肿瘤标志物检测的质量保证

第一篇：肿瘤标志物检测的质量保证

肿瘤标志物检测的质量保证

一、肿瘤标志物的定义

肿瘤标志物（tumor marker，TM）是指在肿瘤的发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身所产生的或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的，反映肿瘤存在和生长的一类物质，包括蛋白质、激素、酶（同工酶）、多胺及癌基因产物等。肿瘤患者血液或体液中肿瘤标志物的检测，对肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断、疗效观察、病情监测以及预后的评价具有一定的价值。

肿瘤标志物存在于细胞浆和细胞核中，与细胞表面膜相连，在血液中进行循环。肿瘤标志物可以在血清、血浆、其他体液、组织提取物或石蜡固定的组织中检测到。大多数肿瘤标志物可以用免疫学的技术进行检测。

二、影响肿瘤标志物检测的因素 1.样本采集对检测的影响

如前列腺按摩、前列腺穿刺、射精、导尿和直肠镜检查后，血液PSA和PAP值可升高；肝、肾功能异常和胆道排泄不畅、胆汁淤滞等均可造成肿瘤标志物如 CEA、ALP、GGT、细胞因子等浓度增高；某些药物影响肿瘤标志物的浓度，如抗雄激素治疗前列腺癌时可抑制PSA产生，导致 PSA 假阴性结果；唾液和汗液污染标本可使SCC升高。由于红细胞和血小板中也存在神经元特异性烯醇化酶（NSE），因此，样本溶血或放置时间过长（且未分离血清保存）可使血液中NSE浓度增高。采血管内的促凝剂或抗凝剂，对某些项目的测定有干扰。2.样本保存对检测的影响

血液标本采集后应及时离心,分离血清或血浆尽快测定,或保存于4℃冰箱中；若在2～3个月内测定,则应低温冰冻保存,防止反复冻融。酶类和激素类TM不稳定,如fPSA和HCG,半寿期短,易降解,应及时测定。3.肿瘤病人自身状况的影响

肿瘤患者自身的状况影响肿瘤标志物的检出及血液中肿瘤标志物的浓度，包括：①肿瘤的大小和肿瘤细胞的数目：肿瘤越大、肿瘤细胞的数目越多，血液中TM越高。②肿瘤细胞自身的分化程度：肿瘤细胞的分化程度越差，恶性程度越高，血液中TM越高。③肿瘤的分期不同：肿瘤越晚期，血液中TM越高。④肿瘤细胞表达和合成肿瘤标志物的程度：肿瘤细胞表达和合成的TM程度越高，血液中TM越高，反之，血液中TM较低。⑤肿瘤细胞的坏死和坏死程度：肿瘤细胞坏死后，释放出TM，使血液中TM升高，坏死程度越大，血液中TM升高越明显。⑥TM在体内的降解和排泄：若肝脏、肾脏功能差，排泄速度慢，则TM在体内明显升高。⑦假阳性和假阴性；有些疾病如炎性疾病，结缔组织病和生理变化如妊娠时，有些标志物的表达也升高，可导致假阳性；而有些肿瘤标志物较少或肿瘤细胞被封闭，抗原抗体形成免疫复合物，血循环差等都可导致肿瘤标志物不能被检出，导致假阴性。⑧生物学因素的影响: 随年龄的增长PSA升高;老年人CA199、CA153、CEA等可升高。部分妇女在月经期CA125和CA199可增高，妊娠期血液中AFP和CA125含量明显升高；长期吸烟会使血液中CEA含量偏高。⑨非法表达与假基因转录：非法表达指有些基因在肿瘤组织中表达，在正常组织中不应该表达而有少量表达；假基因转录，指假基因转录为mRNA，一般情况下不翻译为蛋白质。在定性的检测mRNA和蛋白质时，这两种情况都可以影响检测的准确性和特异性，导致假阳性。⑩患者血液中有噬异性抗体存在，可导致TM假阳性结果，要将此抗体消除后再检测。

因此，肿瘤患者的肿瘤标志物基础测定值对于观察疗效、预测复发有非常重要价值。对肿瘤标志物检测正常的肿瘤患者，还可以做如下解释：疗效显著、未复发未转移；未选择到恰当的肿瘤标志物，提供错误信息；是一种目前还未发现的肿瘤细胞亚型。

三、肿瘤标志物检测的质量保证

（一）肿瘤标志物检测前的要求

对病人的信息进行充分了解，确保实验结果的准确性。

检测前样本的保存：血液标本采集后应及时离心，保存于4℃冰箱中，24小时内测定；如在短期内测定，则应-20℃保存，长期保存应置于-70℃ 冰箱, 标本应防止反复冻融。酶类和激素类肿瘤标志物不稳定，易降解，应及时测定或低温保存。

（二）肿瘤标志物分析检测的要求 满意的测试结果来自于符合要求的标本以及经过室内质控（IQC）和实验室间质量评价（EQA）监测评价的有效的实验方法。室内质控和室间质评的监测评价包括实验的重复性、采用的标准、所用基质的影响、动力学范围、参考品、稳定性、分析结果的理论数据、实验方法。

肿瘤标志物测定方法很多，有放射免疫测定法，酶联免疫测定法，化学发光免疫测定法等，每种测定方法有自己的精密度和重复性，但手工操作的方法重复性较差，误差比较大，操作时要特别认真；用自动化仪器进行测定，重复性好，误差小，实验结果的分析内和分析间变异系数可以达到<5%和<10%，具有手工分析难以比拟的优势。各实验室还应注意影响实验特异性的因素。

不同的试剂盒测定也有差异,其原因是由于使用的单克隆抗体针对抗原的位点不同所致。有时即使使用同一抗体，也可能因抗原异质性（如原发肿瘤转移后，失去了原有的抗原性而停止分泌原有的肿瘤抗原）或基质的影响而得到不同的结果。有研究报道，使用12种不同的CEA试剂盒检测某一混合血清中CEA的浓度，结果其差异超过100%。导致分析间误差的主要原因是没有测定的标准化，包括缺乏统一的抗原、抗原成分、校正品和参考方法等。因此，在工作中要尽量使用同一种方法，同一种仪器和同一厂家的试剂盒进行测定。1.室内质量控制（IQC）的要求

