3.霉菌、放线菌的形态观察 4学时

第一篇：3.霉菌、放线菌的形态观察 4学时

实验三

一、实验目的

霉菌、放线菌的形态观察

1.学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的基本方法。2.初步了解放线菌和四类常见霉菌的基本形态特征。

二、实验原理

1.霉菌（真核微生物）：

霉菌是一类可产生菌丝体的真核微生物的统称。霉菌的菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，菌落与培养基间连接紧密，不易挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、构造通常不一致，有霉味。霉菌的菌丝体分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及包子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。

菌丝的孢子较大，在低倍镜下即可清晰观察到有隔或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比放线菌粗的多，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片特点是：（a）细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；（c）溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。霉菌的菌丝、分生孢子梗和分生孢子的形态常作为分类的重要依据。

曲霉形态特征：表面灰绿色，菌体有许多复杂的分枝菌丝构成。营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端产生烧瓶形或近球形顶囊，表面产生许多小梗，小梗上着生成串的表面粗糙的球形分生孢子。

根霉形态特征：匍匐菌丝弧形，无色，向四周蔓延。

放线菌形态特征：呈菌丝状生长，以孢子繁殖。显微镜下呈紫红色。青霉形态特征：菌丝初期白色，颜色逐渐由白转变为绿或蓝，菌丝有隔膜。气生菌丝特化成子实体，子实体类型为分生孢子头。

霉菌的培养和观察方法：

（1）载玻片培养观察法：无菌操作将培养基薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间有限的空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察，这种方法既可以保持霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。

（2）玻璃纸培养观察法：与放线菌的玻璃纸培养观察方法相似，这种方法用于观察不同生长阶段霉菌的形态，也可获得良好的效果。

（3）直接制片观察法：用解剖针挑取少量培养物置于预先滴加乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。2.放线菌（原核微生物）

放线菌是由不同长短、纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝，简称基丝）和生长在培养基以上的气生菌丝（简称气丝）。有些气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等，孢子常呈圆形、椭圆形或杆状。能否产生气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为放线菌分类鉴定的重要依据。

放线菌的菌落形态特征为：形成干燥、不透明、表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉”的菌落。菌落与培养基连接紧密，难以挑取，菌落正反面颜色不一致，在菌落边缘的琼脂平板上有变形的现象，有泥腥味。

放线菌只产生基丝而无气丝。放线菌的培养和观察方法：

放线菌在显微镜下一般气丝在上，基丝在下，气丝色暗，基丝较透明。有的（1）扦片法：在放线菌平板上扦上盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时用镊子拔出盖玻片，擦去背面培养物，将有菌的一面朝上置于载玻片上，直接镜检。

宜用略暗光线观察，低倍镜—高倍镜；染色后观察效果更好。

（2）玻璃纸法：玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在平板表面，接种放线菌，经培养，放线菌在玻璃纸上形成菌苔。观察时先在载玻片上滴一小滴水，取下玻璃纸，使菌面朝上，使玻璃纸平贴于载玻片上。

优点：可观察到放线菌自然生长状态下的特征和不同生长期的形态。注意：整过程勿触动菌面培养物。

（3）印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔直接印在载玻片上，经染色后观察。该方法主要用于观察孢子丝的形态，孢子的排列及其形状等，但形态特征可能有所改变。

用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培养基一起切下，菌面朝上。另取一载玻片，微热后，轻轻按压菌苔，固定，染色后镜检。

三、实验器材

1.菌种

放线菌划线平板28℃，3~5天后培养物；曲霉（Aspergillus sp.）、根霉(Rhizopus sp.)和青霉(Penicillium sp.)划线平板28℃，2~3天后培养物。

2.仪器

显微镜、培养皿、载玻片、牙签、擦镜纸、吸水纸、染色缸等。3.试剂

乳酸石炭酸棉蓝染色液，石炭酸复红染液，生理盐水。

四、实验步骤(一)霉菌观察：

1.霉菌自然生长状态下的观察：将培养3—4天的霉菌培养皿打开，放在显微镜低倍镜下寻找菌落的边缘，直接观察菌丝，分生孢子梗和分生孢子。

2.直接制片染色观察：于洁净载玻片上，加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用牙签从霉菌菌落的边缘外（培养基平面下方一点儿）取少量带有孢子的菌丝置染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。

