绿色植物中色素的提取和分离

第一篇：绿色植物中色素的提取和分离

绿色植物中色素的提取和分离

一、实验的目的：

1、学习从植物中提取色素的方法。

2、学习柱色谱(层析)的原理及其操作方法。

二、实验原理

柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。在色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)如氧化铝或硅胶。液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时，由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不同而按一定的顺序吸附。然后从柱顶加入洗脱剂(流动相)，样品中的各组分随洗脱剂按一定的顺序从色谱柱下端流出，根据不同颜色分段收集。

三、器材与试剂

氧化铝,石油醚,乙酸乙酯,色谱柱,乙醇,绿叶 ,旋转蒸发仪

四、实验步骤

菠菜色素的提取过程

取3g 新鲜菠菜叶于研钵中拌匀研磨5 分钟，残渣用20mL 的石油醚-乙醇（2:1）混合液进行提取，共提取两次。把浸取液合并过滤，滤液转移到分液漏斗中，加入等体积的水洗涤后弃去下层的水-乙醇层，石油醚层再用等体积的水洗涤两次，以除去乙醇和其它水溶性物质。石油醚层用无水Na2SO4进行干燥、浓缩为2 mL。取一半做柱层析分离，其余留作薄层层析分析。

（4）上样：将要分离的混合物用适当的溶剂溶解后，用滴管沿柱壁慢慢加入吸附剂表面。

（5）淋洗分离：当被分离物的溶液面降至吸附剂表面时，立即加入洗脱剂进行淋洗，此时可以配合薄层层析来确定各组分的分离情况。

取15-20g 中性氧化铝进行湿法装柱。填料装好后，从柱顶加入上述浓缩液，先用9:1的石油醚-丙酮进行洗脱，当第一个橙黄色色带（胡萝卜素）即将流出时，换一接收瓶接收，约需要洗脱剂40 mL。换用7:3的石油醚-丙酮进行洗脱，当第二个棕黄色色带（叶黄素）即将流出时，换一接收瓶接收。此时，继续更换洗脱剂，用3:1:1的正丁醇-乙醇-水洗脱，分别在层析柱的上端可见蓝绿色和黄绿色的两个色带，此为叶绿素a和叶绿素b。

(1)用10g中性氧化铝和石油醚装层析柱。

(2)将绿色植物色素浓溶液用滴管小心加到层析柱顶部。加完后打开下部活塞，让液面下降到柱面以下1mm左右关闭活塞。加入数滴石油醚，重新打开活塞使液面下降，重复几次使有色物质全部进入柱体内。

(3)依次用不同洗脱剂进行洗脱，收集各色带

五、注意事项

1.石油醚有毒，请在通风良好处使用；

2.柱中不可有空气，必要时用装在玻棒上的橡皮塞轻轻敲击柱身；

3.柱中氧化铝表面任何时候都不得露出液面，以防有空气进入；

4.待色素全部进入柱体后，方可进行洗脱，以防有拖尾影响分离效果。

第二篇：绿色植物中色素的提取和分离

绿色植物中色素的提取和分离

[实验名称] 绿色植物色素的提取及色谱分离

[教学目标] 知识与技能: 通过对绿色植物色素的提取与分离，了解天然产物分离提纯的方法 [教学重点] 学习柱色谱和薄层色谱分离的基本原理及操作方法 [教学难点] 薄层色谱、柱层析实验操作要点的掌握和应用 [教学方法] 陈述法，讲演法

[教学过程] [讲述] 【实验目的】

1.通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；

2.通过对柱色谱和薄层色谱操作方法的掌握，加深了解微量有机物色谱分离、鉴定的原理。

[讲述] 【背景知识】

绿色植物的叶、茎中，如菠菜叶，含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶绿素b。它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素a的含量通常是b的3 倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体，即a-胡萝卜素、β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素，其中β-胡萝卜素含量最多，也最重要。叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。

本实验先根据各种植物色素的溶解度情况将胡萝卜素（橙）、叶黄素（黄）、叶绿素a和叶绿素b从菠菜叶中提取出来，然后根据各化合物物理性质的不同用色谱法进行分离和鉴定。[图示] 【分离产物结构式】

