乙醇脱氢酶的分离提纯鉴定与定量

第一篇：乙醇脱氢酶的分离提纯鉴定与定量

乙醇脱氢酶的分离提纯鉴定与定量

乙醇脱氢酶的分离提纯鉴定与定量

12级临本二班 吕梦月 许力飞

王雅琦 王明华 马翔 张宇 王帅

实验目的：乙醇脱氢酶的分离提纯鉴定与定量 实验原理：

分离：加蛋白质抑制剂：竞争性或非竞争性抑制蛋白酶活性；防止蛋白酶分解；除核酸：利用核酸和蛋白质在链霉素磷酸酶中溶解度不同除去核酸；去盐 ：超滤液筛分过程，以膜两侧的压力差为驱动力，以超滤膜为过度介质，在一定的压力下，当原液流过膜表面时，超滤液膜表面密布的许多细小的微孔只允许水及小分子物质通过而成为透过液，而原液中体积大于膜表面微孔径的物质则被截留在膜的进液侧，成为浓缩液，因而实现对原液的净化、分离和浓缩的目的。等电点测定法的原理：在等电点时蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子静电荷为零，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互作用之间的作用减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。

提纯：醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm为宜。太厚吸水性差，分离效果不好；太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。

鉴定：乙醇脱氢酶可将乙醇分解生成乙醛

定量：SDS-PAGE即十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法：1.在混合样品中各蛋白质组分的迁移率主要取决于分子大小和形状以及所带电荷量。2.在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入适量SDS(阴离子表面活性剂)，使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上(一定条件下，大多数蛋白质与之结合比为1.4g SDS/1g protein)，使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而掩盖了不同种类蛋白质之间原有的电荷差别。此时特定蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于其分子量大小，而其它因素对电泳迁移率的影响几乎可以忽略不计。3.蛋白质分子量在15,000～200,000之间时，电泳迁移率与分子量的对数值线性相关：若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图，可以获得一条标准曲线，而从未知蛋白质在相同电泳条件下的迁移率即可在标准曲线上求得其分子量。

实验试剂与器材：

器材：剪刀、研钵、铁架台、漏斗、烧杯、玻璃棒、滤纸、试管一支、管式的超滤装置、聚酰胺膜、醋酸纤维薄膜（2×8厘米）；常压电泳仪；点样器（市售或自制）；培养皿（染色及漂洗）（直径9cm—10cm）；普通滤纸；玻璃板；钝头镊子；白瓷反应板；试管（15～20ml）；水浴；分光光度计；离心机；比色杯（光径1cm）

试剂：磷酰胺素、1%~2%的链霉素硫酸盐、硫酸铵、0.02mol/L的盐酸、PH7.4的磷酸盐 缓冲液、0.1mol/mL的氢氧化钠、去离子水、巴比妥—巴比妥钠缓冲液（pH8.6，0.07mol/L，离子强度0.06）：称取1.66g巴比妥（AR）和12.76g巴比妥钠（AR），置于三角烧瓶中，加蒸馏水约600ml，稍加热溶解，冷却后用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存，、.交联葡聚糖G-25(细粒)、0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.0)、0.4% K3Fe(CN)6、乙醇脱氢酶的标准溶液、乙醇、染色液（0.5%氨基黑10B）：称取0.5g氨基黑10B，加蒸馏水40ml，甲醇（AR）50ml，冰乙酸（AR）10ml混匀溶解后置具塞试剂瓶中贮存、漂洗液：取95%乙醇（AR）45ml，冰乙酸（AR）5ml和蒸馏水50 ml混匀置具塞试剂瓶贮存、透明液：临用前配制。

甲液：取冰乙酸（AR）15ml，无水乙醇（AR）85ml，混匀置试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。

乙醇脱氢酶的分离提纯鉴定与定量

乙液：取冰乙酸（AR）25ml，无水乙醇（AR）75ml，混匀置试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。、保存液：液体石蜡、定量洗脱液（0.4mol/L NaOH溶液）：称取16g氢氧化钠（AR）用少量蒸馏水溶解后定容至1000ml。

实验步骤：

分离：1.细胞破碎：将10g肝组织用剪刀剪碎，放入研钵中,加入0.067mol/LPH7.4的磷酸盐缓冲液4ml研磨成糊状，再加2ml0.067mol/LPH7.4的磷酸盐缓冲液,搅匀，然后将所得的物质过滤，取滤液。2.添加蛋白质抑制剂：在盛有研磨液的试管中加入5ml磷酰胺素，震荡40度水浴中保温30min。3.除核酸：逐滴加入1%~2%的链霉素硫酸盐，直至沉淀不再产生。进行过滤除去沉淀。4.盐析：逐滴加入硫酸铵溶液直至蛋白质不再沉淀。进行过滤取其沉淀部分，并加入适量磷酸盐缓冲液直至蛋白形成6ml糊状物。5.去盐：将上述溶液放入超滤装置中，使蛋白质和小分子物质分离开，将大分子物质分离开并加入一定量磷酸盐缓冲液直至糊状物形成6ml。6.等电点沉淀法：在上述溶液中加入一定量0.02mol/L盐酸边加入边搅拌，一边用PH剂测量使其PH值调至5.4，然后倒置离心机中6000r/min离心15分钟，倒掉上清液，再在此溶液中加入6ml去离子水，震荡使下部的沉淀重新溶解，并以0.1mol/mL的氢氧化钠将其PH值调至8.6.重复进行两次。

提纯：醋酸纤维膜电泳：1电泳槽与薄膜的制备（1）醋酸纤维素薄膜的湿润与选择：用钝头镊子取一片薄膜，在薄膜无光泽面上，距边2cm处用铅笔各划一条直线此线为点样标志区。小心地平放在盛有缓冲液的平皿中。若漂浮于液面的薄膜在15s—30s内迅速湿润，整条薄膜色泽深浅一致，则此膜均匀可用于电泳；若薄膜湿润缓慢，色泽深浅不一或有条纹及斑点，则表示薄膜厚薄不均匀应舍去，以免影响电泳结果，将选好的薄膜用竹夹子轻压，使其完全浸泡于缓冲液中约30min后方可用于电泳。（2）电泳槽的准备：根据电泳槽的宽度，剪裁尺寸合适的滤纸条。在两个电极槽中，各倒等体积的电极缓冲液，在电泳槽的两个膜支架上，各放两层滤纸条，使滤纸的长边与支架前沿对齐，另一端浸入电极缓冲液内。当滤纸条全部浸润后，用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡，使滤纸的一端能紧贴在膜支架上。

