医学检验仪器学济宁医学院考试重点（全文5篇）

第一篇：医学检验仪器学济宁医学院考试重点

灵敏度： 检验仪器在稳态下输出量变化与输入量变化 特定波长以下的光不能通过前向角散射： 前向角散射 阳性瓶的判断有三个标准：

1、CO2 初始值超过生物 从安全柜内排出的气流经高效空气过滤器过滤后排 之比，即检验仪器对单位浓度或质量的被检物质通过 与被测细胞的大小有关，确切地说与细胞直径的平方 指数基值

2、CO2 产生的速度持续增加

3、CO2 生成速 出，保护环境不受污染。②Ⅱ级生物安全柜是指用于 检测器时所产生的响应信号值变化大小的反应能力，密切相关 它反映仪器能够检测的最小被测量。误差：当对某物理量进行检测时，所测得的数值与标 号，可提供细胞内精细结构和颗粒性质的信息。了测量值对真值的偏离程度。相对误差：它是绝对误差与被测量真值之比。时，仪器输出信号的波动或变化范围即为噪音。技术叫做电泳技术。度异常高。保护操作人员、处理样品安全与环境安全的通风安全 侧向角散射： 是指与激光束正交 90°方向的散射光信 酶标仪工作原理：光通过被检测物，前后的能量差异 柜。前窗操作口向内吸入的气流用以保护操作人员的 即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被 安全； 工作空间为经高效空气过滤器净化的垂直下降 气流用以保护产品的安全； 柜内的气流经高效空气过 酶标仪与普通光电比色计的不同之处：

1、酶标仪比 滤后排出，以保护环境不受污染③Ⅲ级生物安全柜是

称值(即真值)之间的差异称为误差，误差的大小反映 电泳技术：利用电泳现象将多组分物质分离、分析的 检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。

绝对误差：它是测得值 X 与被检测值真值 X0 之差。醋酸纤维素薄膜： 醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化 色液的容器不是比色皿，而是塑料微孔板

2、以垂直 具有完全密闭、不漏气结构的通风安全柜。工作空间 形成的纤维素醋酸酯，由该物质制成的薄膜称为醋酸 光束通过微孔板中的待测液

3、酶标仪的酶值表示方 为经高效空气过滤器净化的无涡流的单向流空气，在 式是 OD 值，分光光度计的表示方式为吸光度值 A 值。安全柜内的操作是通过与安全柜密闭连接的手套完 Ⅱ级生物安全柜分类和适用范围①A1 型生物安全柜，免疫透射比浊法 ：用于测定产生抗原抗体特异性浊 发光免疫分析法是将发光反应与免疫反应相结合，产 成的。噪音： 检测仪器在没有加入被检验物品(即输入为零)纤维素薄膜

最小检测量：检测仪器能确切反映的最小物质含量。度反应的项目，在光源的光路方向测量透射光强度来 生的一种很有发展前途的分析方法。检测者、

第二篇：检验仪器学,问答题13

二、选择题

【A型题】

1．A2．B3．B4．E5．C6．A7．C8．B9．E10．A

11．E12．A

13．D14．B15．A16．E17．D18．C19．A20．B21．C22．E

23．E24．E

25．A26．B27．C

【X型题】

1．ABDE2．ACDE3．BCDE4．ABCD5．ADC6．ABD

7．ABD8．ABCD9．AC10．ACDE11．ABCD

三、简答题

1．尿液分析的临床意义是什么？

答：尿液分析是临床诊断泌尿系统疾病的重要措施之一，通过对尿液物理学检查和化学检查，可观察尿液物理性状和化学成份的变化。在尿沉渣检查中能够看到的有形成份为红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、巨噬细胞、肿瘤细胞、细菌、精子以及由尿液中沉析出来的各种结晶（包括药物结晶）等。这些检查资料对肾和尿路疾患的诊断、鉴别诊断以及疾病的严重程度和预后的判断，都有极重要的意义

2．简述尿液分析技术的进展。

答：尿液分析是最古老的医学检验之一。公元前400年，古希腊学者Hippocrates 已注意到人发热时，尿液颜色和气味的变化。此后，人们对尿液检验与疾病之间关系的认识逐渐加深。真正科学的尿液检验始于18世纪-19世纪，1827年，Bright，最早把尿液检验用于患者的诊断和护理，成为尿液常规分析最早期的开拓者和支持者；20世纪40年代，逐渐出现了尿液干化学试剂带法，并成为筛检健康人或患者尿液的首选方法；20世纪70年代，第一台尿液化学分析仪问世，从此在相当程度上改变了传统尿液检验繁琐费时的操作方式，成为现代尿液分析的标志；20世纪80年代，逐渐将色谱和免疫技术用于干化学试纸中，生产出具有检测敏感性和特异性极高的单克隆抗体的试剂带；20世纪90年代以来，尿液分析仪自动化程度、性能得到迅猛发展。

3．简述我国现代尿液分析技术的发展过程。

答：我国的尿液分析仪的研制起步较晚，1966年，北京协和医院和上海医学化学研究所开始研制尿液试剂带，1985年广西桂林医疗电子仪器厂从日本引进当时具有国际先进水平的MA-4210型尿液分析仪和专用试剂带的生产技术及设备，由此填补了国内空白。经过近三年的努力，实现了部分国产化，1990年尿液分析仪达到全部国产化。目前我国也已经能够生产功能齐全的尿液分

析仪。

4．尿液分析仪是如何进行分类的？

答：尿液分析仪按工作方式可分为湿式尿液分析仪和干式尿液分析仪。其中干式尿液分析仪主要着眼于自动评定干试纸法的测定结果，因其结构简单、使用方便，目前临床普遍应用。

尿液分析仪按测试项目的数量可分为8项尿液分析仪、9项尿液分析仪、10项尿液分析仪、11项尿液分析仪和12项尿液分析仪。检测项目包括尿蛋白、尿葡萄糖、尿pH、尿酮体、尿胆红质、尿胆原、尿潜血、亚硝酸盐、尿白细胞、尿比重、维生素C和浊度。

尿液分析仪按自动化程度可分为半自动尿液分析仪和全自动尿液分析仪。

5．简述试剂带结构。

答：采用了多层膜结构，第一层尼龙膜起保护作用，防止大分子物质对反应的污染；第二层绒制层，包括碘酸盐层和试剂层，碘酸盐层可破坏维生素C等干扰物质，试剂层含有试剂成分，主要与尿液中所测定物质发生化学反应，产生颜色变化；第三层是固定有试剂的吸水层，可使尿液均匀快速地浸入，并能抑制尿液流到相邻反应区；最后一层选取尿液不浸润的塑料片作为支持体。

6．尿液分析仪的检测项目有哪些？

答：检测项目包括尿蛋白、尿葡萄糖、尿pH、尿酮体、尿胆红质、尿胆原、尿潜血、亚硝酸盐、尿白细胞、尿比重、维生素C和浊度。

7．尿液分析仪的检测原理是什么？

答：把试剂带浸入尿液中后，除了空白块外，其余的试剂块都因和尿液发生了化学反应而产生了颜色的变化。试剂块的颜色深浅与光的吸收和反射程度有关，颜色越深，相应某种成分浓度越高，吸收光量值越大，反射光量值越小，反射率也越小。反之，反射率越大。即颜色的深浅与光的反射率成比例关系，而颜色的深浅又与尿液中各种成分的浓度成比例关系。所以只要测得光的反射率即可以求得尿液中各种成分的浓度。

8．简述尿液分析仪的结构。

答：尿液分析仪一般由机械系统、光学系统、电路系统三部分组成。

9．现代尿液分析仪的光学系统有几种？

答：有三种。滤光片分光系统：采用光源灯（卤灯）发出的白光通过球面积分仪的通光筒照射到试剂带上，试剂带把光反射到球面积分仪中，透过滤色片，得到特定波长的单色光，照射到光电二极管上，实现光电转换。

LED系统：采用了可发射特定波长的发光二极管（LED）作为检测光源，两个检测头上都有三个不同波长的光电二极管，对应于试剂带上特定的检测项目分别为红、橙、绿单色（660nm、620nm、555nm），它们相对于检测面以60°照射在反应区上。作为光电转换器件的光电二极管垂直安装在反应区的上方，在检测光照射的同时接收反射光。