叶绿素a、叶绿素b、叶黄素（黄）和β-胡萝卜素的结构式如下图所示：

[讲述] 【色谱法原理】

色谱法是分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法。其分离原理是利用混合物中各个成分的物理化学性质的差别，当选择某一个条件使各个成分流过支持剂或吸附剂时，各成分可由于其物理性质的不同而得到分离。与经典的分离提纯手段（重结晶，升华，萃取和蒸馏等）相比，色谱法具有微量、快速、简便和高效等优点。按其操作不同，色谱可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气相色谱和高压液相色谱等。在此，我们学习柱色谱和薄层色谱（TLC）。1.柱色谱原理

液体样品从柱顶加入，流经吸附柱时，即被吸附在柱中固定相（吸附剂）的上端，然后从柱顶加入流动相（洗脱剂）淋洗，由于固定相对各组分吸附能力不同，以不同速度沿柱下移，吸附能力弱的组分随洗脱剂首先流出，吸附能力强的组分后流出，分段接收，以此达到分离、提纯的目的。2.薄层色谱原理

由于混合物中的各个组分对吸附剂（固定相）的吸附能力不同，当展开剂（流动相）流经吸附剂时，发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组分具有不同的移动速率，最终得以在固定相薄层上分离。其应用主要有：跟踪反应进程；鉴定少量有机混合物的组成；分离；寻找柱色谱的最佳分离条件等。

[提问] 试比较叶绿素、叶黄素和胡萝卜素三种色素的极性，为什么胡萝卜素在层析柱中移动最快？

[讲述] 【实验试剂】

新鲜菠菜3g、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、硅胶G、中性氧化铝

[讲述和演示] 【实验步骤】 1.菠菜色素的提取过程

取3g 新鲜菠菜叶于研钵中拌匀研磨5 分钟，残渣用20mL 的石油醚-乙醇（2:1）混合液进行提取，共提取两次。把浸取液合并过滤，滤液转移到分液漏斗中，加入等体积的水洗涤后弃去下层的水-乙醇层，石油醚层再用等体积的水洗涤两次，以除去乙醇和其它水溶性物质。石油醚层用无水Na2SO4进行干燥、浓缩为2 mL。取一半做柱层析分离，其余留作薄层层析分析。2.柱色谱的一般过程及菠菜色素的分离： 【柱色谱的一般过程】

（1）选择吸附剂：

常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭等

选择规则：吸附剂必须与被吸附物质和展开剂无化学作用；吸附剂的颗粒大小要适中；可以根据被提纯物质的酸、碱性选择合适的吸附剂。

化合物的吸附能力与分子极性的关系：分子极性越强（或分子中所含极性较大的基团）其吸附能力也较强。极性基团的吸附能力排序如下：

Cl-, Br-, I-<<（2）选洗脱剂：

CC<-OCH3 <-CO2R

CO<-CHO <-SH <-NH2 <-OH <-CO2H根据被分离物各组分的极性和溶解度选择相应极性的溶剂，当单一溶剂无法很好洗脱时，可考虑选择混合溶剂。

溶剂的洗脱能力按递增次序排列如下：己烷（石油醚）、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、甲醇、水。

（3）装柱：色谱柱的大小应视处理量而定，柱长与直径之比，一般为10:1 ~ 20:1。固定相用量与分离物质用量比约为50:1 ~ 100:1。

装柱的方法分湿法和干法两种，无论哪一种，装柱的过程中都要严格排除空气，吸附剂不能有裂缝。上样前必须使吸附剂在洗脱剂的流动过程中进行沉降至高度不变为止，此为压柱。

（4）上样：将要分离的混合物用适当的溶剂溶解后，用滴管沿柱壁慢慢加入吸附剂表面。

（5）淋洗分离：当被分离物的溶液面降至吸附剂表面时，立即加入洗脱剂进行淋洗，此时可以配合薄层层析来确定各组分的分离情况。【菠菜色素的分离】

取15-20g 中性氧化铝进行湿法装柱。填料装好后，从柱顶加入上述浓缩液，先用9:1的石油醚-丙酮进行洗脱，当第一个橙黄色色带（胡萝卜素）即将流出时，换一接收瓶接收，约需要洗脱剂40 mL。换用7:3的石油醚-丙酮进行洗脱，当第二个棕黄色色带（叶黄素）即将流出时，换一接收瓶接收。此时，继续更换洗脱剂，用3:1:1的正丁醇-乙醇-水洗脱，分别在层析柱的上端可见蓝绿色和黄绿色的两个色带，此为叶绿素a和叶绿素b。3.薄层色谱（Thin Layer Chromatography）的操作方法： 【薄层色谱的操作方法】

