第一篇:洛阳玉米种子纠纷案
洛阳玉米种子纠纷案.(2003)
案情简介:2001年5月22日,河南汝阳县种子公司(下称汝阳公司)与伊川县种子公司(下称伊川公司)签定合同,约定由伊川公司为其代繁玉米种子。合同约定:汝阳公司给伊川公司提供亲本玉米种子2437.5公斤,伊川公司为汝阳公司代繁农大108玉米杂交种子10万公斤。合同履行期限至2002年10月31日止。同时,双方约定,汝阳公司接受玉米种子的价格为基地收购价加代繁费,基地种子收购价的确定按移交种子时当地市场商品玉米单价的2.2至2.5倍计算。但伊川公司未能履约,为赚取更大利润,将所育种子高价卖与了他人。2003年初,汝阳公司以伊川公司不履约为由,将其诉至洛阳市中级人民法院,请求法院判令伊川公司合同违约并对汝阳公司做出经济赔偿。
伊川公司同意做出赔偿,但在赔偿损失的计算方法上与汝阳公司发生争议。汝阳公司认为,依据《中华人民共和国种子法》(以下简称《种子法》的立法精神,赔偿损失的计算方法应按市场价格定,伊川公司之所以将代繁的种子转卖他人,也是因为当时市场价格较高。汝阳公司按市场利润3.4—3.9元/公斤价格计算,扣除其它因素损失为70余万元。而伊川公司认为,赔偿应当依据《河南省农作物管理条理》及省物价局、农业厅据此制定的《河南省主要农作物种子价格管理办法的通知》(以下简称《通知》)即政府指导价来确定赔偿数额,因为按此计算,伊川公司只需赔偿2万元左右。
洛阳市中级人民法院在经审理后,于2003年5月27日做出(2003)洛民初字第26号判决书,判决书认定:《种子法》实施后,玉米种子的价格已由市场调节,《河南省农作物种子管理条理》作为法律价位较低的地方性法规,其与《种子法》相冲突的条款“自然无效”,而河南省物价局、农业厅联合下发的《通知》又是根据该《条例》制定的一般性规范性文件,其与《种子法》相冲突的条款亦为“无效”条款,遂判令伊川公司按市场价格赔偿汝阳公司经济损失59.7万余元。
但伊川公司则提出,《种子法》并没有对种子的销售价格做出任何规定,《河南省农作物种子管理条例》对农作物种子经营价格做出的具体规定没有与《种子法》、《价格法》相抵触,法庭不应视之“无效”。法院是司法机关,无权直接在判决书中认定上级立法机关制定的正在生效的《条例》无效。一审判决后,伊川公司不服洛阳市中级法院的一审判决,向河南省高级人民法院提起上诉。
与此同时,河南省人大、洛阳市人大亦对洛阳中级法院“宣告”地方法规“无效”的判决表示不满,于是在2003年10月13日,河南省人大常委会办公厅下发了“关于洛阳市中级人民法院在民事审判中违法宣告省人大常委会通过的地方性法规有关内容无效问题的通报”(下称“通报”),“通报”指出,“针对洛阳市人大常委会的请示,2003年10月13日省十届人大常委会第24次主任会议认为,洛阳市中级人民法院作为一级审判机关,在其民事判决书中宣告省人大常委会通过的地方性法规有关内容无效,其实质是对省人大常委会通过的地方性法规的违法审查,违背了我国的人民代表大会制度,侵犯了权力机关的职权,暴露了一些审判机关对人民代表大会制度意识的淡薄,是严重违法行为。1998年省高级人民法院已就沁阳市人民法院在审理一起案件中错误地审查地方性法规的问题已通报全省各级法院(豫高法[1998]111号),洛阳市中级人民法院却明知故犯。主任会议决定,为了维护地方性法规在全省贯彻执行的严肃性,请省法院对洛阳市中级人民法院的严重违法行为做出认真、严肃的处理,认真查找、分析再次出现类似情况的原因,真正采取切实措施,以避免类似情况的再发生,并将处理结果报告省人大常委会。”
2003年10月13日,河南省人大常委会法制室下发了题为“关于洛阳市人大常委会关于《河南省农作物种子管理条例》实施中有关种子经营价格问题的请示”的答复,该答复认为:经2003年10月13日省十届人大常委会第24次主任会议研究,现答复如下:
1.《河南省农作物种子管理条例》第36条关于种子经营价格的规定,与《中华人民共和国种子法》没有抵触,应继续适用。
2.洛阳市中级人民法院在其民事判决书([2003]洛民初字第26号)中宣告地方性法规有关内容,这种行为的实质是对省人大常委会通过的地方性法规的违法审查,违背了我国的人民代表大会制度,侵犯了权力机关的职权,是严重违法行为,请你们依法行使监督权,纠正洛阳市中级人民法院的违法行为,对直接责任人员和主管领导依法做出了处理,通报洛阳市有关单位,并将处理结果报告省人大常委会。