CCD系统：采用了目前比较尖端的光学元件CCD技术进行光电转换。它是把反射光分解为红

绿蓝（RGB：610nm、540nm、460nm）三原色，又将三原色中的每一种颜色分为2592色素，这样整个反射光分为7776色素，可精确分辨颜色由浅到深的各种微小变化。CCD的基本单元是MOS（金属氧化物半导体），当光照射到CCD硅片上时，在栅极附近的半导体内产生电子-空穴对，其多数载流子被栅极电压排开，少数载流子则被收集在势阱中形成信号电荷。将一定规则变化的电压加到CCD各电极上，电极上的电子或空穴（信号电荷）就能沿着半导体表面按一定方向移动，形成电信号。

10．尿液分析仪的安装注意事项有哪些？

答：（1）避免安装在有水分、潮湿的地方。应安装在清洁、通风处，室内温度应在10℃-30℃，相对湿度应≤80％；（2）安装在稳定的水平实验台上（最好是水泥台）。禁止安装在高温、阳光直接照射处，要远离高频、电磁波干扰源、热源及有煤气产生的地方；（3）应安装在大小适宜、有足够空间便于操作的地方；（4）要求仪器接地良好，电源电压稳定。

11．如何进行尿液分析仪的调校？

答：（1）首先应该用标准的校正带对仪器进行测定，对仪器的光路、状态进行校正，以达到最佳状态；（2）应该对尿液分析仪及试剂带的准确度进行评价。准确度的评价应根据仪器制造商规定的测定范围配制成一定浓度的标准物，在仪器上严格按说明书操作，每份标准物测定3次，看测定结果是否与标准物浓度相符合的程度；（3）用传统的方法与尿液分析仪测定作对比分析，对尿液分析仪的敏感性和特异性进行评价。与传统湿化学法对比分析时，应注意两种方法测试原理不同带来的实验误差；（4）了解该仪器对每项测试指标的测试范围，并建立该仪器的正常人的参考值范围。

12．尿液分析仪使用注意事项是什么？

答：（1）保持仪器的清洁；（2）保证使用干净的取样杯；（3）使用新鲜的混合尿液，标本留取检查应不超过2h；（4）不同类型的尿液分析仪使用不同的尿试带，在试带从冷藏温度变成室温时，不要打开盛装试剂带的瓶盖，防止试剂带受潮变质；（5）试剂带浸入尿样的时间为2s，试剂带过多的尿液标本应用滤纸吸走，所有试剂块包括空白块在内都要全部浸入尿液中；（6）仪器使用最佳温度应在20℃-25℃室温，尿液标本和试剂带最好也维持在这个温度范围内；（7）在观看仪器测试结果时，不能单独以符号代码结果来解释，要结合半定量值进行分析，以免因定性结果的报告方式不够妥当，给临床解释带来混乱。

13．如何进行尿液分析仪的维护和保养？

答：不规范地操作仪器，会扰乱仪器的正常工作，引起不良结果。仪器应避免阳光长时间的照射及温度过高．湿度过大。

日常维护在常规工作中必须严格按一定的操作规程进行操作，否则会因使用不当影响实验结果。（1）操作前应仔细阅读分析仪说明书及尿试剂带说明书，每台尿液分析仪应建立操作程序，并按其进行操作；（2）对尿液分析仪要有专人负责，建立专用的仪器登记本，对每天仪器操作的情况、出现的问题，以及维护、维修情况逐项登记；（3）每天测定开机前，要对仪器进行全面检

查，确认无误时才能开机，测定完毕，要对仪器进行全面清理．保养；（4）开瓶但未使用的尿试剂带，应立即收入瓶内盖好瓶盖，根据要求妥善保存，以免下次使用影响结果。

每日保养仪器表面应用清水或中性清洗剂擦拭干净；试剂带托盘，每日测定完毕，使用无腐蚀性的洗涤剂清洗，也可用清水或中性清洗剂擦拭干净；不要使用有机溶剂清洗传送带，清洗时勿使水滴入仪器内，有些仪器的试剂带托盘是一次性的，应注意更换；废物（废水．废试剂带）装置，每日用完应清除干净，并用水清洗干净。

每周或每月保养各类尿液分析仪的每周或每月保养，要根据仪器的具体情况而定。

14．简述引起尿液分析仪故障的原因。

答：仪器的故障分为必然性故障和偶然性故障。必然性故障是各种元器件．零部件经长期使用后，性能和结构发生老化，导致仪器无法进行正常的工作；偶然性故障是指各种元器件．结构等因受外界条件的影响，出现突发性质变，而使仪器不能进行正常的工作。通常出现故障的原因分为以下几类。

（1）人为引起的故障是由于操作不当引起的，故障轻者导致仪器不能正常工作，重者可能损害仪器。因此在操作使用前，必须熟读用户使用说明书，了解正确的使用操作步骤；（2）仪器设备质量缺陷引起的故障是指仪器元器件质量不好、设计不合理、装配工艺上因疏忽造成的故障；（3）长期使用后的故障这类故障与元器件使用寿命有关，所以是必然性故障，如光电器件、显示器的老化，传送机械系统的逐渐磨损等等；

（4）外因所致的故障是由仪器设备的使用环境条件不符合要求所引起的，常常是造成仪器故障的主要原因。一般指的是电压、温度、电场、磁场及振动等。

15．尿沉渣分析仪有几大类型？

答：迄今为止尿沉渣分析仪大致有两类，一类是通过尿沉渣直接镜检再进行影像分析，得出相应的技术资料与实验结果；另一类是流式细胞术分析。

16．简述流式细胞术尿沉渣分析仪的结构。

答：它包括光学检测系统、液压系统、电阻抗检测系统和电子系统。

17．简述流式细胞术尿沉渣分析仪的工作原理。

答：测定是应用流式细胞术和电阻抗的原理进行的。当一个尿液标本被稀释并经染色液染色后，靠液压作用通过鞘液流动池。反应样品从样品喷嘴出口进入鞘液流动室时，被一种无粒子颗粒的鞘液包围，使每个细胞以单个纵列的形式通过流动池的中心（竖直）轴线，在这里每个尿液细胞被氩激光光束照射。每个细胞有不同程度的荧光强度、前向散射光强度和电阻抗的大小。仪器将这种荧光．散射光等光信号转变成电信号，并对各种信号进行分析，最后得到每个尿液标本产生出的直方图（histogram）和散射图（scattergram）。通过分析这些图形，即可区分每个细胞并得出有关细胞的形态

18．尿沉渣分析仪的安装、使用注意事项是什么？

答：（1）安装仪器必须安装在通风好，远离电磁干扰源、热源，防止阳光直接照射，防

潮的稳定水平实验台上（最好是水泥台上）。环境大小应适宜，仪器两侧至少有0.5m空间，仪器后面最少有0.2m空间。最好安装在有空调装置的房间内（室内温度为15℃-30℃，最适温度为25℃，相对湿度应为30％-85％）。

（2）使用和注意事项安装新仪器时或每次仪器大维修之后，必须对仪器技术性能进行调试，这对保证检验质量起着重要的作用。全自动尿沉渣分析仪的鉴定必须由仪器制造公司的工程师来进行。每天开机前，操作者要对仪器的状态进行全面检查，确认无误后方可开机。开机时严格按说明书进行操作，仪器先进行自检，自检通过后，仪器再进行自动冲洗并检查本底。本底检测和质控通过后，方可进行样品测试。

下列情况应禁止上机测试：①尿液标本血细胞数>2000/μl时，会影响下一个标本的测定结果；②尿液标本使用了有颜色的防腐剂或荧光素，可降低分析结果的可信性；③尿液标本中有较大颗粒的污染物，可引起仪器阻塞。

19．简述UD自动染色尿沉渣分析仪的主要功能和特点。

答：（1）仪器定量准确，具有极高的重复性；（2）系统自动化、智能化程度高，具备灵活的操作方式；（3）克服了不染色方法易误认、漏检的缺点，提高了典型沉渣成分的检出率；（4）符合标准化要求，克服人为因素后，使尿沉渣分析达到尿沉渣分析的规范化、标准化的要求；（5）安全洁净，减少了对实验室及操作人员的污染；（6）智能控制，软件功能强大，可全面实现人机对话；（7）功能齐备，人性化设计，环保节约、易于摆放和观察。