肿瘤标志物很少有参考方法，要坚持作室内质控图，以均值为靶值，来判断试验的稳定性和重复性。

①重复性：理想的分析批内误差应<5%；批间误差<10%。②建立测定认可的标准：选择合适的IQC标准。

③样品与病人血清尽可能相似：仅仅采用试剂盒所附的质控品是不够的，还应包括独立来源的可靠的血清基质质控品。

④IQC样品的浓度适合临床应用：应包括肿瘤标志物的阴性和低值阳性质控品，需要较宽的浓度范围；评价高浓度样本稀释后的测定准确度。

⑤评价实验的干扰因素：要求对实验的干扰因素（嗜异性和其他抗体、血凝试管中的凝血试剂等）进行检查。2.实验室间质量评价（EQA）的要求 ①适宜浓度的EQA样本：EQA样本应具有适宜的工作浓度范围，但有时会需要较高浓度的EQA样本来评价实验的稀释步骤。对于某些分析（如：AFP、hCG）用无分析物血清检查基线的可靠性是很重要的。

②实验“稳定性”的评价：在一定时间内（6-12个月）重复进行相同样本的测试，对实验室内实验结果的重复性进行评价。

③验证靶值的精确度和稳定性：指无现成参考方法时，需要对所使用的方法进行以下验证：稳定性：对同一样本进行重复测定；用已知浓度的相关国际标准品进行回收率实验；对不同实验室间的检测结果（参考值范围、结果累计报告等）进行比较。

3.肿瘤标志物测定的标准化问题

要保证TM检测结果的准确性和各实验室之间的可比性,首先诊断产品要达到国际标准(IS),有统一的参考方法和国际参考品(IRR)。但目前尚无公认的参考方法,能得到的国际标准品仅有AFP、CEA、HCG和PSA四种,而CA系列的TM至今还没有国际标准,这为TM测定的准确性和质量控制带来了困难。

涉及到免疫测定标准化的组织有世界卫生组织（WHO）生物学标准化专家委员会（The Expert Committee on Biological Standardization，ECBS），负责建立生物物质的国际标准及参比材料。WHO通过国家生物学标准和质控物研究所（National Institute for Biological Standards and Control，NIBSCC）提供大多数多肽激素和一些肿瘤标志物的国际标准品。一些地区性组织也制备标准品，如美国的疾病控制中心（Centers of Disease Control，CDC）、美国病理学家协会的国家委员会（National Committee of the College of American Pathologists）、国家卫生研究所（National Institute of Health，NIH）等提供用于研究目的的多肽激素标准品。国际癌症生物学和医学学会（International Society of Onco-developmental Biology and Medicine）已启动一个肿瘤标志物抗原决定簇绘图计划。

4.抗原、抗体和基质效应对肿瘤标志物测定的影响

抗原抗体反应是指抗原与相应抗体间所发生的特异性结合反应,受抗原抗体的性质、活性、效价、反应比例及环境(如电解质,pH 值,温度)等因素影响。在TM测定中应注意:①确认样品中被检抗原和校准品中抗原的一致性。②制备抗体时使用的抗原和样品中抗原的一致性。③抗原过剩的识别。④试剂使用的是多克隆抗体，则抗体的纯度很重要；试剂使用的是混合单克隆抗体则每批抗血清内各单克隆抗体的组成及相对比例很重要，并要保持恒定。另外，很多肿瘤标志物是糖蛋白或粘蛋白，糖基化的不均一性可能导致其免疫反应性某些变化，从而引起测定结果的差异。⑤校准品稳定、无混浊。⑥抗原抗体反应时所处的基体（基质）状况应保持恒定和一致。

免疫反应的基质效应是指干扰抗原、抗体反应而与分析物本身无关的所有非特异性因素(即基质)对分析物反应的影响。基质效应通常由蛋白质、电解质、补体、类风湿因子、抗人球蛋白抗体、药物、添加剂和各种污染物引起。标准品和质控品的基质与待测血清标本不一样,标准品的基质通常是含蛋白的缓冲溶液；标准品和质控品都是经过加工处理的,如冰冻、冷冻干燥、加稳定剂或添加某些分析物等,而临检所用的测定方法、仪器、试剂等都是以人新鲜血清标本为模板的,对血清标本测定有可靠性,而对加工处理过的物质不一定可靠。对于基质效应，需要注意以下几点：①同一基质状态的基质效应随方法及检测条件而异。②基质效应是绝对的，只要处理过的样品和测定样品的基质状态不一，一定有基质效应；基质效应又是相对的，只要认可某一方法的基质效应可忽略不计，或者由基质效应对某方法引入的误差在可接受水平，那么衡量另一方法是否具有基质效应时，应作方法学比较。若处理过的样品和测定样品的结果分布不同，说明基质效应明显。反之属可接受。也即认为“无” 基质效应。③严格讲，不同批号试剂，它们产生的基质效应也不一致。度量有无基质效应，或者了解不同方法间的可比性，最佳样品是人新鲜样本。④一定要懂得单一标准液，校准品，质控品和新鲜样品间的区别，并正确使用。不应用质控品作为校准品去校准仪器，不仅是基质差异，而且是校准品和质控品定值的水平不一。室内质控用的质控品仅用于各检验科日常工作中重复性和精密度的控制。由于各检验科的检验方法和厂商定值的方法不一致，不可将定值血清的靶值来定值。⑤衡量某一方法或试剂是否准确可靠，唯一可信的方法是使用人新鲜样本进行比较，仅以控制品测定值相似或等于定值，不足以说明方法的准确度。⑥校准品是公司指定用来校准某测定系统（仪器＋试剂＋方法程序）的，是考虑到它具有基质效应的情况下，人为赋予校准品的校准值。因此校准品必须专用于某一测定系统。应鼓励检验科使用仪器厂商指定的试剂和校准品。⑦同一个校准品用于不同仪器时，应该有不同的校准值。不轻易使用某一校准品的校准值对于各种仪器作校准。5.引起肿瘤标志检测错误结果的潜在因素

①高浓度hook效应：通常情况下，肿瘤标志物的浓度范围会有好几个数量级的差别，因此有可能需要确认高浓度的样本产生的hook效应，以避免低值结果的错误报告。这对于首次进行肿瘤标志物检测的病人犹为重要。（可以通过使用高结合力的固相抗体、分析两个稀释度的样本、或通过后续的分析步骤包括清洗步骤来减少hook效应。）

