ABO血型定型检测作业指导书

第一篇：ABO血型定型检测作业指导书

ABO血型定型检测作业指导书

1.目的：ABO血型定型检测 2.适用范围：

新鲜、无污染、无溶血的人全血，避免反复冻融，不可用NaN3 防腐。3.职责：

站（院）长批准，专业负责人考核合格的优生筛查实验室检验人员履行此项工作。4.试剂：

4.1本法所用试剂为长春博德生物技术有限责任公司生产的抗A抗B血型定型试剂盒。

4.2本法所用试剂应在有效期内使用。5.设备仪器： 5.1医用冰箱 5.2双目显微镜

5.3微量可调移液器 6.原理：

本品系由经配制的抗A血型或B血型单克隆抗体的杂交瘤细胞培养上清液（或在上清液中加少量同型腹水）组成，专供鉴定人ABO血型用。7.程序：

7.1平衡：将在有效期内试剂盒、待测适用样品从冷藏环境中取出，平衡至室温（18-25℃）。

7.2平板法（玻片法）：本品与受检者全血或红细胞生理氯化钠悬液按1：1使用，不必再稀释，按照有无凝集判定结果。

7.3试管法：本品与受检者5%红细胞生理氯化钠悬液按1：1使用，不必再稀释，摇匀，1000r/min离心1分钟或室温静置1小时，按照有无凝集判定结果。7.4结果判定

血型 A B AB O 7.5检验结果登记 8.相关程序

8.1设备管理程序

8.2设备校准工作程序 8.3方法管理程序

8.4实验标本管理程序 8.5记录控制程序

8.6优生筛查服务管理程序 8.7实验室管理制度

抗A试剂

++ 8.8员工守则

8.9保密和保护专有权管理程序 8.10档案管理规定 9.相关记录

9.1《环境条件记录》 9.2《冰箱温度记录》 9.3《实验标本流转单》

9.4《仪器设备使用维护记录》

9.5《优生筛查检测结果登记表二》 9.6《实验标本处理表》 9.7《医用垃圾处理记录》

第二篇： ABO、RhD血型定型检测卡原理

ABO、RhD血型定型检测卡原理

【产品名称】

通用名称：ABO、RhD血型定型检测卡

英文名称：Microcolumn Gel Cards for Forward and Reverse ABO/RhD Blood Group Typing 【包装规格】

6孔/卡，抗A、抗B和抗D各1孔，空白凝胶管3孔。12卡/盒。【预期用途】

人红细胞 ABO血型正、反定型及RhD血型定型，仅供临床使用，不用于血源筛查。【检验原理】

采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物，利用凝胶间缝隙只允许游离红细胞通过的特性，将生物化学的凝胶过滤技术、离心技术和血型血清学的抗原抗体特异性反应结合在一起，专供血型血清学试验使用。ABO、RhD血型定型检测卡的前3支塑料微管中分别灌注有与抗A、抗B和抗D抗体按照一定的比例混合的葡聚糖凝胶，用于红细胞 ABO血型正定型及RhD血型定型。后三支塑料微管中只灌装凝胶，不含任何抗体。第四支微管作为阴性对照管，第五支和第六支微 管用于红细胞 ABO血型反定型。使用时将样本红细胞悬液或血清加在凝胶上部反应，离心后观察。凝集的红细胞，被阻挡在凝胶的上部或中央，判断凝集反应阳性；游离的红细胞，可通过凝胶间隙而沉积在凝胶的底部，判断凝集反应阴性。

第三篇：abo血型鉴定

生理盐水凝集法

①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。

②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。

红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。

玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。

在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：

①呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（++++）。

②呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）。

③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1／2为（++）。

④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为（+）。

⑤可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（±）。

⑥可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。

⑦镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。凝胶微柱法

是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。

抗A、抗B和抗AB标准血清标准

准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。④冷凝集素效价：在1：4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。[3] 编辑本段注意事项

1、所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。

2、加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。

3、虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，医学教育网收集整理但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。

4、幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。

5、玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。

6、正、反定型结果一致才可发报告。

7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。[4]

