中医大实验动物学重点要点

第一篇：中医大实验动物学重点要点

实验动物:是经人工饲育、对其携带的微生物实行控制、遗传背景明确或者来源清楚的，用于科学研究、教学、生产、检定以及其他科学实验的动物。

实验动物的三大特点:遗传背景明确,来源清楚;对其携带的微生物、寄生虫进行人工控制;用于科学实验

实验用动物:一切用于科学实验的动物。(野生动物；经济动物；观赏动物;实验动物)实验动物与实验用动物的区别：实验用动物是指所有用于动物实验的动物，包括实验动物。而实验动物是为研究的需要而培育的。确定是否是实验动物，要经过一系列检测，如微生物和遗传基因等，经专家鉴定才能称其为实验动物.动物实验是为科研、教学、药品检定等目的，对动物进行物理、化学和生物因素处理，观察其反应，获得实验数据，解决科研中的问题。即如何使动物实验合理化、规范化。简而言之，实验动物科学就是关于实验动物标准化和动物实验规范化的科学。3R 原则：减少；替代；优化

研究热点:基因治疗;异种器官移植;基因工程动物研究;3R研究 实验动物是现代医学生物学研究的重要支撑条件

AEIR要素：在生命科学领域里进行实验研究有四个支撑条件，即AEIR要素。即A：实验动物；E：仪器设备；I：情报信息；R：化学试剂

自然分类的方法：即根据动物的形态结构、生理机能、生态和地理分布等方面作为分类的标准。

种是分类的基本单位，它不是单独的个体，而是一群特性相似的个体总称。

实验动物现在一般按下列两种方法进行分类：按遗传学控制分类;按微生物学控制分类 品种：是人们根据不同需要而对动物进行改良、选择，即定向培育，并具有某种特定外形和生物学特性的动物群体，其特性能较稳定地遗传。

品系： 指来源明确，并采用某种交配方法繁殖，而具有相似的外貌、独特的生物学特征和稳定的遗传特性，可用于不同实验目的的动物群体。

按遗传学控制分类，实际上是根据基因的纯合程度来分，实验动物可分为:近交系;封闭群;杂交群

近交：血统和亲缘关系相近两个体间的交配，针对某一性状来说指基因型相同或相近的两个体之间的交配。

近交效应：使基因纯合；产生近交衰退

在实验动物的育种中，多采用全同胞兄妹交配的形式。

近交系：经至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先。亚系：残余杂合性；突变；遗传污染

3、近交系的特征：①基因纯合性 ②同基因性③表现型的均一性 ④遗传稳定性⑤可辨识性⑥个体性⑦国际分布⑧背景资料的可查性

近交系小鼠（除地鼠以外）国际命名法是近交系动物命名的基本参照法。

封闭群动物：以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群，在不从其外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上。

杂交群：两个近交品系动物之间进行有计划交配所获得的第一代动物。系统杂交动物（F1动物）杂种F1代动物不是一个品系或品种

命名：其杂交动物的雌性亲代名称在前，雄性亲代名称居后，二者间以大写英文字母“X”相连表示杂交。

鼠痘病毒：鼠痘是由鼠痘病毒引起的传染病。急性引起大批动物死亡。亚急性或慢性使患鼠肢尾肿胀，发炎和坏疽脱落，呈“缺肢”畸形。实验动物常见细菌感染对实验的干扰：引起人兽共患病的细菌;动物致病菌;条件致病菌 按对微生物控制的净化程度,国际上把实验动物分为：无菌动物；悉生动物；无特殊病原体动物（SPF动物）；普通动物

实验动物在我国分四级：无菌动物;无特定病原体动物(SPF动物);清洁动物;普通动物 无菌动物：以无菌技术获得，用现有的科学知识和检测技术，不能从动物体表及体内检出任何活的微生物和寄生虫的动物。

无”: 不是绝对的，而是相对的，是以现有的科学知识和检测技术不能检测出活的微生物和寄生虫。“菌”：细菌、病毒、支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体、真菌、寄生虫 “非一过性无菌”：不是用抗生素来得到的一过性的无菌，而是以无菌技术获得的。

在1895年Nuttall等人经剖腹产，用牛奶饲喂获得了无菌豚鼠，无菌动物的培育和使用是实验动物科学的第二次重大进展。

广义的悉生动物包括无菌动物，悉生动物、SPF动物。狭义的仅指悉生动物。

悉生动物：通常是指在无菌动物的基础上，经人工植入已知菌的动物，又称为已知菌动物或已知菌从动物。

无特定病原体动物：指不携带人兽共患病原体，而且不携带主要潜在感染或条件致病和对科研实验干扰大的病原体的动物。或指动物体内无特定的微生物和寄生虫存在，但带有非特定的微生物和寄生虫的动物。悉生动物与ＳＰＦ动物的异同：

相同点：体内都无病原微生物，但都带有非致病的其它微生物种类。

不同点：悉生：带哪些微生物是清楚明了的。SPF：只清楚体内排除了哪些微生物，真正体内带有微生物的情况是不清楚的。

普通动物：是微生物控制标准最低的动物。对实验结果的反应性较差

按微生物学控制标准,即根据微生物的净化程度及携带的寄生虫状况,将实验动物分为四级: 一级,普通级动物；二级,清洁级动物；三级,无特定病原体动物（SPF）；四级,无菌动物。卫生部级课题及研究生毕业论文等科学实验必须应用清洁级以上的实验动物”。

环境控制： 是研究饲养条件对实验动物的健康和质量所产生的影响，以及研究改善饲养条件的措施。

饲养条件：饲养过程、饲养管理、饲养环境

环境因素的分类：

1、气候因素：温度、湿度、气流、风速等

2、物理因素：照明、噪音、粉尘等。

3、化学因素：空气（O2和CO2）、臭气（NH3、H2S）和各种有害气体（SO2、NO2）

4、居住因素：房舍、饲养笼具、垫料、喂食器和饮水器，内环境等。

5、生物因素：微生物、动物密度、人、动物之间

实验动物设施的基地选择要求如下： 应避开自然疫源地； 宜环境安静；宜环境空气质量较好;应远离易燃、易爆物品的生产和储存区，并远离高压线路及其设施； 距离公共场所和居住建筑应间距应不少于 20m。

根据实验动物的微生物控制程度和空气净化程度分为：隔离系统；屏障系统；开放系统

1、动物饲育室的建筑：

（1）墙壁：要求光洁平滑、无裂口、耐腐蚀、耐洗涤剂的洗刷，不宜将水管、风管或其他线路裸露在墙上，不易清理。

（2）地板：地面宜采用水磨石，平整而不滑，耐水，耐磨，耐腐蚀，防潮。地面最好不设门槛。

（3）天花板：耐水耐腐蚀，其结构应力求简洁平滑。如同墙面，不应在天花板下出现明管。（4）窗：除了采用自然通风的开放系统外，最好不设可开启的窗户，可采用双层玻璃作窗户

（5）门： 饲养室的开门方向与室内通风情况相适应，室内为正压的门要往里开，室内为负压的门要向外开，门边上要有密封条，门上方应有玻璃做窥视窗，下方设有金属板。门要有防野鼠进入装置，门的规格大小应考虑室内最大物品的进出方便，最小不能低于0.9米宽、2米高，普通动物房应设有纱门。

（6）走廊：在清洁级以上的动物室最好设双走廊，即清洁走廊和污染走廊。

1、动物设施中建筑物的布局应根据以下几个原则而定：a、有利于防治疾病的传播和相互的感染b、便于工作、实验人员的操作c、清洁物品、污染物品运送的路线应分开，人员、物品、动物空气要单向移动。

1.营养：指的是一个过程，是指动物摄取、消化、吸收和利用食物中的营养物质以维持生命、生产产品的整个过程。

2.营养控制：通过研究营养素对动物生命活动的影响，揭示养分与生命间定性、定量规律。3.营养素： 即营养成分，凡能被动物用以维持生命活动、生产产品的物质。

4.饲料：指在正常情况下，凡能被动物采食，无毒、无害且能提供营养物质或有利于营养物质代谢的所有物质。营养素的功能：

结构物质：脂肪、蛋白质、碳水化合物、粗纤维。能源：脂肪、蛋白质

代谢调节物：矿物质、脂肪酸 附属功能：形成产品（蛋、奶）

蛋白质：是由氨基酸（机体所需的氨基酸有20种）组成的一类数量庞大的物质的总称。蛋白质是动物生命活动最基本的营养物质。

蛋白质生理作用 ：1.是构成机体器官、组织、细胞的基本材料2.是组织更新、修补的主要原料3.是机体生理功能的物质基础4.可供能和转化为糖和脂肪

必需氨基酸：动物体内不能合成或合成的量和速度不能满足动物的需要，必须从外界食物（饲料）中摄取的氨基酸。有10种：缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸。

非必需氨基酸：指人体可以自身合成或由其它氨基酸转化而得到，不一定非从食物直接摄取不可。包括：谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、天门冬氨酸、胱氨酸、脯氨酸、丝氨酸和酪氨酸等

脂肪生理作用 ：1.是组成机体组织的重要成分2.是体内能量的重要来源，也是储能的最好形式3.是脂溶性维生素的溶剂4.具有保温、保护脏器的作用

碳水化合物生理作用 ：1.无氮浸出物（1）供能与储能（2）机体某些细胞的重要成分（3）形成产品：奶、蛋 2.粗纤维（1）填充胃肠道，使动物有饱食感。（2）促进胃肠发育、蠕动和粪便排泄。（3）供给能量（指草食动物－盲肠）

矿物质生理作用 ：1.构成动物组织的重要成分：2.维持正常的渗透压、酸碱平衡、神经肌肉的兴奋性3.构成酶的辅基、激素、维生素、蛋白质和核酸的成分和参与酶的激活 维生素生理作用 ：1.是人体不可缺少的物质 2.营养作用

水的生理作用 ：1.是动物体内最重要的营养物质2.具有保持体温恒定的作用3.具有润滑作用4.有助于保持细胞和动物体格的形状

小鼠：耳耸立呈半圆形，有平衡、散热等功能 ；食道内壁有一层厚的角质化鳞状上皮。不耐饥饿。肠道短小。盲肠不发达；有胆囊；胰腺分散在十二指肠、胃底及脾门处。下颌骨形态不同品系有差异，可以进行遗传学检测。脾脏有明显的造血功能。大动物（如狗、猴）则无造血功能，只有贮血功能。骨髓为红骨髓,无黄骨髓，终生造血。腭或咽部无扁桃体。雌：无宫外孕，乳腺癌可发生在颈、背部。雄：睾丸大，共2个。不适宜做慢支炎模型及去痰平喘药的疗效实验。

生理功能及行为习性：1.体型小、易于饲养管理和实验操作 2．性成熟早、繁殖力强（18个月以上属于老年小鼠）3．昼伏夜动、喜黑暗（采食、交配均在夜晚进行，镇静试验、壮阳试验在晚上进行。）4．喜群居、雄鼠好斗，体臭传情（“理发师”。雄鼠具有分泌醋酸氨臭气的特性）5.性情温顺、胆小怕惊6．适应性差7.多种毛色，便于遗传学研究8.对外界刺激极为敏感，对多种病原体和毒素具有易感性，对致癌物敏感，自发肿瘤多。

BALB／c小鼠主要特性：①乳腺肿瘤自然发生率低，但对乳腺肿瘤病毒敏感；②易患慢性肺炎。③对放射线甚为敏感。⑤有自发高血压症，老年鼠心脏有病变，雌雄性小鼠均有动脉硬化。⑥对鼠伤寒沙门菌补体敏感，对麻疹病毒中度敏感。

C57BL 主要特性：①乳腺肿瘤自然发生率低，化学物质难以诱发乳腺和卵巢肿瘤。②对放射物质耐受力强。③对结核杆菌敏感。氨基甲乙酯处理后尾静脉注射引起肺部结核 C3H主要特性： ①乳腺癌发病率高，6～10月龄雌性小鼠乳腺癌自然发生率达85％～100％，乳腺癌通过乳汁而不是胎盘途径传播。14月龄雌性小鼠肝癌发生率为85％。③仔鼠下痢症感染率高。④对狂犬病病毒敏感。⑤雄性小鼠对氨气、氯仿、松节油等甚为敏感，病死率高。

DBA/2：①雌性小鼠乳腺肿瘤发生率，繁殖鼠(经产母鼠)为66％，处女鼠为3％。②听源性癫痫发作，35日龄小鼠为100％，55日龄后为5％。③雄性小鼠接触氯仿和乙二醇的氧化物，以及维生素K缺乏时，病死率高。

大鼠：在口腔充满食物时，仍可进行呼吸。大鼠不会呕吐，不能做催吐实验（狗、猫、猴等动物呕吐反应敏感，则宜选用）。适于肝外科实验研究。无胆囊（鸽、鹿、马、驴、象等动物没有胆囊）不能做胆功能观察。不具备胆囊浓缩胆汁和储存胆汁的功能，适宜作胆管插管模型，不耐饥饿。胰腺与脂肪组织的区别 是：胰腺颜色较暗，质地较坚硬。适宜作支气管肺泡灌洗。易做去垂体模型。无扁桃体。

生理功能与行为习性：

1、繁殖快，全年多发情动物。

2、喜啃咬、昼伏夜动。

3、垂体-肾上腺系统功能发达，应激反应灵敏，行为表现多样，情绪敏感，对炎症敏感，眼角膜无血管。（适于作去肾上腺模型和炎症模型，适宜于制作去垂体模型。）

4、视觉、嗅觉较灵敏，适宜做条件反射实验，对许多药物易产生耐药性。（一般开放饲养的大鼠主要死因为呼吸道疾病。）

5、营养缺乏敏感，易产生营养缺乏症。

6、汗腺极不发达，心电图中无S-T段，但其他部分稳定，重复性好。（适宜于直接描记血压，进行降压药及心血管疾病研究，汗腺仅仅分布在爪垫上，尾是散热器官，室温过高时常借助分泌大量唾液调节体温）

7、大鼠血压和血管阻力对药物反应敏感，但对强心甙的作用较猫敏感性低671倍。

8、性情较凶猛，抗病力强，门齿较长，激怒、袭击捕捉时易咬手，对环境适应性强。大鼠的常用品种、品系：

近交系：F344/N、Lou/CN(大鼠回盲部免疫细胞瘤)

突变系：SHR/oal、癫痫大鼠(可用于癫痫病的实验研究)、裸大鼠

封闭群：Wistar大鼠、SD大鼠(多用于营养实验;可作为更年期实验模型,以研究更年期综合征)

大鼠在生物医学研究中的应用：

（一）药理毒理研究1．药效学研究：新药筛选：抗高血压药物的筛选等。雌激素能终止大鼠和小鼠的早期妊娠但不能终止人的妊娠。(2)心血管系统药物的评价：常用作研究心血管药物的药理和调压作用的动物模型。(3)抗炎药物的筛选和评价 ：常用以筛选抗关节炎药和中医痹证的评价。足跖浮肿法 2．药物安全性评价试验

（二）肿瘤研究：大鼠可用于自发性和诱发性肿瘤模型的研究。

（三）微生物、寄生虫的研究

（四）营养代谢研究中的应用

（五）行为学研究的应用：

1、学习、记忆能力的研究

2、药物依赖性研究

3、条件反射和非条件反射的研究

（六）老年病学研究

豚鼠生理功能与行为习性：

1、生殖慢、发育快（豚鼠属于晚成性动物：母鼠怀孕期较长平均68天（60-75天），脑的发育在胚胎期42—45d就已经成熟，出生后就发育完善，（这一点有利于部腹取胎后无菌豚鼠和SPF豚鼠的人工哺育）。出生后就能活动，有牙齿，有被毛，眼可张开，4小时后就能行走和吃软料，2-3天豚鼠就可以一边吃乳，一边吃青饲料，生长发育快。）