②样本间的携带：检测高浓度的样本会产生样本间携带的潜在问题，因此有必要对此进行随时检查。

③嗜异性或人抗鼠抗体（HAMA）的干扰：IgG抗体可以和测定中使用的抗体进行反应。通常情况下，由于进行影像检查和治疗而使病人接触鼠单克隆抗体，由此而产生的人抗鼠抗体会使肿瘤标志物的检测出现错误结果。（可以通过使用阻断剂对样本进行前处理、在反应基质中加入非免疫的鼠血清或对样本进行稀释后再进行分析的方法来减少HAMA的干扰。）

（三）肿瘤标志物分析检测后的要求

①通过询问医生获取病人的临床信息：有必要鼓励临床医生提供带有说明的简短的临床信息（如手术后、化疗后等），这有助于确认偶然误差（如可能出现的仪器上加错标本等）。另外，当改变TM 检测方法和试剂时,必须通知临床,避免对结果的误判。实验室还应印发宣传资料介绍TM标本采集的注意事项,并提出TM 检测的合适频率供临床参考。这些措施对提高检测质量,用好TM非常有用。②参考值范围的有效性：通常来自相应的健康人群的参考值范围与初始治疗前的肿瘤病人有很好的相关性。因此，病人自己的“基线”值对于肿瘤标志物的测定结果具有非常重要的参考意义。只有基于有效的参考范围，增高甚至在参考范围增高才有临床显著床意义，但须进行进一步的工作。

③了解显著变化或临床相关变化的组成因素：应包括生物学变异和分析数据的变异。一般病人的结果在排除检测方法引起的误差后，上升或下降25％都有临床价值。对于测定结果升高的标本必须复查，以防测定误差。

④改变方法时应进行方案确认：有助于确认由于改变方法而引起的肿瘤标志物检测结果的差异。（可能需要对以前检测过的样本再用新的方法进行检测来确认结果的差异。）

⑤必须知道肿瘤标志物的半寿期：TM的半寿期是指肿瘤组织被完全切除后血液循环中TM浓度下降到50%的时间。这有助于选择TM的监测时间和解释TM浓度变化与临床疗效和肿瘤复发的关系。若复查间隔时间太短,将误认为肿瘤未被完全切除；间隔时间太长,将无法区分是肿瘤复发还是疗效欠佳。一般应在治疗结束后5个半寿期采血为好,这时原有的TM约97%已被清除。主要TM的生物半寿期: CA199为4～8天；CA153为5～7天；CA125为5天；CA724为3～7天；细胞角质蛋白19片段(CYFRA21)为1天；AFP2～8天；CEA2～8天；PSA2～3天；fPSA12～18小时；HCG12～36小时；NSE 1天；SCC1天。

⑥肿瘤标志物临床应用的比较：首先需要得到有关肿瘤标志物临床应用的信息，再由有关的专业组织进行考察比较。

六、常用肿瘤标志物检测中的注意事项

CA15-3

分析测试前准备和样本贮存：进行CA15-3的检测可以采用新鲜分离的血清样本。CA15-3在4℃下可以稳定24小时。建议将血清贮存于-20℃（短期）或-70℃（长期），以备复试时使用。若需长期贮存，则不能使用变性胶（CA15-3在变性胶的存在下表现出明显的不稳定）。

分析中的注意事项：每个实验室都应对CA15-3的分析方法、分析精密度和参考值范围进行验证，以确定临床诊断的界限值。分析后结果报告的注意事项：应进行进一步的研究来确认性别、种族、年龄和绝经情况对正常人和乳腺癌病人CA-153表达的影响，制订出肿瘤标志物的参考值范围。CA125 分析前注意事项：含糖的血清肿瘤标志物一般在常规实验室室温条件下有一定程度的稳定性。然而样本的快速处理对于减少分解是十分必要的。新鲜分离的血清应该立即进行CA125的测定。血清样本应于4℃下存放或冻存于-20℃（短期）或-70℃（长期），以备复试时使用。

分析中的注意事项：NACB认为，CA125的测定结果用于病情监测，CV值应<15%。在此CV值下，95%可信限的范围是21～39U/ml，平均30U/ml。EGTM建议，肿瘤标志物自动化测定的批内变异应<10%，并应考虑生物变异和分析的不精确度。分析后结果报告的注意事项：由于各厂家的检测试剂盒检测结果略有不同，因此应在报告中附加试剂盒标明的正常值范围。SCCA 分析前注意事项：由于唾液、汗液和呼吸分泌物中存在大量SCCA，因此血样应避免暴露于皮肤和唾液。

分析中的注意事项：SCCA测定的平均日间变异为24%，因此在监测疾病复发时，应分别考虑其Cut-off值。

分析后结果报告注意事项：应同时报告试剂盒生产厂家标明的正常值范围。PSA 分析前注意事项：NACB对用于PSA测定的标本的采集和处理作出如下建议：因为有许多因素都会影响PSA的含量，所以应确保在任何有关前列腺的活动之前进行血样的抽取，也就是说，在射精后至少24小时（如果在24小时以内，应注意最后一次射精的时间）、前列腺炎症消退、前列腺活检、经尿道的前列腺切除后数周再进行游离PSA的检测。由静脉抽取的血样应在3小时内离心分离出血清。血清样本在冰箱中可保存24小时以上，但应于24小时内进行测定，否则就应将样本冻存于-20℃以下（最好在-30℃以下避免结晶），长期保存温度应在-70℃以下。考虑到以上对样本的要求在日常工作中可能较难达到，EGTM建议根据采集样本时病人的情况而使用特定的分析参考值。分析和结果报告注意事项：结果报告中应注明，单次PSA的检测结果不能用于前列腺癌的诊断和判定，应该和物理检查结合使用。结果报告中还应分别注明分析实验的灵敏度和正常值参考范围，并说明结果不能用作评判恶性肿瘤是否存在的证据，除非有另外一些检测结果说明一定程度上升高的PSA水平不是由于良性前列腺组织疾病所引起的。报告中还应注明PSA分析（试剂、仪器）的生产商，并声明测定结果不能和用其他方法得到的结果进行互换。对病人的治疗后监测，单次PSA检测结果不能用于前列腺癌复发的诊断。根部前列腺切除手术后，PSA的持续升高（基于多次PSA的检测结果）指示疾病的复发，若用超灵敏度分析进行根部前列腺切除手术后的跟踪随访（超灵敏度分析唯一的临床应用），应对实验的灵敏度进行验证，并将其报告给临床医生，更重要的是要研制出质控品并达到要求的灵敏度。有些较低的检测结果在生物学变异范围内可能会变得很高，因此持续升高的PSA水平应该引起高度重视。EGTM的观点是PSA超灵敏度分析实验的结果不应用于决定临床治疗方案。肺癌标志物

