第一篇：病理石蜡切片心得体会
病理石蜡切片心得体会
石蜡切片是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
我从事病理技术工作刚刚一年多，细细回味自己在实际工作中的切片过程，有一点点心得体会，在这里向大家做一简单汇报。
一、组织脱水：
要想切出一张好的石蜡切片，组织处理非常重要。经典的脱水方法，酒精脱水，二甲苯透明，石蜡浸蜡是最简单、方便、容易掌握，也是最便宜效果最好的方法。但脱水过程中尤其要注意的是梯度酒精脱水。在实际工作中，有时为了省事，往往采取倒掉第一缸酒精，后面往前移，这样会导致第一缸酒精浓度偏高，高浓度酒精，能使蛋白质凝固，使组织表面发硬，酒精无法渗透到组织深处，造成组织脱水效果不佳，从而不能切出优质石蜡切片。我的做法是，在更换液体时，尽管是后边液体往前边倒，但一定要测量其浓度，不合适就要调整到合适为止。这样像子宫平滑肌瘤这样的硬组织也能切除很好的切片。
二、组织包埋：
组织包埋好坏同样会影响石蜡切片质量。有些小组织，特别是内窥镜活检组织，如果组织没切全，就有可能会影响诊断。因此。小组织切出优质切片的重要步骤是把好组织包埋这一关。首先，最好选用5x5mm或更小的包埋底模，这样的底模即可将组织完全置于蜡块切面的中心，又可连续切片并将蜡片捞在载拨片相对集中的区域而利于阅片诊断。另外，包埋时先把底模放入少许石蜡，将组织移放在底模里移至冰上，待石蜡略冷却再用齿科镊子将组织集中到一块并按压到一个平面后，再注满石蜡，平移到冰台上。
三、组织切片：
切片工艺上稍加讲究，就可做到“多”、“快”、“好”、“省”。
1、先粗切所有蜡块。用废弃刀片将每个蜡块粗切至组织全部暴露的最大切面，边切边排序，摆放在事先做好的冰盘中冷冻。
2、全部蜡块粗切完成后，再更换新刀片细切。将冰冻好的蜡块迅速按放固定好，先切2-3张，削去浮蜡后即可连续切片，切片时要求用力均匀柔和，摇速不宜过快或者过慢，切片厚度一般为3-5um，如为淋巴结，切片厚度应为3um，这样镜下细胞无重叠，清晰，透亮利于诊断。切出的蜡片先放在入40℃热水中，在这种温度下，蜡片迅速舒展得非常平整，再裱贴至载玻片上。采用这种方法切片，既有速度又节省刀片，最主要的是能切出高质量的切片。
四、染色：
染色同样会影响切片的整体质量。染色过程中最重要的是苏木素染色后经盐酸酒精分化，流水冲洗即反蓝过程，时间一定要充分，否则切片再好，镜下结构也不够清晰。
切片经过染色后，通过各级酒精脱水，由低浓度到高浓度，低浓度酒精对伊红有分化作用，时间要短，向高浓度时逐步延长脱水时间，染色经过脱水后必须经过二甲苯处理，这样的切片看切来才晶莹剔透，使阅片者赏心悦目。
以上是我在工作中得出的一点体会，不足之处请各位批评指正。
第二篇：病理实验 各种切片介绍
1.肾小管水样变
肾小球周围肾小管体积大，染色淡红
近曲小管上皮细胞肿胀，向管内突出，官腔不规则变小，胞浆内有粉红色小颗粒，分布均匀，大小一致，细胞核结构清晰 2.肝脂肪变性
小叶周围肝细胞胞浆出现大小不等的圆形空泡 有的空泡较大，将核挤到一边 3.肾小管玻璃样变
近曲小管上皮内出现大小不一的红色球形颗粒 4.脾动脉硬化(玻璃样变)低倍镜：脾动脉增厚，脾小梁增粗，脾小体中央动脉及其小梁内的小动脉壁增厚，红染 高倍镜：脾小体中央动脉壁增厚，管腔变小，内膜下可见均匀红染无结构物质 5.脾梗死
低倍镜：红染区即为坏死区，其中散落着一些深蓝色碎屑，为坏死的细胞核 高倍镜：核固缩，碎裂，溶解，脾小体和小梁结构模糊，尚可辨认 6.肉芽组织
低倍镜：表面有一层炎性渗出物，其下可见大量的新生的毛细血管垂直表面生长，其间有成纤维细胞。深部血管减少，成纤维细胞逐步变为纤维细胞，并有胶原纤维生成
高倍镜：新生毛细血管由单层内皮细胞构成，成纤维细胞大，胞浆丰富淡红色，成梭型或分支状，可见各种炎细胞 7.慢性肺淤血
低倍镜：肺泡壁增厚，肺泡壁内毛细血管扩张充血。高倍镜：肺泡腔内含淡红色水肿液及心衰细胞、8.慢性肝淤血
中央静脉及周围肝窦扩张充血，近中央静脉的肝细胞萎缩甚至消失 9.混合血栓
低倍镜：粉红色不规则小梁与浅红色区域交织存在 高倍镜：粉红色小梁为已经崩解而凝聚成颗粒的血小板，小梁边缘附近有较多的中性粒细胞，血小板小梁间的浅红色区域为丝网状的纤维素及自溶的红细胞 10.肾贫血性梗死
低倍镜：正常肾组织与梗死组织交错分布，梗死灶内可见轮廓模糊的肾小管和肾小球，梗死灶周边部有较多的中性粒细胞浸润
高倍镜：坏死的肾小球及周围肾小管结构模糊，胞质红染，肾小管数目明显减少，残留的细胞核呈固缩状态 11.肺出血性梗死
肺泡轮廓可见，肺泡壁细胞坏死，核消失，肺泡腔内聚集大量的红细胞 12.会厌白喉、低倍镜：支气管上皮坏死脱落，表面附着粉染的假膜 高倍镜：假膜由纤维素，坏死组织和炎细胞构成 13.心肌脓肿
肉眼可见心肌组织内圆形淡蓝色区域为脓肿
镜下可见脓肿灶内心肌纤维破坏消失，积聚以大量中性粒细胞和脓细胞，脓肿周围心肌纤维变性坏死，并有炎细胞浸润。14.急性化脓性阑尾炎 蜂窝织炎 低倍镜：阑尾各层内有弥漫的炎细胞浸润，腔内有炎性渗出及坏死脱落的粘膜上皮，浆膜面有炎性渗出物，血管扩张充血
高倍镜：各层浸润的炎细胞为中性粒细胞，浆膜面渗出物由纤维素和中性粒细胞组成 15.异物肉芽肿
低倍镜：主要由多核巨细胞，单核巨噬细胞等成分构成，为结节状的病变
高倍镜：病变部位主要由单核巨噬细胞，散在分布较多的异物多核巨噬细胞，边缘区可见纤维组织增生 16.纤维肉瘤
低倍镜：瘤细胞束状排列成人字形，羽毛性或鱼骨状结构，间质胶原纤维较少。分化差者，瘤细胞弥散排列，间质纤维少，血管丰富
