第一篇：天然药物化学实验讲义汇总
《天然药物化学实验讲义》
实验须知
天然药物化学实验教学是天然药物化学课程的重要组成部分，是使学生进一步理论联系实际，掌握天然药物有效成分提取、分离和检定的基本操作技能，提高学生分析和解决问题能力。养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节。为此，提出下列实验须知：
1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。若发生事故应立即报告指导教师。
2．实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划，争取准时结束。实验过程应养成及时记录的习惯。凡是观察到的现象和结果及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录，实验完毕后，认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、mp、bp、TLC、重量）交给老师。
3．实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。
4．公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。节约用水、用电、药用试剂。严格药品用量。
5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电和门窗是否关闭。
实验一
薄层板的制备、活度测定及应用
一、目的要求
1．掌握硅胶薄层板的制备及薄层层析的操作方法 2．掌握硅胶薄层活度的测定方法 3．应用薄层层析法检测识中草药化学成分
二、实验材料
薄层层析用硅胶G，硅胶F，羧甲基纤维素钠，0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow.P-Dimethylaminoazobenzene），苏丹红（Sudan Ⅲ），靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline），苯，微量点样管，10×20cm玻璃板20块，碾钵7套。
三、实验操作
（一）薄层板的制备 1．硅胶薄层的制备
（1）硅胶G薄层
取硅胶G或硅胶GF一份，置烧杯中加水约5份混合均匀，放置片刻，随即用药匙取一定量，分别倒在一定大小的玻璃片上（或倒入涂布器中，推动涂布），均匀涂布成0.25~0.5mm厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀，在水平位置放置，待薄层发白近干，于烘箱中100℃活化0.5~1小时，冷后贮于干燥器内备用。活化温度和时间可依需要调整，一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干燥，不经活化即可贮存备用。
（2）硅胶（H）羧甲基纤维钠（CMC-Na）薄层
CMC-Na系碳水化合物，调制时应在水浴上进行。羧甲基纤维素钠的溶液一般用0.5~1%浓度（常用0.8%），宜预先配制后静置，取其上层澄清溶液应用，则所制备的薄层表面较为细腻平滑。
取薄层层析用硅胶，按1：3~3.5的比例加入羧甲基纤维素钠溶液顺时针方向搅拌混合并排除气泡，按照硅胶G薄层涂布法制备薄层，让其自然阴干，100℃下活化30分钟。活化温度不应过高，防止碳化。冷后于干燥器内备用。注：国内青岛海洋化工厂出售薄层层析用的硅胶在吸附剂名称之后加几个字标明的意思是：硅胶G（G是Gypsum石膏的缩写。表示加了石膏），硅胶H（H表示不加石膏），硅胶GF254（F254表示加石膏和波长254显绿色荧光的硅酸锌锰）。硅胶GF365（表示加石膏和波长365nm显黄色荧光的硫化锌镉）。2．特殊薄层的制备
根据分离工作的特殊需要，可制成以下几种特制薄层。（1）酸、碱薄层和pH缓冲薄层
为了改变吸附剂的酸碱性，以改进分离效果，可在吸附剂中加入稀酸溶液（如0.1~0.5N草酸溶液）代替水制成酸性氧化铅薄层使用，硅胶微呈酸性，可在铺层时用稀碱溶液（如0.1~0.5N氢氧化钠溶液）代替水制成碱性的硅胶薄层。当用醋酸钠、磷酸盐等不同pH的缓冲液代替水铺层，制成一定pH缓冲的薄层。（2）络合薄层
硝酸银薄层的制法，可在吸附剂中加入5~25%硝酸银水溶液代替水制成均匀糊状，再按常法铺成薄层，制成薄层避光阴干，于105℃活化半小时后避光贮存，制成的薄层以不变成灰色为好，在三天内应用。也可先把硝酸银用少量水溶解，再用甲醇稀释成10%溶液，把预先制好的硅胶G薄层浸入此溶液中约1分钟，取出避光阴干，按上法活化，贮存。
（二）、吸附剂的活度测定 1．硅胶活度的测定
一般选用三种染料的薄层层析法进行测定。
欧洲药典1969年记载用0.01%二甲基黄（Dimethy-yellow.P-Dimethylaminoazobenzene）。苏丹红（Sudan Ⅲ），靛酚蓝（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline）的苯溶液各10μl点滴于硅胶G或硅胶H薄层上，以苯为展开剂，展开10cm（约20分钟），三种染料应明显分离，靛酚蓝斑点接近于起始线。二甲基黄斑点在薄层的当中。苏丹红斑点与二甲基黄斑点之间，则认为薄层板活性符合要求。2．氧化铝活度的测定
一般可用4~5种偶氮染料以薄层层析法进行测定。
染料试剂的配制：取偶氮苯（Azobenzene）50mg，对甲氧基偶氮苯（P-Methoxyuzobenzene）,苏丹黄（Sudan I, Benzeneazo-β-naphthol），苏丹红（Sudan Ⅲ Tetrazobenzol-β-naphthol），对氨基偶氮苯（P-Aminoazobenzene）各20mg，分别溶于50ml重蒸馏的四氯化碳（经氢氧化钠干燥）中。
常法制备不含粘合剂氧化铝薄层，以铅笔尖或毛细管尖在薄层板一端2~3 cm处间隔1cm左右轻轻点上5个可以看清的小点，各吸取约0.02ml染料试剂分别点滴于原点上，以四氯化碳为展开剂，展开时薄层板与容器底部交角为10~40°之间，展开后测出各斑点的Rf值，从表1确定氧化铝的活度（一般高活性氧化铝Ⅰ~Ⅲ级活度使用本法时，结果往往偏低）。
另取不含粘合剂氧化铝薄层板一块，置于水蒸汽饱和容器内，2~3小时后取出，按上述方法测定活度。观察有无变化。
表1 氧化铝活度与偶氮染料外值关系
偶氮染料 偶氮苯
氧化铝活度级Rf值 二级 0.59
三级 0.72 0.45
四级 0.85 0.69
五级 0.95 0.89 对甲氧基偶氮苯 0.16 苏丹黄 苏丹红 对氨基偶氮苯
0.02 0.00 0.00
0.25 0.10 0.05
0.87 0.35 0.08
0.98 0.50 0.19
（三）、薄层层析的应用
薄层层析法在天然药物化学成分的研究中，主要应用于化学成分的预试、化学成分的鉴定及探索柱层分离的条件。用薄层层析进行中草药化学成分检识，可依据各类成分性质及熟知的条件有针对性地进行。由于在薄层上展开后，可将一些杂质分离，选择性高，可使预试结果更为可靠，不仅可通过显色获知成分类型，而且可初步了解主要成分的数目及其极性大小。实验操作：蒽醌类成分的鉴别
三、思考题
1.为何在铺板之前，色谱用的玻璃板要完全洗净并干燥？ 2.为何铺好的TLC板用前要在烘箱中干燥？
试验二
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
（一）概述
大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。
自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L），大黄（R.officinale Baill）及唐古特大黄（R.tangutium Maxim.et Regll）的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种：
OHOOHR1OR2 晶
形 黄色针晶 橙色细针晶
熔
点 318~320℃ 206~208℃ 196℃ 256~257℃ 207℃ R1-H-H-H-CH3-CH R2-COOH-CH2OH-CH3-OH-
名 称 大黄酸(Rhein)芦荟大黄素(Aloe-emodin)
大黄酚(Chyrsophanol)金色片状结晶 大黄素(Emodin)大黄素甲醚(Physcion)
橙色针晶 砖红色针晶 大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH，酸性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连有-CH3，因而后者酸性排在第四位。
（二）实验目的和要求
1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混合物的实验方案。
2．掌握PH梯度法的原理及操作技术。
3．学习蒽醌类化合物鉴定方法。
（三）实验方法 实验试剂及试药：
大黄药材粗粉2Kg，氯仿500ml 10瓶，浓硫酸2瓶，浓盐酸2瓶，冰醋酸，苯，乙酸乙酯，碳酸钠（5% Na2CO3溶液3000ml），碳酸氢钠（5% NaHCO3溶液3000ml），氢氧化钠（5% NaOH溶液1000ml），氢氧化钾，醋酸镁试剂等。实验仪器设备：
500ml圆底烧瓶10个，冷凝回流管10只，500ml分液漏斗10只，500ml烧杯20只，100-250ml量筒10只，常压漏斗（5-10cm斗径10只），定性滤纸（10cm）2盒，毛细管点样器1盒，玻璃喷瓶4套，广谱PH试纸5盒，纱布一卷，多孔水浴锅5台，旋转蒸发仪2台
1．大黄总蒽醌苷元的提取
大黄粗粉50g
加20%的硫酸水溶液100ml，加氯仿250ml，水浴回流2小时，过滤，测量滤液体积
残渣 氯仿溶液
注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒；②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。
2．总蒽醌苷元的分离与精制 大黄酸的分离与精制 将含有总游离蒽醌的氯仿液250ml移至1000ml的大分液漏斗中，加PH8缓冲液（5% NaHCO3溶液）125ml振摇萃取（3次，每次125ml，至碱液无色），静置至彻底分层，放出氯仿液后，倒出碱水液至置500ml烧杯中，加HCl酸化至PH=3，待黄色沉淀析出完全后，过滤、干燥，干燥后的样品加冰醋酸10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。大黄素的分离与精制
将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH9.9缓冲液（5%NaCO3溶液）125ml振摇萃取（3次，每次125ml，至碱液无色），275ml振摇萃取，彻底分层后，分出碱水层，并用HCl酸化至PH=3，析出棕黄色沉淀，过滤，沉淀经干燥后，用10ml冰醋酸加热使溶，趁热过滤，析出橙色大针晶，过滤后，即得大黄素纯品。
芦荟大黄素的分离和精制
余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH(9:1)碱水液125ml或用0.5%KOH125ml振摇萃取，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤干燥，用10ml乙酸乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。3.鉴定
1.化学检识：分别取总蒽醌提取物少许，用乙醚溶解，做如下反应： A：碱液试验：取试液1ml，加20%NaOH数滴，观察颜色。B．醋酸镁反应：取试样1ml，加醋酸镁试剂数滴，观察现象。2．薄层鉴定： 吸附剂：硅胶-CMC 展开剂：C6H6-EtOAc(3:2或97：9)。
显色剂：（1）氨蒸气熏。（2）5%KOH喷雾。
（四）实验指导
1．本实验讲解要点及注意事项。① PH梯度萃取的原理及注意事项。② 如何设计萃取分离方案的程序与方法。
③ 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步最好用新鲜CHCl3，回洗碱水液。
⑤ 缓冲液的配制和碱液的配制要准确，严格注意检查。2．实验报告要求
① 记录大黄总蒽醌的提取方法及总蒽醌的分离程序（包括溶剂用量）。② 总蒽醌的显色鉴别结果。
③ 记录大黄素、大黄酸、芦荟大黄素的精制方法及薄层色谱鉴别结果。
实验四
黄连中盐酸小檗碱的提取、精制和鉴定
黄连为毛莨科黄连属植物黄连、三角叶黄连或云连等的干燥根茎。具有清热燥湿、清心除烦、泻火解毒的功效。黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要有：小檗碱（Berberine），又名黄连素，巴马丁、黄连碱，甲基黄连碱、药根碱、表木兰碱等，其中以小檗碱含量最高，可达10%左右，且以盐酸盐的状态存在于黄连中。小檗碱盐酸对痢疾杆菌、葡萄球菌和链球菌等均有显著抑制作用，临床用于治疗细菌性痢疾和胃肠炎等，无耐药性和副作用。
