孢子什么形状，有几个分隔？有无颜色？（绘图）4．显微镜观察芹菜叶斑病菌（自制玻片）：分生孢子梗和分生孢子什么形态？几个分隔？有无颜色？（绘图）

5．从培养皿的菌落上挑取少许镰孢菌制成玻片，在显微镜下观察，有无见到两种分生孢子？各呈什么形态？分生孢子梗什么形态？

6．从培养皿的菌落上挑取少许立枯丝核菌制成玻片，在显微镜下观察，菌丝如何分枝的。（绘图）

7．观察齐整小核菌的培养特性，培养基表面生长的菌丝有何特征？菌核什么形状？显微镜观察菌核的切片，表层细胞和内部细胞有何不同？

8．显微镜观察炭疽病的组织切片，分生孢子盘什么形状？分生孢子梗和分生孢子什么形状？

有无见到黑色的刚毛？（绘图）

9，显微镜观察果实黑腐病的组织切片，分生孢子器什么形状？有无见到孔口？分生孢子什么形状？有无分隔？有无颜色？（绘图）

10．显微镜观察芹菜斑枯病的组织切片，分生孢子什么形状？有几个分隔？ 11．观察半知菌主要属引起的植物病害，属何种类型的症状？产生什么病征？

实验七

植物细菌病害的症状观察及细菌病害的室内诊断

一、实验材料及用具

各种细菌病害症状类型的标本、图片、挂图；待诊断的细菌病害的新鲜病株，已知血清的稀释液；手持放大镜、干净的载玻片、盖玻片、生理盐水、吸水纸、刀、针、剪等用具。

二、实验步骤

（一）症状观察

1．腐烂

柔嫩多计肥厚的植物器官或组织，尤其是贮藏器官组织、受病原细菌寄生后往往发生腐烂，造成这类症状的细菌，大多是从植物的伤口侵人的。欧氏杆菌属（Erwinia）中的许多种都可以引起多种植物发生腐烂，如白菜软腐病。

2．叶斑、叶枯

叶斑病主要是叶片局部的细胞或组织受细菌侵染后坏死而形成的症状。在具有网状叶脉的寄主植物上叶斑常呈多角形，如黄单胞杆菌（Xanthomonas sp.）引起的棉花角斑病、豆类叶斑等。在禾谷类作物及其它具平行脉的植物上叶斑多呈现为长条形，如水稻白叶枯病和水稻细菌性条斑病等。

细菌性叶斑病发生初期常呈现半透明的水渍状，大多数叶斑病的病斑周围由于毒素的作用，有一黄色的晕圈所包围，有些叶斑病的坏死部分，容易在后期脱落形成穿孔，如黄单胞杆菌（Xanthomonas sp.）引起的桃细菌性穿孔病。

3．萎蔫

是侵染维管束组织的细菌所引起的症状，如棒状杆菌（Clavibacter sp.）所引起的马铃薯环腐病，假单胞杆菌（Pseudomonas sp.）引起的花生、烟草、番茄、桑树等的青枯病。4．癌肿和其它畸形

植物的薄壁组织局部受病原细菌侵染后发生的刺激性病变，引起癌肿的病原细菌可以产生一些生长激素，刺激细胞分裂增多或体积增大，而呈现瘿瘤或簇生等现象，如癌肿野杆菌（Agrobacterium tumefaciens）所引致的苹果毛根病，仁果类，核果类及葡萄的根癌病。

（二）细菌病害的室内诊断 1．显微镜检验法

将典型、新鲜的病组织洗刷干净，用解剖刀或剪刀在病健交界处剪取一小块病组织，置于干净的载玻片上，加一滴无菌水，盖上盖玻片，在低倍显微镜下观察，若有大量的细菌从病组织中溢出，则可初步诊断该病组织可能是由细菌引起的病害。