2、草食动物：不能合成维生素C3、喜群居，胆小易惊：容易出现脱毛、皮肤损伤和皮炎。

4、豚鼠对青霉素、四环素族、土霉素等药物敏感，易引起变态反应。豚鼠在生物医学研究中的应用

（一）药物研究

1、药效学实验：用豚鼠来研究镇咳药物。是研究抗生素如青霉素的专门动物；作过敏反应的研究，豚鼠是首选动物，最好用白色豚鼠。

（二）、微生物研究中的应用： 豚鼠对结核杆菌具有高度感受性

（三）免疫研究中的应用（速发型过敏反应，迟发型超敏反应）

（四）、耳科研究中的应用：听觉耳动反射

（五）、营养研究中的应用

家兔的生物学特征：回盲部膨大形成一圆小囊，盲肠末端有较长的蚓突，为一免疫器官.对儿茶酚胺类和其它药物反应敏感，颈部有减压神经独立分支，电刺激减压神经对心脏的影响首选家兔。家兔属于刺激性排卵类型动物，兔无明显发情期，雌兔卵巢内一次能成熟许多卵子，但这些卵子并不排出，只有经雄兔的交配刺激后隔10～12小时才能排出。这种现象叫刺激性排卵。哺乳动物中家兔和猫都属于这种类型

能够准确掌握其排卵怀孕的时间，可预测胚胎发育，用于计划生育研究。家兔常用品种品系：日本大耳白兔，新西兰白兔，青紫兰兔，中国白免

家兔在生物医学研究中的应用：发热动物模型（首选家兔）以及解热和检查热原的实验研究，（大鼠、小鼠体温调节不稳定，不宜选用。）兔是研究胆固醇代谢及冠心病最早使用的动物，是复制高胆固醇血症、动脉粥样硬化动物模型的首选动物。生命科学研究中实验动物的选择要求：

一、动物个体间的均一性

二、动物遗传的稳定性

三、动物的易获得性： 果蝇、小鼠易得 选择的原则：

一、选择与人的形态结构、生理机能、代谢特点、疾病特点相似的实验动物

选用小型猪作烧烫伤实验研究是较理想的实验动物；犬、猴适合建立龋齿模型。小型猪是制作中医病理舌苔动物模型最理想的实验动物。金鱼被用来研究视觉器官的结构与功能；药物依赖性试验常选猴（最适宜），妇科方面可用猴做实验。神经反射弧实验蛙为首选的实验动物。可利用家兔进行针灸穴位实质的探讨。犬适合做药理学、营养学、外科学、毒理学、生理学和行为学等研究。小型猪常用于动脉粥样硬化、皮肤病、营养代谢等方面的研究。大鼠适于做应激性胃溃疡等实验。药物代谢的研究最适宜的动物为猴，其次为犬、大鼠。猕猴、豚鼠适宜于做Vc合成代谢的研究。仔猪适宜做营养学和婴儿食谱的研究。SHR大鼠是筛选抗高血压药物的良好动物模型。肥胖症小鼠常用于肥胖症的研究。糖尿病小鼠常用于糖尿病的研究。TA2小鼠常用于乳腺癌的研究。家猪是一种很好的子宫囊肿模型。猫是研究弓形虫的一个很好的实验动物。

二、选择解剖特点、生理特点符合实验目的要求的实验动物

观察电刺激减压神经对心脏的作用时应选用家兔。家兔不需要人工呼吸；青紫蓝兔适用于淋巴结内注射药物或通电进行免疫功能的研究。兔不适于做甲状旁腺摘除实验，但宜做甲状腺摘除后研究甲状旁腺功能的实验。而犬的甲状旁腺位置比较固定，常选用犬作甲状旁腺摘除实验。家兔常用于角膜瘢痕和角膜移植的研究。新西兰兔是很好的青光眼模型；雄鸡适宜做雄性激素的研究。地鼠适于作免疫学、肿瘤学和微循环功能等方面的实验研究。小鼠没有扁桃体，因此不能做扁桃体炎的模型。大鼠没有胆囊，因而不能做胆囊功能的实验研究。大鼠的肝脏再生能力很强，切除60%-70%肝叶仍可再生，很适合做肝外科实验的研究。猫的循环系统发达，故循环系统药物研究首选猫。家犬的汗腺不发达，不宜作发汗实验；其胰腺小，适宜作胰腺摘除术。家犬胃小容易作胃导管手术，便于进行胃肠道生理学的研究。猕猴气管腺数量较多，选用它作慢性支气管炎或祛痰平喘药的研究较合适。不宜选用大鼠、小鼠和豚鼠。可选用成年雌兔或雌猫来诱发排卵进行避孕药和胚胎发育的研究。大、小鼠适宜做卵巢功能的测定，是计划生育、避孕、抗生育、抗着床研究的合适动物。大鼠对营养缺乏比较敏感，是研究营养学的首选动物。家犬是红绿色盲，因此不能以红绿色作为条件刺激物来进行条件反射实验。某些研究高级神经活动的实验可选择家犬作为实验动物。Beagle犬最适用于毒理学、药理学和生理学研究用，比如用于长期毒性实验。大鼠和小鼠的心电图没有S-T段，这在给大鼠作心电图时应加以注意。

三、选择某些品种、品系对实验出现特殊反应的实验动物

家兔常用于解热实验和致热源检查的研究。相反，大、小鼠体温调节不稳定，就不宜选用。鸽子、家犬、猴和猫适于作呕吐实验。家兔、豚鼠等草食动物呕吐反应不敏感，小鼠和大鼠无呕吐反射，镇吐实验就不宜选用。大鼠适于做应激反应和内分泌实验。大鼠可用于降压药的研究。大鼠适合于各种关节炎和中医痹证的研究。家兔、鸡、鸽和猴适于进行动脉粥样硬化实验研究。小鼠、大鼠和犬就不容易形成动脉粥样硬化病变，因此不宜选用。金黄地鼠和豚鼠对各型钩端螺旋体都很敏感，小鼠、大鼠等实验动物对钩端螺旋体一般不大敏感。豚鼠适于作平喘实验、过敏试验和抗组胺药物的研究。豚鼠适于做听觉方面的实验研究。豚鼠对青霉素很敏感。吗啡对大鼠、犬、兔、猴和人主要表现为中枢抑制，对猫表现为中枢兴奋。5-羟色胺对人主要是升压作用，对猫和大鼠则主要是降压作用。普鲁卡因局部注射时，对于人产生局部麻醉作用，对马产生中枢兴奋作用。雌激素能终止大鼠和小鼠的早期妊娠，但不能终止人的妊娠。

四、选择人兽共患病实验动物或人类疾病模型的动物

1、选择人兽共患病实验动物

猴是人类痢疾和结核理想的模型。豚鼠、C57BL小鼠可用作结核病的动物模型。淋巴细胞性脉络丛脑膜炎的研究可选用大鼠和小鼠。流行性出血热的研究宜选用大鼠。沙门氏菌病宜选用豚鼠、大鼠、小鼠、兔、猴。

2、选择人类疾病模型的动物

选择人类疾病模型的动物；中医证候动物模型及病证结合动物模型

五、选择遗传稳定、背景明确、标准化的实验动物

六、选择与实验要求一致的动物规格

1、年龄、体重

2、性别

3、生理状态

第二篇：实验动物学重点汇总

一、实验动物、近交系动物、转基因动物、屏障环境

实验动物(Laboratory Animal): 是指经人工饲养、繁育，对其携带的微生物及寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的，应用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。包括四个基本内涵：

1.遗传背景明确（近交系、封闭群、杂交群）

2.对携带微生物和寄生虫实施控制（普通动物、清洁动物、无特定病原体动物、无菌动物）3.在特定的环境条件下，人工培育而成的动物 4.应用范围明确

近交系(Inbred Strain)是指至少连续经过20代以上全同胞兄妹或亲子交配，品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先。近交系动物的近交系数（Inbreeding Coefficient）应大于99%。近交系动物的特点：

1．基因纯合性和同基因性 2．各品系均具有独特的特性

3．研究结果的一致性

4．可作为有价值的动物模型

5．具有标准实验材料特性

6.遗传背景清楚

通过实验手段将新的遗传物质(外源性的基因片段)导入到动物的胚细胞中，并能稳定的遗传，由此获得的动物称为转基因动物。常用的方法有显微注射法、逆转录病毒载体法、胚胎干细胞介导法、精子载体法、电转移法、基因直接导入法等。

屏障环境：与外界隔离，是饲养清洁级动物和SPF级动物的设施。进入实验动物生存环境的空气须经过滤净化处理，其洁净度相对于10000级，进入屏障内的人、动物和物品如饲料、水、垫料及实验用品等均需有严格的微生物控制。

二、实验动物环境设施分类

实验动物设施是指实验动物和动物实验设施的总和。一个设施可以大到动物中心或生产繁殖机构，小至某一实验动物室。总体的原则是提供实验动物最适宜的环境，保障实验动物的质量和为动物实验的准确性提供可靠保障。

（一）、按其功能分类

1．动物生产设施（Animal Production Facility）指用于实验动物的饲育繁殖、生产的建筑物、设备以及运营管理在内的总和。

2．动物实验设施（Animal Experimental Facility）指用于研究、试验、教学、生物制品、药品生产、检定等为目的进行实验动物饲育、试验的建筑物、设备以及运营管理在内的总和。

3．特殊动物实验设施（Special Animal Experimental Facility）指用于感染、毒理动物实验、病原微生物和细胞培养、重组DNA、转基因动物实验、克隆和胚胎干细胞、细胞实验和应用特殊化学物质等进行实验的建筑物、设备以及包括运营管理在内的总和。

（二）按微生物控制程度分类

1．普通环境（Open System）

直接与外界大气相通，是饲养普通级实验动物的场所。饲料、饮水要符合卫生要求，垫料要消毒，饲养室内要有防鼠、防昆虫等措施。

2．屏障环境（Barrier System）

与外界隔离，是饲养清洁级动物和SPF级动物的设施。进入实验动物生存环境的空气须经过滤净化处理，其洁净度相对于10000级，进入屏障内的人、动物和物品如饲料、水、垫料及实验用品等均需有严格的微生物控制。3．隔离环境(Isolation System)

与外界环境完全隔离的环境内。工作人员通过隔离器上组装的无菌手套进行操作，不直接接触动物。饲料、饮水，垫料，笼具等都应高压、高温灭菌。进入隔离器内的一切物品均需通过传递舱灭菌。适合饲养SPF、无菌动物、动物的保种育种或同等级的动物实验。

（三）按设施的平面布局分类

1．无走廊式(No Corridors)

用于饲养品种单一或以实验为主的设施。一般饲养普通级动物

2．单走廊式（Single Corridors）

一般的研究机构在进行中、短期动物实验。相对于双走廊其优点是占用空间小，设施利用率较高，维护费用低。缺点为清洁笼具和污染材料之间常常存在污染的危险，走廊相对拥挤。

3．双走廊式（Double Corridors）

常用的一种实验动物屏障设施类型。可以有效分割为清洁区和污染区。作为屏障设施使用，比较容易控制微生物污染。缺点是有效利用面积减少。

4．三走廊式（Three Corridors）

三走廊式压力梯度从中间的洁净走廊、前室、动物饲养室、污物走廊逐渐降低，是目前常用的动物实验设施。

三、地鼠的习性、特点（颊囊、冬眠）地鼠的习性： 1．生活习性

中国地鼠，灰色，个体小，体长约10cm，背部中心有黑色条纹。白天基本上睡眠，行动笨拙。昼伏夜行动物，一般在夜晚8～11点最为活跃，运动时腹部着地，行动不敏捷，巧手营巢，牙齿十分坚硬，可咬断细铁丝，兴奋时发出强烈的金属性音响。地鼠好斗，雌性比雄性大而且凶猛，受惊时会咬人。除发情期外，雌鼠不易与雄鼠同居，且雄鼠易被雌鼠咬伤。

2．采食性

有很强的贮食习性，可将食物存贮于颊囊内。其颊囊可充分扩张，贮藏能力极大，便于冬眠时食用。地鼠口腔内两侧各有一个很深的颊囊，一般深度为3.5～4.5厘米，直径为2～3厘米，一直延续到耳后颈部。通过颊囊将大量食物搬于巢中。

3．嗜睡性

睡眠很深时，全身肌肉松弛，且不易弄醒，有时误认为死亡。室温低时出现冬眠，一般于8～9℃时可出现冬眠，此时体温、心跳、呼吸频率、基础代谢率均降低。室温低于13℃则幼仔易于冻死，室温最好保持20～25℃，相对湿度40～70%。

地鼠的特点：

（一）解剖学特点：

1．头骨较长，门齿孔小，臼齿呈三棱形，齿式为2（门1/1，犬0/0，前臼0/0，臼齿3/3）=16，门齿能终生生长。

2．口腔内两侧各有一个颊囊。颊囊缺少腺体和完整的淋巴通路，因此对外来组织不产生免疫排斥反应，可用于异体移植。中国地鼠颊囊容易翻脱。

3．在臀髋部有一种腺体，当地鼠处于性兴奋状态时，分泌物会使局部皮肤湿润。雌性地鼠不如雄性发育完全，腺体外露也不明显。

（二）生理学特点：（略看）1．地鼠生殖周期短。

金黄地鼠性周期开始出现年龄为30～32日龄，妊娠为16（14～17）d，为啮齿类动物中妊娠期最短者。哺乳期20～25d，离乳后雄鼠2月龄，雌鼠 1.5月龄可配种。成熟期时除发情期以外雌鼠不许雄鼠靠近。年产5～7胎，每胎产仔约7只。平均寿命2～3年。

2．出生仔鼠体重2～3.3g，离乳时体重可达25～28g，成年体重约为150g，雌鼠体重比雄鼠稍大。成年中国地鼠体重约为35g，雄鼠则比雌鼠大。

3．地鼠对皮肤移植的反应特别，封闭群内个体间皮肤移植常可存活，并能长期生存下来，但不同群体间移植则100%被排斥。这一现象正吸引着许多免疫工作者进行深入的研究。4．中国地鼠（黑线仓鼠）与金黄地鼠解剖生理特点基本相似，但也存在一些差异，如中国地鼠的染色体少而大，二倍体细胞 2n=22，大多数能相互签别，定位明确，尤其Y染色体在形态上是独特的，极易识别。无胆囊，大肠长度比金地鼠短1倍，但脑重、睾丸大均比金地鼠重近1倍。

三、实验动物人性化及3R 至少要满足动物五种基础需要:1.足够饮水和营养良好的食物；2.任何时间不受饮水的限制3.免受痛苦和疾病的折磨；4.免受焦虑和害怕的折磨；5.能够表达正常生理学行为，如躲藏、犊和互相关照等。3R的基本内涵：

减少 Reduction）是指在科学研究中，使用较少量的动物获取同样多的实验数据或使用一定数量的动物能获得更多实验数据的科学方法。

替代(Replacement)是指使用其它方法而不用动物所进行的试验，或者说是使用没有知觉的试验材料代替以往使用神志清醒的活的脊椎动物进行试验的一种科学方法。

优化（Refinement）是指在符合科学原则的基础上，通过改进条件，善待动物，提高动物福利或完善实验程序和改进实验技术，避免或减轻给动物造成的与实验目的无关的疼痛和紧张不安的科学方法。

3R研究的意义：

（一）3R作为提升突破技术壁垒能力的载体和具体体现“标尺”，在经济发展和国际贸易中发挥不可替代的重要作用

（二）为科学发展提供了新思路和新方法

（三）开展“3R”研究，从保护动物，或是关注动物福利的角度出发，这也是时代发展、社会进步在科技上的一种体现。

五、小鼠的行为和生理学特点

（一）行为学特点

1.性情温顺，胆小怕惊，对环境反应敏感。

2.喜居于光线暗的安静环境，昼伏夜动，喜欢啃咬。3.社会群居性。

（二）生理学特点

1．小鼠体型小

2．体温与能量代谢。对小鼠需要供给充足的饮水。小鼠饮水量为4～7ml/d。

3．泌尿 小鼠尿量较小，一次排尿仅1～2滴。与其他哺乳动物不同的是，小鼠尿液中含有蛋白质和肌酸酐。

4．生殖 生长期短、成熟早、繁殖力强。小鼠6～7周龄时性成熟，性周期为4～5d，妊娠期为19～21d；哺乳期为20～22d；有产后发情特点，每胎产仔数为8～15头，一年产仔胎数6～10胎，繁殖率很高，生育期为1年。小鼠为全年多发情动物，发情周期可分为前期、发情期、后期和间情期四个阶段，每个阶段阴道粘膜均发生典型变化，通过阴道涂片可判断处于哪个阶段。交配后10～12h，雌鼠在阴道口形成一个白色的阴道栓，这是受孕的标志。