ABO血型系统

英文：ABO blood group system 根据红细胞表面有无特异性抗原（凝集原）A和B来划分的血液类型系统。ABO血型系统是1900年奥地利兰茨泰纳发现和确定的人类第一个血型系统。根据凝集原A、B的分布把血液分为A、B、AB、0四型。红细胞上只有凝集原A的为A型血，其血清中有抗B凝集素；红细胞上只有凝集原B的为B型血，其血清中有抗A的凝集素；红细胞上A、B两种凝集原都有的为AB型血，其血清中无抗A、抗B凝集素；红细胞上A、B两种凝集原皆无者为O型，其血清中抗A、抗B凝集素皆有。具有凝集原A的红细胞可被抗A凝集素凝集；抗B凝集素可使含凝集原B的红细胞发生凝集。输血时若血型不合会使输入的红细胞发生凝集，引起血管阻塞和血管内大量溶血，造成严重后果。所以在输血前必须作血型鉴定。正常情况下只有ABO血型相同者可以相互输血。在缺乏同型血源的紧急情况下，因O型红细胞无凝集原，不会被凝集，可输给任何其他血型的人。AB型的人，血清中无凝集素，可接受任何型的红细胞。但是异型输血输入量大时，输入血中的凝集素未能被高度稀释，有可能使受血者的红细胞凝集。所以大量输血时仍应采用同型血。临床上在输血前除鉴定ABO血型外，还根据凝集反应原理，将供血者和受血者的血液作交叉配血实验，在体外确证两者血液相混不发生凝集，方可进行输血以确保安全。近年来发现存在于红细胞上的凝集原（即血型抗原）也存在于其他血细胞和一般组织细胞。所有细胞表面血型抗原的特异性可作为机体免疫系统鉴别自身和异物的标志。因此，在临床实践中血型鉴定也是组织器官移植成败的关键。人类血型有遗传特性，决定血型的血型抗原即凝集原ABOA和B及其前身物H，分别受ABO三个等位基因控制。A、B基因为显性基因，O（H）基因为隐性基因。它们的遗传规律所显示的父、母血型与子代血型间的关系，在法医学上可作为否定亲子关系的依据，若再配合其他血型系统的测定，则可判断亲子关系。

血型不仅在输血上有重要意义，而且在人种学、遗传学、法医学、移植免疫、疾病抵抗力（或易感性）等方面都有应用价值，在输血前，一定要检查病人(受血者)和输血人（供血者）的血型，并且要进行交叉配血试验。在临床医学中，除输血、移植免疫外，对新生儿溶血病、自身免疫性溶血性贫血特异性抗体的检查，也都需要血型知识和有关技术。ABO血型抗原具有种族差异。例如，中欧地区的人群中，约40％以上的人为A型，近40％的人为O型，10％的人为B型，6％的人为AB型；而90％的美洲土著人为O型。[5] 编辑本段举例分析

通常只用两种抗血清即抗A及抗B血清，就可将群体分为四种血型。

根据血型的遗传规律，和临床工作方例起见，配偶间所生子女的血型如下：

各种ABO配偶所生子女的血型:

婚配式 子女可能有的血型 子女不可能有的血型

A×A A、O B、AB

A×B A、B、O、AB 无

A×AB A、B、AB O

A×O A、O B、AB

B×B B、O A、AB

B×AB A、B、AB O

B×O B、O A、AB

AB×AB A、B、AB O

AB×O A、B AB、O

O×O O A、B、AB

婚配式 A型血的可能 B型血的可能

A*A 75% 0% 25% 0%

A*B 25% 25% 25% 25%

A*O 50% 0% 50% 0%

A*AB 50% 25% 0% 25%

B*B 0% 75% 25% 0%

B*O 0% 75% 25% 0%

O型血的可能AB型血的可能

B*AB 25% 50% 0% 25%

O*O 0% 0% 100% 0%

O*AB 50% 50% 0% 0%

AB*AB 25% 25% 0% 50% ABO血型鉴定总结

AB0血型鉴定原理

常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。常规的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。ABO血型定型原则见表1-5-2。

鉴定方法

（1）生理盐水凝集法：①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。

红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。

玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：①呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（++++）。②呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）。③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1／2为（++）。④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为（+）。⑤可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（±）。⑥可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。⑦镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。

（2）凝胶微柱法：是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。

抗A、抗B和抗AB标准血清标准

准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。④冷凝集素效价：在1：4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。血型鉴定操作时注意事项

一般注意事项：①所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。②加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。③虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，医学教育网收集整理但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。④幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。⑤玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。⑥正、反定型结果一致才可发报告。⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。[6]

第四篇：ABO血型操作

长春博迅ABO、RhD血型定型检测卡操作流程 【检验原理】

本试验采用排阻层析原理，即在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定的离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。【样本要求】

标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。

红细胞标本的制备：配制成0.5％-0.8％红细胞悬液。

血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，2000rpm,10分钟，取上清；或者将被检者静脉血采入无抗凝试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000rpm,10分钟，取上清。该上清不得有絮状物或沉淀。标本必须充分去纤维蛋白，否则血清标本中析出的或红细胞悬液中残余的纤维蛋白可阻碍红细胞沉降，使非凝集细胞离心后在胶表面形成一条红线，呈假阳性反应。【操作步骤】

1.将微柱凝胶试剂卡的六支凝胶微管标号。

2.将待检者0.5％-0.8％红细胞悬液分别加入第一至第四支微管中，每管50微升。3.将待检者血清分别加入第五支和第六支

第五篇：ABO-Rh正反定型血型定型操作规程

ABO-Rh正反定型血型定型操作规程

一、项目名称、检验方法名称

1．项目名称：ABO-Rh正反定型血型定型 2．检验方法名称：柱凝集

二、方法学原理

该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。

三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物

1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc)2．代号：BioVue-ABO/Rh-Reverse 3．包装规格：