20．自动尿液分析质控物选择的要求有哪些？

答：对质控物的要求必须达到以下几点：（1）质控物应成分稳定，批内分装均匀，易于保存和运输，复溶后成分无变化。（2）选择质控物时，最好使用多项复合控制品。有条件的实验室最好同时使用高．低两个值的质控物。也有人利用红细胞．白细胞醛化固定，霉菌孢子固定，作为有形成分的质控物。（3）在一天内做质控时最好使用同一份质控物，并采用高．低两种质控物对照。（4）根据各实验室的具体情况每天或隔日随机做质控检测，使用不同批号的试剂带前均需做质控，并对仪器进行校正。（5）质控物的测定结果由于某些原因超出质控要求的范围表示失控,则需从检查试剂带、质控物、校准仪器等方面查找原因。

第三篇：检验仪器学,问答题12

二、选择题

【A型题】

1．D 2．B 3．C 4．A 5．E 6．C 7．B 8．C 9．C 10．C 11．B 12．E 13．D 14．A 15．B 16．B 17．D 18．B 19．C 20．D 21．E 22．C 23．E 24．D 25．A 26．C 27．E 28．D 29．A 30．E 31．B 32．A 33．C 34．E 35．B 36．B 37．A 38．E 39．D 40．C 41．B 42．D 43．D 44．B 45．D 46．B 47．A 48．E 49．A 50．E 51．B 52．D 53．C 54．A 55．D

【X型题】

1．ABE 2．ABCD 3．ACE 4．ABDE 5．BC 6．BD 7．BCDE 8．BCDE 9．ACDE 10．BCDE 11．ABC 12．ACDE 13．BCE 14．BCDE 15．ABCD 16．AB 17．ABCD 18．ABCD 19．CD 20．ABCE 21．BCDE 22．CDE 23．ABCD 24．ABCE 25．ABDE 26．BCE 27．ACE 28．ABCE 29．ABC 30．ABC 31．AC 32．ABCE 33．ABC 34．BCDE 35．BCDE 36．ABCE 37．ABCE 38．BDE 39．ABCE 40．ABCE

三、简答题

1．BCA的概念及功能是什么？

答：血细胞分析仪是指对一定体积全血内血细胞异质性进行自动分析的临床常规检验仪器。其主要功能是：血细胞计数；白细胞分类；血红蛋白测定；相关参数计算。

2．如何对BCA进行分类？

答：按自动化程度分半自动血细胞分析仪、全自动血细胞分析仪、血细胞分析工作站、血细胞分析流水线；按检测原理分电容型、光电型、激光型、电阻抗型、联合检测型、干式离心分层型、无创型；按对白细胞的分类水平分二分群、三分群、五分群、五分群＋网织红BCA。

3．简述电阻抗（库尔特）血细胞检测原理。

答：血细胞与等渗的电解质溶液相比为相对的不良导体，其电阻值大于稀释溶液的电阻值；当血细胞通过检测器的孔径感受区时，检测器内外电极之间的恒流源电路的电阻值瞬间增大，产生电压脉冲信号；脉冲信号数等于通过的细胞数，脉冲信号幅度大小与细胞大小成正比。

4．简述电阻抗血细胞分析技术的应用及其缺点。

答：应用电阻抗原理可进行白细胞计数和分群、血小板计数、红细胞计数、红细胞平均体积和血小板平均体积测定及获得其他相关参数等。

1白细胞分类计数不特异；○2技术所限，影响红细胞有关参数的准确性；电阻抗法的缺点：○3血小板计数的干扰因素多；④不易发现异常细胞。○5．简述联合检测型BCA白细胞分类计数的实质和共有特点。

答：实质是选用较特异的方法将血中含量较少的嗜酸、嗜碱性粒细胞检出，发现异常细胞。共有特点是：均使用了鞘流技术，将细胞重叠限制到最低限度。

6．联合检测型BCA在白细胞分类上主要有哪些技术？

1容量、电导、光散射联合检测技术；○2答：联合检测型BCA在白细胞分类技术上主要有：○

3多角度激光散射、电阻抗联合检测技术；○4光散射与电阻抗、射频与细胞化学联合检测技术；○细胞化学检测技术。

7．简述BCA网织红细胞检测原理。

答：利用网织红细胞中残存的嗜碱性物质—RNA，在活体状态下与特殊的荧光染料结合；激光激发产生荧光，荧光强度与RNA含量成正比；用流式细胞技术检测单个的网织红细胞的大小和细胞内RNA的含量及血红蛋白的含量；由计算机数据处理系统综合分析检测数据，得出网织红细胞数及其他众多参数。

8．简述电阻抗型BCA和联合检测型BCA的基本结构。

答：电阻抗型BCA和联合检测型BCA的基本结构：主要由机械系统、电学系统、血细胞检测系统、血红蛋白测定系统、计算机和键盘控制系统以不同形式的组合而构成。

9．对BCA进行评价的指标有哪些？

答：在细胞计数、血红蛋白测定方面，主要评价仪器测试样本的总变异、携带污染率、线性范围、可比性和准确性等，这对保证检验质量将起重要作用。

10．简述BCA堵孔情况的判断。

答：根据微孔堵塞的程度，将分为完全堵孔可不完全堵孔两种。堵孔判断：当检测器小孔管的微孔完全阻塞或泵管损坏时，血细胞不能通过微孔而不能计数，仪器在屏幕上显示“CLOG”，1观察计数时间；○2观察示波器波形；为完全堵孔。而不完全堵孔主要通过下述方法进行判断：○3看计数指示灯闪动；○4听仪器发出的不规则间断声音等进行判断。○11．BCA常见的堵孔原因有哪些？如何处理？

1仪器长时间不用，试剂中水分蒸发，盐类结晶堵孔，可用去离答：常见堵孔原因与处理：○

2未梢采血不顺或用棉球擦拭微量取血管；○3抗凝剂子水浸泡，完全溶解后，按CLEAN键清洗；○

4小孔管微孔蛋白沉积多，需清洗；○5样品杯未盖量与全血不匹配或静脉采血不顺，有小凝块；○好，空气中的灰尘落入杯中。后四种原因，一般按CLEAN键清洗，如果不行须按说明书卸下检测器进行清理。

12．BCA保证血小板准确计数的技术有哪些？

答：主要有：鞘流技术、扫流技术、隔板技术、浮动界标和拟合曲线技术等，保证血小板计数的精确性。

13．BCA的进展表现在哪几个方面？

答：主要表现在：仪器测试原理的不断创新；新血细胞分析参数的出现；各种特殊技术的应用；仪器自动化水平的提高；无创型全血细胞分析仪的研究等几个方面。

14．血凝仪常用检测原理有哪些？

答：血凝仪常用的检测原理主要：有凝固法、底物显色法、免疫学方法、干化学技术法检测原理等。凝固法原理是最基本、最常用的方法。

15．半自动与全自动在使用方法上有何不同？

答：半自动血凝仪以凝固法原理测量为主，全自动血凝仪除了使用凝固法外，还使用其他的分析方法，如底物显色法、免疫学法等。

16．简述血凝仪光学法检测原理。

答：光学法属凝固法的一种；是利用一束光线通过样品杯，样品杯中的血浆在凝固过程中导致血浆浊度发生变化；透射光或散射光的强度也发生改变；仪器根据光强度的变化来判断血浆凝固终点的检测方法称为光学法检测原理。

17．光学法血凝仪从光路结构上分哪两类？

1散射比浊法：根据待测答：根据仪器光路结构的不同又可分为散射比浊法和透射比浊法；○样品在凝固过程中散射光的变化来确定凝固终点；其光源、样本、接收器成直角排列；接收器得2透射比浊法：根据待检样品在凝固过程中吸光度的变化来到的完全是浊度测量所需的散射光。○确定凝固终点；其光源、样本、接收器成一直线排列；接收器得到的是很强的透射光和较弱的散射光。

18．简述双磁路磁珠法的测定原理。

答：属磁电检测原理。在测试杯的两侧各有一组驱动线圈，它们产生恒定的交替电磁场，使测试杯内特制的去磁小钢珠保持等幅振荡运动；凝血激活剂加入后，随着纤维蛋白的增多，小钢珠的运动振幅逐渐减弱；另一组测量线圈感应到小钢珠运动的变化；仪器将运动幅度衰减到50时确定为凝固终点。