（1）点样：将样品用低沸点的溶剂配成1-5％的溶液，用内径小于1 mm的毛细管点样。点样前，先用铅笔在薄层板上距一端1 cm处轻轻划一横线作为起始线，然后用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径不超过2 mm；如果需要重复点样，则待前次点样的溶剂挥发后，方可重复点样，以防止样点过大，造成拖尾、扩散等现象，影响分离效果。若在同一板上点两个样，样点之间距离在1-1.5 cm为宜。待样点干燥后，方可进行展开。

（2）展开和展开剂：薄层展开要在密闭的器皿中进行，加入展开剂高度为0.5 cm。把带有样点的板（样点一端向下）放在展开器中，并与器皿成一定的角度。盖上盖子，当展开剂上升到离板的顶部约1 cm处时取出，并立即标出展开剂的前沿位置，待展开剂干燥后，观察斑点的位置。

（3）显色：若化合物不带色，可用碘薰或喷显色剂后观察，若化合物有荧光，可在紫外灯下观察斑点的位置。

（4）Rf值：一个化合物在薄层板上上升的高度与展开剂上升高度的比值称为该化合物的Rf值：

[7]

[8][6]

Rf

【薄层色谱应用】

化合物移动的距离

展开剂移动的距离当实验条件严格控制时，每种化合物在选定的固定相和流动相体系中有特定的R值，把不同的化合物的Rf值的数据积累起来可以供鉴定化合物使用。但是，在实际工作中，Rf值的重复性较差，因此不能孤立地用比较Rf值来进行鉴定。然而，当未知物与已知物在同一薄层板上，用几种不同的展开剂展开时都有相同的Rf值时，那么就可以确定未知物与已知物相同。当未知物的鉴定被限定到只是几个已知物中的一个时，利用TLC就可以确定，如图1（a）所示。

TLC也可以用于监测某些化学反应进行的情况，以寻找出该反应的最佳反应时间和达到的最高反应产率。如图1（b）所示，反应进行一段时间后，将反应混合物、原料和产物的样点分别点在同一块薄层板上，展开后观察反应混合物斑点体积不断减小体积不断减小和产物斑点体积逐步增加了解反应进行的情况。

展开剂前沿ABCDE1小时FD'EF（a）未知物鉴定2小时（b）利用薄层监测化学反应图1 A：已知物；B：未知物；C：未知物D，D'：反应混合物；E：反应物；F：产物

[板书] 薄板层析结果记录

展开剂前沿碘苯二苯醚碘苯 反应液 二苯醚（a）第一步：点样（b）展开以后

图2 TLC跟踪反应记录[讲述] 【菠菜色素的鉴定】

取一块硅胶板，分别点上色素提取液样点，胡萝卜素样点和叶黄素样点，分别用石油醚-丙酮（8:2）或石油醚-乙酸乙酯（6:4）两种溶剂系统展开，观察斑点的位置并排列出胡萝卜素样点和叶黄素Rf值大小的次序。[板书] 【菠菜色素的提取与分离】

研磨菠菜过滤菠菜汁石油醚-乙醇萃取液萃取析层柱色带、溶液水洗涤旋蒸石油醚浓缩液薄层层析Rf值

[讲述] 【注意事项】

由于实验时间有限，只接收全部的胡萝卜素。在接收叶黄素的同时，进行柱上叶绿素的分离，不接收叶绿素，叶黄素也不必全部接收。[作业] 1.色谱法分离是根据什么原理进行的？ 2.柱色谱和薄层色谱主要应用在哪些方面？

3.TLC分析中常用展开剂的极性大小顺序是怎样的？展开剂极性对样品的分离有何影响？点样、展开、显色这三个步骤各要注意什么？

第三篇：绿叶中色素的提取和分离的实验报告

绿叶中色素的提取和分离的实验报告

一、实验目的 1.学会提取和分离叶绿体中色素的方法。2.比较、观察叶绿体中四种色素：理解它们的特点及与光合作用的关系

二、实验原理 光合色素主要存在于高等植物叶绿体的基粒片层上，而叶绿体中的色素能溶于有机溶剂 中。故要提取色素，要破坏细胞结构，破坏叶绿体膜，使基粒片层结构直接与有机溶剂接 触，使色素溶解在有机溶剂中。叶绿体中的色素有四种，不同色素在层析液(脂溶性强的有机溶剂)中的溶解度不同，因而随层析液的扩散速度也不同。

