白细胞五分类技术

第一篇：白细胞五分类技术

20世纪时发现了电阻抗原理，由于血细胞是一种不良导体，将血液标本稀释、溶血后制成白细胞悬液，在负压的作用下，悬液流经一个带有微孔的恒压电路时，每个细胞会产生一个电阻脉冲信号，这些信号经过微机的放大、甄别、整形等处理，最后计算出单位体积内的白细胞数。

这种方法最初只能进行细胞计数，美国科学家库尔特采用电子阻率与电子技术相结合，设计出了世界第一台电阻抗三分群血液细胞分析仪，第一次将白细胞分为了大细胞群、中间细胞群、小细胞群，并应用于临床，开创了血细胞分析的新纪元。三分类的方法中大细胞相当于中性粒细胞，中间细胞相当月嗜酸、嗜碱及单核细胞，小细胞相当于淋巴细胞。这种技术只起到了筛选的作用。随着科学技术的迅速发展，三分群血细胞分析技术在临床实践中的局限日益明显，因此，对血液白细胞进行五分类的仪器开始出现。1982年，Technicon公司生产的H6000型血液细胞分析仪器是第一部具有白细胞五分类能力的仪器。同时代的日本日立公司推出的图像分析法的白细胞分析仪HITACHI8200型，仅仅可以完成白细胞血片分类并没有其他血细胞计数分析能力。1990年前后，欧洲和题本许多厂家都陆续推出了各种类型的具有白细胞五分类功能的血细胞分析仪器。

目前已有的白细胞分类技术仪器按原理主要有三种类型：第一类是物理法，第二类是物理——化学法，第三类是图像分析法。1.物理法 1.1 VCS法

Beckman-Coulter公司生产的血细胞分析仪将电学与光学结合，该方法称为体积、电导、激光散射血细胞分析法（VCS）。V是利用电阻抗法测定细胞体积；C是利用高频电磁波，根据各种细胞核浆的电导性不同测理细胞内部结构、核浆比例；S是利用光散射原理测量细胞内颗粒的大小密度等结构特性。计算机根据3种技术得到的资料综合分析，将中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞一一分开，以白细胞分类散点图显示这些细胞，并提示异常淋巴细胞、幼稚细胞、有核细胞、抗溶血红细胞等信息。1.2 多角度偏振光激光散射技术

美国ABBOTT推出的五分类血细胞分析仪，采用了多角度偏振光散射技术（MAPSS）。MAPSS原理：血标本在特殊鞘液的作用下，红细胞内血红蛋白游离出细胞外，红细胞变得透明，而白细胞的内部结构和膜结构基本保持自然状态。当细胞悬液的鞘流经过检测器时，仪器从4个不同的角度得到每个细胞的光信号，这4个角度分别为0°前向角光散射测定细胞的大小；7°～10°狭角光散射测定细胞内部结构及其复杂特征；90°垂直光散射测定细胞内部颗粒和胞浆成分；90°消偏振光散射利用嗜酸性细胞内颗粒特有的消偏振特性，将嗜酸性细胞直接分离。计算机综合4个角度的光信号，将白细胞分类，并提供提示信息和相关图谱。2.物理——化学法

2.1 流式细胞法、激光散射和细胞化学染色技术相结合技术

日本Sysmex公司全系列五分类血液细胞分析仪均采用此技术，这也是现在国内应用最广泛的仪器。这种方法通过连续流动的系统，将待测细胞经处理或染色后压入流动室，不含细胞的缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能被包绕着样品高速流动组成一个圆形的流束，待测细胞单行排列依次通过检测区域，通过光电效应将电信号转换为可被计算机识别的数字信号，经处理，可分析出血细胞中白细胞总数，各分类细胞的百分率和绝对值，细胞体积大小和内部信息，并且显示在屏幕上。2.2 激光散射和过氧化物酶染色相结合技术

西门子公司的全自动血液分析仪采用了这种技术。血标本进入仪器，在一系列的预处理液和白细胞过氧化物酶染色后流经检测器。每个细胞在激光束的照射下，各类细胞因过氧化物酶含量不同，具有不同的光吸收信号；根据每个细胞的前向角大小可以得到细胞的体积数据，同时仪器有单独的嗜碱性细胞直接计数通道，计算机根据这些信息得出细胞分类结果。2.3 双鞘流技术和细胞化学染色法

ABX公司生产的血细胞分析仪采用了双鞘流（DHSS）分析法。标本首先在第一鞘流液中经过电阻抗测定分析，得到细胞体积测定结果．然后通过第二鞘流引导再行光吸收率分析．对细胞内容物进行测定，最终将细胞测定信息在散射图相应的位置表现出来。2.4 迈瑞激光散射和细胞化学染色技术

深圳迈瑞（Mindray）公司是国内最早生产五分类血细胞仪的厂家，采用半导体激光散射技术和细胞化学染色技术，配合改良的流式分析装置对白细胞进行精确的五分类分析。激光散射分析技术是五分类法常用的分析技术。由于细胞的物理特性，当激光照射到细胞时，会有不同角度的散射光出现。低角度(1°～5°)散射光可反映细胞体积大小信息；中高角度（10°～20°）。散射光可反映细胞颗粒的复杂性信息。综合这两个角度散射光的信息．结合其他特殊技术来完成自细胞的五分类测定。3.图像分析法