2、点样用钝头镊子取出浸透的薄膜，夹在两层滤纸间以吸去多余的缓冲液，无光泽面向上平放在点样板上，点样时用点样器沾少许经分离的肝脏研磨液，再将点样器轻轻印在点样区内，样品线长度一般为1.5cm，宽度一般不超过3mm.使经分离的肝脏研磨液完全渗透至薄膜内，形成一定宽度、粗细均匀的直线，用同样的方法对标准乙醇脱氢酶溶液进行点样。

3、电泳 用钝头镊子将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上。如图1-2-9所示，要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直，中间不能下垂，如一电泳槽同时安放几张薄膜，则薄膜之间应隔几毫米，盖上电泳槽盖使薄膜平衡10min。用导线将电泳槽的正、负极与电泳仪的正、负极分别连接，注意不要接错。在室温下电泳，打开电源开关，调旋钮调到每厘米电流强度为0.3mA（8块薄膜则为4.8mA）。通电10min—15min后，将电流调节到每厘米膜宽电流强度为0.5mA（8片共8mA），电泳时间约50min—60min。电泳后调节旋钮使电流为零，关闭电泳仪切断电源或自然风干。

4、染色与漂洗用钝头镊子取出电泳后的薄膜，无光泽面向上，放在含有0.5％氨基黑10B染色液的培养皿中，浸染5min。取出后用自来水冲去多余染料，然后放到盛有漂洗液的培养皿中，每隔10min换漂洗液一次，连续数次，直至背景蓝色脱尽。取出后放在滤纸上，用电吹风的冷风将薄膜吹干。凝胶层析法：1.凝胶准备 称取5g交联葡聚糖G-25,倾入锥形瓶中,加蒸馏水约60ml溶胀,搅动后静置.待凝胶沉积后,用倾注法除去浮于表面的细粒,重复3次.将溶胀后的凝胶用10倍体积的磷酸缓冲液浸泡过夜,以达平衡.2.装柱 取玻璃层析柱(25cm×1.5cm)一支,垂直装好.加入缓冲液,打开出口,将气泡赶出,关闭出口.然后从管顶向柱内加入缓冲液8cm左右高,将 2

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平衡后的交联葡聚糖G-25悬浮液边搅拌边加入柱内,再打开出口,使液体流出,继续不断地加入交联葡聚糖G-25悬浮液,柱内凝胶柱床沉积至高20cm左右时为止.床面上覆盖3ml缓冲液,关闭出口,在凝胶柱面上加盖一层圆形滤纸,使层析柱稳定5～10min后,接储液瓶,打开出口,用2倍于床体积的磷酸缓冲液洗脱平衡,最后关闭出口.3..上样,洗脱 打开平衡好的层析柱出口,使柱内溶液流出至刚露出柱床面时即关闭出口.吸混合物样品0.5ml左右,在距离床面1mm处沿管内壁轻轻转动加进样品,切勿搅动床面.然后打开出口,使样品进入床内,直至床面重新露出.同上加入1～2倍样品量体积的洗脱液(这样可以使样品定容至最小,而样品又完全进入床内),当少量洗脱液将流入床面时,加入多量的洗脱液,但注意切勿搅动床面凝胶,连接储液瓶进行洗脱.4.分部收集 根据电泳方法进行的结果可得乙醇脱氢酶为第N条带，用自动部分收集器,以5滴/min,5min/管的速度进行收集.并且观察柱上的色带,待第N柱液体流下时,再继续收集两管透明的洗脱液作为空白,关闭出口.即可收集到提纯后的乙醇脱氢酶。再进行醋酸纤维膜电泳进行一遍看看是否纯净，若不纯净则重复进行凝胶交换柱层析法进行提纯。

鉴定：将提纯后的乙醇脱氢酶中放入一定量酒精，并加入氧化亚铜并加热，观察是否有砖红色沉淀。

定量：1.安装夹心式垂直板电泳槽：夹心式垂直板电泳槽有很多型号，主要结构相同，且操作简单，不易泄漏。可根据具体不同型号要求进行操作。主要注意事项：安装前，胶条、玻板、槽子都要洁净干燥；勿用手接触灌胶面的玻璃。

2.配胶：根据待测蛋白质分子量范围，选择适宜的分离胶和浓缩胶浓度，按下表配制：

3.制备凝胶板： ①分离胶制备： 按表配制12%分离胶。由于AP和TEMED相遇后凝胶即开始聚合，所以应立即混匀混合液。混匀后用注射器抽取3.2~3.5ml凝胶液，加至长、短玻璃板间的缝隙内(立即清洗注射器及针头)。再用滴管取少许蒸馏水，沿长玻璃板壁缓慢注入约3~4mm高，以进行水封。30~60min后，凝胶与水封层间出现折射率不同的界线，则表示凝胶完全聚合。倾去水封层的蒸馏水，再用滤纸条吸去多余水分。②浓缩胶的制备：按表配制3%浓缩胶(待分离胶聚合后再加AP/TEMED)，混匀后用注射器加到已聚合的分离胶上方，直至距离短玻璃板上缘约0.5cm处(立即清洗注射器及针头)。轻轻将样品槽模板插入浓缩胶内，避免带入气泡。约30min后凝胶聚合。

待凝胶凝固后，小心拔去样品槽模板，用窄条滤纸吸去样品凹槽中多余的水分，将Tris-Gly电泳缓冲液倒入上、下贮槽中，应没过短板约0.5cm以上，即可准备加样。4.样品处理及加样 蛋白质标样及待测蛋白都用样品溶解液溶解，使浓度为0.5~1mg/ml，沸水浴加热3分钟，冷却至室温备用(处理好的样品液如经长期存放，使用前应在沸水浴中加热1min，以消除亚稳态聚合)。一般加样体积为10~15l。如样品较稀可适量增加加样体积。用微量注射器小心将样品通过缓冲液加到凝胶凹形样品槽底部(双手操作，避免伤及凝胶)，待所有样品槽内都加完样品后即可开始电泳。5.电泳将直流稳压电泳仪开关打开，将电流调至10~20mA(稳流)开始电泳。待蓝色染料(溴