2．血清反应法（载玻片凝集反应）

（1）在干净的载玻片上滴一滴生理盐水，取一小块病组织浸于其中，静置片刻，让细菌自行涌出，（可在显微镜下观察）制成细菌悬浮液。

（2）将病组织移去，加一滴已知病原细菌的抗血清，充分混合，观察是否有凝集集物形成，可另设一滴不加抗血清的作对照。

三、作业

1． 描述所观察的各类细菌病害的症状特点。2． 细菌病害血清诊断法的检验结果。

实验八 植物病原细菌的分离

一、目的

学习从感病的植物组织中分离出病原细菌纯培养物的操作技术。

二、实验材料及用具 新鲜的病组织。

酒精灯、灭菌的细菌培养基、灭菌的干净培养皿、分离接种用具、升汞液（0.1%）、漂白粉液（1:14）70％酒精、油性笔、火柴。

三、分离前的准备工作

1．将实验室打扫干净，关闭门窗，减少空气流通； 2．用0.1％升汞液将实验台面抹洗干净，再铺上湿毛巾； 3．将所需用品都放好在工作台，操作时尽量避免走动。

四、病原细菌的分离

（一）平板划线分离法

1．将冲洗干净的新鲜病组织剪切成小块，在70%酒精中浸一会迅速移入0.1%升汞液中处理1－2分钟（时间的长短因材料不同而异），后移入漂白粉液中浸1－2分钟，再用无菌水冲洗干净。（如分离的材料为肥厚多汁的组织或较粗的茎、根、枝条等，可将其表面蘸上酒精并在火焰上灼烧进行表面清毒，然后以灭菌的解剖刀削去表皮，在病部边缘挑取一小病组织块）。

2．取一灭菌的培养皿，加一滴无菌水在皿内，将上述已经过表面消毒的病组织置于其中，用灭菌的解剖刀将病组织切碎，静置片刻，制成细菌悬浮液。

3．用灭菌的移植环蘸少许细菌悬浮液，在琼脂平板上自左至右划数条线，使用过的移植环再经火焰灭菌，移动培养皿的位置，移植环，连接上线末再划数条线，如此操作。在该培养皿的琼脂平板上重划3－4次，便可能获得分散的单个菌落。

4．将培养皿倒置，在26－28℃的恒温培养箱中培养1－2天后，观察检查，如见分散的单个细菌落则进行移种，纯化并保存。

（二）平皿稀释法 1．取四个灭菌的培养皿按顺序排列，每一个皿内各加入一滴无菌水。2．细菌悬浮液的制备（同上项2）

3．用灭菌的移植环蘸取1－2环菌液移入第二个培养皿中，略略搅动，再从第二个培养皿内蘸取1－2环稀释后的菌液移入第三个培养皿内，如此依次移至第四个培养皿或至最后一个培养皿为止。

4．将已完全熔化的培养基待其冷却至45℃左右，在各培养皿内倒入10－15毫升培养基，轻轻摇动使其与皿内的细菌悬液充分混匀，静置待其冷凝后即按上项方法培养、检查、纯化和保存。

五、作业

交分离所得的纯培养菌种1支。

实验九

植物病毒的传染试验

一、实验材料

TMV病叶

健康的心叶烟植株

白菜花叶病

健康的白菜植株

无毒菜蚜

金钢砂、纱布、消毒研钵、毛笔、标签等。

二、实验步骤和方法

（一）植物病毒汁液摩擦传染试验 1．制备病毒汁液：取一小块TMV病叶，用水洗干净，放在研钵中磨碎，加蒸馏水2~10倍再进行研磨使得到病毒汁液。

2．用肥皂洗净双手，取健康的心叶烟植株一盆，在其上部已展开的三片叶的正面撒上一层薄薄的金钢砂。

3．左手托住叶片，用右手的拇指和食指夹住纱布沾取少许病毒汁液，轻抹叶片，注意叶片各部位都要抹到，但不要重复以免擦伤叶表面，抹后用蒸馏水冲洗叶面以去除多余的病毒汁液及残存的金钢砂，接种后即告完毕。

4．用肥皂将双手充分洗干净，按上法用健株烟叶研磨的汁液进行接种作对照。5．将接过种的植株及对照植株放入无虫温室中，三天后观察发病情况，记录结果。

（二）介体蚜虫传染试验

1．用毛笔取无毒菜蚜20头，放在小皿中饿半小时后，移到白菜花叶病株上（病叶上先放上一张1平方厘米的白纸，将蚜虫先移到纸片上，让其慢慢爬到病叶上）饲毒5－10分钟。

2．将饲过毒的蚜虫用毛笔转移到4株白菜健苗上，每株5头（每一健苗先放一张1平方厘米的白纸片，将带毒蚜虫移到纸片上，任其爬到叶片上取食）传毒接种24小时后，喷乐果将所有蚜虫杀死。

3．用无毒菜蚜直接移到白菜健苗取食作为对照。4．2－3周后，观察发病情况并记录。

三、作业

两种传染病毒试验记录结果及写出分析报告。

实验十

植物病毒的物理性质测定

一、实验材料 TMV病

健康的心叶烟幼苗

消毒研钵、纱布、薄壁小管、烧杯、水浴箱、试管、棉花、1毫升及10毫升吸管、小碟等。

二、实验步骤和方法

（一）失毒温度的测定

1．取TMV病叶在研钵中研碎，用双层纱布过滤压取汁液，1毫升吸管将病毒汁液分别装入5个薄壁小管中，分别标记处理的温度。

2．将恒温水浴箱调至95℃、90℃、80℃、70℃和60℃五个温度等级。

3．从高温至低温，依次每种温度放入一支装有TMV病毒汁液的薄壁小试管，各处理10分钟，取出立即置冷水中冷却。

4．按常规汁液摩擦接种法，分别将五种不同温度处理过的病毒汁液接种在心叶烟的健康植株上，挂好标签，放置于无虫温室中。

5．接种后第三天观察接种过的叶片坏死枯斑出现的情况，记录结果。失去侵染力的最低温度即为该病毒的失毒温度。

（二）稀释终点的测定

l．取六个小碟分别标记稀释度为1:10，1:102，1:103，1:104，1:105、1:106。2．用10毫升的吸管吸取蒸馏水分别放入六个小碟内，每碟9毫升。吸取1毫升TMV汁液，放入1:10的小碟中，搅匀。

