第一篇：胰腺癌基因诊断与基因治疗研究进展
胰腺癌基因诊断与基因治疗研究进展
胰腺癌是消化系统较常见的恶性肿瘤，起病隐匿，恶性程度高。现有的影像学检查及血清学检查尚不能达到早期诊断；其治疗以胰十二指肠切除术为基础，辅以放疗和化疗，预后较差。平均5年生存率低于5％，被称为“癌中之王”[1]。
近年来随着分子生物学技术的巨大进步发展起来的基因检测技术为胰腺癌的早期诊断提供了方向，为胰腺癌的有效治疗提供了新的途径。本文就胰腺癌基因诊断和基因治疗的研究进展作简要综述。
一、基因诊断 Ⅰ.胰腺腺癌
肿瘤的发生和发展是多个基因异常变化积累的结果。许多原癌基因、抑癌基因以及DNA错位修复基因等，都和胰腺癌有着不可分割的关系。1.原癌基因 1.1 K-ras 与胰腺癌有关的ras基因家族主要是K-ras和N-ras。其中以K-ras的点突变研究的最为深入和广泛，可见于90％胰腺癌，明显高于其他癌[2]。但由于K-ras突变也见于一些良性疾病，临床上可作为筛选指标。某些研究发现，用外周血浆检测K-ras突变还可用于评估肿瘤大小、可切除性以及预后[3]，因此外周血浆检测K-ras基因突变有望成为快速准确诊断胰腺癌的方法。1.2 C-erbB－2（Her2/neu）
C-erbB－2基因编码具酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜糖蛋白Her2/neu，表皮生长因子受体家族成员之一。有结果显示近70％浸润性胰腺导管癌过度表达Her2/ neu。正常胰腺导管上皮不表达Her2/neu，82%的平坦型病变导管，86%的乳头状病变导管，92%的有异型的乳头状病变导管上皮表达Her2/neu[4]。胰腺癌中Her2/neu的强表达可能与肿瘤早期增殖有关，为早期诊断和治疗提供了线索。1.3 Bcl-2 Bcl-2的过度表达见于约50%的胰腺癌，可阻止胰腺癌细胞凋亡，导致肿瘤形成。但无转移的高分化胰腺癌的Bcl-2蛋白的表达明显高于有转移的低分化胰腺癌[5]。1.4 p8 40％以上的胰腺癌过表达p8基因产物，与分化程度、淋巴结转移相关，而与预后无关[
6、7]。
其他如Myc、C-fos、c-raf、HLA-DR-α和C-met基因都与胰腺癌有较大的关联。2.抑癌基因 2.1 p16 P16能抑制细胞周期蛋白D1－细胞周期依赖激酶CDK4/6，使细胞稳定的处于G1期，从而破坏整个通路。p16基因失活使活化转录因子释放，促进了细胞周期。约90％胰腺癌有p16基因异常[8]。据美国俄亥俄州大学研究，化学诱导的大鼠胰腺癌中90.3％与p16失活有关 [8]。检测p16基因突变可为胰腺癌早期诊断提供依据。2.2 p53
活化的p53上调p21，作用于细胞周期蛋白E/CDK2而避免细胞周期停滞于G1/S期。P53作用的另一个靶基因是其负调控因子MDM2。另外P53蛋白还能诱导细胞凋亡，阻止有癌变倾向的细胞产生[8]。约40％－75％的胰腺癌肿存在p53基因的异常。
血清中ｐ53蛋白浓度可用于胰腺癌的诊断及判断肿瘤的进展。2.3 DPC4 进化上非常保守的Smad基因家族。产物蛋白是TGF-β受体信号传导途径中的必需物质。DPC4的丢失可使细胞过度生长。临床上发现近50％胰腺癌都存在DPC4的缺失。DPC4失活被认为是肿瘤发生中的晚期事件。
其他如LKB1/STK11[9]、APC和MCC[10]、DCC[11]、MPP[12]、TGF-β超家族[13]、三联脆组基因FHIT[14]等也有资料表明其与胰腺癌的发生发展具相关性。3.基因组维持基因 3.1端粒酶
端粒酶是细胞核内的核糖核蛋白酶，具有逆转录酶的活性。人正常体细胞端粒酶活性为阴性,而90％左右恶性肿瘤细胞端粒酶呈活化状态。Hiyama等报道95％的胰腺癌组织中端粒酶活性呈阳性,而11例良性胰腺肿瘤均呈阴性[10]。因此端粒酶可作为胰腺癌诊断的基因标记物。3.2 BRCA2 最近的研究发现具有BRCA2胚系突变的病人其患胰腺癌的危险性明显增加。Goggins等发现在41例胰腺癌中，15例存在BRCA2杂合子缺失，4例存在突变[15]。4.血管生成相关基因
