细菌分离鉴定

第一篇：细菌分离鉴定

细菌分离鉴定

目的要求：

熟悉临床标本中常见的病原性细菌的分离鉴定方法，细菌分离鉴定。

实验内容：

一、脓汁、咽拭子等标本中病原性细菌的分离与鉴定

(一)标本采集

1.脓拭子：用无菌棉签蘸取患处深部脓液或分泌物少许，置入无菌空试管内，送检。

2.痰拭子：用消毒容器收集病人痰液，用无菌棉签挑取脓稠痰块，置入无菌空试管内，送检。

3.咽拭子：嘱病人把口张大，用压舌板压住舌根，用无菌棉签迅速蘸取咽部分泌物，置入无菌空试管内，送检。

4.血标本：疑为败血症患者，在严格无菌操作下，静脉采血，床旁直接加入含50ml的肉汤瓶内，立即摇匀后送培养。

5.脑脊液：对疑似流脑患者，作腰椎穿刺取脑脊液，立即行直接床旁接种(送检过程中应注意保温)。

6.尿道、阴-道分泌物：对可疑淋病患者，男性可从尿道取材，取材时导尿管应进入尿道1cm～2cm，如为刚排尿，应等待1h左右;女性则可以从宫颈口取分泌物，当内窥器插入宫颈口后应稍等片刻，再旋转取出，取材应立即送检，不可放置冰箱。

(二)分离鉴定程序

待检标本可直接做涂片染色检查鉴定，必要时可做分离培养、生化反应及致病性鉴定。常见的致病性球菌检查程序如下。

直接涂片、革兰染色、镜检(形态、排列、染色性)

脓、痰、咽拭子

分泌物、脑脊液 观察菌落性状、溶血性、色素

血琼脂平板→ 涂片、染色、镜检

↑ 挑取可疑菌落 生化反应

血液、穿刺液 →肉汤培养基 纯分离 致病性测定

↓ 药敏试验

如培养液混浊时可涂片、染色、镜检

(三)常见临床标本的检查方法

1．脓拭子

在脓汁中除了球菌外，也有杆菌存在，例如革兰阳性的有炭疽杆菌、白喉杆菌、结核杆菌、枯草杆菌等，革兰阴性的有大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等，此外尚可有真菌、放线菌、螺旋体等。

材料

(1)标本：脓拭子

(2)培养基：血琼脂平板

(3)兔血浆、白色滤纸片、无菌生理盐水、载玻片

方法 脓汁 → 革兰染色 → 镜检

↓ ↑

血琼脂平板 →观察菌落形态及溶血情况

↓

致病力试验

(1)将脓拭子作革兰染色，镜检(先作培养再涂片以免污染)，鉴定材料《细菌分离鉴定》。标本放置4℃冰箱保存，待报告发出后再丢弃。

(2)将脓汁涂布于血琼脂平板上，再以灭菌接种环作划线分离。置培养37℃培养18h～24h。

(3)经培养后据菌落特点及涂片检查结果进行初步识别，根据需要再作进一步鉴定。若菌落较大、溶血透明、产生金黄色色素、涂片为革兰阳性球菌并成堆排列时可能系葡萄球菌，应确定其为何种葡萄球菌;必要时再作血浆凝固酶试验及甘露醇发酵试验，确定其致病力。

2.咽拭子

咽喉中存在的细菌较多，可以有厌氧及需氧性链球菌、葡萄球菌、肺炎球菌、四联球菌、脑膜炎球菌、卡他球菌、喉杆菌、结核杆菌枯草杆菌、百日咳杆菌肺炎杆菌及绿脓杆菌等。此外也可有白色念珠菌奋森螺旋体等。本实验以咽拭子作为标本，重点检查病原性球菌。