近年来，瑞典CellaVision AB公司开发出一种新型自动影像血细胞分析系统。国内南昌百特公司也已经研制出了新一代同类数字化血细胞形态分析仪。其工作原理模仿人“脑——眼”系统的智能识别过程，运用计算机图像处理和模式识别，将从显微镜与摄像机得到的数字化细胞图像进行自动处理分析和分类。这种仪器的主要特点是运用图像处理分析技术提取细胞形态，色彩，纹理等方面的多种特征信息，并用模式识别技术进行细胞分类。

虽然这些细胞分类技术都为临床提供了准确的检验结果，但是却不能完全取代显微镜检查。Sysmex全系列仪器由于使用先进的激光散射和核酸荧光染色技术相结合，对正常白细胞分类准确无误，而且其散点图对异常细胞的提示非常具有参考价值。Cellavision AB公司自动影像血细胞形态分析系统只能作为五分类血液分析仪器的后处理，进行白细胞的形态学观察，虽可以大大减少工作量，但由于数据库容量不足，识别精度不够高等原因，仍然无法完全取代人工镜检。

第二篇：白细胞分类计数的临床意义分析

白细胞分类计数的临床意义分析

【摘要】目的：探讨白细胞分类计数的临床意义。方法：通过对我院血常规检验工作的分析，总结白细胞分类计数的工作重要性。结果：白细胞分类计数具有较高的临床价值，值得临床医师参考使用。结论：白细胞检验结果在一定程度上决定着临床诊疗的正确诊断和治疗。

【关键词】白细胞分类计数；临床意义；检验科

【中图分类号】R859 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0515(2011)05-0168-02

白细胞分类计数是临床血液学检验中的常规检验项目[1]。随着基础医学及计算机科学的飞速发展，使得血液学检验技术突飞猛进，特别是近几年来各种新型的血细胞分析仪以其自动化程度高、检测参数多等优势而不断充斥市场，这对减轻检验人员劳动强度和提高检测速度无疑起着积极的作用。现将我院检验科进年来总结的白细胞分类计数的临床资料报道如下。材料与方法

1．1材料:仪器日本Sysmex XT-1800i全自动五分类血细胞分析仪；日本产尼康显微镜。试剂：原装进口配套试剂。标本来源：我院近3年经过血常规检查的1988例我院住院患者。

1．2 方法:仪器法采取患者静脉标本2 ml注入EDTA―K：真空抗凝管中，在25℃室温下3 h内检测完毕。手工镜检法：将经过仪器检测完毕的患者抗凝标本制作成薄厚适宜的血片，依据全国临床检验操作规程，用瑞氏一姬姆萨染液染色后，选择经验丰富、技术熟练的检验人员在油镜下计数分类200个白细胞，并求出各系所占比例的平均值。结果

白细胞分类计数具有较高的临床价值，白细胞检验结果在一定程度上决定着临床诊疗的正确诊断和治疗。值得临床医师参考使用。讨论

人体血液中非细胞成分包括血清或血浆，细胞成分包括红细胞、白细胞和血小板。在末梢血液中，根据白细胞胞浆中有无颗粒，分为粒性白细胞和非粒性白细胞。粒性白细胞中包括中性粒细胞(又分杆状核及分叶核)、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞；非粒性白细胞中包括淋巴细胞及单核细胞。其中中性粒细胞和单核细胞在人体内游戈，可以吞噬和消化进入人体内的细胞等微生物，还能吞噬人体坏死的细胞。淋巴细胞分为T淋巴细胞、B淋巴细胞、K细胞，它们参与人体的细胞免疫和体液免疫反应。白细胞总数的增多或减少，以及分类的改变，均有一定的临床意义。

3.1 嗜中性粒细胞(N):在外周血中可分为中性杆状核粒细胞(NST)和中性分叶核粒细胞(NSG)两类。

3.1.1 嗜中性粒细胞增多：嗜中性粒细胞增多常伴随白细胞总数的增多[2]。在生理情况下，下午较早晨为高，妊娠后期及分娩时，剧烈运动或劳动后，饱餐或淋浴后，高温或严寒等均可暂时性增高。病理性增多见于：急性感染。严重组织损伤及大量血细胞破坏。如严重外伤，较大手术后，大面积烧伤，急性心肌梗死(心绞痛时不增高)及严重的血管内溶血。急性大出血。急性中毒。白血病及恶性肿瘤。

3.1.2 嗜中性粒细胞减少：<4×10??9／L称白细胞减少。当嗜中性粒细胞绝对值<1.0×10??9／L，称为粒细胞减少症，<0.5×10??9／L时称为粒细胞缺乏症。主要见于：感染[3]。血液系统疾病。理化损伤。X线、γ射线，放射性核素；苯、铅、汞以及氯霉素、磺胺类药、抗肿瘤药、抗糖尿病及抗甲状腺药。单核一巨噬细胞系统功能亢进。自身免疫性疾病。如系统性红斑狼疮等。