六、近交系繁殖生产

近交系动物繁殖方法的选择原则：保持近交系动物的同基因性及其基因的纯合性。

（一）引种：繁殖用原种的近交系动物必须遗传背景明确、来源清楚、有较完整的资料（包括品系名称、近交代数、遗传基因特点及主要生物学特征等）。引种动物必须来自近交系的基础群。

（二）繁殖：近交系动物的繁殖可分为：基础群（Foundation Stock）血缘扩大群（Pedigree Expansion Stock）生产群(Production Stock),当近交系动物生产供应数量不是很大时，一般不设血缘扩大群，仅设基础群和生产群。

1.基础群：严格以全同胞兄妹交配方式进行繁殖；对动物个体记录要详细，包括品系名称、近交代数、动物编号、出生日期、双亲编号、离乳日期、交配日期、生育记录和繁殖系谱等。基础群（包括血缘扩大群）的动物不超过5～7代都应能追溯到一对共同祖先。基础群应定期对遗传特性和均一性、病原微生物和寄生虫、环境等检查和监测。基础群动物保种方式：1.平行线式2.单线式3.综合式。也可用于近交系动物的培育（1）平行线式：基础群中的每对全同胞作为一个家系，每个家系繁殖一代后选留一对动物进行全同胞交配，以此类推，以保持基础群。（2）单线式：基础群每对同胞交配繁殖一代后，选留其中一个家系，淘汰其他家系，选中的家系再留数对进行同胞交配繁殖，下一世代仍保留其中一对的后代，淘汰其他后代，如此一代一代繁殖保种。（3）综合式：基础群中每个家系作全同胞交配，每个世代每个家系留一对继续繁殖，若其中某一家系不能继续繁殖下去，则由繁殖力高的一个家系补足，以维持数个家系同步延续，以保证种群和延续。

2.血缘扩大群：种用动物应该来自基础群,，以全同胞兄妹交配方式进行繁殖，设个体繁殖记录卡，血缘扩大群动物不超过5～7代都应能追溯到其在基础群的一对共同祖先。

3.生产群：种动物来自基础群或血缘扩大群。生产群动物一般以随机交配方式进行繁殖。应设繁殖记录卡，生产群动物随机交配繁殖代数一般不应超过4代。

七、封闭群引种

以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群，在不从其外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖 4 代以上，称为封闭群，亦称远交群（Outbred Stock）。

引种：繁殖用原种的封闭群动物必须遗传背景明确，来源清楚，有较完整的资料（包括种群名称、来源、遗传基因特点及主要生物学特性等）。一般小型啮齿类封闭群动物引种数目不能少于25对。

哈迪-温伯格Hardy-Weinberg定律，也称基因平衡定律。等位基因频率:群体中，一条染色体上某种等位基因数与该染色体上全部等位基因数之比。基因型频率:群体中，某基因型个体数与该群体全部个体数之比。

八、大鼠解剖学特点、肝脏再生、无胆囊、环尾病、裸大鼠的免疫学特点

解剖学特点：

1.门齿终生不断生长，需磨损维持其定。

2.食道与十二指肠相距很近，胃中有一条皱折，收缩时会堵住喷门口，这是大鼠不会呕吐的原因。3.肝脏再生能力强，无胆囊，来自各叶的胆管形成总胆管，开口于十二指肠的乳突上。4.肺结构特别，左肺为1个大叶，右肺分成4叶。5.心脏和外周循环与其他哺乳动物不同。心脏的血液供给既来自冠状动脉，也来自冠状外动脉。6.右肾比左肾靠近头侧，肾为蚕豆形，右侧比左侧稍高。单乳头肾，肾脏前端有一米粒大的肾上腺。7.雌性生殖器呈圆形，有凹沟，子宫为丫型双角子宫，左右子宫角的腔是完全分开的。两个子宫颈独立地开口于阴道。胸部和腹部各有3对乳头。

大鼠无胆囊，肝脏再生能力强，不能呕吐，因此不能用于做催吐实验。

当环境湿度低于40％时，大鼠易患环尾病（环状坏死症）。

裸大鼠的免疫缺陷特征：①免疫器官的组织学与裸小鼠相似，幼龄裸大鼠的解剖发现，有胸腺残迹，内有未分化的上皮细胞，但未见淋巴细胞；②先天性无胸腺，无T细胞，T细胞功能缺失，但B细胞功能正常，NK细胞的活力较正常鼠高。

附：裸大鼠的一般特征：

①体毛稀少，裸大鼠并不像裸小鼠一样完全无毛，而是体毛稀少，尾根往往多毛； ②发育迟缓与裸小鼠一样发育相对较缓慢，体重为正常大鼠的70％左右；

③繁育能力差，由于裸大鼠与裸小鼠一样在妊娠期间乳腺发育缺损，故其繁殖方式同裸小鼠相同，即用纯合子的雄鼠与杂合子的雌鼠交配方式进行繁育；

④易患呼吸道疾病，由于其无胸腺，免疫力低下，因此易感各种疾病，特别是在环境较差时，易感溃疡性气管炎和化脓性支气管炎等，生存时间约6～7个月。

九、豚鼠的补体、常用犬品种

豚鼠特别是老龄雌鼠的血清中含有丰富的补体，是所有实验动物中补体含量最多的一种动物，易引起变态反应。其补体非常稳定，免疫学实验中所用的补体多来源于豚鼠血清。豚鼠是速发型过敏性呼吸道疾病的动物模型，是过敏性休克和变态反应的首选实验动物。常用实验动物接受致敏物质的反应程度不同，其顺序为：豚鼠＞家兔＞犬＞小鼠＞猫＞蛙。（注：变态反应也叫超敏反应，指机体对某些抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。）

国际上用于医学科学研究的常用犬主要有小猎兔犬、墨西哥无毛犬、四系杂交犬、Boxer黑白斑点短毛犬等。

十、兔解剖特点

1．口腔小，上唇分开 齿式为2（门2/1，犬0/0，前臼3/2，臼齿3/3）=28。唾液腺有4对，即腮腺、颌下腺、舌下腺和眶下腺。

2．家兔为单胃。盲肠非常大，占腹腔的1/3。在回盲处有特有的圆小囊。

3．雄兔睾丸可以自由地下降到阴囊或缩回腹腔。雌兔为双子宫，有乳头3～6对。兔为单乳头肾。

4．兔的胸腔构造:纵隔将胸腔分左右两室，互不相通。颈神经血管束中减压神经易于分离。

5．幼兔的消化道发生炎症时，消化道壁即成为可渗透的，这样消化道中的有害物质易被吸收，这就是幼兔腹泻时容易自身中毒而死亡的原因。

十一、动物饲养室有害气体

主要有害气体：氨、甲基硫醇、硫化氢、硫化甲基、甲基丁烷、三甲胺、苯乙烯、乙醛和硫化二甲基。

附：信息素（pheromone）或叫引物信息素（primer pheromone）

①Lee-Boot效应，是指小鼠群养时常常发生假性妊娠和发情周期混乱的现象。

②Whitten效应，是指由于雄性动物分泌的信息素促使雌性动物的发情周期出现有规律的现象。③Bruce效应，是指怀孕初期的雌性小鼠与交配对象以外的雄性接近或同居时产生的中止妊娠反应。

十二、动物实验前准备：

准备工作的内容有： 1.饲养室和饲养器具的准备 2.动物数目的确定 3.动物的购入 4.动物的称重

5.动物的分组标记及动物的管理等。

动物的购入时注意事项 ：

1．各项实验前的准备工作是否已落实，如动物笼具数量、清洁卫生情况、动物观察室内是否已消毒。

2．购入动物时应向供应部门索取动物的遗传背景资料、实验动物有效的质量合格证、实验动物微生物控制的检查资料以及动物的年龄和健康等方面的资料。

3．如若是清洁级以上级别的动物，其运输工具应严格检查密封状况。购入动物回到实验室的时间不宜太长。如若是长途运输，还应考虑到途中各种因素对动物的影响，如运输环境的温度、湿度、饮食等等。尤其要注意动物在途中不能被污染和引起窒息死亡。

4．动物健康检查：应对购入动物的健康情况进行详细检查，检查包括：（1）外观。一般常发生异常的部位及其外观检查内容有：

皮毛：有无光泽和脱毛变化。

口腔：流涎、出血、粘膜汤疡、口臭等。

鼻腔：鼻汁、出血、干燥（有些动物鼻镜干燥）。

眼：眼屎、流泪、白内障、角膜损伤等。

耳：外伤、耳壳曲折、贫血、中耳炎等。

尾：弯曲、断折等。

四肢：弯曲、脱臼、外伤、关节炎等。

肛门：下痢、血便、脱肛等。

（2）营养状况。被毛逆立、精神倦怠、瘦弱或过肥等属于营养不良。（3）饲料、水摄入量。有无采食减少、食欲低下、过食等。

（4）动物状态。不活动、转圈运动、卧地不起、跛行、痉挛等属不正常。

十三、动物分组标记

1．染色法

染色法是用化学试剂在动物身体明显部位如被毛、四肢等处进行涂染，或用不同颜色等来区别各组动物，是实验室最常用、最容易掌握的方法。常用的标记液有：①3％～5％苦味酸溶液（黄色）。②0.5％中性红或品红浴液（红色）。③2％硝酸银溶液（咖啡色，涂后需光照10分钟）。④煤焦油酒精溶液（黑色）。

标记时用标记笔蘸取上述溶液，在动物体表不同部位涂上斑点，以示不同号码。编号的原则是：先左后右，从前到后。2．烙印法 3．挂牌法

4．耳孔法

一般来说，小型动物适宜用耳孔法和染色法，中型动物适用挂牌法和烙印法。

十四、影响动物和实验的因素

• 气候因素（温度、湿度、气流速度等）• 理化因素（照明、声音、气味等）• 居住因素（房屋、笼具、垫料等）

• 同种动物间因素（饲养密度、社会地位、势力范围等）

附：

1、实验动物科学的定义：是研究实验动物和动物实验的一门新兴学科。

2、实验动物:略。动物实验:以实验动物为材料，采用各种手段和方法在实验动物身上进行实验，研究实验过程中实验动物的反应、表现及其发生机制、发展规律，以探讨生命科学的疑难问题。

3、种（Species）：是生物学分类系统中最基本单位。同种间可相互交配且后代有繁殖能力的同一类的动物。

品种（Stock，Breed）：是研究者根据不同需要而对同一“种”的动物进行改良和选择（即定向培育），并具有某种特定外形和生物学特征，并能较稳定地遗传的动物群体。

品系（Strain）：指动物群体来源明确，在其内部采用某种交配方法繁殖，个体间具有相似的外貌、群体内都有独特的生物学特征和基本稳定的遗传特性，可用于不同实验目的的动物群体。

亚系（Substrain）：是由同一个近交系分离出来的具有各不相同特性的品系。残余杂合性和突变而导致部分遗传组成的改变。

支系(Subline)：是指品系或亚系经过人工技术处理后称为支系。

4、普通动物（conventional animal，CV；一级动物）：指不携带主要人兽共患病病原和动物烈性传染病病原的动物。仅可用于示教、科研的探索方法、预试之用。清洁动物（clean animal，CL；二级动物）：指除普通级动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原的动物。

无特定病原体动物（specific pathogen free animal，SPF；三级动物）：指除普通、清洁级动物应排除的病原外，还不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原的动物。

无菌动物（germ free animal，GF；四级动物）：指无可检出一切生命体的动物。

悉生动物（gnotobiotic animal，GN；四级动物）：又称已知菌（丛）动物，饲养于隔离系统。具有更强的生活力和抵抗力，更易于饲养管理。

第三篇：实验动物学实验报告

实验动物学实验报告

一、实验动物：小鼠

二、操作流程：抓取，固定，编号，给药，取血，麻醉，绝育，解剖。

三、具体操作

1、抓取：抓取小鼠时，右手抓住小鼠尾巴，不要过于用力，以免惊吓小鼠。左手从小鼠身体后部向前抓（以免小鼠向后缩咬伤自己），抓住小鼠颈部。固定住小鼠后，将小鼠皮肤往上抓，尽量将小鼠背部皮肤抓住。左手将小鼠腹部朝向自己，把小鼠尾巴用左手无名指和小指夹住，这时小鼠腹部皮肤紧绷，不能动弹。

2、固定： 通常使用固定器进行固定。将固定器拧开后，抓住小鼠尾巴，使其钻入固定器中，再将拧下的固定器部分装好，使小鼠尾部露出，再将可旋转的铁片固定住即可进行后续实验。

3、编号：编号方式有两种：①剪脚趾编号：把小鼠腹面朝上，在下的脚趾从左至右依次编为1~10号，剪10号脚趾加1~9号脚趾依次编为11~19号，在上的脚趾依次编为20,30,40,50,60,70,80,90号，其余编号与11~19号类似。②打耳钉编号：耳钉上均有唯一编号，通过使用耳钉钳将耳钉打在小鼠耳朵上即可。实验时通常使用的是第一种方式进行编号，第二种编号通常用于需要长距离运输的动物。

4、给药：常用的给药方式有：

①口服给药：即灌胃。将注射器装入药物溶液，装上灌胃针（灌胃针有直头和弯头两种，区别不大）。如上所述，抓取小鼠后，使其头部朝上，尽量呈一直线，取灌胃针，从小鼠嘴角一侧缓缓插入（保持刻度在自己能看到的位置），顺着小鼠口腔食道的弧度让小鼠将针咽入，灌胃过程中如果遇到阻碍一定要及时拔出灌胃针，不可强行灌胃以免伤及小鼠食道以及肺部。灌胃针顺利进入后基本与小鼠身体呈一条直线，注入适量体积后再顺着食道缓缓取出灌胃针。

②静脉注射：小鼠尾部有3条静脉和1条动脉，3条静脉非别位于背部，及两侧。静脉注射时一般选取两侧静脉，因为其相对于背部静脉更为清晰饱满。将小鼠固定后，用酒精擦拭其尾部静脉，使其充血，以便注射。之后使注射器针孔处朝上，针与尾部呈约30°扎入尾部后向上轻挑，再向内扎入部分，此过程应该比较顺畅，没有阻碍，若阻碍较大则有可能扎入到了皮肤中。扎入后将活塞向后回抽一点可见到有血回流，则说明成功扎入静脉当中，注射适当体积后迅速拔针，用酒精进行消毒。

5、取血：有断尾取血法和眼眶取血法两种。本次实验使用的是眼眶取血法。抓取小鼠，固定其头部用手指将其上下眼睑分开，露出其眼球并且不能闭上。用玻璃毛细管从其上眼角处扎入眼球后方毛细血管从，使血液顺着毛细管留下，取血完成后快速将毛细管取下。

6、麻醉：抓取老鼠，使其头部朝下，使其腹部脏器向胸腔靠拢，露出腹部空腔，以免刺伤脏器。将注射器竖直扎入靠近后腿部腹腔，刺入之后稍微向前倾斜但不要向前刺入，一般注入0.5mL麻醉剂即可。随后拔出针，方向小鼠，等待几分钟后即可麻醉。