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酚蓝)迁移至距凝胶底部约1cm时关闭电源。6.染色及脱色取出玻璃板，先用注射器取水从两侧小心冲洗使之松动，再用取胶板轻轻将短玻璃板撬开移去(必要时同时用水冲洗)，在胶板一端切除一角作为标记，将胶板移至大培养皿中染色。

将染色液倒入培养皿中，染色1h左右，用蒸馏水漂洗数次，再用脱色液脱色，直到蛋白区带清晰。7.相对分子量计算用直尺分别量取各蛋白质条带中心以及溴酚蓝条带中心距分离胶顶端的距离，按下式计算：相对迁移率 = 样品迁移距离(cm)/ 染料迁移距离(cm)以标准蛋白质分子量的对数对相对迁移率作图，得到标准曲线，根据待测样品相对迁移率，从标准曲线上查出其分子量。

实验结果：

由此次实验可推理的，将乙醇脱氢酶提纯纯净，则可得其可乙醇进行脱氢生成醛，且可得此物质的相对分子质量为141000.实验讨论：

1.并非所有蛋白质都能用此法测定其分子量。已发现有些蛋白质用这种方法测出的分子量是不可靠的，包括电荷异常或构象异常的蛋白质，带有较大辅基的蛋白质(如某些糖蛋白)以及一些结构蛋白如胶原蛋白等。例如组蛋白F1本身带有大量正电荷，尽管结合有正常比例的SDS，仍不能完全掩盖其原有正电荷的影响：其分子量是21,000，但用本法测定的结果却是35,000。因此有必要至少用两种方法来测定未知样品的分子量，以便互相验证。2.有许多蛋白质是由亚基(如血红蛋白)或两条以上肽链(如-胰凝乳蛋白酶)组成的，它们在SDS和巯基乙醇的作用下解离成亚基或单条肽链。因此，对于这一类蛋白质，本法测定的只是其亚基或单条肽链的分子量。为了得到更全面的资料，还必须用其它方法测定其分子量及分子中肽链的数目等，以便与SDS-凝胶电泳的结果互相参照。3.此次实验为推理实验，则不知是否纯正，所以要进行检测，而检测的方法是醋酸纤维蛋白膜进行检测即可知道含有几种蛋白质，用标准液进行对比就可知道乙醇脱氢酶的排列顺序是什么，则就知道在凝胶交换柱层析法的分离顺序，如若分离不彻底即要反复进行。就可分离出较纯正的乙醇脱氢酶。然后进行检测其活性和相对分子质量。

注意事项：

1进行研磨操作时，研钵应放在不易滑动的物体上，研杵应保持垂直。研钵中盛放固体的量不得超过其容积的1／3。洗涤研钵时，应先用水冲洗，耐酸腐蚀的研钵可用稀盐酸洗涤。研钵上附着难洗涤的物质时，可向其中放入少量食盐，研磨后再进行洗涤。2.加入链霉素磷酸盐时要适量，不要大量一次加入。3.装柱后要检查柱床是否均匀,若有气泡或分层的界面时,需要重新装柱.4.流速不可太快,否则分子小的物质来不及扩散,随分子大的物质一起被洗脱下来,达不到分离目的.附：本次实验思路

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原料选取：饥饿24小时后的肝脏

↓

分离：细胞破碎（捣碎）→添加蛋白质抑制剂（丝氨酸蛋白质抑制剂）→除核酸（沉淀法

1％-2％的链霉素硫酸盐）→盐析（硫酸铵）→去盐（超滤）→等电点沉淀法（PI=5.4-5.8）↓

提纯：检测电泳检测是否是纯净的蛋白质若不纯净看乙醇脱氢酶的带的顺序、凝胶交换柱层析法提纯、检测电泳检测是否是纯净的蛋白质若不纯净再进行提纯

↓

鉴定：加入乙醇分解鉴定

↓

定量：SDS-PAGE法测定蛋白质相对分子质量

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实验清单

实验试剂与器材：器材：剪刀、研钵、铁架台、漏斗、烧杯、玻璃棒、滤纸、试管一支、管式的超滤装置、聚酰胺膜、醋酸纤维薄膜（2×8厘米）；常压电泳仪；点样器（市售或自制）；培养皿（染色及漂洗）（直径9cm—10cm）；普通滤纸；玻璃板；钝头镊子；白瓷反应板；试管（15～20ml）；水浴；分光光度计；离心机；比色杯（光径1cm）

试剂：磷酰胺素、1%~2%的链霉素硫酸盐、硫酸铵、0.02mol/L的盐酸、PH7.4的磷酸盐 缓冲液、0.1mol/mL的氢氧化钠、去离子水、巴比妥—巴比妥钠缓冲液（pH8.6，0.07mol/L，离子强度0.06）：称取1.66g巴比妥（AR）和12.76g巴比妥钠（AR），置于三角烧瓶中，加蒸馏水约600ml，稍加热溶解，冷却后用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存，、.交联葡聚糖G-25(细粒)、0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.0)、0.4% K3Fe(CN)6、乙醇脱氢酶的标准溶液、乙醇、染色液（0.5%氨基黑10B）：称取0.5g氨基黑10B，加蒸馏水40ml，甲醇（AR）50ml，冰乙酸（AR）10ml混匀溶解后置具塞试剂瓶中贮存、漂洗液：取95%乙醇（AR）45ml，冰乙酸（AR）5ml和蒸馏水50 ml混匀置具塞试剂瓶贮存、透明液：临用前配制。

甲液：取冰乙酸（AR）15ml，无水乙醇（AR）85ml，混匀置试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。乙液：取冰乙酸（AR）25ml，无水乙醇（AR）75ml，混匀置试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。、保存液：液体石蜡、定量洗脱液（0.4mol/L NaOH溶液）：称取16g氢氧化钠（AR）用少量蒸馏水溶解后定容至1000ml。

第二篇：有机物分离和提纯教案

第四节 研究有机化合物的一般步骤和方法

主讲人：黄菊梅 2013/12/4 知识与技能:

1、了解怎样研究有机化合物，应采取的步骤和方法。

2、掌握有机物的分离和提纯的一般方法。过程与方法: 通过多媒体课件和讲授的方式，了解质谱、红外光谱、核磁共振氢谱。情感、态度与价值观: 通过本节的练习，从中体验研究有机化合物的过程和科学方法，提高自身的科学素养。教学重点

研究有机化合物的一般步骤和常用方法。

1、蒸馏、重结晶等分离提纯有机物的实验操作

2、通过具体实例了解某些物理方法如何确 【教学过程】

【引入】从天然资源中提取有机物成分或者是工业生产、实验室合成的有机化合物不可能直接得到纯净物，因此，必须对所得到的产品进行分离提纯，如果要鉴定和研究未知有机物的结构与性质，必须得到更纯净的有机物。我们已经知道，有机化学是研究有机物的组成、结构、性质、制备方法与应用的科学。那么，该怎样对有机物进行研究呢？一般的步骤和方法是什么？ 这就是我们这节课将要探讨的问题。

【板书】 第四节 研究有机化合物的一般步骤和方法

从天然资源中提取有机物成分，首先得到的是含有有机物的粗品。在工厂生产、实验室合成的有机化合物也不可能直接得到纯净物，得到的往往是混有未参加反应的原料，或反应副产物等的粗品。因此，必须经过分离、提纯才能得到纯品。如果要鉴定和研究未知有机物的结构与性质，必须得到更纯净的有机物。下面是研究有机化合物一般要经过的几个基本步骤： 【板书】

首先我们结合高一所学的知识了学习第一步——分离和提纯。【板书】

一、分离、提纯

提纯混有杂质的有机物的方法很多，基本方法是利用有机物与杂质物理性质的差异而将它们分离。接下来我们主要学习三种分离、提纯的方法。【板书】

1、蒸馏

蒸馏是分离、提纯液态有机物的常用方法。当液态有机物含有少量杂质，而且该有机物热稳定性较强，与杂质的沸点相差较大时（一般约大于30ºC），就可以用蒸馏法提纯此液态有机物。【演示实验1-1】含有杂质的工业乙醇的蒸馏

所用仪器：铁架台（铁圈、铁夹）、酒精灯、石棉网、蒸馏烧瓶、温度计、冷凝管、接受器等。如图所示：

【蒸馏的注意事项】

(1)注意仪器组装的顺序：“先下后上，由左至右”；(2)不得直接加热蒸馏烧瓶，需垫石棉网；

(3)蒸馏烧瓶盛装的液体，最多不超过容积的2/3；不得将全部溶液蒸干；需使用沸石；

(4)冷凝水水流方向应与蒸气气流方向相反（逆流：下进上出）；

(5)温度计水银球位置应与蒸馏烧瓶支管口齐平，以测量馏出蒸气的温度； 【演示实验1-2】（要求学生认真观察，注意实验步骤）【板书】

2、重结晶

（1）冷却法：将热的饱和溶液慢慢冷却后析出晶体，此法适合于溶解度随温度变化较大的溶液。

（2）蒸发法：此法适合于溶解度随温度变化不大的溶液，如粗盐的提纯。（3）重结晶：将以知的晶体用蒸馏水溶解，经过滤、蒸发、冷却等步骤，再次析出晶体，得到更纯净的晶体的过程。

重结晶的首要工作是选择适当的溶剂，要求该溶剂：（1）杂质在此溶剂中的溶解度很小或溶解度很大，易于除去；（2）被提纯的有机物在此溶剂中的溶解度，受温度的影响较大。【思考与交流】

1、已知KNO3在水中的溶解度很容易随温度变化而变化，而NaCl的溶解度却变化不大，据此可用何方法分离出两者混合物中的KNO3并加以提纯？

2、重结晶对溶剂有何要求？被提纯的有机物的溶解度需符合什么特点？

3、重结晶苯甲酸需用到哪些实验仪器？

4、能否用简洁的语言归纳重结晶苯甲酸的实验步骤？ 【概括】高温溶解、趁热过滤、低温结晶

【补充】

1、洗涤沉淀或晶体的方法：用胶头滴管往晶体上加蒸馏水直至晶体被浸没，待水完全流出后，重复两至三次，直至晶体被洗净。

2、检验洗涤效果：取最后一次的洗出液，再选择适当的试剂进行检验。

【板书】

3、萃取（1）所用仪器：烧杯、漏斗架、分液漏斗。

（2）萃取：利用溶液在互不相溶的溶剂里溶解度的不同，用一种溶剂把溶质从它与另一种溶剂组成的溶液中提取出来，前者称为萃取剂，一般溶质在萃取剂里的溶解度更大些。

分液：利用互不相溶的液体的密度不同，用分液漏斗将它们一一分离出来。注意事项：

1、萃取剂必须具备两个条件：一是与溶剂互不相溶；二是溶质在萃取剂中的溶解度较大。

2、检查分液漏斗的瓶塞和旋塞是否严密。

3、萃取常在分液漏斗中进行，分液是萃取操作的一个步骤，必须经过充分振荡后再静置分层。

4、分液时，打开分液漏斗的活塞，将下层液体从漏斗颈放出，当下层液体刚好放完时，要立即关闭活塞，上层液体从上口倒出。

练习1 下列每组中各有三对物质，它们都能用分液漏斗分离的是 A 乙酸乙酯和水，酒精和水，植物油和水 B 四氯化碳和水，溴苯和水，硝基苯和水 C 甘油和水，乙酸和水，乙酸和乙醇 D 汽油和水，苯和水，己烷和水

练习2 可以用分液漏斗分离的一组液体混和物是 A 溴和四氯化碳 B 苯和溴苯 C 汽油和苯 D 硝基苯和水

当堂检测

1)．下列属于分离、提纯液态有机物的操作的是（）A．蒸馏 B．蒸发 C．重结晶 D．过虑

2).下列各组混合物中，可以用分液漏斗分离的是（）

A.溴苯和水 B.乙酸和乙醇 C.酒精和水 D.溴苯和苯

3).现有三组混合液，①乙酸乙酯和乙酸钠溶液 ②乙醇和丁醇 ③溴化钠和单质溴的水溶液，分离以上各混合液的正确方法依次是（）

A.分液、萃取、蒸馏 B.萃取、蒸馏、分液 Ｃ.分液、蒸馏、萃取 Ｄ．蒸馏、萃取、分液

4)．下列物质中的杂质（括号中是杂质）分别可以用什么方法除去。（1）酒精（水）（2）壬烷（己烷）（3）KNO3（NaCl）（4）乙酸乙酯（乙醇）（5）甲烷（乙烯）（6）NaCl（泥沙）（7）溴水（水）（8）CO2（HCl）