近年来的肿瘤研究确立了肿瘤血管生成在肿瘤生成、发展中的地位和作用。肿瘤血管生成相关基因的检测有助于胰腺癌预后的判断，但作为诊断手段尤其早期诊断还需要进一步研究。5.基因芯片技术
基因芯片技术是80年代发展起来的新兴技术，是基因突变分析、基因测序和基因表达研究的高效手段，具有高度敏感性、特异性和准确性。
利用基因芯片技术可筛选出在胰腺癌中呈特征性表达的基因，作出早期准确的诊断。更重要的是应用基因工程的方法来校正这些变异基因,可达到治愈肿瘤的目的。
Ⅱ.其他类型胰腺肿瘤 1.胰腺内分泌肿瘤
研究中发现胃泌素瘤和胰腺内分泌肿瘤中MEN－1等位缺失的发生率58.4％，突变的发生率23.2％。胃泌素瘤的基因半定量PCR分析发现与HER-2/neu相关。胰腺无功能内分泌肿瘤中，大部分有p16的失活，55％的无功能性胰腺内分泌肿瘤有DPC4/Smad4的异常。
2.导管内乳头粘液瘤(IPMT)：
65％IPMT有K-ras突变（浸润性腺癌90％突变），p16和p53杂合子的缺失在浸润性IPMT中明显高于非浸润性IPMT[16]。
二、基因治疗 Ⅰ.基因治疗策略
1.恢复抑癌基因和抑制癌基因
重新引入野生型抑癌基因拷贝修复突变基因的功能，来抑制肿瘤生长或诱导肿瘤细胞调亡，这在高突变率的个体中，并没有很大意义。关键是干扰肿瘤细胞持续性生长的途径。胰腺癌中主要用反义核酸和核酶技术直接破坏癌基因的mRNA的转录。如将含K-ras反义核苷酸的脂质体质粒载体经腹腔注射胰腺癌小鼠模型，获得明显的治疗效果[17]。2.酶解药物前体疗法
将非哺乳动物某些酶通过基因转导入肿瘤部位，再给予无毒性前体药物治疗，其经酶解代谢后的毒性产物在局部具有高浓度，能将肿瘤细胞杀死，而全身反应轻微。
在酶解药物前体治疗研究中还发现存在“旁观者效应”，利用已转导的肿瘤细胞杀死未发生基因转导的肿瘤细胞，或抑制其生长。3.免疫疗法
肿瘤的免疫治疗就是诱导及增强抗肿瘤的免疫反应。主要包括应用肿瘤疫苗、转染某些细胞因子基因和利用抗体等对肿瘤进行治疗。以肿瘤疫苗研究较为深入。Schnurr等将胰腺癌细胞提取物载入树突细胞制备抗肿瘤疫苗，避免了单一抗原的局限性，结果表明此种疫苗可以诱导较强的Ｔ细胞抗肿瘤免疫反应[18]。4.抗肿瘤血管生成
Kuo等构建的表达vEGF受体Flk1的病毒载体，通过离体和在体转染胰腺癌细胞，抑制胰腺癌生长[19]。Ⅱ.基因转导系统
肿瘤基因治疗受基因转导载体的限制，包括载体的有效浓度和转导的生物有效性。目前使用的基因转导方法有三种：病毒、非病毒和物理方法。常用的病毒载体有逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒；非病毒载体有裸DNA技术和脂质－DNA复合物；物理方法主要有细针注射和电穿孔[20]。病毒载体仍然是目前最有效的基因转导方法。
目前已有用于胰腺肿瘤细胞的逆转录病毒载体，如单克隆鼠白血病病毒（MoMLV）[21]。腺相关病毒（AAV）载体也已经用于胰腺癌细胞的基因转导[22]。
杂交载体转导是基因转导系统中的转折点。它既保留了原病毒载体的特性，又能解决滴度和免疫应答的问题。Ⅲ.胰腺癌基因治疗的靶基因 1.K-ras 消除优势途径：Kuzumaki等从原癌基因v-H-ras得到一种突变N116Y，通过脂质体将其导入8种具有K-ras突变的人胰腺癌细胞株后，发现可抑制细胞株的生长，而对正常的细胞则不起作用[23]。
免疫治疗途径：胰腺肿瘤肽可放大抗原递呈效应，细胞毒T细胞（CTL）对突变 4 的ras肽反应，能暂时将胰腺癌细胞株杀死 [24]。
反义RNA及核酶途径：在裸鼠模型中转导含反义RNA的质粒，能抑制胰腺肿瘤的生长[17]。另外的研究表明，用腺病毒系统转导针对K-ras第12密码子突变的核酶，发现突变的K-ras的mRNA和Bcl-2蛋白明显减少，并且能抑制肿瘤生长和诱导肿瘤细胞凋亡[25]。2.P16 直接在胰腺肿瘤部位或通过门静脉注射含p16的腺病毒载体（Adp16），在切除肿瘤后能抑制肿瘤的转移[26]。3.P53 腺病毒转导野生型p53至胰腺肿瘤细胞，在体内外均能抑制肿瘤细胞的生长。在体内研究中，同时转染p53和p16能提高细胞凋亡的程度。所以至少在胰腺癌模型中，可以得出p53和p16在诱导细胞凋亡上具有协同作用。