4．从1:10的小碟中吸取1毫升稀释1O倍的病毒汁液移入第二个小碟中，获得1:102的病毒稀释液。按同法依次稀释至第六个小碟，分别获得六种不同稀释度的病毒汁液。5．从稀至浓，将六种不同稀释度的病毒汁液分别用常规接种法接种在健康的心叶烟植株上，置无虫的温室中。

6．接种后第三天观察接种过的叶片坏死枯斑出现的情况，记录结果。失去浸染力前一个稀释度即为该病毒的稀释终点。

三、作业

病毒致死温度和稀释终点试验记录结果及写出分析报告。

实验十一 植物线虫病的症状观察、病原线虫的识别及线虫的常规分离方法

一、实验材料及用具

1．常见的农作物线虫病害标本：小麦粒线虫病；甘薯茎线虫病；花生或柑桔根结线虫病；大豆胞囊线虫病；水稻潜根线虫病；水稻干尖线虫病等。

2．显微镜镜检用具。

3．带有活线虫的植物病组织或土壤标样。

4．分离线虫用的漏斗、纱布、小烧杯、吸管、离心管等。

二、实验步骤和方法

1． 取所提供的各种植物线虫病害的标本，观察其受害部位及症状特点并作记载。

2．显微镜观察几种植物线虫各虫态的形态特征。注意其是雌雄同形还是雌雄异形，及其内部主要器官。

3． 用漏斗法分离病植物或土壤中的活线虫，取病组织或土壤20克，置于盛有清水的纱网漏斗中（用双层纱布包扎亦可），在20－25℃的室温下静置24小时。线虫即会慢慢游出滑落到漏斗底部的乳胶管中，然后轻轻打开乳胶管的止水夹，用小烧杯收集漏斗底部的液体，用每分钟约1000转的离心机将此液体进行离心去掉上层清液，用吸管吸取一滴沉淀液置载玻片上，在低倍显微镜下检查有无活动的线虫？注意区别土壤中的寄生线虫和非寄生线虫。

三、作业

1．描述2－3种线虫病的症状特点。2．绘一种植物病原线虫的形态图。

3．记述线虫分离的结果。

第五篇：农业植物病理学实验室守则及实验指南

农业植物病理学实验室守则及实验指南

一、实验须知

1、实验前须充分预习实验指导书的内容，明确本次实验的目的要求，准备好当次实验所需用具。

2、实验操作要细心谨慎，认真进行观察，独立完成实验作业。

3、实验用品和材料用后必须放回原处，以免丢失，也方便他人取用，对于需清洁的用具须及时清洁。

4、实验仪器设备等由于操作不当或其他原因等引起损坏或遗失的，应及时登记并按照学校有关规定处理。

5、实验完毕应将仪器放回原处，擦净桌面，收拾整齐。离开实验时注意关闭门、窗、水、灯等。

二、实验指南

农业植物病理学实验是农业植物病理学课程的重要组成部分，目的是以植物病理学和其它相关学科知识为基础，追溯引起植物病害发生的原因及过程，认识不同病原所致病害的症状特点及病原形态特征。掌握植物病害实验及研究的基本技能及方法，注重学生观察、思考、分析、解决实际问题的能力培养，为将来的研究工作打下基础。

本实验适用于植保学科各专业方向（植物病理学、植物检疫学、农业昆虫学等）《农业植物病理学》课程的实验教学，共分为9次实验，30个学时，前1～7次实验，重点要求学生认识和掌握水稻、麦类、棉花、杂粮、烟草、油料作物、果树和蔬菜病害等的症状和病原物的形态特点、学习显微绘图、制片技术；实验8～9为综合型实验，要求学生掌握田间一般病害的诊断和鉴定方法，以及学会田间病害调查方法，做到将所学知识真正应用到生产实践中。要求学生在实验课前预习实验指导，明确实验的目的意义，复习实验相关理论知识，了解实验的方法、步骤及重难点；实验课上在教师指导下，按照要求的内容和方法，认真、独立地进行实验，分析实验数据和结果，认真完成实验报告，总结实验所得并找出实验中不足之处的原因，培养严谨的科学态度。