7、绝育：绝育手术是通过剪除雌鼠卵巢或雄鼠输精管来实现的。将麻醉的雌鼠背面朝上，从其胸腔和尾部之间向下三分之一处剪开一个小口，用镊子将其卵巢取出，上面呈现红色斑点的部分即为卵巢，用剪刀将这一部分剪除，然后用缝合针线将其缝合，缝合方法为将针穿过后，将线缠绕镊子两圈再逆时针缠绕两圈，再重复缠绕一遍，将镊子夹住线头把缠绕的线移至线头系紧即可（缝合过程全程用镊子和剪刀操作），里面肌肉层以及外面皮层均需缝合。雄鼠则从外生殖器向上1-2cm处剪开小口，用镊子在其中找出输精管（较细长的乳白色小管），尽量多减掉一些，以免其长长愈合，以上述方法缝合伤口即可。

9、解剖：以颈椎脱臼法处死小鼠，使其腹面朝上。用镊子将其腹部皮肤夹起，然后用剪刀剪开，观察各个器官所在位置和形态，解剖完的小鼠放入尸体袋中。

第四篇：实验动物学实验

实验一 常用实验动物技术介绍

目的

了解并熟悉实验动物实验操作的基本方法和技术。内容

注射方法；麻醉方法；动物编号的方法；采血；动物性别鉴定；动物的致死。学习打结、缝合、固定动物等。播放录像《太行山猕猴》、《动物的捉拿和给药途径》。用品

大白鼠、小白鼠、蟾蜍、家兔，常用手术器械、注射器、小木锤、大小鼠固定器，戊巴比妥钠，乙醚、士的宁、乙醚、氯仿、氯化钾、一氧化碳、二氧化碳

常用实验动物性别鉴定

1、大、小鼠的性别鉴定

离乳仔鼠性别鉴定主要以生殖器与肛门之间的距离长短及肛门与生殖器有无被毛为标志。识别要点是：① 雄性的生殖器与肛门之间的距离较远，雌鼠较近；② 雄性的生殖器与肛门之间有毛；③ 雄性的生殖器突起较雌鼠大；④ 雌鼠乳头较雄鼠明显。成熟后，雄性可见阴囊,雌性乳头明显而易于区分。

2、豚鼠的性别鉴定

豚鼠的性别鉴定主要是通过生殖器形态来判断。雌性外生殖器阴蒂突起比较小，用拇指按住阴蒂突起，余指拨开大阴唇的皱褶，可见阴道口呈”V”形（注意发情间期的闭锁现象，即一种除了发情和分娩时外，关闭阴道口的细胞结构）；雄性外生殖器有包皮覆盖的阴茎小隆起，用拇指按住其基部包皮，可见龟头向外突出。

3、兔子的性别鉴定

幼兔的性别鉴定主要以尿道开口部与肛门之间的距离及尿道开口部的形状来判别。哺乳期仔兔，雄性尿道开口部与肛门之间的距离较远，为雌性的1.5－2倍，雌性较近。雌性尿道开口扁形，大小与肛门同；雄性圆形，略小于肛门。1月龄仔兔，雄性生殖孔呈圆形，翻出可见呈圆柱体的突起；雌性生殖孔呈Y形，翻出仅见有裂缝，裂缝及于肛门。3月龄以上成年兔，雄性阴囊明显而雌性无阴囊；雄性头大短而圆而雌性头小略呈长形。

4、猫的性别鉴定

幼猫的性别是根据生殖器与肛门的距离来判断。距离远者为雄性，距离近者为雌性。

5、猴类的性别鉴定

猴类性别的区分较为困难。首先检查尿道开口，许多雌性动物有较大的阴蒂，其腹侧形成沟状通向尿道口，而雄性动物的尿道开口在阴茎头上。触摸阴囊内是否有睾丸是确定其雌雄的最可靠办法。

常用实验动物处死

大鼠和小鼠的处死方法

1、脊椎脱臼法

右手抓住鼠尾用力向后拉，同时左手拇指与食指用力向下按住鼠头，将脊髓 与脑髓拉断，鼠便立即死亡。

2、断头法

实验者戴上棉纱手套，用右手握住大鼠头部，左手握住背部，露出颈部，助手用剪刀在鼠颈部将鼠头剪掉。小鼠处死法相同。

3、击打法

右手抓住鼠尾，提起，用力摔击其头部，鼠痉挛后立即死亡。用小木锤用力击打鼠头部也可致死。

4、急性大失血法

可采用鼠眼眶动脉和静脉急性大量失血方法使大小鼠立即死亡。

5、化学致死法

吸入一氧化碳，大、小鼠在一氧化碳浓度为0.2-0.5%环境中即可致死。皮下注射士的宁，吸入乙醚、氯仿，均可致死。士的宁注射量，小鼠为0.76～2.0mg/kg体重，大鼠3.0-3.5ml/kg体重。氯化钾处死大鼠剂量：25%溶液0.6ml/只静脉注入。

实验动物的处死方法很多，应根据动物实验目的、实验动物品种（品系）、以及需要采集标本的部位等因素，选择不同的处死方法。无论采用哪一种方法，都应遵循安乐死的原则。安乐死是指在不影响动物实验结果的前提下，使实验动物短时间无痛苦地死亡。处死实验动物时应注意，首先要保证实验人员的安全；其次要确认实验动物已经死亡，通过对呼吸、心跳、瞳孔、神经反射等指征的观察，对死亡作出综合判断；再者要注意环保，避免污染环境，还要妥善处理好尸体。

一、颈椎脱臼处死法

此法是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓致死，为大、小鼠最常用的处死方法。操作时实验人员用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离，实验动物立即死亡。

二、断头处死法

此法适用于鼠类等较小的实验动物。操作时，实验人员用左手按住实验动物的背部，拇指夹住实验动物右腋窝，食指和中指夹住左前肢，右手用剪刀在鼠颈部垂直将鼠头剪断，使实验动物因脑脊髓断离且大量出血死亡。

三、击打头盖骨处死法

主要用于豚鼠和兔的处死。操作时抓住实验动物尾部并提起，用木锤等硬物猛烈打击实验动物头部，使大脑中枢遭到破坏，实验动物痉挛并死亡。

四、放血处死法

此法适用于各种实验动物。具体做法是将实验动物的股动脉、颈动脉、腹主动脉剪断或剪破、刺穿实验动物的心脏放血，导致急性大出血、休克、死亡。

犬、猴等大动物应在轻度麻醉状态下，在股三角做横切口，将股动脉、股静脉全部暴露并切断，让血液流出。操作时用自来水不断冲洗切口及血液，既可保持血液畅流无阻，又可保持操作台清洁，使实验动物急性大出血死亡。

五、空气栓塞处死法

处死兔、猫、犬常用此法。向实验动物静脉内注入一定量的空气，形成肺动脉或冠状动脉空气栓塞，或导致心腔内充满气泡，心脏收缩时气泡变小，心脏舒张时气泡变大，从而影响回心血液量和心输出量，引起循环障碍、休克、死亡。空气栓塞处死法注入的空气量，猫和兔为20~50ml，犬为90~160ml。

六、过量麻醉处死法

此法多用于处死豚鼠和家兔。快速过量注射非挥发性麻醉药（投药量为深麻醉时的30倍），或让动物吸入过量的乙醚，使实验动物中枢神经经过过度抑制，导致死亡。应用戊巴比妥钠注射麻醉致死。豚鼠可用其麻醉剂量3倍以上剂量腹腔注射。猫可采用本药麻醉量的2～3倍药量静脉注射或腹腔内注射。兔可用本药80～100ml／kg的剂量急速注入耳缘静脉内。狗可用本药100mg／kg静脉注射。

七、毒气处死法

让实验动物吸入大量CO2等气体而中毒死亡。吸入二氧化碳，此法安全、人道、迅速，被认为是处理啮齿类的理想方法，国外现多采用此法。可将多只动物同时置入一个大箱或塑料袋内，然后充入CO2，动物在充满CO2的容器内l～3min内死去。

人类为什么总拿小白鼠做实验？

原因一：

老鼠中的小白鼠的基因序列和人类的差不多，一些医学的科研和临床实验都是有小白鼠来完成的。当中以小白鼠做遗传学实验很好，因为它的全基因组和人类的相似度极高，很多人类难以治愈的疾病可以在小白鼠身上找到相似性状，从而加以实验发现治病基因。

原因二：

实验专用白鼠的生物学意义较大，纯系小鼠的培育方法经过百年探索已经形成固定流程，培育出的小鼠几乎完全没有个体差异(生理上)，而在一般的自然种群中,同种动物间的个体差异是很大的(尽管外表相同)，主要表现在先天的身体素质上。生理上没有个体差异是否意味着气质上没有差异尚不明了，不过选择纯系实验白鼠主要还是为了尽可能的减少先天的个体差异。

原因三：

数量充足，许多实验需要统计学分析，这就要求一定的数量，大白鼠和小白鼠，特别是小白鼠，在人工繁殖条件下，能满足这一要求。种系纯，好的实验要对实验动物的品种严格控制，这用小白鼠就容易解决。

还有动物等级，小白鼠好歹也是哺乳动物，除了体形小，与其它哺乳动物的进化水平相比并不差。体形小反而成为人工繁殖喂养的有利条件。

原因四：

其实很多实验用猩猩等与人更近似的动物做最好，但使用猩猩太昂贵了。许多实验，比如认知类的，实验结束后时需要将动物杀死，来检查其内部变化的。这样，大量的实验肯定就不能用比较“贵重”的猩猩了。

实验

二、常用实验动物采血、血细胞计数

1、小白鼠的采血 目的：

了解并熟悉小白鼠的采血方法； 掌握小白鼠眼眶后静脉丛采血。

用品: 二甲苯棉球、1%肝素溶液、1%可卡因、乙醚、刀片、无钩弯镊子、弯止血钳、微量采血针、剪刀、剪毛剪、锋利刀片、注射器。内容：

1、剪尾采血：需血量少时可用此方法。将动物固定，显露尾部，将尾尖剪去约5mm，从尾根部向尾端部按摩，血即从断端流出。若用二甲苯棉球涂擦尾部或事先将鼠尾浸在45℃水中数分钟，使尾部血管充盈，可采到较多的血，但注意二甲苯可致溶血。也可用锋利刀片割破尾动脉或尾静脉，让血液自行流出，采血后，消毒，止血。如将动物麻醉取血量可更多些。小鼠每次采血约0.1ml，大鼠约0.4 ml。为了多次反复取血应尽量从鼠尾末端开始。

2、摘眼球采血：此法常用于鼠类大量采血。用左手固定动物，压迫眼球，尽量使眼球突出，右手用无钩弯镊子或弯止血钳迅速摘除眼球，立即将鼠倒置，头朝下，眼眶内很快流出血液。一般只适用于一次采血。大部动物采血后可以存活，可采另一侧眼球取血。

3、眼眶后静脉丛采血：用7—10cm长的微量采血针。将取血管浸入1%肝素溶液，干燥后使用。采血时，左手拇指和食指抓住鼠两耳之间的皮肤使鼠固定，并用中指配合，轻轻压迫颈部两侧，阻碍静脉回流，使眼球充分外突，提示眼眶后静脉丛充血。可用少量1%可卡因滴入动物眼内，使眼部局部麻醉。右手持取血管，将其尖端插入内眼角与眼球之间，轻轻向眼底方向刺入，小鼠刺入约2—3mm，大鼠刺入约4—5 mm，当感到有阻力时即停止刺入，旋转取血管以切开静脉丛，血液即流入取血管中，采血结束后，拔出取血管，放松左手，出血即停止。用本法短期内可重复采血。小鼠一次可采血0.2—0.3 ml，大鼠一次可采0.5—0.1ml。

4、颈静脉或颈动脉采血：将鼠麻醉，剪去一侧颈部外侧被毛，作颈静脉或颈动脉分离手术，用注射器即可抽出所需血量。也可插入导管，反复采血。

5、断头采血：操作者左手拇指和食指握住鼠颈部，头朝下，用利剪在头颈间1/2处迅速剪动物头部，提起动物，血液即可流入准备好的容器中。

6、心脏采血：将动物麻醉，使其仰位固定，剪去胸前区毛，消毒皮肤，在左侧第3—4肋间选择心博最强处穿刺，血液借心脏跳动的力量进入注射器。亦可在动物麻醉后，切开动物胸腔，直视心脏内抽血或剪破心脏，直接用注射器、吸管等吸血。

2、豚鼠的采血 目的

了解并熟悉豚鼠的采血方法； 用品

刀片、注射器、消毒干棉球、75%酒精棉球、20%的柠檬酸钠溶液、纱布、脱脂棉。

方法与步骤：

1、耳缘切口采血：先将豚鼠耳消毒，用刀片割破耳缘，在切口边缘涂上20%的柠檬酸钠溶液，防止血凝，则血可自切口处流出。此法采血每次可采0.5ml左右。

2、背中足静脉采血：固定豚鼠，将其右或左后肢膝关节伸直，脚背消毒，找出背中足静脉，左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手将注射针刺入静脉，拔针后立即出血。采血后用纱布或脱脂棉压迫止血。

3、心脏采血：选心跳最明显的部位把注射针刺入心脏，血液即流入针管。心脏采血时所用的针头应细长些，以免发生采血后穿刺孔出血。

3、家兔的采血 目的 了解并熟悉家兔的采血方法； 掌握家兔的耳缘静脉采血方法。用品

常用手术器械、玻璃取血管、计数板、注射器、显微镜。内容

1、耳缘静脉采血：将兔固定，拔去耳缘静脉局部的被毛，消毒，用手指轻弹兔耳，使静脉扩张，用针头刺耳缘静脉末端，血液即流出。本法为兔最常用的采血方法，可多次重复使用。

2、耳中央动脉采血：在兔耳中央有一条较粗的、颜色较鲜红的中央动脉。用左手固定兔耳，右手持注射器，在中央动脉的末端，沿着与动脉平行的向心方向刺入动脉，即可见血液进入针管。由于兔耳中央动脉容易痉挛，故抽血前必须让兔耳充分充血，采血时动作要迅速。采血所用针头不要太细，一般用6号针头，针刺部位从中央动脉末端开始，不要在近耳根部采血。

3、颈静脉采血：将家兔麻醉，剪去一侧颈部外侧被毛，作颈静脉或颈动脉分离手术，用注射器即可抽出所需血量。也可插入导管，反复采血。

4、心脏采血：穿刺部位在第三肋间胸骨左缘1mm处，选心跳最明显的部位把注射针刺入心脏，血液即流入针管。心脏采血时所用的针头应细长些，以免发生采血后穿刺孔出血。

4、小白鼠RBC、WBC计数 目的

1、复习小白鼠眼眶后静脉丛采血；

2、学习微量采血法和红、白细胞计数法。原理

用加有抗凝剂的溶液将定量的血液稀释，滴入血细胞计数室内，于显微镜下计数，求出一定容积的稀释血液中的RBC、WBC数，再将其换算成1L血液中的RBC、WBC个数。用品

血细胞计数板、计数器、显微镜、微量吸血管、酒精棉球、消毒脱脂棉球、RBC稀释液（0.9%NaCl溶液）或RBC稀释液：NaCl（维持渗透压）0.5g，Na2SO4（使溶液比重增加，红细胞均匀分布不易下沉）2.5g，HgCl2（固定红细胞并防腐）0.25g，蒸馏水加至100ml。

WBC稀释液，其成分为：冰醋酸1ml（破坏红细胞），1%龙胆紫1ml（染白细胞核，便于计数），加蒸馏水至100ml。方法与步骤

1、熟悉血细胞计数板和微量吸血管的构造

（1）计数板是一块厚厚的长方形玻璃板，板的中部有四条直槽，内侧两槽中间有一条横槽，把中部隔成两个长方型的平台。此平台比整个玻璃板的平台低0.1mm，当放上盖玻片后，平台与盖玻片之间的高度为0.1mm,平台中部有3mm×3mm精确划分的9个大方格，称为计数室,每个大方格的面积为1mm×1mm=1mm2, 体积为0.1mm3。中央的大方格则由双线精确划分为25个中方格，每个中方格的面积为0.2mm×0.2mm=0.04mm2,体积为0.004mm3,每个中方格又用单线精确划分成16个小方格。适用于RBC计数。

（2）微量吸血管 一次性玻璃细管，以防交叉感染。该管长12cm，在4.5cm处和9cm处各有一定量标记，分别10μl和20μl。在11cm处有一色标，为连 结橡胶吸头的标记。