随后,河南省高院于2003年10月21日做出了关于“河南省高级人民法院关于洛阳中院在民事审判中违法宣告省人大常委会通过的地方性法规有关内容无效问题的通报”(豫高法[2003]187号),洛阳市中级人民法院做出了“关于中院(2003)洛民初字第26号判决书违法宣告省人大常委会通过的地方性法规有关内容无效问题通报”。11月7日,在河南省人大和省高级法院的直接要求下,洛阳中院党组做出书面决定,撤消了此案主审法官李慧娟的审判长职务,并免去其助理审判员的资格,同时撤消了当时受委托签发判决书的一位副庭长的职务。
分析参考:此案涉及的最核心的问题就是法律审查权的问题。
“司法审查”一般是指法院或司法性质的机构对政府行为的审查,主要包括立法与行政行为的审查。“宪政审查”是指法院或专门成立的机构,基于宪法对立法行为的审查。在这个意义上,“司法审查”是一个更广泛的概念,包括了行政法(行政法规)审查和宪法审查。国内学者一般把宪政审查也称之为“违宪审查”。国外的宪法审查机构无非两种模式:一种是马歇尔大法官在1803年的马伯里案中所创建的“分散”审查模式,其特征是普通法院有权审查立法的合宪性。第二种是1920年奥地利宪法所建立的“集中”审查模式,即建立专门的“宪法法院”来审查立法的合宪性。司法审查或违宪审查制度,就是在制度内部设置一种自动发挥作用的纠错机制,时刻准备发现错误、纠正错误。通过这种分散的纠错活动,化解法律中的冲突,防范由不正义的积累所引发的社会尖锐冲突。对于一个现代国家来说,没有建立适当的宪法审查制度,就不可能有宪政,更谈不上法治。
很遗憾的是我国从第一部宪法颁布至今已有五十年了,宪法审查制度仍然没有建立起来。我国现行宪法第67条规定:“全国人民代表大会常务委员会行使下列职权:„„
(七)撤消国务院制定的同宪法、法律相抵触的行政法规、决定和命令;
(八)撤消省、自治区、直辖市国家权力机关制定的同宪法、法律和行政法规相抵触的地方性法规和决议。”但是全国人大常委会从来没有行使过这种权力,因而,究竟通过何种程序、以何种方式认定行政法规、地方性法规违法、违宪,又以何种程序、何种方式宣布撤消已被认定为违宪、违法的行政法规、地方性法规就更有待于我们在今天进行制度创新时加以认真考虑了。2004年5月虽然全国人大常委会成立了法规审查备案室,它似乎是中国违宪审查的雏形。但值得注意的是,法规备案审查室所审查的范围只是国务院的行政法规和政令、地方性法规和政令,并不包括全国人大及其常委会通过的一般法律,因为宪法规定全国人民代表大会及其常务委员会是我国的最高权力机关,行使立法权,所以,它所通过的法律,任何机构都无权进行审查,只能由它自己来进行解释和修改。
现在我们再回到本案,根据宪法第2条,“中华人民共和国的一切权力属于人民。人民行使国家权力的机关是全国人民代表大会和地方各级人民代表大会”,第3条第3款规定,“国家行政机关、审判机关、检察机关都由人民代表大会产生,对它负责,受它监督”,由此,我们可知,法院在行使审判权时,确实无权对人大及其常委会通过的地方性法规的效力进行评判。而应该承担这一职能的全国人大常委会却从未行使过这种权力,这就形成了实际生活中法律审查权的真空状态。然而,法院作为法律的适用者,难免会遇到法律之间相互抵触的情形,同时,《立法法》第79条也规定:“法律的效力高于行政法规、地方性法规、规
章”,法官选择上位法应当是于法有据。正确地选择所适用的法律是法官的职责,但法官又无权对自己在相抵触的法规中做出选择的理由做出解释,这正是中国法官所遭遇的尴尬现状!
于是,在现实中,法官们处理此类问题会因人而异地在如下方法中进行选择:(1)拒绝违反上位法的规范的适用,并指出这样做的理由。李慧娟就是这样做的,她是法律的忠实适用者,也是一位勇敢者,但却成了制度创新的牺牲者!(2)直接适用上位法,不对下位法进行评论,即不说明判决的理由。这种选择在现行制度下,不失为一种“聪明人”的选择,但不讲理的判决不符合司法判决的应有品格——以理服人。
(3)适用低位法。这是在法官地方化的制度环境中带有普遍性的一种选择。试看看今天各地因政府强制拆迁所引发的行政诉讼的判决就会一目了然。这种法官虽能“明哲保身”,但实在有愧于法律的公正,难免良心的熬煎!(4)在理论上还有一种办法,就是不判决,向上报告。主审法官碰到法律相抵触,先报告所在法院,下级法院报告上级法院,最终报告到最高人民法院,最高人民法院再报告全国人大常委会进行审查。且不说其中的种种步骤是否可行,即便顺利走完这一大圈,也不知要费时几何,效率何在!君不闻西谚“迟到的公正就是不公”乎?由是而观之,中国的法官在此情形下,进亦难,退亦难,唯李慧娟们才敢于迎难而上,勇于进行制度创新,斯人吾所与也!