一、实验目的：
1、掌握盐酸小檗碱的一种提取方法，熟悉盐析法、重结晶法。
2、掌握小檗碱的结构特点，特殊的理化性质和薄层鉴定方法。
3、通过实验熟悉和掌握柱层析法的分离原理及操作技能。
二、小檗碱的结构及性质
小檗碱为黄色长针状结晶，具5.5个结晶水，m.p145℃，能缓缓溶于冷水中（1：20），微溶于冷乙醇（1：100），易溶于热水和热乙醇，微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮，与酸结合成盐时失去一分子水，其硝酸盐和氢碘酸盐极难溶于水，盐酸盐微溶于冷水，较易溶于沸水，其硫酸盐，构椽酸盐在水中溶解度较大。盐酸小檗碱为黄色结晶，含2分子结晶水，220℃左右分解为棕红色小檗红碱，285℃左右完全溶融，UVλmax265nm，343nm。游离小檗碱易和1分子丙酮或1分子氯仿或1.5分子苯结合成一黄色络合物晶体。
三、实验原理
本实验利用小檗碱与含氧酸（硝酸例外）所成盐在水中溶解度较大的性质，采用稀硫酸将其以硫酸盐形式提取出来，再根据小檗碱与氢卤酸所成盐在水中溶解度较小的特点，在将小檗碱游离后，加入盐酸使其形成盐酸盐，结合成盐析法，使之沉淀析出。
四、实验内容
1、提取
取黄连粗粉25克，加入0.2%H2SO4液200ml加热煎煮1小时（注意随时补充蒸发损失的溶剂），纱布过滤，残渣再加0.2%H2SO4液200ml 加热煎煮45分钟，纱布过滤，两次滤液合并。向滤液中加入石灰乳调节pH12，抽滤，再向抽滤所得的滤液中滴加浓HCl，调节pH2-3，然后加入8%（W/V）氯化钠，搅拌并使完全溶解，并继续搅拌至溶液出现微浊现象为止，放置过夜。则有盐酸小檗碱沉淀析出。
2、分离及精制
抽滤，得盐酸小檗碱粗品，水洗，加适量蒸馏水加热溶解，趁热抽滤，滤液放置，则有盐酸小檗碱结晶析出。再进行重结晶：即滤取结晶，加入适量乙醇，水浴加热溶解，趁热抽滤，滤液放置结晶。待盐酸小檗碱析出完全后，滤出，80℃干燥，得成品。
3、盐酸小檗碱的检识
（1）取盐酸小檗碱少许，加10%稀硫酸适量使之溶解后，加入一点漂白粉，即显樱红色。
（2）取盐酸小檗碱少许，加热使其溶于水中，加10%NAOH使呈强碱性，然后滴加丙酮数滴，可见有黄色结晶性的小檗碱丙酮加成物生成。
4、柱层析分离
吸附剂：12克氧化铝（80-100目）
层析柱：1х40cm玻璃柱（也可用碱式滴定管代替）洗脱剂：95%乙醇
（1）氧化铝吸附柱的制备（湿法装柱）
取一根25cm碱式滴定管代作层析管用，管的下端套一段约3-4cm长的乳胶管，在乳胶管上夹一螺旋夹，以控制洗脱液流出速度。在层析管的下端填一层松紧合适平整的脱脂棉。将此层析管垂直地固定在铁架台上，关闭螺旋夹。
管内先加入一定体积的洗脱剂（此处用95%乙醇），打开螺旋夹，放出管内乙醇，将层析管下端的脱脂棉内的空气充分赶尽，然后再向层析管中加入一定体积的乙醇。
取中性氧化铝（100-200目）12克于烧杯中，加一定体积的乙醇调成浆状，赶尽其中气泡，然后通过小玻璃漏斗将浆状氧化铝徐徐注入注中，并同时打开下端螺旋夹，让洗脱剂缓缓流出，不断用手轻轻振动玻璃柱，使氧化铝沉降均匀。当柱内液面接近氧化铝柱面时，关闭螺旋夹。（2）样品的加入
称取50-100mg盐酸小檗碱，加少量95%乙醇于水浴上加热溶解，用滴管沿层析管壁小心加入，勿使氧化铝柱面受到振动。找开螺旋夹，当液体表面下降接触氧化铝时，关闭螺旋夹。（3）洗脱
用滴管吸取95%乙醇，经管壁轻轻加入柱内，打开螺旋夹，控制流速20-30滴/分钟，不断加入洗脱剂，使洗脱剂的液面始终高于氧化铝。待氧化铝柱上呈现数段不同颜色的色带时，继续冲洗，使其彼此分离，并收集鲜黄色带，此段为盐酸小檗碱，其余色带为其它成分。
5、薄层层析鉴定 薄层板：硅胶G-CMC板
样品：实验所得精制盐酸小檗碱的醇溶液 对照品：1%盐酸小檗碱的醇溶液
展开剂：氯仿：甲醇=7：2，氨水饱和20分钟 展距：10cm 显色：自然光下观察 结果：计算Rf值
五、实验说明及注意事项
1、整个操作过程，氧化铝柱表面应保持一定高度的溶剂（洗脱剂），不得使柱面溶剂流干。
2、一般采用等量收集洗脱液流份。每份洗脱剂体积的毫升数，一般与吸附剂重量相近。如果洗脱剂极性较大或样品各组份结构相近似时，每份收集量要小；
3、洗脱时流速不宜过快，太快时柱中交换来不及达到平衡，影响分离效果；
4、由于氧化铝表面活性较大，有时会促使某些成分发生变化，应在短时间内完成一个柱层析的分离，以免样品在柱上起异构化、氧化、皂化、水合以及脱氢形成双键等反应。样品在柱上会扩散也会影响分离效果。
5、氧化铝的粒度一般为100-200目，用量一般为样品量的20-50倍，根据被分离的化合物而定，有时可达100-200倍。硅胶吸附柱层析粒度一般为100-160目或160目以上，用量为样品量的30-60倍，较难分离的化合物可选用500-1000倍。
六、思考题
1、采用柱层析分离时应注意哪些方面的问题？
2、为什么本实验采用氧化铝而不采用硅胶作吸附剂？ 实验三
槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定
芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。槐花米为豆科植物槐花的未开放花蕾。味苦性凉，具清热、凉血、止血之功。槐花的主要化学成分为芦丁，又名芸香甙，含量可达12-16%。
芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
芦丁具有维生素P样作用。可降低毛细管前壁的脆性和调节渗透性，有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，临床上用作毛细管脆性引起的出血症，并常用作防治高血压病的辅助治疗剂。现在国处也常用芦丁作食品及饮料的染色剂。
一、实验目的
1．通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。2．掌握芦丁的一种提取、精制方法及提制过程中防止甙水解的方法。3.掌握黄酮甙水解生成甙元的方法及二者之间的分离。4．熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。
二、实验原理
本实验主要是利用芦丁中含有较多的酚羟基，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出芦丁结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。芦丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、李糖，并能通过纸层析鉴定。芦丁及槲皮素还可通过化学反应及紫外光谱鉴定。
三、实验材料
槐米、活性炭、石灰乳、0.4％硼砂水溶液、2％的硫酸溶液、浓盐酸、正丁醇、冰醋酸、蒸馏水、1％的氢氧化钠溶液、1％的三氯化铝乙醇溶液、1％槲皮素乙醇溶液、95％乙醇、广泛pH试纸、中速层析滤纸等。
四、实验内容
（一）提取：
称取槐米30g，在乳钵中研碎后，投入300ml0.4％硼砂溶液的沸水溶液中煮沸2-3分钟，在搅拌下加入石灰乳调pH9，煮沸40分钟（注意添加水，保持原有体积，保持pH8~9），趁热倾出上清液，用棉花过滤（或用四层纱布过滤）。残渣加100ml水，加石灰乳调pH9，煮沸30分钟，趁热用棉花过滤（或用四层纱布过滤），二次滤液合并。滤液保持在60℃，加浓HCl，调pH2-3，放置过夜，待析出结晶，过滤，滤饼用蒸馏水洗至pH5-6，抽干，置空气中晾干，得粗制芦丁，称重，计算得率。
（二）精制：
将芦丁粗品悬浮于蒸馏水中，煮沸至芦丁全部溶解，加少量活性炭，煮沸5-10分钟，趁热抽滤，冷却后即可析出结晶，抽滤至干，置空气中晾干，或60~70℃干燥，得精制芦丁，称重，计算得率。
（三）芦丁的水解：
取芦丁1g，研碎，加2％硫酸水溶液80ml，小火加热，微沸回流30-60min，并及时补充蒸发掉的水分。在加热过程中，开始时溶液呈浑浊状态，约10min后，溶液由浑浊转为澄清，逐渐析出黄色小针状结晶，即水解产物槲皮素，继续加热至结晶物不再增加时为止。抽滤，保留滤液20ml，以检查滤液中的单糖。所滤得的槲皮素粗晶水洗至中性，加70％乙醇80ml加热回流使之溶解，趁热抽滤，放置析晶。抽滤，得精制槲皮素。减压下110℃干燥，可得槲皮素无水物。
（四）芦丁、槲皮素及糖的检识 1．颜色反应
① α-萘酚-浓硫酸（Molisch）试验：
取芦丁少许置于试管中，加乙醇1ml振摇，加α-萘酚试剂2~3滴振摇，倾斜试管，沿管壁徐徐加入0.5ml浓硫酸，静置，观察两层溶液界面变化，出现紫红色环者为阳性反应，表示试样的分子中含有糖的结构，糖和甙类均呈阳性反应，比较芦丁和槲皮素的不同。②盐酸-镁粉试验：
取芦丁少许置于试管中，加5％乙醇2ml，在水浴中加热溶解，滴加浓盐酸2滴，再加镁粉约50mg，即产生剧烈的反应。溶液逐渐由黄色变为红色。③ 三氯化铁试验
取样品水或乙醇液，加入三氯化铁试剂数滴，观察颜色变化。④三氯化铝试验：
取芦丁少许置于试管中，加入甲醇1~2ml，在水浴中加热溶解，加1％三氯化铝甲醇试剂2~3滴，呈鲜黄色。以同样方法试验槲皮素。⑤醋酸镁试验：
取芦丁少许置于试管中，加入甲醇1~2ml，在水浴中加热溶解，加1％醋酸镁甲醇试剂2~3滴，呈黄色荧光反应。以同样方法试验槲皮素（反应也可在滤纸上进行，观察荧光）。⑥ 氧氯化锆-枸橼酸试验：
取芦丁少许置于试管中，加甲醇1~2ml，在水浴上加热溶解，再加2％氧氯化锆甲醇试剂3~4滴，呈鲜黄色。然后加2%枸橼酸甲醇试剂3~4滴，黄色变浅，加蒸馏水稀释变无色。以同样方法试验槲皮素进行对照。⑦ 氢氧化钠试验：
取芦丁少许置于试管中，加水2ml振摇，观察试管中有无变化。滴加1％氢氧化钠溶液数滴，振摇使溶解，呈黄色澄清溶液。再加入1％盐酸溶液数滴使呈酸性反应，则溶液由澄清转为浑浊状态。2．色谱检识
(1)槲皮素和芦丁的薄层鉴定 ①聚酰胺薄层色谱：
固定相：聚酰胺薄层板
样品：a 精制芦丁
b 芦丁标准品
c 精制槲皮素 展开剂：氯仿-甲醇-丁酮-乙酰丙酮：(16：10：5：1)显色：a 可见光下观察色斑，再于紫外灯下观察荧光斑点
b 喷洒AlCl3乙醇液后观察。②硅胶薄层色谱
吸附剂：硅胶G，105℃下活化2h 展开剂：a.氯仿：甲醇：甲酸（15：5：1）
b.氯仿：丁酮：甲酸（5：3：1）
显色剂：1%FeCl3和1%K3[Fe(CN)6]水溶液，应用时等体积混合。(2)芦丁和槲皮素的纸色谱检识：
支持剂：新华层析滤纸（中速、20cmХ7cm）样
品：自制1％芦丁乙醇溶液
对照品：1％槲皮素标准品与1％芦丁标准品乙醇溶液 展开剂：a.正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5上层）
b.15％醋酸水溶液 展距：10-15cm 显色：a.在可见光下观察斑点颜色，再在紫外灯下观察斑点颜色
b.喷三氯化铝试剂呈黄色斑点
c．经氨气熏后再于可见、紫外下观察。
(3)糖的纸色谱检识：取上述芦丁水解后的母液20ml，加入氢氧化钡细粉（约2.6g）中和至pH7，滤除生成的硫酸钡沉淀（可用滑石粉助滤）。滤液中水浴中浓缩至1~2ml，供纸色谱点样用。
支持剂：新华层析滤纸（中速、20cmХ7cm）样
品：水解浓缩液
对照品：a.葡萄糖标准品水溶液
b.鼠李糖标准品水溶液 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5上层）
显
色：a.喷苯胺-邻苯二甲酸试剂，于105℃加热10min，显棕色或棕红色斑点
b.喷氨性硝酸银试剂，于100℃左右加热，呈棕褐色斑点。
五、实验说明及注意事项
1．本实验采用碱溶酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。在提取前应注意将槐米略捣碎，使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除支。pH应严格控制在8-9，不得超过10。因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芸香甙水解破坏，使提取率明显下降。酸沉一步pH为2-3，不宜过低，否则会使芸香甙形成盐溶于水，降低了收率。
2．提取过程中加入硼砂水的作用：即能调节碱性水溶液的pH，又能保护芸香甙分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芸香甙不受损失。
3．芸香甙的提取方法除了用碱溶酸沉法外，还可利用芸香甙在冷水及沸水中的溶解度不同，采用沸水提取法。又报道将生产工艺改进为95%乙醇回流提取后回收醇得浸膏，然后将粗浸膏经除去脂溶性杂质后，用水洗净，过滤，干燥即得芸香甙，可提高收率6．96%，并降低了成本。因此可根据不同原料采用各种不同方法提取。