最近的研究中发现88％以上的胰腺癌与CaSm（肿瘤相关类sm原癌基因）有关，特别是与肿瘤的恶性表现联系紧密。腺病毒转导CaSm至胰腺肿瘤后，在体内外能抑制肿瘤细胞生长[27]。
三、结语
综上所述有关胰腺癌基因学方面的研究进展很快, 虽然目前尚未发现特异表达于胰腺癌组织的基因，但利用分子生物学技术检测这些基因改变,有希望成为一种新的早期诊断方法。
胰腺癌的基因治疗取得了可喜的进展。尽管目前采用的任何一种基因治疗措施都不尽完善,还存在许多问题,肿瘤的基因治疗已经显示了良好的发展前景,经过研究者们的不懈努力,通过基因治疗治愈胰腺癌有望成为本世纪新的有效治疗手段。
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第二篇：2013博士研究生中医诊断研究进展学术讨论题
2013博士研究生中医诊断研究进展学术讨论题
2013-09-05 16:56
1．你如何理解“司揣内外”在中医诊断方面的意义与运用，对中医的学术研究有何启示，如何看待经典著作的现实指导意义？
2．中医对健康状态判定方面有何特点，与西医体检相比有何优势，如何开展中医健康检查与中医疾病预警，对此有何具体设想？
3．中医有哪些辨证思维模式？各有何特点？是否可以建立统一的中医辨证系统，请提出正反两方面的理由并谈谈你的认识。
4．如何建立中医特有的疗效判定标准，这种疗效判定标准是否存在客观指标，目前广泛应用的量表法有何长处与不足。应从哪些方面入手研究？
5．目前中医诊查仪器的发展现况如何，你认为影响中医诊疗仪器临床应用的主要障碍是什么，应如何取得突破？
6．中医证候的诊断标准应如何确定，有无客观化的具体指标，舌诊脉诊的表现是否可作为金标准，谈谈你的看法。
7．有人提出中医基本病机的核心是不通、不荣与不平，你认为这种提法是否可行，是否可以以此为核心研究中医辨证体系？详细谈谈你的理由与设想。
8．你如何认识中医辨病与辨证的关系，中医辨病在临床上有何指导意义。针灸与药物治疗在辨病辨证方面有何区别。
9．中医诊断客观化研究方面存在哪些问题，有哪些误区影响中医的发展，中医诊断数字化量化诊断有无必要与可能，如有应如何努力实现。
要求：本次课将按讨论方式进行，请博士研究生作好选题、搜集资料、攥写报告，可制作PPT，发言时间一般不超过15分钟、做好接受质询的准备，每人选择一题，报班长处。上课按所报题目参加讨论的人数多少为序，报的人多的题目优先讨论，依次进行。
第三篇：猪圆环病Ⅱ型及鉴别诊断技术研究进展
猪圆环病Ⅱ型及鉴别诊断技术研究进展
摘要：猪圆环病毒(porcine circovirus，PCV)属于圆环病毒科，该病毒有2个血清型：PCV1和PCV2。PCV1广泛存在于猪体内，无致病性；PCV2能直接或间接导致一系列猪的综合性疾病。如猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)，断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)，猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和成年猪皮炎肾病综合征(PDNS)等，对养猪业危害严重。为了深入了解PCV2致病因素，建立快速鉴别诊断技术，综述了PCV2的猪圆环病毒病及其相关致病因素和目前应用诊断技术研究情况。为研究探讨PCV2的发生和诊断提供借鉴。关键词：猪圆环病Ⅱ型；诊断技术；致病基因