2、微量采血和稀释

（1）先准确吸取3.98mlRBC稀释液于一洁净的试管内。

（2）手持微量吸血管，将其管口浸入血滴，缓缓吸入血液至20μl处，如吸入血液稍过量，可用手指或干棉球轻触管口，缓缓转动，可使血液吸出，至恰好与刻度相符。用干棉球将管口外面的血液擦拭干净。将血液加入到准备好的RBC稀释液中。注意，应将采血管垂直插入稀释液底部，缓缓挤出血液使之不扩散，轻吸上清液再挤出，使血液完全转入到试管中。

（3）将血液和稀释液混匀。

3、充液

取洁净计数板及盖玻片，将盖玻片平放在计数板的计数室上。用干净吸血管或小吸管吸少量混匀的RBC稀释液，然后将管口斜置于盖玻片边缘的计数板毛玻璃斜面上，挤出少量稀释液，此时液体即由于毛细管作用而进入计数室内。但须注意，如果计数室内留有气泡或稀释液过多以致溢出室外的凹沟中，都应该洗去，再重新充液。

4、计数

充液后应让计数板静置8min，待RBC充分下沉后方可进行计数。先在低倍显微镜下观察RBC分布是否均匀，如果分布很不均匀，应洗去重做。在低倍镜下找到中央大方格，看清其横、竖线后即可用高倍镜来计数。显微镜的光圈应缩小并降低聚光器使得视野较暗，这样RBC的轮廓可更清楚些。通常选择中央大方格四角的4个中格和中央的1个中格来计数。计数为了防止遗漏，应按一定的顺序：即第一行先从左向右数到最后一格，下一行则从右向左数，以此类推。对于分布在双线上的RBC，则可计数左侧和上方线上的RBC，即按照“数上不数下，数左不数右”的原则。计数时应将每个中格的RBC数记录下来，若发现各中格之间的RBC数相差超过15个时，表示其分布不均匀，应将计数室洗净，重新摇匀吸管中的稀释血液，再充液进行计数。

5、计算

RBC的稀释倍数为200倍：（0.02ml+3.98ml）/0.02ml=200 计数室5个中格的总容积为0.02mm3，设5个中格RBC总数为X，则1mm3稀释液RBC总数为X×50个。由此可知，每毫升血液中实际RBC数目：X×50×200个，即10000X，再乘以106得出每升血液中的RBC数。WBC基本与RBC相同，不同之处：

1、WBC稀释液，其成分为：冰醋酸1ml（破坏红细胞），1%龙胆紫1ml（染白细胞核，便于计数），加蒸馏水至100ml。

2、计数板四角的四个大方格又各分为16个中方格，适用于WBC计数。

3、吸取WBC稀释液为0.38ml，血液稀释了20倍。

4、在计数WBC时，计数四角的4个大方格中的WBC总数。其总容积为0.4mm3,换算成每升血液中的WBC数时，4个大方格内WBC数×2.5×20×106=WBC数/L。

5、计数时，如发现大方格之间的WBC数相差超过10个时，表示WBC分布不均匀，应重新充液计数。思考题：

1、在实际操作中，你认为哪种采血方法效果好？为什么？

2、小结在操作过程中，哪些因素可能影响计数的准确性？ 实验

三、常用实验动物的给药、胰岛素惊厥

1、小白鼠的给药 目的：

1、了解并熟悉小白鼠、豚鼠、家兔的给药方法；

2、掌握小白鼠的皮下注射、腹腔注射。

3、了解胰岛素调节血糖水平的机能。

用品：小鼠专用灌胃针、注射器、75%酒精棉球。

内容：

1．灌胃给药

小鼠专用灌胃针由注射器和喂管组成，喂管长约1nm，喂管尖端焊有一金属小圆球，金属球中空，用途是防止喂管插入时造成损伤。金属球弯成20度角，以适应口腔与食道之间弯曲。将喂管插头紧紧连接在注射器的接口上，吸入定量的药液；左手捉住小鼠，右手拿起准备好的注射器。将喂管针头尖端防放进小鼠口咽部，顺咽后壁轻轻往下推，喂管会顺着食管滑入小鼠的胃，插入深度约3cm。用中指与拇指捏住针筒，食指按着针竿的头慢慢往下压，即可将注射器忠的药液灌入小鼠的胃中。在插入过程中如遇到阻力或可看见1/3的针管，则江喂管取出重新插入，因为这时灌胃并没有插入胃中。

2．注射给药

（1）皮下注射给药

皮下注射给药是将药液推入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环的过程。作皮下注射常选项背或大腿内侧的皮肤。操作时，常规消毒注射部位皮肤，然后将皮肤提起，注射针头取一钝角角度刺入皮下，把针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。拔针时左手拇、食指捏住进针部位片刻，以防止药物外漏。注射量约为0.1-0.3ml/10g体重。

（2）皮内注射给药

是将药液注入皮肤的表皮和真皮之间，观察皮肤血管的通透性变化或皮内反应，接种、过敏实验等一般作皮内注射。先将注射部位的被毛剪掉，局部常规消毒，左手拇指和食指按住皮肤使之绷紧，在两指之间，用结核菌素注射器连接4.5针头穿刺，针头进入皮肤浅层，再向上挑起并梢刺入，将药液注入皮内。注射后皮肤出现一白色小皮丘，而皮肤上的毛孔极为明显。注射量为0.1ml/次。

（3）肌肉注射给药

小鼠体积小，肌肉少，很少采用肌肉注射。当给小鼠注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时，采用肌肉注射。操作时1人保定小鼠，另一人用左手抓住小鼠的1条后肢，右手拿注射器。将注射器与半腱肌呈60°角迅速插入1/4，注入药液。用药量：不超过0.1ml/10g体重。

(4)静脉注射给药

将小鼠放在金属笼或鼠夹中，通过金属笼或鼠夹的孔拉出尾巴，用左手抓住小鼠尾巴中部，小鼠的尾部有2条动脉和3条静脉，2条动脉分别在尾部的背侧面和腹侧面，3条静脉呈品字型分布，一般采用左右两侧的静脉。拔去沿尾部静脉走向的毛，置尾巴于45-50℃温水中浸泡几分钟或用75%酒精棉球反复擦拭尾部，以达到消毒和使尾部血管扩张及软化表皮角质的目的。当尾部静脉注射时,以左手拇指和食指捏住鼠尾两恻，使静脉更为充盈，用中指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的末梢，右手持4号针头注射器，使针头与静脉平行(小于30° 角)，从尾巴的下1/4处进针，开始注入药物时应缓慢，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，可正式注入药物。有的实验需连日反复尾静脉注射给药，注射部位应尽可能从尾端开始，按次序向尾根部移动，更换血管位置注射给药。注射量为0.05-0.1ml/10g体重。拔出针头后，用拇指按住注射部位轻压1-2min，防止出血。

（5）腹腔注射

左手提起并固定小鼠，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手持注射器将针头在下腹部近腹白线的两侧进行穿刺，针头刺入皮肤后进针3nm左右，接着使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。注射量为0.1-0.2ml/10g体重。

2、豚鼠的给药

1）皮下注射给药

皮下注射部位取颈背、腋下、侧腹或豚鼠后大腿的内侧，注射时以左手拇指和食指提起豚鼠皮肤，将连有5（1/2）号针头的注射器刺入皮下。

2）肌肉注射给药

选用大腿外侧肌肉进行注射。操作时1人保定豚鼠，另一人用左手抓住豚鼠的1条后肢，右手拿注射器。将注射器与半腱肌呈60°角迅速插入1/4，注入药液。用药量：不超过0.1ml/10g体重。

3、家兔的给药

1）静脉注射 兔耳部血管分布清晰。兔耳中央为动脉，耳外缘为静脉。内缘静脉深不易固定，故不用。外缘静脉表浅易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手指弹动或轻揉兔耳，使静脉充盈，左手食指和中指夹住静脉的近端，拇指绷紧静脉的远端，无名指及小指垫在下面，右手持注射器连6号针头尽量从静脉的远端刺入，移动拇指于针头上以固定针头，放开食指和中指，将药液注入，然后拔出针头，用手压迫针眼片刻。

2）皮下注射 注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有5（1/2）号针头的注射器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、猫多在大腿外侧，豚鼠在后大腿的内侧或小腹部；大白鼠可在侧下腹部。兔在背部或耳根部注射。

3）肌肉注射

肌肉注射应选肌肉发达，无大血管通过的部位，一般多选臀部。注射时垂直迅速刺入肌肉，回抽针栓如无回血，即可进行注射。

4）腹腔注射

用家兔做实验时，进针部位为下腹部的腹白线离开1cm处。

小白鼠胰岛素惊厥

基本原理

胰岛素是调节机体血糖的激素之一，当体内胰岛素含量增高时，便引起血糖下降，动物出现惊厥现象。动物与器材

小白鼠数只、1ml注射器、鼠笼、胰岛素溶液（2μ/ml）、50%葡萄糖溶液、酸性生理盐水。方法与步骤

1．取4只小白鼠称重后，分实验组和对照组，每组2只。2．给实验组动物腹腔注射胰岛素溶液（0.1ml/10g体重）。3．给对照组动物腹腔注射等量的酸性生理盐水。4．将两组动物都放在30—37℃的环境中，并记下时间，注意观察并比较两组动物的神态、姿势及活动情况。

5．当动物出现角弓反张、乱滚等惊厥反应时，记下时间，并立即皮下注射葡萄糖溶液（0.1ml/10g体重）。

6．比较对照组动物、注射葡萄糖的动物、以及出现惊厥而未经抢救的动物的活动情况，并分析所得的结果。注意事项

1．动物在实验前必须饥饿18—24h。2．一定要用pH2.5—3.5的酸性生理盐水配制胰岛素溶液。因为胰岛素在酸性环境中才有效应。

3．酸性生理盐水的配制将10ml0.1mol/LHCl加入300ml生理盐水中，调整其pH值在2.5—3.5，如果偏碱，可加入同样浓度的盐酸调整。

4．注射了胰岛素的动物最好放在30—37℃环境中保温，夏天可为室温，冬天则应高些，可到36—37℃。因温度过低，反应出现较慢。思考题

试分析糖尿病产生的原因及治疗方法。

实验

四、实验动物的全身麻醉、损毁小白鼠小脑的效应

1、实验动物的全身麻醉 目的：

了解影响实验动物麻醉的因素； 了解并熟悉实验动物的麻醉方法； 掌握大、小白鼠的吸入麻醉法。原理：

麻醉(anesthesia)的基本任务是消除实验过程中所至的疼痛和不适感觉，保障实验动物的安全，使动物在实验中服从操作，确保实验顺利进行。

全身麻醉方法：麻醉药经呼吸道吸入或静脉、肌肉注射，产生中枢神经系统抑制，呈现神志消失，全身不感疼痛，肌肉松弛和反射抑制等现象，这种方法称全身麻醉。其特点为抑制深浅与药物在血液内的浓度有关，当麻醉药从体内排出或在体内代谢破坏后，动物逐渐清醒，不留后遗症。

用品：注射器、乙醚、戊巴比妥钠、硫喷妥钠、氨基甲酸乙酯、内容：实验动物的麻醉是一项复杂系统的工作。正确的麻醉处理，是动物实验成功的有力保障。而麻醉处理不当，会给实验结果带来难以分析的误差。要想获得良好的麻醉效果，除掌握实验动物麻醉的基本知识和技术、遵循科学的麻醉程序外，还应了解影响实验动物麻醉的各种因素，如动物因素、环境因素等。

1、动物因素

1、年龄和体重

动物对药物的反应随年龄的不同而有差异。有人将大鼠、小鼠按年龄分成幼年、成年和老年3组，观察年龄对乙醇、戊烷和二氯乙烷等急性毒性的影响。按LD50及麻醉浓度观察，敏感性显示为幼年>成年>老年。

体重小的动物每单位体重的基础代谢率较大动物高，因此，动物越小，每单位体重所需的麻醉药剂量越大。一些慢性实验，观察时间较长，可选择年幼、体重较小的动物做实验。

2、性别 实验证明，不同性别的动物对同一药物的敏感性不同，对各种刺激的反应也不尽一致，雌性动物性周期不同阶段和怀孕、授乳时的机体反应性有较大的改变，因此，一般情况优先选雄性动物或雌雄各半做实验。

3、生理和健康状况 体瘦、肌肉发达的动物较脂肪多的动物所需麻醉药量大，这是因为相对非代谢组织，其基础代谢率较低。活动可增加代谢率，因此，好动的动物所需的麻醉量大。身体状况差的动物，所需麻醉药量小耐受性降低。易发生中毒现象。

4、动物饲养

保证足够的营养供应是维持动物健康的重要因素，其中饲料对动物的关系更为密切。动物的生长、发育、繁殖、抵御疾病的能力及一切生命活动都依赖于营养丰富的饲料。动物在麻醉之前一周应提前到位，给于精心的饲养管理，使其处于良好的健康状态。

2、环境因素

1、温度

在一定范围内，温度缓慢的变化，机体可以进行自动调节与之相适应。但变化莫测过大或过急，对机体将产生行为和生理等不良影响。因此，实验环境温度过高或过低都能导致机体抵抗力下降，对麻醉药物的敏感性升高，易发生中毒现象。因此影响麻醉效果。

2、湿度；

3、空气的流速和清洁度 方法：

1.吸入麻醉法 麻醉药以蒸气或气体状态经呼吸道吸入而产生麻醉者，称吸入麻醉，常用乙醚作麻醉药。吸入法对多数动物有良好的麻醉效果，其优点是易于调节麻醉的深度和较快的终止麻醉，缺点是中、小型动物较适用，对大型动物如狗的吸入麻醉操作复杂，通常不用。

具体方法是：使用乙醚麻醉兔及大小鼠时，可将动物放入玻璃麻醉箱内，把装有浸润乙醚棉球的小烧杯放入麻醉箱，然后观察动物。开始动物自主活动，不久动物出现异常兴奋，不停地挣扎，随后排出大小便。渐渐地动物由兴奋转为抑制，倒下不动，呼吸变慢。如动物四肢紧张度明显减低，角膜反射迟钝，皮肤痛觉消失，则表示动物已进入麻醉，可行手术和操作。在实验过程中应随时观察动物的变化，必要时把乙醚烧杯放在动物鼻部，以维持麻醉的时间与深度。2.注射麻醉法 常用的麻醉药有戊巴比妥钠、硫喷妥钠、氨基甲酸乙酯等。大、小鼠和豚鼠常采用腹腔注射法进行全身麻醉。狗、兔等动物既可腹腔注射给药，也可静脉注射给药。在麻醉兴奋期出现时，动物挣扎不安，为防止注射针滑脱，常用吸入麻醉法进行诱导，待动物安静后再行腹腔或静脉穿刺给药麻醉。在注射麻醉药物时，先用麻醉药总量的三分之二，密切观察动物生命体征的变化，如已达到所需麻醉的程度，余下的麻醉药则不用，避免麻醉过深抑制延脑呼吸中枢导致动物死亡。注意事项

1、麻醉剂的用量，除参照一般标准外，还应考虑个体对药物的耐受性不同，而且体重与所需剂量的关系也并不是绝对成正比的。一般说，衰弱和过胖的动物，其单位体重所需剂量较小，在使用麻醉剂过程中，随时检查动物的反应情况，尤其是采用静脉注射，绝不可将按体重计算出的用量匆忙进行注射。

2、动物在麻醉期体温容易下降，要采取保温措施。

3、静脉注射必须缓慢，同时观察肌肉紧张、角膜反射和对皮肤夹捏的反应，当这些活动明显减弱或消失时，应立即停止注射。配制的药液浓度要适中不可过高，以免麻醉过急；但也不能过低，以减少注入溶液的体积。