3.2 嗜酸性粒细胞(E)

3.2.1 嗜酸性粒细胞增多：①过敏性疾病。支气管哮喘、药物过敏反应、荨麻疹、食物过敏、血管神经性水肿、血清病等。②寄生虫病。血吸虫病、肺吸生病、蛔虫病、钩虫病等。③皮肤病。如湿疹、剥脱性皮炎、天疱疮、银屑病等。④血液病。如慢性粒细胞白血病，嗜酸粒细胞白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、嗜酸性粒细胞肉芽肿等。⑤某些恶性肿瘤。如肺癌等。肿瘤治疗有效往往伴随着嗜酸性粒细胞增多的改善。⑥某些传染病。如猩红热时反而增多。

3.2.2 嗜酸性粒细胞减少：见于伤寒、副伤寒初期、大手术、烧伤等应激状态或长期应用肾上腺皮质激素后，其临床意义甚小。

3.3 嗜碱性粒细胞(B)

3.3.1 嗜碱性粒细胞增多：①过敏性疾病。结肠炎、药物、食物、吸人物超敏反应、红斑及类风湿性关节炎等。②血液病。如慢性粒细胞白血病，嗜碱性粒细胞白血病，以及骨髓增殖性疾病的骨髓纤维化等。③恶性肿瘤。特别是转移癌时。④其他。如糖尿病、水痘、流感、天花、结核等。

3.3.2 嗜碱性粒细胞减少：无临床意义。

3.4 淋巴细胞:

3.4.1 淋巴细胞增多：①感染性疾病。病毒感染如风疹、麻疹、流行性腮腺炎，传染性单核细胞增多症、传染性淋巴细胞增多症、病毒性肝炎及肾病综合征出血热等。此外，某些杆菌，如百日咳鲍特杆菌、结核分枝杆菌、布氏杆菌及梅毒螺旋体、弓形体等。③淋巴细胞性恶性疾病。急性和慢性淋巴细胞白血病、淋巴肉瘤白血病、毛细胞白血病等。③其他。自身免疫性疾病、肿瘤，慢性炎症、GVHR或GVHD等[4]。

3.4.2 淋巴细胞减少：主要见于接触放射线及应用肾上腺皮质激素、烷化剂、抗淋巴细胞球蛋白和先天性免疫缺陷性疾病和获得性免疫缺陷综合征。

3.5 单核细胞:

3.5.1 单核细胞增多：生理性增多见于婴幼儿及儿童。病理性增多见于：①某些感染。如感染性心内膜炎、疟疾、黑热病、急性感染恢复期、活动性肺结核等。②某些血液病。如单核细胞白血病，粒细胞缺乏恢复期、多发性骨髓瘤、恶性组织细胞病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征等。

3.5.2 单核细胞减少：无临床意义。

定期观察疾病过程中白细胞的变化，可以了解疾病的演变。通常在感染的急性期，主要表现白细胞总数增加，中性粒细胞增高[5]。如中性粒细胞仅为轻度增加，未成熟者极少，常表示轻度感染；如白细胞增加明显或反而减少，且未成熟者明显，常表示严重感染。但老年人患感染性疾病后白细胞并不明显增加。

参考文献

[1] 李筱梅，杨玉宝，李承文，等．白细胞分类计数方法学比较[J]．检验医学，2004，19(2)：100-103

[2] 张之南，杨天楹，郝玉书．血液病学．第l版．人民卫生出版社．2003：1109

[3] 吴茅，王海英，陈秉宇，等．血细胞分析仪提示中性粒细胞增高标本指标被忽视及其对策[J]．临床检验杂志，2002，20：47-48

[4] 孙芾，王厚芳，于俊峰，等．血细胞显微镜复检标准的制定及临床应用[J]．中华检验医学杂志，2005，28：155-157

[5] 朱庚伯.漫话白细胞分类计数.家庭医学2007(11):38

作者单位：271200 新泰市人民医院检验科

第三篇：血液分析仪五分类技术原理

血液分析仪五分类技术原理

随着电子技术、流式细胞技术、激光技术、电子计算机技术和新荧光化学物质等各种高新技术在血细胞分析仪中的应用.使血细胞分析仪的检测原理不断完善、测量参数不断增加、检测水平不断提高.尤其在白细胞五分类技术方面，已发展到利用多项技术(如射频、细胞化学染色、流式细胞术和荧光染色技术等)联合同时检测一个白细胞.再用先进的计算机技术区分、辨别经上述方法处理后的各自细胞间的细胞差别.综合分析实验数据，得出较为准确的白细胞分类结果。为临床疾病的诊断、治疗提供了重要的实验室依据。近年来。可以对白细胞进行五分类计数的血细胞分析仪已经普遍使用。本文就目前血细胞五分类测定中常用技术及其最新应用进展作一综述。血细胞五分类技术的原理