19．简述凝固法与免疫学方法中的透射比浊、散射比浊的区别。

答：凝固法是检测血浆在凝固过程中所致一系列物理量的变化，来反映相关因子的活性，也称生物物理法。凝固法中的透射比浊、散射比浊是根据血浆中的纤维蛋白原逐渐转变成纤微蛋白，导致血浆浊度发生变化，进行光电比浊测定。而免疫学方法中的透射比浊、散射比浊虽属光电比浊原理的光学法,但有抗原抗体参与。前者是血浆凝固过程中纤维蛋白形成所致的浊度，后者是相应的抗原抗体反应形成的复合物所致的浊度。20．血凝仪光学法与双磁路磁珠法主要区别及优缺点是什么？

答：主要区别在于：前者是检测血浆凝固过程中光信号的变化，后者是检测该过程中磁电信号的变化。光学法血凝仪测试的优点在于灵敏度高、仪器结构简单、易于自动化。缺点是样本的光学异常、测试杯的光洁度、加样中的气泡等都会成为测量的干扰因素。双磁路磁珠法不受溶血、黄疸、高血脂症及气泡的严重影响；该法有利于血浆和试剂的充分混匀。

21．简述半自动和全自动血凝仪的基本结构。

答：半自动血凝仪的基本结构：主要由样本和试剂预温槽、加样器、检测系统（光学、磁场）及微机组成。全自动血凝仪基本结构包括：样本传送及处理装置、试剂冷藏位、样本及试剂分配系统、检测系统、计算机、输出设备及附件等。

22．简述全自动血凝仪的主要特点及其维护与保养。

答：主要特点：①自动化程度高；②检测方法多；③速度快；④项目任意组合，随机性；⑤测量精度好，易于质控和标准化；⑥智能化程度高，功能多；⑦价格昂贵；⑧对操作人员的素质要求高。

维护与保养：①清洗或更换空气过滤器；②检查及清洁反应槽；③清洗洗针池及通针；④检查冷却剂液面水平；⑤清洁机械运动导杆和转动部分并加润滑油；⑥及时保养定量装置；⑦更换样品及试剂针；⑧数据备份及恢复等。

23．简述血凝仪的的性能评价与临床应用。

答：血凝仪性能评价的内容主要有：重复性、线性范围、准确性、携带污染率、干扰因素、可比性分析评价等几方面。临床应用主要有：①凝血系统的检测，常规筛选实验和单个凝血因子含量及活性的测定。②抗凝系统的检测。③纤维蛋白溶解系统的检测。④临床用药监测等。

24．血凝仪的进展体现在哪几个方面？

答：主要体现在：①多方法、多功能、快速高效；②智能化程度高，软件开发进一步完善；③全自动血凝分析仪工作站；④床旁分析（即时检）；⑤在临床中的应用日趋广泛。

25．简述毛细管黏度计的工作原理与基本结构。

答：毛细管黏度计是依据牛顿流体遵循泊肃叶定律而设定的。即一定体积的液体，在恒定的压力驱动力下，流过一定管径的毛细管所需的时间与黏度成正比。

基本结构：包括毛细管、储液池、控温装置、计时装置等。26．简述旋转式黏度计的工作原理与基本结构。

答：以牛顿粘滞定律为理论依据。锥板式黏度计是同轴锥板构型，平板与锥体间充满被测样本；调速电机带动圆形平板同速旋转；锥体与平板及马达间均无直接联系。因此，当圆形平板以某一恒定角速度旋转时，转动的力矩通过被测样本传递到锥体；样本越粘稠，传入的力矩越大。当此力矩作用于锥体时，立即被力矩传感装置所俘获，其信号大小与样本黏度成正比。

基本结构：包括样本传感器、转速控制与调节系统、力矩测量系统、恒温系统。27．毛细管黏度计有何特点？ 答：其特点是：价格低廉、操作简便、速度快、易于普及；测定牛顿流体黏度结果可靠，是血浆、血清样本测定的参考方法；全血在毛细管中的不同部位，剪切率不一样，黏度亦不一样；不能直接检测某一剪切率下的表观黏度；难以反映全血等非牛顿流体的黏度特性；对进一步研究RBC、WBC的变形性和血液的粘弹性等也无能为力。

28．旋转式黏度计有何特点？

答：其特点是：能提供所需不同角速度下的剪切率；在被测液体中各流层的剪切率一致，使液体在剪切率一致的条件下做单纯的定向流动；可以定量的了解血液、血浆的流变特性，RBC与WBC的聚集性、变形性、时间相关性等很多流变特性。操作使用较为简单，是目前血液流变学研究和应用较为理想的仪器。但价格较毛细管黏度计要贵一些，操作要求也更精细一些。

29．什么情况下需对黏度计进行技术性能评价？指标有哪些？

答：性能评价在仪器安装、维修及使用一定时间后，至少每半年，应对仪器准确度、分辨率、重复性、灵敏度与量程进行1次检验。

30．简述锥板式激光衍射法红细胞变形测定仪的工作原理与基本结构。

答：工作原理：根据红细胞被激光照射时发生衍射，产生反映细胞几何状态的衍射图像，当有剪切应力作用于红细胞时，红细胞发生形变，衍射图也随之变化，测定该作用力前后红细胞形变率的大小来反映其变形性。

基本结构：主要由能提供可变剪切场的透明锥板结构、光路系统、摄像系统、控温装置、光电转换器、处理器及显示打印装置组成。

第四篇：急诊医学考试重点

⒈简述心搏停止的诊断要点 ①主要依据：突然意识丧失；心音或大动脉（颈动脉，股动脉）搏动消失；心电图可以有3种表现-------心室颤动，室性自主心律即心肌电-机械分离，心室停搏（心搏停止）②次要依据：双侧瞳孔散大，固定，对光反射消失；自主呼吸完全消失，或先呈叹息或点头状呼吸，随后自主呼吸消失；口唇，甲床等末梢部位出现紫绀

⒋一般监测内容包括哪几项？重症监护的适应症

1意识状态2体温3心律与心率脉搏4呼吸频率与节律5无创血压 ①心搏，呼吸骤停需CPR或者复苏后生命体征不稳定，或者出现严重并发症②休克③急性呼吸衰竭需机械通气治疗④急性心血管事件⑤各种原因引起的大出血

⑥严重水电解质酸碱失衡⑦严重创伤，多发伤⑧MODS ⒌如何诊断ARDS？简述其治疗措施，以及ARDS病因 病因：①休克②严重创伤（大面积烧伤）③严重感染（败血症）④误吸（误吸胃内容物，淹溺）⑤吸收有害气体（氯气，光气）⑥急性中毒（急性药物中毒）⑦代谢紊乱（尿毒症）⑧过量补液（输库存血）⑨其他（妇产科疾病，其他急性疾病）

诊断：①欧美ARDS联席会议：a急性起病b氧合指数（PaO2/FiO2）≤200mmhg（不管PEEP水平为多少）c胸部X线片显示双肺浸润阴影d肺动脉楔压（PCWP）≤18mmhg或者没有左房压升高的临床证据

②中华医学会呼吸分会急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合症：a有发病的高危因素b急性起病，呼吸频数和（或）呼吸窘迫c低氧血症，ALI时氧合指数（PaO2/FiO2）≤300mmhg，ARDS时氧合指数（PaO2/FiO2）≤200mmhg d胸部X线片表现为两肺浸润阴影e毛细血管楔压（PCWP）≤18mmhg或者临床上能除外心源性肺水肿 治疗：原则：改善肺氧合功能，纠正缺氧，生命支持，保护器官功能，防止并发症，积极治疗原发病 ①祛除诱因，积极治疗原发病：及时有效的控制感染，是关键②氧疗：纠正缺氧为抢救患者的关键措施，高浓度给氧3机械通气： PEEP或者 CPAP④维持液体平衡：限制液体摄入

⑤药物治疗：a非皮质类固醇药物b肺表面活性物质cNO d糖皮质激素⑥监测脏器功能，防止MODS⑦加强支持治疗，足够的热卡

⒐简述休克的分类，常见病因及诊断治疗 分类：①失血性休克、失液性休克、创伤性休克②心源性休克、心脏压塞性休克③感染性休克、过敏性休克、神经源性休克、细胞性休克

病因：①低血容量：大出血，严重烧伤，大手术等②心泵功能障碍：急性心肌梗死 大量心包积液等③心血管功能失常：重症肺炎，药物创伤氢化物等 诊断要点：①有诱发休克的诱因②意识障碍③脉搏细速大于100/每分钟或者不能触之④四肢湿冷，胸骨不问皮肤指压征，皮肤花纹，粘膜苍白或者发绀，尿量大于30ml每小时⑤收缩压小于80mmhg⑥脉压差小于20mmhg⑦高血压患者收缩压较基础血压下降30%以上