4、作慢性实验时，在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平。思考题

小结在操作过程中，哪些因素可能影响实验动物麻醉效果？

常用的麻醉剂

动物实验中常用的麻醉剂分为三类，即挥发性麻醉剂、非挥发性麻醉剂和中药麻醉剂。1.挥发性麻醉剂 这类麻药包括乙醚、氯仿等。乙醚是常用的吸入麻醉剂，乙醚挥发性很强，有特殊的气味，为易燃品，适用于各种动物（鸡除外），乙醚的作用是抑制中枢神经系统。其特点是安全范围大，肌肉能完全松弛，对肝和肾的毒性较小，麻醉的诱导期和苏醒较短，动物麻醉深度容易掌握，而且麻醉后苏醒较快。其副作用是对呼吸道和结膜刺激性强，胃肠道反应增高，局部刺激作用大，可引起上呼吸道黏膜液体分泌增多，易发生呼吸道阻塞，使用时应小心。2.非挥发性麻醉剂 这类麻醉剂种类较多，包括苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、硫喷妥钠等巴比妥类的衍生物，氨基酸乙脂和水合氯醛。这些麻醉剂使用方便，一次给药可维持较长的麻醉时间，麻醉过程较平稳，动物无明显挣扎现象。但缺点是苏醒较慢。（1）戊巴比妥钠：为中效巴比妥类药物。戊巴比妥钠，是常用的麻醉剂，有兽用、人兽共用的产品，使用时应注意药品质量。（2）硫喷妥钠：硫喷妥钠为超速效巴比妥类药物，为淡黄色粉末，有硫臭，易吸水，装在安瓶中保存。其水溶液不稳定，故必须临时配制，常配浓度为1%~5%，在0～4℃冰箱中保存，置7天之内，其分解甚微；在室温中则只能保存24h。如见溶液色呈深黄、混浊，即表示已分解，不能使用。该药麻醉诱导和苏醒时间短，一次用药仅可维持数分钟。因此，一般用作为诱导麻醉或基础麻醉。其副作用：对呼吸系统有明显的抑制作用，不宜与吗啡合用。（3）氯胺酮：为中效巴比妥药物，常用其盐酸盐。静脉或肌肉给药后，很快起到麻醉作用，但维持时间较短，一般仅10～20min。为了延长时间，可重复给药。其副作用是心率加快，血压升高，有时还可引起动物呕吐等。（4）水合氯 11 醛：此药为无色透明棱状结晶，有穿透性的臭气及腐蚀性苦味。其溶解度较小，常配浓度为5％～10％。配制后的溶液易沉淀，用时先在水浴锅中适量加热，促其融解。作用特点与巴比妥类药物相似，似一种安全有效的镇静催眠药，能起到全身麻醉作用，其麻醉量与中毒量很接近，故安全范围小，使用时应注意。其副作用为对皮肤和粘膜有较强的刺激作用。（5）氨基甲酸乙酯（乌拉坦）：此药是比较温和的麻醉药，安全度大。多数实验动物都可使用，更使用于小动物。一般用作基础麻醉，如实验全部过程都用此药麻醉时，动物保温尤为重要。使用时常配成20%～25%水溶液，犬、猫、兔直肠灌注1.5g/kg体重；皮下、静脉、腹腔注射0.75～1g/kg体重。当与水合氯醛按1：1比例合并麻醉时，效果更好。但在作静脉注射时必须溶在生理盐水中，配成5%或10%的溶液，即每千克体重注射10～20ml。蛙类：2g/kg体重，由背部淋巴囊注射。鸟类：1.25g/kg体重，由肌肉注入。鼠：1.5～2g/kg体重，由腹腔注射。（6）异戊巴比妥钠：常配成5％～10％的水溶液，作用和戊巴比妥钠相似。使用剂量和方法：犬、猫、兔腹腔和肌肉注射80～100mg/kg体重；静脉注射40～50mg/kg体重；直肠灌注100mg/kg体重。鼠：腹腔注射100mg/kg体重。3.中药麻醉剂 动物实验时有时也用到象洋金花和氢溴酸东莨菪菅碱等中药麻醉剂，但由于其作用不够稳定，而且常需加佐剂麻醉效果才能理想，故在使用过程中不能得及普及，因而，多数实验室不选用这类麻醉剂进行麻醉。

2、豚鼠的局部麻醉 目的

1、了解并熟悉豚鼠的局部麻醉方法

2、掌握局部浸润麻醉方法。用品

刀片、注射器、消毒干棉球、75%酒精棉球、普鲁卡因、利多卡因。原理

用局部麻醉药阻滞周围神经末梢或神经干、神经节、神经丛的冲动传导，产生局部性的麻醉区，称为局部麻醉。其特点是动物保持清醒，对重要器官功能干扰轻微，麻醉并发症少，是一种比较安全的麻醉方法。适用于大中型动物各种短时间内的实验。豚鼠对麻醉药物很敏感。内容

1.表面麻醉 利用局部麻醉药的组织穿透作用，透过粘膜，阻滞表面的神经末梢，称表面麻醉。在口腔及鼻腔粘膜、眼结膜、尿道等部位手术时，常把麻醉药涂敷、滴入、喷于表面上，或尿道灌注给药，使之麻醉。

2.局部浸润麻醉：沿手术切口逐层注射麻醉药，靠药液的张力弥散，浸入组织,麻醉感觉神经末梢，称局部浸润麻醉。常用药为普鲁卡因。在施行局部浸 润麻醉时，先固定好动物，用0.5～1％盐酸普鲁卡因皮内注射，使局部皮肤表面呈现一桔皮样隆起，称皮丘，然后从皮丘进针，向皮下分层注射，在扩大浸润范围时，针尖应从已浸润过的部位刺入，直至要求麻醉区域的皮肤都浸润为止。每次注射时，必须先抽注射器，以免将麻醉药注入血管内引起中毒反应。3.区域阻滞麻醉：在手术区四周和底部注射麻醉药阻断疼痛的向心传导,称区域阻断麻醉。常用药为普鲁卡因。

4.神经干(丛)阻滞麻醉：在神经干(丛)的周围注射麻醉药，阻滞其传导,使其所支配的区域无疼痛，称神经干(丛)阻滞麻醉。常用药为利多卡因。

3、损毁小白鼠小脑的效应 目的：

1、掌握小白鼠的麻醉方法；

2、了解小脑的机能。基本原理

小脑具有维持身体平衡，调节肌紧张和协调肌肉运动等机能。当小脑损伤后，随着破坏程度的不同，可表现出不同程度的肌紧张失调及平衡失调。动物与器材

小白鼠、常用手术器械、大头针、麻醉口罩、乙醚、棉花。方法与步骤

1．用乙醚麻醉小鼠（注意仔细观察呼吸，若呼吸变慢时则表示动物已麻醉）。2．自头顶部至耳后沿正中线剪开皮肤，将颈肌向下剥离。透过透明的颅骨即可看清小脑的位置（图9-6）用大头针刺穿颅骨，直达小脑（2—3mm），搅毁该侧小脑（注意不可深刺，以免损伤脑干）。

3．待小鼠清醒后，可见其向一侧旋转或翻滚。如损伤较轻，小鼠向健侧旋转；当损伤重时，则向损伤侧翻滚。

4．将实验用完的小鼠拉断颈椎处死后弃之。思考题

根据实验结果说明小脑的生理机能。

实验

五、家兔的热原实验

目的

1、练习家兔的各种注射方法；

2、了解家兔热源反应的基本原理。原理

家兔体温变化十分灵敏，最易产生发热反应，发热反应典型、恒定，因此常选用家兔进行这方面的研究。方法与步骤

1、用体温计测量实验前家兔的正常体温。

2、采用以下方法进行热源实验：给家兔静脉注射伤寒一副伤寒四联菌苗0.5～2.0ml/kg，菌苗含量应不低于100亿/ml；皮下注射2%二硝基酚溶液（30毫克）15～20分钟后开始发热；肌注10%蛋白胨1.0g/Kg；皮下注射消毒脱脂牛奶3～5ml。

3、一至两小时后，用体温计再次测量家兔的体温，看其有何变化。思考题

在热源实验操作过程中，你认为应注意哪些方面？

实验

六、动物体内常见寄生虫卵检查

目的

1、学习常见实验动物虫卵标本的采集和检查方法。

2、学会对不同虫卵进行鉴定。用品

大鼠、小鼠、猕猴的粪便、示范片、盖玻片、载玻片、目镜测微尺、物镜测微尺 方法

1、直接涂片法

包括粪便、血液、肠内容物等直接涂片检查。取一载玻片,在其上加一滴生理盐水,取少许粪便或肠内容物与生理盐水混匀后于显微镜下观察。血液可直接滴于载玻片上，制成涂片，加盖玻片观察。

2、虫卵收集法

a.沉淀集卵法:取粪便加适量清水,混匀后过滤,重复数次至液体清亮为止,静止沉淀十分钟后,取底部沉淀物作镜检。此法适于检查血吸虫卵。

b.饱和盐水漂浮法:利用虫卵的比重小于饱和盐水的原理,使线虫卵和几种绦虫卵或包囊漂浮于液面上,提高检查效果。实验步骤和内容：

1、自然感染蠕虫的调查

取猕猴粪便在盛有生理盐水的培养皿中漂洗,直接查找寄生虫虫体和虫卵,根据虫体和虫卵的形态,签别虫种。

2、直接涂片法或沉淀集卵法检查寄生虫卵。

3、观察蛔虫、蛲虫、绦虫和血吸虫卵标本装片。

注意:观察各种虫卵的大小、形状、颜色、卵膜结构等以及各种虫卵的特征

A、蛔虫卵(线虫纲一虫体线形或长圆柱形,雌雄异体)受精卵为椭圆形,大小约40-60微米(35-50×45-76),卵壳的表面有一层凸凹不平的蛋白质膜,被胆汁染成棕黄色,整个虫卵呈棕黄色。卵壳厚而透明。卵内有一近圆形的卵细胞。

未受精卵多为长椭圆形,大小约40一60微米(39-40×88-94),卵壳与蛋白质膜较薄,卵内充满大小不等的屈光颗粒。

无论受精卵和未受精卵其蛋白质膜有时缺失,无蛋白质膜的受精卵是无色透明,请注意与其它虫卵的区别。

B、蛲虫(线虫纲：虫体细小,乳白色,似一白色线头。)虫卵为椭圆形,两侧不对称,一侧扁平,一侧稍凸。大小约25-55微米(20-30×50-60),卵壳较厚,无色透明,内含幼虫。

C、绦虫(绦虫纲：腹背扁平、带状、分节,雌雄同体,常见的有链状带绦虫。)虫卵近球形,较小,大小约45-70微米,虫卵自孕节排出时卵壳己脱落,镜下所见是具胚膜的六钩蚴,胚膜较厚,棕黄色有放射状的条纹。

D、血吸虫(吸虫纲一多有腹背扁平,舌状或叶状,有吸盘,雌雄异体,常见的有日本血吸虫等。)虫卵为椭圆形,淡黄色。大小约74-106×55-80微米,卵壳较薄无盖,壳 的一侧有小棘,一般在镜下不易见到。成熟的卵内含有一个毛蚴。注意事项

1.高倍镜下观察必须加盖玻片；

2.采用直接涂片法时，不要涂得太多，必须分散开，均匀； 3.观察寄生虫卵前，需在高倍镜下校对目镜每格的长度，才能算出虫卵大小； 4.先在低倍镜下观察，发现后换为高倍镜。实验报告内容

1、绘出镜下观察到的蛔虫、蛲虫、绦虫和血吸虫卵。

2、概括总结蛔虫、蛲虫、绦虫和血吸虫卵的形态区别要点。

3、在整过操作过程中的注意事项。

实验

七、雌性小鼠动情周期的检查

目的

1、学习小鼠阴道内液体的采集方法；

2、了解在动情周期的不同阶段，小鼠阴道涂片的组织学变化。原理

哺乳类的雌性动物在性成熟后，出现动情周期变化，其中啮齿类动物在动情周期不同阶段，阴道粘膜发生比较典型的变化。因此，根椐阴道涂片的细胞学改变，可以推断卵巢功能的周期性变化。

未成熟的大、小白鼠尚无自然的动情周期，但当注射绒毛膜促性腺激素后，则可使其提前出现。用品

显微镜、棉签、载玻片、生理盐水、碱性美蓝溶液（配制：美蓝0.3g，溶于95%的乙醇30ml中，再加蒸馏水至100ml及10%NaOH溶液0.1ml）等。动物

性成熟的雌性小白鼠。方法与步骤

1、小鼠阴道内液体取法

取阴道内液体有下列三种方法：

（1）冲洗法 将装有消毒生理盐水的滴管轻轻插入动物阴道内，按压滴管橡皮头，将生理盐水打入阴道，然后吸出，如此2-3次。最后将滴管中的阴道冲洗液滴在载玻片上。

（2）沾取法 将消毒的细棉签用生理盐水润湿，轻轻插入动物阴道内0.5cm，慢慢转动一下取出。

（3）刮取法 用光滑的玻璃小勺或牛角制 小刮片慢慢插入阴道内，在阴道壁轻轻刮取一点阴道内含物。

2、涂片

将带有阴道内含物的细棉签等在载玻片上均匀的转动做成涂片，然后将涂片在空气中自然干燥。

3、染色

用碱性美蓝溶液染色5min左右，用蒸馏水冲洗剩余的美蓝溶液（注意：应从涂片边缘慢慢冲洗，切不要把细胞冲洗掉），并使之干燥。

4、观察结果

在显微镜下观察阴道分泌物涂片的组织学变化，确定动情周期变化的不同阶 段。

阶段

表 小白鼠性周期阴道分泌物涂片变化 持续时卵巢变化 涂片可见 间/h 卵泡加速大量有核上皮细胞，少量角化

生长 细胞

卵泡成熟、满视野角化上皮细胞，少量有

排卵 核上皮细胞

黄体生成 角化上皮细胞及白细胞 动情前期

动情期

动情后期

动情 黄体退化 大量白细胞及少量黏液 间期

注意事项：

1.采取阴道（下口）内分泌物，不是肠道内容物（上口）； 2.制作涂片要均匀；

3.自然干燥后，再染色8-10min；

4.用蒸馏水冲洗剩余的美蓝溶液时，应从涂片边缘慢慢冲洗； 5.在镜下镜检（如用高倍镜，必须加盖玻片）。

实验

八、小鼠下颌骨形态分析

目的与原理

小鼠的下颌骨形态有高度的遗传稳定性，不同品种或品系小鼠下颌骨的形态、大小不同，因此该项技术可以作为纯系小鼠、纯系大鼠遗传质量的检测方法之一。下颌骨形态分析是一种定量技术。可阐明许多遗传学差异。主要是对小鼠或大鼠右侧下颌骨形态做对比分析，通过多变量分析，建立判别函数进行性别判别。

常规标本制备方法

1.随机抽取小鼠数只（60日龄，体重相当）处死，取下头颅。

2.投入沸水中煮约10分钟，冷却后把头颅上的组织仔细剔除，放在含有木瓜蛋白酶的自来水中（下颌骨带的残肉与酶的比例为1:25)，水的PH为4.5，消化温度为40—60℃，最适温度为52 ℃，保温过夜，取出下颌骨，用小镊子去掉残肉和门齿，再用水洗净。

3.自然干燥，存放于塑料袋中。

4.制作坐标底片，用于测量下颌骨有关变量。

5.在坐标底片上用两个平直的玻璃细条粘成直角，成L型，与坐标的纵轴和横轴相吻合，压平待用。动物

小白鼠 方法与步骤

1.下颌骨的11个测量点参见下图。

2.将待测标本平放在解剖镜载物台的标尺上，下颌骨前端和下部边缘与标尺上的L型玻璃条的X及Y轴分别贴紧放平，将每个标本11个变量的结果记录下来，交给老师，统一处理。

3、打开SPSS，输入数据；定义变量；

4、操作步骤：Analyze→Classify →Discriminant →open discriminant analyze;Gender →grouping variables(define range);all variables →independent;Method →enter independent together;open statistics →function coefficients →Fisher’s,unstandardized →continue;open classify →display→summary table,casewise results;prior probabilities →All groups equal → continue →OK。结果分析：求出判别系数和判别函数；