高倍镜：分化好者，瘤细胞长梭型，核肥大，染色质较粗，可见核分裂像，细胞大小较一致；分化差者，瘤细胞呈短梭型，圆形或不规则型，有巨瘤细胞，可见病理性核分裂像 17.鳞状上皮乳头瘤
低倍镜：肿瘤呈乳头状，实质为增生的鳞状上皮，间质为血管及纤维组织，有少量炎细胞浸润
高倍镜：瘤细胞分化成熟，排列近似正常鳞状上皮，可见角化，基底膜完整 18.子宫平滑肌瘤
低倍镜：瘤组织呈圆形结节，与周围组织界限清楚，瘤细胞分化较好，大小形态一致，呈编织状排列。
高倍镜：瘤细胞类似正常的平滑肌细胞，核呈长杆状，两端顿圆 19.乳腺纤维腺瘤
低倍镜：有增生的腺管和纤维组织，有管周型，管内型和混合型
高倍镜：增生的上皮为立方或者杆状，两层，未层为肌上皮，异型性较低，内层为腺上皮 20.食管鳞状细胞癌
低倍镜：可见癌巢，与间质分界清楚，高分化的癌巢中可见层状红染的角化珠，低分化者不可见
高倍镜：高分化癌细胞体积较大，核大深染，可见病理性核分裂像和细胞间桥，癌巢中间的角化珠内可见角化不全的蓝色细胞核碎屑。低分化的癌细胞分化差，癌巢内细胞极性，层次不明，癌细胞排列紊乱，大小不等，可见核分裂像，五角化珠与细胞间桥，间质有炎细胞浸润
21.胃腺癌
低倍镜：分化好者，癌细胞排列成腺管状，排列不规则，多层排列。分化差者，癌细胞形成癌巢，与间质分界清楚，癌细胞突破粘膜层向深层浸润
高倍镜：癌细胞表现不同程度的异型性，大小不一，形态各异，排列紊乱，可见病理性核分裂像
22.淋巴结转移腺癌
低倍镜：正常淋巴结结构尚存，部分淋巴结破坏，于淋巴结边缘窦及皮质，髓质内可见多量大小不一，形态不规则的癌性腺体，高倍镜：癌细胞有明显的异型性，可见病理性核分裂像 23.骨肉瘤
低倍镜：癌组织由大小不等，异型性显著的癌细胞构成，可见肿瘤性类骨质形成
高倍镜：癌细胞多为立方形，多边形，梭型，排列不规则，核大，深染，部分可见核仁，异型性明显 24.畸胎瘤
低倍镜：囊壁由复层鳞状上皮所衬覆，可见皮肤的附属结构 高倍镜：各胚层来源的组织基本分化成熟，无明显的异型性。31.急性风湿性心内膜炎 theumatic myocarditis 低倍镜：心肌间质充血，水肿，心肌纤维排列疏松，血管周围可见由簇细胞构成的梭型或椭圆形病灶，即风湿小体
高倍镜：小体中央有少许红色絮状物质，为纤维素样坏死，其外部见许多风湿细胞，体积较大，梭型或多边形，胞浆丰富，嗜碱性，核大，卵圆形，空泡状，染色质集中于核中央，有细丝放射至核膜，似枭眼，纵切像毛虫。外层有少量淋巴细胞，单核细胞及浆细胞浸润。
诊断要点:心肌间质形成具有特征性的Ashoff小体 32.主动脉粥样硬化 atherosclerosis of aorta 低倍镜：主动脉内膜部分增厚，表层纤维结缔组织增生，并有玻璃样变。内膜深层见一片浅依红色无结构样坏死物，为粥样斑块。其中有许多呈斜方形，菱形和针样空隙，为胆固醇结晶
高倍镜：可见泡沫细胞及胆固醇结晶，中膜肌层不同程度的萎缩，外膜疏松有少量淋巴细胞浸润
诊断要点：内膜表面纤维组织增生，玻璃样变性 内膜深层为大量坏死物，并可见胆固醇结晶 内膜底部和边缘科技那肉芽组织增生，外周可见少许泡沫细胞 中膜不同程度萎缩 33.冠状动脉粥样硬化
冠状动脉内膜部分增厚，半月形向管内突出，表层纤维结缔组织增生，部分玻璃样变，下位依红色无结构粥样斑块，中膜平滑肌萎缩。34.肺气肿
低倍镜:部分肺泡管和肺泡囊,肺泡腔明显扩张成囊状,细小支气管壁增厚
高倍镜:肺泡间隔变薄,断裂,相互融合成囊状,肺泡壁毛细血管数量减少,细小支气管管壁可见炎细胞浸润
诊断要点：肺泡扩张融合，肺泡间隔断裂 细小支气管慢性炎细胞浸润 35.大叶性肺炎红色肝样变
低倍镜:肺泡壁毛细血管扩张,肺泡腔内充满炎性渗出物
高倍镜:毛细血管扩张充血,肺泡腔内可见大量纤维素,红细胞,中性粒细胞,单核巨噬细胞
诊断要点：肺泡腔内大量的纤维素和红细胞渗出 灰色肝样变期
低倍镜:肺组织固有结构存在,肺泡壁变窄,其内毛细血管呈贫血状态,肺泡腔内有大量炎性渗出物,胸膜表面有纤维素渗出
高倍镜:肺泡腔扩张,其内充满大量纤维素和中性粒细胞以及少量巨噬细胞,肺泡间孔扩张,部分区域可见纤维素穿过肺泡间孔与相邻肺泡腔内的纤维素网连接
诊断要点：肺泡腔内可见大量的纤维素和中性粒细胞渗出 36.小叶性肺炎
低倍镜:肺组织内血管扩张充血,可见弥漫三载的灶性病变,肺泡腔扩张.高倍镜:病灶中心可见细支气管,粘膜上皮部分脱落坏死,腔内有脓性分泌物,周围肺泡腔有多量炎细胞浸润.部分病灶内肺组织周围固有结构破快,形成小脓肿.病灶间肺泡代偿性扩张.诊断要点：肺内弥漫散在的化脓性病灶，病变细支气管及所属肺泡腔内的渗出物为中心粒细胞 可见正常的肺泡和代偿性扩张的肺泡 37.矽肺 低倍镜:肺组织内可见矽结节以及弥散性间质纤维化
高倍镜:矽结节内可见巨噬细胞,成纤维细胞,纤维细胞以及胶原纤维.后三者呈同心圆状排列
诊断要点：矽结节形成，间质弥漫性纤维化 38.肺小细胞癌
低倍镜:肺组织大部分区域被破坏,局部出现体积较小的瘤细胞
高倍镜:肿瘤细胞体积较小,一部分如淋巴细胞大小,核圆形,染色较深,胞浆小.一部分呈短梭型,核深染,一端较细,一端较粗,呈葵花籽样,另一部分体积较大,形状不规则.诊断要点：肺组织内见浸润性生长的恶性肿瘤细胞，瘤细胞体积小呈巢状排列，部分呈燕麦状
39.慢性萎缩性胃炎
低倍镜:粘膜萎缩变薄,腺体变小,可有囊性扩张,数目减少
高倍镜:粘膜上皮有明显的上皮化生,固有层间质内有慢性炎细胞浸润
诊断要点： 40.慢性胃溃疡
低倍镜:两侧为正常胃组织,中间为溃疡部,凹陷缺损病灶深达肌层