1.1 流式细胞术

流式细胞术(flow cytometry，FCM)是一种综合应用光学、机械学、流体力学、电子计算机、细胞生物学、分子免疫学等学科技术，使被测溶液流经测量区域，并逐一检测其中每一个细胞的物理和化学特性，从而对高速流动的细胞或亚细胞进行快速定量测定和分析的方法。首先，待测细胞经处理或染色后被压人流动室，与此同时，不含细胞的缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管人口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能被包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在包绕下单行排列，依次通过检测区域.在激光束的照射下产生散射光和激发荧光。这两个光源信号分别反映了细胞体积的大小和内部的信息.经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模，数转换器.将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号，经计算机处理，可将分析结果显示在屏幕上。

为了保证细胞单个排列地逐一通过检测区域，鞘流技术在流式细胞术中被广泛应用。根据层流理论，由于两种液体的流速和压力不同。在一定条件下样品溶液与包裹它的鞘液在流动中可以保持相互分离并且同轴。同时鞘液流可以加速样品溶液中颗粒的流动并迫使他们的流动轨迹保持在液流的中轴线上，使细胞单排列地逐一通过检测区域，这便是所谓的液流聚焦原理

1_2 阻抗法 根据库尔特原理，将不良导体血液按一定比例稀释于等渗的电解液中，在小孔电极的两侧加一恒流源.在负压作用下，使稀释的血细胞通过小孔。当细胞通过截面时会由于电阻增大产生相应的脉冲，其脉冲的幅度与细胞的体积成正比，脉冲的频度与细胞的数量成正比。这便是著名的库尔特原理或称变阻脉冲原理。利用库尔特原理可以有效地区分淋巴及单核细胞。1.3 激光散射法／多角度偏振光散射技术

根据光散射理论，当激光照射到流动室内流过的每一个细胞时，由于细胞的物理特性，部分光线从细胞上经不同的角度散射。其中，前向小角度散射光的光强可以反应细胞体积；大角度散射光的光强可以反应细胞核，浆复杂度和细胞颗粒的信息；而侧向散射光的光强可以反应细胞膜、核膜、细胞质的变化。因此，可以依据细胞表明光散射的特点对细胞进行分类。www.xiexiebang.com用激光光源产生的单色光束直接进入计数池的敏感区，在不同角度(10度～7O度)对每个细胞进行扫描分析，测定其散射光强度，从而提供细胞结构、形态的光散射信息。由于粗颗粒细胞的散射强度比细颗粒细胞更强，故光散射对细胞颗粒的构型和颗粒质量具有很好的区别能力。

多角度偏振散射技术用偏振激光束射照单个排列细胞，并进一步分辨细胞。该技术采用了l0度窄角和偏振加消偏振检测法，分辨能力有所提高。它首先测试中性，单核细胞，用0度～90度的散射数据，再测得90度D的衍射差，将嗜酸性和中性细胞分开.而嗜碱性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞则按其大小和内部结构不同的复杂性，所产生的散射光也各异，用可调较的门限加以区分。其采用特定程序自动储存分析数据，并经计算机软件处理，在屏幕上显示6个散点图和2个直方图。

1.4 各种细胞化学特性应用技术

利用五种白细胞自身不同的化学性质.应用相应的化学试剂加以区分

由于嗜酸性(或嗜碱性)粒细胞均有较强的碱性(或酸性)，因此在特殊的溶血剂作用下，经过特定时间及温度的孵育，可使除嗜酸性(嗜碱性)粒细胞之外的所有细胞溶解或萎缩.经处理之后的细胞根据阻抗脉冲计数法，可得相应嗜酸性(嗜碱性)细胞有效数值。

利用五种白细胞过氧化物酶活性的差异对白细胞进行染色，测定其酶反应强度，对白细胞进行分析。血液中五种白细胞的过氧化物酶活性排列顺序为：嗜酸性粒细胞>中性粒细胞>单核细胞。淋巴细胞和嗜碱性粒细胞均无过氧化物酶。将待测血液加入清洗剂和甲醛的等渗液体内经孵育，再加入过氧化氢和四氯一萘酚，细胞内过氧化酶分解产生氧离子，使四氯一萘酚显色并沉淀，并定位于酶反应部位。根据酶反应强度的不同，利用光电检测技术测定相应吸光度值的方法,用以区分嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞。

1.5 电导，射频法

与早期的三分类血液分析仪利用库尔特原理不同的是，它在内外电极上加了一个RF射频发生器。RF是射频电流的简称.它是一种高频交流变化电磁波。按照工作频率的不同，RF可以分为低频(LF)、高频(HF)、超高频(UHF)和微波等不同种类.不同频段的RF工作原理不同，和HF频段一般采用电磁耦合原理，而UHF及微波频段的RF一般采用电磁反射原理。在血液分析仪中多采用高频电磁波，其原理是交变电流通过导体时，会在导体周围形成交变电磁场，形成电磁波。因导体的密度及导电性质等差异，其周围所形成的电磁场也不相同。因此当射频电流穿透细胞膜透入胞内时，由于核的大小、化学组分、颗粒多少以及浆核比例的不同，使RF信号发生不同的变化。借此可以将体积大小相同但内部结构不同的细胞区分开来，如淋巴细胞与嗜碱性细胞。

