药品质量分析方法验证CN

第一篇：药品质量分析方法验证CN

药品质量标准分析方法验证

药品质量标准分析方法验证

药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。在起草药品质量标准时，分析方法需经验证；在药物生产方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时、则质量标准分析方法也需进行验证。方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草或修订说明中。需验证的分析项目有：鉴别试验，杂质定量或限度检查，原料药或制剂中有效成分含量测定，以及制剂中其他成分(如降解产物、防腐剂等)的测定。药品溶出度、释放度等功能检查中，其溶出量等测试方法也应作必要验证。验证内容有：准确度、精密度(包括重复性、中间精密度和重现性)、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。视具体方法拟订验证的内容。附表中列出的分析项目和相应的验证内容可供参考。方法验证内容如下。

一、准确度

准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回收率(％)表示。准确度应在规 定的范围内建立。

1．含量测定方法的准确度

原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的 结果进行比较。制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与另一个已建立准确度的方法比较结果。如该法已建立了精密度、线性和专属性，准确度有时也能推算出来，不必再做。

2．杂质定量测定的准确度

可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。如不能测得杂质或降解产物的相对响应因子，则可用原料药的响应因子。应明确证明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比(％)，或是面积比(％)。

3．数据要求

在规定范围内，至少用9次测定结果进行评价，例如制备3个不同浓度的样品，各测定3次。应报告已知加入量的回收率(％)，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。

二、精密度

精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。在相同条件下，由一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性；在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度，称为中间精密度；在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度，称为重现性。含量测定和杂质定量测定应考虑方法的精密度。

1．重复性在规定范围内，至少用9次测定结果进行评价，如制备3个不同浓度的样品，各测定3次，或把被测物浓度当作100％，用至少测定6次的结果进行评价。

2．中间精密度为考察随机变动因素对精密度的影响，应设计方案进行中间精密度试验。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。

3．重现性当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。

4．数据要求均应报告标准偏差、相对标准偏差和可信限。

三、专属性

专属性系指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。

1．鉴别反应

应能与可能共存的物质或结构相似化合物区分。不含被测成分的样品，以及结构相似或组分中的有关化合 1

物，均应呈负反应。

2．含量测定和杂质测定

色谱法和其他分离方法，应附代表性图谱，以说明专属性。图中应标明诸成分的位置，色谱法中的分离度应符合要求。在杂质可获得的情况下，对于含量测定，试样中可加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并可与未加杂质和辅料的试样比较测定结果。对于杂质测定，也可向试样中加入一定量的杂质，考察杂质能否得到分离。在杂质或降解产物不能获得的情况下，可将含有杂质或降解产物的试样进行测定，与另一个经验证了的或药典方法比较结果。用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解，或氧化的方法进行加速破坏，以研究降解产物。含量测定方法应比对二法的结果，杂质测定应比对检出的杂质个数，必要时可采用光二极管阵列检测和质谱检测，进行纯度检查。

四、检测限

检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。常用的方法如下。

1．非仪器分析目视法用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

2．信噪比法

用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为3:1或2:1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。

3．数据要求应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。

五、定量限

定量限系指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定定量限。常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为10:1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。

六、线性

线性系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列供试样品的方法进行测定，至少制备5份供试样品。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。

七、范围

范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果和要求确定。原料药和制剂含量测定，范围应为测试浓度的80％～120％；制剂含量均匀度检查，范围应为测试浓度的70％～130％，根据剂型特点，如气雾剂、喷雾剂，范围可适当放宽，溶出度或释放度中的溶出量测定，范围应为限度的±20％；如规定限度范围，则应为下限的-20％至上限的+20％；杂质测定，研究时，范围应根据初步实测，拟订出规定限度的±20％。如果含量测定与杂质检查同时测定，用百分归一化法，则线性范围应为杂质规定限度的-20％至含量限度（或上限）的+20％。

附表 检验项目和验证内容

内容 项目 鉴别 杂质测定 含量测定及溶出量测定

定量 限度

准确度 － ＋ － ＋

精密度－ － － ＋

重复性 － ＋ － ＋

中间精密度 － ＋① － ＋①

专属性② ＋ ＋ ＋ ＋

检测限 － －③ ＋ －

定量限 － ＋ － －

线性 － ＋ － ＋

范围 － ＋ － ＋

耐用性 ＋ ＋ ＋ ＋

①已有重现性验证，不需验证中间精密度。②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。③视具体情况予以验证。