第三篇：《有机物的分离与提纯》教学设计

《有机物的分离与提纯》教学设计

【教材分析】有机物的分离与提纯是选修5第一章第四节第一课时。研究一个有机化合物，不论这个有机化合物是天然存在的，还是人工合成的，第一步就是分离、提纯，得到纯净的有机化合物。分离提纯有机化合物是正确测定其元素组成和机构的基础，是进行现代物理方法测试前必须做好的准备工作。随着科学技术的进步与发展，分离、提纯的方法也逐渐增多，这节仅学习最常用的基本方法——蒸馏法、萃取法和重结晶法。【教学目标】 知识与技能：

1、了解怎样研究有机化合物应采取的步骤和方法

2、掌握有机化合物分离提纯的常用方法

3、掌握蒸馏、重结晶和萃取实验的基本技能

过程与方法： 通过有机化合物研究方法的学习，了解分离提纯的常见方法

情感态度与价值观：通过化学实验激发学生学习化学的兴趣，体验科学研究的艰辛和喜悦，感受化学世界的奇妙与和谐

【教学重点】掌握蒸馏、重结晶、萃取的实验操作方法 【教学难点】重结晶的原理 【教学方法】通过观看网上下载的实验录像、教师演示实验、学生动手操作来学习实验操作，通过多媒体展示教学过程，通过分组实验分组讨论来归纳整理，让学生更直观地学习。【教学过程】 好奇实验：

菠菜的颜色是由一种色素构成的吗？

小实验 现象：3种颜色 绿色 黄绿色 黄色

有机物（不纯）——有机物（纯净）——确定实验式——确定分子式——结构式（有哪些官能团）

一、蒸馏

（1）基本原理：利用混合液体或液-固体系中各组分沸点不同，使低沸点组分蒸发，再冷凝以分离整个组分的操作过程。【提问】

（2）基本条件：① 有机物热稳定性较强；

②与杂质的沸点相差较大（一般约大于30℃）。【提问】

（3）实验仪器：铁架台、酒精灯、石棉网、蒸馏烧瓶、温度计、冷凝管、牛角管、锥形瓶（4）实验操作：工业酒精的分离【通过网上下载的实验录像《含有杂质的工业乙醇的蒸馏》一起来学习蒸馏的仪器组装，实验过程以及实验注意事项】

（5）注意事项：①在蒸馏烧瓶中放少量碎瓷片，防止液体暴沸。

②温度计水银球的位置应与支管底口下缘位于同一水平线上。③冷凝管中冷却水从下口进，从上口出； 先通水后点灯。【提问】

【思考】工业上如何制取无水乙醇？

工业乙醇——（蒸馏）——95.6﹪的共沸混合物——(CaO)——99.5﹪以上的无水乙醇 【思考与交流】

1、如何提取溴水中的溴？

2、实验原理是什么？

3、用到的实验仪器（玻璃仪器）有哪些？

4、如何选取萃取剂？

二、萃取

（1）基本原理：利用混合物中一种溶质在不同溶剂里的溶解度不同,用一种溶剂把这种溶质从另一种溶剂里提出取出来的方法。【提问】

（2）萃取剂的选择：① 萃取剂和原溶剂互不相溶且不发生化学反应。

②溶质在萃取剂中的溶解度远大于在原溶剂中溶解度。【提问】

（2）学生实验

碘水的分离

用4ml的四氯化碳萃取10ml碘水中的碘

（3）操作步骤

1.检漏2.加液3.振荡4.静置5.分液【提问】 【思考与交流】

如何提纯苯甲酸、NaCl和沙子组成的混合物中的苯甲酸 提示:（1）苯甲酸在水中溶解度：0.35g（25℃）、5.9g（100℃）

（2）NaCl在水中溶解度：36.2g（25℃）、39.8（100℃）

（3）沙子不溶于水

先在较高的温度下溶解样品，过滤，除去沙子，再冷却，苯甲酸就会析出

二、重结晶

（1）溶剂的条件：①杂质在此溶剂中溶解度很小或很大；

②被提纯有机物在此溶剂中的溶解度受温度的影响较大。（4）实验操作：【通过教师的演示来学习整个操作过程】

学与问：为了得到更多的苯甲酸晶体，是不是结晶时的温度越低越好？

答：不是。因为温度过低，杂质的溶解度也会降低，部分杂质也会析出，达不到提纯苯甲酸的目的。

【 随堂练习】

1、连线题，将下列物质中的杂质(括号中是杂质)与除杂方法连接起来。

物质

方法(1)酒精(水)

A．结晶或重结晶(2)壬烷(己烷)

B．CaO，蒸馏(3)乙酸乙酯(乙醇)

C．洗气

(4)甲烷(乙烯)

D．饱和Na2CO3溶液，分液(5)溴水(水)

E．蒸馏(6)CO2(HCl)

F．溶解，过滤（7）KNO3(NaCl)

G．萃取 答案：1B 2E 3D 4C 5G 6C 7A

2、可以用分液漏斗分离的一组混合物是(D)

A．溴和四氯化碳

B．苯和溴苯

C．酒精和水

D．硝基苯和水

3、下列实验操作中错误的是(C)A．分液时，分液漏斗中下层液体从下口放出，上层液体从上口倒出 B．蒸馏时应使温度计水银球靠近蒸馏烧瓶支管口 C．重结晶实验中，玻璃棒只有搅拌作用。

D．称量时，称量物放在称量纸上，置于托盘天平的左盘，砝码放在托盘天平的右盘 小结：

【教学反思】本节课通过实验观看、教师演示、学生动手操作，基本完成了教学目标； 通过有机化合物研究方法的学习，了解分离提纯的常见方法；通过化学实验激发学生学习化学的兴趣，体验科学研究的艰辛和喜悦，感受化学世界的奇妙与和谐。