1.6 荧光法

利用不同细胞的细胞膜、胞内因子以及胞内DNA、RNA、胞内离子钙等不同染色特性，选用具有特异性抗原或抗体的荧光染料载体，使待分离的细胞分别标记相应的荧光物质，经过特定波长的激光照射激发出不同波长的荧光，利用各种PMT管检测荧光信号的个数，可以完成待检细胞的计数 如进一步分析计数淋巴细胞或网织红细胞等 血细胞五分类技术的应用及展望

2.1 五分类血液分析仪的现状

全自动五分类血细胞分析仪是多学科相互交叉、渗透、综合的产物，涉及技术领域包括电子技术、计算机技术、传感器技术、信号处理技术、生物化学、临床医学、精密机械、光学、自动控制、流体力学等领域。绝大多数“五分类”分析仪采用了流式细胞分析方法，而联合检测法则代表了五分类血细胞分析仪的最新发展趋势。

BECKMAN COULTRER GENS全自动五分类血球分析仪采用其独特的VCS技术，其中V(体积法)用于分析细胞体积；C(电导法)用于分析细胞核型；S(散射法)则用于分析细胞的颗粒特性。测试时。患者标本经过分血片等样本分配系统进入搅拌杯中，再加入溶血剂搅拌.溶血.完全破坏红细胞，剩下的白细胞在样本压力作用下进入流式通道。运用VCS联合检测方法，在流式通道的某一位点。对通过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检测以及三维分析，以确定其亚群性质。

雅培公司新推出的CELL-DYN Ruby全自动血液分析仪运用合并流式细胞术及多角度偏振散射分离技术检测白细胞。其采用多角度偏振散射技术对白细胞进行区分和按序分离，通过四个角度的光学检测进行白细胞分析。其中，0度用于区分细胞体积大小；10度用于区分细胞的复杂性；90度用于区分细胞核的分叶性；90度D用于区分细胞的颗粒性。通过90度偏振和90度去偏振区分嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞，同时通过多个散点图分析来鉴别和分类未成熟细胞和干扰物质。

拜尔公司的ADV IA120利用化学特性中过氧化物酶活性与激光散射技术结合原理进行白细胞五分类测定。该仪器有4个测量通道：血红蛋白测量通道、红细胞／血小板测量通道、嗜碱性粒细胞测量通道、过氧化物酶测量(白细胞分类)通道。其利用五种白细胞过氧化物酶活性的差异对白细胞进行染色.测定其酶反应强度，对自细胞进行分析。在测试过程中.每个细胞产生2个信号：组化染色结果与光散射结果。www.xiexiebang.com以X轴代表吸光率(组化染色酶反应强度)，Y 轴代表光散射(细胞大小)，一起定位于细胞图上(cytogram)。计算机系统对存储资料进行分析处理，并结合嗜碱性或分叶细胞通道结果计算出白细胞总数及分类。值得一提的是，该设备对RBC及PLT的测定也摒弃了传统的阻抗法，而是采用激光法对其进行测定的。

希森美康(SYSMEX)公司五分类血液分析仪的检测原理按生产时间的先后可分为三大类：多通道阻抗与射频联合检测技术.代表机型有SE一9000；激光流式细胞检测结合细胞组化染色技术，代表机型有SF一3000；激光流式细胞检测结合核酸荧光染色技术，代表机型有SF一2l00。SYSMEX XE一2100全自动血细胞分析仪是综合了前向散光、侧向散光和侧向荧光三种光学检查技术，结合电阻抗技术来进行白细胞分类的。直流电阻抗法(DC)用于测量细胞体积大小。激光散射产生的前向散射光、侧向散射光可用于探测白细胞体积大小、细胞内含物的情况(细胞核以及颗粒情况)，侧向荧光则可以反映细胞内脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的含量。综合各个测量方法，得到白细胞五分类的图形和数据。SYSMEX XT一2000i全自动血液分析仪运用核酸荧光染色技术，配合激光流式分析系统，保证了精确的WBC五项分类结果。

HORIBA ABX 公司生产的Pentra系列五分类血液分析仪采用独有的双鞘流通道，结合阻抗法、化学染色技术及吸光度法对白细胞进行精确的分析。流式通道内有两个检测装置，60um的鞘流微孔用于阻抗法体积检测，42um 的光窗用于吸光度测定分析细胞内容物。实现对大量细胞进行的顺序、快速、准确地分析与测定。以上所介绍的几种血液分析仪是目前我国医疗机构常见的具有代表性的几种测定白细胞五分类的机型。另外，日本光电公司生产的MEK一8222K在中国的拥有量也较大.因其工作原理与雅培公司的CELL—DYN Ruby相似.也是采用半导体激光法和多角度激光散射技术，只是试剂的配方有所区别，因此不再赘述。