符合1及234忠的两项，和567中一项 ⒑休克的治疗措施 ⑴病因防治：积极防治原发病，去除休克的原始动因如止血，控制感染，输液镇痛等 ⑵紧急处理：平卧或者头胸与下肢抬高30度，保暖镇静少搬动。吸氧2~4L每分钟或者更高，建立静脉通道，建立必要检测项目⑶，抗休克的措施：①补充血容量②纠正电解质与酸碱平衡失调③应用血管活性药物（拟肾上腺素，肾上腺素能α受体，阻滞剂，硝普钠，氯丙嗪等）④维护脏器功能⑷其他治疗措施 ：①纳洛酮②环氧化酶抑制剂③其他

⒒口服有机磷农药中毒的治疗措施

⑴一般处理 使患者脱离中毒现场，脱去被污染的衣物佩戴物，保持保持呼吸道通畅⑵清除毒物：①彻底清晰污染部位②经口中毒者，催吐，2%碳酸氢钠溶液或者1:5000高锰酸钾溶液洗胃，而后催吐，并反复进行③洗胃后导泻

⑶应用特效解毒药物：①抗胆碱能药物 阿托品②胆碱酯酶复能剂 双复磷

⑷对症治疗，针对呼吸异常、心律失常、肺水肿、休克、脑水肿，抽搐等严重表现，应注意加强呼吸功能的支持措施，吸氧，维持水电解质平衡，必要时适量应用糖皮质激素，及时给予呼吸机治疗

⒓简述有机磷农药中毒的临床表现及“阿托品化”的判断要点

临床表现：①毒蕈碱样表现（最早）： A腺体分泌增加，流泪，流涎，大汗 B平滑肌痉挛，恶心呕吐，腹痛，腹泻 C心脏抑制，心动过缓 D瞳孔括约肌收缩，缩小呈指针样 ②烟碱样表现：肌肉颤动，严重时强直痉挛，抽搐，伴脉动加速，血压升高等

③中枢神经系统表现：头痛头晕，行走不稳，共济失调等，严重者烦躁，抽搐，甚至脑水肿④经皮肤黏膜吸收中毒，过敏性皮炎，水泡与剥落性皮炎，少数迟发性脑病，中间综合症

阿托品化—意识好转，皮肤干燥，颜面潮红，肺部湿罗音小时，瞳孔较前扩大，心律较前增快等 阿托品中毒——瞳孔扩大，烦躁不安，神志不清，抽搐，尿潴留甚至昏迷

⒗中毒的治疗原则 ⑴一般处理：①边实施救治，边采集病史，留取含有毒物或者采血送检查②给患者取恰当的体位，保持呼吸道通畅，及时清除口咽鼻腔内分泌物，给氧③及时向患者家属交待病情及可能发生的病情变化

⑵消除未吸收的毒物：①口服毒物：催吐，洗胃（口服法、胃管法），导泻，灌肠②皮肤黏膜吸收中毒：立即用清水或者能溶解度无的容积彻底洗涤接触毒物部位，持续冲洗至少15分钟以上 ③吸入中毒：立即移离现场，吸氧④注射中毒：止血带护着布条扎紧注射部位上端，注射部位放射状注射1%肾上腺素

⑶排出吸收的毒物：①利尿②吸氧③改变尿液酸碱度④血透，血浆置换等

⑷应用特效解毒剂：a氯磷定、解磷定、双复磷；阿托品—有机磷农药 b氟马西尼—苯二氮卓类 c纳洛酮—阿片类 ⑸腐蚀性毒物的中毒处理：①强酸中毒时服MgO乳剂300ml ②强碱中毒时服橘汁300ml③严禁洗胃、导泻、催吐、灌肠④口服牛奶或豆浆100~200ml，一方面稀释一方面保护胃粘膜

全身炎症反应综合征（SIRS）诊断标准（符合其中二项或二项以上即可诊断）：①T>38℃或T<36℃。②P>90次/min。③R>20次/min或PaCO2<4.0kPa。④WBC>12×109/L或<4×109/L

MODS诊断标准:

1、循环系统收缩压＜90mmHg，持续1h以上，或循环需要药物支持维持稳定

2、呼吸系统急性起病，PaO2/FiO2≤200（已用或未用PEEP），X线胸片见双肺浸润，PCWP≤18mmHg，或无左房压升高的证据

3、肾脏血Cr ＞177μmol/L伴有少尿或多尿，或需要血液透析

4、肝脏血清总胆红素＞34.2μmol/L,血清转氨酶在正常值上限的2倍以上或有肝性脑病

5、胃肠道上消化道出血，24h出血量＞400ml，或不能耐受食物，或消化道坏死或穿孔

6、血液系统血小板计数＜50×109／L或减少25％，或出现DIC7、代谢不能为机体提供所需能量，糖耐量降低，需用胰岛素；或出现骨骼肌萎缩、无力

8、中枢神经系统GSW＜7分

脓毒症诊断标准：

1、一般指征① 发热② 心率＞90次/分③ 呼吸＞30 次/分④ 意识状态改变⑤ 明显水肿⑥ 高糖血症 BS>7.1mmol/L2、炎症反应指标① 白细胞增多②C反应蛋白＞ 正常值2个标准差③ 降钙素原＞正常值2个标准差

3、血流动力学指标① 低血压② 混合静脉血氧饱和度＞70%③ 心排出指数＞3.5L/（min·m2）

4、组织灌注指标① 高乳酸血症（乳酸＞3mmol/L）② 毛细血管再充盈时间延长＞ 2秒或皮肤出现花斑

5、① 低氧血症② 少尿，肌酐增加③ 凝血异常④ 血小板减少⑤ 腹胀⑥ 高胆红素血症⒉简述心肺脑复苏过程的三阶段九步骤 三个时期：基础生命支持，加强生命支持，复苏后生命维护。九步骤：A airway：开放气道B breathing呼吸支持C circulation循环支持D difibrillation+drug除颤+给药E electrocardiograph心电图G gauge监测H human mentation保持和恢复人的智能活动I intensive care强化监护

1急诊：突然发生的急性疾病以及意外伤害。2急诊医学：在急救医学的基础上，危重病医学，复苏医学，灾害学，急性中毒学，创伤学，急诊医学管理学等逐步发展，共同组成了现代急诊医学。

3院前急救：事发现场的第一目击者实行的初步急救，实施急救的地点可以是家庭，公共场所，社区，野外等，施救者可以使院前急救专业人员，院前急救辅助人员，全科医生，公民或者公民本人。4反应时间：接到患者呼救信息至急救力量到达现场所需要的时间，为国际上用以衡量急救系统质量的重要指标，按照国际化惯例，失去的反应时间不超过8分钟，郊区的反应时间不超过15~30分钟。

5急诊医疗服务体系(EMSS)：急诊医学将院前急救，医院急诊室，重症监护病房三部分组成一个完整的体系。

6专科型ICU：专科建设的衍生和发展，是英语专科建设医院或者专业特色十分明显的学科。收治某一专业分为内的危重患者。

综合性ICU:跨学科，面向全院的监护病房，其任务是收治多科为重患者，适应绝大多数医院。

7院内获得性感染：入院前无感染，入院后48~72小时后发生的感染，常见获得性肺炎，血源性感染，泌尿系统感染，外科感染等等。

8心肺脑复苏术：心跳呼吸骤停后，是自主心脏和自主呼吸得以恢复并积极保护脑功能的急救技术。

9生存链：用来描述VF所致SCA患者复苏时间重要性的一个四环接链。包括：早期识别和启动急救医疗系统，或者联系当地急救反应系统，呼叫120。早期由目击者进行CPR，早期进行电击除颤，早期由医务工作者进行复苏后的高级生命支持。