4．槲皮素以乙醇重结晶时，如所用的乙醇浓度过高（90％以上），一般不易析出结晶。此时可于乙醇溶液中滴加适量蒸馏水，使呈微浊状态，放置，槲皮素即可析出。
六、思考题
1．本实验提取过程中应注意哪些问题？
2．根据芦丁的性质还可采用何种方法进行提取？简要说明理由。
七、参考文献
1．海药物研究所：中草药有效成分的提取和分离
234—240页
2．中国医学科学院药物研究所：中草药有效成分的研究(第一分册)219—225
1972 3．日本药学杂志，72(333)1952；76(1210)1956，80(304)1960；80(698)1960 4．Chem，Pharm．
Bull，ll(167)，1963
附录：
一、薄层的制备实验材料：
硅胶G 羧甲基纤维素钠 托盘分析天平薄层玻璃板 薄层玻璃板 烧杯 展开槽 玻棒 量筒 碾钵 烘箱
500g 500g
10*20 5*10 500ml
100ml 100ml 瓶 1 瓶 1 台 10 张 10 张 10 个 10 套 10 个 10 个 10 个 1
台
二、大黄中蒽醌类成分的提取分离鉴别实验材料：
氯仿 乙醚 浓硫酸 浓盐酸 冰醋酸 乙酸乙酯 碳酸氢钠 碳酸钠 氢氧化钠 大黄 大黄素 大黄酸 大黄酚 芦荟大黄素 大黄素甲醚 分析天平烧杯 烧杯 锥形瓶 分液漏斗 玻璃漏斗 布氏漏斗 试管 调温电炉 圆底烧瓶 索氏提取器 真空冷凝管 牛角管 PH试纸 PH试纸 滤纸 铁架台、铁圈
500ml 500ml 500ml 500ml 500ml 500ml 500g 500g 500g 20mg 20mg 20mg 20mg 20mg 1/1000克级 500ml 50ml 50ml 500ml 小号 中号 10－15ml 1-2000瓦 250ml 中号 中号 中号 广泛试纸PH4-8试纸 直径11cm
瓶 10 瓶 2 瓶 4 瓶 2 瓶 10 瓶 2 瓶 2 瓶 2 瓶 1000 g 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 台 20 个 30 个 10 个 10 个 10 个 10 个 20 个 10 个 10 个 10 个 10 个 10 个 10 本 10 本 5 盒 10 套 1-14
三、槐米中芦丁的提取鉴别实验材料：
槐花米 硼砂 氧化钙 浓盐酸 蒸馏水 活性炭 95%乙醇 无水乙醇 α-萘酚 浓硫酸 镁粉 三氯化铁 三氯化铝 甲醇 醋酸镁 二氯氧化锆 柠檬酸 枸橼酸 冰醋酸 正丁醇 芦丁 槲皮素 分析天平烧杯 烧杯 锥形瓶 分液漏斗 玻璃漏斗 布氏漏斗 试管 调温电炉 水裕锅 滴管
新华层析滤纸 纸层析缸 玻棒 研钵 PH试纸 抽滤瓶 量筒 滤纸
脱脂棉或医用纱布
500g 500克 500ml
500ml 500ml 50g 500ml 500克 100g 100g 500ml 100g 100g 500ml 500ml 500ml 500ml 200mg 20mg
1/1000克级 50ml 500ml 50ml 500ml 小号 中号 10－15ml 1-2000瓦 2-4孔
中速20cm*7cm
中号 1-14广泛试纸 500ml 100ml 直径11cm 600 克 1 瓶 1 克 1 瓶 10L
200g 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 台 20 个 10 个 20 个 10 个 10 个 10 个 50 个 10 个 2 台 20
个 盒 10 个 10 个 10 个 10 本 10 个 10 个 5 盒 卷 2
四、黄连中盐酸小檗碱的分离鉴别实验材料：
黄连药材 浓盐酸 浓硫酸 氧化钙 氯化钠 无水乙醇 氢氧化钠 丙酮 氯仿 甲醇
中性氧化铝95%乙醇 氨水 蒸馏水 分析天平烧杯 烧杯 锥形瓶 玻璃漏斗 布氏漏斗 抽滤瓶 水裕锅 硅胶薄层板展开槽 玻棒 PH试纸 量筒 滤纸
碱式滴定管滴管、胶帽螺旋夹 铁架台 铁夹
500ml 500ml 500克 500克 500ml 500克 500ml 500ml 500ml 500g 500ml 500ml
1/1000克级 500ml 50ml 100ml 大号 中号 500ml 4-8孔 自制
1-14广泛试纸100ml 直径11cm
500g 克 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 5 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 1 瓶 5 瓶 1 瓶 10L 台 20 个 10 个 10 个 10 个 5 个 5 个 2 台 10 块 10 个 15 个 4 本 10 个 10 盒 12 支 12 个 12 个 10 个 20 个
第二篇：天然药物化学实验讲稿
作者：杨明利
天然药物化学实验（本科）讲稿
第一章
黄柏中小檗碱的提取、分离与鉴定
教学目的要求掌握黄柏中小檗碱(季胺型生物碱)的提取原理和方法。掌握干法装柱和湿法装柱的操作方法
1、掌握鉴定小檗碱(已知化合物)的一般方法。教学重点难点季铵型生物碱的理化性质及提取方法。
2、渗漉法的操作过程及注意事项。
3、结晶法的注意事项
4、掌握薄层色谱鉴定的方法实验一
黄柏中盐酸小檗碱的提取
（一）实验原理
根据黄柏中含粘液质较多的特点，首先用石灰乳使粘液质生成难溶于水的钙盐，用碱水自黄柏中提出小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出。小檗碱能缓缓溶解于水中，在冷乙醇中的溶解度不大，但易溶于热水或热乙醇，难溶于苯、氯仿、丙酮。小檗碱与酸结合脱去一分子水而成盐。小檗碱盐酸盐在冷水中溶解度小，较易溶于沸水，几不溶于乙醇，小檗碱的硫酸盐、磷酸盐在水中溶解度较小，与大分子有机酸生成的盐在水中的溶解度很小。黄柏中主要含有小檗碱，其结构如下
OOO+NOHOMeOMeOON:OHOMeOMeONHCHOOMeOMe
季铵式（红棕色）
醇式（黄色）
醛式（黄色）
小檗碱的三种互变异构体
川黄柏含小檗碱约1.37％～5.8％，关黄柏含小檗碱约0.60％～1.64％。作者：杨明利
天然药物化学实验（本科）讲稿
黄柏粗粉石灰乳搅拌 均匀，水浸渍后 渗漉渗漉液加入总体 积10％NaCl，静置，过 滤沉 淀溶于20倍量沸水趁热抽滤不 溶物滤液浓HCl至pH2，放置，过 滤滤液沉 淀 纯 水洗 至中性，抽干(二)实验方法
盐 酸小檗碱
实验二 黄柏中盐酸小檗碱的纯化及鉴定
一、纯化
1.湿法装柱色谱法
吸附剂：中性氧化铝(100～200目)35g置于烧杯中，加入50ml 95％乙醇，调成浆状，湿法装柱。
上样：取50～100mg自制盐酸小檗碱，溶于少量95％热乙醇中，加入色谱柱中。洗脱：95％乙醇洗脱，收集开始流出的鲜黄色带，即为纯化的盐酸小檗碱。2.结晶法
抽率上次提取液，将得到的滤饼用少量水加热溶解，趁热抽率，滤液放冷等待析晶，再抽率得到晶体，即盐酸小檗碱纯品。
二、薄层色谱鉴定
将提取分离出的盐酸小檗碱样品与盐酸小檗碱的对照品共薄层色谱，比较其Rf值是否一致。
吸附剂：硅胶G薄层板
展开剂：① 苯一醋酸乙酯一异丙醇一甲醇一水(6：3：1.5：l.5：0.3)，氨蒸汽饱和。
②氯仿-甲醇-氨水(15：8：1)
显色剂：改良碘化铋钾试剂
1、渗漉前为什么要加入石灰乳搅拌？ 2.提取时加氯化钠的作用是什么？
3、在制备薄层色谱板时有哪些注意事项？ 第四章
芦丁的提取、分离、精制和鉴定
1、掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、掌握黄酮苷的水解原理及操作
3、掌握黄酮类及糖类化合物的检识。
1、碱溶酸沉法提取的原理
2、黄酮的检识反应实验七
槐米中芦丁的提取 作者：杨明利
天然药物化学实验（本科）讲稿
实验原理：芦丁结构中具有酚羟基，显酸性，可用碱溶酸沉法提取，碱用石灰水，酸用浓盐酸。
实验步骤：
称取槐米30g，在乳钵中研碎，置l000ml的搪瓷杯中，加入300ml饱和石灰水①(以棉花过滤至澄明)加热煮沸30分钟，趁热过滤(以棉花)，残渣再用200ml饱和石灰水煮沸30分钟。趁热过滤，合并两次滤液．加浓盐酸(边加边搅拌)调PH3～4②(放置过夜)次日倾出上清液，抽滤沉淀，蒸馏水洗至PH5～6，70℃干燥，得粗芦丁。注意：
①加石灰乳既可以达到碱溶解提取芦丁目的还可以除去槐花米中的多糖类、粘液质等。②酸化时PH过低会使芦丁形成烊盐而降低收率。
实验八 芦丁的精制、水解及鉴定
实验原理：芦丁在水中热溶冷不溶，可用水做溶剂，利用结晶法精制芦丁。
一、芦丁（芸香苷）的精制
水结晶法：率上次提取液，得芦丁粗品，加蒸馏水300ml，煮沸至芦丁全部溶解，趁热立即抽滤，冷却后即可析出结晶，抽滤，60～80℃烘干，得芦丁精制品。
二、芦丁的水解和槲皮素的分离
取芦丁1g置500ml圆底烧瓶中加2％H2SO4100ml回流30分钟，(加热约数分钟后，溶液完全澄清，20分钟后又逐渐析出黄色针状结晶)过滤即得槲皮素．必要时用稀乙醇重结晶即可得以含2个分子结晶槲皮素，110℃真空干燥，即可得无水物。滤液：供糖的鉴定。
三、化学鉴定
取芦丁3～4mg，加乙醇5～6ml使溶解，制成样品溶液A，取槲皮素3～4mg，加乙醇5～6ml使溶解，制成样品溶液B，取芦丁的水解滤液为C，按下列方法进行试验。呈色反应
(1)盐酸－镁粉反应
取样品溶液A和B各1～2ml，分别加2滴浓盐酸，再酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。
(2)锆盐－枸橼酸反应
取样品溶液A和B各1～2ml，分别滴加2％ZrOCl2的甲醇溶液3～4滴。注意观察颜色变化情况，再继续向试管中加入2％枸橼酸的甲醇溶液3～4滴，并详细记录颜色变化情况。
(3)a-萘酚反应(Molish反应)取样品溶液C l～2ml，然后再加10％a-萘酚乙醇溶液2～3滴，摇匀，沿管壁缓缓加入浓硫酸lml，注意观察溶液界面产生的颜色变化。作者：杨明利
天然药物化学实验（本科）讲稿
槐花米粗粉（20g）置500ml烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入石灰乳（1~1.5g），调至PH8~9，加热至微沸，保持30min，趁热抽滤。残渣滤液在60~70℃下用浓盐酸调至PH4~5，精置1hr,抽滤。滤液沉淀（粗制芦丁）重结晶将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15min，趁热过滤残渣滤液充分静置后过滤，60~70℃下干燥芦丁（精制品）
2、薄层色谱鉴别（糖的纸色谱鉴定）
点样：取新华一号滤纸，15厘米长，宽度按需要决定。用毛细管点上以下溶液：
1、水解浓缩液
2、葡萄糖(Rf0.18)对照品溶液
3、鼠李糖(RfO.37)对照品溶液 展开：用正丁醇一醋酸一水(4：1：5)上行展开。
显色：喷苯胺-邻苯二甲酸试剂，于100℃加热5分钟
1、简述碱溶酸沉法的原理。
2、芸香苷水解时为何会出现沉淀——澄清——沉淀的现象
3、怎样确定芦丁结构中糖基是连接在槲皮素C3-OH上? 第二章
大黄中游离蒽醌成分的提取、分离和鉴定
1、掌握PH梯度萃取法的原理和操作技术。
2、掌握柱色谱法分离精制大黄酚的实验方法。
3、掌握羟基蒽醌类化合物的理化性质及鉴定方法。
1、PH梯度萃取法的原理和操作技术
2、柱色谱法分离精制大黄酚的实验方法
3、羟基蒽醌类化合物的理化性质及鉴定方法实验三 大黄中蒽醌类化合物的提取 作者：杨明利
天然药物化学实验（本科）讲稿
虎杖粗粉95%乙醇回流三次,滤过药渣滤液减压回收乙醇至干膏状物加水20ml,乙醚100ml,充分振摇后放置,倾出醚层,再加50ml乙醚振摇,放置,倾出醚层,同法操作五次.醚层І(总游离蒽醌)剩余物(含苷类)实验四
大黄中游离蒽醌的分离及鉴定
1、化学检识：分别取大黄素、大黄酚等少许，用乙醚溶解，做如下反应： A．碱液试验：取试液1ml，加20%NaOH数滴，观察颜色。B．醋酸镁反应：取试样1ml，加醋酸镁试剂数滴，观察现象。
2、薄层鉴定：
吸附剂：硅胶G－CMC-Na板
展开剂：石油醚（30~60℃）-乙酸乙酯-甲酸(15：5：1)上层溶液。
显色剂：（1）氨蒸气熏。（2）5%KOH喷雾。
[实验说明及注意事项]
(1)在乙醚提取过程中，如乙醚挥发，可酌量补加。
(2)加HCl酸化时产生大量CO2气体,小心防止气体产生时，内容物溢出。
醚层 І5%NaHCO3液萃取完全5%NaHCO3液乙醚层6NHCl调PH至2,5%Na2CO3液萃取完全稍放置,滤过5%Na2CO3液乙醚层2%NaOH萃取4～5次浓HCl调PH至2,滤液沉淀放置,滤过水洗至中NaOH液乙醚层沉淀物性,干燥HCl调PH至3,(β-谷甾醇)水洗至中性,抽放置,抽滤强酸性成分干,干燥,依次以丙酮、甲醇重沉淀物结晶水洗至中性,抽干,干燥,以MeOH-大黄素结晶CHCl3重结晶大黄酚和大黄素-6-甲醚混合物
1、PH梯度萃取法的原理是什么?适用哪些中药成分的分离? 作者：杨明利
天然药物化学实验（本科）讲稿
2、大黄酚、大黄素和大黄素-6-甲醚酸性及极性强弱，应如何排列?