国内迈瑞公司生产的BC一5500的白细胞分类结合了液流聚焦技术、激光散射技术和化学染色技术。其光源采用半导体激光系统，通过多角度的激光散射，提供细胞的大小、细胞核、细胞颗粒大小及复杂性的信息.并结合试剂对嗜酸性细胞和嗜碱性细胞的特异处理，将嗜酸性细胞和嗜碱性细胞区分开来，刚筛选出各类异毒细胞，实现精确的五分类检测结果。

由于不同仪器的检测原理及相关试剂的差异，各类设备均有其相应的特点。总体来讲，光学检测法结合特种化学试剂如染色物质等.由于其针对某一被检物质的特异性，因此其测定及分析结果较电阻法精确度要高，但相应的试剂成本加大，同时对操作人员及环境的要求也会有所提高。

2.2 五分类血液分析仪的展望

从五分类血液分析仪的发展进程可以看出，临床对血细胞的分析已不满足于简单的对WBC、RBC、PLT的计数，而是更倾向对于其各类细胞及其亚群的进一步分析，包括从细胞内部的DNA，RNA及免疫等方面进行分析。冈此，血细胞分析仪已从对细胞的简单的物理性能的研究转向对细胞内部化学性质及免疫性质的研究方向发展，即从细胞学向分子生物学，从分子生物学向免疫学方向发展。同时，随着工业科技的进步，仪器的精度、速度、集成化、一体化的程度会更高，相信在不久的将来会有更先进的血液分析系统面世。

第四篇：白细胞计数实验报告

白细胞计数和分类

目的：掌握血涂片制备的操作要领、瑞氏染色方法、正常外周血五种白细胞形态特点、原理：各种白细胞必须经过染色，才易于区分其类别。常用者为瑞氏（Wright’s）染色法和姬姆萨(Giemsa)染色法。测定外周血液中各种白细胞的相对比值，以观察其数量、形态和质量变化，通过显微镜观察染色血涂片，计算血液中各类白细胞的百分率，称为白细胞分类计数。利用白细胞总数和各类白细胞的百分率，即可计算每mm3血液中各类白细胞的绝对值。

实验器材： 香柏油、盖玻片、推片、采血针或注射器、小滴管、消毒棉球、瑞氏染液、pH6.4~6.8磷酸盐缓冲液、蒸馏水、计数板及专用盖片、针 1ml刻度移液管、1ml EP管、光学显微镜。20ul刻度移液管、推片

实验步骤

白细胞分类

1．血片制作：

取一滴血，滴于洁净无油脂的玻片一端。左手持玻片，右手再取边缘光滑的另一玻片作为推片。将推片边缘置于血滴前方，然后向后拉，当与血滴接触后，血即均匀附在二玻片之间。此后以二玻片约呈30—45度的角度平稳地向前推至玻片另一端。推时角度要一致，用力应均匀，即推出均匀的血膜（血膜不可过厚、过薄）。将制好的血涂片晾干，不可加热。

注：（1）良好涂片标准：

１)呈头、体、尾舌形 ２)血膜厚薄适宜 ３)两边留有空隙

（2）涂片好坏与下列因素有关： 1）血滴大小

2）推片与玻片之间角度 3）推片速度

2、血涂片的染色步骤：

（1）用蜡笔在血膜两端各划一道线，以免染料外溢，置涂片于染色架上。

（2）滴加瑞氏染液，共计七八滴数，以盖满血膜为度，静置1分钟。

（3）再滴加等量的磷酸缓冲盐溶液，轻轻摇动，并轻吹液体使染色液与缓冲液混合均匀，静置15分钟。

（4）用清水冲洗。切勿先倾去染液再冲洗，否则沉淀物附于血膜上不宜出去。冲洗后斜置血涂片于空气中干燥。或先用滤纸吸取水分迅速干燥，即可镜检。

3、白细胞分类计数：先用低倍镜检查涂片及染色是否均匀。然后加一滴香柏油于血膜厚薄均匀处（一般在体尾交界处），在油镜下由此处开始按其形态特征进行分类计数，计数移动时避免重复。根据所见到的100个白细胞，记录各种白细胞所占的百分数。

4、各类白细胞的形态特征

嗜中性白粒细胞：圆形，胞浆淡红色，胞浆内有多量紫红色细小颗粒（染色不佳时则看不清楚）。核为蓝紫色。

嗜酸性白细胞：大小、形态与中性白细胞大体相似，唯胞浆内含有粗大的鲜红色颗粒。核多数为两叶。

嗜碱性白细胞：大小、形态与中性白细胞大体相似，但胞浆内含有粗大的深蓝色，常遮盖在核上。核分叶不明显

淋巴细胞：分大小两种，小淋巴细胞圆形，核染成深紫色，圆形或肾形，胞浆很少，常呈一小片月牙状，染成蓝色。大淋巴细胞，核圆形或肾形，胞浆相对较多，染成天蓝色，在胞浆与核之间有淡染带。有时内含少数紫红色大颗粒。

单核细胞： 核染成紫色，其染色质疏松，核形不规则。胞浆较多，染成浅灰蓝色 白细胞计数

加稀释液 用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。

吸取血液 用微量吸管吸取新鲜全血或末梢血20ul，擦去管尖外部余血。将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取上层白细胞稀释液清洗吸管2-3次