最后我们再谈谈人大监督与司法独立的问题。根据我国宪法和法律,全国人大及其常委会无疑对包括最高人民法院在内的各级人民法院的司法工作、上级人大及其常设机关对下级人大产生的人民法院的司法工作、各级人民代表大会对产生于自己的人民法院的司法工作都具有监督权。同时,宪法也规定人民法院独立行使审判权。人大的监督应以不妨害司法独立为界限。因此,人大在行使监督权时应注意合法。河南省人大常委会发布的由省人大常委会主任会议作出的有关本案的《通报》以及河南省人大常委会法制室作出的有关答复是在该案的二审期间,不但干扰了正常的司法程序,而且实质性地影响了该案的的最终判决,使该案的判决成了人大的判决,严重妨害了司法独立的原则;同时,河南省人大常委会的“通报”和答复在主体资格上违反了我国宪法关于人大制度的规定。我国人大制度的一个很重要的特点就是,能够作出决定的要么是人大,要么是人大常委会,而人大常委会主任会议和专门委员会(本案中的法制室更不在此列)都无权对外行使决定权,但河南省人大的这两个不具资格的主体却下发文件对外作出了关于洛阳市中院种子案件的定性的决定。其主体资格之不合法显而易见,地方人大是地方的最高权力机关,其对自身当如何合法去行为尚且如此,足见中国实现法治之不易。
可喜的是学者们和我国有关机构正在积极地研究、探索和启动中国的宪法审查制度,但愿李慧娟们在未来不再成为牺牲者!
第二篇:2013年玉米种子市场分析
2013年玉米种子市场形势分析
浏览次数:236发布时间:2013年02月19日【字号 大 中 小】
作者:佟屏亚
今年是玉米种子严重供大求的年份,郑单958、先玉335两品种依然唱主角,“套包”种子充斥市场,诱惑式促销竞争终端,种子价格从高降低,激烈价格战“断尾求生”。寒冬之后,谁能活下去?谁能走出来?
一、一年制种,可用两年
2012年风调雨顺,气候适宜,全国杂交玉米制种面积435万亩,制种产量平均亩产360公斤,总产量15.7亿公斤,有效库存5.5亿公斤;2013年可供种量21.2亿公斤,预计全国玉米面积5.5亿亩,需种量12亿公斤,余种量9.2亿公斤,供种量多了近1倍,创下十年来玉米制种产量和余种量的新高。就地区而言,东北、西北春玉米区供过于求,黄淮海夏玉米区严重供过于求,西南玉米区略过于求,只有黑龙江省极早熟玉米区供种量不足,部分品种走俏,价格高企。就市场销售现状而言:高产、优质、耐密、脱水快的品种受欢迎,区域性新审定品种需求稳定,传统大路品种随季节推移销量逐渐减少。
玉米种子持续供大于求,原因是审定品种过多过快,有些种业老板以拥有的新品种确定制种面积。库存过剩的不仅有大品牌郑单958、先玉335,还有刚进入市场的新品种,两三年不生产种子都够了。尽管高端玉米种子毛利率60%~70%的时代已不复存在,尽管在供大于求形势下玉米种子利润下降,但在农资行业中15%~20%的利润依然可观,经销商利润依然可盘可点。
二、两大品种,仍唱主角
郑单958、先玉335火爆市场已有7~8年甚至十多年,两个品种一枝独秀的局面将不复存在,但依然鹤立鸡群,没有哪个品种有超越表现,今后种植面积能超过1000万亩的几率很低。新审定品种都会“避开大路走两厢”,依靠定位发展地区性品种。
两个品种一是市场依然唱主角。郑单958以适应性广、综合抗性好、耐密高产,全国种植面积依然会保持5000万亩以上。先玉335表现高产、稳产、早熟,脱水快,出籽率高,容重高,商品品质好,适合机械化收获,有5%~10%的产量优势,2010年迅猛增加到3692万亩,如果加上私繁滥制,先玉335可能达到7000万亩。二是依然是核心竞争力。郑单958为拥有产权的几家种业公司每年奉献亿元左右的红利。遗憾的是,无序竞争,互相掣肘,“人参卖成萝卜价”。先玉335分别由敦煌-先锋、登海-先锋获得经销权,知识的垄断性决定价格的走向,采取高品质、高价位、服务到户的独家营销模式,毛利率依然走高。三是依然引领育种方向。两类品种基本上“左右”了中国玉米育种方向,育种人员掀起“模仿秀”,两三年就吆喝着“类958”、“类335”上市了。新审定品种2/3以上都是仿制或稍加修饰,超越的概率微乎其微。
三、“套包”种子,充斥市场
“套包”种子成本低,盈利高,市场随处可见,哪个品种热销,就有人“套包”那个品种。专家估计,在玉米主产区,郑单958、先玉335被“套包”约在2/3以上。有大企业、有小厂家。有国企、有民企,也有上市公司。
“套包”种子花样翻新:一是真袋子里装假种子。在潜规则护卫下,很多比对照郑单958增产8%到20%的“类958”新品种浮出水面,“类958”袋子里多数装的是郑单958种子。新品种吉祥1号和郑单958的长相只在苗期才有宽叶和窄叶可辨,有产量优势。很多地区都有它被“套包”的影子。二是假袋子里装真种子。有报道说,吉林销售“套包”种子公司或作坊就有数百家,有2/3的先玉335是“套包”种子。正牌先玉335每袋净利润15~20元,而“套包”种子可达30~40元成倍暴利。三是假袋子里装假种子。经理花百十万买下新品种权,或只买个审定号,甚至就地取名灌包,把套购或自繁种子装进包装袋。便可轻松地赚到大钱。“套包”已经成为中国种子行业的一大痼疾,知
识产权保护形如摆设,监管执法部门助纣为虐!