分析测试前的注意事项：用于肺癌肿瘤标志物检测的样本应存放于4℃（短期）和-70℃（长期）。当融化冰冻样本进行细胞角蛋白测定时，应避免样本的剧烈混合，因为剧烈震荡后细胞角蛋白可能会附着在试管壁上。用于NSE检测的样本应在采集的血液凝集后60分钟内进行分离，注意避免存在于红细胞内的NSE漏出。溶血的样本不能进行NSE检测。用于SCCA检测的样本应避免皮肤和唾液的污染，因为这可能导致结果的错误升高。肾功能障碍会显著影响CYFRA21-1和SCCA的检测结果，因此，对高检测结果的病人应观察其身体状况。

第二篇：7项肿瘤标志物检测试剂盒A

7项肿瘤标志物检测试剂盒A 【产品名称】

通用名称：7项肿瘤标志物检测试剂盒（微阵列化学发光免疫分析法）

英文名称： Seven Tumor Markers Test Kit(Microarray Chemiluminescent Immunoassay)【包装规格】

100人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定量检测人血清样本中的糖链抗原19-9（CA19-9）、糖链抗原125（CA125）、糖链抗原724（CA724）、神经元烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）、胃泌素释放肽前体（Pro-GRP）7种肿瘤标志物的浓度。

【检验原理】

本产品由蛋白芯片、酶标二抗反应液、检测液及其他试剂配套组成。应用双抗体夹心法原理定量检测人血清中的7种肿瘤标志物的浓度。

第一步反应：待测血清与芯片反应，芯片表面的7种肿瘤标志物的单克隆抗体与样品中潜在的相应抗原结合，反应结束芯片经洗涤后进行第二步反应。第二步反应：将芯片转入预加了酶标二抗反应液的反应杯中，进一步反应形成抗体-抗原-抗体的双抗夹心结构，反应结束芯片经洗涤后检测反应信号。

信号检测：将芯片转移入预加了发光底物的反应杯中，利用致冷CCD对芯片反应区进行成像，读取点阵灰度值。

报告结果：以不同浓度的校准品作为样本进行检测，作出灰度——浓度定量标准曲线，通过该标准曲线计算血清样本中不同指标的相应浓度，报告检测结果。

【适用仪器】

江苏三联生物工程有限公司全自动生物芯片阅读仪SLXP-001、SLXP-002。

【储存条件及有效期】

2～8 ℃保存，有效期6个月。

【医疗器械注册证编号】

国械注准20153400230

7项肿瘤标志物检测试剂盒B 【产品名称】

通用名称：7项肿瘤标志物检测试剂盒（微阵列化学发光免疫分析法）

英文名称： Seven Tumor Markers Test Kit(Microarray Chemiluminescent Immunoassay)【包装规格】

100人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定量检测人血清中的糖链抗原19-9（CA19-9）、糖链抗原125（CA125）、糖链抗原724（CA724）、癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）、胃蛋白酶原I（PG I）以及胃蛋白酶原II（PG II）7种肿瘤标志物的浓度。

【检验原理】

本产品由蛋白芯片、酶标二抗反应液、检测液及其他试剂配套组成。应用双抗体夹心法原理定量检测人血清中的7种肿瘤标志物的浓度。

第一步反应：待测血清与芯片反应，芯片表面的7种肿瘤标志物的单克隆抗体与样品中潜在的相应抗原结合，反应结束芯片经洗涤后进行第二步反应。

第二步反应：将芯片转入预加了酶标二抗反应液的反应杯中，进一步反应形成抗体-抗原-抗体的双抗夹心结构，反应结束芯片经洗涤后检测反应信号。

信号检测：将芯片转移入预加了发光底物的反应杯中，利用致冷CCD对芯片反应区进行成像，读取点阵灰度值。

报告结果：以不同浓度的校准品作为样本进行检测，作出灰度——浓度定量标准曲线，通过该标准曲线计算血清样本中不同指标的相应浓度，报告检测结果。【适用仪器】

江苏三联生物工程有限公司全自动生物芯片阅读仪SLXP-001、SLXP-002。

【储存条件及有效期】

2～8 ℃保存，有效期6个月。

【医疗器械注册证编号】

国械注准20153400234 6项肿瘤标志物检测试剂盒

【产品名称】

通用名称：6项肿瘤标志物检测试剂盒（微阵列化学发光免疫分析法）

英文名称：Six Tumor Markers Test Kit(Microarray Chemiluminescent Immunoassay)【包装规格】

100人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定量检测人血清样本中的甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、糖链抗原19-9（CA19-9）、糖链抗原125（CA125）、糖链抗原724（CA724）以及细胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）6种肿瘤标志物浓度。【检验原理】

本产品由蛋白芯片、酶标二抗反应液、检测液及其他试剂配套组成。应用双抗体夹心法原理定量检测人血清中的6种肿瘤标志物的浓度。

第一步反应：待测血清与芯片反应，芯片表面的6种肿瘤标志物的单克隆抗体与样品中潜在的相应抗原结合，反应结束芯片经洗涤后进行第二步反应。

第二步反应：将芯片转入预加了酶标二抗反应液的反应杯中，进一步反应形成抗体-抗原-抗体的双抗夹心结构，反应结束芯片经洗涤后检测反应信号。

信号检测：将芯片转移入预加了发光底物的反应杯中，利用致冷CCD对芯片反应区进行成像，读取点阵灰度值。

报告结果：以不同浓度的校准品作为样本进行检测，作出灰度——浓度定量标准曲线，通过该标准曲线计算血清样本中不同指标的相应浓度，报告检测结果。

【适用仪器】

江苏三联生物工程有限公司全自动生物芯片阅读仪SLXP-001、SLXP-002。

【储存条件及有效期】

2～8 ℃保存，有效期6个月。

【医疗器械注册证编号】

国械注准20153400232 12项肿瘤标志物检测试剂盒（女）

【产品名称】

通用名称：12项肿瘤标志物检测试剂盒（微阵列化学发光免疫分析法）

英文名称： Twelve Tumor Markers Test Kit(Microarray Chemiluminescent Immunoassay)【包装规格】