三、材料用具 取新鲜的绿色叶片、定性滤纸、烧杯、研钵、漏斗、纱布、剪刀、小试管、培养皿、毛细吸管、量筒、有机溶剂、层析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸钙。

四、实验过程（见书Ｐ54）1.提取色素： 2.制备滤纸条： 3.色素分离，纸层析法。（不要让滤液细线触及层析液）4.观察： 层析后，取出滤纸，在通风处吹干。观察滤纸条上出现色素带的数目、颜色、位置和宽窄。结果是：4条色素带从上而下依次是：胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)、叶绿素a(蓝绿色)、叶绿素b(黄绿色)。

五、讨论 1.滤纸条上的滤液细线为什么不能接触到层析液？ 2．提取和分离叶绿体中色素的关键是什么？

第四篇：《绿叶中色素的提取和分离》教学反思

增加高中生物实验教学，注重分析能力培养

由于生物学科的地位在高考中不高，在很多学校，领导和教师普遍认为由于高考基本是重视对实验的理论原理，实验的设计步骤和实验的现象及结论的考察，所以讲讲实验就行了，而且组织学生实验教学费时又费力。然而这样的想法不但违背了《新课程标准》的理念，也严重影响了学生生物科学素养的发展。所以在新课程的改革中，就要求我们的教师要合理安排教学进度，我们不但要把实验时间还给学生，同时还要加强对学生的实验教学。把演示实验变成学生实验，提高动手能力。实验课的教学不仅能够培养学生的动手操作的能力，同时还能培养学生分析问题的能力，提高创新能力。

在新课程改革下的实验教学可以采用让学生自主探究，合作互动的教学模式，教师通过精心设计教学程序，为学生创设于实验内容密切相关的学习情境，让学生在创设的学习情境中去发现问题、解决问题，去补充实验所必需的认知和操作经验，并在实验过程中培养自主探究意识、科学思维方法、严谨科学态度和创新实践能力。

第五篇：叶绿体中色素提取和分离实验课案例及总结

“叶绿体中色素提取和分离”实验课的案例及分析

在倡导教学形式和学习方式多样化，体现以学生发展为本的教学改革形势下，实验课的教学改革迫在眉睫。生物学实验并不是简单的教学辅助部分，它是学习生物学的主要手段，是培养学生能力，提高科学素养的有效途径。因此，必须考虑：怎样才能使学生在实验课中乐学、会学、学有所得。下面介绍作者在“叶绿体中色素提取和分离”实验课教学中的尝试和体会。1 案例介绍

1.1 案例实施的背景

现行高二教材中本实验属验证性实验，教师在实验课之前布置了预习，并按传统教学方法要求学生根据实验步骤进行操作，但是在学生完成实验后，结果并不理想，很多学生的色素带出现颜色不明显；色素带不整齐，有重叠等情况，究其原因，主要是学生实验操作不规范造成的，然而令人担忧的是当老师追问“可能是哪些操作步骤出问题，会导致实验结果的不理想？”时，多数学生一问三不知，很显然，学生在做实验时，只是按照教材中的实验步骤，“依葫芦画瓢”，机械地完成实验任务而已，对实验步骤缺乏深入思考和有效反思，“只知其然，而不知其所以然”。

要改变这种现状，必须解决以下几个问题：①要激发学生上实验课的兴趣，提高学习积极性，增强学生的主体意识；②要提高学生的自我监控意识，使学生对实验的各具体操作步骤能不断进行反思。③使学生深刻认识到生物学实验操作的准确性和规范性是得到正确实验结果的必要前提，提升学生的生物科学素养。

1.2 教学过程及分析

教师在认真学习和领会《高中生物课程标准》的基础上，结合学校和学生实际，创造性地进行了心得教学设计，并在平行班中加以实施。教学实施情如下：

（1）课前准备

①教师：编制“自我监控”表（附录）；准备新鲜的菠菜叶，干燥的定性滤纸，烧杯，研钵，小玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，小试管，培养皿盖，量筒。天平，丙酮，层析液，二氧化硅，碳酸钙。②学生：进行课前预习；分组。