八、耐用性

耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为常规检查提供依据。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。典型的变动`因素有：被测溶液的稳定性，样品提取次数、`时间等。液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成和pH值，不同厂牌或不同批号的同类色谱柱，柱温，流速等。气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体、柱温，进样口和检测器温度等。经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。

第二篇：药品质量标准分析方法验证

药品质量标准分析方法验证

一、目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求。

二、用途

（一）药品质量标准起草时，分析方法需经验证。

（二）药物生产方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。

三、需验证的分析项目

1.鉴别试验；

2.杂质定量或限度检查；

3.原料或制剂中有效成分含量测定；

4.制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定；

5.溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法

四、验证内容

准确度、精密度（重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性

（一）线性（Linearity）

在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

•方法：应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列不同浓度标准溶液的方法进行测定（n≥5）。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。

•数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图

UV法：吸光度A一般在0.2～0.8，浓度点n＝5。用浓度c对A作线性回归处理，得一直线方程，r应达到0.9999(n＝5)，方程的截距应近于零。

HPLC法: 用精制品配制一系列标准溶液，浓度点n应为5～7，用浓度c对峰高h或被测物的响应值(峰面积A)之比进行回归处理，建立回归方程，r应大于0.999，截距应趋于零。

（二）准确度（accuracy）

准确度是指用该方法测定的结果与真实值接近的程度，用百分回收率表示。

测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。回收试验：空白+已知量的对照品（或标准品）测定，测定值为M

回收率R测定平均值空白100% 加入量

加样回收试验 ： 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为MRMP100% A

数据要求：可向制剂中加入已知量的被测物对照品进行测定规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次。

（三）精密度（precision）

精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)表示。

相对标准偏差（RSD），也称变异系数（CV）

RSDS100%S2xi

n

11.重复性(repeatability):

在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作100%，至少测6次进行评价。

2.中间精密度同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。

3.重现性(reproducibility)不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。

数据要求：需报告RD，RSD和可信限。

（四）检测限（LOD）

检测限系指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。

1．非仪器分析目视法

用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

2．信噪比法

用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），是把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。

（1）空白值＝0时；①测定背景10次以上，求出标准差S空。②将S空乘以三倍；③在工作曲线上求出3 S空相对应的浓度X；即为方法的检出值；

（2）空白值不等于0；①测定背景10次以上，求出标准差S空；②在工作曲线上求出3 S空 相对应的浓度X； ③ 将求得的对应浓度值加上空白值即得该方法的检出限。

（五）定量限（LOQ）

指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求。

常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10∶1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可按1984年国际纯粹和应用化学联合会(IVPAC)规定：用仪器所测空白背景响应标准差（SD）的10倍为估计值，再经试验确定方法的实际测定下限。

仪器分析：通过测定一组空的样品的背景信号后计算标准差S。以1OS来估算定量限度。（以定量限度制备的样品来验证）

非仪器分析：通过分析己知被测物浓度的样品并确定一个样品中被测物可被准确和精密测定出的最低浓度（量）。

（六）耐用性

指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量在正常情况下实验结果重现性的尺度。

分析方法重现性的测定是通过在不同的实验室内不同的实验者对同一样品的分别测试而获得的。（获得的这种再与正常检定下的精密度进行比较，从而确定该法的耐用性）

（七）专属性

（八）范围

•典型的变动因素有：被测溶液的稳定性，样品提取次数、时间等。

•液相色谱法中典型的变动因素有：流动相的组成和pH值，不同厂牌或不同批号的同类色谱柱，柱温，流速等。

•气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体、柱温，进样口和检测器温度等。

经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。

含量测定需进行的方法学验证项目：准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性

五、各种含量测定方法对效能指标的要求

1.容量分析法：用原料药精制品(含量>99.5％)或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于0.2％；进行回收率试验。回收率一般在99.7～100.3％之间。