材料

(1)标本:咽拭子。

(2)培养基:血琼脂平板。

方法

咽拭子

↓

血琼脂平板

↓

观察菌落形态及溶血性

↓

革兰染色，镜检

取标本涂布于血琼脂平板，再以灭菌接种环划线分离，置37℃培养18h～24h培养。标本放置4℃冰箱保存，待报告发出后再丢弃。

可根据下述特点进行鉴别：

(1)在菌落周围产生2mm～4mm宽、界线分明、完全透明的溶血环、涂片为革兰阳性球菌并呈链状排列，可能是乙型溶血性链球菌。

(2)菌落细孝半透明、有草绿色溶血环、涂片为革兰阳性球菌呈链状排列，可能为甲型溶血性链球菌。需要进一步与肺炎球菌区别时，可做胆汁溶菌试验及菊糖发酵反应。

菌落细小半透明、不溶血、涂片为革兰阳性链状排列的球菌时，为丙型链球菌。

(4)菌落扁平边缘隆起、中央稍凹、半透明、呈草绿色溶血、革兰染色为阳性双球菌、呈矛头状排列时为肺炎球菌，应以胆汁溶菌及菊糖发酵反应与甲型溶血性链球菌区分。

(5)菌落中等大孝表面光滑、呈灰色、革兰染色为阴性双球菌，呈肾形排列时，可能为脑膜炎球菌，需要进一步作氧化酶试验及糖发酵试验(接种于含血清之葡、麦、蔗糖发酵管中)。

二、粪便标本中肠道杆菌的分离与鉴定

(一)标本收集

取患者的粪便或肛-门拭子。

(二)鉴定程序

肠道杆菌为一大群革兰阴性杆菌，从形态及染色性上无法鉴别为何种菌，只能依靠生化反应和血清学反应进行鉴定。

患者粪便(粘液、脓血)→肠道选择、鉴别培养基(如ss、中国蓝、伊红美兰)

↓

挑取可疑菌落(据大孝颜色、透明度而定)

↓

双糖铁及其他鉴别培养基

↓

据结果分析鉴定

↓

玻片凝集(做出特异性诊断)

葡萄糖乳糖动力H2S尿素

⊕⊕±--艾希菌属非致病菌

⊕+---克雷伯菌属

⊕±+++变形杆菌

⊕-++-乙型副伤寒致病菌

⊕-+±-甲型副伤寒

+-++-伤寒杆菌

+----痢疾杆菌

第二篇：全自动细菌鉴定

全自动细菌鉴定

仪器简介：

法国生物梅里埃公司最新一代应用经典生化方法进行细菌鉴定的全自动仪器，采用了国际金标准ApI的数据库并继承发展了VITEK第一代产品的自动化处理技术，集成了生物梅里埃几十年的技术和创新于一体，为当今最先进的细菌鉴定/药敏系统，全自动细菌鉴定。

技术参数：

一、鉴定原理：终点法、阈值法;比色、比浊动态分析法

二、菌液浓度控制：液晶数显比浊仪，测量细菌浓度范围0.0-7.5麦氏单位。多点测量，自动显示平均值。

三、自动加样：真空批量加样法，每批可同时处理10个试剂卡，每卡需菌悬液小于4ml

四、自动处理测试卡：自动扫描卡片条码、自动核查卡片与标本资料、自动密封卡片、自动上载试卡，自动孵育，自动每15分钟进行一次检测、自动卸载完成卡，自动报告结果。

五、操作软件：Windows Xp操作系统，简易易用图形界面，鉴定材料《全自动细菌鉴定》。

六、打印机：激光打印机，自动打印实验结果。

七、一次性试卡：64孔鉴定/药敏卡片，带有条形码可指示卡片的序列号和测试的种类。

八、鉴定细菌范围：可全自动鉴定菌种400种，包括：

革兰氏阴性杆菌(含大肠杆菌0157及非发酵菌);革兰氏阳性菌(含猪链球菌1型、2型和7种李斯特菌);酵母菌;需氧芽胞杆菌(含炭疽芽孢杆菌);奈瑟菌、嗜血杆菌、弯曲菌;厌氧菌