四、诱惑式促销,竞争终端
种子经销得终端者得天下,“渠道制胜”、“终端为王”是众多企业奉行的名言。今天种子企业普遍采用“返利营销”模式,在连年供大于求的买方市场,经销商被“返利”的胃口与日俱增,每袋(每亩播种量)种子少者返利8~10元,多者20~30元,卖1袋返利高的种子比卖1袋返利低的种子要多挣一两倍的钱。经销商会努力销售返利高而实际并不优秀的品种。
农民信息闭塞,科技知识欠缺。在老人妇女成为农业生产主力军的情况下,农民极易接受诱惑式促销。今年经销商们普遍提高了优惠幅度,赠送各种礼品,农户也加快了备种的步伐。山东省德州市一位经理介绍隆平206销售现场:“隆平206啊!名门出新秀啊!买种子有奖啊!买1袋,送个盘;买两袋,给个盆;买3袋,拿暖并;买4袋,奖个锅;买5袋,提溜一并油啊!多买多赠,机会莫错过啊!花样翻新的诱惑式营销渐渐演绎成为礼品战、饮食战、回扣战,促销方式激励农民的购买冲动。农民与经销商之间信息严重不对称,既在专业知识上不对称,又在定价评估上不对称,无法做出主观判断,只能随终端经销商的“指挥棒”转动。
五、激烈价格战,“断尾求生”
作为特殊的商品的种子,其价格要体现种子作为商品自身的价值,也要体现出其市场供需关系和科技含量。培育品种投入大量的资金、人力和时间,周期长,风险高,经济寿命短。在供大于求形势下,“赚的钱都存在仓库里”是老板最头疼的事。种子滞销就面临着贷款利息、压库损失等风险,几年的心血和投入都可能打了水漂!价格战的背后始终游荡着一个高库存魅影,特别是临近玉米播种季节,生产厂家、经销商都绷紧劲儿,整天提心吊胆,随时准备把价位降下来,出货为王,净仓是福,最后演变成为种子价格战。
吉林一家种业老板介绍:2012年春节过后,长春种子大市场出现突如其来的种子大甩货,先玉335每袋(亩)从近百元降至35~40元,有的店100元可以拿走3~4袋,直逼经销商的心理底线,赔本赚吆喝啊!种子大甩卖让周边市县的农民大车小车赶来,出现了多年少有的排队购种现象。
价格战似乎更接近于“断尾求生”。在缺乏规范的市场,那些缺乏科技实力和核心竞争力的企业,往往通过价格战低价倾销种子。专家指出,经济政策和种子市场变化诡谲,种业老板看不清未来,追逐眼前利益,孤注一掷,很多企业自己就是掘墓人。寒冬之后,谁能活下去?谁能走出来?