2.UV法：用适当浓度的精制品进行测定，其RSD一般不大于应在98％～102％之间。

3.HPLC法：要求

第三篇：分析方法的验证(精)

分析方法的验证

分析方法的验证，就是对药品分析实验所采用的分析方法是否完全达到了预期目的，或证明由分析方法误差而导致试验结果判断错误的概率是否在允许范围之内，而进行的科学证明。

分析方法的验证以验证参数表示。在制定药品质量标准时，可通过这些参数证明所建立的分析方法是否适当。本文所述分析方法验证是指下述情况：药局方新收载品种质量标准的建立；药局方已收载品种质量标准的修订；根据药局方的通则建立替代方法。

定量限界是指样品中所含的被测物质可被进行定量的最小量或最低浓度。定量限界所述样品测定值的精度，以相对标准偏差表示，一般为10%。2.5.2 评价方法：通常定量限界可以通过空白样品或被测物定量限界附近的样品测定值的标准偏差以及定量限界附近的标准曲线的斜率算出。例如，根据定量限界附近的标准曲线的斜率以及空白样品测定值的标准偏差，由下式求出定量限界。

DL=10σ/slope

DL：定量限界

σ：空白样品测定值的标准偏差

slope：定量限界附近标准曲线的斜率

应用色谱法时，测定值的标准偏差可以用信噪比代替。分析方法的定量限界应比质量标准中规定值要小。2.6 线性关系

2.6.1 定义：线性关系是指分析方法能够得到与被测物质的量或浓度具有直线关系的测定值的能力，必要时，被测物质的量或浓度的测定值也可以是从数学公式中得到的变换值。

2.6.2 评价方法：准备一系列不同浓度(量)的被测样品，按照分析方法的操作步骤进行测定，用测定值得到的回归方程及相关系数对线性关系进行评价。必要时，将测定值由回归方程算出的残差对被测物质的量(浓度)作图，不应具有某种特定的趋势。通常，采用5个不同量(浓度)的样品作线性关系的研究。2.7 范围(Range)

2.7.1 定义：分析方法验证中所述范围是指具有一定精度和准确度的被测物质上限及下限量(浓度)之间的领域。对于上述具有线性关系的分析方法则指：具有一定精度和准确度，并且使线性关系成立的被测物质上下限量(浓度)之间的领域。

2.7.2 评价方法：分析方法验证的范围一般为标准中规定值的±20%左右，对范围的上下限值及范围中央值附近的样品进行精度、真度及线性的研究讨论。

验证参数

类型Ⅰ

类型Ⅱ

类型Ⅲ

定量试验 限度试验 准确度+ 精密度 并行精度+ 室内再现精度-* 室间再现精度+* 专属性 + + + + 检出限界定量限界-直线性+ 范围

+

+

注：-：一般不需要；+：需要；*：视情况而定。室内或室间再现精度选择其一进行评价，日本药局方通常选择后者进行评价。

类型Ⅰ需做鉴别试验，即对药品中的主要成分及其特征进行鉴别。类型Ⅱ需做检查试验，即对药品中的杂质或不纯物的量进行测定。类型Ⅲ需做含量测定和溶出度试验，即对药品中的成分进行测定(成分包括稳定剂、添加剂等)和药品有效性试验。分析方法验证用语

4.1 适应性/牢固性(Robustness)指故意将分析条件在小范围内变化时，测定值不受影响的能力。例如，反应的pH值、温度、室间及试药的量等分析条件在适当的范围内改变时，对测定值的稳定性进行研究讨论。测定值对于分析条件不稳定时，应对方法加以改进。适应性的研究结果在分析方法中以表示分析条件的有效数字或注意事项的形式得以体现。

4.2 实验室 指试验进行的场所、设施。分析方法验证中所述改变实验室是指试验者、装置以及试药的批号等试验条件发生变化。

4.3 试验法 指药局方中的试验方法，例如鉴别试验、检查试验等。试验方法应包括样品的制备、规定值、分析方法等。

4.4 生产者危险率 指合格的制品由于试验原因而错判为不合格制品的发生概率。一般以α表示，也叫第一过失率，也就是在限度试验中所说的假阳性率。4.5 消费者危险率 指不合格的制品由于试验原因而错判为合格制品的发生概率。一般以β表示，也叫第二过失率，也就是在限度试验中所说的假阴性率。4.6 测定次数 指分析方法操作程序中规定的次数，为了提高分析方法的精度，有些试验明确规定试验次数在2次以上，分析方法验证是对包括分析方法所规定的测定次数在内的分析方法的评价。它与为了提高分析方法的精度进行重复分析时的重复次数不同。