2、得到判别代结果和判别率；

3、验证回代和新标本判别。注意事项

1、标本要保证完整性；

2、小白鼠雌雄的体重要分别相近；

3、突变性的标本要舍去；

4、测量要注意准确；

5、每组标本的性别，不要混淆。

实验

九、家兔的神经分离、气管插管

目的

1、学习气管插管术；

2、学习分离及识别有关的血管和神经；

3、学习测定家兔呼吸运动的方法。用品

常用手术器械、气体插管、玻璃分针、刺激器、张力换能器、铁夹台、25%氨基甲酸乙酯、3%乳酸。动物

家兔 方法与步骤

1、麻醉并固定动物

每组取家兔一只,称重,按40mg/kg体重的剂量由耳缘静脉缓慢注射戊巴比妥钠溶液，将动物麻醉。当动物四肢松软,呼吸变深变慢,角膜反射迟钝时,表明动物己被麻醉，即可停止注射。将麻醉动物仰卧于兔体手术台上,固定好头部和四肢，将兔舌拉出以免阻塞呼吸道。注意：缓慢注射；兔舌拉出；颈部必须放正拉直。

2、颈部手术

用剪毛剪剪去颈部被毛,用手术刀切开颈部皮肤(5-7cm)长,分离皮下结缔组织和肌肉,暴露气管,分离气管和食管,在气管下穿一棉线备用。

3、颈部神经及血管分离术

3.1 颈总动脉的分离 在颈部,神经与颈总动脉被结缔组织膜束在一起,形成血管神经束,位于气管的外侧,其腹面被胸骨舌骨肌和胸骨甲状肌所覆盖。用玻璃分针将气管两侧上述肌肉分离后,用左手拇指和食指轻轻捏住分离的左侧肌肉和皮肤,稍向外翻,即可将血管神经束翻于食指之上。然后用玻璃分针分离颈总动脉外的结缔组织膜,将动脉分离约4cm长,并向头端追索到甲状软骨上缘,暴露颈动脉窦,在颈动脉下穿一棉线。用同样的方法可分离右侧颈总动脉。3.2 颈部神 经的分离 轻轻提起左侧颈总动脉下的线,即可清楚看到三条粗细不同的神经。其中迷走神经最粗,呈白色，一般位于外侧,易于识别；交感神经较细,略呈灰色，一般位于内侧；减压神经最细，呈白色,一般位于迷走神经和交感神经之间。

由于家兔品种不同及个体间的差异,三条神经的位置有较大的变异,应注意识别。识别准确后,用玻璃分针顺着神经的方向,小心分离其外的结缔组织膜,-般先分离减压神经,然后再分离交感神经和迷走神经,并分别在各神经下穿不同颜色的线（双线）备用。

4、气管切开术

在喉头下2-3cm处的气管上作一“T”型切口,将与气管口径相近的气管插管向心方向插入气管中，用线结扎,并将余线固定于气管插管的分叉处,以防气管插管脱落。

5、腹部手术

剪去剑突部位腹部被毛,切开胸骨下端剑突部位的皮肤,并沿腹白线再切开长约2cm的切口。细心分离剑突软骨并结扎,线的另一端连于张力换能器上,张力换能器连接于计算机BL-410的 1 通道上。

6、开机→BL-410生物机能实验系统→实验项目→呼吸实验→呼吸运动调节 这时可看到在屏幕上显示4个波形窗口,鼠标左双击1通道窗口,即只显示出1通道波形窗口,在屏幕右下角选实验标记。鼠标点开始即可描记呼吸运动曲线。

7、观察项目

7.1 慢速记录正常的呼吸运动曲线,注意分清吸气与呼气时的曲线方向； 7.2 增加无效腔对呼吸运动的影响 将橡皮管(长约lm,内径0.7cm)连于气管插管的一个侧管上,用止血钳夹闭另一侧管,使无效腔增加,观察并记录呼吸运动的变化。当呼吸运动出现明显改变后立即去掉橡皮管使呼吸运动恢复正常；

7.3 窒息对呼吸运动的影响 将气管插管的两个侧管同时夹闭,观察并记录呼吸运动的变化；

7.4 血中酸性物质增多的效应 取5ml注射器,由耳缘静脉较快地注入3%乳酸溶液2m1,观察呼吸运动的变化；

7.5 分别刺激迷走神经中枢端和外周端,观察并记录呼吸运动。注意事项

1、实验过程中，要防止动脉套管刺破颈总动脉和发生凝血现象；

2、剪去一段剑突软骨时，不能剪得过深，以免伤及其下附着的膈肌，并要保证剑突软骨与胸骨完全分离；

3、在分离神经及穿线时,切勿损伤与其伴行的神经；

4、在颈总动脉近甲状腺处有甲状腺前动脉,分离时应稍靠下方,以免损伤；

5、注射要缓慢，兔舌要拉出，颈部必须放正拉直。

实验

十、实验动物环境因子检测

目的

1、正确使用环境因子检测仪器；

2、了解噪音计、光度计、温度计、湿度计的测定原理；

3、学习测定方法。内容

测定各种实验动物环境的照度、噪音、温度和湿度。

实验

十一、小白鼠走迷宫

目的

1.通过观察、分析小白鼠学习和记忆过程，理解大脑在动物行为机制建立中的作用。

2.通过实验，了解影响动物学习和记忆能力的因素。

3.通过实验，了解数据统计分析在科学研究中的重要作用。实验原理

老鼠接近人类，通过老鼠的实验可以间接地了解人脑的功能。学习和记忆是神经系统高级中枢的重要机能之一。学习是神经系统不断接受环境刺激而获得的行为习惯或经验；获得的行为习惯或经验维持一定时间的能力就是记忆。动物的学习和记忆能力对其生存具有重要意义。

在人为设置的迷宫里，动物通过不断感受复杂通道的结构，调整和改进自己的行为。随着训练次数的增加，条件反射逐渐建立，以至在大脑皮层形成记忆。通过记录动物搜寻食物的时间长短可以对此加以评价。同时也可以考察一些刺激（如饥饿和化学药剂）对记忆力的影响。

实验材料

小白鼠。用品

由学生根据实验需要自行准备。实验步骤

（一）实验准备

1.用硬纸板或木板构建迷宫。高度以小白鼠不能爬上为宜，上面也可以盖上一玻璃板。

1、选择健康活泼的小白鼠5只，要求年龄和体重一致，实验前饥饿一天，但提供水。另选择一只未经饥饿处理的小白鼠备用。在迷宫内特定位置放置一块面包。

（二）实验项目

1.饥饿处理的小白鼠1只，放置在迷宫入口，记录其找到食物所需时间。5分钟后，重复上述步骤，同样的间隔时间对其进行四次实验，每只小白鼠共计进 行5次实验。

2.对其余四只饥饿处理的小白鼠进行5次实验，记录每只小白鼠找到食物所需时间。

3.数据处理 根据实验数据，求出5只小白鼠每次实验找到食物所需时间的平均值。以实验次数为横坐标，找到食物的时间为纵坐标，建立直角坐标系，制作标准曲线。把上述平均值标在坐标纸上并连接各点，从而得到实验数据与寻找时间的关系曲线。观察图形的变化趋势。

4.取未经饥饿处理的小白鼠进行步骤1，把记录的时间与标准曲线进行对比，分析小白鼠记忆力的变化。

5.取1只饥饿处理的小白鼠称重，皮下注射120mg/kgNaNO2，然后让其走迷宫，重复步骤1，将所记录的时间与标准曲线对比，分析小白鼠记忆力的变化。

6.另取1只饥饿处理的小白鼠称重，测试前半小时将小白鼠灌服20%-40%酒精100ml/kg。将所记录的时间与标准曲线进行对比，分析小白鼠记忆力的变化。

7.再取1只饥饿处理的小白鼠静脉注射乙酰胆碱，重复步骤1，将所记录的时间与标准曲线对比，分析小白鼠记忆力的变化

实验改进点

1、实验用年老的小鼠与小白鼠进行对比考察年龄对学习和记忆力的影响。

2、实验考察乙酰胆碱和NaNO2对小白鼠学习和记忆力的影响。

3、实验注意事项

1、选材为活泼健康的小白鼠，不能选运动机能和记忆力差的小白鼠。

2、为了避免嗅觉对测试的影响，做每一个实验项目前都应对迷宫进行清洁。实验分工

和 负责找资料，负责整理和制作，实验改进点由这几人讨论。

实验预期结果

1、随着小白鼠学习和记忆过程的进行，小白鼠找到食物的时间会越来越短。

2、未经饥饿处理的小白鼠由于没有饥饿的刺激，找到食物的时间会更长。

3、由于NaNO2是缺氧剂，会造成脑部缺氧，从而破坏记忆的保持，因此小白鼠找到食物的时间会变长。

4、测试前半小时将小白鼠灌服20%-40%酒精可以明显干扰记忆的再现，因此小白鼠找到食物的时间会变长。

5、小白鼠脑部乙酰胆碱的增加会增强记忆力，因此小白鼠找到食物的时间会变短。思考

1.小白鼠的年龄对学习和记忆有没有影响？ 2.人的大脑也和小白鼠有类似的结果吗？ 3.乙酰胆碱在该实验中的作用机理是什么？

实验参考资料

《实验动物和动物实验技术》苗明三主编中国医药出版社.北京.1997.6 《动物生物学实验技术》黄诗笺主编高等教育出版社 施普林出版社2001.8：109，131，132 《实验动物学》罗满林、顾为望主编中国农业出版社 2002.8P127-143.实验十二 消化系统疾病动物模型建立及验证（设计）

（一）病毒性肝炎模型

常用方法是注射乙型肝炎病人血清复制乙型肝炎模型。但大部分实验动物对甲型肝炎病毒不易感。我国已有报导红面猕猴、恒河猴、人及野生树鼩种毒后出现人甲型肝炎现象。近年来发现某些鸭肝炎病毒的特征与人肝炎病毒十分相似，故用鸭作为人肝炎模型也开始增多。

（二）免疫性肝炎模型

慢性或迁延性肝炎患者体内存在着抗肝细胞成分抗体。1959年国外有人用肝组织悬液加弗氏佐剂免疫豚鼠，成功地诱发了肝细胞变性及坏死病变。也有人报导肝膜蛋白（LSP）加佐剂分次注射产生动物免疫性肝炎模型。

（三）胃、肠道溃疡模型

在动物身上复制胃、肠道溃疡的方法较多，但所用的方法不同，引起的溃疡病变也各有特点。常用的方法有：

1．应激法 以各种强烈的伤害性刺激（如强迫制动、饥饿、寒冷等），引起动物发生应激性溃疡。如把动物浸入冷水中或放在应激箱中不断地遭受电刺激，使之剧烈不安，一昼夜即能引起胃粘膜出血及溃疡。这种方法简单，成功率达99%以上。

2．药物法 给动物投服或注射一定量的组织胺、胃泌素、肾上腺类固醇、水杨酸盐、血清素、利血平、保泰松等可造成动物胃肠溃疡。如给豚鼠小剂量的组织胺，连续数天，可引起胃、十二指肠、食道等发生溃疡。又如可用利血平、血清紧张素、阿斯匹林等诱发大白鼠或小白鼠的胃溃疡。

3．烧灼法 用电极烧灼胃底部的胃壁，可造成象人的胃溃疡病变；用浓醋酸给大鼠胃壁内注射或涂抹于胃壁浆膜面上可造成慢性溃疡。烧灼法复制胃、肠道溃疡模型的优点是方法简便，溃疡部位可由作者自己选择。

4．结扎幽门法 选用大鼠、小鼠或豚鼠，麻醉后，无菌技术下在剑突下由腹正中切开腹壁皮肤及肌层，切口长约3cm，暴露胃，沿胃向右，辩清幽门和十二指肠的联结处，避开血管，于其下穿线，将幽门完全结扎。术后绝对禁食禁水。幽门结扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度胃液在胃中潴留，造成胃溃疡。这类溃疡复制方法简单，发生快，成功率高，但病变较表浅，严格地说仍然属于胃粘膜急性出血性糜烂，与人类胃溃疡的典型病变差距较大，适于作探索抗溃疡病药物研究和胃溃疡发病学方面的研究。

其他还可用外科手术方法从肠道上部排除可中和胃酸的碱性胆汁、胰 液或十二指肠液造成溃疡。还可用刺激、损伤或毁损脑组织等方法造成溃疡。

（四）胰腺炎模型

复制胰腺炎模型可采用使胰液外分泌发生潴留；使各种胰酶在胰管系统内活化；感染或某些微生物毒素的作用，影响胰腺的营养、代谢等。实验动物选用狗、兔和大鼠。将狗自身胆注按0.5ml/kg体重缓慢注入狗胰腺体尾交界处的胰腺实质内，则可引起胰腺局部组织坏死及炎性浸润，与人类急性胰腺炎和病变相似。用大肠杆菌悬液9亿/ml，按1ml/kg体重，向兔胰管内逆进注射可诱发急性胰腺炎。另外也可采用大鼠腹腔内连续注射乙硫胺酸诱发成功胰腺炎模型。随着乙硫胺酸注射时间的延长，胰腺组织可以出现广泛进行性破坏和退化及胰酶水平的持续下降。

（五）糖尿病模型

糖尿病模型的复制方法采用注射致高血糖因子；手术切除胰腺的全部或大部；用四氧嘧啶（Alloxan）破坏胰岛β细胞，造成胰性糖尿病；注射根皮苷使肾小管对糖的再吸收发生障碍并破坏酯酶致使葡萄糖磷酸化过程和脱磷酸过程障碍，引起根皮苷糖皮。

四氧嘧啶复制的糖尿病动物模型是目前研究人类糖尿病较好的方法，其实验性糖尿病近似人类糖尿病，体内代谢障碍时有可能产生此种衍生物，胰岛外分泌部不受损伤，几乎所有常用实验动物都可用来进行实验研究。模型胰岛的β细胞不是功能消失，而是功能不同程度的降低，有利于研究胰岛组织再生和功能恢复，动物不必注射胰岛素即可存活很久。大鼠造型剂量为12mg/100g体重，家兔为150～200mg/kg体重，狗约为50～60mg/kg体重。家兔根皮苷皮糖尿病造型剂量为0.5%根皮苷按15m/kg体重，皮下注射。注意所用四氧嘧啶和根皮苷溶液必须现配现用。

实验

十三、骨质疏松动物模型建立和验证（设计）

第五篇：中医大讨论

7月3日下午，南京中医药大学会议室，一场关于中医未来之路的大讨论正在如火如荼的展开。来自这所素有“高等中医教育摇篮”之称的中医名校的各个院系的“顶尖高手”们，就中医现代化及中医人才培养中存在的问题各抒己见、激昂陈词，有关中医危机的深刻讨论，让校园中弥漫的暑假临近的轻松气氛变得异

常沉重。

中医发展 墙内开花墙外香的尴尬

带着刚刚从瑞士归来的风尘仆仆，南京中医药大学第二临床医学院的王旭东教授首先发言。作为1995年首届“中国百名杰出青年中医”的金奖得主，他近两年一直在国外从事中医医疗、教学工作，并对

欧洲的中医药市场进行了深入调查。海外游历的亲身体验使他对中医的发展有着与众不同的看法。王说，其实目前有关中医危机的问题只有国内才会讨论，在国外，是没有人考虑这个问题的，因为中医在国外的上升速度之快另人瞠目结舌。以瑞士为例，2003年，瑞士的中医从业人员不到300人，可不到一年间就翻了一番，增加到700人。至于中医诊所，更是如雨后春笋，开得人眼花缭乱。而且目前

瑞士的每一家医院都在积极筹办中医科室。

同时，欧洲人对中医理论的接受程度也大大超出人们的想象。在他行医的州，每当他和病人讲气血阴阳，病人都会表示很理解，认为这是东方医学对人体和生命的独特认识。在他为当地的西医学生讲授中医时，谈到心肝脾肺肾这些中医特有的、与西医完全不同的脏腑概念时，西医们也表示出了超乎寻常的认同。“我觉得在欧洲对中医的认同度和热情甚至比国内还要多一些。”他说。“我讲课时发现，那些西医学生们很喜欢听气血、阴阳、五行这些东西，因为他们认为这是中医的精髓。而且他们很排斥用西医的理