3、根据虎杖中所含羟基蒽醌的结构，说明为什么它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？
第八章
天然药物化学成分的预试验
1、掌握植物主要成分试管预试及纸色谱、薄层色谱预试的一般方法。
2、了解未知成分的植物怎样进行初步分离，根据各类化合物的性质，判断该植物应含有什么类型的成分。
1、药物化学预试验的意义
2、药物化学预试验的操作流程 实验十五
天然药物化学成分的预试验
一、样品液的制备液
1、水提取液
取样品粉末10g(过20目筛)，加水10倍量，室温浸泡过夜，滤取部分滤液，供检查氨基酸、多肽、蛋白质。剩余滤液和滤渣在60℃水浴中加热10分钟～1小时，过滤，滤液供检查糖、多糖、皂苷、苷类和鞣质、有机酸盐、生物碱盐等。
2、乙醇提取液
乙醇提取液可供黄酮、蒽醌、苷类、生物碱、有机酸、鞣质、香豆精、萜类、甾类及内脂化合物等项的检查。提取方法如下：
二、各类成分的检查
（一）氨基酸、多肽、蛋白质的检查
l、加热沉淀试验
取检液，加热至沸，如出现浑浊或沉淀时，表明有蛋白质；加入5％硫酸溶液也能出现沉淀。
2、茚三酮试验(Ninhydrin)取检液，加入0.2％茚三酮的水溶液后，在沸水浴上加热5分钟，冷后，如有蓝或蓝紫色反应，表明含有氨基酸、多肽、或蛋白质；或将试液滴在滤纸片上，加入或喷洒0.2％印三酮溶液后，在100℃左右烘烤2分钟．如有氨基酸和肽则呈现紫红色或蓝色斑点，也有少数氩基酸呈黄色斑点。
（二）糖、多糖的检查
α-萘酚试验(Molish反应)取检液．加热浓缩，使溶于乙醇中，再加等体积的10％α－萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，二液界面处产生紫红色环，表示有糖、多塘、苷类。
（三）酚类成分的检查
三氯化铁试验
取检液，加入l％三氯化铁乙醇溶液．溶液如呈现绿、蓝绿或暗紫色等，则有酚性成分存在，若有鞣质存在同样呈现正反应．可水解鞣质多呈蓝色．缩合鞣质多呈绿色。
（四）有机酸的检查
溴酚蓝试验
将检液滴在滤纸片上，再滴加0.1％溴酚蓝溶液，立即在蓝色的背景上显黄色斑点；如不够明显，再喷洒氨水，然后暴露在盐酸气体中，背景逐渐由蓝色变为黄色，而有机酸的斑点仍然为蓝色。(五)皂苷的检查
泡沫试验
取检液，置于试管内，激烈振摇，如产生持续性泡沫，就可能含有皂苷、高级脂肪酸、蛋白质、粘液质。皂苷和脂肪酸盐，泡沫特别显著，在试管内能持续10分钟以上，即使加热、加乙醇，泡沫也不明显地减少。(六)黄酮类化合物的检查
盐酸－镁粉试验
取检液，加入数滴浓盐酸及少量镁粉(或锌粉)，溶液如现樱红色，表示含有黄酮类化合物。如乙醇提取液加浓盐酸而不加镁粉即出现红色，表明含有花色素。(七)蒽醌的检查
碱液试验
取检液，加入10％氢氧化钠溶液，如产生红色，加入少量30％过氧化氢溶液．加作者：杨明利
天然药物化学实验（本科）讲稿
热，红色不褪，加酸使呈酸性．则红色消褪，表明含有蒽醌化合物；冷后，加乙醚振摇，加人氨液显红色。(八)香豆素的检查
荧光试验
将检液滴在滤纸片上，干燥后，在日光下观察，有的香豆精类成分，可显天蓝色荧光，若于紫外灯下观察，多数香豆精类成分的蓝色荧光可转变为绿色荧光。呋喃骈香豆精类成分多显黄绿色荧光。
（十）生物碱的检查
碘化铋钾试剂：取检液三份，分别加人碘化汞钾试剂，如产生白色或淡黄色沉淀；加入碘化铋钾试剂，如有桔红色沉淀，或加入硅钨酸试剂，如有淡黄或灰白色沉淀，均表明含有生物碱。
上述各种成分的预试验，仅仅是为进一步提取分离有效成分提供初步的线索。由于植物中各成分的复杂性和相互间的干扰，各种定性反应都有例外情况。根据预试结果，就作出某种成分存在与否的结论是不全面的。例如碘化铋钾试剂，不仅对生物碱发生反应，对碱性氨基酸、生物胺等同样也发生反应。生物碱沉淀反应作为预试，如呈阴性还有一些意义，阳性反应则不能肯定就是生物碱存在。但通过预试，可以对中药成分有一大致了解，告诉我们可能含有的某类成分，如生物碱、糖类、苷类等，再配合薄层色谱，可进一步了解其中所含单体的个数和情况。系统预试虽有上述一些缺点，但在目前仍不失为检查中药化学成分的常用的简便方法。这类方法在今后的工作中，还需要不断地充实和改进。天然药物化学成分预实验的意义和方法？第五章
薄荷中挥发油的提取及鉴定1.掌握挥发油类成分的提取和鉴定方法 2.熟悉挥发油的组成、性质和生物活性
3.了解薄荷中的化学成分和药用价值重点：水蒸气蒸馏法提取薄荷挥发油的原理及操作要点。
难点：道尔顿分压定律
实验九
薄荷中挥发油的提取及鉴定
一、薄荷中挥发油的提取
取薄荷40g撕碎，置挥发油含量测定器1000ml烧瓶中，加350ml水与少量沸石，连接 挥发油含量测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并使溢流入烧瓶时为止，缓缓加热至沸提取，至测定器中油量不再增加，停止加热，防冷，分取油层，计算得率。
二、薄荷中挥发油的鉴定 薄层色谱法
活化--点样—饱和—展开—计算Rf—喷香草醛-浓硫酸显色 观察斑点数目和颜色，并做记录。1.挥发油的组成？ 2.计算提取率？
第三章
秦皮中香豆素的提取及鉴定
掌握用溶剂法提取、分离香豆素类成分七叶苷和七叶内酯的方法。
七叶苷和七叶内酯均能溶于沸乙醇中，可用沸乙醇将二者提取出来，利用在乙酸乙酯中两者溶解度的不同而分离之。实验五、六
秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取、分离及鉴定
（一）提取与分离
作者：杨明利
天然药物化学实验（本科）讲稿
二）鉴定 1.荧光实验
2.异羟钨酸铁试验 3.TLC 展开剂：甲苯-甲酸甲酯-甲酸（5：4：1）样品：七叶苷、七叶内酯及其对照品的甲醇溶液 显色剂：紫外等下观察荧光
1.萃取时，如何选择溶剂？
2.一般情况下，都有哪几种方法用于分离苷和苷元？ 第六章
绞股蓝总皂苷的提取分离及鉴别 1．掌握皂苷的提取方法。
2．熟悉大孔吸附树脂法纯化绞股蓝皂苷的操作技术。
3．熟悉皂苷及其制剂的鉴定方法。
绞股蓝总皂苷有较好的水溶性，可用水为提取溶剂，因为绞股蓝皂苷分子中含有非极性部分三萜母核，故可使其在非极性大孔树脂上能较好地被吸附，相反，极性较大的成分如糖类则在非极性大孔树脂上难以吸附，因而选用非极性大孔吸附树脂D101型可将绞股蓝水提物中的总皂苷与糖类等水溶性成分较好地分离，最后用活性炭脱色，从而达到纯化的目的
实验十
绞股蓝总皂苷的提取
（一）提取
取绞股蓝粗粉5g，加水80ml，超声振荡15min，过滤，残渣再加水60ml，超声振荡15min，过滤，合并两次滤液，用2％氢氧化钠溶液调至pH9～10①，静置，滤除沉淀，滤液备用。
实验十一
绞股蓝总皂苷的纯化与鉴定
（二）纯化
1．大孔吸附树脂的准备
取D101型大孔吸附树脂5g，用95％乙醇浸泡过夜后，湿法装柱（1.0cm×28cm），继续用95％乙醇洗涤至流出液加等量水后几乎无白色浑浊为止。然后用去离子水洗至无醇味。2．纯化 将绞股蓝提取液以2m1／min的速度通过大孔吸附树脂柱②，待溶液全部作者：杨明利
天然药物化学实验（本科）讲稿
进入柱后，用2％氢氧化钠溶液洗涤③，洗涤速度控制在5ml／min为宜。当流出液接近无色时，改用水洗，至流出液pH接近7为止。然后用95％乙醇洗脱，收集醇洗脱液至无绞股蓝皂苷洗出[薄层色谱法检查：硅胶H一CMC-Na板，正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5）上层，5％磷钼酸乙醇液，110℃显色]。醇洗脱液加入少量活性炭回流10min④，趁热过滤，滤液回收乙醇至小体积，水浴蒸干，刮松，得白色鳞片状结晶，为绞股蓝总皂苷。大孔吸附树脂回收。
（三）鉴定 1．呈色反应
（1）醋酐一浓硫酸反应 取绞股蓝总皂苷少许，置蒸发皿中，滴加冰醋酸1ml溶解，再加1ml醋酐，然后于溶液边沿滴加浓硫酸，观察颜色变化。
（2）molish反应取绞股蓝总皂苷少许于试管中，加乙醇1ml溶解，滴加lmlα—萘酚试剂，然后沿试管壁加入2ml硫酸，不要摇动，观察两液交界面的颜色。2．薄层色谱鉴别
薄层板：硅胶H—CMC-Na板。
点样：纯化的绞股蓝皂苷乙醇液、人参皂苷Rbl对照品乙醇液。
展开剂：正丁醇-乙酸乙酯-水（4：l：5，上层）。
展开方式：上行展开。
显色：喷5％磷钼酸乙醇液110℃加热显色（约5min）；或喷硫酸-甲醇（1：1）溶液，105℃加热显色。
1.皂苷类成分的结构特征？
2.大孔吸附树脂的操作要点？第七章
汉防己生物碱的提取、分离与鉴定
1、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。
2、熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。
3、掌握结晶法的一般程序和操作方法。
4、掌握薄层色谱法鉴定己知生物碱的方法。
1、回流提取法的操作
2、结晶法的一般程序和操作方法
3、薄层色谱法的操作方法及注意事项
实验十二
汉防已总生物碱的提取
取汉防已粗粉50g，置500ml烧瓶中，加95％乙醇150ml，水溶加热回流提取1小时，倾出乙醇提取液；药渣重新加入95％乙醇100ml，继续如上法加热回流提取1小时，合并两次提取液，过滤，滤液置1000ml广口瓶中。
实验十三 汉防已总生物碱的纯化
将滤液倒置与500ml圆底烧瓶中，水浴回收乙醇(注意加沸石)得流浸膏，倾人蒸发皿中，水浴上挥尽残留乙醇，得到糖浆状提取物。将糖浆状提取物转入500ml烧杯中，缓慢加入0.5％硫酸溶液，边加边搅拌，约加入100ml0.5％H2S04，静置，过滤，得澄明滤液。加氨水调至滤液PH11，立即将其转入500ml的分液漏斗中，加入l00ml氯仿，振摇，静置分层，分出氯仿层，碱水液再加氯仿萃取两次，每次60ml，合并三次氯仿萃取液。在氯仿溶液中加入约10～20克无水硫酸钠，充分振摇2min，静置10min，过滤，滤液置于250ml圆底瓶烧中，回收氯仿至少量，转入20ml蒸发皿中，水浴挥尽残留氯仿。残留物用50ml丙酮分次溶入l00ml圆底烧瓶中，水浴加热回流20分钟，趁热过滤，用少量丙酮洗涤滤纸。回收丙酮至原体积的三分之一，放置过夜，析出深黄色沉淀物，即得汉防已总碱。
实验十四
汉防已甲素和乙素的分离及鉴定
汉防已甲素和乙素的化学结构和性质相似，仅一个官能团的差异，前者为甲氧基，后者为酚羟基，利用两个化合物极性的微小差异，采用氧化铝柱色谱法，可获得满意的分离。作者：杨明利
天然药物化学实验（本科）讲稿
1、装柱
取17×400mm层析柱垂直固定在铁架台上，在管的下端垫人少量棉花．称取氧化铝(100一140目)25克，缓缓加入柱中，边加边轻轻振动色谱柱，使氧化铝在柱中填实均匀。
2、上样
称取汉防已总碱0．5克，置于蒸发皿中，加5ml氯仿溶解，另加氧化铝2克，搅拌均匀，并于水浴上缓缓蒸除溶剂，然后将附有样品的氧化铝装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。
3、洗脱
将色谱柱活塞打开，通过分液漏斗缓缓加人氯仿洗脱液。每分钟流速2-3ml，用三角锥瓶收集流份，每个流份收集洗脱液15ml，并依次编号，氯仿洗脱约150ml后，改用甲醇洗脱约50ml。
4、检查
依次将各流份点于硅胶G薄层板上，用氯仿－丙酮－甲醇(6：1：1)为展开剂，展开，挥干溶剂，喷以碘化铋钾试液，比较各流份的Rf值，合并相同Rf值的流份。
1、用回流法提取时要注意什么？
2、用结晶法分离时，溶剂选择有何要求？
3、用柱色谱分离时，汉防已甲素和乙素哪个先出柱，哪个后出柱，为什么？
实验七 黄芩中黄芩苷的提取分离与鉴
定
【实训目的】
1、能够运用煎煮法、碱溶酸沉法对黄芩中的黄芩苷进行提取和精制。
2、会用显色反应、色谱法进行黄芩苷的检识。【实训原理】 本实验是根据黄芩中的黄芩苷在植物中以镁盐形式存在，可以被沸水溶出，在
【实训目的】
1、能够运用煎煮法、碱溶酸沉法对黄芩中的黄芩苷进行提取和精制。
2、会用显色反应、色谱法进行黄芩苷的检识。【实训原理】