400卡/箱 试剂卡（707100）；100卡/箱 试剂卡（707155）4．试剂成分：

BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.成分描述 第一柱：抗－A试剂 抗－A鼠单克隆(lgM)抗体混和；蓝色染料 第二柱：抗－B试剂 抗－B鼠单克隆(lgM)抗体混和；黄色染料 第三柱：抗－D试剂（抗RH）抗－D人单克隆(lgM)抗体 第四柱：质控 优化增强剂，用于血型检测的质控对照 第五，第六柱：反定型稀释液 优化增强剂，用于反定型血型检测 5．试剂的储存与效期：

储存条件： 2～25℃环境中保存。请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。

效 期： 试剂盒上有记载

四、仪器品牌、型号

BioVue专用离心机 ；BioVue专用孵育器

五、样本的采集与准备：

在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。

标本采集后应尽快进行检测。如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。已凝集的标本以及用EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的标本应在7天内检测。献血员标本应在其效期内检测。

采集自脐带血的红细胞应确保没有污染。如怀疑样品污染需用生理盐水洗涤。抗凝全血标本以900－1000g离心5分钟，即可得到浓度约为80％的浓缩红细胞。1ml生理盐水＋40ul浓缩红细胞 即配制成3％的红细胞悬液。

或 1ml生理盐水＋10ul浓缩红细胞 即配制成0.8％的红细胞悬液。

六、试剂准备：

BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。请勿使用液面在玻璃珠以下的试剂卡。需准备3％或0.8%浓度的用于反定型的红细胞试剂。

七、具体操作步骤

 按照“样本的采集与准备”部分配置红细胞悬液。

 取出试剂卡，确保平衡至室温；使用前离心，确保无气泡、无断层。 在有条形码的一面作标本标记。

 使用打孔器，将试剂卡倒置下压，插入打孔器中，然后取下密封条。

 反定型：在相应试剂卡的反应腔（第5和6号微柱）中加入40ul血清/血浆，然后加入10ul的3％反定型的红细胞试剂（或50ul的0.8％红细胞试剂）。

 质控微柱：在4号柱加入40ul血清/血浆，然后加入10ul的3％标准O细胞悬液（或50ul的0.8％标准O细胞悬液）。

 正定型：在相应试剂卡的反应腔中（第1，2，3号微柱）加入10ul的3％红细胞悬液（或50ul的0.8％红细胞悬液）。 使用BioVue离心机离心。（离心必须在加样完成后30分钟内进行） 从微柱的正反两面判读凝集和/或溶血结果。

 在有较强阳性反应的试剂卡一侧读取并记录反应强度。 BioVue结果判读：

 阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果，表明红细胞表面存在相应的抗原。反定型测试中，无论是否发生凝集，溶血的存在视为阳性结果  阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集是阴性结果，表明红细胞表面不存在相应抗原

 溶血会导致玻璃珠上方呈浅粉色或红色。部分溶血时，有可能不出现凝集  4＋反应：红细胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一个环形带  3＋反应：发生凝集的大部分红细胞停留在柱的上半部分

 2＋反应：发生凝集的红细胞分布于整个柱体，柱的底部可见少量的细胞  1＋反应：大部分凝集的红细胞停留在柱的下半部分，柱的底部有少量红细胞  0.5＋反应：大部分凝集的红细胞穿过玻璃珠，在柱的底部形成一个粗糙的（不平整的）红细胞聚集带，聚集带上方可见少量红细胞

 0阴性：所有红细胞均穿过玻璃珠，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带

八、操作注意事项

1.所有血液标本以及与血液有接触的材料都视同传染性物质，依照实验室管理操作规范处置。

2.不适宜的存储条件可能会影响产品质量。注意：每个试剂盒卡的架子外面都贴有一个圆形的温控指示点，如指示点圆圈内为蓝色，说明试剂卡曾被暴露在可能影响产品质量的温度环境中。使用这些试剂卡时可能出现假阴性的检测结果。请勿使用这样的试剂卡。3.请勿使用超过效期的试剂卡。

4.卡中液体试剂的冷冻或蒸发都有可能影响未凝集红细胞通过玻璃珠而到达微柱的底部。5.请勿使用表面破损的试剂卡或微柱内试剂液面低于玻璃珠介质或褪色的试剂卡。6.不恰当的使用启封装置或将插有启封装置的试剂卡坠落会在加样时引起交叉污染。7.不恰当的技术操作会导致错误结果，具体可能的原因如下：

 未使用本规程中推荐的红细胞浓度。 实验过程中的辅助材料发生微生物污染。

 使用了含有某种特殊成份的标本（阻碍了红细胞自由穿过微柱中的介质）。 采用了严重溶血的标本（可能影响结果判读）。