（2）创设问题情景

①教师：展示实验结果，一条色素带颜色清晰、整齐、无明显重叠（理想）；另一条色素带颜色不明显、不整齐、有明显重叠（不理想）。提问：“为什么会出现不理想的实验结果，本实验的哪些操作步骤与之有关？” ②学生：相互讨论，但由于一时无法理清实验内容的内在逻辑性，因此难以确定问题的答案。

（3）明确监控目标及意义

①教师：（发“自我监控”表）问题的答案就在学生的实际操作过程中，就在于这些实验操作的“准确度”的把握上，那么如何把握实验操作过程的“准确度”？就要求学生对实验操作的具体步骤进行自我监控，自我监控能力的培养也是提到学生自学能力和学习效率，掌握好各学科知识的重要前提。②学生：带着一种新奇感，饶有兴趣地去了解“自我监控”表中各项监控项目。

（4）引导学生实施“自我监控”学习

①学生：按照“自我监控”表对各项监控项目进行实验操作的自我监控，并做好相应的实验记录。②教师：不断巡视，进行适当的指导。

（5）开展“协作式”探索

①学生：以“自我监控”表作为重要的参考依据，以小组为单位，对实验结果成败的原因进行对照分析，明确问题症结的原因，并进一步验证。如有学生发现用棉线蘸取绿叶画滤液细线效果更好，马上向其他同学推广；也有的学生通过对照分析，认为自己的色素带颜色太浅的原因是研磨不够充分及研磨液过滤不彻底，则新的监控学习中调整研磨的程度，并且不用尼龙布过滤而直接用少许脱脂棉等操作加以验证。②教师：适当指导，并引导学生了解科学研究的一般过程：“实验观察—提出假设—验证假设”。

（6）反馈和评价

①学生：以小组为单位反馈实验结果，实现小组间的资源共享。②教师：不管学生的协作式探索结果是否正确，教师都要予以适当鼓励。2

教学反馈及反思

2.1

教学反馈

学生对实验教学的评价是考查实验教学效果的重要材料。因此该实验结束后，教师以座谈的形式进行了教学反馈调查，现将部分反馈整理如下：

（1）学生甲：这种实验方式，不像以前那样简单，给我增加了难度，我无法从课本的操作步骤中找到明确的答案，有时甚至感到无从下手，但却使我产生挑战的兴趣，而且我也有信心去战胜困难！

对“叶绿体色素提取和分离”实验的一点改进

在人教版高中生物（必修）教材第一册的“叶绿体色素提取和分离”实验中，按教材所描述的实验方法和过程操作，实验效果并不理想，往往存在以下问题影响实验效果：（1）实验过程繁琐、操作复杂、耗时长；（2）绿叶还未充分研磨，加入的丙酮就以挥发的差不多了；（3）由于毛线吸管较细，学生操作时极易将其折断，增加了操作的难度和实验的成本；（4）用毛细吸管划出的滤液细线，线条粗细不均，影响层析效果。

针对上述问题，笔者对该实验的方法和步骤进行了一些改进，并做了大量的对照实验，获得了良好的实验效果。现将改进后的具体方法和步骤介绍如下，一边和各位同仁交流。1 实验方法、步骤

提取绿叶中的色素

（1）称取5g新鲜绿色叶片（如菠菜叶、胡萝卜叶等），剪碎，放入研钵中。（2）向研钵中加入少许二氧化硅和碳酸钙，将纸盖在研钵上，在纸的中心穿一个洞，将杵棒套入洞口中进行迅速充分的研磨。

（3）研磨1-2min后（绿叶接近雨糊状时），向研钵中加入3ml丙酮，继续迅速充分的研磨约半分钟。

1.2

制备滤纸条

取一张干燥的定性滤纸，剪成长6cm，宽1cm的滤纸条，将滤纸条的一段剪去两角，并在距这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。1.3

分离色素

（1）用一干净的盖玻片，用其一端蘸取研磨液印在滤纸条的铅笔线上（操作时注意：盖玻片要始终与滤纸相垂直），待研磨液干后，再重复上述操作一次。

“叶绿体中色素的提取和分离”实验改进

一．实验原理： 色素提取原理：利用相似相溶原理，色素可以溶解于酒精、丙酮等有机溶剂中，形成色素液。色素分离原理：由于四种色素在层析液的溶解度不同，因而四种色素在滤纸上的扩散速度也不同，从而将它们分离开来。