本实验是根据黄芩中的黄芩苷在植物中以镁盐形式存在，可以被沸水溶出，在酸性（pH1～2）情况下转变成黄芩苷，溶解度降低沉淀析出，从而与共同存在的水溶性杂质分离，进一步精制是利用其钠盐在pH6.5～7时可溶于50％的乙醇，使之与不溶于50％乙醇的杂质分离，在pH1～2时黄芩苷在50％的乙醇中溶解度降低而析出，而得各单体苷元。【实训材料】
设备：托盘天平、电炉、烧杯、离心机、水浴锅、抽滤装置、量筒、玻璃棒、移液管、脱脂棉、温度计、滴管、pH试纸、新华色谱滤纸（15cm×7cm）、硅胶CMC-Na薄层板、展开缸（筒）、试管、试管架 药品：黄芩粗粉、镁粉、锌粉、5％二氯氧锆、2％三氯化铝、盐酸、40％氢氧化钠、95％乙醇、冰醋酸、苯、甲酸乙酯、甲酸、正丁醇、冰醋酸、1％三氯化铝、三氯化铁乙醇试剂、1％黄芩标准品三氯甲烷溶液 【操作步骤】 作者：杨明利
天然药物化学实验（本科）讲稿
1、黄芩苷的提取
称取黄芩粗粉100g，加10 倍量沸水，并加热煮沸30分钟，随时补充失去的水分，脱脂棉过滤。药渣再加8倍量水煮沸30分钟，过滤。合并两次滤液。加浓盐酸调pH1～2，水浴保温80℃30分钟，放置24小时，析出黄色沉淀。离心滤去沉淀中的水分。将沉淀移入500ml烧杯中，加水100ml，充分搅拌使成为均匀的混悬液，滴加40％氢氧化钠溶液调pH6.5～7，使黄芩苷全部溶解，加入等体积95％乙醇，搅匀后于50℃（水浴保温）迅速抽滤，滤液加热至50℃，以浓盐酸调pH1～2，放置（约4小时）使析出沉淀。倾去上清液，沉淀物抽滤，沉淀用蒸馏水抽洗2～3次，抽干，60℃以下干燥，得粗制黄芩苷。
2、黄芩苷的精制
称取黄芩苷粗品，加10倍量水搅拌均匀，以40%氢氧化钠溶液调pH6.5～7，使黄芩苷全部溶解，加活性炭适量拌匀，加热至80℃30分钟（水浴），抽滤除去活性炭渣，滤液用浓盐酸调pH1～2，加入等体积95%乙醇，50℃保温30分钟（水浴），至有沉淀析出时取
第三篇：《天然药物化学》教案
《天然药物化学》教案
一、总学时数、理论学时数、实验学时数、学分数：
（一）总学时数：108学时
（二）理论学时数：54学时
（三）讨论学时数：6学时
（四）实验学时数：48学时
（五）学分数：6学分
二、承担课程教学的院、系、教研室名称
华中科技大学同济医学院
药学院中药系天然药物化学教研室
三、课程的性质和任务
天然药物化学是运用现代科学理论和方法研究天然药物中化学成分的一门学科。
天然药物化学是药学专业的必修专业课，学生在具备有机化学、分析化学、光谱解析、药用植物学基础知识后，通过本课程的教学，使学生系统掌握天然药物化学成分（主要是生物活性成分或药效成分）的结构特征、理化性质、提取分离方法以及主要类型化学成分的生源途径、结构鉴定的基本理论和基本技能，培养学生具有从事天然药物的化学研究、新药开发和生产的能力，为继承、整理祖国传统医药学宝库和全面弘扬、提高祖国药学事业水平奠定基础。
四、所用教材和参考书
（一）所用教材：国家级规划教材，吴立军主编，天然药物化学(第四版)，人民卫生出版社。
（二）参考书：
1、吴寿金、赵泰、秦永琪主编 《现代中草药成分化学》中国医药科技出版社。
2、徐任生主编 《天然产物化学》科学出版社。
3、Nakanishi K.Natural Products Chemistry, Academic Press, New York。
第一章 绪 论
一、学时数：6学时
二、目的和要求
1、掌握天然药物化学的含义、研究对象、性质与任务；
2、掌握天然药物有效成分提取分离的一般原理及常用方法；
3、掌握层析分离法的分类及其原理、各种层析分离要素、相关因素及应用技术；
4、掌握天然化合物结构研究的一般步骤和常用方法；
5、熟悉不同的生物合成途径与各类二次代谢产物生成的相关性
6、了解天然药物化学的发展历史、近代研究成就及发展趋势；
7、了解天然药物化学与药学相关学科的关系；
8、了解天然药物化学在国民经济和药学专业中的作用和地位。
三、重点和难点
1、重点：性质、任务、提取分离、结构鉴定。
2、难点：提取分离原理。
四、讲授的基本内容和要点
（一）绪论
1、天然药物化学的内涵
2、天然药化的研究对象及其任务
3、天然药物化学的发展历史
4、天然药物化学的发展趋势
（二）生物合成
1、生物合成假说的提出
2、植物代谢及其代谢产物
3、“植物亲缘相关性学说”与“植物化学分类学”
4、生物合成途径
5、了解生物合成的意义
（三）提取分离方法
1、概述：天然药物化学成分的构成特点、提取分离前的文献调研
2、天然药物有效成分的提取：常用提取方法、溶剂提取法
3、天然药物有效成分的分离与精制：根据物质溶解度差异、物质分配系数差异、物质吸附能力差异、物质分子大小差异、物质解离程度差异分离
4、提取与分离天然药物有效成分的注意事项：光照、酸碱、温度、溶剂、层析的影响
（四）天然化合物结构研究方法
1、化学结构研究的目的与意义
2、结构研究步骤与方法：查阅文献、纯度测定、物理常数测定、分子量测定（经典法、MS法）、分子式测定（EA法、HR-MS法、NMR法）
3、不饱度计算
4、分子结构骨架测定：专属反应、植物亲缘相关性、光谱特征、部分合成、化学降解
5、功能团推断：化学法、光谱法
6、光谱分析:UV、IR、NMR、MS
（五）天然化合物结构研究实例
五、英语词汇
1、概念词汇：
Chemistry of Constituents of Chinese Traditional and Herbal Drugs、Phytochemistry、Chemistry of Natural Products、Chemistry of Natural Organic Compounds
2、专业及术语词汇： Active Constituents、Active Compounds、Active Extracts、Active Fraction、Inactive Constituents、Biosynthesis、primary metabolites、secondary metabolites、acetate-malonate pathway、mevalonic acid pathway、cinnamic acid – shikimic acid pathway、amino acid pathway、extraction、extracts、isolation、chromatography、CCD、counter current distribution、DCCC、GC、LC、TLC、normal phase、reverse phase、adsorption、adsorbent、partition、fraction、gel filtration、exclusion、Sephadex G、Sephadex LH、mobile-phase、structural identification、structural elucidation、spectral analysis
六、复习思考题
1、天然药物化学的定义、研究对象、任务及其在药学专业中的作用？
2、何谓有效成分、有效部位和无效成分？他们与中药新药研究开发的关系如何？
3、天然化合物生物合成的主要途径有哪些？与主要成分间相关性如何？
4、分离天然化合物的主要依据有哪些？
5、不同的层析法分离天然化合物的要素是什么？吸附薄层层析最佳条件的选择与哪些因素有关？如何调整？何谓边缘效应？如何规避？
6、天然化合物结构鉴定的一般程序如何？“四大”波谱分别提供化合物分子的何种结构信息？
第二章 糖和苷
一、学时数：6学时
二、目的和要求
1、掌握糖和苷的结构特征、分类及苷类化合物的含义；
2、掌握苷的溶解度与分子结构的内在联系，检识糖、苷类化合物反应机理与应用；
3、掌握苷键的裂解的反应机理及其应用；
4、掌握多糖和苷的提取通法及常用的分离方法。
5、掌握苷类化合物结构鉴定的程序和苷键构型的确定方法；
6、熟悉单糖立体化学及苷类化合物中的几个重要的名词、术语；
7、熟悉单糖结构中各类羟基的不同活性及作用于羟基的化学反应；
8、熟悉糖和苷的旋光性质及对结构研究的贡献；
9、了解糖和苷类化合物研究成就与最新研究进展。
三、重点和难点
1、重点：分类、检识反应、苷键裂解、提取通法、糖链结构鉴定程序及苷键构型确定。
2、难点：苷键裂解及苷键构型确定原理。
四、讲授的基本内容和要点
（一）单糖的立体化学；
1、单糖的绝对构型
2、单糖的差向异构体
3、单糖的氧环
4、单糖的构象
（二）糖和苷的分类
1、天然界常见的单糖
2、低聚糖
3、多聚糖
4、苷类：定义、分类、（三）糖的理化学性质
1、溶解性
2、氧化反应
3、糠醛形成反应
4、羟基反应
5、羰基反应
（四）苷键的裂解
1、酸催化水解
2、乙酰解
3、碱催化水解和β消除
4、酶催化水解
5、过碘酸裂解反应
（五）糖的核磁共振性质
1、苷类化合物中糖的1H-NMR特征
2、苷类化合物中糖的13C-NMR特征
3、糖的NMR特征在结构鉴定中的意义
（六）糖链的结构鉴定
1、研究糖链结构的顺序：纯度鉴定、分子量测定、单糖种类鉴定、单糖间及糖与苷元间连接位置确定、糖链连接顺序确定、苷键构型的确定
2、糖链结构研究实例
（七）糖和苷的提取分离
1、酶对糖及其苷类提取的影响
2、提取糖及苷类溶剂的选择
3、糖及苷提取分离纯化的方法
五、专业及术语英语词汇
monosaccharides、anomeric-carbon、anomeric-proton、oligosaccharides、polysaccharides、glycosides、aglycone、genin、Cyanogenic、saccharides、Molish reaction、invertase、maltase、emulsin、glycoside shift
六、复习思考题
1、苷类化合物的含义及其结构特征是什么？常见的分类方法及主要类型有哪些？
2、单糖的D、L系和α、β型的含义是什么？如何判断？
3、何谓原生苷、次生苷、苷元？提取时应注意什么？
4、苷键裂解的常用方法有哪些？各有何优缺点？酸水解的反应机理如何？
5、如何识别天然药物中可能存在糖和苷类成分？Molish反应阳性说明一定是苷类成分存在吗？
6、简述糖链测定的一般程序，如何应用NMR确定苷键的构型？
第三章 苯丙素类
一、学时数：2学时
二、目的和要求
1、掌握苯丙酸类的结构类型；香豆素的理化性质。
2、熟悉香豆素结构类型。
3、了解木脂素的结构特征及结构类型。
三、重点和难点
1、重点：结构类型、化学性质、波谱特征。
2、难点：波谱特征。
四、讲授的基本内容和要点
（一）定义及生物合成途径
（二）香豆素类
1、定义
2、结构类型：简单香豆素、呋喃香豆素、吡喃香豆素、其他香豆素、异香豆素、双香豆素
3、生理活性
4、物理化学性质：溶解性、荧光性质、内酯性质和碱水解反应、Labat 反应、Gibb’s 反应、Emerson 反应、异羟肟酸铁反应、酚羟基反应
5、提取分离：系统溶剂法、真空升华或蒸馏法、色谱法、酸碱分离法
6、波谱鉴定：UV法、1H-NMR法
（三）木脂素
1、概述
2、结构与分类：简单木脂素、单环氧木脂素、木脂内酯、环木脂素、环木脂内酯、双环氧木脂素
五、专业及术语英语词汇
Phenylpropanoids、coumarins、lignan、六、复习思考题
1、苯丙素的母核结构特征是什么？常见的香豆素结构类型有哪些？
2、香豆素的内酯性质、Labat 反应、Gibb’s 反应、Emerson 反应、异羟肟酸铁反应在香豆素类化合物的检识与结构信息中的意义如何？
3、香豆素的紫外特征是什么？
4、木脂素的结构特点是什么？
第四章 醌类化合物
一、学时数：4学时
二、目的和要求
1、掌握醌类衍生物的理化性质及呈色反应。
2、掌握醌类衍生物的结构特征及类型；
3、熟悉蒽醌衍生物提取分离的一般原则和方法；
4、熟悉蒽醌衍生物结构测定的化学方法。
5、了解醌类衍生物的生物活性。
三、重点和难点
1、重点：结构类型、理化性质及呈色反应。
2、难点：呈色反应。
四、讲授的基本内容和要点
（一）结构类型
1、苯醌类
2、萘醌类
3、菲醌类
4、蒽醌类：蒽醌衍生物、蒽酚和蒽酮衍生物、二蒽酮类
（二）理化性质及呈色反应
1、物理性质：性状、升华性、挥发性、溶解性、光稳定性
2、化学性质与呈色反应：酸性、颜色反应（Feigl 反应、无色亚甲兰显色试验、Kesting-Craven 反应、Karius 反应、Borntrager’s反应、醋酸镁反应）