猪圆环病毒(PCV)是兽医学上已知动物病毒中最小的病毒，根据PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列，将其分为PCV1和PCV2两个型，其中PCV1无致病性[1]，广泛存在于猪体内及猪源传代细胞系。PCV2则具有致病性，在临床上主要引起断奶仔猪多系统衰竭综合征。PCV对酸性环境(pH3)、氯仿或者高温(56℃和70℃)有抵抗作用。PCV在原代胎猪肾细胞、恒河猴肾细胞、BHK-21细胞上不生长，可在PK-15细胞中生长，但不引起细胞病变，且需将PCV盲传多代才能使病毒有效增殖。在接种PCV的PK-15细胞培养物中加入d-氨基葡萄糖，可促进PCV复制，使得感染PCV的细胞数量提高30％。感染PCV的细胞内含有许多胞浆内包涵体，少数感染细胞内含有核内包涵体。
PCV2属圆环病毒科(Circoviridae)，是最小的无囊膜单链环状DNA病毒，其单链环状DNA染色质由1759个碱基组成，有11个开放阅读框架，编码11种蛋白质，猪圆环病毒的抵抗力较强，不易被灭活，在外界环境中可长时间存活。由猪圆环病毒(PCV2)引起的猪圆环病，临床表现为体质下降、消瘦、皮肤发白、腹泻、呼吸困难和黄疸。
PCV2与大多数典型的猪病原传播不同，PCV2既可水平传播，也可垂直传播。Shibata等在近期研究中随机的发现，临床健康的猪体内含有PCV2[2]，说明PCV2可潜伏于健康猪群中，更出乎意料的是，科研工作者在怀孕母猪和哺乳期母猪的乳汁中检测出PCV2[3] 1 猪圆环病毒病及其相关性致病因素
1.1 相关的致病因子
PCV2的致病因子主要与免疫刺激、宿主的敏感性和PCV2分离株有关[4]。研究表明，免疫刺激可以激发PCV2从感染向疾病方向发展而出现PMWS的机能障碍特征，这可能是由PRRSV或猪细小病毒(PPV)激活了巨噬细胞，从而促进了PCV2的增殖。
在宿主敏感性研究中发现，长白猪较杜洛克和大白猪更容易出现与PCV2相关的疾病爆发，而皮特兰仔猪对与PCV2相关的疾病敏感性较低，且公猪的遗传品系对PCV2相关疾病发病情况有显著的影响。最新的证据则表明[5]，PCV2分离株在毒力上有一定的差异，但这种微小的分歧可能与病毒的地域来源有关，而与分离株的病毒毒力无关。
1.2 PCV2的协同感染疾病
PCV2的主要协同感染疾病在最初研究中倾向于猪肺炎支原体、PPV、PRRSV，可是随着研究的深入，发现了如猪皮炎与肾炎综合征、繁殖障碍、母猪流产和死亡综合征和PMWS等很多疾病可能都会协同PCV2感染。
充分的证据表明，由于PCV2和PPV在猪体内具有类似的靶细胞，而PPV提高免疫系统的功能导致了更严重的疾病，PCV2和PPV的双重感染会引发比单个感染PCV2更严重的临床症状和病变，在发生PCV2相关疾病PMWA的猪群中，PRRSV居最常见的协同感染因子名单之首，其检出率高达52％[6]。猪呼吸道综合征(PRDC)、增生和坏死性肺炎(PNP)、猪皮炎与肾炎综合征(PDNS)是发生在断奶、育成猪及成年猪群中的疾病，被认为是由多种病因共同感染所致，由于PCV2在这些共同感染疾病中普遍存在，其在这些疾病的共同感染中扮演了何种角色已普遍引起了人们的关注[7-8]，但PCV2与PRRS和PMWS直接相关的证据[9-10]，愈来愈明显。致病基因
PCV的基因组为单股、负链、环状DNA，病毒基因组以滚环模式(rolling circle model)进行复制。PCV2的复制起始区位于一个324 bp的片段上，其包含1个茎-环结构、保守的九核苷酸基序(AAGTATTAC)、3个六核苷酸重复序列(CGGCAG)和2个五核苷酸重复序列，Rep和Rep’的共表达是起始PCV2的复制所必须的，对PCV2的保守九核苷酸基序进行突变，从而影响病毒的复制过程，Rep和Rep’蛋白协同定位于同一个细胞的细胞核内，二者既可以形成同源复合物，也可以形成异源复合物。
据研究报道认为，猪圆环病的致病基因可能与ORFl-6这6个编码框编码的蛋白有关，其中ORFl为Rep基因，编码2种蛋白，负责PCV2的复制；ORF2为Cap基因，编码Cap蛋白，是PCV2病毒的唯一结构蛋白，可诱导产生中和抗体；ORF3编码的一种蛋白可以诱导宿主细胞凋亡[11-12]。