九、鉴定速度：95%常见细菌≤5小时;其中革兰氏阴性菌(GN)2～10小时，革兰氏阳性菌(Gp)2～8小时

十、药敏试验：满足革兰氏阴性及革兰氏阳性两大类细菌药敏试验，速度4—15小时，95%常见细菌药敏≤6小时;抗生素已含第4代头孢等

十一、工作容量：30个试验卡

十二、操作步骤：自动真空批量接种、自动扫描卡片条码、自动核查卡片与标本资料、自动密封卡片、自动上载试卡，自动孵育，自动检测、自动卸载废卡，自动报告结果

十三、认证：ISO9001认证:OK;CE或FDA认证:OK;进口医疗器械注册证：OK

主要特点：

1、自动化程度高，操作简单易用。

2、数据库齐全，鉴定准确。

内 容 概 述

关于全自动细菌鉴定等部分检验项目收费标准的复函

内 容 全 文

天津市卫生局：

你局《关于请批准部分新增检验项目收费标准的函》(津卫财函389号)收悉。经审核，对全自动细菌鉴定等4项检验项目收费标准予以核定，具体收费标准(见附件)，自2011年11月20日起执行。

二〇一一年十一月二十八日。

第三篇：细菌鉴定系统

细菌鉴定系统

博检革兰氏阴性菌鉴定系统科学可行的鉴定系统

本系统由青岛高科园海博生物技术有限公司联合山东省出入境检验检疫局共同研发设计，经CDC、CIQ等部门验证完全符合GB/T 4789.4、GB/T 4789.5、GB/T 4789.6、GB/T4789.7、GB/T4789.8、GB/T 4789.36、GB/T 4789.40，具有与ApI20E和VITEK GNI+相同的鉴定效果，可广泛用于革兰氏阴性细菌的鉴定，细菌鉴定系统。

方便有效的编码程序

不同种属的细菌具有不完全相同的生化特征。本系统选取21种典型生化试验，并把生化反应的结果转换为一个8进制数，通过提供的标准数据库查询系统可得到实验菌株归属的相对概率、T值和R值，对菌株的归属进行一定程度的鉴定。

强大的数据库支持

当前可鉴定的革兰氏阴性细菌有112种，基本上涵盖了常见的革兰氏阴性细菌。

共有20种生化管及一个氧化酶试纸条，另附配套鉴定系统程序（博检鉴定系统），用于各种革兰氏阴性菌的生化检测

在该套试验系统中,21种生化试验分别为ONpG、精氨酸(ADH)、赖氨酸(LDH)、鸟氨酸(ODC)、柠檬酸盐利用实验(CIT)、产硫化氢试验(H2S)、脲酶(URE)、乳糖(LAC)、吲哚(IND)、Vp、明胶(GEL)、葡萄糖(GLU)、甘露醇(MAN)、肌醇(INO)、山梨醇(SOR)、鼠李糖(RHA)、蔗糖(SAC)、蜜二糖(MEL)、苦杏仁甙(AMY)、阿拉伯糖(ARA)、氧化酶(OX)。博检鉴定系统的原理是：不同种属的细菌具有不完全相同的生化特征。本系统选取21种典型生化试验，并把生化反应的结果转换为一个8进制数，通过提供的标准数据库查询系统可得到实验菌株归属的相对概率、T值和R值，对菌株的归属进行一定程度的鉴定。将细菌各项生化反应结果填入附赠的记录卡中，依次每三项为一组，若这三项反应均为阳性，则分别记为1、2、4，若为阴性，则相应项记为0，鉴定材料《细菌鉴定系统》。将每组三项的数值相加，共七组，组成一个七位数。将所得七位数输入数据库系统中即可进行查询。若某项生化反应结果较难判断，则按照阴性进行记录，但查询时，应在不定的生化反应前打钩。这样，及时是不确定生化同样可以做出鉴定结果。经过我们的反复试验校正，该实验准确率大大提高，同时系统的准确率接近100%，大大缩短了生化鉴定的时间，提高了鉴定效率。