100人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定量检测女性患者血清样本中的糖链抗原19-9（CA19-9）、糖链抗原125（CA125）、糖链抗原724（CA724）、甲胎蛋白（AFP）、神经元烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）、糖链抗原153（CA15-3）、β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）、胃蛋白酶原（IPGI）、胃蛋白酶原II（PGII）以及胃泌素释放肽前体（Pro-GRP）12种肿瘤标志物的浓度。

【检验原理】

本产品由蛋白芯片、酶标二抗反应液、检测液及其他试剂配套组成。应用双抗体夹心法原理定量检测人血清中的12种肿瘤标志物的浓度。第一步反应：待测血清与芯片反应，芯片表面的12种肿瘤标志物的单克隆抗体与样品中潜在的相应抗原结合，反应结束芯片经洗涤后进行第二步反应。

第二步反应：将芯片转入预加了酶标二抗反应液的反应杯中，进一步反应形成抗体-抗原-抗体的双抗夹心结构，反应结束芯片经洗涤后检测反应信号。

信号检测：将芯片转移入预加了发光底物的反应杯中，利用致冷CCD对芯片反应区进行成像，读取点阵灰度值。

报告结果：以不同浓度的校准品作为样本进行检测，作出灰度——浓度定量标准曲线，通过该标准曲线计算血清样本中不同指标的相应浓度，报告检测结果。

【适用仪器】

江苏三联生物工程有限公司全自动生物芯片阅读仪SLXP-001、SLXP-002。

【储存条件及有效期】

2～8 ℃保存，有效期6个月。

【医疗器械注册证编号】

12项肿瘤标志物检测试剂盒（男）

【产品名称】

通用名称：12项肿瘤标志物检测试剂盒（微阵列化学发光免疫分析法）英文名称： Twelve Tumor Markers Test Kit(Microarray Chemiluminescent Immunoassay)【包装规格】

100人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定量检测男性患者血清样本中的糖链抗原19-9（CA19-9）、糖链抗原125（CA125）、糖链抗原724（CA724）、甲胎蛋白（AFP）、神经元烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）、前列腺特异性抗原（T-PSA）、游离前列腺特异性抗原（F-PSA）、胃蛋白酶原I（PGI）、胃蛋白酶原II（PGII）以及胃泌素释放肽前体（Pro-GRP）12种肿瘤标志物的浓度。

【检验原理】

本产品由蛋白芯片、酶标二抗反应液、检测液及其他试剂配套组成。应用双抗体夹心法原理定量检测人血清中的12种肿瘤标志物的浓度。

第一步反应：待测血清与芯片反应，芯片表面的12种肿瘤标志物的单克隆抗体与样品中潜在的相应抗原结合，反应结束芯片经洗涤后进行第二步反应。

第二步反应：将芯片转入预加了酶标二抗反应液的反应杯中，进一步反应形成抗体-抗原-抗体的双抗夹心结构，反应结束芯片经洗涤后检测反应信号。信号检测：将芯片转移入预加了发光底物的反应杯中，利用致冷CCD对芯片反应区进行成像，读取点阵灰度值。

报告结果：以不同浓度的校准品作为样本进行检测，作出灰度——浓度定量标准曲线，通过该标准曲线计算血清样本中不同指标的相应浓度，报告检测结果。

【适用仪器】

江苏三联生物工程有限公司全自动生物芯片阅读仪SLXP-001、SLXP-002。

【储存条件及有效期】

2～8 ℃保存，有效期6个月。

【医疗器械注册证编号】

国械注准20153400231

国械注准20153400233

第三篇：常用的乳腺癌肿瘤标志物检查项目

常用的乳腺癌肿瘤标志物检查项目

1.血清癌抗原15-3(CA15-3)

临床意义：①在乳腺癌早期诊断中，检查血清CA15-3可作为一种乳腺良恶性病变鉴别、乳腺癌确诊的有效辅助手段。②CA15-3是目前监测乳腺癌术后复发、转移情况较为理想的血清肿瘤标志物。往往在术前测一次CA15-3，以便与术后测的CA15-3做比较，若术前异常增高的CA15-3水平术后明显下降，则表明患者的病情在一定程度上得到控制。③CA15-3可用于指导临床治疗，如患者CA15-3水平持续升高，则表明病情继续发展，应全面检查，必要时开始或加强化疗、放疗或改用内分泌治疗等。

2.血清癌胚抗原(CEA)

临床意义：CEA是一种胚胎性抗原，存在于3~6个月正常胎儿的消化道内皮细胞中，在胚胎后期和婴儿出生后，CEA逐渐消失，而患癌后会在体内重新出现。它也是预示肿瘤可能复发或转移的重要指标之一。临床上，常常和CA15-3联检用于乳腺癌的术后监测。当CA15-3和CEA的值同时持续升高并保持较高的水平时，就更应考虑乳腺癌有转移、复发的可能。

3.血清癌抗原125(CA125)

临床意义：CA125是一种卵巢相关抗原，可见于卵巢上皮癌、子宫内膜癌、乳腺癌等恶性肿瘤。尽管其对乳腺癌的诊断敏感度不如卵巢癌，但与其他肿瘤标志物联合测定，能提高乳腺癌诊断的准确率。

4.血清癌抗原19-9(CA19-9)