第四篇：初中化学物质分离与提纯的常用方法小结

初中化学物质分离与提纯的常用方法小结

物质的分离是将几种物质通过物理或化学方法分开，提纯则要求把不纯物质中的杂质除去。提纯的原则是： ①不增：即在除掉杂质时不增加新杂质。②不减：即被提纯的物质不能减少或改变。③易分：即操作简便易行，杂质易分离除去。

④最佳：即最好在除去杂质的同时能增加被提纯物质的量。

一、常用的物理方法

1.过滤法：适用于固体与液体的混合物进行分离。

①先将混合物溶于水。

②过滤。

③将滤液蒸发得某溶质。

2、蒸发：适用于可溶性固体溶质与溶剂的分离。

3、降温结晶（重结晶）法：适用于两种可溶性固体的溶解度受温度影响变化明显不同的混合物进行分离。溶解度变化大的那种物质被提纯出来。

可按如下步骤：①在高温下制成饱和溶液，②结晶，③过滤。

4、特殊性质法：利用混合物中某些物质的特性进行物质分离。如：Cu粉中混有Fe粉，可用磁铁吸出铁粉。

二、常用的化学方法

原理：所用试剂能与杂质反应，不能与提纯物反应，把杂质转化成水；气体；沉淀除去，又不能引入新的杂质。

1、沉淀法：即加入一种试剂和杂质反应生成沉淀经过滤而除去。如：HNO3中混有H2SO4，可加入适量的Ba(NO3)2溶液：

2、化气法：即加入一种试剂和杂质反应，使其生成气体而除去。如一般某盐中混有少量碳酸盐、碳酸氢盐等常用此法除去。

如NaCl溶液中混有Na2CO3，可加入适量的稀盐酸：

3、置换法：即在某盐溶液中加入某金属，把盐溶液中的金属置换出来，从而把杂质除去。

如Zn SO4 溶液中含有CuSO4，可加入过量的锌：

4、转化法：即通过某种方法，把杂质转化为被提纯的物质。如CO2气体中混有少量的CO，可将混合气体通过盛有足量灼热的CuO的试管：

第五篇：有机化学试题库六——鉴别与分离提纯题及解答

试题库六——鉴别与分离提纯题及解答

6-1．(A)己烷(B)1－己炔(C)2－己炔

+ 答：加入溴水不褪色的为(A)，余下两者加入Ag(NH3)2溶液有白色沉淀生成的为(B)，另者为(C)。

6-2．(A)1－戊炔(B)1－戊烯(C)正戊烷

+ 答：加入KMnO4溶液不褪色的为(C)，余下两者加入Ag(NH3)2溶液有白色沉淀生成的为(A)，另者为(B)。

6-3．(A)1－戊炔(B)2－戊炔(C)1,3－戊二烯

+ 答：加入Ag(NH3)2溶液有白色沉淀生成的为(A)，余下两者加入顺丁烯二酸酐有白色沉淀生成的为(C)，另者为(B)。

6-4．(A)甲苯(B)苯乙烯(C)苯乙炔

+答：加入溴水不褪色的为(A)，余下两者加入Ag(NH3)2溶液有白色沉淀生成的为(C)，另者为(B)。

6-5．(A)环己烯(B)1,1－二甲基环丙烷(C)1,3－环己二烯

答：加入KMnO4溶液不褪色的为(B)，余下两者加入顺丁烯二酸酐有白色沉淀生成的为(C)，另者为(A)。

6-6．(A)2－丁烯(B)1－丁炔(C)乙基环丙烷

+答：加入KMnO4溶液不褪色的为(C)，余下两者加入Ag(NH3)2溶液有白色沉淀生成的为(B)，另者为(A)。

6-7．(A)1－庚炔(B)2－庚炔(C)1,3－庚二烯

+答：加入Ag(NH3)2溶液有白色沉淀生成的为(A)，余下两者加入顺丁烯二酸酐有白色沉淀生成的为(C)，另者为(B)。

6-8．(A)环己基乙炔(B)环己基乙烯(C)2－环己基丙烷

+答：加入Ag(NH3)2溶液有白色沉淀生成的为(A)，余下两者加入溴水，使褪色的为(B)，另者为(C)。

6-9．(A)2－辛炔(B)环丙烷(C)1,3－环戊二烯

答：加入KMnO4溶液不褪色的为(B)，余下两者加入顺丁烯二酸酐有白色沉淀生成的为(C)，另者为(A)。

6-10．(A)丙烯(B)环丙烷(C)丙炔

答：加入氯化亚铜氨溶液有砖红色沉淀生成的为(C)，另两者加入稀的KMnO4溶液，使之褪色的为(A)，余者为(B)。

6-11．苯乙炔 环己烯 环己烷

+加溴水使溴水不褪色的为环己烷，余者加Ag(NH3)2有白色沉淀为苯乙炔。6-12.1－戊烯 1,2－二甲基环丙烷

加KMnO4不褪色的为1,2-二甲基环丙烷。6-13．2-丁烯 1-丁炔 乙基环丙烷

+ 加KMnO4不褪色的为乙基环丙烷，余者加Ag(NH3)2有白色沉淀为1－丁炔。6-14.环丙烷与丙烷 5．1,2－二甲基环丙烷与环戊烷

加溴水使溴水褪色的为环丙烷。加溴水褪色的为1,2-二甲基环丙烷。6-15.乙基环丙烷和环戊烷 7．乙基环丙烷和乙烯基环丙烷 加溴水使溴水褪色的为乙基环丙烷。加KMnO4褪色的为乙烯基环丙烷。6-16.环己烯与异丙基环丙烷 9．丁烷和甲基环丙烷