第三篇:玉米种子室内检验学习心得
学习心得
一、扦样分样技术
1、袋装种子扦样频率
a 1-4 个容器,每个容器扦取3个初次样品;
b 5-8 个容器,每个容器扦取2个初次样品;
c 9-15 个容器,每个容器扦取1个初次样品;
d 16-30 个容器,种子批中扦取15个初次样品;
e 31-59 个容器,种子批中扦取20个初次样品;
f 60或更多容器,种子批中扦取30个初次样品。
以前扦样有时没有严格按照这个标准来取,以后取样要严格按照标准执行。2.制备送验样品
(1)需磨碎的种类100g,不需磨碎的为50g;
(2)真实性样品100g。3.机械分样法
混合2-3次,对分递减分至所需重量,每类样品要独立分取。
4.如果发现种子异常,要进行异质性检测判定。
二、抓关键技术环节,控制影响因素
1.检验员(人)(1)熟悉有关的法律、法规规定
对种子法还不熟悉,种子检验理论和技术还有待加强和提高。
(2)具有良好的职业道德
爱岗敬业,诚实守信,客观公正,遵纪守法等。2.种子生活力和种子活力
种子生活力:种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总合。
种子活力是指在广泛的环境条件下,决定可接受发芽率的种子批的活性和性能那些特性的综合表现。与种子田间出苗质量密切相关。3.发芽结果计算与表示
当重复正常幼苗百分率都在容许差距范围内,则取其平均数;当重复间超过容许差距时,要重新试验。4.发芽试验数据修约
a)先将正常幼苗百分率修约至最接近的整数,0.5进位,并与其余部分(不正常幼苗、硬实、新鲜种子和死种子)百分率整数部分的数值相加。如果总和为100,则修约程序结束。b)执行a)程序后的总和不是100,则在不正常幼苗、硬实、新鲜种子和死种子百分率中找出小数部分最大数值者,将此修约至整数,并作为最终结果。并与其余部分百分率整数部分的数值相加。如果其总和为100,则修约程序结束。c)执行b)程序后的总和不是100,继续重复执行b)程序,直至获得总和为100。
d)执行b)和c)程序时,凡小数部分均相同的,按照下列顺序优先进行修约:不正常幼苗、硬实、新鲜种子和死种子。5.发芽试验重复间和重复试验间超差的处理:
(1)假如四次重复间最高和最低值的差距在容许误差范围内,该发芽试验的结果是可靠的。将各重复的平均数修约成最接近的整数,查容许误差表,如重复间的最大差异小于规定的容许误差,则认为结果是可信的。容许误差至少适用于正常幼苗种类。
(2)当重复间的差距超过表中最大容许误差时,应采用同样的方法重新试验。如果第二次结果与第一次结果相符合,即其差异不超过表中规定的容许误差,则填报两次试验的平均数。
(3)如果第二次结果与第一次结果不相符,即其差异超过表中所示容许误差,则采用同法第三次试验,如果三次试验的结果相符合,即其差异不超规定容许误差,则填报三次试验结果的平均数。如果三次试验结果不相符,即其差异超过规定容许误差,则三次试验结果进行两两比较,取不超过容许误差的一对结果的平均值作为最后结果。若第三次试验仍得不到符合要求的结果,则应考虑人员操作、仪器设备或其他反面原因。
三、实验室质量管理
1、质量法规
对《产品质量法》、《标准化法》、《种子法》、《农作物种子标签和使用说明管理办法》等的学习有待进一步学习。
2、质量与检验
(1)从过程管理的角度来看,质量绝对不是检验出来的,预防产生质量,检验不能产生质量;
(2)合格产品不是检验出来的,而是干出来的;
(3)检验可以发现不合格产品。
3、种子检验室质量管理
应建立相适应的有效的管理体系,形成文件,将抽样到结果报告各环节检验活动标准化、制度化。管理体系文件一般包括四个层次:《质量手册》、《程序文件》、《作业指导书》、《记录格式》。
4、试验要求
(1)若发现试验结果异常,试验人员不要轻易下结论,应认真查记录、查计算、查操作、查试剂、查方法、查样品,找出原因后有针对性地进行复验。
(2)要认真及时做好原始记录,要求所有的实验内容都要有原始记录,不得漏记。
5、记录控制要求
(1)试验数据应用中性笔或钢笔在实验同时记录在原始记载表上,不应事后抄录,也不应漏记。试验中出现的异常情况也应及时记录。书写要求工整、清楚、真实、准确、完整。不准用铅笔记录,不得随意涂改、乱写、乱画和折叠。当发生笔误时,用“-”注销,并在“-”上方由本人更正,加盖改正章。
(2)试验原始记录要按年编目成册,做好标识,归档保管。(每年做一次整理归档)。
6、检测数据修约规则
(1)称重规定:1g以下保留四位小数,1~10g保留三位小数,10~100g保留二位小数,100~1 000g保留一位小数。(2)在净度分析中,各成分之和是99.9%或100.1%,从最大值(通常是净种子成分)增减0.1%。(3)数字修约规则:“四舍六入五成双”法则。(4)检测室报出数值最右的非零数字为5时,应在数值后面加“(+)”或“(-)”或不加符号,以分别表明已进行过舍进或未舍未进。
四、净度分析水分测定
1、净种子
未成熟的、瘦小的、皱缩的、带病的或发过芽的种子单位都应作为净种子。