（三）醌类化合物的提取分离
1、一般醌类成分的提取分离：有机溶剂提取法、碱提酸沉法、水蒸气蒸馏法，吸附层析分离法
2、蒽醌类成分的提取分离：游离蒽醌衍生物的分离、游离蒽衍生物与蒽苷类的分离、蒽醌苷类的分离
（四）结构测定
1、衍生物制备：甲基化反应、乙酰化反应
2、波谱分析：UV、IR
五、专业及术语英语词汇
Quinones、benzoquinones、naphthoquinones、phenanthraquinones、anthraquinones
六、复习思考题
1、醌类化合物的母核结构特征及其分类有哪些？写出丹参酮ⅡA的结构；常见蒽醌的结构类型有哪些？写出大黄酚、大黄酸结构。
2、蒽醌类化合物颜色反应的类型有哪些？它们在蒽醌的检识与结构信息中有何意义？
3、以大黄中蒽醌系列化合物为例，排列PH梯度萃取酚酸性成分时碱的强弱顺序与化合物酸性强弱顺序。
4、蒽醌类化合物的UV、IR特征是什么？
第五章 黄酮类化合物
一、学时数：6学时
二、目的和要求
1、掌握黄酮类化合物的主要理化性质和鉴别反应；UV、NMR、MS在黄酮类化合物结构测定中的应用。
2、熟悉黄酮类化合物生物合成的基本途径；黄酮类化合物结构分类及其结构类别间的生物合成关系；黄酮类化合物提取分离原理及主要方法；聚酰胺层析法在黄酮类化合物分离中的应用；
3、了解化学法在黄酮类结构测定中的应用。
三、重点和难点
1、重点：黄酮类化合物的主要理化性质和鉴别反应；UV、NMR、MS在黄酮类化合物结构测定中的应用。
2、难点：黄酮类化合物提取分离原理及主要方法
四、讲授基本内容和要点
（一）概述
1、基本结构和分类
2、黄酮类化合物生物合成的基本途径
3、黄酮类化合物结构分类及其结构类别间的生物合成关系
4、重要黄酮类药物及生理活性成分
（二）黄酮类化合物的理化性质
1、性状
2、溶解度
3、酸碱性
4、显色反应
5、呈色反应与结构的关系
（三）黄酮类化合物的生物活性
（四）黄酮类化合物的提取分离
1、提取
2、精制
3、分离
（五）黄酮类化合物的检识与结构鉴定
1、层析的应用
2、紫外光谱的应用 3、1H-MR谱的应用； 4、13C-NMR谱的应用；
5、MS谱的应用；
6、结构研究实例
五、专业及术语英语词汇
flavone、flavonol、flavanone、flavanonol、chalcone、isoflavone、anthocyanidin、xanthane
六、复习思考题
1、试用电子理论解释为什么黄酮类多显黄色，而二氢黄酮(醇)多无色。
2、黄芩在贮存过程中为什么会变绿?化学成分有何变化?(用化学式表达)
3、就不同的黄酮类化合物的立体结构解释其在水中溶解度规律。
4、应用碱溶酸沉法提取黄酮类化合物时，应注意哪些问题?
5、为什么红花在开花中期为黄色，开花后期或采收干燥过程中颜色渐变为红色或深红色(写出可能的化学反应)?
第六章 萜类和挥发油
一、学时数：6学时
二、目的和要求
1、掌握萜类成分的结构特征和主要类型；主要类型萜类成分的结构、性质；萜类成分的生源途径；重要的理化性质。
2、了解有重要生物活性的萜类化合物。
三、重点与难点
1、重点：萜类化合物的结构特征和主要类型；主要类型中重要代表物的结构和理化性质；萜类化合物的提取分离方法
2、难点：萜类化合物的结构类型；检识与结构鉴定
四、讲授基本内容和要点
（一）概述
1、萜类化合物的含义和分类
2、生物活性及分布
3、萜类化合物的生源学说与生物合成途径
（二）萜类化合物的结构类型及其重要代表化合物
1、单萜
2、环烯醚萜
3、倍半萜
4、二萜
5、二萜半萜
（三）萜类化合物的理化性质
1、物理性质
2、化学性质
（四）萜类化合物的提取分离
1、萜类的提取
2、萜类的分离
3、提取分离实例
（五）萜类化合物的检识与结构鉴定
1、波谱法的应用（UV、IR、MS）
2、结构鉴定实例
（六）挥发油
1、概述（定义、分布、组成和分类、生物活性及应用）
2、挥发油的性质
3、挥发油的提取
4、挥发油的分离
5、挥发油的鉴定
五、专业、术语、重要化合物英语词汇
terpenoids、empirical isoprene rule、monoterpenoids、geraniol、menthol、borneol、camphor、troponoides、iridoids、qinghaosu、artemisinin、a-santonin、azulenoids、diterpenoids、andrographolide、ginkgolides、taxol、curcumol、triptolide、tanshinone ⅡA、stevioside、guanfu base A
六、复习思考题
1、何谓生源异戊二烯法则、挥发油、Girard试剂、萜类化合物、酸值、酯值、皂化值？
2、常见的重要单萜、倍半萜、二萜、二萜半萜的代表化合物及其生物活性是什么？
3、如何鉴定挥发油？
4、环烯醚萜的结构特点是什么？稳定性如何？
第七章 三萜及其苷类
一、学时数：4学时
二、目的和要求
1、掌握三萜及其苷类化合物的理化性质与显色反应。
2、熟悉三萜皂苷类化合物的结构类型与特征；三萜及其皂苷的提取分离方法。
3、了解三萜皂苷键的裂解反应。
三、重点和难点
1、重点：掌握三萜及其苷类化合物的理化性质与显色反应。
2、难点：三萜皂苷类化合物的结构类型与特征。
四、基本内容
（一）概述
1、三萜的定义
2、三萜的分布
3、三萜的存在形式
4、三萜的研究进展
5、三萜的生物合成
（二）四环三萜
1、羊毛脂烷型
2、达玛烷型
3、甘遂烷型
4、环阿屯型
5、葫芦烷型
6、楝烷型
7、原萜烷型
（三）五环三萜
1、齐墩果烷型
2、乌苏烷型
3、羽扇豆烷型
4、木栓烷型
5、何伯烷型和异何伯烷型
（四）三萜类化合物的理化性质
1、性状
2、表面活性
3、溶解度
4、溶血作用
5、沉淀反应
6、显色反应
（五）三萜类化合物的提取与分离
1、苷元的提取与分离
2、三萜皂苷的提取与分离
（六）三萜类化合物的结构鉴定
1、常用的化学反应
2、三萜类化合物的波谱特征(UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR)
3、结构测定实例
（七）三萜类化合物的生物活性
五、专业、术语、重要化合物英语词汇
triterpenes、tetracyclic triterpenoids、Triterpenoid sapogenins、Triterpenoid saponins、ginsenosides、20（S）-protopanaxadiol、oleanane、oleanolic acid、glycyrrhizic acid、Glycyrrhetinic acid、α-amyrane、Ursolic acid、Liebermann-burchard reaction、toosendanin
六、复习思考题
1、简述三萜苷元的提取分离步骤。
2、简述四环三萜的分类和结构特征。
3、三萜皂苷的物理化学性质特点是什么？
第八章 甾体及其苷类
一、学时数：6学时
二、目的和要求
1、掌握甾体化合物的结构特征与分类；强心苷的理化性质；甾体皂苷的理化性质、提取分离方法。
2、熟悉C21甾体化合物的结构类型和海洋甾体化合物；甾体母核的显色反应及其与三萜的区别；强心苷的结构特征；区分甲、乙型强心苷的方法；甾体皂苷元的结构类型及区分方法。
3、了解强心苷的提取与分离方法。
三、重点和难点
1、重点：甾体化合物的结构特征与分类；强心苷的理化性质；
2、难点：甾体皂苷的理化性质、提取分离方法。
四、基本内容
（一）概述
1、甾体的定义
2、研究进展
3、基本结构和分类
4、甾体的立体化学
5、甾体的颜色反应
（二）甾体化合物
1、C21甾体化合物（定义、存在形式、结构特点、结构类型、理化性质）
2、海洋甾体化合物
（三）强心苷类化合物
1、定义
2、生物合成
3、化学结构和分类
4、强心苷的理化性质
5、强心苷的颜色反应
6、强心苷的提取分离
7、强心苷的波谱特征（UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR）
8、强心苷的生理活性
（四）甾体皂苷
1、概述
2、甾体皂苷的化学结构及分类
3、甾体皂苷的理化性质
4、甾体皂苷元的波谱特征（UV、IR、MS、1H-NMR）
5、甾体皂苷的提取分离
五、专业、术语、重要化合物英语词汇
steroides、C21-steroides、cyclopentano-perhydrophenanthrene、Salkowski reaction、Rosenheim reaction、pregnane、Keller-Kiliani reaction、cardiac glycosides、bufogenins、bufotoxins、digitoxigenin、cardenolide、scillanolide、bufanolide、Legal reaction、Kedde reaction、Raymond reaction、Baljet reaction、xanthydrol reaction、steroidal saponins、spirostane、spirostanols、isospirostanols、furostanols、pseudo-spirostanols
六、复习思考题
1、强心苷的结构特点及分类依据是什么？其强心作用与结构关系如何？
2、强心苷类化合物的鉴别反应有哪些？活性次甲基反应基本原理是什么？
3、甾体皂苷与三萜皂苷如何区别？甾体皂苷元、C21甾与强心苷元结构上有何异同？
第九章 生物碱
一、学时数：8学时
二、目的和要求
1、掌握生物碱的概念、命名规则、分布及存在形式；生物碱呈色、溶解性及碱性与其分子结构的关系，及其影响生物碱碱性的诸因素；生物碱提取分离的原理；
2、了解生物碱的生物合成途径；主要生物碱的骨架及结构分类；生物碱常用的检识方法；生物碱的碱性在提制和结构研究上的意义；生物碱提取分离的诸种方法；生物碱结构测定中常用的降解反应机理和对测定结构的意义。
三、重点和难点
1、重点：生物碱的定义和分类生物碱的分类和物理性质。
2、难点：生物碱呈色、溶解性及碱性与其分子结构的关系，及其影响生物碱碱性的诸因素。
四、基本内容
（一）概述
1、定义
2、分布
3、积累和储藏
4、生物碱存在形式
（二）生物碱生物合成的基本原理
1、Schiff base的形成2、Mannish reaction
3、酚氧化偶连
4、亚胺盐次级环合反应
（三）生物碱的分类、生源及其分布
1、生物碱分类的主要方法
2、来源于鸟氨酸的生物碱
3、来源于赖氨酸的生物碱
4、来源于苯丙氨酸/酪氨酸的生物碱
5、来源于色氨酸的生物碱
6、来源于萜类的生物碱
7、来源于甾体的生物碱
（四）生物碱的理化性质
1、物理性质
2、生物碱的检识（生物碱的沉淀反应、生物碱的显色反应）
3、生物碱的化学性质（碱性、成盐、C-N键的裂解反应）
（五）生物碱的提取分离
1、总生物碱的提取
2、生物碱的分离
（六）生物碱的结构鉴定
1、波谱法在生物碱的结构鉴定与测定中的应用（UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR）
2、生物碱类化合物结构鉴定实例
五、专业、术语、重要化合物英语词汇
alkaloid、Schiff base、atropine、morphine、ephedrine、pseudoephedrine、berberine、palmatine、colchicines、reserpine、vinblastine、cinchonine、quinine、verticine、Dragendroff’s reagent、Hofmann degradation、exhaustive methylation、Emde degradation、von Braun ternary amine degradation、Caffeine、Codeine、Cocaine
六、思考题
1、思考生物碱的简单定义与目前较确切的表述的关系。
2、生物碱主要有哪些存在形式？
3、莨菪碱与阿托品的关系如何?如何由莨菪碱变成阿托品?