加KMnO4褪色的为环己烯。加溴水使溴水褪色的为乙基环丙烷。6-17.1,3－环已二烯与环己烯

加顺丁烯二酸酐产生白色沉淀的为1,3－环己二烯。6-18．甲基环丁烷和环己烷

加溴水使溴水褪色的为乙基环丙烷。

6-19.环丁烯与1,3－丁二烯鉴别下列各组化合物 1．甲苯 1－己烯 1,3－环己二烯

加入溴水无变化者为甲苯，已反应的两种化合物中加入顺丁烯二酸酐，产生白色沉淀者为1,3环己二烯。

6-20．苯 乙苯 苯基乙炔

+加入Ag(NH3)2有白色者为苯基乙炔，余下两者加入KMnO4溶液，使之褪色者为乙苯。6-21．邻甲苯酚 甲苯 苯

加入FeCl3溶液有颜色反应者为邻甲苯酚，余下两者加入KMnO4溶液，使之褪色者为甲苯，另者为苯。

6-22．环戊基苯 叔丁基苯 苯酚

加入溴水生成白色沉淀的为苯酚，余下两者加入KMnO4溶液使之褪色者为环戊基苯，另者为叔丁基苯。

6-23．苯 异丙苯 苯乙烯

加入溴水褪色者为苯乙烯，余下两者加入KMnO4溶液，使之褪色者为异丙苯，另者为苯。

加顺丁烯二酸酐产生白色沉淀的为1,3－丁二烯。

6-24．正溴丙烷 叔丁基溴 3-溴丙烯

答：加入硝酸银的乙醇溶液，室温下有浅黄色生成的为3－溴丙烯和叔丁基溴，余者为正溴丙烷。将前两者加入溴的四氯化碳溶液使溴水褪色者为3－溴丙烯。6-25．对氯甲苯 苄基氯 烯丙基氯

答：加入Ag(NH3)2的乙醇溶液有白色沉淀生成的为苄基氯和烯丙基氯，余者为对苯基氯。有沉淀的两者加入溴水，使溴水褪色的为烯丙基溴，另者为苄基氯。

CH2Cl6-26．

答：加入硝酸银乙醇溶液，室温下有白色沉淀生成的为苄基氯，另者为邻氯甲苯。6-27．与CH3ClCH2Br

CH3Br

CH2CH2Br

答：室温加入硝酸银乙醇溶液有淡黄色沉淀的为苄基溴，加热后有淡黄色沉淀的为2－苯基－1－溴乙烷，而对甲基溴苯即使加热也无沉淀生成。6-28．对氯甲苯 苄基氯 2-苯基氯乙烷

答：加入硝酸银的乙醇溶液室温下有白色沉淀的为苄基氯，加热以后有白色沉淀的为2-苯基氯乙烷，无变化的为对氯甲苯。

6-29．(A)(CH3)3CBr(B)CH2=CHCH2Br(C)CH3CHCHBr

答：加入硝酸银乙醇溶液室温下有淡黄色沉淀的为(A)和(B)，将(A)和(B)两种液体加入溴水，使溴水褪色的为(B)，另者为(A)。

6-30．(A)3－溴环己烯(B)氯代环己烷(C)碘代环己烷

答：加入硝酸银乙醇溶液室温下有黄色沉淀的为（A）和（C），无变化的为(B)，将（A）和（C）加入高锰酸钾，使高锰酸钾退色的为（A），另者为(C)。

6-31．用简单方法鉴别下列两组化合物。

（1）1－溴丙烷和1－碘丙烷

（2）烯丙基溴和1－溴丙烷

答 ：（1）加入AgNO3－C2H5OH溶液1－碘丙烷立即产生黄色沉淀。

（2）加入AgNO3－C2H5OH溶液烯丙基溴立即产生淡黄色沉淀。6-32．(A)氯乙烯(B)丙炔(C)溴丙烷

答：加入银氨溶液有白色沉淀的为(B)，余者能与硝酸银的乙醇溶液温热时能生成淡黄色沉淀的为(C)，另者为(A)。

6-33．(A)正碘丁烷(B)正丁烷(C)环己烯

答：加入溴水能使溴水褪色的为(C)，余下二者加入硝酸银乙醇溶液温热，有黄色碘化银沉淀的为(A),另者为(B)。

6-34．(A)环己醇(B)环己烯(C)环己基溴

答：加入溴水使溴水褪色的为(B)，余下两者加入硝酸银的醇溶液，有淡黄色沉淀的为(C),另者为(A)。（也可用金属钠鉴别醇的方法，先鉴别出环己醇）。

6-35

6-36

6-37 两瓶没有标签的无色液体，一瓶是正己烷，另一瓶是1－己烯，用什么简单方法可以给它们贴上正确的标签？ 答案：

1－己烯正己烷无反应Br2 / CCl4or KMnO4褪色1－己烯 正己烷用简单并有明显现象的化学方法鉴别下列各组化合物：

a.正庚烷 1,4－庚二烯 1－庚炔 b.1－己炔 2－己炔 2－甲基戊烷 答案：

a.正庚烷1,4－庚二烯1－庚炔Ag(NH3)2+灰白色1－庚炔褪色1,4－庚二烯正庚烷无反应正庚烷1,4－庚二烯1－己炔Br2 / CCl4无反应b.2－甲基戊烷2－己炔1－己炔Ag(NH3)2+灰白色褪色无反应2－甲基戊烷Br2 / CCl42－己炔无反应2－己炔2－甲基戊烷

6-38 用简单化学方法鉴别下列各组化合物：

a.1,3－环己二烯，苯和1－己炔 b.环丙烷和丙烯 答案：

a.A1,3－环己二烯BC苯1－己炔+Ag(NH3)2灰白色C无反应BA无反应ABr2 / CCl4B褪色b.AB环丙烷丙烯无反应 KMnO4褪色AB

6-39 用简便且有明显现象的方法鉴别下列各组化合物 a.HCCCH2CH2OHCH3CCCH2OH b.CH2OHOHCH3

c.CH3CH2OCH2CH3 , CH3CH2CH2CH2OH , CH3(CH2)4CH3 d.CH3CH2Br , CH3CH2OH 答案：

+a.Ag(NH3)2 b.FeCl3 c.浓H2SO4和K2Cr2O7 d.浓H2SO4 6-40 简单化学方法鉴别下列各组化合物

a.丙醛、丙酮、丙醇和异丙醇 b.戊醛、2-戊酮和环戊酮 答案：

a.ABCD丙醛丙酮丙醇异丙醇2,4－二硝基苯肼沉淀有沉淀ＡTollen试剂ＢＣＤI2 / NaOH无沉淀无沉淀黄色沉淀沉淀Tollen试剂无沉淀BCI2 / NaOH无沉淀CＡＢＣＤ无沉淀b.ABC戊醛2－戊酮环戊酮ACHI3B