注：挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。

可先将挑取的菌丝置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，然后置于染液中。(二)放线菌观察：

1.放线菌自然生长状态下的观察

将培养3—4天的放线菌培养皿打开，放在显微镜低倍镜下寻找菌落的边缘，直接观察菌丝，孢子丝和孢子。

2.印片法染色观察

（1）用接种铲或解剖刀（或牙签）将平板上的菌苔连同培养基切下一小块，菌面朝上放在载玻片中央。

（2）用另一洁净载玻片置火焰上微热后，盖在菌苔上，轻轻垂直按压，将其压碎，使培养物（气丝、孢丝或孢子）粘附在后一块载玻片中央，弃去培养基，制成涂片，将有印迹的一面朝上，通过火焰2～3次固定。

注：不能压碎培养基，也不能将孢子或菌丝压入培养基。

（3）用石炭酸复红染液或吕氏碱性美蓝染液覆盖印迹，染色0.5~1分钟后水洗。

（4）干燥后，用油镜观察营养菌丝,孢子丝及孢子的形态。

五、实验结果

绘图说明所观察到的青霉和放线菌主要形态特征。六 思考题

1.镜检时，如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？

2.显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的主要区别是什么？ 补充材料：

1.霉菌对人类生活和生产能产生哪些积极作用和消极作用？

答：霉菌分布极其广泛，只要存在有机物就有它们的踪迹。它们在自然界扮演者最重要的有机物分解者的角色，从而把其他生物难分解利用的数量巨大的复杂有机物如纤维素和木质素彻底分解转化，称为绿色植物可以重新利用的养料，促进了整个地球上生物圈的繁荣发展。

积极作用：（1）工业上的柠檬酸、葡萄糖酸、淀粉酶、蛋白酶等酶制剂，青霉素、头孢霉素等抗生素，核黄素等维生素，麦角碱等生物碱，真菌多糖、赤霉素等产物的发酵生产；利用Absidia(犁头霉)等对兹体化合物的生物转化以生产兹体激素类药物；以及利用霉菌在生物防治、污水处理和生物测定等方面的应用；（2）在食品制造方面，如酱油的酿造和干酪的制造等（3）在基础理论研究方面，霉菌是良好的实验材料

消极作用：（1）大量真菌可引起工农业产品霉变（2）是植物最主要的病原菌，引起各种植物的传染性病害，如马铃薯晚疫病，稻瘟病和小麦锈病等（3）引起动物和人体传染病，如皮肤廯病症等；另有少部分霉菌可产生毒性很强的真菌毒素，如黄曲霉毒素。

2.在自然界和实际应用中放线菌有什么作用？

答：实际应用：（1）产生抗生素；

（2）近年来筛选到的许多新的生化药物多数是放线菌的次生代谢产物，包括抗癌剂、酶抑制剂、抗寄生虫剂和农药杀虫剂等；

（3）放线菌还是许多酶、维生素的产生菌；

自然界：放线菌在兹体转化、石油脱蜡和污水处理中也有重要作用。由于很多放线菌有极强的分解纤维素、石蜡、角蛋白、琼脂和橡胶等的能力，故它们在环境保护、提高土壤活力和自然界物质循环中起着重大作用。

第二篇：放线菌霉菌的制片观察

实验三 放线菌霉菌的制片观察

实验目的：

1.学会用印片法制作临时装片

2.掌握用显微镜观察放线菌个体形态特征的方法 3.掌握霉菌的观察方法和观察霉菌的形态特征 实验原理：

1.放线菌是产生抗生素的重要微生物种类之一，其形态特征含有3个部分，基内菌丝、气生菌丝和孢子丝。基内菌丝：升展于培养基的表面和内部，菌丝色淡、较细。气生菌丝：在基内菌丝上，升展于空间，颜色较深，菌丝较粗。孢子丝：菌丝成熟时，大部分气生菌丝分化成孢子丝，孢子丝形态多样，由成串分生孢子组成。

2.霉菌是真核生物主要有基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝。基内菌丝：升展于培养基的表面和内部。气生菌丝：在基内菌丝上，升展于空间。繁殖菌丝：产生孢子。材料和仪器：