4.7 测定值 一次分析所得到的一个数值。

第四篇：JP13分析方法的验证

JP13分析方法的验证

JP13分析方法的验证

分析方法的验证，就是对药品分析实验所采用的分析方法是否完全达到了预期目的，或证明由分析方法误差而导致试验结果判断错误的概率是否在允许范围之内，而进行的科学证明。

分析方法的验证以验证参数表示。在制定药品质量标准时，可通过这些参数证明所建立的分析方法是否适当。本文所述分析方法验证是指下述情况：药局方新收载品种质量标准的建立；药局方已收载品种质量标准的修订；根据药局方的通则建立替代方法。

1、日本药局方收载分析方法所需资料

1.1 概要 对分析方法作简要说明，包括所采用分析方法的必要性，特点与优点及有关验证的要点。如系分析方法的修订，则需阐明新方法与原方法的区别以及新方法的优势。

1.2 分析方法 本项记载的有关分析方法的内容要足以能对分析方法进行评价，并且必要时可用复核试验进行评价。分析方法主要记载内容包括：分析的步骤、标准品及样品的制备方法、试剂与试药的调配、注意事项、分析系统是否正常运转的检验证明方法(例如高效液相色谱法中的分离效率的研究)、分析结果的计算公式、测定次数等。并且，如果使用了药局方以外的装置，还需详述有关内容；如果使用了新的标准品，则必须提供其物理、化学及生物学特征数据，并提供其质量标准。

1.3 有关分析方法验证的资料 本项应包括求导各验证参数的试验设计、试验数据、计算结果及检定结果等。

2、验证参数(validationcharacterisitics)

分析方法适当与否可通过验证参数进行评价，下面列举了最典型的分析方法验证参数的定义及其评价方法。

验证参数的有关术语及定义因分析方法的应用领域不同而不同，本文所使用的术语及定义仅限于日本药局方。评价方法项下所述内容也仅为简要概述。确定验证参数的方法很多，采用何种方法没有具体限制。但是，验证参数的限值常因确定方法的不同而发生变化。故此，确定验证参数的实验方法、实验数据、计算方法等应尽可能详细地记述。

本文分析方法验证中未包括验证参数适应性/牢固性(Robustness)的讨论，这是由于牢固性的研究主要在分析方法的开发设计阶段进行，其研究结果可以在方法的分析条件或注意事项中得到体现。

2.1 真度/准确度(Accuracy/Trueness)

2.1.1 定义：所谓准确度，指分析方法所得测定值的偏离程度，通常以测定值的总平均值与真值之间的差来表示。

2.1.2 评价方法：准确度一般以测定室内重现精度或室间再现精度时所得总平均值与真值的差表示。真值一般使用理论值(如滴定法)，如果理论值不存在或即使存在但很难求出的情况下，可采用经过确证或认可的数值来代替(如制剂分析常以原料药的测定值作为真值)。分析方法的专属性强，可以推断其分析方法的误差就小。由推出的真值与室内(室间)再现精度的标准偏差即可计算出真值的95%置信区间，并可判断这个区间是否包括0点，或区间的上下限值是否在分析方法

1所要求的精度范围之内。

2.2 精密度(Precision)

2.2.1 定义：精密度是指从均匀样品中抽取的复数个供试品进行重复分析测定时，所得到的一系列测定数据彼此之间的一致程度。测定值的误差以偏差、标准偏差、或相对标准偏差的形式表示。精度根据重复实验的条件不同以三个水平表示，分别称为：并行精度、室内再现精度、室间再现精度。

并行精度(Repeatability/Intra-assayprecision)：指实验室、实验者、实验日期、装置、器具以及试药的批号等实验条件均未改变的情况下，从均匀样品中抽取的复数个供试品短时间内进行重复分析测定时(并行条件)的精度。