临床意义：CA19-9在胰腺癌、结肠癌等消化系统恶性肿瘤和乳腺癌时均出现异常升高。常常与其他肿瘤标志物联合测定，应用于乳腺癌的诊断。

病理组织化验

临床上，在确诊为乳腺癌并进行手术切除后，需要对切除的组织做病理化验。常用病理化验“乳癌五项” 如下：

PCNA(增殖细胞核抗原

P53基因

癌基因

ER(雌激素受体

PR(孕激素受体 得出的结果用阳性(+、++、+++、++++)和阴性(-)表示。其中ER、PR阳性说明是激素依赖性乳腺癌，内分泌治疗有效率高，反之内分泌治疗的效果不好;而PCNA(增殖细胞核抗原)、P53基因、癌基因C-erbB-2这三项指标的阳性对于乳腺癌患者就不那么好了，它们的阳性加号越多，说明肿瘤的侵袭性越高，越容易复发、转移，预后也差。更多资讯咨询 ***

人参皂苷Rh2斩断乳腺癌魔爪

人参是自古以来研究较多的名贵中药材，现代医学研究表明，人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物活性作用，其主要活性成分是人参皂苷。迄今为止，从人参中分离并确定了结构的皂苷有40余种，通过对各种人参皂苷抗肿瘤作用的比较发现，人参皂苷Rh2抑制癌细胞增殖作用的能力最强，是人参皂苷中的最主要抗癌活性成分。人参皂苷Rh2通过抑制癌细胞增殖和诱导癌细胞分化凋亡对多种肿瘤有效，也为乳腺癌的治疗提供了新的武器。

朱君荣、孙建国等人研究了人参皂苷Rh2对雌激素依赖性人乳腺癌T47D 细胞增殖和凋亡的影响。结果发现，T47D细胞经Rh2作用后生长受抑制，呈剂量依赖性和时间依赖性，半数抑制浓度为 21.6 μg/mL；光学显微镜显示T47D细胞经Rh2作用后呈较明显的凋亡形态学改变；流式细胞仪检测证实，Rh2能在一定浓度 范围内诱导T47D细胞凋亡，将细胞周期阻滞于G1期，并使Caspase-3表达增加。说明Rh2 能抑制T47D细胞增殖并诱导其凋亡，对乳腺癌有效。

究所高峰等人通过实验证实，人参皂苷Rh2对正常小鼠和犬的神经系统、呼吸系统、心血管系统无明显影响，这与其他抗癌化疗药物有明显不同。

正因为人参皂苷Rh2的高效、低毒，在杀伤肿瘤细胞的同时不损害正常细胞，被称为“癌细胞狙击手”。同时它还是“免疫细胞激活剂”，可通过激活免疫细胞功能，而发挥人体自身免疫系统对癌细胞的清除，利于患者康复。

第四篇：肿瘤检测样本

1、新鲜组织(包括手术和活检组织)肿瘤新鲜冷冻材料可提取出最高品质的DNA、RNA。在手术现场取样的情况也比较多，但需要在显微镜下确认肿瘤细胞含量。周围炎症严重的肿瘤、黏液产生过高的肿瘤、病变中心广泛纤维化的肿瘤细胞不能采集，以免产生假阴性结果。切割后取其中一半，并利用另一半切面制作组织标本，然后进行确认。

手术切除的组织样本理想的保存方法是迅速置于液氮中，然后保存于液氮罐或-80℃冰箱，这一过程应在手术样本离体后30分钟内完成。由于组织样本通常需先进行病理学分析，在分析完成后应尽早将组织样本置于稳定剂中，避免核酸降解。

2、石蜡包埋组织（formalin-fixed paraffin-embedded，FFPE）

10%中性福尔马林固定手术切除样本，按病理学操作规范进行取材。制作石蜡切片时，切取5片连续切片，其中1片进行HE染色，确认肿瘤细胞的含量。在高灵敏度检测方法中，可考虑使用活检标本。

DNA容易受固定的影响，长时间（1周以上）浸泡在福尔马林中的样本的DNA会被片段化，不能检出突变。活检材料的固定时间一般是24小时，对于穿刺等活检样本，固定时间控制在6~24小时为佳。

3、胸腹水等细胞学样本

用胸腹水中的肿瘤细胞用于基因检测时，必须确认肿瘤细胞，穿刺获得胸腹水样本提交给细胞病理检查之后，剩余液体冷藏/冷冻保存，也可在含有细胞成分的离心沉淀中加入含有蛋白质变性剂的缓冲液（AL缓冲液，Qiagen公司）等室温保存。由于细胞学样本的肿瘤细胞含量较低，因此必须使用高灵敏度检测方法。

4、血浆样本

循环DNA(circulating free DNA，cfDNA)是存在于血浆中的游离DNA，肿瘤来源的DNA占血浆游离DNA的比例在不同肿瘤及病例中相差悬殊（0.01~93%），从而限制了外周血在肿瘤分子检测时的应用。目前已有多篇文献证实可利用从血浆游离DNA检出突变，但需要使用ARMS法等灵敏度非常高的检测方法。

采集外周血提取血浆游离DNA进行检测，取样时应使用一次性密闭EDTA抗凝真空采血管，采集6~10ml全血，冷藏运输，6小时内分离血浆，提取游离DNA，保存到-80℃冰箱中，并避免反复冻融。如外周血需长时间运输，建议用商品化的游离DNA样本保存管，在常温条件下，cfDNA在全血中可稳定保存7天。

第五篇：肿瘤标记物检测

肿瘤标记物检测及临床意义

肿瘤标志物是肿瘤细胞本身存在或分泌的特异性物质，应具备以下一些特征：必须由恶性肿瘤细胞产生，并可在血液、组织液、分泌液或肿瘤组织中测出；不应该存在于正常组织和良性疾病中；某一肿瘤的肿瘤标志物应该在该肿瘤的大多数患者中检测出来；临床上尚无明确肿瘤证据之前最好能测出；肿瘤标志物的量最好能反映肿瘤的大小；在一定程度上能有助于估计治疗效果、预测肿瘤的复发和转移。理想的肿瘤标志物应符合上述各项特征。然而，实际上冻存在绝对理想的肿瘤标志物。现今所知的肿瘤标志物中，绝大多数不但存在于恶性肿瘤中，而且也存在于良性肿瘤、胚胎组织，甚至正常组织中。因此，这些肿瘤标志物并非恶性肿瘤的特异性产物，但在恶性肿瘤患者中明显增多。故有人将肿瘤标志物称为肿瘤相关抗原。