1． 菌种：细菌链霉菌、霉菌 2． 培养基：高氏一号琼脂培养基

3． 器皿：培养皿、盖玻片、载玻片、镊子、显微镜等 4． 染液：吕氏美兰染液、乳酸石碳酸棉兰染液 实验步骤：

1.配制培养基灭菌后倒平板，待起冷却后划线接种，在培养箱内培养5-7天

2.取盖玻片印于放线菌菌体处，轻轻敲打后取出置于有吕氏美兰染液的载玻片上，无菌操作

3.用镊子夹取少量霉菌菌体于有乳酸石碳酸棉兰染液的载玻片上，用大头针打散菌体，盖上盖玻片吸取多余的染液，无菌操作

4.取制作好的临时装片于显微镜下，镜检，观察放线菌和霉菌的形态特征 实验结果：

1.放线菌所获临时装片材料较少，只有几个视野可以观察的到菌体，菌体疏松。因为放线菌长势不好，只有少数生长于培养基上，故取材时只取到少部分，但不影响观察，可以清晰的看到菌丝体和孢子丝，说明放线菌有菌丝体和孢子丝组成，孢子丝呈串珠状。2.霉菌制作了两块临时装片，第一个观察到的都是圆形小颗粒的孢子，说明取材时，仅仅只取了培养基表面的一层菌体，没有深入培养基中取菌体，操作有误。第二块可以清晰的看见霉菌菌体，其中有分生孢子梗、顶囊、小梗、分生孢子，说明霉菌由这几部分组成，孢子着生于小梗上，呈串珠状。霉菌菌体比放线菌菌体大很多。

第三篇：实验三 放线菌形态及菌落特征的观察

实验三 放线菌形态及菌落特征的观察

一、目的要求

掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。

二、基本原理

和细菌的单染色一样，放线菌也可用石炭酸复红或碱性美蓝等染料着色后，在显微镜下观察其形态。放线菌的孢子丝形状和孢子排列情况是放线菌分类的重要依据，为了不打乱孢子的排列情况，常用印片染色法和胶带纸粘菌染色法进行制片观察。

放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。

三、器材

1.活材料：放线菌培养物，酵母菌斜面培养物；

2.染色液：复红染色液（或结晶紫，美兰）；

3.器材：载玻片，胶带纸，小刀，接种环，吸水纸，擦镜纸，酒精灯，香柏油，乙醚-乙醇混合液，显微镜。

四、操作步骤

1．印片法：放线菌自然生长状态的观察

印片：取干净载玻片一块，用小刀切取放线菌培养体一块，放在载玻片上，用另一块载玻片对准菌块的气生菌丝轻轻按压，然后将载玻片垂直拿起。注意不要使培养体在玻片上滑动，否则会打乱孢子丝的自然形态；

微热固定：将印有放线菌的涂面朝上，通过酒精灯火焰2-3次加热固定； 染色:石炭酸复红染色1min； 水洗：水洗后晾干；

镜检：先用低倍镜后用高倍镜，最后用油镜观察孢子丝、孢子的形态及孢子排列情况。

2．胶带纸法

粘菌：用胶带纸在放线菌培养体上粘取菌体，注意，压取时从菌落边顺着菌体生长方向，避免从菌落上面压取，以免取得的全是孢子。

染色：将粘有菌体的胶带纸压在事先准备好的滴油染液的载玻片上。将多余染色液用滤纸吸掉。

镜检：同上。

五、实验报告

绘图说明你所观察到的放线菌的形态特征。

第四篇：观察酵母菌与霉菌实验教案

《观察酵母菌与霉菌》实验教案

一.实验目的

1.观察酵母菌的形态与结构并掌握其特征。

2.观察霉菌的菌落特征，学会霉菌的一般制作方法。3.观察并掌握各种霉菌的个体形态及生长繁殖方式。4.进一步熟悉显微镜的使用。二.实验原理

酵母菌是一类单细胞真菌，一般呈圆形、椭圆形，无性繁殖以芽孢为主，也有少数是裂殖，有些酵母菌能产生囊孢子，有的能形成假菌丝。酵母菌的菌落似细菌菌落，但较大且厚，多呈白色，少数为红色。酵母菌在液体中生长可形成菌膜、菌环、沉淀和浑浊。酵母菌的细菌结构较完善，即有壁、膜、质、核等结构。酵母菌的细胞形态、繁殖方式和培养特征均为菌种鉴定的依据。

酵母活细胞新陈代谢旺盛，活力强，还原力也强，若无毒的染料进入细胞，既被还原脱色，但死细胞及代谢作用缓慢的老弱细胞无此还原力。美兰是无毒染料，且能被活细胞还原成无色，故可用来区别细胞的死活。