高倍镜:从上到下可见四层结构 渗出层：中心粒细胞和纤维素渗出 坏死层：红染无结构的坏死物质 肉芽组织层：幼稚的纤维结缔组织，成纤维细胞，毛细血管较多，少许炎细胞浸润 瘢痕组织层：由纤维结缔组织组成，可发生玻璃样变
诊断要点：胃黏膜局部组织成凹陷缺损，其底部从上到下可见典型的4层结构 41.亚急性重型肝炎
低倍镜：肝组织出现大片坏死，有坏死区和出血区
高倍镜：肝索竭力，肝细胞溶解，呈现弥漫性的大片坏死，并有肝细胞结节状再生 42.门脉性肝硬化
低倍镜：正常肝小叶结构破坏，由大小不等，圆形或者椭圆形的假小叶组成，周边有较多的纤维组织，其中有淋巴细胞浸润和小胆管再生
高倍镜：假小叶有以下特点，肝细胞排列紊乱，部分肝细胞变性坏死，可见肝细胞再生；中央静脉缺如，偏位或者有两个以上中央静脉，部分假小叶可见会管区 43.肝细胞肝癌
低倍镜:癌细胞排列成小梁状，类似肝细胞索，小梁间为血窦。癌细胞染色较深
高倍镜:癌细胞呈多边形,胞浆丰富,颗粒状,嗜酸性,核大深染,核浆比例增大.分化差者异型性明显,常有多核和巨核瘤巨细胞 44.霍奇金淋巴瘤
低倍镜:淋巴结正常结构破坏,被大量瘤细胞取代.瘤细胞成分多样化,可见多核巨细胞.高倍镜:瘤组织中有一种特殊的多核瘤巨细胞,体积较大,椭圆形或不规则形,胞浆丰富,嗜双色性或嗜酸性.核大,多见双核或多核,染色质沿核膜排列,使核膜增厚,核内有一嗜酸性大核仁.核仁便捷光滑整齐,周围有一层空晕,成为r-s细胞,双核的rs细胞两核等大排列,都有大而红的核仁,称为镜影细胞.可见较多的嗜酸性粒细胞,浆细胞和淋巴细胞浸润.46.弥漫性毛细血管内增生性肾小球肾炎
低倍镜:病变弥漫累积及几乎所有的肾小球,肾小球内细胞数目增多,肾小球体积增大,肾间质充血,有炎细胞浸润
高倍镜:肾小球内血管内皮细胞核系膜细胞增生,少量中心粒细胞浸润,毛细血管官腔狭窄闭塞,很少见红细胞,呈贫血状态.肾小管尤其是近曲小管上皮细胞肿胀,颗粒变性,部分肾小管可见蛋白及白细胞管型.肾间质毛细血管扩张充血及炎细胞浸润.47.新月体性肾小球肾炎
低倍镜:多数肾小球可见到新月体和环状体形成.高倍镜:肾小球囊壁层上皮细胞增生成多层,如新月状,重者包绕整个血管从,构成环状体.部分肾小球毛细血管丛因受新月体压迫儿纤维化或玻璃样变,所属肾小管也萎缩,部分肾小球代偿性肥大,所属肾小管也扩大.间质纤维增生伴有淋巴细胞浸润.48.慢性肾小球肾炎
低倍镜:病变弥散,肾小球数目减少,部分肾小球纤维化,玻璃样变.肾小球相对集中,部分代偿性肥大,扩张.间质广泛的结缔组织增生.高倍镜:受累肾小球萎缩,纤维化或玻璃样变,相应肾小管也萎缩,纤维化或消失.周围肾小球体积增大,肾小管扩张,可见各种管型.肾间质大量纤维结缔组织增生伴淋巴细胞浸润,间质内细小动脉管壁增厚,玻璃样变性,官腔狭窄.诊断要点 大量肾小球纤维化或玻璃样变,所属肾小管萎缩消失,存留肾单位代偿性肥大,肾小球集中现象.49.急性肾盂肾炎
低倍镜:肾组织中片状分布的炎性病灶,肾盂粘膜充血水肿.有炎细胞浸润.高倍镜:部分肾小球和肾小管坏死,为中心粒细胞或脓细胞所替代.有些肾小管管腔内有大量脓细胞和坏死的组织碎片及细菌菌落.肾间质充血,大量中性粒细胞浸润.50.慢性肾盂肾炎 51.肾透明细胞癌
低倍镜:癌细胞呈实性团块状,条索状,腺管状或乳头状.间质少,血管丰富.高倍镜:癌细胞由透明细胞和颗粒细胞两种类型，按照不同比例分为透明细胞型和颗粒细胞型，混合型。透明细胞体积较大,呈多角形,轮廓清楚,胞浆透明清亮,细胞核小,深染,位于细胞中央或边缘.53.葡萄胎
低倍镜:胎盘绒毛肿大,绒毛间质高度水肿,并形成水泡
高倍镜:绒毛间质高度水肿,间质内血管减少或消失.绒毛表面细胞滋养层细胞核合体滋养层细胞增生活跃,有的形成团块.合体细胞胞浆红染, 54.绒毛膜癌
低倍镜:癌细胞由两种细胞组成,无绒毛,无间质,无血管,侵入子宫平滑肌层,伴有出血坏死和炎细胞浸润
高倍镜:一种癌细胞与细胞滋养层细胞相似,细胞界限清楚,胞浆丰富而淡染,核大而圆,核膜增厚,核空泡状.另一种癌细胞与合体滋养层细胞相似,体积大,形态不规则,胞浆丰富红染,核长椭圆形.两种癌细胞多少不等,彼此紧密镶嵌,组成部规则的团块状或条索状.55.子宫颈原位癌
低倍镜:子宫颈上皮全层不典型增生与癌变,基底膜完整,间质无浸润
高倍镜:增生上皮异型性明显,核浆比例失常,核大小不等.核分裂像增多,多见病理性核分裂像.细胞排列紊乱,极性消失 56.卵巢粘液性囊腺瘤
低倍镜：上皮为单层高柱状粘液上皮,胞浆含清亮粘液,核位于基底部,大小形态比较一致,染色质纤细,无明显核仁,无核分裂像,间质为纤维结缔组织.高倍镜: 57.卵巢浆液性囊腺瘤 低倍镜:肿瘤形成囊腔,囊壁内为乳头状增生,囊腔和乳头间质均由含血管的纤维结缔组织构成
高倍镜:乳头表面为单层柱状上皮或立方上皮,核大多位于中央,染色质纤细,核仁缺损不明显,无病理核分裂相 58.单纯性甲状腺肿
低倍镜:滤泡上皮增生肥大,呈立方上皮或柱状,间质充血,上皮细胞受压扁平.滤泡增生,大部分滤泡可显著扩大,内积多量浓厚的胶质,滤泡大小有明显差异 59
60.甲状腺腺瘤
低倍镜:瘤组织与正常甲状腺之间有包膜分隔,瘤组织与包膜外的甲状腺组织截然不同.高倍镜:瘤组织由许多小滤泡构成,滤泡圆形,由单层小立方上皮围绕而成.61.甲状腺乳头状腺癌
低倍镜:大部分为癌组织,一侧可见正常的甲状腺组织,两者间有不完整的纤维间隔存在.高倍镜:癌组织围绕纤维血管中心轴呈乳头状排列.乳头分支较复杂,有三级以上分支.癌细胞矮柱状或立方状,染色质少,透明或毛玻璃样,无核仁,间质中常有啥立体出现.包膜及血管亦被上述癌组织 62.肺结核