论解读中医的东西，对神经、细胞、分子这些现代中医的研究成果全不感兴趣。”

“所以我认为，中医的价值和生命力不是讨论出来的，也不是谁给她的。中医的价值和生命力源于她本身内在的东西，她深厚的文化底蕴，她那种深层次的、对人、对生命和自然的尊重，这种顽强的生命力是任何势力都压制不住的。中医用她卓越的疗效赢得了全世界人民的青睐，甚至在西方的医生心中，中医也有她独特的地位，因为她确实能够解决西医所不能解决的问题。所以如何将中医推广、弘扬、光大，让她更健康地成长，才是我们这一代中医学者最重要的职责。”

但是在海外中医繁荣的背后，王旭东也透露出了深深的忧虑。“目前中医高级人才向海外流失的非常严重”，他说，“在欧洲各地的中医院，都有来自国内各大中医学院和中医医院的教师、医生的身影。他们都有着副教授以上的职称，都是很优秀的中医人才。”然而真正让他焦虑的还不止于此。最让他揪心的是，作为中医的发源地，中国的中医有可能被其他国家的标准取代、超越，“教会徒弟饿死师傅”的一幕很有可能在中医上演。一次上课时被学生反诘的经历让他至今久久难忘。那是一次讲针灸治疗忧郁症，他讲了很多不同证型的取穴、用药。快下课时，下边的学生突然反驳，老师你讲得不对，少海也可治忧郁症。他当时一愣，反问道，少海可以治忧郁症吗？没想到学生们理直气壮，当然，因为我们德国针灸学会制订的标准中就讲了少海可以治疗忧郁症。

“西方人是非常善于制订标准的。”王说。“只要他们觉得你好，他们就会进行研究，制订出自己的标准，然后将这些标准向全世界推广。目前德国的针灸学会正在用他们制订的标准与我们抗衡，而法国耳针学会也宣称他们制订的耳针标准要比中国的耳针标准强100倍。我们教会了西方人中医，可是如果一个中国中医要在国外给人看病，却要经过那些红头发、蓝眼睛的、学问远不如你的徒子、徒孙的层层审核，怎么能不生气、窝火？我们的中医行业到目前为止都没有在世界上为自己树立起良好的形象，结果是人家只承认中医是好东西，却不买中国中医的账。中医是中华文化的瑰宝，为什么我们的有关机构不能在全世界树立起中国中医的强势品牌呢？为什么我们不能把中医作为最强有力的一种政治文化工具，在全世界推

广，就像美国大片一样呢？为什么我们总拿不出中医发源地老祖宗国的气势和权威呢？”

中医现代化 让大象钻针眼的无奈

关于中医现代化的反思是最近一段时期中医界的焦点话题。从五四运动至今的近一百年来，“科学”一词就总如悬于中医头上的达摩克利斯之剑，让中医屡屡面临危境。对中医的改造取代了应有的尊重，中医的精神被别有用心者借“现代”之名肆意扭曲、蹂躏，中医的发展，难道注定是一个充满矛盾的悖论？

“科学这个词在现代被滥用了。科学的本义是分科的学问，后来被演变为人类知识的总和，最后又成为真理的代名词。不科学就是不正确，就是伪科学，就是迷信、愚昧、落后，就应该扫荡，这种观念在我们国家已经存在了近一个世纪。用现代科学研究中医是大势所趋，但研究者不等于被研究者，不能说我们用白话文翻译了唐诗之后，就说李白的水平提高了。同时，传统又岂是我们能用现在所谓的科学思想来束缚的呢？中医的思想已经历经了几千年的考验，而现代医学的发展不过才几百年，用现代医学的理论来剪裁中医学，那不是等于让大象穿针眼吗？”南京中医药大学图书馆馆长、博士生导师吉文辉教授用特有风趣表达着自己的观点，而他的“一只茶杯的故事”也为中医独特、深奥的思维方式加了一个通俗生动的注脚。“中医学强调的就是取类比象，比如一只茶杯，书本上只能写他是喝茶的工具。可是在现实生活中，茶杯可不可以用来装水、装酒，甚至装酱油呢？只要体积比它小的，茶杯都可以来装嘛。那一阵风过来，茶杯可不可以用来压压纸？茶杯造得精致美观，可不可以作为工艺品来欣赏？生气时，我又可不可以顺手拿起一只茶杯来打人呢？可茶杯这些变化是书本所不能尽言的，这种变化也是无穷的，需要在实际中去悟、去用的。这种推理的变化才是中医思维的精髓，没有这种脑袋，是不能来学中医的。其中的意境，也是现

代医学所不能体会的。”

南京中医药大学教授、天水堂中医药研究所所长李铁君也认为中医现代化确实有陷入科学崇拜误区。他说，“过去人们总用是否科学作为判断是非的唯一的依据。可是随着后科学时代的来临，人们发现，对事物合理与否的判断不再是简单的是与非，人们开始认识到真理是多元的。”

基础医学院的沈澍农教授则通过中西医学体系的比较对中医现代化提出了异议。“中医是不能以西医先验的观点，先入为主的来研究的。中医是宏观的，她的文化的内容多于技术的内容；而西医则是微观的，其中技术的内容大于文化的内容。可现在我们的研究恰恰是用西医微观的技术的视角来寻找中医的合理内涵，如果找到了，就是科学，反之，就是不科学。在目前我们对人体认识还很肤浅的情况下，这种

用西医的尺度判断中医的方式无疑是不适合的，也是不公平的。”

对此，金鑫教授也表示了赞同，并通过知识与智慧的不同辩证地阐释了中医坚持自我的重要性。“中医现代化过程中最可怕的就是简单拿来和西化，失去中医的特色。中医特点与她的传统有关，中医的传统就是她很宏观，很模糊。在人们试图改造中医时，总希望把她宏观的优势保存下来，而抛弃她的模糊的弱点。可中医的优势和弱点就像一枚硬币的两面，是共生共亡的，如果我们把她的弱点丢掉，她的优势也就荡然无存。长期以来，我们希望通过现代化，简单地用现代的知识来取代中医，其实我们没有看到，中医既是传统知识的表达，更是我们传统智慧的结晶。中医与古代的哲学的关系很密切，所以用简单的现代知识来代替中医，无疑是徒劳的，因为知识代替不了智慧。智慧除了书本的学习外，还需要在实践中悟。这也是智慧是比知识层次更高，是知识所不能取代的重要原因。我们现在所做的一切其实是从现代知识中找到与中医相近的东西，但还不是相应的东西。中医现代化应该是传统的知识转化为现代的知识、传统的智慧上升为现代智慧的过程，这是一个漫长的过程，但我们决不能放弃自己的智慧来简单套用别人的知识。”

可是任何人不能否认，现代化是中医发展的必然趋势。如何在实现现代化与保持中医特色间取

得平衡是中医目前迫切需要解决的问题之一。

张宗明副教授认为，中医学的发展不能游离于现代科学技术之外。但是否这种研究会导致中医失去本体和特色，则应该有所区分。近代科学与中医学确有很多难以通约性的东西，用它来肢解中医是不合理的。但现代科学与近代科学又有很大的区别，关键之一就是近代科学追求简单性、还原性和线性，而现代科学是建立在还原论知识基础上的一种更高级的融合，她追求复杂性，这在很多方面正与中医学的思维方式一致。所以研究中医，两种科学我们都不应拒绝，在学习了近代科学知识的基础上，用中医学的思维

方式，或现在复杂性科学的思维方式来整合这些知识，保持中医思维方式的优势，这样既可以使中医走向现代化，也可以保持中医的特色。张说，中医的特色应该并不简单地保存在阴阳气血这些具体的概念中，中医更重要的特色是她看待人体的思维方式，而这种思维方式与现代科学的发展趋势是相吻合的。第一临床医学院的潘立群教授则提出采用只了解“输入－输出”的黑箱式的方式来研究中医。“中医是宏观的、非定性定量的，如果要把中医定性定量，肯定会出问题。研究中医应该采用一种输入－输出的方式，即用药之前，所反映出的表象是什么，用药之后，发生什么变化，症状如何改善，结果如何就可以了，完全没有必要把药中的每一个成分都搞清，也不可能把每个东西都搞清。就像研究飞机的飞行，我们不需要知道这架飞机长得如何，都装了什么东西，只要通过它运行时的光点判断它的轨迹最终可以到达

目的地就足够了。中医研究的方式也应如此。”

美国中医学体系研究院首席顾问吴云波教授也对两种中医研究的方式提出了自己的看法。“当代中医学的发展过程中，实际上存在两种趋向，一种是以西医学为标准来整理、吸收、改造中医，半个多世纪以来，学术界提出的中医现代化、中西医结合、中医客观化，就是这一趋势的体现；另一种趋势就是中医学的独立发展，并以传统中医的思维、理论、方法为主体，坚持自身的独立发展，其中也不排斥西医的生理解剖、仪器和实验的方法，进行信息转换为我所用。对于这两种取向，我的观点是不要互相攻击，两者的发展可以相辅相承，西医对中医的解读对中医的发展也不是没有好处，针灸是因为针刺麻醉的神奇效果才走向世界的，而针刺麻醉就是中西医结合的成果。所以在坚持自身科学原理的同时，中医完全可以大

量吸收西医的技术成果，为我所用。”

中医教育 传统文化断层的危机

比起现代化之路的不甚明朗，与自己赖以生存的传统文化土壤的割裂让中医显得更加无所适从。这种与自己生命之源的断层不仅让中医经受着前所未有的信仰危机，也使中医深受各种问题困扰，而

其最直接的表现就是备受争议中医教育。

“中医教育五年是中医两年，西医两年，外语一年，结果培养出来的学生中医不像中医，西医不像西医，只不过是两个中专生而矣。”盛良教授这样评价中医本科毕业生。王旭东教授也认为，现在很多的中医学生“很糟”，“谈起阴阳五行，满脸的不屑一顾；谈起现代医学，又只是一知半解。如果说临床是现代中医教育缺憾之一的话，至少这种缺憾还可以通过学生毕业后的积累弥补、再造。可如果他们连中医的科学精神都没有掌握，那就连再造的可能性都没有了。能成为大师是需要有大师的思维方式的，可现在很多

毕业生的世界观、方法论、思维特点都与中医方式格格不入，又怎么能成为大师？”

对于造成这种现象的原因，薛公忱教授和张宗明教授的话一针见血。薛认为，“目前中医理论面临的最大的危害就是民族虚无主义。因为中医属于传统文化，但从五四运动以来，我们的传统文化就一直在遭受批判。中国人对自己的文化失去了信心和信仰，而结果是我们民族的根、民族的自信心没有了。中医现在也在拼命割断自己和传统文化的关系，可是失去了传统文化依托的中医，就如同离开土壤的大树，只有枯萎和死亡。”张则更加直接地指出了中医目前正遭遇的危机，“我记得一个哲学家讲过，当一门学科的学者们关注到这门学科的基础问题的时候，当他们关注到这门学科的发展模式和方向的问题的时候，这门学科就遭遇到了危机。而这正是目前中医学所处的状态。中医的危机就在于她生存的社会和文化土壤的破坏，我们已经失去了传统中医学赖以生存的社会土壤和文化土壤，使人们对中医学产生信仰危机。更为可怕的是，中医的本科生、硕士生、甚至连博士生都不相信自己所学的东西，中医教育很可能培养的不是

自己的继承人，而是掘墓人。”

可是究竟该怎样才能重塑中医的自信心，让中医薪火相传、生生不息呢？加强传统教育，让学生在传统中学习中医以克服文化苍白症；提高学生的医古文基础，让他们掌握与经典心灵相通的工具；增加临床实践，早临床，多临床，反复临床，让学生在实践中体会中医的乐趣都是教授们提出的解决良策。

而在这些观点之中，基础医学院的黄煌教授的观点更加独树一帜，他的中医发展公式引起了与会者的共鸣。“在中医现代化的内涵目前还不甚明朗的情况下，我们不妨把中医现代化理解为发展中医。而发展中医最终的目标是什么，那就是给老百姓实惠。给老百姓实惠＝有效＋安全＋经济，这个公式就是中

医一切发展的准绳。那么有效＋安全＋经济的核心是什么，就是中医的规范。”

而要加强对中医的规范，黄认为，首先应该尽快为中医立法，实现中医和西医管理上的两元制。“现在很多中医看病都是西药、成药加汤药，不少中医师甚至首选的是西药，这很成问题。看好了病，到底是中药的作用还是西药的作用？这样一来，中医的经验没法总结，学术不能传承，中医生和学习者失去了对中医的信心，长此以往，怎么谈发展？因此加快中医立法，实现中医和西医管理上两元制刻不容缓。长期以来，我们的机疗卫生体制表面上是中医、西医、中西医结合三驾马车，但实际上还是西医一主天下。因此必须通过法律明确中医的责权利，中医才能真正开好业。否则再这么„眉毛胡子一把抓‟，中医的阵地还

要萎缩，因为中医生存的土壤已经没有了。”

黄教授关于中医师管理的思路是这样的：单纯中医师应该必须以中为主，其中根据他们专业的不同特点，又有具体的细分，比如以汤方为主的就是中医师；以针灸为主的就是针灸师；还有推拿师、食疗师等等。分类后，就要对各种中医师的资格进行严格认证，并明确规定他们不能用西医的处方药，只能用非处方药，否则就是就违法。而如果是中西医结合医师，应该有中医、西医两个执照。同时，法律还应规定许多中医应遵循的条款，对中医的法律职能加以明确和规范。比如肝阳上亢的诊断有没有法律价值，能不能作为法律依据；哪些病中医治疗有效，哪些病西医治疗有效，哪些病适宜中西医结合治疗等。只有给了中医独立生存的空间，中医的临床和教育才能得上去，学生们才能真正喜爱、认可、信仰中医，中医

最终才能发展。

对传统文化的反思在最近一段时间成为一种热潮，作为中国传统文化的代表，对中医的反思更是首当其冲。这也许反映了人们在物质生活逐渐富足之后，开始寻找自身精神家园的一种回归。中医与中国传统文化一脉相承，在中医里，记录着我们祖先艰难探索的足迹、包涵着我们民族锲而不舍的精神。如果失去了与传统的交连，孤军奋战的中医，在现代化的滚滚红尘中，注定只能节节败退，遍体鳞伤。可是如果失去了传统支撑，貌似现代的我们在通往世界的名片中将以何自居？中华民族又

凭什么自立于世界民族之林？

西方医学的技术是先进的，但这并不能掩饰它在思想上的苍白。这么说，并不代表中医的思想有多完美，正如潘立群教授所言，那是我们祖先在“五千年前不得已而为之的智慧”。所以中医需要发展，需要现代，需要吸收一切她可以吸收的东西完善自己。但关键在于，在这个过程中，如何判断什么是应该坚持的，又有什么是可以放弃的？这不仅需要一个清醒冷净的头脑，更需要一颗坚定自信的心。可事实却是，在现代科研繁花似锦的表面下，我们看到了中医灵动的身影日益僵化，中医自由的精神正在窒息，这

就是所谓的现代化？这样的现代化，又怎能不值得反思？

也许回顾汉字走过的曲折迂回的历史，可以让我们把中医的困扰看得更清楚。从五四运动开始，汉字也曾惨遭口诛笔伐，人们想当然地认为，中国之所以落后的原因是中国的文字太难，用拼音甚至英文取代汉字是那个时代学者的理想。可如今，在经历了近一个世纪之后，猛然回首，人们却惊讶地发现，汉字竟然是这个世界上最完美的文字，她音形义俱全，便于制造新字，甚至打字的速度也快于英文。几十年，历史转了一个圈又回到了原地，还好，为时尚不太晚。那么中医呢？在现代车轮的倾轧下，我们又该怎样

保存中医的风骨？

也许路只有一条，中医当自强！