室内再现精度(Intermediateprecision)：指同一实验室内，实验者、实验日期、装置、器具以及试药的批号等实验条件一部分或全部改变的情况下，从均匀样品中抽取的复数个供试品进行重复分析测定时(室内再现条件)的精度。

室间再现精度(Reproducibility)：指在不同实验室间，从均匀样品中抽取的多个供试品进行重复分析测定时(室间再现条件)的精度。

2.2.2 评价方法：首先，要保证精度研究所用样品的数量和均匀性。溶液应为均匀性样品，在得不到均匀性样品时，通常将大量制剂粉碎混合至认为均匀或制剂的各组分混合至认为均匀的样品作为均匀性样品使用。如果同时做两个水平以上的精度评价时，可以采用诸如单因素方差分析等实验方法，但为了正确得出分析方法的精度，必须有足够的实验次数、分析条件的水平数及实验室数。并且要对可预想到的致使分析发生变化的要因进行研究。各水平的精度以偏差、标准偏差、相对标准偏差、偏差的90%置信区间以及与其相对应的标准偏差的区间来表示。将其与分析方法所要求精度的标准值进行对照，以确定分析方法是否可行。通常是以室内(间)的再现精度作为方法取舍的依据。

2.3 专属性/特异性(Specificity)

2.3.1 定义：专属性指分析样品中有共存物质的情况下，对被测物质进行正确测定的能力，即表示分析方法的识别能力。如果分析方法的专属性有个别缺陷，可以用其他方法加以补充。

2.3.2 评价方法：确证分析方法是否达到试验目的，确实能够对被测物质进行鉴别或定量。例如，分析方法的专属性可以通过比较A为仅含被测物质样品(阳性对照)；B为含有制剂的其他各组成成分及不纯物或分解产物中添加被测物质的样品；C为不含被测物质，仅含制剂的其他组分、不纯物及分解产物的样品(阴性对照)，根据A、B、C三种样品的分析结果进行评价。如果不纯物不易得到时，可以用含有不纯物的样品(如经时发生变化的样品)替代。

2.4 检出限界(Detection Limit)

2.4.1 定义：检出限界是指样品中所含的被测物质可被检出的最低量或浓度。在检出限界内并不意味着一定就能够进行定量。

2.4.2 评价方法：通常以消费者危险率及生产者危险率在5%以下来规定检出限界。检出限界可以通过空白样品或检出限界附近的样品测定值的标准偏差以及检出限界附近的标准曲线的斜率算出。例如，根据检出限界附近的标准曲线的斜率以及空白样品测定值的标准偏差，由下式求出检出限界。

DL=3.3σ/slope

DL：检出限界

σ：空白样品测定值的标准偏差

slope：检出限界附近标准曲线的斜率

应用色谱法时，测定值的标准偏差可以用信噪比代替。分析方法的检出限界应比质量标准中规定值要小。

2.5 定量限界(Quantitation Limit)

2.5.1 定义：定量限界是指样品中所含的被测物质可被进行定量的最小量或最低浓度。定量限界所述样品测定值的精度，以相对标准偏差表示，一般为10%。

2.5.2 评价方法：通常定量限界可以通过空白样品或被测物定量限界附近的样品测定值的标准偏差以及定量限界附近的标准曲线的斜率算出。例如，根据定量限界附近的标准曲线的斜率以及空白样品测定值的标准偏差，由下式求出定量限界。

DL=10σ/slope

DL：定量限界

σ：空白样品测定值的标准偏差

slope：定量限界附近标准曲线的斜率

应用色谱法时，测定值的标准偏差可以用信噪比代替。分析方法的定量限界应比质量标准中规定值要小。

2.6 线性关系

2.6.1 定义：线性关系是指分析方法能够得到与被测物质的量或浓度具有直线关系的测定值的能力，必要时，被测物质的量或浓度的测定值也可以是从数学公式中得到的变换值。

2.6.2 评价方法：准备一系列不同浓度(量)的被测样品，按照分析方法的操作步骤进行测定，用测定值得到的回归方程及相关系数对线性关系进行评价。必要时，将测定值由回归方程算出的残差对被测物质的量(浓度)作图，不应具有某种特定的趋势。通常，采用5个不同量(浓度)的样品作线性关系的研究。