4、试论影响生物碱碱性的因素。
5、小檗碱有哪几种结构互变?产生的原因是什么?
6、熟悉有代表性的重要生物碱阿托品、麻黄素、黄连素、吗啡、利血平、长春碱、长春新碱、秋水仙碱、喜树碱、咖啡因、麦角碱、可待因、可卡因、一叶秋碱、延胡索乙素的化学结构。
7、自天然药物提取液中识别生物碱是否存在的主要反应及其试剂有哪些？生物碱沉淀试剂阳性说明一定含有生物碱吗？
第十章 海洋天然药物
一、学时数：2学时
二、目的和要求
1、熟悉大环内酯类、聚醚类、肽类、C15乙酸原化合物、前列腺素类似物等海洋天然药物。
2、了解海燕天然药物研究进展
三、重点和难点
1、重点：已知海洋天然药物类型及结构特点；海洋天然药物的发展态势。
2、难点：已知海洋天然药物类型的结构特点。
四、基本内容
（一）概述
1、海洋的地理状况
2、海洋生物的特点
3、海洋药物研究的国内外概况
4、海洋药物研究的发展趋势
5、海洋天然产物的化合物类型
（二）大环内酯类
1、特点
2、简单大环内酯类化合物
3、内酯环含有氧环的大环内酯类
4、多聚内酯类
5、其他大环内酯类
（三）聚醚类化合物
1、脂溶性聚醚类
2、水溶性聚醚类
3、聚醚三萜类
（四）肽类化合物
1、组成海洋肽类化合物的氨基酸
2、常见的海洋肽类化合物
（五）C15乙酸原化合物
1、生物合成
2、海洋生物中发现的C15乙酸原化合物
3、结构特点
4、分类
（六）前列腺素类似物
1、生理活性
2、发展概况
（七）海洋天然产物研究实例
五、专业、术语、重要化合物英语词汇
marine natural products、marine compounds、tetrodotoxin、macrolides
六、思考题
1、已知的几类海洋天然产物的结构特点是什么？
2、海洋药物的发展趋势和主要领域有哪些？
第十一章 天然药物的研究开发
一、学时数：2学时
二、目的和要求
1、熟悉天然药物的研究开发程序；
2、熟悉天然药物中生物活性成分的研究方法。
三、重点和难点
1、重点：天然药物的研究开发程序。
2、难点：天然药物的研究开发思路与设计。
四、基本内容
（一）概述
1、天然药物的研究开发面临的机遇
2、天然药物的研究开发面临的挑战
3、我国国家食品药品监督管理局颁发的中药新药注册分类情况
4、自天然药物创新药物研究开发的一般程序
（二）天然药物中开发新药途径
1、经验积累
2、偶然发现
3、药物普筛（生物活性指导下的有效成分或有效部位的提取分离）
4、代谢研究
5、天然药物化学成分的结构修饰或结构改造
6、其他
（三）天然药物化学研究方法
1、调研
2、天然药物化学成分预试
3、化学成分的分离
五、复习思考题
1、自天然药物研究开发新药的主要途径有哪些？
2、由天然药物提取分离获得的有效成分研究开发新药，属国家中药注册分类几类？
3、中药新药注册分类中有效部位的含义是什么？由有效部位开发的中药新药属于中药注册分类几类？
4、普筛发现新药的有缺点是什么？目前寻找新药的筛选方法研究进展如何？
第四篇：天然药物化学名词解释
天然药物化学名词解释
Rf值：样品中某成分在纸层析或薄层层析特定溶剂系统中移动的距离与流动相前沿的距离之比。
酸价：在化学中，酸价（或称中和值、酸值、酸度）表示中和1克化学物质所需的氢氧化钾（KOH）的毫克数。
碘价：碘价就是在油脂上加成的卤素的质量（以碘计）又作碘值，即每100g油脂所能吸收碘的质量（以克计）。
皂化价：皂化1克的油脂所需要之碱(即做皂常用的为氢氧化钠)的克数 天然药物化学：运用现代科学理论与方法研究天然药物中化学成分的一门学科。
反相层析：流动相的极性大于固定相的层析技术。分子在此系统中的移动速度依其极性排列，极性大者移动快。
有效成分：一般具有一定生理活性，能用一定的分子式或结构式表述，有一定物理常数的单体化合物。
无效成分：与有效成分共存的其他成分。
单体：单体（monomer；momer）是能与同种或他种分子聚合的小分子的统称。是能起聚合反应或缩聚反应等而成高分子化合物的简单化合物。是合成聚合物所用的-低分子的原料。
透析：穿过膜的选择性扩散过程。可用于分离分子量大小不同的溶质，低于膜所截留阈值分子量的物质可扩散穿过膜，高于膜截留阈值分子量的物质则被保留在半透膜的另一侧。
梯度洗脱：梯度性地改变洗脱液的组分(成分、离子强度等)或pH，以期将层析柱上不同的组分洗脱出来的方法。
黄酮类化合物：1952年以前黄酮类化合物（flavonoids）是指一类存在于自然界的具有2-苯基色原酮（flavone）结构的化合物。现在泛指两个苯环（A与B环）通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物。香豆素：是邻羟基桂皮酸的内酯，具有芳香气味。挥发油：挥发油又称精油,英文为 essential oils，是一类与水不相混溶的挥发性油状液体的总称。
交叉共轭体系：共轭体系中，两个共轭系统分别与另一π键体系共轭，但这两个共轭系统互不共轭，称为交叉共轭体系。
第五篇：中药化学和天然药物化学实验讲稿讲解
防己中生物碱的提取、分离与鉴定
[适用对象]——药学、药剂、环境、中药、中药国际交流、中药 知识产权、中药制药工程、中药资源专业 [实验学时]——24
一、实验目的
学习生物碱类成分的一般提取分离法，通过实验要求：
（1）掌握生物碱的溶剂提取法和粉防己碱与防己诺林碱的分离方法。（2）熟悉生物碱的一般理化性质。
（3）熟悉粉防己碱和防己诺林碱的检识方法。
（4）掌握回流法、萃取法、结晶法等的基本操作过程及注意事项。
二、实验原理
本实验是根据粉防己碱和防己诺林碱游离时难溶于水，易溶于氯仿，成盐后易溶于水，难溶于氯仿的性质提取得到总生物碱。再利用两者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分离。
三、仪器设备
（单口，双口）圆底烧瓶，冷凝管，铁架台，分液漏斗，三角烧瓶，滤纸，微量抽滤器，布氏漏斗，层析槽，毛细管等。
四、相关知识点
防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根。总生物碱含量约为1.5~2.3%，主要为粉防己碱和防己诺林碱。
1、粉防己碱（tetrandrine），又称汉防己甲素，分子式C38H42N2O6，在防己中的含量约为1%，为无色针状结晶（乙醚），mp.217~218℃。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有机溶剂，几乎不溶于水和石油醚。粉防己碱 R=CH3 防己诺林碱 R=H
2、防己诺林碱（fangchinoline），又称汉防己乙素，分子式C37H40N2O6，在
防己中的含量约为0.5%，六面体粒状结晶（丙酮），mp.237~238℃。溶解度与粉防己碱相似，但因较粉防己碱多一个酚羟基，故极性较粉防己碱稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己碱，可利用此性质相互分离。
五、实验步骤
（一）总生物碱的提取
称取粉防己粗粉150克，置1000ml圆底烧瓶中，加95%乙醇以浸透并盖没生药为度（约需400ml）。水浴加热回流1小时（加热期间振摇数次），滤出提取液，药渣再加95%乙醇以浸没为度（约需300ml），如上法再热提一次，滤出提取液，最后将瓶内药渣倒在布氏漏斗上抽滤压干，药渣弃去。合并两次乙醇提取液，放冷后如有絮状物析出，再抽滤一次，澄清液回收乙醇，浓缩至糖浆状无乙醇味为止，得乙醇总提取物。
（二）生物碱的分离
1、亲脂性生物碱和亲水性生物碱的分离
糖浆状总提取物移至大三角烧瓶中，逐渐加入1%盐酸稀释，充分搅拌使生物碱溶解，不溶物呈树脂状析出，直至加酸水溶液不再发生混浊为止（约需300ml），静置，倾出上清液，瓶底的树脂状杂质以1%盐酸少量分次洗涤，直至洗液对生物碱沉淀试剂反应微弱时为止。
合并洗液和滤液，静置片刻，抽滤得澄清滤液，置1000ml三角烧瓶中，滴加浓氨水至PH9左右，此时亲脂性叔胺碱游离析出（如有发热现象，设法冷却），待溶液冷后，移至1000ml的分液漏斗中，加氯仿150ml振摇萃取。分取氯仿层，氨碱性水溶液再以新鲜氯仿萃取数次，每次用氯仿100ml，直至氯仿抽提液的生物碱反应微弱时止（检查时取少量氯仿抽提液置表面皿上，待溶剂挥干，残留物中加稀盐酸数滴使溶解，再加生物碱沉淀试剂试之），合并氯仿液。
此氯仿液中含亲脂性叔胺碱，氯仿萃取过的氨碱性水溶液含亲水性季铵碱。后者取出少量，加盐酸酸化至PH4~5，滴加雷氏铵盐饱和水溶液，观察有无沉淀出现。
2、亲脂性碱中酚性和非酚性碱的分离
氯仿萃取液合并约（300~400ml）移至1000ml的分液漏斗中，以2%氢氧化钠水溶液40ml一次，萃取2次，氯仿液再用水20ml一次，洗涤2次。分取氯仿层，加无水碳酸钾脱水干燥，过滤，滤液常压下回收氯仿。将氯仿全部蒸去，残留溶剂去瓶塞后挥干，得粗总非酚性生物碱。
2%氢氧化钠提取液合并后取出少量，加盐酸酸化后进行生物碱反应。
附注：防己诺林碱虽有酚羟基但不溶于氢氧化钠水溶液中，因而和非酚性生物碱一起在氯仿层中。
3、叔胺生物碱的纯化
在盛有非酚性生物碱的圆底烧瓶中，加丙酮加热溶解，过滤，用热丙酮洗涤滤纸，滤液、洗液合并，回收丙酮至适量，放冷，加塞静置待结晶析出。析出完全后抽滤收集。母液再浓缩重复收集，尚可得结晶。合并数次结晶即为粉防己碱和防己诺林碱的混合物。
4、粉防己碱和防己诺林碱的分离
苯冷浸法：取上述结晶状混合物碱称重，置于50ml三角瓶中，加5倍量的苯冷浸，时时振摇，冷浸半小时后，过滤分开苯溶液和苯不溶物。
苯溶液回收苯至尽，残留物以丙酮重结晶，得细针状结晶，为粉防己碱。苯不溶物待挥发去残留的苯后，也用丙酮重结晶，可得粒状结晶，为防己诺林碱。
（三）生物碱的一般鉴定方法
1、沉淀反应
（1）碘化汞钾试验：取样品的稀酸水溶液1ml，加碘化汞钾试剂（Mayer氏试剂）1~2滴，出现白色或类白色沉淀者为阳性反应，表示有生物碱存在。
（2）碘化铋钾试验：取样品的稀酸水溶液1ml，加碘化铋钾试剂（Dragendorff氏试剂）1~2滴，出现棕黄至棕红色沉淀者为阳性反应，表示有生物碱存在。（3）碘—碘化钾试验：取样品的稀酸水溶液1ml，加碘—碘化钾试剂（Wangner氏试剂）1~2滴，生成褐色至暗褐色沉淀者为阳性反应，表示有生物碱存在。（4）雷氏铵盐试验：取样品的稀酸水溶液（PH4~5）1ml，加雷氏铵盐试剂数滴，生成黄红色沉淀者为阳性反应，表示有生物碱存在。
（5）苦味酸试验：取样品的中性溶液1ml，加苦味酸的饱和水溶液1~2滴，生成黄色沉淀者为阳性反应，表示有生物碱存在。
2、薄层色谱
吸附剂：中性氧化铝（Ⅲ级）干法制版 样品：（1）粉防己碱（2）防己诺林碱
（3）总提取物（均以氯仿溶解）展开剂：氯仿—丙酮—苯（3：1：4）
显色剂：喷以改良碘化铋钾试剂（干法铺板显色时，要在溶剂未干前喷显色剂，否则氧化铝粉末易飞散，使薄层破坏）。
（四）实验流程），滤液 药渣（弃去）
回收（沸石）乙醇至无醇味（雷氏铵盐试验）
水分2次洗涤，无水（酚性碱）碳酸钾干燥后，滤过 沉淀反应 回收氯仿
加丙酮30ml，加热溶解，滤过 浓缩至适量，过夜析晶，抽滤
加丙酮加热溶解，趁热过滤加丙酮加热溶解，趁热过滤 滤液 滤液
放置析晶，滤过，干燥放置析晶，滤过，干燥 粉防己碱（针状结晶）防己诺林碱（粒状结晶）
六、实验报告要求
应包括原理描述、实验流程、数据记录、解决问题的能力、实验结果、实验效果及建议等。
七、思考题
1、粉防己碱和防己诺林碱在结构与性质上有何异同点？实验过程中，应怎样利用它们的共性及个性进行提取分离？请设计方案。
2、分离水溶性与脂溶性生物碱的常用方法有哪些？
3、从防己中分离脂溶性、水溶性碱，酚性、非酚性碱的依据是什么？
4、萃取过程中怎样防止和消除乳化？
5、生物碱的沉淀反应应在什么条件下进行，为什么？
八、实验成绩评定方法
本门实验课程考核成绩占课程总成绩的30%，该实验考核成绩占实验总成绩的40%。考核分实验预习、实验过程操作、实验报告等三个方面，成绩计算为预习实验占20%（包括原理描述、实验流程）、实验过程操作占40%（包括数据记录、解决问题的能力）、实验报告占40%（包括实验结果、实验效果）。槐花中黄酮类化合物提取、分离和鉴定 [适用对象]——药学、环境、中药专业
[实验学时]——18
一、实验目的要求
学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求：