COOCH36-41 用简单化学方法鉴别下列各组化合物：

COOHa.COOHCOOH与CH2COOHCH2COOHb.OCH3COOH与OHOHOHc.(CH3)2CHCH=CHCOOH与COOHd.CH3与与COCH3OHCH=CH2

答案：

a.KmnO4 b.FeCl3 c.Br2 or KmnO4 d.①FeCl3 ②2,4-二硝基苯肼或I2 / NaOH 6-42 怎样将己醇、己酸和对甲苯酚的混合物分离得到各种纯的组分？ 答案：

己醇ANaHCO3水溶液有机相已醇对甲苯酚NaOH有机相水相已酸钠HCl已酸B水相酚钠HCl酚C已酸B对甲苯酚C已醇A

6-43 用化学方法鉴别下列各组化合物：

a.邻甲苯胺 N－甲基苯胺 苯甲酸和邻羟基苯甲酸 b.三甲胺盐酸盐 溴化四乙基铵 答案：

CH3a.NH2(A)不溶AB(B)NaOHCOOH(C)显色COOHOH可溶(D)CDFeCl3不显色DH3CNaOHSO2Cl不溶可溶BNHCH3AC

AgClb.(CH3)3N ．HCl+(A)白A或者用NaOHA分层AgNO3AgBr黄B(CH3CH2)4NBr－(B)Ｂ均相

由于三甲胺b.p.3℃,可能逸出,也可能部分溶于NaOH,所以用AgNO3 作鉴别较好.6-44 N－甲基苯胺中混有少量苯胺和N,N－二甲苯胺,怎样将N－甲基胺提纯? 答案： 使用Hinsberg反应.(注意分离提纯和鉴别程序的不同)NHCH3CH3ANH2BH3CSO2ClNSO2CH3(D)蒸镏除去CNaOH水洗除ENHSO2CH3(E)CNH3CCH3CH3NH3CH+CH3CH3NH。HCl有机相NSO2(D)CH3OH－NHCH3纯Ａ

6-45 将苄胺、苄醇及对甲苯酚的混合物分离为三种纯的组分。

CH2NH2(A)CH2OHNaOH水溶液(B)(C)HOCH3再进一步分别纯化水相C的钠盐稀HClC水相有机相ABHCl有机相A的盐酸盐BNaOHA

6-46 用简单化学方法鉴别下列各组化合物

a.葡萄糖和蔗糖 b.纤维素和淀粉 c.麦牙糖和淀粉 d.葡萄糖和果糖 e.甲基-β-D-吡喃甘露糖苷和2-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖 答案： a.Bendict 试剂;b.I2c.I2d.Br2_H2Oe.Tollen试剂

6-47 怎样鉴别下列各组化合物? a.糠醛 苯甲醛 b.苯与噻吩 c.吡咯与四氢吡咯 d.吡啶与苯 答案：

a.苯胺醋酸盐 b.浓H2SO4，室温 c.KOH or HCl or I2 d.HCl 6-48 怎样鉴别下列各组化合物? a.糠醛 苯甲醛 b.苯与噻吩 c.吡咯与四氢吡咯 d.吡啶与苯 答案：

a.苯胺醋酸盐 b.浓H2SO4，室温

6-49．正溴丙烷 叔丁基溴 3-溴丙烯

答：加入硝酸银的乙醇溶液，室温下有浅黄色生成的为3－溴丙烯和叔丁基溴，余者为正溴丙烷。将前两者加入溴的四氯化碳溶液使溴水褪色者为3－溴丙烯。6-50．对氯甲苯 苄基氯 烯丙基氯

答：加入Ag(NH3)2的乙醇溶液有白色沉淀生成的为苄基氯和烯丙基氯，余者为对苯基氯。有沉淀的两者加入溴水，使溴水褪色的为烯丙基溴，另者为苄基氯。

CH2Cl6-51．

答：加入硝酸银乙醇溶液，室温下有白色沉淀生成的为苄基氯，另者为邻氯甲苯。6-52．与CH3ClCH2Br

CH3Br

CH2CH2Br

答：室温加入硝酸银乙醇溶液有淡黄色沉淀的为苄基溴，加热后有淡黄色沉淀的为2－苯基－1－溴乙烷，而对甲基溴苯即使加热也无沉淀生成。6-53．对氯甲苯 苄基氯 2-苯基氯乙烷

答：加入硝酸银的乙醇溶液室温下有白色沉淀的为苄基氯，加热以后有白色沉淀的为2-苯基氯乙烷，无变化的为对氯甲苯。

6-54．(A)(CH3)3CBr(B)CH2=CHCH2Br(C)CH3CHCHBr

答：加入硝酸银乙醇溶液室温下有淡黄色沉淀的为(A)和(B)，将(A)和(B)两种液体加入溴水，使溴水褪色的为(B)，另者为(A)。

6-55．(A)3－溴环己烯(B)氯代环己烷(C)碘代环己烷

答：加入硝酸银乙醇溶液室温下有黄色沉淀的为（A）和（C），无变化的为(B)，将（A）和（C）加入高锰酸钾，使高锰酸钾退色的为（A），另者为(C)。6-56．用简单方法鉴别下列两组化合物。

（1）1－溴丙烷和1－碘丙烷

（2）烯丙基溴和1－溴丙烷

答 ：（1）加入AgNO3－C2H5OH溶液1－碘丙烷立即产生黄色沉淀。

（2）加入AgNO3－C2H5OH溶液烯丙基溴立即产生淡黄色沉淀。6-57．(A)氯乙烯(B)丙炔(C)溴丙烷

答：加入银氨溶液有白色沉淀的为(B)，余者能与硝酸银的乙醇溶液温热时能生成淡黄色沉淀的为(C)，另者为(A)。

6-58．(A)正碘丁烷(B)正丁烷(C)环己烯

答：加入溴水能使溴水褪色的为(C)，余下二者加入硝酸银乙醇溶液温热，有黄色碘化银沉淀的为(A),另者为(B)。

6-59．(A)环己醇(B)环己烯(C)环己基溴

答：加入溴水使溴水褪色的为(B)，余下两者加入硝酸银的醇溶液，有淡黄色沉淀的为(C),另者为(A)。（也可用金属钠鉴别醇的方法，先鉴别出环己醇）。