肿瘤标志物可以分成以下几大类：肿瘤胚胎性抗原，如甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）；异位激素（ACTH），血清铁蛋白（Fer/SF），血B2微球蛋白（B2-MG），神经元特异性烯醇化酶（NSE），细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）,前列腺酸性磷酸酶（PAP）,总前列腺特异性抗原（TPSA），游离前列腺特异性抗原（FPSA），EB病毒抗体（EB-IGM）,糖类抗,CA-50）,糖类抗原（CA-72-4），糖类抗原（CA-19-9），糖类抗原(CA24-2),糖类抗原（CA-125）,糖类抗原（CA15-3），各项肿瘤标记物都有它的临床意义。

1.AFP原发性肝癌最敏感、最特异的指标，适用于大规模普查，如果成人血AFP值升高，则表示有患肝癌的可能AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌，但阴性并不能排除原发性肝癌。AFP水平在一定程度上反应肿瘤的大小，其动态变化与病情有一定的关系，是显示治疗效果和预后判断的一项敏感指标。AFP值异常高者一般提示预后不佳，其含量上升则提示病情恶化。通常手术切除肝癌后二个月，AFP值应降至20ng/ml以下，若降的不多或降而复升，提示切除不彻底或有复发、转移的可能。在转移性肝癌中，AFP值一般低于350-400ng/ml。正常参考值0-15ng/ml

2．癌胚抗原（CEA）

在正常成人的血液中CEA很难测出。CEA是一种重要的肿瘤相关抗原，70~90%的结肠腺癌患者CEA高度阳性，在其它恶性肿瘤中的阳性率顺序为胃癌（60~90％）、胰腺癌（70~80％）、小肠腺癌（60~83％）、肺癌（56~80％）、肝癌（62~75％）、乳腺癌（40~68％）、泌尿系癌肿（31~46％）。胃液（胃癌）、唾液（口腔癌、鼻咽癌）以及胸腹水（肺癌、肝癌）中CEA的阳性检测率更高，因为这些肿瘤“浸泡液”中的CEA可先于血中存在。CEA含量与肿瘤大小、有无转移存在一定关系，当发生肝转移时，CEA的升高尤为明显。CEA测定主要用于指导各种肿瘤的治疗及随访，对肿瘤患者血液或其他体液中的CEA浓度进行连续观察，能对病情判断、预后及疗效观察提供重要的依据。CEA的检测对肿

瘤术后复发的敏感度极高，可达80%以上，往往早于临床、病理检查及X光检查。

3．癌抗原125（CA125）

CA125是卵巢癌和子宫内膜癌的首选标志物，如果以65U/ml为阳性界限，Ⅲ-Ⅳ期癌变准确率可达100%。CA125迄今为止是用于卵巢癌的早期诊断、疗效观察、预后判断、监测复发及转移的最重要指标。CA125测定和盆腔检查的结合可提高试验的特异性。对输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、乳腺癌和间皮细胞癌诊断的符合率也很高，良性病变阳性率仅2%。CA125水平的升高是女性生殖系肿瘤复发的信号。正常参考值：0.1～35 U/ml。

4．癌抗原15-3（CA15-3）

CA15-3是乳腺癌的最重要的特异性标志物。30%-50%的乳腺癌患者的CA15-3明显升高，其含量的变化与治疗效果密切相关，是乳腺癌患者诊断和监测术后复发、观察疗效的最佳指标。正常参考值：0.1～25 U/ml

5．癌抗原19-9（CA19-9）

CA19-9是胰腺癌，胃癌，结、直肠癌、胆囊癌的相关标志物，大量研究证明CA19-9浓度与这些肿瘤大小有关，是至今报道的对胰腺癌敏感性最高的标志物。胰腺癌患者85%-95%为阳性，CA19-9测定有助于胰腺癌的鉴别诊断和病情监测。正常参考值：0.1～27 U/ml

6．癌抗原72-4（CA72-4）

CA72-4是目前诊断胃癌的最佳肿瘤标志物之一，对胃癌具有较高的特异性，其敏感性可达28-80%，若与CA19-9及CEA联合检测可以监测70％以上的胃癌。

CA72-4对其他胃肠道癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌也有不同程度的检出率。CA72-4与CA125联合检测，作为诊断原发性及复发性卵巢肿瘤的标志，特异性可达100%。

正常参考值：0.1～7 U/ml

CA242是一种新的肿瘤相关抗原，当消化道发生肿瘤时，其含量升高

CEA与CA242联合检测可提高敏感性，与单独采用CEA检测相比，对结肠癌可提高40-70%，对直肠癌提高达到47-62%。CEA与CA242无相关性，具有独立的诊断价值，且二者之间具有互补性。

正常参考值：0～17 U/ml

CA50是胰腺和结、直肠癌的标志物，是最常用的糖类抗原肿瘤标志物，因其广

泛存在胰腺、胆囊、肝、胃、结直肠、膀胱、子宫，它的肿瘤识别谱比CA19-9广，因此它又是一种普遍的肿瘤标志相关抗原，而不是特指某个器官的肿瘤标志物。

另有报导萎缩性胃炎患者胃液CA50的浓度与正常人比较有显著改变。通常认为萎缩性胃炎是癌前高危期，因此CA50可作为癌前诊断指标之一。在胰腺炎、结肠炎和肺炎发病时，CA50也会升高，但随炎症消除而下降。

9．非小细胞肺癌相关抗原（CYFRA 21-1）

CYFRA 21-1是非小细胞肺癌最有价值的血清肿瘤标志物，尤其对鳞状细胞癌患者的早期诊断、疗效观察、预后监测有重要意义

CYFRA 21-1与良性肺部疾病（肺炎、结核、慢性支气管炎、支气管哮喘、肺气肿）的鉴别特异性比较好。

正常参考值：0.10～4 ng/ml

10．小细胞肺癌相关抗原（神经元特异性烯醇化酶，NSE）

NSE被认为是监测小细胞肺癌的首选标志物，60-80%的小细胞肺癌患者NSE升高

血清NSE水平的测定对于神经母细胞瘤的监测疗效和预报复发均具有重要参考价值，比测定尿液中儿茶酚胺的代谢物更有意义。

另外对胺前体摄取脱羧细胞瘤、精原细胞瘤及其它脑肿瘤的诊断也有重要意义。

正常参考值：0～16 ng/ml

11．鳞状细胞癌抗原（SCC）

鳞状细胞癌抗原(SCC)是一种特异性很好而且是最早用于诊断鳞癌的肿瘤标志物。SCC在正常的鳞状上皮细胞中抑制细胞调亡和参与鳞状上皮层的分化，在肿瘤细胞中参与肿瘤的生长，它有助于所有鳞状上皮细胞起源癌的诊断和监测，对子宫颈癌有较高的诊断价值：对原发性宫颈鳞癌敏感性为44%-69%；复发癌敏感性为67%-100%，特异性90%-96%；正常参考值：< 1.5 mg/L