（1）通过芸香苷提取与精制，掌握沸水提取黄酮类化合物的原理和操作。（2）掌握由芸香苷水解制取槲皮素的方法。（3）掌握黄酮苷和黄酮苷元的分离。
（4）掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法。
二、实验原理
由槐花中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制，或根据芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液加酸酸化后则芸香苷游离析出。
三、仪器设备
单口圆底烧瓶，冷凝管，铁架台，烧杯，电炉，烘箱，水浴锅，三角烧瓶，滤纸，微量抽滤器，布氏漏斗，试管，层析槽，石棉网，毛细管等。
四、相关知识点
槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要含芸香苷（芦丁），含量高达12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。
芸香苷（rutoside），分子式C27H30O16，分子量610.51，淡黄色针状结晶，mp.177~178℃。难溶于冷水（1：8000），略溶于热水（1：200），溶于热甲醇（1：
7），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：30），冷乙醇（1：650），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。槲皮素（quercetin），分子式C15H10O7，分子量302.23，黄色针状结晶，mp.314℃（分解）。溶于热乙醇（1：23），冷乙醇（1：300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，几不溶于水。
HOOOH OH 芸香苷 R= —葡萄糖—鼠李糖 槲皮素 R=H
五、实验步骤
（一）芸香苷的提取（水提取法）
称取槐花米50克，置1000ml烧杯中，加沸水800ml，加热保持微沸1小时趁热用棉花过滤，滤渣再加600ml水煮沸1小时，趁热过滤，合并2次滤液放置过夜，析出大量淡黄色沉淀，抽滤，沉淀用水洗3~4次，抽干置于空气中干燥即得粗芸香苷，称重计算得率。
（二）芸香苷的水解
称取芸香苷粗品2克，尽量研细，投入500ml圆底烧瓶中，加2%H2SO4溶液150ml，接上冷凝管，直火加热煮沸1.5小时，滤取沉淀物（即苷元槲皮素），滤液保留以鉴定糖部分，槲皮素沉淀经水洗涤抽干，自然干燥，称重并计算水解得率。
（三）芸香苷、槲皮素重结晶
称取芸香苷粗品2克，加甲醇50ml，加热溶解，趁热过滤，滤液浓缩一半，6 放置析晶，过滤。滤液适当浓缩后放置，复析出结晶，滤取结晶。必要时结晶再用甲醇重结晶一次。
取槲皮素全部，加适量95%乙醇，同上法重结晶一次。
（四）芸香苷、槲皮素和糖的纸色谱鉴定
1、点样：取新华一号色谱滤纸，规格20cm×20cm，在滤纸下端约2cm处用铅笔画一直线，间隔2cm分别点上下列样品或标准溶液：（1）糖样品溶液（2）标准葡萄糖溶液
（3）标准鼠李糖溶液（4）芸香苷样品甲醇溶液（5）芸香苷标准品溶液（6）槲皮素样品甲醇溶液
（7）槲皮素标准品溶液
2、展开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层上行展开。
3、显色：展开完毕，将滤纸取出，记录溶剂前沿位置。待溶剂挥尽后，在（3）与（4）点之间剪开，分别显色。
（1）糖的显色：喷苯胺-邻苯二甲酸试剂，在105℃烘10分钟，显棕色斑点。计算并比较样品和标准品的Rf值。（2）黄酮化合物的显色：
①可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点。
②经氨气熏后再观察。
③待氨气挥尽后，喷1%AlCl3甲醇溶液，再观察。④计算并比较样品与标准品的Rf值。
（五）芸香苷和槲皮素性质试验
1、酸性试验：取小试管8支，每4支一组，第一组每管中加入芸香苷1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每组四管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各2ml，振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或产生浑浊。
2、Molish反应：取试样1mg置小试管中，加乙醇0.5ml溶解，加α-萘酚试剂1~2滴，摇匀。倾斜试管，沿管壁徐徐注入浓硫酸约0.5ml静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的结构（糖和苷类均呈阳性反应），比较芸香苷和槲皮素的不同。
3、Fehling试验：取试样数mg，溶于0.5ml热水中，加斐林氏试剂甲、乙等量 7 混合液2ml，沸水浴上加热，如产生氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其它还原性物质。充分加热作用后滤去沉淀，滤液滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以10% NaOH中和，再进行斐林氏试验，此时显阳性反应者表示样品为糖苷化合物。比较芸香苷和槲皮素的不同。
4、盐酸-镁粉反应：取芸香苷1mg，加乙醇2ml，在水浴上加热溶解，加镁粉约50mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。
如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（3-羟基与糖结合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类）不呈还原显色反应。因此可区别两者。
5、锆-柠檬酸反应：取样品1mg，加乙醇2ml，在水浴上加热溶解，再加2%二氯氧锆甲醇溶液3~4滴，凡有3-羟基或5-羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加2%柠檬酸甲醇溶液3~4滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香苷和槲皮素的不同。
6、三氯化铝反应：取样品1mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液2~3滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。
（六）实验流程 槐花米50g
2g芸香苷粗品 甲醇重结晶 2%硫酸，放冷抽滤 精制芸香苷
滤液（糖类）沉淀（苷元）
95%乙醇重结晶
鉴定反应 槲皮素精制品
六、实验报告要求
应包括原理描述、实验流程、数据记录、解决问题的能力、实验结果、实验效果及建议等。
七、思考题
1、黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷的提取还可用什么方法？
2、酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐酸水解后处理更方便？
3、本实验中各种色谱的原理是什么？解释化合物结构与Rf值的关系。
4、试讨论苷类成分的检识程序。
八、实验成绩评定方法
本门实验课程考核成绩占课程总成绩的30%，该实验考核成绩占实验总成绩的40%。考核分实验预习、实验过程操作、实验报告等三个方面，其成绩计算为预习实验占20%（包括原理描述、实验流程）、实验过程操作占40%（包括数据记录、解决问题的能力）、实验报告占40%（包括实验结果、实验效果）。槐花中黄酮类化合物分离和鉴定
[适用对象]——中药国际交流、中药知识产权、中药制药工程、中药资源专业 [实验学时]——9
一、实验目的要求
学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求：（1）了解沸水提取黄酮类化合物的原理和操作。（2）了解由芸香苷水解制取槲皮素的方法。
（3）掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法。
二、实验原理
由槐花中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制。纸色谱的分离原理是利用各种化合物在流动相和固定相中分配系数的不同而达到分离目的。
三、仪器设备
烘箱，水浴锅，铁架台，烧杯，三角烧瓶，滤纸，试管，层析槽，毛细管等。
四、相关知识点
槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要含芸香苷（芦 9 丁），含量高达12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。
芸香苷（rutoside），分子式C27H30O16，分子量610.51，淡黄色针状结晶，mp.177~178℃。难溶于冷水（1：8000），略溶于热水（1：200），溶于热甲醇（1：
7），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：30），冷乙醇（1：650），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。槲皮素（quercetin），分子式C15H10O7，分子量302.23，黄色针状结晶，mp.314℃（分解）。溶于热乙醇（1：23），冷乙醇（1：300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，几不溶于水。
HOOOH OH 芸香苷 R= —葡萄糖—鼠李糖
槲皮素 R=H
五、实验步骤
（一）芸香苷、槲皮素和糖的纸色谱鉴定
1、点样：取新华一号色谱滤纸，规格20cm×20cm，在滤纸下端约2cm处用铅笔画一直线，间隔2cm分别点上下列样品或标准溶液：（1）糖样品溶液（2）标准葡萄糖溶液
（3）标准鼠李糖溶液（4）芸香苷样品甲醇溶液
（5）芸香苷标准品溶液（6）槲皮素样品甲醇溶液（7）槲皮素标准品溶液
2、展开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层上行展开。
3、显色：展开完毕，将滤纸取出，记录溶剂前沿位置。待溶剂挥尽后，在（3）与（4）点之间剪开，分别显色。
（1）糖的显色：喷苯胺-邻苯二甲酸试剂，在105℃烘10分钟，显棕色斑点。计算并比较样品和标准品的Rf值。（2）黄酮化合物的显色：
①可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点。②经氨气熏后再观察。
③待氨气挥尽后，喷1%AlCl3甲醇溶液，再观察。④计算并比较样品与标准品的Rf值。薄层层析法测定氧化铝的活性
[适用对象]——药学、药剂、环境、中药、中药国际交流、中药 知识产权、中药制药工程、中药资源专业 [实验学时]——3 氧化铝是常用的吸附剂，它的活性对分离效果有很大的影响。为了使样品分离好，结果重现性好，就需要选用一定活性的氧化铝。
一、目的：了解吸附剂活性测定的目的，掌握吸附剂活性测定的原理及方法，练习薄层层析的基本操作。
二、方法：氧化铝干法铺板，利用对其有亲和力的有机染料来标定其活性
三、原理：根据染料被吸附的程度不同而定级
四、实验操作：
1、测定用有机染料（偶氮苯、苏丹黄和对氨基偶氮苯）：各称取20毫克（偶氮苯30毫克），溶于四氯化碳（经氢氧化钠干燥后重新蒸馏）中，配成染料溶液，供测定点样用。
2、步骤
⑴、制版：干法铺板
⑵、各染料液点样：
（下端1.5-2cm，点距1 cm，点直径0.5 cm，可重复加样2-3次）⑶、密闭层析槽中用CCl4上行倾斜法展开：
（先饱和，注意（哪端？浸没程度？）事项，使其成20-30度倾斜，当展至薄层板的2/3时，立即取出，测定Rf值）
⑷、氧化铝活度的判定：Rf值对照P167表中数据，即得活度
五、思考题
1、氧化铝活性测定的原理及目的是什么？
2、为何可以用这些染料作标准来定级？
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