混匀 冲池 将试管中血液与稀释液混匀，待细胞悬液完全变为棕褐色

再次将小试管中的细胞悬液混匀。用滴棒蘸取细胞悬液1滴，充入改良Neubauer计数板的计数池中，室温静置2-3min，待白细胞完全下沉。

计数 在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞总数

计算

白细胞总数 =4大格白细胞数（N）/4×10 ×20 ×10^6

= N÷ 20 ×10^9/L

注：计数板上下各一个计数池计数区域分为9个大方格，四角的大方格各划分为16个中方格，中央大方格划分为25个中方格。四角的大方格为白细胞计数区，大方格四边压线细胞计左不数右，计上不数下

实验结果

白细胞总数

白细胞=(35+42+39+37)/20*10^9=7.65*10^9/L 中性粒细胞65个,占65%

单核细胞5个,占5% 淋巴细胞:27个,占27%

嗜酸性粒细胞3个,占2% 嗜碱性粒细胞1个,占1%

注意事项

1、.采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。

2、白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10％。

3、按一定顺序移动视野。

4、染色时切勿使染液干涸，否则发生不易去掉的沉淀。

5、水冲洗时间不宜过长，否则会脱色。

6、血涂片不可过厚 思考题

1．白细胞核不着色可能是因为操作中那种误差引起的？

第五篇：SYSMEX XE-2100血液分析仪白细胞分类的应用评价

SYSMEX XE-2100血液分析仪白细胞分类的应用评价

凌励

沈茜 周道银1`

王学 郑晓玉 郁 超

1`1`21 摘要：目的 评价Sysmex XE-2100血液分析仪白细胞分类功能的应用。方法 选择6份样本各测5次，观察其批内精密度；对1100例已测样本，进行血片复检，评价其报警系统的性能。结果 XE-2100血液分析仪白细胞分类具有很高精密度，其报警系统的特异性94.8%，灵敏度100%，总有效率95.5%。结论 XE-2100白细胞分类及报警系统的功能良好，符合临床应用需求。

关键词：XE-2100血液分析仪；白细胞分类；报警系统

Sysmex XE-2100血液分析仪是一台五分类血液分析仪，除采用传统的电阻抗法和射频法外，还用流式细胞技术，结合特殊化学试剂及荧光染料作周围血五种白细胞的分类；并可分析出原始和幼稚粒细胞、有核红细胞。我们对用该仪器检测的1100例标本的白细胞分类结果进行了分析评价，现将结果报告如下。

材料与方法

1．仪器与试剂 XE-2100血液分析仪及配套试剂。2．样本 K2EDTA抗凝静脉血来自长海医院血常规标本。3．白细胞分类原理

3.1 “DIFF”通道 将白细胞分为除嗜碱性粒细胞外的中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和嗜酸性粒细胞。其纵座标（Y轴）表示侧向荧光强度，反映亚甲基染料对DNA/RNA的染色强度，横座标（X轴）表示侧向散射光强度，反映细胞的内容物。

3.2 “WBC/BASO”通道 用于检测嗜碱性粒细胞及计数白细胞。Y轴表示前向散射光，反映细胞体积，X轴表示侧向散射光。

3.3 “IMI”通道 用于检测未成熟粒细胞。采用直流电（DC）与射频（RF）联合检测的方法，RF测细胞核的大小及密度为Y轴，DC测细胞体积和数量为X轴，在IMI散射图上，不同的未成熟粒细胞占据不同的位置。

3.4白细胞分类报警系统 仪器为每个可疑警号（Q-flag）设置一个直方图来表达“Yes/No”可疑警号，仪器将临界值设在100，若参数的可疑警号值低于100则定义为阴性，若在100与300（最大值）之间则定义为阳性，可疑警号的数值反映了可疑警号的可信度。可疑警号的类型及含义见表1。

表1.可疑警号的类型及含义 1[1][1]

[2]

[1] 1．第二军医大学长海医院实验诊断科，上海200433，2．江苏大学实习生 类

型

WBC-A-S? Blasts? Imm Gran? Left Shift? Atypical Lymph? Abn Lymph /L-Blasts?

白细胞散射图异常? 出现原始粒细胞?

含

义

出现早幼粒、中幼粒、晚幼粒细胞? 出现中性杆状核细胞? 出现异形淋巴细胞或浆细胞?