研究表明，ORF3诱导TNF-α达到较高水平可能与并发PPV和PMWS直接相关，ORF5诱导的IL-6可能与PDNS有关(PDNS也是IL-6明显增强)[13]，OFFR2基因表达的IL-10可能是感染猪逐渐发展成更严重的PMWS，而ORFl表达的Thl(IFN-γ)和Th2(IL-13)PMWS和PDNS有某种联系[14]。鉴别诊断技术
3.1 PCR方法
复合PCR技术具有单联PCR技术同样的优点，又能一次反应同时方便快捷的检测鉴别多种不同病原体。夏平安教授[15]等针对可引起猪免疫抑制病的重要病原PRRSV和PCV2建立了一种复合PCR检测方法，根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株部分开放阅读框保守序列和PCV2基因保守序列，设计合成了2对特异引物，最终建立了可同时检测PRRSV和PCV2的复合PCR诊断方法。
冯志新等研究设计合成了一套引物和TaqMan探针，特异性扩增PCV2-ORF2基因，通过反应条件的优化，建立了快速定量检测PCV2的实时PCR方法。该方法具有较好的特异性和重复性，对PCV2 DNA检测的下限为1拷贝／uL，敏感性比常规PCR高106倍[16]。
Chae等报道了一种半槽式多重PCR，成功进行PCV1、PCV2和PPV的鉴别诊断，在98个精液样品中发现，有20个阳性的PCV和42个阳性PPV，与半槽式PCR诊断结果相同。当PCV或PPV在人为污染的精液样本中存在时，运用该技术分析发现：PCV和PPVDNA主要存在精
液和一小部分无精子中。实验数据表明，该方法具有较高的敏感性和特异性，可以很好地区别PCV或PPV在猪上的感染。
Kathleen运用实时PCR检测Rep基因(ORF1)在自然感染的猪群和实验室人工感染的猪群的肺、淋巴结等组织，可以检测到2.2×103～2．2×1010／mLPCV2拷贝数。同时，他们检测到在所有被PMWS感染的猪群中都存在Rep基因，即证明了存在PCV2的混合感染的可能性。
3.2 ELISA和ELISA试剂盒
林彦星等应用原核表达的PCV2衣壳(Cap)蛋白作为诊断抗原，初步建立了一种检测PCV2抗体的间接ELISA方法[17]。实验表明该方法具有较高的敏感性和特异性，适于大规模检测PCV2血清抗体的流行病学调查。秦承学等将PCV2 ORF1和ORF2基因分别插入杆状病毒和大肠杆菌表达系统，用亲和层析方法提纯获得重组衣壳(Cap)与复制(Rep)蛋白，用细胞融合技术获得2株Cap和Rep蛋白单克隆抗体，以重组Cap和Rep蛋白作为抗原，通过反应重要条件的优化，建立了间接ELISA方法，有较好的特异性和重复性，可用于PCV2抗体检测和疫苗免疫抗体鉴别诊断[18]。
研究人员研究对3种抗免疫球蛋白G的ELISA试剂盒检测抗PCV2a和PCV2b抗体，同时也检测了抗PCV2和PCV1抗体，55头3周龄的小猪随机分成7组，其中7头为阴性对照，8头接种PCV2a，8头接种PCV2b，8头接种PCV1，其余的24头接种不同厂家的3种疫苗，收集1周的血液样本，分别用3种试剂盒进行检测，反应数值都大于0.94，检测发现PCV2a和b抗体没有根本区别，没有检测出PCV1抗体，但1种试剂盒可鉴别出经疫苗B接种的猪体内的PCV2a或PCV2b抗体[19]。
3.3 竞争性酶联免疫吸附试验(C-ELISA)
Walker以分离的PCV2细胞培养物作为抗原，以PCV2特异性单克隆抗体作为竞争性反应物，C-ELISA敏感性和特异性达到99.58％和97.14％。McNelilly等建立了PCV特异性抗原捕获ELISA，其与定量病毒分离，可以区别PCV的临床和亚临床感染。
3.4 间接免疫荧光试验
间接免疫荧光技术常用于猪圆环病毒感染的血清学普查，其特点是快速、特异、敏感，是目前诊断PCV2常用的血清学方法。在用于抗体检测时，可将PCV2按种于96孔细胞培养板的PK-15细胞上，培养一段时间后，经丙酮固定干燥后即可。此方法不仅可以用于检测抗体，而且可以用已知PCV特异性抗体检测抗原，主要用于PCV的分离鉴定及猪源细胞PCV污染情况的普查，为疾病诊断和净化猪源细胞提供了有效手段。