10黄金时间：发生伤病后的前四分钟。

11休克：是集体遭受强烈的致病因素侵袭后，有效循环血量显著下降，不能维持机体脏器与组织的正常灌注，继而发生全身微循环功能障碍的一种危急重症。

12心源性休克：狭义上是指心脏泵血功能衰竭引起的休克综合症，见于大面积急性心肌梗死等，广义上是指各种原因所致的心脏泵功能极度衰减退，心室充盈或者射血障碍，导致心排血量锐减，多重要脏器和周围组织灌注不足而发生的一系列代谢与功能障碍综合症。精神源性休克：即神经原性休克或者中枢循环衰竭，是指由于强烈的神经刺激如创伤，剧烈疼痛等，引起某些血管活性物质如缓激肽，5——羟色胺等释放增加，或者脑损伤缺血，深度麻醉，脊髓高位麻醉或者脊髓损伤交感神经传出通路被阻断，最终导致周围血管扩张，大量血瘀滞于扩张的血管中，有效循环血量突然减少而引起的休克。13 MODS（多器官功能障碍综合征）：是指机体在经受严重损害如严重疾病，外伤，手术，感染等之后，同时或者序贯性发生两个或者以上急性器官功能障碍，甚至功能衰竭的综合征。SIRS（全身性炎性反应综合征）：当机体经受打击后，发生全身性自我破坏性炎性反应过程。15 ARDS（急性呼吸窘迫综合症）：由于肺外或者肺内的严重疾病引起肺毛细血管炎症性损伤，通透性增加，继发以急性高通透性肺水肿和进行性缺氧为临床特征的急性呼吸衰竭，是急性呼吸衰竭常见类型，也是急性肺损伤（ALI）的病情发展结局。PEEP（呼吸末正压通气）：为机械呼吸机在吸气相产生正压气体进入肺部，在呼吸末起到开放时，祈祷压力仍保持高于大气压，以防止肺泡萎缩塌陷。

17急性心力衰竭：是指由于急性心脏病变引起心排血量急骤降低，导致组织器官灌注不足和急性淤血的临床综合症，为常见循环系统急症。

18高血压急症：是指原发性或者继发性高血压在其病变过程中，由于某些诱导因素导致血压突然或者短时间内升高，造成的心脑肾眼底等主要靶器官功能严重障碍的临床急症。19高血压脑病：急进行或者严重的缓进行高血压病患者，尤其是伴有明显脑动脉硬化者，在其病程过程中因各种诱因导致的血压突然或者短时间内明显升高，突破脑血管自身调节机制，脑部小动脉发生持久的痉挛，继之扩张，导致急性脑循环障碍，脑水肿和颅内压增高，从而出现一系列临床表现。

20恶性高血压：为高血压并的严重临床类型，月1%~5%的中重度高血压患者可发展为恶性高血压，发病机制尚不清楚，可能与不及时治疗或者治疗不当有关，常伴有心脑肾等靶器官损害，而以肾脏损害更加突出，病情进行性加重，故又称为急进型高血压病。

21高血压危象：高血压病程中，由于各种诱因导致循环血液中儿茶酚胺水平升高，交感神经兴奋性增加，外周血管阻力突然增加，血压迅速升高，出现神经精神症状，靶器官功能障碍及交感神经兴奋性增加表现。22 ACS（急性冠状动脉综合症）：是指由于冠状动脉内粥样硬化斑块不稳定导致冠脉血流量急剧减少而形成的临床急性综合症。

23慢快综合征：（心动过缓——过速综合症）：多出现于疾病晚期，在原有窦性心动过缓的基础上，发作快速性心律失常，如阵发性室上性心动过速，心烦颤动等等。出现突发心悸，气急，头晕，晕厥等临床表现，严重时导致猝死。24上消化道大出血：是指在数小时内失血量超出10000ml或者循环血容量的20%，临床主要变现为呕血，和（或）黑粪，往往伴有血容量减少引起的急性周围性循环衰竭。低血糖症：是指多种病因引起血葡萄糖下降至正常值以下，引起交感神经兴奋和中枢神经系统功能障碍为突出表现的临床综合症。

25糖尿病危象：指糖尿病控制不佳，在应激情况下诱发的酮症酸中毒，高渗性非酮症性昏迷，乳酸性酸中毒等急性并发症，糖尿病治疗不当或者胰岛素分泌异常而引起的低血糖也属于此类。

26甲状腺功能亢进症危象：是指甲状腺功能亢进症的一种严重表现，不常见，但是病情严重，死亡率高。

27肾上腺危象：凡有原发性和继发性，急性或者慢性的肾上腺皮质功能不全时，在应激状态下不能相应的增加皮质醇的分泌引发的危急症。主要表现为高热，胃肠紊乱，休克和脑功能障碍。

28癫痫持续状态（癫痫状态）：是指一次癫痫发作持续30分钟以上，或者多次发作，发作间期意识或者神经功能未恢复至正常水平。29氧合指数：即PaO2/FiO2，动脉血氧分压与吸入氧浓度之比，正常值为400~500mmHg.30急性中毒：一定量的毒物短时间内进入机体，产生相应的毒性损害，起病急病情重，甚至危及生命。

31慢性中毒：长时间反复接触小剂量毒物而引起的中毒，起病隐匿病程长，已漏诊与误诊。

32阿托品化：即应用阿托品后患者出现意识好转，皮肤干燥，颜面潮红，肺部湿罗音消失，瞳孔较前扩大，心率较前增快等表现。

33湿性淹溺：喉部肌肉松弛，吸入大量水分重赛呼吸道和肺泡发生窒息。

34干性淹溺：呼吸道和肺泡很少或者无水吸入，喉痉挛导致窒息。

35中暑：人体长时间暴露在高温或者强烈辐射环境中，引起以机体温度调节中暑功能障碍，汗腺功能衰竭及水电解质紊乱等对高温环境适应不全的表现为特点的一组疾病。36糖尿病酮症酸中毒（DKA）：是糖尿病的常见急性并发症，也是内科急诊之一，是以高血糖高酮血症，代谢性酸中毒为主要特点的临床综合症。由胰岛素绝对和相对不足及胰岛素拮抗激素增多，引起组织细胞利用葡萄糖障碍，导致代谢紊乱，脂肪分解加重，血清酮体积聚。

第五篇：临床医学检验考试辅导医学检验

第九章　酶免疫技术

第一节　酶免疫技术的特点

它是将酶与抗体或抗原结合成酶标记抗体或抗原，在酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应完成后，加入酶的相应底物，通过酶对底物的显色反应，对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析。

一、酶和酶作用底物

（一）酶的要求：一个酶蛋白分子每分钟可催化103～104个底物分子转变成有色产物。

1.酶的活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。

2.易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定，且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。

3.作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源性酶或抑制物。用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。

4.酶催化底物后产生的产物易于判断或测量，方法简单易行、敏感和重复性好。

5.酶、辅助因子及其底物对人体无害，酶的底物易于配制、保存，酶及其底物应价廉易得。

（二）常用的酶

1.辣根过氧化物酶（HRP）：目前酶联免疫吸附试验中应用最广泛的标记用酶。由无色的糖蛋白（主酶）和亚铁血红蛋白（辅基）结合而成的复合物。辅基是酶活性基团，而主酶则与酶活性无关，HRP的纯度用RZ（HRP分别在403nm和275nm处的吸光度比值）表示，RZ值应大于3.0。

RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量，并非表示HRP制剂的真正纯度，而且RZ值高的HRP并不意味着酶活性也高，RZ值与酶活性无关。

酶活性以单位U表示：即1分钟将1μmol底物转化为产物所需的酶量。酶变性后，RZ值不变但活性降低，因此使用酶制剂时，酶活性单位比RZ值更为重要。

2.碱性磷酸酶（AP）：大肠杆菌来源的AP分子量80kD，酶作用最适pH为8.0；小牛肠黏膜AP分子量为100kD，最适pH为9.6；后一种AP的活性高于前者。

3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）：β-Gal来源于大肠杆菌。因人血中缺乏此酶，以其制备的酶标志物在测定时不易受到内源性酶的干扰，从而提高特异性，被用于均相酶免疫测定。

（三）常用的底物

1.HRP的底物

（1）邻苯二胺（OPD）：是HRP最为敏感的色原底物之一。OPD在HRP的作用下显橙黄色，加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。OPD应用液稳定性差，易变色，需新配制后在1小时内使用，显色反应过程需避光，而且具有致癌性。

（2）四甲基联苯胺（TMB）：TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长450nm。TMB稳定性好，成色无需避光，无致突变作用，是目前ELISA中应用最广泛的底物。缺点是水溶性差。

（3）其他：5-氨基水杨酸（5-ASA）和2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）。

2.AP的底物

常用对-硝基苯磷酸酯（p-NPP），p-NPP经AP作用后的产物为黄色对硝基酚，最大吸收峰波长为405nm。

3.β-半乳糖苷酶（β-Gal）的底物

常用4-甲基伞酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU），酶作用后，生成高强度荧光物4-甲基伞形酮（4-MU），其敏度性较HRP高30～50倍，但测量时需用荧光计。