2.7 范围(Range)

2.7.1 定义：分析方法验证中所述范围是指具有一定精度和准确度的被测物质上限及下限量(浓度)之间的领域。对于上述具有线性关系的分析方法则指：具有一定精度和准确度，并且使线性关系成立的被测物质上下限量(浓度)之间的领域。

2.7.2 评价方法：分析方法验证的范围一般为标准中规定值的±20%左右，对范围的上下限值及范围中央值附近的样品进行精度、真度及线性的研究讨论。

3、试验分析方法的分类

根据试验目的，试验方法主要可以分为以下3种类型，各类型分析试验方法的验证所要求的验证参数见表1。应该指出，这仅是一个原则，评价分析方法所必需的验证参数将随分析方法的特点及试验目的而改变。

表1 试验类型与所要求的验证参数

其一进行评价，日本药局方通常选择后者进行评价。

类型Ⅰ需做鉴别试验，即对药品中的主要成分及其特征进行鉴别。类型Ⅱ需做检查试验，即对药品中的杂质或不纯物的量进行测定。类型Ⅲ需做含量测定和溶出度试验，即对药品中的成分进行测定(成分包括稳定剂、添加剂等)和药品有效性试验。

4、分析方法验证用语

4.1 适应性/牢固性(Robustness)指故意将分析条件在小范围内变化时，测定值不受影响的能力。例如，反应的pH值、温度、室间及试药的量等分析条件在适当的范围内改变时，对测定值的稳定性进行研究讨论。测定值对于分析条件不稳定时，应对方法加以改进。适应性的研究结果在分析方法中以表示分析条件的有效数字或注意事项的形式得以体现。

4.2 实验室 指试验进行的场所、设施。分析方法验证中所述改变实验室是指试验者、装置以及试药的批号等试验条件发生变化。

4.3 试验法 指药局方中的试验方法，例如鉴别试验、检查试验等。试验方法应包括样品的制备、规定值、分析方法等。

4.4 生产者危险率 指合格的制品由于试验原因而错判为不合格制品的发生概率。一般以α表示，也叫第一过失率，也就是在限度试验中所说的假阳性率。

4.5 消费者危险率 指不合格的制品由于试验原因而错判为合格制品的发生概率。一般以β表示，也叫第二过失率，也就是在限度试验中所说的假阴性率。

4.6 测定次数 指分析方法操作程序中规定的次数，为了提高分析方法的精度，有些试验明确规定试验次数在2次以上，分析方法验证是对包括分析方法所规定的测定次数在内的分析方法的评价。它与为了提高分析方法的精度进行重复分析时的重复次数不同。

4.7 测定值 一次分析所得到的一个数值。

本文译自第13版日本药局方附录参考资料3所载内容。

第五篇：化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则

化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则

一、概述

 保证药品安全、有效、质量可控是药品研发和评价应遵循的基本原则，其中，对药

品进行质量控制是保证药品安全有效的基础和前提。为达到控制质量的目的，需要多角度、多层面来控制药品质量，也就是说要对药物进行多个项目测试，来全面考察药品质量。一般地，每一测试项目可选用不同的分析方法，为使测试结果准确、可靠，必须对所采用的分析方法的科学性、准确性和可行性进行验证，以充分表明分析方法符合测试项目的要求，这就是通常所说的对方法进行验证。方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、合理，是否能有效控制药品的内在质量。 从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通