12．总前列腺特异性抗原（TPSA）

PSA是前列腺癌的特异性标志物，也是目前公认的唯一具有器官特异性肿瘤标志物。血清TPSA升高一般提示前列腺存在病变（前列腺炎、良性增生或癌症

TPSA测定还可用于监测前列腺癌患者或接受激素治疗患者的病情及疗效，90%前列腺癌术后患者的血清TPSA值可降至不能检出的痕量水平，若术后血清TPSA值升高，提示有残存肿瘤。放疗后疗效显著者，50％以上患者在2个月内血清TPSA降至正常。

正常参考值：0.01～4.0 ng/ml

13．游离前列腺特异性抗原（FPSA）

单项的血清总PSA（TPSA）测定不能明确鉴别前列腺癌和良性的前列腺增生，主要是因为在浓度2-20ng/ml范围内，二组病人有交叉。而FPSA/TPSA不受此因素及年龄的影响，通过FPSA/TPSA比值达到鉴别前列腺癌或良性的前列腺增生的目的FPSA检测主要适用于未经治疗、TPSA值为2-20ng/ml病人，当TPSA值低于2ng/ml或高于20ng/ml时，FPSA/TPSA比值并不能用于鉴别前列腺癌和良性的前列腺增生。

正常参考值：0.01～2.0 ng/ml FPSA/TPSA：> 0.15

14．α-L-岩藻糖苷酶（AFU）

AFU是是对原发性肝细胞性肝癌检测的又一敏感、特异的新标志物。原发性肝癌患者血清AFU活力显著高于其它各类疾患（包括良、恶性肿瘤）。血清AFU活性动态曲线对判断肝癌治疗效果、估计预后和预报复发有着极其重要的意义

正常参考值：234～414 μmol/L

15．EB病毒抗体（EBV-VCA）

EB病毒阳性、鼻咽癌家族史、鼻咽癌的高发区、身体免疫力低下，都可能是患鼻咽癌的高危因素。从理论上讲，如EB病毒检查阳性者，仅是代表患者以前曾经受过EB病毒感染，但它是否是鼻咽癌发病的直接原因，目前尚无定论。但临床实践，科学研究表明，阳性者患鼻咽癌的机会比阴性者大得多。正常参考值：EBV-VCA抗体 阴性

16．肿瘤相关物质（TSGF）

TSGF肿瘤相关物质联合检测（原名恶性肿瘤特异性生长因子）是一种可以简便快速地用于恶性肿瘤早期辅助诊断的新型的肿瘤标志物，对疗效观察、人群查体亦有很高的应用价值。

恶性肿瘤患者血清中TSGF含量显著升高，不同种类的恶性肿瘤间差异不明显；而良性肿瘤与健康人群间无显著差异，TSGF是良、恶性肿瘤的鉴别指标，可在辅助诊断恶性肿瘤方面发挥作用正常参考值：正常人TSGF浓度范围为47±17U/ml；＜64U/ml为阴性；≥64U/ml而＜71U/ml为可疑；≥71U/ml为阳性。

17．铁蛋白（SF）

铁蛋白升高可见于下列肿瘤：急性白血病、何杰金氏病、肺癌、结肠癌、肝癌和前列腺癌。检测铁蛋白对肝脏转移性肿瘤有诊断价值，76%的肝转移病人铁蛋白含量高于400μg/L，当肝癌时，AFP测定值较低的情况下，可用铁蛋白测定值补充，以提高诊断率。

正常参考值：男性：30～400 μg/L 女性：13～150 μg/L

18．β2-微球蛋（β2-MG）

β2-MG是恶性肿瘤的辅助标志物，也是一些肿瘤细胞上的肿瘤相关抗原。在恶性血液病或其它实质性癌瘤中，突变细胞合成和分泌β2-MG，可使病人血清中浓度显著上升，在淋巴系统肿瘤如慢性淋巴细胞白血病、淋巴细胞肉瘤、多发性骨髓瘤等中尤为明显，在肺癌、乳腺癌、胃肠正常参考值：1.58～3.55 μg/ml

道癌及子宫颈癌等中也可见增高。

正常参考值：1.58～3.55 μg/ml

19．胰胚胎抗原（POA）

胰胚胎抗原是胰腺癌的又一新型、敏感、特异的新标志物，胰腺癌的POA的阳性率为95%

正常参考值：0～7 U/ml

20．胃泌素前体释放肽（PROGRP）

胃泌素前体释放肽是一种新的小细胞肺癌标志物。PROGRP是脑肠激素的一种，是小细胞肺癌增殖因子胃泌素释放肽的前体。PROGRP作为小细胞肺癌标志物有以下特点：1.针对小细胞肺癌的特异性非常高；2.较早期的病例有较高的阳性率；3.健康者与患者血中浓度差异很大，因而检测的可靠性很高。

正常参考值: 4～6 pg/ml

现在临床对一些肿瘤项目进行一些组合检查肿瘤普查：

1、肿瘤普查四项：AFP、CEA、Fer、β2-MG2、肿瘤三项：AFP、CEA、CA1993、妇科肿瘤五项：AFP、CEA、CA125、CA153、CA1994、卵巢癌二项：CA125、CEA5、乳腺癌二项：CA153、CA1996、消化道肿瘤六项：AFP CEA CA199 CA242 CA724 CA507、肝胆肿瘤五项：AFP CEA CA199 CA125 CA508、胃癌三项：CEA CA724 CA1999、肺癌三项：CEA NSE CYFRA21110、前列腺癌三项：PSA FPSA PAP11、前列腺癌两项：PSA FPSA