BBLCrystalTM半自动自动细菌鉴定系统

微生物分离，鉴定的传统方法繁杂，周期长，准确性差，灵敏度低，对实验室技术人员的专业技术、操作技能、工作经验要求极高。

BBLCrystalTM半自动/自动细菌鉴定系统是BD公司专为中小型微生物实验室及科研结构而设计的经济型鉴定系统。该系统可在保持鉴定板高度专业性及数据库强大分析能力的前提下，有效利用微生物实验室常规配置--普通恒温孵育箱进行鉴定板孵育后进行差距自动或自动低度器进行结果判读，可最大程度实现资源共享，并在保证实验的准确性、快速性的基础上达到节约试验成本的目的。而其便携式设计则尤其适合于偏远地区用户及临床科研机构流行病学异地考察。鉴定试验原理：

将传统的酶、底物生化呈色反应与先进的BD专利荧光增强显色技术结合以设计鉴定反应最佳组合，使BBL? CrystalTM鉴定系统具备独特、准确、快速、灵敏的特点

鉴定板配置：

配套提供独立分装的鉴定用肉汤试管，确保无菌状态，使用方便。

第四篇：细菌鉴定手册

细菌鉴定手册

一本有代表性的、参考价值极高、比较全面系统的细菌分类手册，细菌鉴定手册。由美国布瑞德等人主编。1923年第1版，后于1925、1930、1934、1939、1948、1957、1974年相继出版了第2至第8版，每个版本都反映了当时细菌学发展的新成就。其中第8版有美、英、德、法等 14个国家的细菌学家参加了编写工作，对系统内的每一属和种都做了较详细的属性描述。近年来，由于细胞学、遗传学和分子生物学的渗透，大大促进了细菌分类学的发展，使分类系统与真正反映亲缘关系的自然体系日趋接近。第9版(1984，1986)中实质性的变化，象征着细菌分类学的发展进入新的阶段。第一，手册更名，原书名为《伯杰氏鉴定细菌学手册》，第9版由于内容增加，范围扩大，提高了手册的实用性，同时指出各类细菌间的关系，所以改名为《伯杰氏系统细菌学手册》;第二，由1卷分成4卷，这是考虑到能及时反映新进展和使用者的方便;第三，细菌在生物界的地位，8、9版间无变动，但它们的高级分类单位有很大变化，尤其嗜盐细菌和产甲烷细菌，根据胞壁分析和DNA序列分折，另列疵壁菌门，古细菌纲;第四，趋近自然体系，在各级分类单位中全面应用核酸研究;在表型特征的基础上，以DNA资料给予决定性的判断，鉴定材料《细菌鉴定手册》。使人为的分类体系过渡到自然体系的理想进一步付诸实现。

本书是在《一般细菌常用鉴定手册》一书的基础上编写而成的。全书分两大部分:第一部分主要介绍了伯杰(Bergey)系统、常见细菌的检索表、属的提要及种的鉴别等;第二部分介绍了几种鉴定方法,包括常用的传统分类基本方法和目前通用的分子生物学方法及快速鉴定和自动化鉴定系统等。

常见细菌系统鉴定手册

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常见细菌系统鉴定手册东秀珠蔡妙英等编著科学出版社目录序使用说明绪论第一部分常见 细菌属的特征描述第一章光合细菌第二章产芽孢细菌第三章好氧或兼性厌氧发酵型革兰氏...阅读完整评论内容

常见细菌系统鉴定手册

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常见细菌系统鉴定手册在蓝岭香柏网上书店销售，读者在蓝岭香柏网还可了解到常见细菌 系统鉴定手册作者、价格、内容介绍等信息。欢迎购买常见细菌系统鉴定手册，蓝岭香柏。

第五篇：常见细菌鉴定

常见细菌鉴定

图书信息出版社: 人民卫生出版社;第1版(2009年9月1日)