二、目的要求

1.初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。

2.探索叶绿体中有几种色素。胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b随层析液在滤纸上扩散速度不同，可以分出四条色素带

三、重点与难点

重点：初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法和探索叶绿体中有几种色素。难点：该实验中应注意的问题和培养学生独立实验的能力,掌握探究实验的方法。

四、对实验的几个地方进行的改进 1实验材料的改进：

用菠菜作为实验材料，易受季节性限制，此外，色素提取液呈黄绿色，色素带颜色浅，实验效果差。用韭菜，萝卜叶，蒿菜，天竺葵代替菠菜，所得到的实验效果很好，又可以克服菠菜因季节原因，难于取材。2提取液的改进：

除丙酮外，也可用酒精（无水乙醇）替代，用量相同，结果大致相同；和酒精相比，丙酮有一定毒性，因而不妨换一下。3过滤和制滤液的改进：

获取高浓度的色素提取液是该实验成功的一个关键环节。一般我们要求色素提取液呈墨绿色。为了得到墨绿色的色素提取液，我们可尝试取消漏斗基部放脱脂棉这一步，而用3～4层纱布包裹充分研磨过的绿叶，用4层纱布过滤，通过漏斗将汁液挤于试管中，将滤液收集到试管或小烧杯中备用。这样可以降低叶片含水量，从而提高叶绿体中色素的提取效率。实验证明，改进后较改进前实验效果明显。

将过滤用的尼龙布改为用棉花塞住漏斗口过滤，效果更好！

4分离色素的改进：

分离色素时教材中的条形纸层析法，据许多中学老师反映实验效果不很理想，存在的问题有:①采用毛细吸管吸取滤液，画线很难达到“细、匀、齐”的要求;②制备滤纸条时剪去两角，不容易把握;③层析液容易没及滤液细线。④条形纸很容易下滑⑤层析后容易出现色素带分离不够充分，或色素带分离过度而造成胡萝卜素在滤纸条上消失的现象。

另一种新的方法叫培养皿法

不用滤纸条，也不划滤液细线，而取直径为10cm的干燥圆形定性滤纸，用毛细吸管吸取色素滤液，在滤纸的中央点成圆形的色素斑，重复4～5次。然后取一枚缝衣针，穿一条细棉线，在棉线末端打个结，将针穿过滤纸上的色素斑中心，在距线结约4cm处剪断棉线。取直径l0cm的培养皿一套，向培养皿底中加入5ml层析液。把上述圆形滤纸扣在培养皿底上面，无线结的一面朝下，棉线则浸没在层析液中。再将培养皿盖盖在滤纸上。

采用该方法，可以看到色素随层析液由线结处向周围均匀扩散。因此得到的4条色素带呈同心环状，由内而外分别是黄绿色、蓝绿色、黄色和橙黄色，十分清晰。而且层析时，滤纸上的色素不会没及层析液中，点色素斑比划滤液细线容易得多，实验效果非常显著。结果证明：运用灯芯法分离色素，色素量大，分层清晰，四种色素分离出鲜明的四圈色素环，效果显著；操作过程较易掌握，失误较少。此实验方法关键有两点需注意：一是几次滴液体要在同一点上，否则不能形成圆环：二是要掌握好滴层析液的量和时间，否则会影响效果，甚至失败。

综述： 要求：教师具有较高的组织教学能力和启发教学的经验，教师要事先根据教学内容精心设疑，引导学生积极思考，独立研究，自行设计、完成实验，从而使学生加深对实验原理的理解，并在此基础上掌握和学会获得知识的科学方法。

优点：学生通过亲自参与实验的设计、操作、分析得出结论，学生经历了质疑、思考、分析、释疑等一系列思维加工过程，成为一个“发现者”。获得了成功感，学习兴趣极高。

不足：“探讨——实践”实验教学法适合于有一定的知识基础，已有一定的实验能力的高年级学生，教师既要敢于“放”（让学生自由讨论、动手实验）又要能够“收”（及时纠错、分析、总结），课堂纪律不好控制，很难保证在按时完成实验的前提下全面提高学生的素质。反思和分析：

(1)这个实验可以作为验证实验处理，也可变为光合色素提取方法的探究实验

（2）教师的教育观念一定要转变与更新（3）教师一定要注意学生的创新需要

（4）教师一定要努力实践

综合同学们对各步骤的改进，使实验的完成效果更好，体现了同学们无限的创造力！