过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。

 方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组

成部分。

 只有经过验证的分析方法才能用于控制药品质量，因此方法验证是制订质量标准的基础。方法验证是药物研究过程中的重要内容。

二、方法验证的一般原则

 原则上每个检测项目采用的分析方法，均需要进行方法验证。

 方法验证的内容应根据检测项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。

同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。例如，采用高效液相色谱

法用于制剂的鉴别和杂质定量试验应进行不同要求的方法验证，前者重点要求验证专属性，而后者重点要求验证专属性、准确度、定量限。

三、方法验证涉及的三个主要方面



（一）需要验证的检测项目

 鉴别、 杂质检查

 定量测定（含量测定、溶出度、释放度等）、 其他特定检测项目（分子量及分子量分布、生物活性等）

 鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其它物质，用于鉴别的分析方法

要求具有较强的专属性。

 杂质检查主要用于控制主成分以外的杂质，如有机杂质、无机杂质等。杂质检查可

分为限度试验和定量试验两种情况。用于限度试验的分析方法验证侧重专属性和检测限。

 用于定量试验的分析方法验证强调专属性、准确度和定量限。

 定量测定包括含量测定、制剂的溶出度测定等，由于此类项目对准确性要求较高，故所采用的分析方法要求具有一定的专属性、准确度和线性。

 其他特定检测项目包括粒径分布、旋光度、分子量分布、生物活性等，由于这些检

测项目的要求与鉴别、杂质检查、定量测定等有所不同，对于这些项目的分析方法验证应有不同的要求。

（二）分析方法

 分析方法是为完成上述各检测项目而设定和建立的测试方法。

 分析方法原理

 仪器及仪器参数

 试剂

 系统适用性试验

 供试品溶液制备

 对照品溶液制备

 测定

 计算及测试结果的报告等

 测试方法

 化学分析方法

 仪器分析方法

 这些方法各有特点，同一测试方法可用于不同的检测项目，但验证内容可不相

（三）验证内容

 验证内容：

 方法的专属性

 线性

 范围

 准确度

 精密度

 检测限

 定量限

 耐用性

 系统适用性等

四、方法验证的具体内容



（一）专属性

 专属性系指在其他成分（如杂质、降解物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法

能够正确鉴定、检出被分析物质的特性。

 通常，鉴别、杂质检查、含量测定方法中均应考察其专属性。如采用的方法不够专

属，应采用多个方法予以补充。



1、鉴别反应

 鉴别试验应确证被分析物符合其特征。

 专属性试验要求证明能与可能共存的物质或结构相似化合物区分，需确证含被分析

物的供试品呈正反应，而不含被测成分的阴性对照呈负反应，结构相似或组分中的有关化合物也应呈负反应。



2、杂质检查

作为纯度检查，所采用的分析方法应确保可检出被分析物中杂质的含量，如有

关物质、重金属、有机溶剂等。因此杂质检查要求分析方法有一定的专属性。 在杂质可获得的情况下，可向供试品中加入一定量的杂质，证明杂质与共存物质能

得到分离和检出，并具适当的准确度与精密度。

 在杂质或降解产物不能获得的情况下，专属性可通过与另一种已证明合理但分离或

检测原理不同、或具较强分辨能力的方法进行结果比较来确定。或将供试品用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化的方法进行破坏（制剂应考虑辅料的影响），比较破坏前后检出的杂质个数和量。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行色谱峰纯度检查。



3、含量测定

 含量测定目的是得到供试品中被分析物的含量或效价的准确结果。在杂质可获得的情况下，对于主成分含量测定可在供试品中加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质和辅料的供试品比较测定结果。

 在杂质或降解产物不能获得的情况下，可采用另一个经验证了的或药典方法进行比

较，对比两种方法测定的结果。

 也可采用破坏性试验（强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化），得到含有杂质

或降解产物的试样，用两种方法进行含量测定，比较测定结果。

 必要时进行色谱峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。

（二）线性

 线性系指在设计的测定范围内，检测结果与供试品中被分析物的浓度（量）直接呈

线性关系的程度。线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量试验和含量测定均需要验证线性。应在设计的测定范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列被测物质浓度系列进行测定，至少制备5个浓度。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算，并说明依据。