平装: 331页

正文语种: 简体中文

开本: 16

ISBN: 9787117119610

条形码: 9787117119610

尺寸: 25.6 x 18.6 x 1.6 cm

重量: 540 g

百分网内容简介

《临床常见细菌、真菌鉴定手册》着重对院内感染的常见细菌、真菌及其耐药性检测和研究进行了细致阐述，常见细菌鉴定。细菌耐药也是当前临床面临的重大难题之一，抗生素滥用是造成耐药性不断增长的主要原因。微生物是进化史上最成功的例子，存在几十亿年了，新兴的微生态学理论认为，人类和微生物之间是适应而不是对抗。院内感染菌株绝大部分是条件致病菌，当机体免疫力低下、抗生素使用不合理破坏了正常菌群，导致微生态失衡情况下，引起感染的发生、发展。我从事微生态研究多年，深刻认识到只有从生态平衡角度，将传统的单纯“杀菌”理论转变为“杀菌”加“促菌”理论，保护人体的正常菌群，维护人体微生态平衡，提高机体免疫能力，才是控制感染的根本办法。

百分网目录

上篇 临床细菌学

第一章 需氧及兼性厌氧，革兰染色阴性杆菌、球杆菌、球菌及弯曲菌和螺旋菌

第一节 心杆菌属

第二节 放线杆菌属、艾肯菌属、金氏杆菌属和色杆菌属

第三节 弗朗西丝菌属

第四节 布鲁菌属

第五节 军团菌属

第六节 假单胞菌属

第七节 伯克霍尔德菌属、窄食单胞菌属、丛毛菌属和食酸菌属

第八节 不动杆菌属

第九节 莫拉菌属

第十节 金黄杆菌属和威克斯菌属

第十一节 奈瑟菌属

第十二节 鲍特菌属

第十三节 产碱杆菌属、无色杆菌属、苍白杆菌属和根瘤菌属

第十四节 弧菌属

第十五节 气单胞菌属

第十六节 肠杆菌科

第十七节 巴斯德菌属

第十八节 弯曲杆菌属和弓形菌属

第十九节 螺杆菌属

第二十节 巴尔通体属

第二十一节钩端螺旋体属

第二十二节疏螺旋体属

第二十三节密螺旋体属

第二章 需氧革兰染色阳性球菌及杆菌

第一节 葡萄球菌属

第二节 链球菌属

第三节 肠球菌属

第四节 气球菌属及其相关菌属

第五节 李斯特菌属和丹毒丝菌属

第六节 棒状杆菌属及相关菌属

第七节 芽胞杆菌属和其他需氧芽胞杆菌

第八节 分枝杆菌属

第九节 奴卡菌属、红球菌属

第三章 专性厌氧菌

第一节 消化球菌属、消化链球菌属、嗜胨菌属、微金菌属和厌氧球菌属

第二节 韦荣菌属、氨基酸球菌属和巨形菌属

第三节 丙酸杆菌属、放线菌属、双歧杆菌属、真杆菌属、乳杆菌属、蛛网菌属、放线棒杆菌属和动弯杆菌属

第四节 拟杆菌属、普雷沃菌属、卟啉单胞菌属、梭杆菌属、二氧化碳嗜纤维菌

属及其他革兰阴性无芽胞厌氧杆菌属

第五节 梭状芽胞杆菌属

第四章 支原体属、脲原体属、衣原体属、立克次体属和东方体属

第一节 支原体属和脲原体属

第二节 衣原体属

第三节 立克次体属和东方体属

第五章 埃立克体属、无形体属和相关细胞内寄生体属

第一节 埃立克体属与无形体属

第二节 考克斯体属

第三节 养障体属

下篇 临床深部真菌

第六章 酵母菌及酵母样真菌

第一节 念珠菌属

第二节 隐球菌属

第三节 毛孢子菌属

第四节 地丝菌属

第五节 芽生裂殖菌属

第六节 其他酵母及酵母样真菌

第七章 双相性真菌

第一节 球孢子菌属

第二节 芽生菌属

第三节 组织胞浆菌属

第四节 孢子丝菌属

第八章 丝状真菌

第一节 曲霉菌属

第二节 青霉菌属

第三节 毛霉菌属、根霉菌属

主要参考文献，鉴定材料《常见细菌鉴定》。