2、试验样品的分取
试验样品至少含有2500个种子单位的重量,玉米种子不少于900克。
3、净度分析称重计算
(1)如果增失超过原试样重量的5%,必须重做。(2)如增失小于原试样重量的5%,则计算各组分百分率。各组分百分率的计算应以分析后各种组分的重量之和为分母,而不用试样原来的重量。
(3)若分析的是全试样,各组分重量百分率应计算到一位小数。若分析的是半试样,各组分重量百分率应计算到二位小数。
4、净度分析容许差距
实际差距容许范围内,取其平均值。如超过,再分析一份试样,若分析后的最高值和最低值差异没有大于容许误差2倍时,填报三者的平均值。
4、净度分析容许差距
若一种组分的结果为零,须在适当空格内用“-0.0-”表 示,若其一组分少于0.05%,则填报“微量”。
五、玉米品种鉴定技术-SSR标记法
1、SSR技术特点
•多态性丰富,分辨能力强,每个位点最多可含有十多个等位基因; •较高重复性,针对于每个位点设计特异性引物,扩增均为特异性目的片段扩增;
•前期研发基础强,有大量已知染色体位置的共享位点; •为共显性标记,能准确区分不同等位变异; •为中性变异标记;
•数据形式为具体片段长度,能够实现数据标准化; •技术非常成熟,检测方法简便易行; •SSR技术易于推广,不受专利限制。
2、DNA提取的原则
(1)保证DNA结构的完整性;
(2)将蛋白质、多糖、多酚等杂质降低到最低程度;(3)排除有机溶剂和金属离子的污染;(4)纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质;(5)排除其他核酸分子的污染。
3、快速碱煮法
(1)碱:在碱性环境下裂解细胞,使DNA变性,从而达到提取的目的。碱能够使DNA变性,且不会复性,并缠结成网状物质析出最终加入TE溶液溶解。
(2)煮:煮沸的方式能够代替液氮冷冻法,抑制DNA酶的活性,防止煮沸还能够代替研磨,破坏细胞壁和细胞膜,释放出DNA。
4、核酸提取注意事项 •最好使用新鲜材料,低温保存的样品材料不要反复冻融 •材料应适量,过多会影响裂解,导致DNA量少,纯度低
5、DNA提取量少(1)主要原因
实验材料不佳或量少;破壁或裂解不充分;沉淀不完全;洗涤时DNA丢失(2)解决方法
尽量选用新鲜(幼嫩)的组织;样品预处理充分;适当延长高温裂解时间;用枪头将洗涤液吸出,勿倾倒;低温沉淀,延长沉淀时间,加沉淀辅助物
6、PCR扩增
(1)PCR,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术,能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。
(2)一是被扩增的DNA所需量极小,理论上讲一个分子就可以用于扩增了;二是扩增效率高,几个小时就扩增1000万倍以上。
7、PCR反应体系及循环条件
PCR反应是Taq酶以dNTP为原料,以一对寡核苷酸引物为起点,以被扩增的DNA序列为模板在PCR热循环仪中进行的扩增反应。标准的PCR过程分为三步:1.DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA。2.退火(25℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。3.延伸(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′→3 ′端延伸,合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍。
8、模板DNA对PCR反应的影响
(1)模板纯度:蛋白、酚类、多糖等杂质会抑制PCR反应;(2)模板完整性:模板DNA降解会导致PCR无扩增产物;(3)模板浓度:实验表明:在一定范围内PCR的产量随模板的浓度的升高而显著升高。模板的量与循环数要匹配,如果循环数一定,模板的量太少,会出现阴性结果或条带很弱;模板的量太多,则会出现条带弥散,模糊不清。
(4)PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度(5)PCR反应体系中引物的浓度一般为0.1~0.5umol/L,在此范围内,PCR的产物量基本相同。
(6)若引物量过低会导致PCR产物量降低,而如果引物量过高,则会引起碱基的错配和非特异性扩增、生成引物二聚体,从而使目的DNA片断的扩增量下降。
(7)通常引物量应当10倍于靶序列。此外,引物的Tm值与退火温度相关,故引物的Tm值最好在55~80℃的范围。(8)高浓度dNTP易产生错误掺入,过高则可能不扩增;但浓度过低,将降低反应产物的产量。
(9)PCR中常用终浓度为50-400μM的dNTP。四种脱氧三磷酸核苷酸的浓度应相同,如果其中任何一种的浓度明显不同于其它几种时(偏高或偏低),就会诱发聚合酶的错误掺入作用,降低合成速度,过早终止延伸反应。