出现淋巴细胞异常或原始淋巴细胞增多? 4.方法

4.1批内精密度（重复性）对白细胞计数及分类的重复性进行评估。采用5个异常及1个正常样本共6个样本，每个样本分别进行5到6次闭盖模式进样检测。

4.2白细胞报警系统检测异常细胞能力的评估 我们检测和统计1100份标本中出现的各种可疑警号(有部分标本同时出现两个以上可疑警号)，并对所有样本进行血片分类，以评价该仪器白细胞分类功能及报警系统检测异常细胞的能力。

结

果

1.批内精密度 所分析参数的结果见表2，数值极低的结果CV值较高，总体精密度很好。

表2.XE-2100白细胞计数及分类批内精密度

项目

WBC（×10/L）NEUT（%）LYMPH（%）MONO（%）EOS（%）BASO（%）

9数据范围 1.98-48.02 3.82-89.12

6.70-94.92

0.84-6.12 0.02-4.52 0.08-1.10

CV%变化范围 1.23-4.00

0.22-2.87 0.20-4.60 3.83-8.75 8.54-23.61 23.57-55.90

2.白细胞报警系统对异常细胞检测能力的评估

2.1 异常细胞检测能力评估 检测1100例标本，出现可疑警号的样本为210例，占19.1%。对210例阳性样本及890例阴性标本进行显微镜下形态学分类，以评估白细胞报警系统异常细胞检测能力。890例阴性标本的血涂片经显微镜复检，均未查见异常细胞；210例阳性标本的血涂片经显微镜复检，161例查见相应的异常细胞，49例未查见异常细胞。该仪器检测灵敏度为100%，阴性预示值为100%，阳性预示值为76.7%，特异性为94.8%，白细胞可疑报警系统的总有效率为95.5%。

2.2 可疑警号出现的次数及相关病例分析 210例出现可疑警号的样本中共出现可疑警号259个,各可疑警号出现的次数及其手工复检阳性结果见表3。表3.各可疑警号出现的次数及其假阳性率

可疑警号出现次数

*WBC-A-S 11 0

Blasts 63 54 14.1

Imm Gran 134 113 15.7

Left Shift 28 26 7.1

Atypical Lymph 6 6 0

Abn Lym /L--Blast 17 12 29.4

总计

259 222 14.3 镜检阳性次数

假阳性率(%)

*镜检阳性: 指检测出相应的异常细胞

在11例出现“白细胞散射图异常” 警号的样本中，同时出现“原始细胞”、“幼稚粒细胞”警号，此时仪器不报分类结果，其中４例为急性粒细胞白血病，2例为急性单核细胞白血病，1例为急性粒单细胞白血病，2例为慢性粒细胞白血病，2例为肿瘤患者化疗后使用促粒素，外周血片分类发现前７例中，原始粒细胞均在50%以上，后4例原始粒细胞10%-20% 之间。在单独出现“幼稚粒细胞”或与“核象左移”同时出现的病例中，以术后、感染、失血、大面积烧伤、晚期肿瘤、肿瘤患者化疗后使用促粒素以及慢粒等为多见。在出现异淋警号的6例样本中, 外周血片均发现异淋，3例为儿科病毒感染患者，3例为肝炎患者。出现“淋巴细胞异常或原始淋巴细胞增多”警号的17例样本中，有7例为新生儿或幼儿，淋巴细胞占70%以上，有5例为急性淋巴细胞白血病，５例为淋巴瘤白血病，后10例外周血片中原始淋巴细胞均在70%以上。

讨

论

XE-2100采用半导体激光照射被检细胞，依据每个细胞产生的三种信号来分辨细胞，前向散射光反映细胞的体积，侧向散射光反映细胞内容物，如核和颗粒，侧向荧光反映细胞内脱氧核糖核酸和核糖核酸的含量，因而保证了白细胞分类的质量，我们的研究结果显示，XE-2100白细胞计数及分类计数具有很高的精密度。

在“IMI”通道内，该仪器利用成熟粒细胞膜表面含较多量的脂质及较少量的蛋白质而幼稚粒细胞膜表面则相反的原理，检测时在IMI通道中加入含聚乙二醇次乙基团和硫化氨基酸的表面活性剂以破坏细胞膜，导致成熟粒细胞膜破坏而幼稚粒细胞膜部分受损，从而使聚乙二醇次乙基团和硫化氨基酸进入幼稚粒细胞与细胞膜和细胞内容物结合，不同的幼稚粒细胞对试剂的作用有所不同；再用直流电法测量细胞的大小，而射频则透入细胞内，测量细胞核的大小及核与胞浆的密度，因而在以射频信号为纵轴，直流电信号为横轴的“IMI”散射图上，不同细胞体积和核的密度及大小的细胞占据的位置不同。XE-2100独特的幼稚粒细胞通道（IMI）和白细胞分类的报警系统在血常规工作中，起着极其重要的作用，我们的研究结果显示，出现白细胞可疑警号标本的概率为19.0%，其特异性为94.5%，灵敏度为100%，[1]总有效率为95.5%，可疑警号的假阳性率为14.3%，从而使复片工作的针对性明显增强，提高了血常规工作的效率，保证了血常规检测的快速和准确；

因此我们认为，XE-2100是一台具有独特而完美的设计理念、分析软件功能强大、技术性能优良、操作简便的血液分析仪。

参考文献

1．R.Herklotz, A.R.Huber :Precision and accuracy of the leukocyte differential on the Sysmex XE-2100.Sysmex J Int, 11:8-21,2001.2．H.Inoue: Overview of automated hematology analyzer XE-2100.Sysmex J Int, 9:58-64,1999.