低倍镜:肺组织内可见多个结核结节,中央部为干酪样坏死.高倍镜:干酪样坏死灶周围可见放射状排列的类上皮细胞核朗格汉斯巨细胞,外周有大量成纤维细胞
诊断要点：肺组织内有结核结节，结核结节由干酪样坏死灶，朗格汉斯细胞，类上皮细胞及成纤维细胞组成 63.淋巴结结核
低倍镜:淋巴结组织中有多数散在的结核结节,部分可见干酪样坏死,无结核区可见正常的淋巴小结和窦,索结构
高倍镜:结节中有朗格汉斯巨细胞和干酪样坏死物,周围为环形或放射状排列的类上皮细胞,外层为增生的成纤维细胞核纤维细胞围绕.66.细菌性痢疾
粘膜上面有假膜覆盖,假膜由大量坏死组织和纤维素组成.粘膜上层及腺体大片消失,粘膜下层,肌层,浆膜层有大量炎细胞浸润 67.阿米巴痢疾
低倍镜：肠粘膜发生液化性坏死，形成无结构的淡红染物质.周围粘膜见充血出血及少量淋巴细胞和浆细胞浸润.溃疡底部和边缘可见残存的坏死组织,周围炎性反应不明显.高倍镜:坏死组织和活组织交界处可找到阿米巴滋养体,圆形,直接打,核小而圆,胞浆略嗜酸性,其中可见红细胞,淋巴细胞和坏死组织碎片.
第三篇：病理组织切片制作技术
病理组织切片制作技术
病理组织切片常用的制作方法有三种。即石蜡切片法，冰冻切片法和火棉胶切片法。以石蜡切片法为代表，切片的基本制作过程是：
组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。
以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。因此应细致、耐心、认真负责，并事先做好计划安排。
一、取材
采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压，扯拉病料，以防人为损伤。切取的工具要清洁。采取病料越新鲜越好，一般不超过死后24小时。应选择病变部与可疑病变部切取，切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。特殊病料应根据器官的结构特点切取。管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。
二、固定
固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。材料取下后，应迅速固定。固定液数量应为病理组织块的5到20倍。由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配成。
三、冲洗
固定后的组织块，应将固定液洗去。一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗，也可用较大容器盛装水浸洗，每隔相当时间换水一次。整个浸洗时间比流水冲洗应稍长一些。酒精固定的组织材料不需冲洗。
四、脱水
经过固定的组织，冲洗后要进行脱水。脱水的目的在于将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，为石蜡等其他包埋剂浸入组织创造条件。常用的脱水剂为酒精。由于酒精可以任何比例与水结合，对组织穿透力强，又能使组织硬化，因而不能将组织从水中直接移入浓度高的酒精中，应从低浓度逐渐到高浓度。脱水必须充分，否则给浸蜡造成困难。
除用酒精作脱水剂外，还可以用正丁醇（N—Butyla alcohol）。正丁醇微溶于水，能与各种浓度酒精混合，也能直接溶解石蜡。故组织经正丁醇脱水后，不须经二甲苯透明。用正丁醇作脱水剂，组织块收缩减低，也不会过硬，故比酒精优越。
五、透明
透明的目的是将组织内的酒精用矿物油或植物油置换出来，并溶解石蜡，帮助石蜡浸透组织。由于经过透明剂处理的组织块用肉眼观察呈透明状，故称这一过程为透明。常用的透明剂为二甲苯（Xylol），因其穿透力较强，因而组织在二甲苯中停留时间不宜过长，一般透明时间在30分钟左右即可。
六、浸蜡 浸蜡是指组织经过透明作用以后，放入溶化的石蜡中浸渗，使石蜡浸入组织块中，冷却后，才能进行切片。
通常选择熔点在52～56℃之间的石蜡，并视切片时环境的气温而选择。室温高则选用熔点稍高的石蜡，反之，则选用熔点较低的石蜡，这样可防止切片时石蜡太软或易碎裂。浸蜡的过程是：
二甲苯石蜡混合液（1：1）
1小时 二甲苯石蜡混合液（1：2）
1小时
石蜡（1）
1小时30分 石蜡（2）
1小时30分
上述过程可在56℃～58℃恒温箱中进行，含二甲苯的混合液可用磨口小瓶盛装。
七、包埋
包埋就是将已浸渗好的组织包埋于浸渗剂中。根据需要，包埋的方法常有石蜡包埋法和火棉胶包埋法。石蜡包埋法：
（1）先将熔化的石蜡倒入包埋框，用加热的镊子将欲包埋的组织块在蜡液内放置好。注意各组织块之间的距离和每个组织块的位置和方向。
（2）迅速第二次往平皿内倾倒蜡液，淹没组织块。待蜡液出现凝固层后，即轻轻放入冷水盆中或冰箱中使其凝固。石蜡完全凝固后，倒出冷缩的蜡块片，用加热的外科刀，按组织块位置修整蜡片待用。
对于实验动物（狗和兔等）组织，一般的脱水透明和浸蜡时间如下： 处理步骤处理时间（min）处理步骤处理时间（min）① 75%酒精长短不定二甲苯Ⅰ、Ⅱ⑥ 30 ② 85%酒精 120－300 二甲苯Ⅲ⑦ 60
③ 95%酒精Ⅰ和Ⅱ 120－300 56－58℃石蜡⑧ 30 ④无水酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 30 56－58℃石蜡⑨ 60－120 ⑤无水酒精Ⅲ 60－120 56－58℃石蜡⑩ 120－180