二、酶标记抗体或抗原

（一）酶标记抗体或抗原的制备

标记方法应符合：技术方法简单、产率高，且重复性好；标记反应不影响酶和抗原或抗体的活性；酶标志物稳定，应避免酶、抗体（抗原）以及酶标志物各自形成聚合物等。

1.戊二醛交联法：同源双功能交联剂。

（1）一步法：连接AP。

①优点：操作简便、有效，重复性好。

②缺点：交联时分子间比例不严格，大小不一，影响效果。

（2）二步法：连接HRP。

先将HRP与戊二醛作用，透析除去戊二醛，在pH9.5缓冲液中再与抗体作用而形成酶标抗体。

优点：酶标志物质量较均一，标记效率也较一步法高。

2.改良过碘酸钠法

HRP标记抗体或抗原的最常用方法。

（二）酶标记物的纯化及鉴定

常用的纯化方法有葡聚糖凝胶G-200/G-150过柱层析纯化和50%饱和硫酸铵沉淀提纯等。

常用免疫电泳或双相扩散法进行鉴定。

1.出现沉淀线表示酶标记物中的抗体（抗原）具有免疫活性。

2.沉淀线经生理盐水漂洗后，滴加酶的底物溶液，若沉淀线上显色，则酶标记物中的酶活性仍保留。

三、固相载体

除均相酶免疫测定外，各种非均相酶免疫测定反应最后都需要分离游离和结合的酶标记物。

固相抗体或抗原就是把抗体或抗原结合到固相载体的表面上，是酶免疫技术中将游离和结合的酶标志物迅速分离的最常用方法。

（一）固相载体的要求　结合抗体或抗原的容量大；可将抗体或抗原牢固地固定在其表面，经长期保存和多次洗涤也不易脱落；不影响所固定的抗体或抗原的免疫反应性，而且为使反应充分进行，最好其活性基团朝向反应溶液，固相方法简便易行，快速经济。

（二）固相载体的种类和选择

1.塑料制品：聚苯乙烯塑料最常采用。抗原或抗体以非共价或物理吸附方式结合到此载体上。

主要缺点是抗体（抗原）结合容量不高、固相抗体（抗原）脱吸附率较高且不均一，孔间变异大，重复性差，从而影响测定的灵敏度、精确度及检测范围。

目前采用非共价和化学偶联共价吸附方法进行抗原或抗体的固相化可改善上述缺点

2.微粒：易与抗体（抗原）形成化学偶联，且结合容量大。均匀地分散到整个反应溶液中，因此反应速度快。可制成磁化微颗粒。自动化检测中常用。

3.膜载体：常有硝酸纤维素膜（Nc）、玻璃纤维素膜及尼龙膜等通过非共价键吸附抗体（抗原），广泛用于定性或半定量斑点ELISA的固相载体。

（三）包被与封闭

1.包被：将抗原或抗体结合在固相载体上的过程。普遍使用的聚苯乙烯载体，将抗原或抗体溶于缓冲液（常用为pH9.6的碳酸盐缓冲液）中，加于ELISA板孔中4℃过夜。包被好的固相载体在低温可放置一段时间而不失去免疫活性。

2.封闭：包被的蛋白质浓度过低，固相载体表面不能被此蛋白质完全覆盖，其后加入的血清标本和酶结合物中的蛋白质也会部分地吸附于固相载体表面，最后产生非特异性显色致本底偏高，在这种情况下，需用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清再包被一次，消除此干扰，此过程称为封闭。

第二节　酶免疫技术的分类

包括两种：

酶免疫组织化学技术：用于组织切片或其他标本中抗原的定位。

酶免疫测定技术（EIA）：用于液体标本中抗原或抗体的定性和定量。根据抗原抗体反应后是否需将结合和游离的酶标志物分离，EIA一般可分为均相和异相两种类型。

一、均相酶免疫测定

利用酶标志物与相应的抗原或抗体结合后，标记酶的活性会发生改变的原理，可以在不将结合和游离酶标志物分离的情况下，通过测定标记酶的活性的改变，而确定抗原或抗体的含量。该法主要用于小分子激素和半抗原（如药物）的测定，均相法的优点是适合于自动化测定，但反应中被抑制的酶活力较小，需用灵敏的光度计测定，反应的温度也需严格控制。

（一）酶放大免疫测定技术（EMIT）EMIT的基本原理是半抗原与酶结合成酶标半抗原。当与抗体结合后，所标的酶与抗体密切接触，使酶的活性中心受到影响而活性被抑制。反应后酶活力大小与标本中的半抗原量呈一定的比例，从酶活力的测定结果就可推算出标本中半抗原的量。

（二）克隆酶供体免疫分析（CDEIA）DNA重组技术可分别合成某种功能酶（如β-D半乳糖苷酶）分子的两个片段，大片段称为酶受体（EA），小分子称作酶供体（ED），两者单独均无酶活性，一定条件下结合形成四聚体方具酶活性。克隆酶供体免疫测定（CDEIA）的反应模式为竞争法。

标本中的抗原和酶供体（ED）标记的抗原与特异性抗体竞争结合，形成两种抗原抗体复合物。ED标记的抗原与抗体结合后由于空间位阻，不再能与酶受体（EA）结合，而游离的ED标记的抗原上的ED可和EA结合，形成具有活性的酶，加入底物测定酶活性，酶活力的大小与标本中抗原含量成正比。

二、异相酶免疫测定

是目前应用最广泛的一类标记免疫测定技术。

（一）异相液相酶免疫测定　主要用于检测样品中极微量的短肽激素和某些药物等小分子半抗原。酶标志物具有更好的稳定性，且无放射性污染。

1.平衡法：将待测样品抗原、酶标抗原及特异性抗体进行一次性温育，待反应达平衡后，测定离心沉淀物（酶标抗原抗体复合物）中加入酶底物液后的呈色吸光度值。

2.非平衡法：先将样品（或标准品）与抗体混合反应达平衡，然后加入酶标记抗原继续温育一段时间，测定离心沉淀物（酶标抗原抗体复合物）中加入酶底物液后的呈色吸光度值。

（二）固相酶免疫测定　酶联免疫吸附试验（ELISA）。

第三节　酶联免疫吸附试验

一、基本原理

把抗原或抗体结合到固相载体表面，测定时将受检样品和酶标记抗原或抗体与结合在固相载体上的抗原或抗体反应形成抗原抗体复合物；洗去未结合成分；加入底物后，底物被固相载体上的酶催化变成有色产物。故：

①固相的抗原或抗体；

②酶标记的抗原或抗体；

③酶反应的底物三种试剂为反应必备。

二、方法类型及反应原理

（一）检测抗原的方法

1.双抗体夹心法：属于非竞争结合，检测抗原最常用的方法，检测含有至少两个抗原决定簇的多价抗原。原理是先将特异性抗体与固相载体连接；加入待测标本，形成固相抗原抗体复合物；再加入酶标抗体形成双抗体夹心，洗涤；加底物显色，根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量检测。

如血清标本中有类风湿因子（RF）存在，则可出现假阳性反应，因为RF是一种抗变性IgG的自身抗体，它能与多种动物的变性IgG的Fc部分结合，因此RF就可作为固相抗体和酶标抗体之间的桥接抗原。

双抗体夹心法只适用于二价或以上的较大分子抗原的测定，不能用于小分子半抗原的检测。

2.双位点一步法：针对抗原分子上两个不同且空间距离较远的决定簇，包被使用一种单抗，酶标记使用另一种单抗。测定时将待测抗原和酶标抗体同时加入，温育、洗涤，加入底物显色。若待测抗原浓度过高时，过量的抗原可分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物的形成，出现钩状效应，显色降低，甚至假阴性。必要时可将标本经过适当稀释后重复测定。

3.竞争法

用于测定小分子抗原，如药物、激素等。原理为先用抗小分子的特异性抗体包被固相，然后同时加入待测样本和酶标记的小分子，两种小分子竞争与固相上的抗小分子的特异性抗体结合，温育一定时间后洗涤，加入酶底物显色。