霉菌是一些小型丝状真菌、单细胞（根霉、毛霉）或多细胞（曲霉、青霉），其细胞结构与酵母类似，同属真核细胞。

霉菌形态较复杂，个体较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。其菌丝分为气生菌丝与营养菌丝（菌丝比放线菌粗得多）观察时请注意菌丝是否具有横膈膜、有无假根、无性繁殖时形成何种孢子，孢子着生方式以及孢子头的构造等，以区别各种不同霉菌的形态。

霉菌菌落由分枝状菌丝组成，较疏松，呈毛状、棉絮状、绒毛状或毡状。由于不同霉菌形成的孢子均有不同颜色、构造、性状，故菌落表面呈现出不同的结构和色泽特征。菌丝一般呈白色或灰白色，菌落中心的菌丝较老，先产生孢子，故常形成同心圆。三.实验器材

1.菌种：面包酵母、根霉、曲霉、青霉。2.仪器：显微镜。

3.其它：生理盐水、乳酸酚棉兰染液、载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、美兰、镊子、大头针。四.步骤与方法

1.酵母菌细胞形态观察

（1）制片：用接种环挑取一环面包酵母菌种于载玻片上的一滴美兰染液中混匀，盖上盖玻片静置4~5分钟。盖时先将盖玻片的一边与液滴接触，然后慢慢放下，避免产生气泡。

（2）镜检：用高倍镜观察，光线弱些，绘图表示个体细胞的大小、形状、芽孢或裂殖情况，并观察死活酵母情况。2.霉菌的形态观察（1）制片方法：在洁净的载玻片加一滴乳酸酚棉兰染液，用大头针或镊子从菌落的不同部位菌丝体少许（连同培养基），放入载玻片上的乳酸酚棉兰染液中，使菌丝在染液中展开，加上盖玻片。（2）载片培养法制作霉菌标本片。（3）镜检。

（4）观察毛霉、根霉、曲霉、青霉的菌落。五.结果记录

1.酵母菌的形态观察

绘图表示个体细胞的大小、形状、芽孢或裂殖情况。2.霉菌的形态观察

绘制镜检图并描绘霉菌菌落特征。六.思考题

1.试比较酵母和细菌的形态。

2.为什么在观察霉菌个体形态时要连同培养基一起挑起？

第五篇：实验五 细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的制片和简单染色

实验五

细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的制片和简单染色

一．实验器材 1.菌种

枯草芽孢杆菌12—18h。金黄色葡萄球菌24h牛肉膏蛋白胨琼脂泄密安培养物等。1.溶液和试剂

草酸铵结晶紫染液，齐氏碳酸复红染液，吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用典液，乳酸碳酸棉蓝染液。

2.仪器和其他用品

酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶，擦镜纸，接种环，接种铲，接种针，镊子，载玻片夹子，载玻片支架，玻璃纸，平皿v型玻璃棒，滴管，解剖针，解剖刀，生理盐水，50%乙醇，20%甘油，高氏1号培养基平板。二．目的要求

1.学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本技术 2.初步了解细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的形态特征 3.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术 三．基本原理

放线菌菌体由基内菌丝，气生菌丝和孢子丝组成，制片时不采用涂片法以免破坏细胞及菌丝体形态。通常采用插片法或玻璃纸法并结合菌丝体简单染色进行观察，在插片中首先将灭菌盖玻片插入接种有放线菌的平板，使放线菌沿盖玻片和培养基接触生长而附着在盖玻片上，取除盖玻片上，取出盖玻片可直接在显微镜下观察放线菌在自然生长状态下的形态特征，而且有利于对不同生长时期的放线菌形态进行观察。利用单一染料对菌体进行染色的方法称为简单染色。用于染色的染料是一类苯环上带有发色基因的有机化合物。常采用碱性染料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中通常带负电荷，而染料电离后染料部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色；当细胞处于酸性条件下，所带正电荷增加时，可采用酸性染料染色。

四、操作步骤

（一）细菌制片及简单染色。

1、涂片。

2、干燥。

3、固定。

4、染色。

5、水洗。

6、干燥。

7、镜检。

（二）酵母菌制片及简单染色。

水—碘液浸片法。将革兰氏染色用碘液用水稀释4倍后，滴加一滴于载破片中央，无菌操作取少许菌体置于染色中混匀，盖上破片后镜剑。

五、思考题。