注：摘自病理学技术，人民卫生出版社，王伯，李玉松，黄高，张远强主编。
八、组织切片
不同的切片制备方法，其切片方法也有较大差别，组织切片法包括石蜡切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、石蜡包埋半薄切片法、树脂包埋薄切片法和大组织石蜡切片法等。常用的切片工具包括组织切片机、切片刀和自动磨刀仪器等。以下分别加以叙述。
（一）石蜡切片法
组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程称为石蜡切片法。为现在病理诊断常用的制作切片的方法。在切片前应先切去标本周围过多的石蜡（此过程称为修块）但也不能留得太少，否则易造成组织破坏，连续切片时分片困难。一般切4－6μm的切片，特殊情况可切1－2μm。要观察病变的连续性，可制作连续切片。除此之外，石蜡包埋的组织便于长期保存，因此石蜡切片仍是目前各种切片制作方法中最常用，最普遍的一种方法。
1．切片前的准备
（1）固定后的标本经脱水、透明、浸蜡和包埋后，制成蜡块。高质量的蜡块和锋利的切片刀是保证切片质量的关键环节。检查切片刀是否锋利，简便的方法是用头发在刀锋上碰一下，如一碰即断，说明刀锋锋利。用显微镜观察可确定刀口是否平整，有无缺口。
（2）准备充足的经过处理的清洁载玻片和恒温烤片装置，大中号优质狼毫毛笔和铅笔（用于在载玻片的粗糙端写号），如用普通载玻片，可用碳素墨水和蛋白甘油按3：1体积混合后书写。
2．切片制作过程
（1）将预先修好的组织块先在冰箱中冷却，而后装在切片机固定装置上。将切片刀装在刀架上，刀刃与蜡块表面呈5℃夹角。将蜡块固定，调整蜡块与刀至合适位置，并移动刀架或蜡块固定装置，使蜡块与刀刃接触。
（2）切片多使用轮转式切片机，使用时左手执毛笔，右手旋转切片机转轮。先修出标本，直到组织全部暴露于切面为止，但小标本注意不要修得太多，以免无法切出满意的用于诊断的切片，标本应注意切全。切出蜡片后，用毛笔轻轻地托起，尔后用眼科镊夹起，正面向上放入展片箱（展片温度根据作用的石蜡熔点进行调整，一般低于蜡熔点10～12℃），待切片展平后，即可进行分片和捞片。切片经30%的酒精初展后，再用载玻片捞起放入展片箱更易展平。为减少切片刀与组织块在切片过程中产生的热量，使石蜡保持合适的硬度，切片时可经常用冰块冷却切片刀和组织块，尤其在夏季高温季节更为必要。（3）轮转式切片机切取组织，是由下向上切，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分放在上端（如皮肤组织，应将表皮部分向上。而胃肠等组织，应将浆膜面朝上）。
（4）捞片时注意位置，要留出贴标签的空间，并注意整齐美观。捞起切片后，立即写上编号。
（5）切片捞起后，在空气中略微干燥后即可烤片。一般在60℃左右烤箱内烤30min即可，也可用烤片器烤片。血凝块和皮肤组织应及时烤片。但对脑组织待完全晾干后，才能进行烤片。否则，可能产生气泡影响染色。
3．注意事项
（1）组织的取材和固定 取材时，组织块的大小厚薄应适当，过大、过厚的组织，固定液不易渗透，易引起固定不良。过小、过薄的组织，在固定和脱水的过程中易变硬或产生弯曲扭转，同样影响切片质量。陈旧、腐败和干枯的组织不宜制作切片。用陈腐组织制成的切片，往往核浆共染，染色模糊，组织结构不清，无法进行观察。固定不及时和固定不当的组织，染色时常出现核质着色较浅，轮廓不清，出现不同程度的片状发白区。组织固定时，固定液的量应充足，至少要在4倍以上，同时注意组织块不要与容器粘连。至于组织固定的时间，根据具体情况加以掌握。有关固定时应注意的事项，可参见有关章节。（2）组织脱水、透明和浸蜡组织脱水用的各级酒精，应保证相应浓度，以便组织脱水彻底。但无水酒精中，组织块放置时间不宜过长，否则组织过硬，切片困难。遇到此情况，可将组织浸在香柏油中软化，用二甲苯洗去香柏油后，再重新浸蜡和包埋。脱水酒精，尤其是无水酒精中混有水分，则组织脱水不干净。经二甲苯时，组织也无法透明，呈现浑浊。此时应将组织在新的酒精中重新脱水。二甲苯透明也应充分，否则不利于石蜡的浸透。但组织在二甲苯内的时间应严格掌握，时间过长组织易碎，也无法切出好的切片。时间不足，则石蜡不易浸透。浸蜡的温度也不宜过高，时间长短也应加以控制。总之，组织脱水、透明和浸蜡对于切片质量都有一定影响，组织脱水、透明和浸蜡过度，组织块变硬变脆，因此对于小块组织或小动物标本应注意时间。但若时间不够，组织块硬化不够，也不利于切片和染色，因此，应注意各具体环节的操作，并注意保证各种试剂的质量。
（3）切片切片刀要求锋利且无缺口，切片自行卷起多由切片刀不锋利所致，切片刀有缺口时，易造成切片断裂破碎和不完整。骨组织切片时，用重型刀较好。全钢刀或单面钨刀也适合石蜡或火棉胶包埋的骨组织。
（4）切片刀和切片机切片刀放置的倾角以20－30℃为好。倾角过大切片上卷，不能连在一起。过小则切片皱起。应注意维护切片机，防止因螺丝松动产生震动，切片时会造成切片厚薄不均。遇硬化过度的肝、脑、脾等组织时，应轻轻切削，防止由于震动产生空洞现象。（5）特殊要求切片的制作 石蜡切片虽然有很多优点，但制片过程中要经过酒精和二甲苯等有机溶剂处理，因此很易造成组织内抗原性的丧失，在用于免疫组织化学染色时影响结果的准确性。因而有人采用冷冻干燥包埋法，即将新鲜组织低温速冻，利用冷冻干燥机在真空和低温条件下除去组织内的水分，然后用甲醛蒸汽固定干燥后的组织，而后在进行浸蜡、包埋和切片。此法可保存组织内的可溶性物质，防止蛋白质变性和酶的失活，减少抗原的丢失。用于免疫荧光标记、免疫酶标记和放射自显影。