(10)此外,dNTP能与Mg2+结合,使游离的Mg2+浓度降低。因此,dNTP的浓度直接影响到反应中起重要作用的Mg2+浓度。
(11)耐热DNA聚合酶的活性依赖于反应体系中的二价阳离子。
(12)反应体系中Mg2+浓度过低,会显著降低酶的活性;而Mg2+浓度过高时,又使酶催化非特异性扩增增强。(13)Mg2+浓度还会影响引物的退火、模板与PCR产物解链的温度,从而影响扩增片度的产率。
(14)由于在PCR反应体系中的模板DNA、dNTP、引物中的磷酸基团均可与Mg2+结合从而降低反应体系中的Mg2+的浓度,而耐热DNA聚合酶需要的是游离的Mg2+,因此,一般Mg2+的加入量应比dNTP的总浓度高0.2~2.5mmol/L。(15)在不同的反应体系中模板DNA、引物以及dNTP的量各不相同,因此应根据具体的情况来确定特定PCR反应体系中Mg2+的最适浓度。
9、PCR循环条件
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至95℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备; ②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至60℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
在最后一个循环后,反应在72℃维持5-15分钟。使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链。
10、无扩增产物(1)原因
模板含有抑制物,模板含量低;该Buffer对样品不合适;引物设计不当或者引物发生降解;反应条件不适,退火温度太高,延伸时间太短。(2)对策
纯化模板;更换Buffer或者调整浓度;重新设.引物;降低退火温度,延长延伸时间。
11、PAGE电泳检测 聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis),是由丙烯酰胺(简称Acr)单体和少量交联剂甲叉双丙烯酰胺(简称Bis)通过化学催化剂AP(过硫酸铵)和加速剂TEMED(四甲基乙二胺)形成的三维空间的高聚物。聚合后的聚丙烯酰胺凝胶形成网状结构。网格孔径的平均直径决定于丙烯酰胺和双功能交联剂的浓度。聚丙烯酰胺凝胶具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。因此适用于不同相对分子质量物质的分离,且分离效果好。
12、注意事项
(1)在配制胶时,过硫酸铵最好现配现用,不要先配AP(过硫酸铵)溶液,因为AP很容易变质。而且过硫酸铵固体时间过久也会失效的。
(2)电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。
(3)丙烯酰胺为神经剧毒和可疑致癌物,实验过程中应穿工作衣,戴手套并加倍小心。
13、SSR技术在品种真实性鉴定中的应用(1)成对比较
a)与来自农业部品种权保护的标准样品比较; b)与已审定品种标准样品比较; c)与模仿对象进行比较。(2)数据库比较
a)在品种权保护中,辅助筛查申请品种的最近似品种,代替原来由申请者自行提供。
b)在国家和各省区试中,鉴定区试品种是否与已知品种雷同,并作为品种能否推荐审定的必要条件。
c)在种子市场打假中,鉴定市场抽检的品种仿冒了什么已知品种。
14、纯度鉴定流程(1)引物筛选
利用至少10个核心引物进行筛选和评估(杂交种取20粒),一方面确定该纯度问题是以自交苗、回交苗、其它类型杂株还是遗传不稳定造成的,一方面挑选出合适的双亲互补型引物进行下一步鉴定。(2)样品鉴定
从待测样品中随机取样至少100粒种子,利用确定下的若干引物进行进一步鉴定,并利用这些引物综合判定待测杂交种的纯度。
如果是自交苗造成的,采用其中1个互补型引物即可; 如果是回交苗造成的,则应采用2-4个能够综合判定出回交苗的互补型引物;
如果是其它杂株,则根据实际情况选择1-2个能够将杂株鉴定出来的互补型引物; 如果是遗传不稳定,则尽量剔除一致性极差的位点,对一致性表现较相近的引物中选择1-2个进行鉴定。(3)结果表示
根据所选引物对各单株的检测结果,综合判定待测杂交种的纯度,如果提供了父母本的话,原始记录中需要区分自交苗(NM)和其它类型杂株(NQ,含回交苗、异品种等造成的杂株);如果没有提供父母本的话,原始记录中只需提供杂株(即自交苗也是杂株的一种)。品种纯度检测结果按以下公式计算: P(%)=
第四篇:临泽县力促玉米种子产业
临泽县力促玉米种子产业转型升级
临泽县认真贯彻落实《国务院关于加快现代农作物种业发展的意见》精神,组织实施《张掖市玉米制种产业发展规划(2012-2020年),以30万亩优质玉米种子基地为依托,加快推进张掖国家级玉米种子产业园建设,促进玉米制种产业从传统种业向现代种业转型。