特点是：

①酶标记抗原与样品或标准品中的非标记抗原具有相同的与固相抗体结合的能力；

②反应体系中，固相抗体和酶标抗原是固定限量，且前者的结合位点少于酶标记和非标记抗原的分子数量和；

③免疫反应后，结合于固相载体上复合物中被测定的酶标抗原的量（酶活性）与样品或标准品中非标记抗原的浓度成反比。

（二）检测抗体的方法

1.间接法：最常用的方法，属非竞争性结合试验。原理：将抗原包被在固相载体上，加入待测样本形成固相抗原-受检抗体复合物；经温育洗涤后，加入酶标二抗，常用羊抗人IgG，在固相上即形成固相抗原-待测抗体-酶标抗抗体复合物，加入底物后根据显色的深浅确定待测抗体含量。多用于检测IgG类型抗体。

2.双抗原夹心法

此法可检测各类抗体，因此双抗原夹心法的灵敏度和特异性要高于间接法。其原理及操作步骤类似双抗体夹心法，也可采用一步法。由于机体产生抗体IgG的效价有限，一般不会出现钩状效应。

临床上乙型肝炎表面抗体的测定常用此法。

3.竞争法

一般抗体检测是较少采用，当相应抗原材料中含有与抗人IgG反应的物质，而且不易得到足够的纯化抗原或抗原的结合特异性不稳定时，可采用这种方法测定抗体，目前临床运用较多的是乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）和乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）的检测。

竞争抗体与待测抗体的特异性及亲和力越接近，则测定的可靠性越强。

4.捕获法又称反向间接法

主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定，最常用的是病原体急性感染诊断中的IgM型抗体。原理：先将针对IgM的二抗包被于固相载体，加入待测标本，其中IgM类抗体可被固相抗体捕获，再加入特异性抗原，其与固相上捕获的IgM抗体结合后，加入酶标记特异性抗原的抗体，形成固相二抗-IgM-抗原-酶标记抗体复合物，加底物显色后，即可对待测标本中IgM是否存在及含量进行测定。

第四节　酶免疫测定的应用

几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用酶免疫测定检测。

均相酶免疫测定主要用于药物和小分子物质的检测。

非均相免疫测定中的ELISA在多种物质的检测中被广泛的使用。

实战演练

目前酶免疫技术中应用较广、提纯较简便的酶是

A.脲酶

B.碱性磷酸酶

C.葡萄糖氧化酶

D.辣根过氧化物酶

E.半乳糖苷酶

『正确答案』D

『答案解析』HRP是目前在酶联免疫吸附试验中应用最为广泛的标记用酶。

酶放大免疫测定技术（EMIT）主要用来检测

A.抗原

B.抗体

C.半抗原

D.不完全抗体

E.抗原抗体复合物

『正确答案』C

『答案解析』酶放大免疫测定技术（EMIT）主要用来检测半抗原。

以下关于酶标记抗体或抗原不正确的是

A.过碘酸盐氧化法只用于HRP的标记

B.未标记上的游离的抗体与酶标记抗体竞争固相上的抗原

C.制备的标记物无须纯化，因为游离的酶或未标记上的抗原或抗体成分在测定过程中被洗掉

D.制备的结合物需要纯化

E.标价物需要鉴定

『正确答案』C

『答案解析』每批制备的酶标志物都要进行质量和标记率的鉴定，质量鉴定包括酶活性和抗体（抗原）的免疫活性鉴定。常用免疫电泳或双相扩散法，出现沉淀线表示酶标记物中的抗体（抗原）具有免疫活性。沉淀线经生理盐水反复漂洗后，滴加酶的底物溶液，若在沉淀线上能显色，则表示酶标记物中的酶活性仍保留。也可直接用ELISA方法测定。

关于酶联免疫吸附试验（ELISA）错误的是

A.属于液相和固相酶免疫测定

B.固相常用聚苯乙烯反应板

C.通过洗涤除去未结合成分

D.底物显色

E.既能定性又能定量分析

『正确答案』A

『答案解析』酶联免疫吸附试验（ELISA）属于固相酶免疫测定。

酶免疫技术中最常用的固相载体是

A.聚氯乙烯

B.聚苯乙烯

C.硝酸纤维素膜

D.琼脂糖

E.尼龙膜

『正确答案』B

『答案解析』酶免疫技术中最常用的固相载体是聚苯乙烯。

酶免疫技术中悬浮在溶液中具有液相反应速率的固相载体是

A.聚氯乙烯

B.聚苯乙烯

C.硝酸纤维素膜

D.磁性微粒

E.尼龙膜

『正确答案』D

『答案解析』酶免疫技术中悬浮在溶液中具有液相反应速率的固相载体是磁性微粒。

将抗原或抗体固相化的过程称为

A.吸附

B.包被

C.封闭

D.标记

E.交联

『正确答案』B

『答案解析』将抗原或抗体固相化的过程称为包被。

ELISA技术中，最常用来检测抗体的方法是

A.双抗体夹心法

B.间接法

C.竞争法

D.捕获法

E.应用生物素和亲和素的ELISA

『正确答案』B

『答案解析』ELISA技术中，最常用来检测抗体的方法是间接法。

下列有关双位点一步法ELISA的叙述中，错误的是

A.使用针对同一抗原不同决定簇的两种单克隆抗体作为酶标抗体

B.一种单克隆抗体作为固相抗体，另一种作为酶标抗体

C.采用高亲和力的单克隆抗体将提高测定的敏感性和特异性

D.可使标本和酶标抗体同时加入

E.标本中抗原过高时，会出现钩状效应

『正确答案』A

『答案解析』双位点一步法：在双抗体夹心法基础上，进一步发展了双位点一步法。该法是针对抗原分子上两个不同且空间距离较远的决定簇的两种单克隆抗体，即包被使用一种单抗，酶标记使用另一种单抗。测定时将含待测抗原标本和酶标抗体同时加入进行反应，两种抗体互不干扰，经过一次温育和洗涤后，即可加入底物进行显色测定。但当待测抗原浓度过高时，过量的抗原可分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物的形成，出现钩状效应（hook

effect），显色降低，严重时可出现假阴性结果。必要时可将标本经过适当稀释后重复测定。这是应用此法必须要注意的问题。

ELISA技术中待测孔（管）显色颜色的深浅与待测抗原或抗体呈负相关的是

A.双抗体夹心法

B.双位点一步法

C.间接法测抗体

D.竞争法

E.捕获法

『正确答案』D

『答案解析』ELISA技术中待测孔（管）显色颜色的深浅与待测抗原或抗体呈负相关的是竞争法。

双位点一步法钩状效应产生是因为

A.标本中的抗原不纯

B.洗涤不充分

C.孵育时间过长

D.酶标抗体过量

E.标本中的抗原浓度过高

『正确答案』E

『答案解析』双位点一步法钩状效应产生是因为标本中的抗原浓度过高。

用一种标记物可检测多种与抗原相应的抗体的ELISA方法是

A.双抗体夹心法

B.间接法

C.竞争法

D.双抗原夹心法

E.双位点一步法

『正确答案』B

『答案解析』用一种标记物可检测多种与抗原相应的抗体的ELISA方法是间接法。

关于ELISA竞争法的叙述中，正确的是

A.只用于检测抗原

B.待测成分优先于酶标记物与固相结合C.被测物含量多则标记物被结合的机会少

D.待测管显色颜色越淡表示被测物含量越少

E.只用于检测抗体

『正确答案』C

『答案解析』关于ELISA竞争法的叙述中，正确的是被测物含量多则标记物被结合的机会少。

ELISA间接法中固相上包被的是

A.抗体

B.不完全抗体

C.抗原

D.抗抗体

E.酶标抗体

『正确答案』C

『答案解析』ELISA间接法中固相上包被的是抗原。

临床上检测IgM抗体常用的ELISA方法是

A.双抗体夹心法

B.间接法

C.竞争法

D.双抗原夹心法

E.捕获法

『正确答案』E

『答案解析』捕获法，又称反向间接法。主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定，目前最常用的是病原体急性感染诊断中的IgM型抗体。

酶免疫技术分为两类酶免疫测定，它们是

A.均相和异相

B.固相和液相

C.酶免疫组化和酶免疫测定

D.均相和固相

E.异相和液相

『正确答案』C

『答案解析』酶免疫技术分为两类酶免疫测定，它们是酶免疫组化和酶免疫测定。

ELISA一般不用于检测

A.病原体及其抗体

B.Ig、补体、肿瘤标志物等蛋白质

C.非肽类激素

D.药物

E.半抗原

『正确答案』E

『答案解析』ELISA一般不用于检测半抗原。半抗原一般用均相酶免疫测定法。