（二）冰冻切片法
冰冻切片在组织学技术中应用广泛，对临床快速病理诊断尤其具有重要意义。另外，因冰冻切片制作时不经各级酒精的脱水，二甲苯的透明等过程，因此对脂肪和类脂的保存较好，在进行脂肪染色和神经组织髓鞘的染色常用。冰冻切片多用于新鲜组织，甲醛固定的组织和低温冰箱冷藏的组织块等。组织不经任何包埋剂而直接放在制冷台上冷却后进行切片。
1．恒冷箱切片 将组织块在恒冷箱的切片机上切片。恒冷箱切片机的种类较多，可根据实际情况加以选用。一般调节温度为－25℃左右。箱内温度下降后，打开观察窗，将组织固着器放置到速冻台上，先放少量OCT或羧甲基纤维素，待冻结后将组织块放上，并在其周围加适量包埋剂，将组织块包埋。组织冻结后，将组织固着器装到切片机上，调整组织的切面与刀刃平行并贴近刀刃，将厚度调至适当位置后，关闭观察窗。初步修出组织切面后，放下抗卷板，开始切片。切出切片用载玻片贴附后，进行吹干或固定。这种切片用于科研和教学的连续切片，效果较好。在切片前，应预先启动进行预冷，同时准备多个冷却台，用于多块组织切片。
2．半导体制冷冰冻切片法 组织块放置在半导体制冷台上，加少许蒸馏水，调好切片的厚度。接通循环流水后，再接通电源，而且在使用的全过程中流水不能中断，关闭电路后，才能停水。还应注意电源正负极不能接反，用整流电源控制温度。冰冻组织周围的水不宜过多，用手检查组织块的硬度，当可切成厚薄一致的切片时，即可切片。切片用毛笔展平后，立即用载玻片贴附，待切片刚要融化时，即刻入固定液内固定1min。已固定的组织切片，收集于清水中。根据目的进行染色。暂时不染色的切片，用载玻片吸附。
3．甲醇制冷器 制冷箱为附有带导管的制冷台和制冷刀的甲醇循环装置，其冷却速度较快，属开放式，做一般常规冰冻切片用。
4．二氧化碳冰冻法 将组织块用蒸馏水洗后，放在冰冻切片机的冷冻台上，加蒸馏水少许。打开冷冻台的二氧化碳开关，二氧化碳气体喷出，待组织出现冷霜时，关闭二氧化碳，即可切片。组织冷冻过硬易碎，若冷冻不够，组织块硬度不足，切片呈粥糜状，无法成片，应用间歇冷却法继续冷却。硬度一般在刚开始解冻时最适合，应迅速切片。
5．冰冻切片粘片法冰冻切片粘片法基本按石蜡切片的粘片处理，但烤片温度不宜超过40℃。烤干后立即取出，温度过高，时间过长，则切片易碎。烤干后用70%酒精和自来水略洗后即可染色。
九、苏木精－伊红染色方法
苏木精-伊红染色方法，简称HE染色方法，是生物学和医学的细胞与组织学最广泛应用的染色方法。在病理学实验室中称为常规染色方法。病理细胞和组织学的诊断，教学和研究都是用HE染色方法观察正常和病变组织的形态结构。因此病理学工作者必需学习和掌握这种染色方法。
（一）HE染色的基本原理
1．细胞核染色的原理
细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精硷性染料以离子键或氢键结合而染色。苏木精在碱性染料中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2．细胞浆染色的原理
细胞浆内主要成分是蛋白质，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。伊红是细胞浆的良好染料。
随着科学技术快速发展和电子计算机的广泛应用，染色自动仪器的出现，许多实验室已用全自动染色机代替人工染色。
（二）人工操作苏木精伊红染色方法
1．染色步骤 二甲苯I脱蜡10min.二甲苯II脱蜡5min。
无水乙醇洗去二甲苯1min×2次。
95%酒精1min。
90%酒精1min。
85%酒精1min。自来水洗2min。
苏木精染色1min至5min。自来水洗1min。
1%盐酸酒精分化20s。自来水洗1min。
稀氨水（1%）反蓝30s。自来水洗或蒸馏水洗1min。伊红染色20s至5min。自来水洗30s。
85%酒精脱水20s。
90%酒精30s。
95%I酒精1min。
95%II酒精1min。无水乙醇I 2min。无水乙醇II 2min。二甲苯I 2min。二甲苯II 2min。二甲苯III 2min。
中性树胶或加拿大树胶封片。
2．染色结果
细胞核呈蓝色，细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色。
（三）自动染色机苏木精伊红染色程序
1．二甲苯I 10min。
2．二甲苯II 10min。
3．无水乙醇1min。
4．无水乙醇1min。
5．95%酒精I 1min。
6．95%酒精II 1min。
7．90%酒精I 1min。
8．80%酒精1min。
9．自来水洗1min。
10．苏木精染色1至5min。
11．自来水洗1min。
12．1%盐酸酒精分化30s。
13．自来水洗5min。
14．伊红染色30s至5min。
15．自来水洗30s。
16．85%酒精20s。
17．90%酒精30s。
18．95%酒精1min。
19．95%酒精1min。
20．无水乙醇I 2min。
21．无水乙醇II 2min。
22．二甲苯I 2min。
23．二甲苯II 2min。
24．二甲苯III 2min。
25．中性树胶或加拿大树胶封片。
（四）冰冻切片苏木精伊红染色
1．恒冷箱冰冻切片，粘贴在载玻片上，用95%酒精95ml和冰醋酸5ml的混合固定液固定1min。自来水洗。
2．苏木精染色1～2min。
3．自来水洗30s。
4．1%盐酸酒精分化20s。
5．自来水洗20s。
6．稀氨水30s。
7．自来水洗20s。
8．伊红染色20s～1min。
9．自来水洗10s。