（三）范围

 范围系指能够达到一定的准确度、精密度和线性，测试方法适用的试样中被分析物

高低限浓度或量的区间。范围是规定值，在试验研究开始前应确定验证的范围和试验方法。

 可以采用符合要求的原料药配制成不同的浓度，按照相应的测定方法进行试验。范

围通常用与分析方法的测试结果相同的单位（如百分浓度）表达。涉及到定量测定的检测项目均需要对范围进行验证，如含量测定、含量均匀度、溶出度或释放度、杂质定量试验等。

 范围应根据剂型和（或）检测项目的要求确定。



1、含量测定范围应为测试浓度的80％～100％或更宽。



2、制剂含量均匀度范围应为测试浓度的70％～130％。根据剂型特点，如气雾

剂、喷雾剂，必要时，范围可适当放宽。



3、溶出度或释放度对于溶出度，范围应为限度的±20％；如规定限度范围，则

应为下限的-20％至上限的+20％。对于释放度，如规定限度范围为，从1小时后为20％至24小时后为90％，则验证范围应为0～110％。



4、杂质杂质测定时，范围应根据初步实测结果，拟订出规定限度的±20％。如

果含量测定与杂质检查同时测定，用面积归一化法，则线性范围应为杂质规定限度的-20％至含量限度（或上限）的+20％。



（四）准确度

 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间接近的程度。有时也

称真实度。一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的检测项目均需要验证准确度，如含量测定、杂质定量试验等。准确度应在规定的范围内建立，对于制剂一般以回收率试验来进行验证。试验设计需考虑在规定范围内，制备3个不同浓度的试样，各测定3次，即测定9次，报告已知加入量的回收率（％）或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。



1、含量测定

 原料药可用已知纯度的对照品或符合要求的原料药进行测定，或用本法所得结果与

已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，必要时，与另一个已建立准确度的方法比较结果。



2、杂质定量试验

 杂质的定量试验可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典方法或经过验证的方法。如不能测得杂质的相对响应因子，可在线测定杂质的相关数据，如采用二极管阵列检测器测定紫外光谱，当杂质的光谱与主成分的光谱相似，则可采用原料药的响应因子近似计算杂质含量（自身对照法）。并应明确单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（％）或面积比（％）。



（五）精密度

 精密度系指在规定的测试条件下，同一均质供试品，经多次取样进行一系列检测所

得结果之间的接近程度（离散程度）。

 精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。取样测定次数应至少6次。精密度可以从三个层次考察：

 重复性

 中间精密度

 重现性



1、重复性

 重复性系指在同样的操作条件下，在较短时间间隔内，由同一分析人员测定所得结

果的精密度。重复性测定可在规定范围内，至少用9次测定结果进行评价，如制备3个不同浓度的试样，各测定3次，或100％的浓度水平，用至少测定6次的结果进行评价。



2、中间精密度

 中间精密度系指在同一实验室，由于实验室内部条件改变，如时间、分析人员、仪

器设备、测定结果的精密度。验证设计方案中的变动因素一般为日期、分析人员、设备。



3、重现性

 指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用

时，应进行重现性试验。



（六）检测限

 检测限系指试样中的被分析物能够被检测到的最低量，但不一定要准确定量。该验

证指标的意义在于考察方法是否具备灵敏的检测能力。因此对杂质限度试验，需证明方法具有足够低的检测限，以保证检出需控制的杂质。

六、对方法验证的评价



（一）有关方法验证评价的一般考虑

 总体上，方法验证应围绕验证目的和一般原则来进行，方法验证内容的选择和试验

设计方案应系统、合理，验证过程应规范严谨。并非每个检测项目的分析方法都需进行所有内容的验证，但同时也要注意验证内容应充分，足以证明采用的分析方法的合理性。如杂质限度试验一般需要验证专属性和检测限，而对于精密度、线性、定量限等涉及定量测定的项目，则一般不需要进行验证。



（二）方法验证的整体性和系统性

 方法验证内容之间相互关联，是一个整体。因此不论从研发角度还是评价角度，方

法验证均注重整体性和系统性。例如，对于鉴别项目所需要的专属性，一般一种分析方法不太可能完全鉴别被分析物，此时采用两种或两种以上分析方法可加强鉴别项目的整体专属性。在方法验证内容之间也存在较多的关联性，可以相互补充。如原料药含量测定采用容量分析法时，由于方法本身原因，专属性略差，但假如在杂质检测时采用了专属性较强的色谱法，则一般认为整个检测方法也具有较强的专属

性。

 总之，由于实际情况较复杂，在方法验证过程中，不提倡教条地去进行方法验证。 此外，越来越多的新方法不断被用于质量控制中，对于这些方法如何进行验证需要

具体情况具体分析，而不能照搬指导原则。