3.5 免疫金标检测
浙江大学发明公开了一种猪圆环病毒2型(PCV2)抗原或抗体检测试纸条。检测试纸条既可以猪圆环病毒2型抗原也可以检测血清中的PCV抗体，检测试剂条操作简单，易于大范围推广应用，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。
3.6 环介导等温扩增技术
环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一种新的具有明显优势的扩增技术，能够在63℃～65℃等温条件下扩增特异的DNA序列，在30～60min可以得到肉眼可见的结果，该技术在禽流感的快速诊断中已成功运用。据研究数据统计分析表明，此技术的敏感性高于PCR，同时，在检测PCV1，PPV，PRV时无交叉反应，特异性较高，能够完成对PCV2的快速检测和定性分析，为PCV2的诊断提供了一种快速敏感的检测方法。
3.7 基因芯片技术
基因芯片(gene chip)的原型是80年代中期提出的，工作原理是应用已知核酸序列作为探针与互补的靶核苷酸序列杂交，通过随后的信号检测进行定性与定量分析。基因芯片是在一微小的基片(硅片、玻片、塑料片等)表面集成了大量的分子识别探针，能够在同一时间内平行分析成千上万的基因，进行大信息量的筛选与检测分析。基因芯片技术已经成功地应用于禽流感和口蹄疫等重大疾病的快速诊断及分型和定型，但在PCV2混合感染的相关疾病的快速诊断和鉴定上还没见报道。可以预见，在不久的未来可能会出现基因芯片技术在PCV2引起的相关疾病上的应用。
3.8 原位杂交(ISH)技术
ISH具有高度敏感性，在国内外已经建立了多种方法。应用ISH既可以对PCV1和PCV2进行分型，又可以检测PCV与其他病毒的混合感染。刘方娜等根据GenBank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列，在ORF2内设计l对特异性引物，利用PCR反应扩增出371 bp的核酸片段，回收并纯化PCR产物，用地高辛标记，建立了地高辛标记核酸探针诊断PCV2的方法[20]。该探针与8个PCV2重组菌的核酸抽提物均能发生特异性杂交，而与对照组猪圆环病毒I型(PCVI)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)的核酸杂交均为阴性；对PCV2 DNA的最低检测量为lOpg。结论与讨论
PCV2与一系列猪的综合感染相关，这些疾病包括PMWS，PNP，PDNS，PRDC。很显然，这些疾病的发生与发展，至少与PCV2损毁猪的免疫系统有关，比如，PMWS发展是由于免疫系统异常和免疫抑制有关。显微镜观察发现，PCV2在淋巴组织的淋巴细胞、组织细胞和巨细胞广泛存在，导致体液免疫和细胞免疫失败。同时，由于PCV2分离株在毒力和地理分布上相差较大，这就意味着它的病原学意义有相当高的研究价值。
有文献报道，PCV2可以感染牛，接种PCV2完全可以致死8周龄的小鼠，这是否意味感染别的动物还需要进行很多的调查研究。目前，PCV2的研究倾向与动物解剖，然后进行分型和鉴定，这明显不利于动物安全生产、疾病的控制和人类自生安全。PCR技术有存在假阳性的问题，ELISA虽然特异性和敏感性较高，但它所用时间较长，在快速诊断方面显然不足，LAMP技术花费时间较少，敏感性和特异性也较高，但他是一个相对较新的技术，还需要更多的临床验证，基因芯片技术已经成功地应用于禽流感、口蹄疫和人类重大疾病的快速诊断及分型和定型，但在PCV2诊断和鉴定上还没见报道。如何与PCV2相关疾病的混合感染中进行快速的分型和定型鉴定，如何加强传统诊断技术的完善，以及加大对PCV2分子致病特性的研究力度，是科学工作者努力探索的问题；从而建立快速、敏感、准确的分子诊断技术和诊断方法，定期检测和预测即将流行的毒株，不断提高传统技术敏感度和特异性，同时不断推广和完善新方法、新技术，为早期、快速、特异、敏感地鉴别诊断此病毒，为有效地防控PCV2暴发与蔓延具有重大的理论意义和现实意义，控制PCV2对全世界养殖业及公共卫生构成的巨大威胁。