10．85%酒精20s。
11．90%酒精30s。
12．95%酒精1min。
13．无水乙醇I 1min。
14．无水乙醇II 2min。
15．二甲苯I 1min。
16．二甲苯II 2min。
17．二甲苯III 2min。
18．中性树胶或加拿大树胶封片。
（五）染色液的配制
1．苏木精（素）
苏木精是一种纯天然染料，是从苏木素树提炼出来的，苏木树主产墨西哥的坎偑切，苏木精的染色性能差，经过一百多年精心加工配制，现用的苏木精配方，染色性能好，保持时间长，是世界上唯一的常规细胞核染料，2．苏木精的配制
苏木精的配方很多，可根据不同需要选用，Harris配方最常用。（1）Harris苏木精的配制 苏木精1g 硫酸铝钾15g 无水乙醇10ml 蒸馏水200ml
先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，用无水乙醇溶解苏木精再倒入已溶解的硫酸铝钾蒸馏水中，煮沸1min后，稍冷却，慢慢加入红色氧化汞0.5g，继续加热至染液变为紫红色，用纱布盖瓶口，用前滤纸过滤后每100ml加冰醋酸5ml。（2）Mayer苏木精改良配法
A液 苏木精2g
无水乙醇40ml
B液
硫酸铝钾100g 蒸馏水600ml
稍加热使硫酸铝钾在水中溶解，将苏木精溶于酒精中，再将A液与B液混合煮沸2min。用蒸馏水补足600ml，加入400mg碘酸钠充分混匀，苏木精染液呈紫红色。（3）Gill改良苏木精染液的配制 苏木精2g
无水乙醇250ml 硫酸铝钾17g 蒸馏水750ml 碘酸钠0.2g 冰醋酸20ml
先将苏木精溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中。两液溶解后将其混合，加入碘酸钠待苏木精氧化成紫红色，再加入冰醋酸。
3．伊红溶液的配制（1）水溶性伊红 伊红Y0.5－1g 蒸馏水100ml
先将水溶性伊红加入蒸馏水中，用玻璃棒将伊红搅起泡沫后过滤，每100ml加冰醋酸1滴。（2）乙醇性伊红液的配制 伊红Y 0.5～1g
90%酒精100ml
先将伊红溶于酒精中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸1滴。用乙醇性伊红液染细胞浆后不可经水洗直接用85%酒精脱水。
4．盐酸酒精分化液的配制 浓盐酸0.5～1ml
75%酒精99ml
此液用一段时间后需要延长或更换液体，新液分化时间要短。
5．染色中注意事项（1）脱蜡 石蜡切片必需经过脱蜡后才能染色，脱蜡前切片要经烘烤，这样使组织与玻璃片粘贴牢固。组织切片脱蜡应彻底，脱蜡好坏主要取决于二甲苯的温度和时间，所有的时间都是指新的二甲苯在室温25℃以下时，如果二甲苯是用过一段时间，切片又比较厚，室温低应增加脱蜡时间，脱蜡不净是影响染色不良的重要原因之一。（2）染色
石蜡切片经水洗后放入Harris苏木精染色，一般情况下在新配的苏木精溶液中只需要染1min左右，应根据染片的多少，逐步把染色时间延长。苏木精染色后，不宜在水中和盐酸酒精停留过长，切片分化程度应在镜下观察，分化过度，应水洗后重新在苏木精中染色，再水洗分化和使切片在自来水或稀氨水中充分变蓝。
新配的伊红染色快，切片染色不宜过长，应根据染切片的多少逐步延长染色时间，切片经伊红染后，水洗时间要短。（3）脱水
切片经过染色后，通过各级酒精脱水，首先从低浓度到高浓度，低浓度酒精对伊红有分化作用，切片经过低浓度时间要短，向高浓度时逐步延长脱水时间；脱水不彻底，使切片发雾，在显微镜下组织结构模糊不清。（4）透明与封片
石蜡组织切片染色经过脱水后必须经二甲苯处理，使切片透明，才能用树胶封片。常用切片封片胶有国产的中性树胶，光学树胶，加拿大树胶和合成树脂（DPX）。在封片时，树胶不能太稀或太稠，不能滴加的太多或太少，太稀或太少切片容易空泡，树胶也不可太多，不要使树胶溢出玻片四周太多。标签要附贴牢固。封片中不能对着切片呼气。（5）常规石蜡切片和HE染色标本的质量标准（全国统一评定标准）①切片完整，厚度4－6um，薄厚均匀，无褶无刀痕。②染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。
第四篇：冰冻切片快速病理诊断30年总结
冰冻切片快速病理诊断30年总结
秦皇岛市肿瘤医院病理科
康文喜 谢芳芳 王小聪 李英 邮编：066001
术中冰冻切片快速病理诊断是1818年由Pieter de Riemer首先创造发明的，1891年Halsted和Accarty将冰冻切片技术列为正式诊断方法。目前国内外已将此项技术普遍应用于临床，解决手术中的病理诊断问题。并日益受到外科医生和患者的欢迎和肯定。随着冰冻切片技术和临床外科手术的发展，要求做冰冻的病例逐年增多，截止到2012年10月份，本院病理科开展快速冰冻病理诊断30余年，共完成冰冻快速病理诊断1476例，积累了一定的经验和教训，为了更进一步提高冰冻快速病理诊断水平，提高冰冻诊断准确率，降低误诊率，作者将30年来所有冰冻切片快速病理诊断病例进行总结分析如下。1 材料和方法
1.1 一般资料
本组1476例大部分来自本院住院病人，小部分来自其他医院。其中男897例，女579例，年龄最大81岁，最小5个月。1.2 病变部位
乳腺1052例，软组织42例，胃33例，淋巴结33例，骨12例，腹膜9例，睾丸及附睾8例，甲状腺47例，小肠15例，大肠25例，膀胱5例，脊椎5例，阑尾10例，胆道14例，阴茎19例，卵巢53例，脑及脑膜3例，前列腺3例，肝12例，肾26例，脊髓2例，喉2例，子宫42例，精索1例，纵隔1例，腹膜后1例，眼1例。