该县进一步严格玉米种子企业准入条件,加强质量信誉等级评估和星级评定,2012年全县准入玉米制种企业23家,落实玉米制种基地30万亩。以建设标准化、规模化、集约化、机械化种子生产基地为目标,集中流转土地3.15万亩,建设玉米制种核心区,配套播收机械131台。加快推进张掖国家级玉米种子产业园建设,以入驻工业园区的种子企业为依托,打造10家左右拥有自主知识产权、新品种研发生产能力强、生产加工技术先进、市场营销网络健全、技术服务到位、具有核心竞争力的“育繁推一体化”现代化玉米制种企业为目标,实现优质基地与优势企业的强强联合。至目前,张掖国家级种子产业园基础配套设施已基本完成,入驻北京奥瑞金、中种迪卡、三北种业等国内外知名种子企业16家,其中上市公司6家,累计完成建设投资25.6亿元,建成23条果穗、籽粒烘干及成套种子加工生产线,加工能力突破20万吨;投资5020万元,建筑面积19957平方米的种子检验检测科技培训服务中心已开工建设。结合开展种子执法年活动和玉米种子生产经营秩序专项整治行动,积极推行玉米种子合同规范化管理,公示亩保效益、收购方式、分配方案等合同内容,接受群众监督
第五篇:2012年玉米种子市场形势分析
核心提示:据农业部资料,20112012年杂交玉米制种面积410万亩,产种13.6亿公斤,加上库存4.0亿公斤,可供种17.6亿公斤以2012年玉米种植面积5亿亩计算,需种11.0亿公斤,余种6.6亿公斤,是一个玉米种子强势供大于求的年份,种子市场将开展一场激烈的竞销战两品种依然走俏郑单958和先玉335两个品种将依然主宰今年的种子市场,面积稳定且可能继续增加郑单958以耐密高产优势横亘新世纪10年,近两年部分地区发生风、涝、旱自然灾害,郑单958表现出较好的综合抗性和适应力,面积有所回升,今年仍将是全国种植面积最大的品种,但郑单958收获时含水多,收购粮价偏低,在东北地区无法恢复到前几年优势地位先玉335早熟,脱水快,出籽率高,商品性好,适合机械化收割,农民依然情有独钟,去年种植面积约5000多万亩但在吉林部分地区风雨灾害造成倒伏,有些地区还因饲用效果不佳被拒种,预计今年先玉335种植面积略有减少新品种叫好不叫座近年来,玉米育种人员以郑单958或先玉335为标杆,品种部门也以它作为区试对照,一般产量必须超过5才能通过审定但超过这个指标很难!
据农业部资料,20112012年杂交玉米制种面积410万亩,产种13.6亿公斤,加上库存4.0亿公斤,可供种17.6亿公斤以2012年玉米种植面积5亿亩计算,需种11.0亿公斤,余种6.6亿公斤,是一个玉米种子强势供大于求的年份,种子市场将
开展一场激烈的竞销战两品种依然走俏郑单958和先玉335两个品种将依然主宰今年的种子市场,面积稳定且可能继续增加郑单958以耐密高产优势横亘新世纪10年,近两年部分地区发生风、涝、旱自然灾害,郑单958表现出较好的综合抗性和适应力,面积有所回升,今年仍将是全国种植面积最大的品种,但郑单958收获时含水多,收购粮价偏低,在东北地区无法恢复到前几年优势地位先玉335早熟,脱水快,出籽率高,商品性好,适合机械化收割,农民依然情有独钟,去年种植面积约5000多万亩但在吉林部分地区风雨灾害造成倒伏,有些地区还因饲用效果不佳被拒种,预计今年先玉335种植面积略有减少新品种叫好不叫座近年来,玉米育种人员以郑单958或先玉335为标杆,品种部门也以它作为区试对照,一般产量必须超过5才能通过审定但超过这个指标很难!于是区试和审定部门各自确定规则,比如改为超过3,后来干脆模糊对照品种,或者把供试品种排个队,录取前几名,佼佼者就浮出水面了但还没有发现超过或替代郑单958或先玉335的新品种春节前后,某些企业搞宣传,造声势,声称新审定品种超过958打败335,佯称已经种植好几百万亩了农民经历超级玉米吨玉米多次上当受骗,心有余悸,这样的新品种叫好不叫座加大返利争商家由于多年来供大于求造成种子买方市场,许多公司为争夺客户,普遍采用所谓的返利营销模式,即繁种公司给经销商留下一定的利润空间前几年一般每公斤
玉米种子返利24元,今年种子明显供大于求,批发商和经销商的胃口与日俱增,对返利要求越来越大,每公斤种子返利增加到68元有些地区实行单粒播种,每亩地播量1.5公斤左右,每袋(亩)售价3040元,个别地区每袋5060元,每袋返利高达1520元有的公司宣布达到若干指标奖励面包车批发商、经销商、代销户都很乐意销售返利多的品种,即使这个品种并不十分优秀一位经销商实话实说:你想啊!每年销量是固定的,卖1公斤高价种子比卖1公斤返利低的种子要多挣1倍的钱终端市场上演礼品战玉米种子终端继续下沉现今玉米主产区每个县经销商少则300500家,多者1000家名副其实的品种仅2030个,大多数是套牌冒牌种子,有大企业,有小厂家,也有就地取名灌包的品种名称多乱杂,经营商心照不宣激烈竞销直达乡、镇、村,随处可见经销种子的宣传车,摆满各类赠品(大褂、外套、棉裤、电饭锅等)乃至摆桌喝酒经销手段已经从品种竞争演变为让利竞争的礼品战酒水战以前是农民求商家卖种子,现在是商家求农民买种子种子价格两极分化,有经历的农民意识到贪小便宜吃大亏,不会轻易购买,坐待降价。