参考文献
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第四篇：心理咨询与诊断
心理咨询与诊断系统
1.产品简介
心理咨询与诊断系统（网络版）是辅仁淑凡软件为心理工作者（咨询师、心理医生等）量身定制的一套集心理咨询、诊断、治疗和档案管理为一体的大型心理专业网络平台应用系统。能够提高专业人员的工作效率，快速提升咨询师的职业化水平，同时也丰富了心理治疗的实现途径。
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第五篇：银杏的开发利用与研究进展
银杏科植物的开发利用与研究进展 摘要：本文主要就银杏类植物的各个部分的作用及其价值进行综合阐述，对其研究进展进行简单说明，指明其发展趋势, 给人们在以后的银杏栽培及开发利用方面以启迪。
银杏(Ginkgo)是一种多年生木本植物.又名白果树、公孙树。银杏是目前世界上珍稀裸子植物之一其生存历史可追溯到2 亿年前.树龄达千余年, 素有‘活化石’之称。这种古老树种早在地质史第四世纪冰川期就大批灭绝而仅存于中国、朝鲜半岛和日本。我国大部分地区诸如江苏、浙江、山东、广西、贵州、河南、湖北、江西、安徽、四川等省均产银杏。银杏是一种孑遗植物。和它同门的所有其他植物都已灭绝。银杏是现存种子植物中最古老的孑遗植物。变种及品种有：黄叶银杏、塔状银杏、裂银杏、垂枝银杏、斑叶银杏。主要分布在中国中部肥沃的砂质土壤，阳光充足的隐蔽处。
1我国银杏栽培发展状况
改革开放以来, 我国银杏栽培发展速度突飞猛进。现在人们不再是只有走进寺庙或名胜古迹地, 才可看到稀有的几株老银杏树, 银杏的千万个子后代都纷纷离开寺庙, 到城市的街道旁、公园里、校园及其他庭院内扎根落户, 到农村的田地时、山坡上和宅边路旁安了家。据不完全统计, 现在全国银杏栽培面积约13 万hm2, 仅江苏、山东两省栽植银杏就达2500 万株左右(不包括正在培育的数亿株苗木)。通过科学研究的深入开展和科学知识的普及, 越来越多的人对银杏的生长发育特点有了一定的了解,掌握了银杏丰产栽培新技术。从而打破了过去那种把银杏说成是30年而生, 300年而兴, 以及桃三杏四梨五年, 无儿不栽白果园等旧的观念。现在可以达到一年播种, 二年嫁接, 三年见花, 四年见果, 五年果实产量形成一定规模。若是以收获银杏叶作为主要栽培目的, 则见效更快。
2银杏的价值和用途
银杏科植物，不管是原种还是变种的价值之高, 效益之大, 用途之广, 是一般树种难以比拟。
2.1银杏树的环境价值
银杏树高大挺拔，叶似扇形。冠大荫状，具有降温作用。叶形古雅，寿命绵长。无病虫害，不污染环境，树干光洁，是著名的无公害树种、有利于银杏的繁殖和增添风景。适应性强，银杏对气候土壤要求都很宽范。抗烟尘、抗火灾、抗有毒气体。银杏树体高大，树干通直，姿态优美，春夏翠绿，深秋金黄，是理想的园林绿化、行道树种。可用于园林绿化、行道、公路、田间林网、防风林带的理想栽培树种。被列为中国四大长寿观赏树种（松、柏、槐、银杏）。
2.2银杏果的食用价值
银杏果俗称白果，它由肉质外种皮、骨质中种皮、膜质内种皮、种仁组成。白果养生延年，银杏在宋代被列为皇家贡品。日本有每日食用白果的习惯。西方人圣诞节必备白果。就食用方式来看，银杏主要有炒食、烤食、煮食、配菜、糕点、蜜饯、罐头、饮料和酒类。有祛痰、止咳、润肺、定喘等功效，但大量进食后可引起中毒。白果中含有的白果酸、白果酚，有抑菌和杀菌作用，可用于治疗呼吸道感染性疾病。白果水浸剂对各种真菌有不同程度的抑制作用，可止痒疗癣。白果外种皮中所含的白果酸及白果酚等，有抗结核杆菌的作用。白果用油浸对结核杆菌有很强的抑制作用，用生菜油浸演的新鲜果实，对改善肺结核病所致的发热、盗汗、咳嗽咯血、食欲不振等症状有一定作用。
2.3银杏果和银杏树的经济价值