1.3 方法
本组1476例均采用德国进口莱卡冰冻切片机切片，HE染色，普通光学显微镜观察。
1.4 结果
1476例中，恶性肿瘤687例，良性肿瘤388例，瘤样病变170例，炎症202例，结核29例，确诊1457例，未能确诊15例，误诊4例。2.讨
论
冰冻切片质量差，最初很多著名的病理学家如Ewing、Brewer、Simpson等曾经怀疑冰冻切片的准确性，1960年Cryostat冰冻切片机正式应用于临床后，冰冻切片质量有了很大提高，但和石蜡切片相比仍很逊色，对准确的冰冻病理诊断带来一定困难，尤其对年轻的病理科医生来说难度较大，缺乏经验的病理科医生难以胜任此项工作，下面根据自己个人的经验发表一点看法。
2.1 冰冻切片快速病理诊断的优缺点：冰冻切片快速病理诊断的优点是在手术过程中随时取材，迅速做出准确可靠的病理诊断，同时也减少了病人二次手术的痛苦。缺点是切片厚，细胞大，层次多，易造成错觉。另外冰冻切片诊断要求报告快，没有更多思考讨论余地，一旦报错，将造成严重的无法弥补的后果。
2.2 准确率：本文对1476例冰冻切片进行了统计分析，结果准确率为98.7%，未能确诊率为1.02%，误诊率为0.3%，与国内报道相比准确率相仿，而误诊率低于各家报道。
2.3 未能确诊和误诊的原因：⑴
取材不当：恰当准确的取材是正确诊断的必备条件，取材不当就不可能得出正确的病理诊断。当临床切取肿物困难时，所送检的肿物标本不一定是肿物中心组织，很可能是肿物边缘组织，这种组织大部分是肿物周围的正常成分，或仅带有少量肿物，此时应多切几个切面进行观察，在把握不足的情况下可多取几块组织做切片，以防漏诊。⑵
切片质量不佳：切片过厚，组织未能展平出现折叠，组织缺损，染色深浅不均等都直接影响诊断结果。因此，一张高质量的冰冻切片要求厚度不得超过10微米，而且要平整，无折叠无破损，染色深浅适中。
图1：乳腺冰冻切片
图2：同一病例常规石蜡切片
⑶
病理医师经验不足：医生经验不足是误诊的重要原因，从事冰冻快速病理诊断的医生，必须要经过相当长的时间训练和有足够的石蜡切片诊断经验方能胜任此项工作。2.4 冰冻切片快速病理诊断应注意的几个问题：⑴
甲状腺肿物冰冻切片
滤泡性甲状腺癌、胚胎型甲状腺瘤和 Hurhle 氏细胞腺瘤的良恶性鉴别诊断在常规石蜡切片上均有一定难度，在冰冻切片上若想准确的进行鉴别则更加困难，为了防止误诊，有些知名的老专家主张在基层单位的病理科不宜开展甲状腺肿物的冰冻切片快速病理诊断。我们认为，当冰冻切片较难做出良恶性判断时应等石蜡切片确诊，不要冒然发出良性或恶性的报告。另外在许多甲状腺疾病中常常出现一种多形性大细胞，易与恶性肿瘤细胞相混淆，在冰冻切片诊断时应特别注意。这种细胞与恶性肿瘤细胞不同之处是染色质分布均匀，胞浆丰富，不见核分裂像。⑵
淋巴结
术中送淋巴结做冰冻快速病理检查多用于确定有无癌转移，以便手术医生选择手术方式和手术范围。原发于淋巴结的恶性淋巴瘤一般不用冰冻切片方法进行诊断，因为正常未脱水的淋巴细胞膨胀，体积大，加之切片厚，很难与恶性淋巴瘤瘤细胞进行区别，在冰冻切片诊断淋巴结原发性恶性淋巴瘤时要格外慎重。⑶
骨：骨肿瘤冰冻切片快速病理诊断因涉及到截肢，病理科医生的责任十分重大，应慎之又慎。在诊断中一定要密切结合临床及X线，特别是镜下观察，必须结合大体标本的形态特点、取材部位认真分析作出判断。因骨肿瘤病理形态变化多端，送检组织块小常不能代表肿瘤病变全貌，给良恶性判断带来非常大的困难，在确实无法肯定良恶性时，应缝合切口，待石蜡切片确诊后再做处理。
第五篇：手术中冰冻切片病理检查志愿书
接受手术中冰冻切片病理检查志愿书
门诊、住院科 室ID号住院号
姓名年龄性别职别单位
手术中冰冻切片病理检查是将切下的病变组织在冰冻切片机中迅速冷冻后制成病理切片，由病理医师即刻在显微镜下检查，做出病现诊断，主要目的是：（1）帮助判断病变的性质。如：炎症、肿瘤或其它性质的病变；如果是肿瘤，则需进一步判断是良性还是恶性肿瘤。（2）帮助判断切除肿瘤组织的边缘是否有残留的癌组织。（3）帮助辨认手术切除组织。
（4）判断手术切除的淋巴结中有无转移的癌细胞。冰冻切片病理诊断结果作为术中会诊意见提供给临床医生，临床医生将其作为重要的参考依据决定进一步手术的方式和范围。与常规石蜡包埋切片相比，冰冻切片诊断的局限性是：（1）冰冻切片质量较差，诊断准确率低于常规石蜡切片。（2）在做冰冻切片采取活检组织时，有造成肿瘤种植的可能，特别是在甲状腺和肺等实质器官。（3）术中冰冻切片技术不适用于脂肪组织和骨组织。（4）某些疑难病例和交界性病例有时在石蜡切片诊断都很困难，需要做免疫组化和电镜观察，仅凭冰冻切片难以确定诊断，因而要延缓病理诊断。（5）冰冻切片取材局限，有时局部的组织不能代表整个标本。因此，有的病例冰冻切片组织象和手术切除大标本的石蜡切片组织象相差很远，甚至造成假阴性诊断。（6）病变组织在冷冻过程中不可避免地形成冰晶，以及组织处理和诊断时间紧迫等技术因素所限，“冰冻”诊断的准确率有一定的局限性，有可能与最终的“常规”病理切片诊断不相符合，最后病理诊断应以“常规病理诊断为准”。
医师签名：年月日
我已仔细阅读并了解上述关于“冰冻”切片病理诊断的作用及其局限性，同意对实施手术中切除的病变组织进行冰冻切片快速病理检查。
患者本人签字：
代表签字：（与患者关系：）
年月日
注：本志愿书除不能明辨是非、不能正确表达的伤病员可由法定代理人签字外，均由伤病员本人签字
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