又名白果，属于干果类，其经济结果年限可达数千年之久。在诸多的干果中，银杏的经济价值排名第三。白果的价值主要体现在食用和药用。中国白果产量占世界总产量的90%，银杏叶、果是出口创汇的重要产品，尤其是防治高血压、心脏病重要的医药原料，银杏叶中提取物可以“捍卫心脏，保护大脑”。已知其化学成分的银杏叶化学提取物多达160余种。主要有黄酮类、萜类、酚类、生物碱、聚异戊烯、奎宁酸、亚油酸、蟒草酸、抗坏血酸、a-已烯醛、白果醇、白果酮等。白果的药用主要体现在医药、农药和兽药3个方面。银杏的外种皮提取物对苹果炭疽病等11种植物病菌的抑制率达88%～100%。醇提取物对丝棉金尺蠖3天内防治率达100%，同时可防治叶螨、桃蚜、二化螟等害虫。此外，银杏树干通直，木材是制乐器，家具的高级材料。银杏木材优质，价格昂贵，素有“银香木”或“银木”之称。银杏木材质具光泽、纹理直、结构细、易加工、不翘裂、耐腐性强、易着漆、掘钉力小，并有特殊的药香味，抗蛀性强。银杏木除可制作雕刻匾及木鱼等工艺品，也可制作成立橱、书桌等高级家具。银杏木具共鸣性、导音性和富弹性，是制作乐器的理想材料。
2.4银杏的艺术价值
银杏气势雄伟，树干虬曲、葱郁庄重。在中国的名山大川、古刹寺庵、无不有高大挺拔的古银杏，它们历尽沧桑、遥溯古今，给人以神秘莫测之感，历代骚人墨客涉足寺院留下了许多诗文辞赋，镌碑以书风景之美妙，文载功德以自傲。选取姿势优美的银杏，加工制成盆景，将大自然中银杏的雄姿浓缩在盆盎之中，古特幽雅、野趣横生，清供案头，令人怡情怡目。
银杏树是著名的长寿树种，生命力强，叶形奇特，易于嫁接繁殖和整形修剪，是制作盆景的优质材料，用银杏树奶制作的银杏盆景更是一绝，具有很高的观赏价值和经济价值。银杏是中国盆景中常用的树种，银杏盆景干粗、枝曲、根露、造型独特、苍劲潇洒、妙趣横生，是中国盆景中的一绝。夏天遒劲葱绿，秋季金黄可掬，给人以峻峭雄奇、华贵雅之感，近年来日益受到重视，被誉为“有生命的艺雕”。按照人们不同的欣赏要求，主要有观实盆景、观叶盆景和树桩盆景几种类型。
2.5银杏叶的价值
银杏叶为银杏科银杏属植物银杏 的叶子。银杏中含有丰富的黄酮类物质。此外, 还含有银杏内醋、银杏多糖等。其提取物(E G B)具有多种保健功能, 广泛应用于食品及化妆品。
银杏叶中含有多种黄酮类化合物(如芸香甙、山奈素-3-鼠李糖甙、山奈酚、槲皮素、异鼠李素等),叶蜡中含有白果醇, 秋季黄叶中还可提取银杏素和异银杏黄素等。就目前所知, 银杏叶片中含有180 余种有机化合物[ 2, 4] , 这些化合物其中许多具有药理活性。当前人类发生多且又危害大的首要疾病是心脑血管病, 而治疗心脑血管疾病的药物的有效成分便是银杏叶中所富含的黄酮类化合物和银杏内酯等。这些化合物对人体能起到扩张血管, 软化血管, 抑制血小板活化因子, 抑制脂质过氧化, 清除血液中活性氧和血管壁上废弃物等良好作用。从而可达到增加血流量, 降低血液粘稠度, 改善微循环, 防止血小板凝集等方面的积极效果。因此, 对高血压、冠心病、心绞痛、脑血栓、脑供血不足, 以及由这些疾病所引起的并发症(如视网膜距离改变、老年性痴呆、头昏、头痛、眩晕、耳鸣、失眠、健忘等)均有极为显著的疗效。到目前为止, 用银杏叶有效成分制成的药物应是防治心脑血管疾病的最佳天然药物。近期发现, 银杏叶黄酮尚具有一定的抗肝损伤作用。
3研究前景
我国银杏资源相当丰富.其拥有量占世界总量的70% 以上，银杏除作为药用外.它的提取物更广泛地用干食品、饮料、化妆品等方面。国外市场己有含银杏叶提取物的口香糖和巧克力;口本已将银杏叶提取物添加到红茶、绿茶、乌龙茶中制成保健茶;香港市场已有银杏洒、银杏饮料等产品出售。另外.银杏叶提取物加入消炎剂能有效地促进毛发生长及改善皮肤末梢血液循环.在美容、美发上均有显著功效。目前已有以银杏提取物为主要成分的生发剂等。一批发明专利问世。与国外相比 我国银杏制剂的开发尚处干出口原料及粗提取物初级阶段.欧洲所需银杏叶90 % 从我国购买。因此.我们应充分利用我国的银杏资深改变我国出口原料及粗提取物的现状.进一步开发出有效的银杏新药品和保健食品、美容化妆品及饮料等其它银杏制品。
参考文献
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